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UNIVERSIDAD JOSE CARLOS MARIATEGUI

INGENIERA AGROINDUSTRIAL

CURSO: TECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL

II Semestre 2013

LABORATORIO
DETERMINACIN DE CLOROFILA EN EXTRACTO DE PLANTAS
1. INTRODUCCIN

Hay mucho inters en evaluar los mtodos analticos para la determinacin


de clorofila en los vegetales verdes. Ya que estos poseen un poderosos pigmento
natural, cuyo poder de tincin es de muy amplio espectro, sin embargo aunque la
clorofila puede ser determinado por titulacin con (ethilendinitrilo) en funcin de
la cantidad de magnesio unido a su anillo pirrolico, este procedimiento no hace
posible diferenciar el tipo de clorofila presente (tipo a y b), es por ello que el
mtodo espectrofotomtrico hace posible esta caracterizacin ya que es sencillo
y rpido.
Es muy importante referir que la extraccin de clorofila de las plantas verdes
ser posible usando solventes orgnicos, siendo la acetona el medio donde la
clorofila es ms soluble, esto permite tener un medio altamente suspendido en la
disolucin por ende mejorara el espectro de absorbancia al momento de su
anlisis.
2. OBJETIVOS
Extraer Clorofila, usando solventes orgnicos
Determinar los niveles de clorofila a y b

3. MATERIALES Y METODOS
Muestra: Espinaca
3.1. MATERIALES Y EQUIPOS
Muestra

Hojas de espinaca

Reactivos e insumos
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INGENIERA AGROINDUSTRIAL

CURSO: TECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL

Acetona 80%

Metanol 96%

Ether dietilico 95%

II Semestre 2013

Materiales y equipos
Espectrofotometro
Cuebtas de espectrofotmetro
Fiolas de 250 y 25ml
Pipetas volumtricas de 5, 10, 20 y 25 ml
Embudo
Papel filtro N4
Papel tissue
Pizeta con agua destilada
Licuadora
3.2.

METODOS
Procedimiento:
Preparacin de la muestra

Pesar 4 a 5 discos (hojas) de espinaca

Triturar en un mortero con 5ml del solvente (acetona, metanol y


Ether) por cada gramo de muestra.

Agregar 45ml del solvente por cada gramo de muestra.

Filtrar la solucin en un papel filtro Wthaman N4

Centrifugar a 2500 RPM por 10 min, separar el sobrenadante

Lectura de absorbancias

Preparar blanco y fijar la escala a cero de densidad ptica (D.O.) o


100 de transmitancia (T)

Leer la D.O. versus la longitud de onda () desde: 400 hasta 700


nm, de 20 en 20 nm (15 mediciones)

Graficar y seleccionar la mxima absorbancia (referencia 662, 647


y 470nm)

Registrar los valores de absorbancia y llevar a las siguientes


ecuaciones.

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CURSO: TECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL

INGENIERA AGROINDUSTRIAL

II Semestre 2013

4. RESULTADOS Y DISCUSION.

Explicar los resultados de encontrados


Recomendar otras tcnicas para tener mayor fiabilidad de nuestros resultados

5. BIBLIOGRAFIA

ALDRICH CHEMICAL COMPANY. 1992. Aldrich chemical catalogue. Aldrich Chemical


Company, Milwaukee, WI, USA. http://stainsfile.info/StainsFile/dyes/52015.htm.

BERMEJO, F. 1991. Qumica Analtica General, Cuantitaviva e Instrumental. Editorial


Paraninfo, 6ta edicin, Madrid (Espaa).

MERCK. 2002. Catalogo de Reactivos Qumicos.

DAY, R Y ANDERWOOD, A. 1989. Qumica Analtica Cuantitativa. 5ta edicin.

ERWING, G. 1979. Mtodos Instrumentales de anlisis Qumico. Mc Graw Hill. Mxico.

FLASHKA, H. 1981. Qumica Analtica Cuantitativa. Editorial continental S.A., Mxico


D.F. (Mxico)

SKOOG, D. Y LEARY, H. 1997. Anlisis Instrumental. Mc Graw Hill. Interamericana.


Espaa.

SKOOG, D.; WEST, D.; HOLLER, F. Y CROUCH, R. 2000.Qumica Analtica. Sptima


Edicin. Interamericana de Mxico, S.A. Mxico.

WILLARD, H.; MERRIT, L. Y DEAN J. 1991. Mtodos Instrumentales de Anlisis". 4ta


Edicin. Compaa Editorial Continental. Mxico.

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