UNIVERSITATEA DE MEDICIN I

FARMACIE DIN TRGU-MURE

SPECIALIZAREA NUTRIIE I
DIETETIC

ELEMENTE DE ANALIZ INSTRUMENTAL

CURSUL

PROF. DR. SILVIA IMRE

1

III.2. Refractometria

III.2. Refractometria

III.3. Polarimetria

III.4. Spectrometria UV-VIS

III.5. Turbidimetria i nefelometria

Refracia luminii schimbarea direciei de propagare

a luminii la trecerea ntr-un mediu transparent cu
densitate diferit de cea a mediului transparent din
care provine

III.6. Spectrofluorimetria

III.7. Chemiluminiscena
III.8. Spectrometria de absorbie i emisie
atomic

Cele mai importante moduri de

interaciune radiaii - materie

Bibl.: http://biosci.southmountaincc.edu/NR/rdonlyres/41601595-0D76-459C-99F56FF5BE3198EE/883/Refractometer.pdf

Refracia luminii
3

Refracia luminii modificarea vitezei de propagare a luminii

observat n timpul traversrii unor medii cu densiti optice diferite.
n cazul considerat viteza este ncetinit n prob.

Indicele de refracie
(mrime adimensional):

v aer sin iaer

n =
=
v
sin r
t

Refracia i reflexia luminii la

suprafaa de separare
dintre dou medii cu densiti
optice diferite

20
D

v aer sin iaer

=
=
v
sin r

unde:
t temperatura, C
D = 589 nm, lungimea de und
corespunztoare radiaiei galbene
emis de lampa cu sodiu
v viteza radiaiei
i unghi de inciden
5
r unghi de refracie

INDICELE DE REFRACIE AL UNEI SUBSTANE

este o caracteristic intrinsec:
Identificare
Determinarea gradului de puritate

Factorii de care depinde indicele de

refracie:
Natura probei (inclusiv natura solventului)

Concentraia probei (la soluii)

Lungimea de und a radiaiei la care se
determin indicele de refracie

Temperatura

Presiune (la gaze)

n =1,3 - 1,7 pentru lichidele organice

6

nsoluie = nsolvent + k c
Dac c = 0, atunci nsoluie = nsolvent

Dependena n = f()
nsolvent

0
Dependena n = f(c)

Utilitatea practic:

determinarea identitii i puritii unei substane; se determin
indicele de refracie pentru prob n condiii standard de
temperatur (20 sau 25 C) i lungime de und (D = 589 nm)
i se compar cu valorile de referin (din tabele de specialitate);
dou valori pot fi considerate identice, dac ele nu difer cu mai
mult de 0,0004.
nD20 prob
! Posibil etanol

nD20 tabele

Diferena

1,3612

1,3609

-0,0003

IDENTITATE
Proba este etanol

cx =

A pc s
As

Soluie standard: soluie cu concentraie bine determinat din analitul

care urmeaz s fie determinat n prob; solventul (mediul) soluiei
standard trebuie s fie identic cu cel al probei s reproduc matricea
probei.

Utilitatea practic:

determinare cantitativ metoda standardului extern
Indicele de refracie
nP la lungimea de
und i
temperatura t

Prob, cP

cx =
Indicele de
refracie ns la
lungimea de und
i temperatura t

npc s
ns

Soluie
standard, cs
9

Avantajele metodei standardului extern:

Este nevoie doar de o soluie standard
Dezavantaje:

Trebuie s se cunoasc cu aproximaie nivelul de
concentraie ateptat n prob
Exemplu de utilizare:

Controlul concentraiei de glucoz din siropuri cu
glucoz; concentraia este inscripionat pe ambalaj de
productor i, deci, se poate utiliza ca referin o soluie
standard de glucoz cu concentraia egal cu
concentraia ateptat n sirop.
10

cx =

A pc s
As

Intervalul de concentraii al dreptei de calibrare: trebuie ales astfel

nct s includ concentraiile ateptate n probe
Numrul minim de soluii standard necesare pentru obinerea
dreptei de calibrare: 5

Utilitatea practic:

determinare cantitativ metoda dreptei (curbei) de calibrare
(metoda standardelor externe)

nx
cx
Prob

n1
c1

n2
c2

n3
c3

ni
ci

Serie de soluii
standard
11

Avantajele metodei dreptei de calibrare:

Se pot determina cantitativ probe cu
concentraii diferite folosind o singur
referin dreapta de calibrare
Dezavantaje:

Trebuie s se foloseasc mai multe
soluii standard pentru obinerea
referinei - dreapta de calibrare

12

Aparatur

Refractometre
digitale cu mai
multe lungimi de
und

Refractometre portabile
13

Principiul determinrii
indicelui de refracie
cu refractometrul
Abb: determinarea
poziiei razei critice

Refractometrul Abb
14

aer

i = c

n1

Mediul 1

ap

n1 > n2

Mediul 2

r = 90

n2
Raza critic i
unghiul critic

a. Dac < c, vizibilitate n aer

b. Dac > c, fr vizibilitate n aer
Obs.: 1 este raza critic, creia i
corespunde unghiul de inciden critic c

http://www.space.gc.ca/asc/img/neemo_trans_critical_angle1.gif

15

http://images.google.ro/imgres?imgurl=http://www.exploratorium.edu/sn
acks/critical_angle/critical_angle_1_269x223.gif&imgrefurl=http://www.e
xploratorium.edu/snacks/critical_angle/index.html&h=223&w=269&sz=4
8&hl=ro&start=7&um=1&usg=__LIPXMjJm_fuwEn3leR8xh3YBdM=&tbnid=K_u0L142x3EHkM:&tbnh=94&tbnw=
113&prev=/images%3Fq%3Dcritical%2Bangle%26um%3D1%26hl%3D
ro

16

Ocular

Prob, n

Prism de
msur
Principiul de
funcionare a
refractometrului Abb

c
Prism de
iluminare

17

Principiul de funcionare a
refractometrului Abb
Ref.: http://www2.ups.edu/faculty/hanson/labtechniques/refractometry/theory.htm

18

1
2
3
Etape ale msurrii indicelui de
refracie cu refractometrul clasic

19

III.3. Polarimetria

III.3. Polarimetria

III.4. Spectrometria UV-VIS

III.5. Turbidimetria i nefelometria

Molecule asimetrice

III.6. Spectrofluorimetria

III.7. Chemiluminiscena
III.8. Spectrometria de absorbie i emisie
atomic

http://porpax.bio.miami.e
du/~cmallery/150/protei
n/aaisomers.jpg

20

Chiralitate
Oglind

Molecula asimetric conine un

atom de carbon cu patru valene
satisfcute de patru grupe de atomi
diferite; ex. aminoacizii

Moleculele asimetrice sunt

nesuperpozabile cu imaginea
lor n oglind

http://images.google.ro/imgres?imgurl=http://www.creation-science-prophecy.com/amino/polarimeter.gif&imgrefurl=http://www.creation-scienceprophecy.com/amino/&h=350&w=422&sz=30&hl=ro&start=1&um=1&usg=__x6aiTYF91A9DVb5SbB5EWgdN1c=&tbnid=dLfshUEfhpdeuM:&tbnh=105&tbnw=126&prev=/images%3Fq%3Dpolarimeter%26um%3D1%26hl%3Dro

Chiralitate

FOARTE IMPORTANT:
configuraiile D sau R nu
nseamn n mod
obligatoriu c centrul de
chiralitate este dextrogir +;
analog, configuraiile L sau
S nu nseamn n mod
obligatoriu c centrul de
chiralitate este levogir -.

* centru de chiralitate
sau de asimetrie

Centrul de chiralitate:
configuraie D sau L - dup configuraia glicerinaldehidei chimistul german Emil Fischer
configuraie R (rectus) sau S (sinister) - conform regulii CahnIngold-Prelog prioritatea substituenilor
efect dextrogir, notat + sau d, sau efect levogir, notat sau l

22

Radiaie (lumin) plan polarizat

http://images.google.ro/imgres?imgurl=http://images.encarta.msn.com/xrefmedia/aencmed/targets/illus/ilt/T046344A.gif&imgrefurl=http://encarta.msn.com/media_461563419_761579230_1_1/polarized_light.html&h=328&w=556&sz=30&hl=ro&start=4&um=1&usg=__z7376J3qC0ELXNrU0y_-0RAOf8E=&tbnid=AulAXpUQumfVM:&tbnh=78&tbnw=133&prev=/images%3Fq%3Dpolarized%2Blight%26um%3D1%26hl%3Dro%26sa%3DN

Unghi de
rotaie

nainte

Dup

Rotirea luminii plan polarizate dup trecerea printr-o prob optic activ
Ref.: http://www.enzim.hu/~szia/cddemo/edemo15.htm

24

Schema unui polarimetru clasic

http://www.chemistry.adelaide.edu.au/external/soc-rel/content/polarim.htm

Substane dextrogire rotesc planul luminii plan polarizate n

sensul acelor de ceasornic, unghiul de rotaie are semnul+
Substane levogire rotesc planul luminii plan polarizate n sens
invers acelor de ceasornic, unghiul de rotaie are semnul-

Puterea rotatorie (unghiul

de rotaie) pentru lichide:

= [ ] l t
t

Rotaia planului luminii

plan - polarizate
de ctre o substan optic activ

Puterea rotatorie (unghiul

de rotaie) pentru substane
n soluie:

c
= [ ] l
100
t

Unde - puterea rotatorie sau unghiul de rotaie a luminii plan polarizate

dup trecerea prin prob; l lungimea stratului de prob strbtut de
radiaie; c concentraia procentual % m/V; - densitatea lichidului, g/cm3;
[] puterea rotatorie specific, este o constant caracteristic fiecrei
substane, la o anumit lungime de und i o anumit temperatur t

Importana puterii rotatorii:

-un criteriu de identitate i puritate al unei substane
- o cale simpl i relativ ieftin de efectuare a unor determinri
cantitative

Factorii de care depinde puterea rotatorie a

unei substane:
Natura probei (inclusiv solventul)

Temperatura t

Lungimea de und a radiaiei (tipul de radiaie)

Concentraia substanei c, dac este n soluie

Densitatea substanei , dac este un lichid pur

Lungimea stratului de prob strbtut de radiaie
(lungimea tubului polarimetric)

Polarimetria cantitativ
a. Determinarea concentraiei unei probe cunoscndu-se
puterea rotatorie specific a substanei de determinat

100
cp =
20
l [ ]D
b. Determinarea concentraiei prin metoda standardului extern

p cs
cp =
s

Unde P unghiul de rotaie msurat

pentru prob; S unghiul de rotaie
msurat pentru soluia standard; cS
concentraia soluiei standard

Polarimetria cantitativ
c. Determinarea concentraiei prin metoda curbei de calibrare
(standardelor externe)

x
cx
Prob

1
c1

2
c2

3
c3

Serie de soluii
standard

i
ci

Aparatur

Polarimetru digital, cu mai

multe lungimi de und
Polarimetru clasic cu disc
cu o singur lungime de und

Ref.: http://www.creation-science-prophecy.com/amino/polarimeter.gif

Importana studierii
activitii optice

Compuii optic activi

pot fi determinai n
prezena unor
compui inactivi
optic, fr izolarea
individual a
compuilor din prob

32

Importana studierii
activitii optice
- Enantiomerii pot avea activitate biologic (benefic sau toxic) diferit ca
intensitate sau ca tip de efect

- efect teratogen
- defecte la natere
(ex. focomelie)

S - talidomida

R - talidomida

Levogir -

Dextrogir +

S(-)

R(+)

- efect hipnotic
sedativ
- tratamentul
mielomului
multplu

33

Importana studierii
activitii optice
- Enantiomerii pot avea activitate biologic (benefic sau toxic) diferit ca
intensitate sau ca tip de efect

Inactiv biologic, fr toxicitate

Levogir R(-)

Antiinflamator activ
Dextrogir +
S(+)

Pe pia se gsesc att amestecul racemic, ct i izomerul

dextrogir (mai scump!!)

34

Importana studierii
activitii optice
- Exemple de aminoacizi constitueni ai proteinelor umane

Configuraii L(S) la carbonul din poziia

35