Genetica bacteriana

Genetica bacteriana
Genetica studiul caracterelor ereditare si al
variatiei acestora
Gena secventa ADN care codifica un produs
specific (ARN, proteina)
Genom totalitatea genelor unui organism

Structura ADN

Bailey , Scott Diagnostic Microbiology, 12th ed

Genetica bacteriana
Genomul bacterian
Cromozom
Plasmide
Episomi plasmide sau gene profagice
integrate linear in cromosomul bacterian

Cromozomul bacterian
molecula unica de ADN d.c.
circular
Contine genele care codifica
toate caracterele esentiale
mentinerii viabilitatii
Atasat unui situs membranar
de replicare
1-2 mm lungime (cromozomul E
coli - 1300 m lungime, dimensiunile
bacteriei 1m x 3m)

2000 4000 gene

500 5000 kb

Jawetz, Melnick, Adelberg`s Medical Microbiology, 24 th ed

Plasmide

Elemente genetice extracromosomale

Atasate unui situs membranar de replicare
Autonomie replicativa
<5% din cromozom
Prezente la unele bacterii (caracter de tulpina)
Celula bacteriana numar variabil de plasmide
Codifica unele caractere necesare bacteriilor pentru
supravietuire in conditii modificate de mediu (dar
expresia acestor caractere creste timpul de generatie)

Plasmide
Gene necesare pentru autonomia replicativa
Gene care codifica structuri exprimate in fenotipul
gazdei

Fact de virulenta (toxine, adezine etc)

Enzime ale unor cai metabolice particulare
Sinteza unor agenti antimicrobieni (bacteriocine)
Factori de rezistenta la agenti antimicrobieni (betalactamaze)
Criptice

Gene care codifica structurile implicate in conjugarea

bacteriana (la plasmide conjugative)

Bacteriofagi (fagi)
virusuri care se replica in celule bacteriene
specificitate de specie
Structura
Cap - capsida (ADN sau ARN, 3-200 gene)
Coada
Teaca contractila
Fibrele cozii

Bacteriofagi
Fag virulent: stadiul de fag infectios si fag vegetativ

Bacteriofagi
Fag temperat: fag infectios, profag si fag vegetativ

Bacteriofagi
Bacterie lizogena bact care gazduieste un profag
(dupa un numar nedeterminat de diviziuni va genera
fagi maturi)
Genomul profagic se replica sincron cu cel bacterian
In stadiul de profag genele vegetative sunt represate,
fiind exprimate doar genele responsabile de
replicarea genomului; uneori si gene exprimate in
fenotipul bacterian
Conversie lizogenica aparitia unui caracter nou (ex
producerea de toxina) la bacterii care gazduiesc un
profag

Bacteriofagi
Derepresia genelor vegetative in functie de statusul
bacteriei, stimuli externi (UV etc)
Integrarea profagului in cromosom aleatorie sau
situs specifica

Genomul bacterian
Cromozom
Plasmide
Episomi plasmide sau gene profagice
integrate linear in cromosomul bacterian

Elemente transpozabile
elemente genetice mobile (jumping genes)
fragmente de ADN capabile sa se insere si sa treaca de
la cromozom la plasmide si invers
nu exista independent in celula
Secvente de insertie vs transpozomi
structura
secv scurte (20-40 pb), inversate, dispuse la capetele
elementului; recunoscute de transpozaze
gene care codifica transpozaze
gene care codifica factori specifici (patogenitate, rezistenta la
antibiotice) si se exprima in fenotipul gazdei; prezente doar la
transpozomi, nu si la SI

Elemente transpozabile
Consecinte
integrare aleatorie - alterarea secventei genei in care se
insera
transfer intercelular (prin plasmide sau fagi) - factor
major in producerea variabilitatii genetice in populatii
bacteriene (ex. rezistenta la antibiotice)

Harvey, Cornelissen, Fisher Microbiology, 3rd ed

Replicarea ADN-ului bacterian

in cursul diviziunii celulare

semiconservativa
Bidirectionala
Etape
derularea ADN
Desfacerea celor 2 catene ADN parental originea
replicarii giraza si helicaza
Sinteza noilor catene ADN model semiconservativ ADN
polimeraza
Terminarea replicarii

Replicarea ADN

Bailey , Scott Diagnostic Microbiology, 12th ed

Expresia informatiei genetice

in toate celulele vii, continuu (replicarea ADN doar in
cursul diviziunii celulare)
Structura genei
secv promotor
Cadru de citire (ORF)
secv terminator

Operon ansamblu de gene care au acelasi promotor

si terminator, iar reglarea transcrierii acestor gene se
face prin intermediul aceleiasi secvente, numita
operator
ex. - gene care codifica enzime implicate in aceeasi cale
metabolica

Expresia informatiei genetice

Transcriere
are loc in citoplasma
ARN polimeraza recunoaste
secventa promotor
sinteza ARNm complementar
unidirectionala 5`
3`
ARNm bacterian policistronic
(codifica produsele genelor
grupate intr-un operon)
ARN polimeraza recunoaste
secventa terminator
ADN-ul bacterian nu contine
introni
Bailey , Scott Diagnostic Microbiology,

Expresia informatiei genetice

Translatie sinteza proteinelor, pe baza secventei ARNm
(un codon 3 nucleotide codifica un aminoacid)
Codul genetic universal si redundant (43 = 64 codoni; 61 codifica
20 aminoacizi)

Bailey , Scott Diagnostic Microbiology,

Expresia informatiei genetice

Translatie
Etape
Initierea asocierea subunit ribosomale, ARNm, ARNt
formilmetionina (codon start AUG), factori de initiere
Elongarea
Polisomi mai multi ribosomi pe acelasi ARNm

Terminarea codon stop (UGA, UAG sau UAA)

Procese post-translationale

Bailey , Scott Diagnostic Microbiology,

Reglarea expresiei informatiei genetice

Reglarea expresiei genice - responsabila de variatia
fenotipica (nu toate genele sunt permanent exprimate
fenotipic)
gene care codifica produsi esentiali pentru viabilitatea
celulei in orice conditii de mediu (gene constitutive)
exprimate continuu
gene care codifica produsi necesari doar in anumite
conditii expresia lor este controlata la nivel
Transcriptional
Translational
Post-transcriptional

Reglarea expresiei informatiei genetice

la nivel transcriptional
Represia = inhibitia transcrierii
unor gene in prezenta unui produs
metabolic
- genele care codifica enzimele
implicate in sinteza unui anumit
produs nu sunt transcrise in prezenta
acelui produs
- Produsul (corepresor) formeaza un
complex cu represorul (proteina
reglatoare) si se fixeaza pe regiunea
operator, astfel fiind blocata
transcrierea genelor operonului

Bailey , Scott Diagnostic Microbiology,

Reglarea expresiei informatiei genetice

la nivel transcriptional
Inductia
- genele care codifica enzime
implicate in catabolizarea unui
anumit substrat sunt transcrise doar
in prezenta acestuia
- Represorul se fixeaza pe regiunea
operator si blocheaza transcrierea
genelor operonului
- Substratul (inductorul) formeaza
un complex cu represorul si reduce
afinitatea represorului pt regiunea
operator, astfel fiind indusa
transcrierea
Bailey , Scott Diagnostic Microbiology,

Reglarea expresiei informatiei genetice

Exemple
Represia unor gene vegetative in cursul sporularii;
inductia acelorasi gene declanseaza germinarea (prin
modificarea specificitatii ARN polimerazei)

Inductia sintezei unor -lactamaze de catre antibiotice lactamice

Inductia unor pompe de eflux de catre subst toxice
(antibiotice, dezinfectante etc)
Inductia (in prezenta lactozei) a enzimelor care
degradeaza dizaharidul
Represia sintezei unor aminoacizi in conditiile prezentei
lor in mediu

Reglarea expresiei informatiei genetice

Exista interactiuni complexe intre diferitele
mecanisme reglatorii
Diversitatea si interdependenta mecanismelor
reglatorii necesare pentru adaptarea rapida
si adecvata a microroganismului la variate
conditii de mediu

Variatia bacteriana
Fenotipica

Genotipica

Indusa de interactiunea
genomului cu factori de
mediu
Reversibila
Nu se transmite ereditar
Prin controlul la nivel
transcriptional,
translational sau
posttranslational

Modificare brusca,
(spontana sau indusa)
Ireversibila
transmisibila ereditar
prin
Mutatii
Transfer de ADN
Recombinare genetica

Mutatii
Modificare in secventa nucleotidica a unei gene
Spontane - erori in cursul replicarii ADN
ADN polimeraza realizeaza 1 eroare la 109 baze/celula/ciclu de
replicare)

Induse de agenti mutageni

fizici (radiatii ionizante, UV)
chimici (acid nitros, analogi nucleozidici, benzopiren etc);
cresc rata mutatiilor de 10 1000 ori

Mecanisme de reparare a ADN-ului: repararea prin excizie

Prezenta si manifestarea mutatiilor bacteriene favorizate
de
Marimea populatiilor bacteriene
Caracterul diploid al genomului bacterian

Mutatii
Tipuri
Substitutii modifica un singur nucleotid dintr-un
codon, care astfel poate deveni codon
sinonim nu se modifica aminoacidul codificat
nou modificarea secventei de aminoacizi (mutatie cu
sens gresit)
non-sens - sinteza unui peptid incomplet (mutatie nonsens); daca mutatia non-sens este in prima gena
structurala a unui operon mutatie polara
GAG
Glu

GAA
Glu

GAG
Glu

GTG
Val

GAG
Glu

UAG
stop

Mutatii
Microinsertii, microdeletii insertia sau deletia a
unul sau mai multe nucleotide (mutatii cu schimbare
de proiect)

AUG GCU ACC GUC

Met Ala Tre Val

AUG AGC UAC CGU C..

Met Ser Tyr Arg -

Mutatii
Consecinta: modificarea unui caracter/ functii
Reversia fenotipica
Reversie genotipica f rar
Supresie - mutatii compensatorii - frecvent

Transfer genetic
limitat la fragmente mici de ADN provenit de la o
bacterie donor
Bacteria receptor se apara de ADN-ul strain, daca il
recunoaste ca atare - endonucleaze de restrictie

Endonucleaze de restrictie
recunosc si cliveaza secvente specifice de 6-10 pb
care constituie un palindrom (se citesc identic in
ambele sensuri)
Fiecare specie are propriile enzime de restrictie
Bacteria mascheaza situsurile de restrictie ale
propriului ADN prin metilarea nucleotidelor (A sau
C) din pozitii specifice
Metilarea dupa sinteza catenelor de ADN
3`--GAATTC- -5`
5`--CTTAAG- - 3`

3`--GA*ATTC- -5`
5`--CTTAA*G- - 3`

Transfer genetic
Gene ale bacteriei donor pot persista
integrate in cromosomul bacteriei receptor
consecutiv recombinarii genetice
ca replicon daca ADN-ul are informatii necesare
pentru propria replicare

Recombinarea genetica
= schimb de gene intre doua molecule de ADN
La eucariote in cursul meiozei (reproducere
sexuata) transfer genetic vertical
La procariote in urma transferului genetic lateral
(de la bacterii din aceeasi generatie)
Fenomen rar - <1%

Recombinarea genetica
Legitima omologie intre secventele ADN donor si
receptor
Generalizata
Situs specifica

Nelegitima recombinarea catalizata enzimatic intre

secvente diferite de ADN
Transpozitia

Recombinarea legitima
Generalizata
prin ruperea si reunirea moleculelor de ADN, dupa
substituirea a 1-n alele intre ADN-ul donor si cel
receptor
controlata de genele rec
Situs-specifica
Situs de atasare zona de omologie structurala
prezenta pe ambele elemente genetice: ADN
receptor si plasmid/ profag
integrarea unor episomi (factor F, profagi etc)

Transferul genetic
Mecanisme
Transformarea
Conjugarea
Transductia (transferul mediat de bacteriofagi)

Transformarea
Transfer de gene realizat prin
intermediul ADN-ului liber
(neincorporat in cromozom)
provenit de la o bacterie donor si
acceptat de bacteria receptor
Griffith, 1928
depinde de starea de competenta
a bacteriei
fenomen descris la pneumococi,
Bacillus, Haemophilus, Neisseria

Transductia (transfer mediat de bacteriofagi)

Harvey, Cornelissen, Fisher Microbiology, 3rd ed

Conjugarea
Transfer genetic realizat prin contact fizic intre doua
bacterii, prin intermediul unor
pili sexuali (bact Gram neg)
molecule de adeziune (bact Gram poz)
intraspecific si interspecific
Bacteria donor are plasmide conjugative (conjugoni),
care codifica structuri si enzime necesare transferului
(genele tra)
Fiziologia si efectele conjugarii difera in functie de
localizarea plasmidului (independent in citoplasma sau
integrat in cromosom)

Conjugarea prin pili sexuali

Factorul F plasmid care are numai genele
tra
Bact F+ (au pili sexuali), bact F- (receptori pt pili)

Etape
pereche specifica
pereche eficienta
Replicare de transfer o nucleaza cliveaza
una dintre catenele ADN la originea
transferului, capatul 5` trece prin puntea
citoplasmatica in celula receptoare;
replicare pe matritele catenelor parentale,
apoi circularizare

Rezulta doua bact F+

Harvey, Cornelissen, Fisher Microbiology, 3rd ed

Conjugarea intre bacterii Hfr si bacterii F Bacterii cu factorul F episomal

(integrat in cromosom) transfera
frecvent gene cromosomale: Hfr
(High frequency of recombinations)
transferul genetic incepe cu
genele cromosomale (episomul ar fi
ultimul transferat)
Cuplul bacterian se separa inainte
de transferul episomului
Rezultat bact receptor ramane F-,
dar primeste gene cromosomale
care codifica noi caractere
fenotipice
Jawetz, Melnick, Adelberg`s Medical Microbiology, 24 th ed