GUA PARA LA DETECCIN DE DERMATOFITOS EN PERROS Y GATOS

Objetivo general.- investigar dermatofitos en perros y gatos, con mtodos y tcnicas,

para acrecentar el sistema de conocimientos y habilidades, con el fin de que sirva a las
ctedras de sucesin correspondiente.
MATERIALES DE CAMPO

BIOLGICOS
Gatos y perros

FSICOS
Depsito de plstico estril
Bistur estril
Pinzas estriles
Cinta Masking y Ficha de registro
Guantes de examinacin y cubrebocas

QUMICOS
Jabn
Alcohol

MATERIALES DE LABORATORIO

BIOLGICOS
Pelos de los bordes de la lesin
Agua destilada estril para conservar los dermatofitos
Arroz integral molido

FSICOS
Cajas de Petri
Erlenmeyer
Probeta
Pipetas
Papel de aluminio
Papel de empaque
Balanza analtica
Varillas de vidrio
Porta y cubreobjetos
Papel manteca
Hilo chillo grueso
Papel de sumadora
Etiquetas adhesivas
Cinta Scoth
Barniz de uas
Asa de inoculacin,
Lmpara de Wood,
Cepillo de dientes nuevo
Micrmetro ocular y objetivo
Guantes de examinacin y cubrebocas
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QUMICOS

Azul de lactofenol para algodn

Es empleado para examinar muestras obtenidas a partir de los cultivos. El fenol
mata al hongo, el cido lctico es un agente aclarante que preserva la estructura
del hongo, la glicerina previene la desecacin y el azul de algodn colorea la
quitina y celulosa del hongo.
Solucin A:
Fenol (cristales derretidos)
20 mL.
Fundir los cristales de fenol en bao de Mara y juntar con el resto.
Acido lctico (U. S. P., 85%)
28 mL.
Glicerina
48 mL.
Mezclar

Solucin B:
Azul para algodn (azul de anilina o azul de Poirier) 0,05 g.
Agua destilada
10 mL.
Mezclar las soluciones A y B, esperar 24 horas y filtrar. Conservar a temperatura
ambiente hasta por seis meses. El azul para algodn puede ser substituido por el
azul de metileno.
.
Hidrxido de potasio al 10%

100 mL.

Agar Sabouraud Dextrosa con granos de arroz integral, conteniendo cicloheximida

(Actidione) 0.5 gramos y Cloramfenicol 0.05 gramos
Alcohol
MTODO
Se proceder a escarificar la piel afectada con un bistur estril y se extraer los pelos del
borde de la lesin depilada con pinzas estriles y se depositarn en depsitos de plstico
estriles. Previo al envo de las muestras al laboratorio, se emplear las hojas de registro
con los siguientes datos: Nmero de identificacin de la muestra; Fecha; Hora;
Procedencia; Observaciones
TCNICA DE LABORATORIO

En un cuarto oscuro, utilizando la lmpara de Wood, se examinar la muestra

obtenida, para reconocer los pelos infectados por Microsporum canis, los cuales
producen fluorescencia de amarilla brillante a verde amarillenta. Tambin debern
revisarse las uas en busca de la fluorescencia, especialmente en el gato y en este
ltimo, se pueden obtener muestras sobre un papel despus del cepillado del pelo
con un cepillo limpio de dientes, para el examen de laboratorio. Aunque no se
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observe la fluorescencia en el perro o en el gato, el animal puede tener una

infeccin mictica que puede estar producida por uno de los muchos dermatofitos
que no son fluorescentes, por ejemplo: Microsporum canis var distortum.
Microsporum gypseum. Trichophyton mentagrophytes var erinacei. Trichophyton
mentagrophytes var mentagrophytes. Trichophyton simii.

La muestra se la dividir en dos partes: una para tratarla con KOH al 10% y la otra
parte para cultivarla.
Los pelos que muestren fluorescencia se escogern con pinzas estriles y se
colocarn en un portaobjeto con varias gotas de KOH al 10%.
Se aplica un cubreobjeto y poco calor por la parte inferior del portaobjeto,
sostenindolo sobre una flama unos segundos o colocndolo en la lmpara del
microscopio durante corto tiempo.
Si no se usa calor, se deje reposar la preparacin por 20 a 30 minutos antes de
examinarla.
Una solucin aclaradora alternante es el hidrxido de potasio dimetil sulfxido, la
cual elimina la necesidad del calor.
Frmula:
Hidrxido de potasio
20 gramos
Dimetil Sulfxido
40 mL.
Agua
60 mL.
Se examinar primero con el objetivo del microscopio de poco aumento (10X), para
la bsqueda de pelos que contengan artrosporas. Los pelos sospechosos debern
examinarse con el objetivo seco de gran aumento para ver los detalles de las
esporas y las hifas que estn en ellos. Se proceder a reducir la iluminacin.
Las artrosporas de los hongos se observan como pequeos cuerpos esfricos,
refringentes, en cadenas o como una envoltura en mosaico completa alrededor del
pelo infectado. Todos los hongos dermatofitos que producen lesiones en los
animales tienen artrosporas localizadas que rodean el tallo y la raz del pelo. La
disposicin de las artrosporas en los pelos es tpicamente ecttrix (que se
encuentra en el exterior del pelo). En estas muestras tambin pueden aparecer
caros, como diversas especies del gnero Demodex.
Si no existe en la muestra fluorescencia, se proceder a utilizar el azul de
lactofenol algodn para observar las muestras.
La otra parte de la muestra, se sembrar en Agar Sabouraud dextrosa con granos
de arroz integral molido, conteniendo cicloheximida (Actidione) 0.5 gramos y
Cloramfenicol 0.05 gramos, no importando si las artrosporas son observadas con el
KOH al 10%. Las cajas Petri se incubarn en aerobiosis a 25 27 0C.
Los hongos que crezcan, se examinarn sus caractersticas macroscpicas y
microscpicas. En el agar Sabouraud dextrosa con granos de arroz integral molido,
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el anverso es de color blanco con un halo perifrico de color naranja brillante y el

reverso, anaranjado amarillento o marrn amarillento. El tamao de la colonia
puede llegar hasta 50 mm tras incubar durante 10 das. Microscpicamente, las
macroconidias de Microsporum canis se presentan en forma fusiforme (40 120 x
8 20 m.), rugosa, de pared gruesa, con hasta 15 septos.
Tambin se puede utilizar In Vitro, el estudio de la perforacin del pelo para
diferenciar entre aislamientos atpicos de Microsporum canis y Trichophyton
equinum, para lo cual se lleva a cabo la colocacin de pelos rubios estriles de
nios sobre un medio de cultivo que contenga muestra sospechosa y se incuba a
25oC. A partir del sptimo da se proceder a realizar la tincin de los pelos, con
azul de lactofenol algodn. Microsporum canis es el que penetra en el eje del pelo,
dando lugar a la formacin de estructuras azul oscuro en forma de cua,
denominadas rganos perforadores. El Trichophyton mentagrophytes var
mentagrophytes, tambin penetra en el eje del pelo y este microorganismo afecta a
los perros, roedores, caballos y muchas otras especies domsticas.
Para la utilizacin microscpica se podr aplicar a la muestra el azul de algodn
lactofenol o las tiras de cinta Scoth y el sellado se lo realizar con barniz de uas.

DERMATOMICOSIS.-

Se refiere a las infecciones que afectan a las clulas

queratinizadas del estrato crneo, el pelo y las uas; en los
animales el pelo es un sitio muy frecuente de infeccin.