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Solano de Abreu
Ano Lectivo: 2008/2009
Existem várias técnicas de obtenção das impressões digitais genéticas, entre as quais
a de RFLP (Restriction Lenght Polymorphism), a mais utilizada, e ainda a de PCR (Polymerase
Chain Reaction), que graças à alta sensibilidade e espeficidade é possível analisar um fio de
cabelo com bulbo ou caspas eliminadas do couro cabeludo.
O Processo da técnica de
RFLP
Materias que podem ser colectados:
Origem animal:
Origem vegetal:
Sangue;
Saliva; Caule;
Urina; Raiz;
Dentes;
Ossos e outros.
O material mais utilizado é o sangue. O DNA é retirado dos glóbulos brancos, devido
aos glóbulos vermelhos humanos não possuírem núcleo.
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DNA Fingerprint
Torna-se difícil obter o DNA de uma amostra caso esta seja escassa, esteja degradada
ou ainda contaminada. O DNA é purificado através da utilização de métodos químicos (ex:
fenol, chelex, etc.)
No caso de a amostra de DNA ser inferior ao necessário para realizar a sua análise, a
reacção de polimerização em cadeia permite obter cópias de uma parte do material genético
em quantidade suficiente.
4ºPasso – Electroforese
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DNA Fingerprint
Prepara-se o gel de agarose que é imerso numa tina de electroforese com uma
solução-tampão que estabelece a condução eléctrica com a fonte de alimentação. Uma vez
aplicadas as amostras de DNA e o padrão de pesos moleculares nos poços, inicia-se a
electroforese. A aplicação do campo eléctrico é efectuada através de 2 eléctrodos situados
paralelamente à fileira de poços.
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DNA Fingerprint
Desnaturação
Terminada a separação electroforética, o gel deve ser tratado com uma solução
alcalina (geralmente contendo hidróxido de sódio) para promover a desnaturação da dupla fita
do DNA, separando-a em simples fitas.
Uma membrana de nitrocelulose ou nylon é posta sobre o gel. Uma pressão é aplicada
uniformemente sobre o gel, ou recorrendo-se à sucção, ou pondo-se sobre a membrana uma
pilha de toalhas de papel com um peso em cima. Isto leva a que o DNA passe do gel para a
membrana, aonde ele adere-se.
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DNA Fingerprint
A membrana é agora tratada com uma sonda hibridizadora - que é uma molécula de
DNA isolada cuja sequência é conhecida e é idêntica, ou então complementar, aquela
sequência a qual se quer determinar a presença ou não na amostra (como as duas fitas da
dupla hélice do DNA são complementares uma a outra, tanto faz escolher uma sonda que seja
idêntica ou complementar à sequência procurada).
A sonda de DNA é marcada de tal forma que permita ser detectada a sua presença,
essa marcação é normalmente feita incorporando-se a ela átomos radioativos ou ligando-se a
ela corantes fluorescentes ou cromogênicos (substâncias incolores que produzem cor ao
interagirem com um determinado meio).
Essa sonda irá parear com qualquer sequência de DNA complementar a ela. Portanto
se a sequencia procurada não estiver presente na amostra não haverá o pareamento.
Então o excesso de sonda é lavado da membrana, e toda a sonda não hibridizada será
removida. Depois disso, a presença ou não da sonda na membrana (e as posições onde ela
está presente) é revelada por uma auto-radiografia em um filme de raio-x, ou pelo
aparecimento de uma cor caso a marcação cromogênica tenha sido usada.
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DNA Fingerprint
Aplicações do DNA
Fingerprint
Análise forense
Determinação de paternidade
Como cada indivíduo herda a disposição dos seus nucleótidos dos seus pais,
comparando os padrões de banda de um indivíduo com os dos alegados progenitores, podem-
se obter probabilidades de parentesco que nos levem a excluir a paternidade ou a confirmá-la
com um elevado grau de certeza. Se os dois padrões forem suficientemente semelhantes
(tendo em conta que só metade do DNA é herdado de cada progenitor), então a paternidade
confirma-se.
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DNA Fingerprint
Diagnóstico de doenças
Esta tecnologia pode ser usada para prever a nossa saúde futura.
Também pode ser usado no período pré-natal para detectar possíveis anomalias
hereditárias, como a distrofia muscular ou a doença de Huntington, de forma a que possa ser
disponibilizado aconselhamento médico e possam ser adoptadas as devidas precauções.
Diagnóstico molecular
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DNA Fingerprint
http://www.ufv.br/dbg/trab2002/GMOL/GMOL006.htm
http://www.portalmedico.org.br/revista/bio2v5/odnacomounica.htm
http://pt.wikipedia.org/wiki/Eletroforese_em_gel
http://www.icb.ufmg.br/big/genmed/southblot.html
http://www.biologia-ap.no.comunidades.net/index.php?pagina=1288163696