Objetivos

OBJETIVOS v 112

Objetivos

a finalidad del presente estudio ha sido desarrollar un sistema de seleccin y maduracin in vitro
de ovocitos de cabras prepberes, que permita una eficaz maduracin citoplasmtica de los
ovocitos con mayor competencia para el desarrollo. Para ello, se han formulado los siguientes

objetivos concretos:
1) Estudiar la utilidad del test de Azul de Cresol Brillante (BCB) como mtodo de seleccin de ovocitos
inmaduros de cabras prepberes con mayor competencia para la produccin in vitro de embriones
2) Evaluar el uso de un medio de MIV qumicamente definido, basado en la adicin de Factor de
Crecimiento Epidrmico (EGF), sobre la maduracin nuclear, fecundacin y desarrollo embrionario
in vitro de ovocitos de cabras prepberes
3) Investigar el efecto de la adicin de compuestos tioles (cisteamina, -mercaptoetanol, cistena,
cistina) al medio de MIV sobre la capacidad de desarrollo de los ovocitos de cabras prepberes
4) Analizar la capacidad de sntesis de glutatin (GSH) intracelular de los ovocitos de cabras
prepberes durante la MIV en presencia o ausencia de compuestos tiol
5) Mejorar la produccin in vitro de embriones de cabras prepberes, mediante el uso combinado del
test de BCB como mtodo de seleccin ovocitaria y la presencia de compuestos tiol en el medio de
MIV

Planteamiento del problema y plan

de trabajo

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y PLAN DE TRABAJO v 113

Planteamiento del problema y plan de trabajo

nteriormente, hemos mencionado como anomalas ms frecuentes tras la FIV de ovocitos de

cabras prepberes la poliespermia, la falta de formacin del proncleo masculino y la haploida en
embriones de 2-4 clulas. Entre las posibles causas de estas anomalas de la fecundacin

detectadas en nuestro laboratorio se plantean las siguientes opciones: a) Que la seleccin de los ovocitos
capaces de soportar una maduracin citoplasmtica correcta se realice de forma inapropiada, b) que el
medio de maduracin empleado no asegure una correcta maduracin citoplasmtica c) que los ovocitos
de cabras prepberes no sean competentes para realizarla. A continuacin, se plantean las actividades a
desarrollar en el presente estudio para analizar la/s causa/s de dicha problemtica:

a) Seleccin ovocitaria incorrecta

Atendiendo a esta opcin, una de las finalidades que se plantearon fue comprobar si se estaba realizando
una correcta seleccin de los ovocitos caprinos en nuestro laboratorio, la cual se ha realizado siempre
atendiendo a criterios morfolgicos. Dichos criterios no siempre coinciden entre los autores por ser
parmetros poco objetivos, lo cual hace difcil la extrapolacin de resultados de un laboratorio a otro. Por
tanto, se hace necesario un sistema estandarizado de seleccin de ovocitos para poder optimizar los
resultados.
Por esta razn, una de los objetivos planteados fue comprobar si los ovocitos seleccionados mediante un
mtodo bioqumico, el test de Azul de Cresol Brillante (BCB), eran capaces de realizar una correcta
maduracin in vitro. Para llevar a cabo este propsito se dise el primer estudio, que lleva por ttulo:
SELECCIN DE OVOCITOS DE CABRAS PREPBERES MEDIANTE EL TEST DE AZUL DE CRESOL
BRILLANTE.

b) Medio de maduracin inadecuado

Es esencial definir las condiciones de cultivo de los ovocitos para eliminar variabilidad entre experimentos y
alcanzar unos resultados ptimos de desarrollo. En la actualidad, uno de los principales objetivos de
diversos estudios sobre PIV de embriones es la estandarizacin del medio de maduracin de ovocitos con
medios qumicamente definidos. El Factor de Crecimiento Epidrmico (EGF) es un complemento definido de
los medios de maduracin que se ha utilizado en diversas especies como la base de estos medios, adems
de proporcionar notables efectos positivos durante el desarrollo. Teniendo en cuenta estas ventajas, se
dise el segundo estudio, titulado: PAPEL DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDRMICO DURANTE
LA MADURACIN IN VITRO DE OVOCITOS DE CABRAS PREPBERES.
Las anomalas halladas en estudios previos realizados con ovocitos de cabras prepberes (falta de
descondensacin de la cabeza del espermatozoide y reducidas tasas de formacin de blastocistos) podran
resolverse mediante la adicin de ciertos compuestos al medio de MIV. Se ha demostrado que la presencia

114 w PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y PLAN DE TRABAJO

de compuestos tiol durante la maduracin in vitro mejora los parmetros de fecundacin y desarrollo
embrionario en varias especies. Por esta razn se dise el tercer estudio, que se denomina: EFECTO DE
LA ADICIN DE COMPUESTOS TIOL DURANTE LA MADURACIN SOBRE LA CAPACIDAD DE
DESARROLLO DE OVOCITOS DE CABRAS PREPBERES.

c) Incompetencia de los ovocitos

Los ovocitos seleccionados mediante un criterio adecuado y madurados en un medio apropiado deberan
ser herramientas suficientes para comprobar que los ovocitos de cabras prepberes son competentes para
el desarrollo embrionario in vitro. Para concluir este trabajo de investigacin y comprobar la eficacia de los
resultados obtenidos en los anteriores estudios se dise el cuarto estudio, denominado: OPTIMIZACIN
DE LA PRODUCCIN DE EMBRIONES CAPRINOS IN VITRO MEDIANTE EL TEST DE BCB Y LA
SUPLEMENTACIN DEL MEDIO DE MADURACIN CON CISTEAMINA.