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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL

UNIDADE UNIVERSITRIA DE NAVIRA
Curso de Licenciatura em Qumica
Disciplina de Qumica Orgnica Experimental

CROMATOGRAFIA

Navira - MS
Outubro, 2014

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL

UNIDADE UNIVERSITRIA DE NAVIRA
Curso de Licenciatura em Qumica
Disciplina de Qumica Orgnica Experimental

BENTO PEREIRA CABRAL JUNIOR

RGM: 27008

FABIO PEREIRA DOS SANTOS

RGM: 27023

LEANDRO DE OLIVEIRA BISCOLI

RGM: 27033

RICARDO RIBEIRO FERNANDES

RGM: 27043

CROMATOGRAFIA

Relatrio de atividade experimental

exigido para fins de avaliao parcial da
disciplina
de
Qumica
Orgnica
Experimental, do Curso de Licenciatura
em Qumica, da Universidade Estadual
de Mato Grosso do Sul UEMS,
Unidade Universitria de Navira.
Prof: Dr. Sandro Minguzzi

Navira - MS
Outubro, 2014

Sumrio
Resumo ......................................................................................................................................... 4
1. Introduo................................................................................................................................ 4
2. Objetivos .................................................................................................................................. 5
3. Materiais e reagentes .............................................................................................................. 5
4. Procedimento Experimental ................................................................................................... 6
4.1. Cromatografia em coluna ................................................................................................... 6
4.1.1. Empacotamento da coluna (adaptada em uma bureta) ................................................ 6
4.1.2. Separao dos componentes de uma mistura .............................................................. 6
5. Resultados e Discusses .......................................................................................................... 6
5.1. Cromatografia em coluna ................................................................................................... 6
5.1.1. Empacotamento da coluna .......................................................................................... 6
5.1.2. Separao dos componentes de uma mistura .............................................................. 7
6. Concluso ................................................................................................................................. 8
7. Anexos ...................................................................................................................................... 8

Resumo
Entre os mtodos mais modernos de anlise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque
devido facilidade com que efetua a separao, identificao e quantificao das espcies
qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras tcnicas instrumentais de anlise.

1. Introduo
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de
uma mistura, realizada atravs da distribuio desses componentes em duas fases, que
esto em contato ntimo. Uma das fases permanece estacionria, enquanto a outra se
move atravs dela. Durante a passagem da fase mvel sobre a fase estacionria, os
componentes da mistura so distribudos pelas duas fases de tal forma que cada um
deles seletivamente retido pela fase estacionria, o que resulta em migraes
diferenciais desses componentes [1].
Os termos e expresses cromatografia, cromatograma e mtodo
cromatogrfico so atribudos ao botnico russo Mikhael Semenovich Tswett, que, em
1906, os utilizou em dois trabalhos que descrevem suas experincias na separao dos
componentes de extratos de folhas, nas quais usou colunas de vidro recheadas com
vidros slidos, finamente divididos, e arrastou os diferentes componentes com ter de
petrleo. O nome deriva das palavras gregas chrom (cor) e graphe (escrever), embora
ele tenha explicitado que o processo no depende da cor, exceto para facilitar a
identificao dos componentes separados [1].
A forma fsica da cromatografia define a tcnica geral: a fase estacionria pode
ser colocada em um tubo cilndrico ou disposta sobre uma superfcie planar. Baseandose nesta, a cromatografia pode ser subdivida em cromatografia em coluna e
cromatografia planar. As colunas preparativas e analticas e analticas sempre
apresentam a fase estacionria na forma de partculas, e a fase ativa na separao pode
ser um slido ou um liquido, que tanto pode recobrir a superfcie do slido como pode
estar ligado quimicamente a ele [1].
A cromatografia lquida em coluna divide-se em dois grupos: a cromatografia
lquida clssica, feita em colunas de vidro, sob presso atmosfrica, com fluxo da fase
mvel devido fora da gravidade, e a cromatografia lquida que normalmente utiliza
colunas metlicas e presses de fase mvel elevadas, obtidas com auxlio de uma bomba
de alta presso (por isso, , s vezes, chamada de cromatografia lquida de alta

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presso ), que pode empurrar a fase mvel com vazo mais rpida (resultando em outro
nome: cromatografia lquida de alta velocidade ). Sugere-se aqui, que se denomine
essa tcnica cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), devido sua
caracterstica mais importante, que a elevada eficincia atingida na separao [1].
Na CLAE emprega-se uma coluna, reaproveitvel, portanto, at centenas de
separaes individuais podem ser realizadas com a mesma coluna. Desde que o custo de
uma coluna individual pode ser distribudo por um grande nmero de amostras,
possvel utilizar colunas com recheios de alta resoluo, porm mais caras. Essas
colunas so muito eficazes, mas oferecem uma grande resistncia a vazo da fase
mvel. Por essa razo, faz se necessrio empregar uma bomba de alta presso que faz
que a fase mvel migre a uma velocidade razovel atravs da coluna [1].

2. Objetivos
A realizao desta prtica ser feita atravs da cromatografia em coluna para a
separao dos componentes de uma mistura colorida de azul de metileno e alaranjado de
metila em uma coluna contendo slica gel. A slica gel interage com as espcies bsicas
devido natureza cida do xido de silcio.

3. Materiais e reagentes
Bureta 25 mL;
Suporte para bureta;
Basto de vidro;
Chumao de algodo;
Pipetador;
Slica gel;
Soluo de alaranjado de metila;
Soluo de azul de metileno;
lcool etlico;
cido actico;
Pipeta de Pasteur;

4. Procedimento Experimental
4.1. Cromatografia em coluna
4.1.1. Empacotamento da coluna (adaptada em uma bureta):
Preparou-se uma coluna para cromatografia utilizando slica gel como fase
estacionria, da seguinte maneira: agitou-se com um basto em um bquer, 5.0234 g de
slica em etanol, at obter uma pasta fluda, homognea e sem bolhas de ar includas.
Fixou-se na extremidade inferior da coluna um pedao de algodo para impedir a
passagem da slica pela torneira da bureta. Encheu-se a tera parte da coluna com etanol
e derramou-se, ento, a pasta fluda de slica, de modo que ela sedimente aos poucos e
de forma homognea. Controlou-se o nvel de do solvente abrindo a torneira da coluna,
terminou-se a preparao, deixou-se o nvel de etanol 1 cm acima do topo da coluna.

4.1.2. Separao dos componentes de uma mistura

Distribuiu-se homogeneamente sobre o topo da coluna de slica, com o auxilio
da pipeta Pasteur adicionou-se 3 mL da soluo etanlica de alaranjado de metila e azul
de metileno. Aps a adsoro pela coluna, procedeu-se a eluio com etanol, vertendo
cuidadosamente o solvente pelas paredes da coluna, tomando cuidados para no causar
distrbios na agitao da coluna. Ao mesmo tempo abriu-se a torneira para escora o
solvente.
Elui-se todo azul de metileno com etanol. Elui-se, primeiro com gua, o
alaranjado de metila retido na coluna e em seguida com uma soluo de cido actico.
Repitiu-se o mesmo procedimento acima utilizando slica gel como fase fixa da
coluna. Observou-se que a ordem de eluio se inverte, isto , o alaranjado de metila sai
com etanol enquanto o azul de metileno fica retido na coluna.

5. Resultados e Discusses
5.1. Cromatografia em coluna
5.1.1. Empacotamento da coluna
Tomou-se uma bureta de 25 mL, a fim de adaptar uma coluna que o corao do
sistema cromatogrfico, introduziu-se a fase estacionria (Slica gel) no tubo de vidro
(Bureta) com o recobrimento com etanol, e de maneira a evitar que a mesma sasse da

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coluna empregou-se um material poroso que neste caso foi um chumao de algodo
para reter as partculas, mas que deixasse a fase mvel passar.
5.1.2. Separao dos componentes de uma mistura
Foram preparados duas solues simples de alaranjado de metila e outra de azul
de metileno, foi introduzido na coluna cromatogrfica (bureta) 3 mL de cada soluo e
como nesta cromatografia foi utilizado como eluentes a mistura de dois solventes o
etanol e o cido actico, comeamos o processo de separao primeiro com o etanol que
possui menor afinidade com a slica gel por ser considerado parcialmente apolar, aps o
incio da separao por cromatografia para acelerar o processo utilizamos um pipetador
adaptado para comprimir a coluna, agindo como se fosse um bomba de presso. O
primeiro lquido a descer pela slica tinha colorao amarelada e logo em seguida surgiu
na fase estacionria colorao azul (LANAS, 2009).
Como a adsoro das substncias pela fase estacionria proporcional a
polaridade da substncia para produzir a separao, elevamos a polaridade do eluente
trocando o etanol pelo cido actico, para que dessa forma aumentasse a seletividade
das substncias pela fase estacionria. Aps separarmos todos os lquidos que possuam
colorao amarelada com etanol, mudamos a fora de eluio dentro do intervalo,
demos inicio a separao da colorao azul com cido actico que possui maior
afinidade com a fase estacionria, e dessa forma finalizamos a separao sendo que
todas as substncias de afinidade apolar foram separadas de antemo pelo etanol
restando apenas as polares que foram extradas pelo eluente polar, o acido actico
(LANAS, 2009). Ficando dessa forma a sequncia de separao, como demonstrado
na (Figura 1.).

Figura 1. Sequncia de separao cromatogrfica pelo mtodo da coluna, utilizando

com eluentes o etanol e o cido actico

6. Concluso
A cromatografia lquida um processo fsico utilizado na separao dos
componentes de uma mistura. A base para esta separao a distribuio dos analitos
entre duas fases: uma fase estacionria e a fase mvel (um lquido). Para que haja a
separao da mistura bem assimilada, a ordem dos eluentes importantssima, pois
neste caso se tivssemos invertido a ordem dos eluentes o mais polar que o cido
actico teria arrastado todos os componentes da mistura simultaneamente, dessa forma
no produzindo a separao, ento todos os componentes da mistura seriam eluidos
juntos e com uma velocidade maior.

7. Anexos
1. Cite os principais tipos de foras que fazem com que os componentes de uma mistura
sejam adsorvidos pelo slido:
R= Foras de Van Der Waals, interao dipolo induzido, ligaes de hidrognio,
interaes dieltricas, interaes eletrostticas e coulombianas.

2. Cite a principal caracterstica do solvente para lavar ou arrastar os compostos

adsorvidos na coluna cromatogrfica:
R= A caracterstica principal dos solventes a polaridade, dessa forma vai-se
aumentando a polaridade, o que tambm aumenta o poder de arraste das substancias
mais polares.

3. Fale sobre o princpio bsico que envolve a tcnica de cromatografia:

R= A cromatografia uma tcnica de separao baseada na distribuio dos
componentes de uma mistura entre um fluido (fase mvel ou eluente) e um adsorvente
(fase estacionria). A fase estacionria pode ser um slido ou um lquido depositado
num slido inerte, empacotado numa coluna ou espalhado por uma superfcie formando
uma camada fina.

4. Por qu se deve colocar papel filtro na parede da cuba cromatogrfica?

R= Para saturar a atmosfera no interior da cuba com o solvente, se no for feito isso o
solvente que sobe pelo papel ir se evaporar para saturar a atmosfera e equilibrar o

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sistema liquido/gasoso, se isso acontecer, essa evaporao ir interferir no processo de
eluio podendo produzir variaes nos resultados de Rf.

5. Se os componentes da mistura, aps a corrida cromatogrfica, apresentam manchas

incolores, qual o processo empregado para visualizar estas manchas na placa
cromatogrfica?
R= A placa deve ser revelada, um mtodo bastante comum o uso de vapores de iodo,
que reage com muitos compostos orgnicos formando complexos de cor caf ou
amarela, outros reagentes utilizados na visualizao so: nitrato de prata (derivados
halogenados), 2,4-dinitrofenilidrazina (para acetonas e aldedos), verde de bromocresol
(para cidos), ninhidrina (para aminocidos), etc.
6. O que e como calculado o Rf ?
R= um parmetro frequentemente usado na cromatografia de camada fina, que dado
em funo do tipo de suporte (fase fixa) empregada e o eluente, definido como a razo
entre a distncia percorrida pela mancha do componente e a distancia percorrida pelo
eluente.

7. Quais os usos mais importantes da cromatografia de camada delgada?

R= Os usos mais importantes para a cromatografia em camada delgada so para a
separao rpida e anlise qualitativa de pequenas quantidades de material.Usada
tambm para determinar a pureza de um composto, identificar componentes de uma
mistura e acompanhar o curso de uma reao atravs do desaparecimento do reagente
limitante e aparecimento do produto.

8. A alumina, ou xido de alumnio, tem ao bsica e interage fortemente com espcies

cidas; por sua vez, a slica gel interage com espcies bsicas devido a natureza cida do
xido de silcio. Baseado nessas informaes, explique o comportamento distinto dos
dois corantes (azul de metileno e alaranjado de metila) empregados quando se usa
alumina ou slica como fase fixa.
R= O azul de metileno, por ser um sal e ser mais polar tem maiores interaes com a
slica do que o alaranjado de metila, sendo melhor adsorvido por ela.

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8. Referencias
[1]

COLLINS H. C.; BRAGA L. G.; BONATO. S. P. Fundamentos de Cromatografia.

Campinas, SP: Editora da Unicamp, 2006.

LANAS M F. Cromatografia lquida moderna: HPLC/CLAE. Campinas, SP:
Editora tomo, 2009.