HAPTOGLOBINA

(Ref. NPP21)
REACTIVO PARA LA DETERMINACIN CUANTITATIVA DE HAPTOGLOBINA EN EL
SUERO HUMANO CON MTODO NEFELOMTRICO
SLO PARA EL DIAGNSTICO IN VITRO
APLICACIONES CLNICAS
La haptoglobina es una protena que se liga a la hemoglobina liberada por la lisis de los
eritrocitos. El complejo hemoglobina/haptoglobina se elimina rpidamente de la sangre
circulante. Por consiguiente, una intensa liberacin de hemoglobina debida a hemlisis
intravascular, lleva a una disminucin en la concentracin de haptoglobina y, en casos graves
de hemlisis, a su total consuncin. La haptoglobina es una protena de fase aguda, y como tal
su concentracin srica puede ser elevada en los procesos inflamatorios.

PRINCIPIO DEL MTODO

La haptoglobina contenida en el suero humano forma algunos inmunocomplejos, reaccionando
con los anticuerpos especficos. Gracias al fenmeno de difracin de la luz provocada por estos
inmunocomplejos, ser posible medir, por medio de un nefelmetro, la intensidad de la luz
difractada, que es proporcional a la concentracin de haptoglobina en la muestra analizada. La
evaluacin de los resultados se realiza por comparacin con un calibrador de concentracin
conocida.
REACTIVO SUMINISTRADO EN EL KIT
El reactivo debe ser almacenado a 2-8C. Durante su almacenamiento, en el antisuero
pueden aparecer sedimentos o turbiedad que no son debidos a contaminacin microbiana y
que no no influyen sobre su actividad. En estos casos ser necesario filtrar el antisuero
antes de usarse. Para este fin, la opcin ms recomendable consiste en el uso de filtros
desechables con tamao de poro de 0.45 m.
La fecha de caducidad es imprimida en la etiqueta del envase y se refiere al componente
cerrado y almacenado a 2-8C.
A/S Antisuero: 1 vial (2 mL) de antisuero policlonal desarrollado en cabra, contra
haptoglobina humana altamente purificada. Conservante: NaN3 (<0.1%). Listo para usarse.
Despus de cada utilizacin, almacenar el reactivo hermticamente cerrado a 2-8C por 4
semanas. No congelar. Los ttulos de anticuerpos (T), nos indican la cantidad en mg de
antgeno precipitado en gel de agarosa por 1 mL de antisuero. Estos niveles se determinan
mediante inmunodifusin radial y estn indicados en la etiqueta del vial.
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
El antisuero debe ser utilizado con los siguientes reactivos:
Calibrador Protenas S, (Ref. NCPP1)
Control Protenas S/L, (Ref. NCPP2L)
Control Protenas S/M, (Ref. NCPP2M)
Control Protenas S/H, (Ref. NCPP2H)
Diluyente, (Ref. NDPP1)
Tampn de Reaccin, (Ref. NDPP2)
Nefelmetro Delta (Ref. 010138)
Materiales desechables y equipos como descrito en el Manual de Uso para el Nefelmetro
Delta.
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ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Para obtener resultados correctos y reproducibles, ajustarse a las siguientes
disposiciones:
No usar los reactivos despus de su fecha de caducidad.
Evite que se produzca cualquier contaminacin entre muestras y reactivos; para ello,
debern utilizarse puntas desechables para cada muestra y reactivo.
Para evitar contaminaciones personales y ambientales, debern observarse las
siguientes normas de seguridad:
Utilizar guantes desechables durante la manipulacin del material potencialmente
infeccioso y durante el ensayo.
No fumar, comer, beber o aplicar cosmticos durante la ejecucin del ensayo.
Evite salpicaduras y formacin de aerosoles; en caso de que se presenten, lave
cuidadosamente con una solucin de hipoclorito de sodio al 3%. Todo este material de
limpieza
debe
manejarse
como
potencialmente
infeccioso
y
desecharse
correspondientemente.
Los reactivos para los cuales no se proporciona una ficha de seguridad, no contienen
sustancias qumicas peligrosas o, si las contienen, stas estn por debajo de los lmites de
concentracin establecidos en el Decreto Italiano D.Lgs.285/98, de conformidad con la
directiva 91/155 de la CEE.
De acuerdo con el decreto Italiano D.L. no. 22, de fecha 05.02.97, de conformidad con las
directivas de la CEE (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), todos los productos de
desecho que se originen tanto a partir de los procedimientos manuales como de los
automticos estn clasificados como material de desecho peligroso especial (clasificacin
europea cdigo 180103). Como tales, deben entregarse a empresas especiales, calificadas
para recoger y disponer de este tipo de desechos.
TOMA Y PREPARACIN DE LAS MUESTRAS
El ensayo puede realizarse en muestras de suero humano. Los sueros tendrn que haber
coagulado completamente y, despus de haber sido centrifugados, debern estar libres de
partculas o trazas de fibrina en suspensin. Asegurarse de que las muestras estn
perfectamente lmpidas antes de ensayarlas. Por lo tanto las muestras extremadamente
lipmicas o los sueros congelados que aparezcan turbios despus del descongelamiento deben
ser clarificados por centrifugacin (10 minutos a aprox. 15000 g). Las muestras pueden
conservarse a 2-8C durante 8 das; para perodos ms largos (1 ao) se recomienda
conservar las muestras a -20C. Evitar repetidos ciclos de congelamiento-descongelamiento de
las muestras.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Todos los pasos estn realizados automticamente por el equipo.
Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente (15-25C).
Consultar el procedimiento del ensayo descrito en el Manual de Uso para el Nefelmetro
Delta, que preveen la disposicin de lo siguiente:
Curva de calibracin: preparada automticamente por el equipo por medio de diluciones
seriales del Calibrador (Ref. NCPP1) con su respectivo Diluyente (Ref. NDPP1). Estas
diluciones se utilizarn para la calibracin, que queda vlida siempre y cuando los controles
ensayados se mantengan dentro de los lmites estimados. La calibracin debe repetirse
necesariamente cada vez que se use un nuevo lote de antisuero.
Muestras: Antes de ser ensayados, los sueros sern diluidos automticamente por el
equipo Delta en relacin 1:20 con el respectivo Diluyente (Ref. NDPP1). Si los valores
resultaran fuera del margen de medicin se recomienda repetir el ensayo utilizando una
dilucin mayor o ms baja.
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Control de calidad interno: Para cada serie de muestras y cada vez que se use un nuevo
vial de antisuero, es necesario aplicar un control de exactitud y precisin mediante los
Controles para Protenas S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) y S/H (Ref. NCPP2H).
Los controles se tratan como las muestras analizadas. Para los lmites esperados, referirse
a la relativa tabla suministrada con el envase de los controles mismos.

CLCULO DE LOS RESULTADOS

La evaluacin de las muestras se realiza automticamente, por medio de la elaboracin de los
resultados con una funcin logit-log.

VALORES NORMALES
Los siguientes valores de haptoglobina tan slo son orientativos. Es aconsejable que cada
laboratorio defina un rango de referencia propio.
Protena

Suero

Haptoglobina

0.30 2.00 g/L

FUNCIONAMIENTO DEL ENSAYO

ESPECIFICIDAD
El antisuero utilizado resulta ser especfico para la determinacin de Haptoglobina humana.
SENSIBILIDAD
La sensibilidad del ensayo queda definida como el lmite inferior de la curva de calibracin y
por eso depende de la concentracin de las protenas en el calibrador.
Los rangos de medicin estn detallados en el Manual de Uso para el Nefelmetro Delta.
PRECISIN
La precisin fue evaluada midiendo la variabilidad intraensayo e interensayo.
Intraensayo
Protena
Haptoglobina

Interensayo

n repl. Valor medio [g/L] CV % n repl. Valor medio [g/L] CV %

15

1.32

2.6

17

1.47

3.8

CORRELACIN ENTRE MTODOS

Las muestras de suero fueron examinadas con Antisuero Radim anti-Haptoglobina humana (y).
Tales resultados fueron comparados con un sistema nefelomtrico de referencia (x). La
correlacin de resultados se resume en la siguiente tabla:
Protena
Haptoglobina

Regresin lineal

ndice de correlacin

n muestras

y = 1.03 x + 0.06

0.98

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LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

La presencia de turbiedad o partculas puede interferir con el procedimiento del ensayo. Por
eso se recomienda remover por centrifugacin eventuales partculas debidas a sueros no
completamente coagulados o por desnaturalizacin de protenas. Por causas tcnicas
relacionadas con la produccin y/o el envejecimiento de las muestras, los resultados obtenidos
con los sueros de control y con los sueros empleados para el control de calidad
interlaboratorios pueden variar en funcin del mtodo utilizado. Por lo tanto, podra ser
necesario evaluar los resultados refirindose a valores especficos para cada mtodo
empleado.

M318.es - Rev.3

Novembre 2005

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