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Se tom un pallet con 1.

5ml del cultivo de bacterias y se centrifug a 13000


rpm por 30 segundos
Se elimin el sobrenadante por aspiracin con ayuda de una micropipeta y se
dej el pallet lo ms seco posible sin eliminar el precipitado
Se resuspendi el pallet en 300l de buffer I (buffer de lisis) y se agit
vigorosamente en el Vortex
Se adicion 300 l del buffer II, se cerr el tubo y se agit muy cuidadosamente
invirtiendo el tubo 5 veces
Se adicion 300 l del buffer III, se cerr el tubo y se agit muy
cuidadosamente invirtiendo el tuvo 5 veces.
Se centrifug a 13000 rpm por 10 minutos
Se tom 800 l del sobrenadante
Se adicion 0.7 volmenes de Isopropanol, se mescl agitando cuidadosamente
invirtiendo el tubo 5 veces y se dej reposar en hielo durante 5 minutos
Se centrifug a 13000 rpm por 10 minutos y se desech el sobrenadante
Se lav el precipitado con etano al 70%. ( se adicion 1ml del etanol al
precipitado, se agit, centrifug y se elimin el sobrenadante)
Se dej secar el precipitado por 5 minutos
Se resuspendi el precipitado en 30 l de buffer Tris 3nM pH 5.5
En un pollet se agrego 2l del ADN, 1.5l de BSA, 1l de la enzima Bam H1,
1.5l del buffer III y 9l de agua destilada. Obteniendo asi 15l de volumen
total en el pollet.
Se centrifugo y se incubo durante dos horas a 37C.