UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

GRADUAO EM FARMCIA
FSICO-QUMICA EXPERIMENTAL - QMC5453 TURMA 03102B
PROFESSOR THIAGO FERREIRA DA CONCEIO











DETERMINAO DA CONSTANTE DE DISSOCIAO DE INDICADORES POR
ESPECTROFOTOMETRIA
Experimento 02


















ANGLICA BARBOZA GELAIN
CAROLINA BONATTO DE SOUZA
MANOELA MARIA DE JESUS
MARIA LUIZA FARIAS DA SILVA
VINCIUS ANTERO NUNES



FLORIANPOLIS, 09 DE SETEMBRO DE 2014.
INTRODUO
Uma variedade de substncias, conhecidas como indicadores de neutralizao, ou indicadores
cido-base, mudam de cor conforme a concentrao de on de hidrognio na soluo. Porm
essa mudana de cor no ocorre de forma sbita e sim num pequeno intervalo de pH (de cerca
de duas unidades), que corresponde ao intervalo de mudana de cor ou zona de viragem do
indicador. A escala de pH em que ocorre a mudana de cor uma caracterstica tpica de cada
indicador cido-base. Indicadores de neutralizao so em geral cidos orgnicos muito fracos
ou bases orgnicas muito fracas, que se dissociam em meio aquoso at alcanarem uma
constante de equilbrio ou constante de dissociao, KIn. Se o pH da soluo for abaixo do
pKIn, o indicador possuir uma cor X e em pH acima de do pKIn, uma cor Y.
A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas investigaes biolgicas e
fsico-qumicas. A absoro das radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas, dependem
das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica. Quando a luz
atravessa uma substncia, parte da energia absorvida: a energia radiante no pode produzir
nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substncias se deve a absoro de certos
comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos
olhos apenas aqueles comprimentos de ondas no absorvidos.
Neste experimento analisamos o comportamento de indicadores na presena de solues de
pH variados, e utilizamos um espectrofotmetro para determinar a constante de dissociao
do indicador vermelho de metila.

OBJETIVO
Estudar, por meio de observao visual, o efeito do pH na mudana de colorao de diferentes
indicadores. Determinar, empregando a espectrofotometria, a constante de dissociao do
indicador vermelho de metila.

MATERIAIS E MTODOS
Materiais: Buretas volumtricas; tubos de ensaio; pipetas volumtricas; bqueres; Na2HPO4
0,2 M; cido ctrico 0,1 M; pH-metro; Indicadores (alaranjado de metila, azul debromofenol,
vermelho de metila, bromocresol prpura, azul de bromotimol, vermelho de cresol,
fenolftalena); frasco lavador; Espectrofotmetro.
Procedimento: Parte 1 - Preparo das solues tampo:
Com o auxlio de 2 buretas foram preparados 15 mL de vrias solues tampo em 6 tubos de
ensaio numerados de 1 a 6, conforme o quadro abaixo.
Soluo pH terico Na
2
HPO
4
; 0,2 M cido ctrico; 0,1 M Volume final
01 3,0 3,10 mL 11,90 mL 15 mL
02 4,0 5,80 mL 9,20 mL 15 mL
03 5,0 7,75 mL 7,25 mL 15 mL
04 6,0 9,50 mL 5,50 mL 15 mL
05 7,0 12,35 mL 2,65 mL 15 mL
06 8,0 14,60 mL 0,40 mL 15 mL

Os tubos foram agitados e o pH das 6 solues medido em um pH-metro calibrado em padres
de pH 7,0 e 4,0. E anotados na tabela.
Aps 2 mL das solues de cada tubo foram transferidos para uma nova srie de 6 tubos
numerados. Estes tubos foram reservados para a execuo da parte 2.
O tubo 6 contendo 10 mL foi dividido em 2 tubos de 5 mL cada, e junto com os demais tubos
com 10 mL, foram adicionados uma gota de indicador em cada um conforme indicado, e as
cores obtidas foram anotadas.
Soluo Indicador
01 Alaranjado de metila
02 Azul debromofenol
03 Vermelho de metila
04 Bromocresol prpura
05 Azul de bromotimol
06a Vermelho de cresol
06b Fenolftalena

Parte 2: Nos 6 tubos reservados contendo 2 mL de soluo cada, foi adicionado 1,0 mL de
vermelho de metila diludo. As absorbncias (A) de cada soluo foram medidas variando o
comprimento de onda de 400 nm a 600 nm.
RESULTADOS E DISCUSSO
Determinao do pH experimental e da cor aparente:

Sol.
pH
terico
pH
exper.

Indicador

Cor exp.
pH
mudana
Cor A Cor B
(transio de cor
terico)
01 3,0 3,08 Alaranjado de metila Laranja 2,9 4,6 Vermelho Alaranjado
02 4,0 5,20 Azul debromofenol Azul 2,8 4,6 Amarelo Azul
03 5,0 6,40 Vermelho de metila Amarelo 4,2 6,3 Vermelho Amarelo
04 6,0 7,16 Bromocresol prpura Prpura 5,2 6,8 Amarelo Prpura
05 7,0 7,99 Azul de bromotimol Verde 6,0 7,6 Amarelo Azul
06A 8,0 9,04 Vermelho de cresol Rosa 7,2 8,8 Amarelo Vermelho
06B 8,0 9,04 Fenolftalena Incolor 8,3 10,0 Incolor Rosa

As solues com pH abaixo do pKIn, obtiveram cor A, ou seja, estavam na forma no ionizada.
Em pHs acima do pKIn a cor B foi obtida, ou seja, estavam na forma ionizada. As solues 05 e
06 apresentaram um estado intermedirio.
Valores de pH e absorbncia das solues obtidas nesta experincia no espectrofotmetro
(para o comprimento de onde de 525nm):
Soluo pH Absorbncias (A)
01 3,08 0,7790
02 5,20 0,5926
03 6,40 0,1399
04 7,16 0,0538
05 7,99 0,0314
06 9,04 0,0283
Obs.: Grfico da espectrofotometria e valores das demais leituras de absorbncias segue em
anexo.

TRATAMENTO DE DADOS E QUESTIONRIO
1. Com os dados de absorbncia obtidos dos espectros de UV-Vis, determine a constante de
dissociao (K) ou pK do indicador por meio da Equao 5. A constante de dissociao
corresponde mdia aritmtica dos quatro valores encontrados. Para os clculos (Eq. 5)
assuma que o valor da absorbncia (A) em pH 3 corresponde a AHin e, em pH 8, a AIn-. O
valor de A ser obtido em cada um dos outros espectros (Figura 2A) em um comprimento de
onda especfico, por exemplo, em 520 nm (Fig 2A).


( ) ()
( ) ()




() ()
() ()
()



() ()
() ()




() ()
() ()




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() ()

2. Faa um grfico como o da Figura 2 B e determine o pK por regresso linear, Eq. 5
(y = ax + b).

(Em anexo)

3. Obtenha da literatura o valor terico da constante do indicador e calcule o erro
experimental do pK. Compare o pK do indicador calculado algebricamente (questo 1) e com
o grfico, (questo 2). Discuta os dois resultados em relao ao erro.

Valor terico da constante do indicador vermelho de metila : pK = 5,05.

O valor experimental da constante do vermelho de metila em relao ao valor terico
apresentou um erro relativo de 10,9%. Tal diferena pode ter ocorrido devido aos possveis
erros durante o manuseio das buretas e na calibrao do pH-metro, j que os valores de pH
das solues utilizadas foram um pouco mais altos que os valores estipulados na tabela.

4. Discuta os resultados obtidos na Tabela 3 em relao ao pH terico e experimental e a cor da
soluo de indicador terico e experimental. possvel estimar o pH de uma soluo aquosa
pela cor obtida quando da adio de um indicador cujo pK conhecido? O que so espectros
de absoro? Explique (Voguel, pg. 542). Que tipos de molculas apresentam absoro no
ultravioleta e/ou no visvel?

Os valores de pH obtidos experimentalmente foram um pouco mais altos que os valores j
estipulados na tabela. H possveis erros durante o manuseio das buretas e na calibrao do
pH-metro.
A adio de determinados indicadores provocou uma reao colorimtrica em que pudemos
observar as mudanas de cores, as quais corresponderam s faixas indicadas, exceto para a
soluo 05 e 06A, onde as solues poderiam estar em estado de transio.

possvel determinar o pH de uma soluo aquosa pela cor obtida quando a adio de um
indicador cujo pK conhecido, pois assim podemos saber o melhor indicador para
determinada faixa de transio. Cor A, corresponde a forma no ionizada (protonada) em que
o pH est abaixo do pK, na cor B que corresponde a forma ionizada (desprotonada) o pH est
acima do valor do pK, portanto o indicador possui uma faixa de viragem de cor dependente de
pH.

Segundo Vogel, a absoro de uma dada substncia afetada, em grande parte, pela presena
de um cromforo. Este um grupo funcional que tem um espectro de absoro caracterstico
na regio visvel ou ultravioleta. Estes grupos contm invariavelmente ligaes duplas ou
triplas C=C (e portanto, o anel benznico), a ligao CC, o grupos nitro e nitroso, o grupo azo e
os grupos carbonila e tiocarbonila. Se o cromforo for conjugado com outro da mesma
espcie, ou de espcies diferentes, a adsoro ser realada e aparecer uma nova banda de
absoro num comprimento de onda maior.

5. O que ponto isosbstico? possvel observar a existncia de ponto isosbstico nos
espectros de absorbncia que voc obteve para o vermelho de metila? Quando isto
acontece?

Ponto isobstico corresponde regio do grfico em que todas as curvas se cruzam ou se
aproximam. Ocorre no momento em que as solues de pHs distintos absorvem o mesmo
comprimento de onda, indicando um equilbrio qumico. No grfico da espectrofotometria (em
anexo) foi possvel observar a existncia do ponto isobstico com o indicador vermelho de
metila, quando o comprimento de onda foi aproximadamente 460 nm.

6. Voc usou um espectrofotmetro na regio do visvel para verificar a dissociao do
indicador cido-base vermelho de metila. Porque isso foi possvel? Explique fazendo a
dissociao da molcula do vermelho de metila no equilbrio cido/base.

Indicadores so cidos ou bases orgnicas que se dissociam em meio aquoso, mudando a sua
cor conforme o pH da soluo. Quando o pKin do indicador for maior que o pH da soluo a
sua cor corresponder a da forma no ionizada, quando o pH estiver acima do valor do pKin a
cor ser aquela da forma ionizada. O indicador utilizado, vermelho de metila, um cido
orgnico, seu pKin 5,05. possvel concluir que quando o pH do meio for menor que 5,05 a
cor apresentada ser correspondente forma no ionizada, ou seja, a cor vermelha.

A visualizao das cores foi possvel devido absoro de radiao luminosa. Quanto menor o
pH (mais cido), maior foi a absoro da luz. Quanto maior o pH (mais bsico), menos luz foi
absorvida.

7. Descreva outro mtodo que poderia ser usado para determinar o pK. Atravs de
espectrofotometria pode-se determinar o pK de aminocidos e protenas? Explique.

Outro mtodo utilizado para a determinao de pK, a titulao potenciomtrica. Esse
mtodo tem por base de determinao a analise potenciomtrica relativa, com auxilio de um
eletrodo de vidro sensvel ao pH, que tem por objetivo determinar os valores experimentais
das constantes de dissociao (pK) de cidos. Sendo assim, atravs dos pontos de equivalncia
das dissociaes pode se determinar experimentalmente os devidos valores de K com base em
uma soluo tampo, possvel comprovar segundo os dados tericos e a curva de titulao
os valores para pK
1
2,15 e pK
2
7,13 e pK
3
. Sendo assim a ponteciometria um mtodo razovel
para analise de pK.
As protenas, que absorvem luz na regio UV, podem ser detectadas pela absoro de luz a
280nm, pois essas molculas tm carter anftero. Porm, as protenas so detectadas
somente com a presena de determinados reativos, que originam substncias coloridas que
absorvem luz na regio visvel, permitindo a sua quantificao.

8. Defina constante de dissociao cida e bsica para uma substncia.

A constante de basicidade definida pela expresso:
[

] [

]
[]
.

Uma base forte tem tendncia de a receber prtons, essa tendncia depende da espcie com
que reage, para se comparar a fora das bases, toma-se de referncia normalmente a gua.
Atravs da constante de basicidade, as foras das bases so comparadas. Quanto maior for o
valor, mais forte a base.

A constante de acidez definida pela expresso:
[

] [

]
[]
.

proporcional a concentrao dos ons formados. Sendo assim, quanto maior o valor de Ka,
mais ionizado o cido, e tambm maior sua fora. A constante de acidez tambm depende
da temperatura.

9. O pH um dos fatores mais importantes no processo de formulao de frmacos por causa
de seus efeitos sobre a solubilidade e a estabilidade dos princpios ativos. Relacione
situaes que exemplifiquem a importncia do controle do pH na rea farmacutica.

Cada frmaco, dependendo de suas propriedades fsico-qumicas, possui uma regio de pH da
mxima estabilidade, onde a velocidade de decomposio mnima. Podemos citar como
exemplo a decomposio de AAS, gerando cido saliclico e cido actico. A regio de pH 2,48
a que apresenta o menor valor para a velocidade de decomposio do AAS. Sendo seu pH
timo igual a 2,48 esse frmaco no ir agir em locais cujo pH seja muito diferente deste,
possvel chegar a essa concluso pois o processo de absoro de um medicamento necessita
de uma membrana preferencialmente permevel, a uma forma de eletrlito fraco e um
gradiente de pH atravs da membrana.

10. Que tipos de resduos qumicos foram gerados neste experimento e como foram tratados.
Explique.

Os resduos gerados eram de material no txico e biodegradvel. Aps a medio do pH e
constatar que a faixa estava dentro do permitido para descarte (pH entre 5 e 9), os resduos
lquidos foram adicionados a um frasco com carvo ativado para remoo da cor dos lquidos.


CONCLUSO

Os indicadores cido-base so geralmente compostos orgnicos, cidos fracos (indicadores
cidos) e bases fracas (indicadores bsicos) que se dissociam em meio aquoso e mudam de cor
de acordo com a variao do pH. Se o indicador se encontra em solues de pH's abaixo do pK
do indicador, sua cor ser a da forma no-ionizada e, se acima do pK do indicador, ser da
forma ionizada. Nas diferentes solues cido-base, foi adicionado o indicador vermelho de
metila, formando um gradiente de cores para cada variao de pH. Estas amostras foram
analisadas em espectrofotmetro de absoro para determinar as absorbncias do vermelho
de metila. A partir das informaes obtidas foi possvel calcular o valor experimental para este
indicador cido-base, resultando numa constante de 5,60.


























REFERNCIAS

VOGEL, Arthur Israel; Anlise qumica quantitativa; 6 edio. Rio de Janeiro, 2012.
RUSSEL, John B; Qumica Geral; 2 edio Volume II; So Paulo, 1994.
Apostila de Fsico Qumica experimental, Curso de graduao em Farmcia, UFSC; 2014.02