Unidad # 3 Mtodos

Microbiolgicos
CALDO UREA
INTRODUCCION
La urea constituye una fuente de nutricin nitrogenada utilizada por
diversos microorganismos, los cuales producen una enzima (ureasa)
que degrada a la misma contenida en el medio. Esta enzima ureasa
cataliza la hidrlisis de la urea hasta obtener amonio y carbamato. El
carbamato es hidrolizado de manera espontnea para originar cido
carbnico y una segunda molcula de amonio. A pH fisiolgico, el
cido carbnico se disocia y las molculas de amonio se unen con el
agua, originando as un incremento del pH (8).

Tomando en cuenta este principio, Rustigian y Stuart, en 1941 (9, 10),
realizaron un valioso aporte en el campo de la taxonoma de las bacterias,
introduciendo la prueba de la ureasa como una de las pruebas bioqumicas
destinadas a la identificacin de las mismas. El medio ideado por estos
autores para realizar la prueba se compona de: extracto de levaduras 0,1
g, fosfato monopotsico 9,1 g, fosfato disdico 9,5 g, rojo de fenol 0,01 g,
urea 20 g y agua destilada 1000 ml. De tal forma que la urea se utilizara
como fuente nitrogenada y el rojo de fenol como un indicador del viraje de
pH. Al sembrar en el medio un microorganismo que sea capaz de hidrolizar
la urea, se desencadenar la descomposicin de la misma en amonio,
alcalinizando el medio y permitiendo el viraje del pH, produciendo un color
rosado intenso que se difunde en el medio de cultivo

Desde 1941 esta prueba se implement como un parmetro
importante para distinguir las bacterias del gnero Proteus de otras
bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Tambin
permiti la clasificacin de las bacterias en aqullas de hidrlisis
rpida (a las 2 horas) y en otras de hidrlisis lenta (de 2 o ms das) (9,
12 - 14).
USO

Se emplea para la diferenciacin de bacterias por medio de la
utilizacin de la urea como nica fuente de carbono.
PRINCIPIO
La enzima ureasa hidroliza la urea en amonaco y anhidrido carbnico, ante
la variacin de pH por la alcalinizacin, el indicador rojo de fenol, vira de
amarillo claro a ligeremente rosado o rosa mexicano.
Se utiliza solamente para la deteccin de la actividad de la ureasa en
especies del gnero Proteus que dan la prueba positiva despus de una
incubacin de 8 h. Si los nutrientes suministrados por el extracto de
levadura se consumen antes de que la bacteria muestre un crecimiento
aceptable no podr determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar
la urea. Si un microorganismo es capaz de hidrolizar la urea, pero no de
utilizar el amonaco como fuente de nitrgeno, no se produce crecimiento
y es posible observar un resultado falso negativo. No se recomienda para
las bacterias con reaccin de ureasa retardada.
Sembrar el medio de cultivo con el cultivo puro de ensayo. Incubar 24 48
h a 35C.
FORMULA EN GRAMOS POR LITRO
DE AGUA DESTILADA
PREPARACION

Rehidratar 3.87 g del medio en 100 ml de agua destilada. Reposar 10
a 15 minutos. Cuando se ha disuelto, esterilizar por filtracin.
Distribuir en tubos de ensayo en volmenes de 0.5 a 2 ml. Es posible
usar cantidades mayores, pero las reacciones son ms lentas. Se
puede esterilizar en autoclave de 5 a 8 libras de presin durante 15
minutos. ES IMPORTANTE PROTEGERLO DE LA LUZ. Conservar en
refrigeracin de 2 a 8 C.
CONTROL DE ACTIVIDAD
BIBLIOGRAFIA
http://www.dibico.com/fichast/1047.pdf
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S1315-
25562002000200008&script=sci_arttext