Estudo Sorológico, Bacteriológico e Molecular Da Leptospirose

1
UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

FACULDADE DE VETERINRIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA
(CLNICA E REPRODUO ANIMAL)

ALINE EMERIM PINNA

Estudo sorolgico, bacteriolgico e molecular da leptospirose
em guas envolvidas em programa de transferncia de
embries
NITERI
2011

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ALINE EMERIM PINNA

Estudo sorolgico, bacteriolgico e molecular da leptospirose
em guas envolvidas em programa de transferncia de
embries

Dissertao apresentada ao Programa de
Ps-Graduao em Medicina Veterinria
da Universidade Federal Fluminense,
como requisito parcial para obteno do
Grau de Doutor em Medicina Veterinria.
rea de Concentrao: Clnica e
Reproduo Animal.

Orientador: Prof. Dr. Walter Lilenbaum
Co-orientador: Prof. Dr. Felipe Zandonadi Brando

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NITERI
2011
ALINE EMERIM PINNA
Estudo sorolgico, bacteriolgico e molecular da leptospirose em
guas envolvidas em programa de transferncia de embries

Dissertao apresentada ao Programa de
Ps-Graduao em Medicina Veterinria da
Universidade Federal Fluminense, como
requisito parcial para obteno do Grau de
Doutor em Medicina Veterinria. rea de
Concentrao: Clnica e Reproduo Animal.

Aprovada em 17 de Junho de 2011.
BANCA EXAMINADORA

_______________________________________________
Prof. Dr. Walter Lilenbaum - Orientador
4

UFF

_______________________________________________
Prof. Dr. Luis Altamiro Nogueira Garcia
UFF

_______________________________________________
Prof. Dr. Jlio Jacob
UFRRJ

_______________________________________________
Prof. Dr. Marco Antnio Alvarenga
UneSP- Botucat

_______________________________________________
Prof. Dr. Slvio Arruda Vasconcellos
USP

5

Dedico s pessoas que mais amo neste mundo.

A minha querida me, que nunca me deixou faltar
apoio, carinho, amizade, ateno e participao nas
decises mais importantes da minha vida. Amo voc!

Aos meus queridos Ancelmo e Adriano, mais que pai
e irmo, amigos que amo muito e sei que muito
intercedem por mim junto a Deus!

Aos meus sobrinhos Luza e Arthur, que so as sementes de amor deixadas
pelo meu querido irmo.

A minha querida tia Neide, tio Ndio, Manuella e Gabriel que esto sempre do
meu lado.

Amo vocs!

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AGRADECIMENTOS

Gostaria de agradecer a todos aqueles que de maneira direta ou indireta contriburam para a
realizao deste trabalho, e em especial:

A Deus, pelo seu amor incondicional.

7

Ao Prof. Dr. Walter Lilenbaum, por todo apoio, incentivo, confiana e por tantos
ensinamentos. Minha eterna gratido!

equipe do Laboratrio de Bacteriologia do Instituto Biomdico da Universidade Federal
Fluminense, especialmente aos colegas Gabriel Martins, Camila Hamond, Bruno Penna,
Renato Varges e Denis Otaka, pela acolhida e colaborao.

Aos meus colegas veterinrios responsveis pelos plantis estudados na presente tese,
agradeo pela disponibilidade e presteza para comigo.

Ao Setor de Reproduo Animal da Universidade Federal Fluminense, em particular aos
professores Luis Altamiro Nogueira e Felipe Zandonadi Brando pela colaborao e
sugestes durante a realizao deste trabalho.

Ao Rafael Barros, pela amizade, respeito e compreenso.

Aos amigos, pois sempre pude contar com vocs.

minha famlia, por tudo que representam para mim.

PINNA, Aline Emerim. Estudo sorolgico, bacteriolgico e molecular da leptospirose em guas
envolvidas em programa de transferncia de embries. 2011. Tese. Universidade Federal
Fluminense. 2011
RESUMO

No Brasil, apesar do considervel plantel de cavalos, existem poucos estudos sobre a leptospirose em equinos.
A ocorrncia de falhas reprodutivas em programas de transferncia de embrio (TE) alta e ocorre por diversas
causas. O presente estudo foi dividido em duas etapas. Em um primeiro momento, foram estudadas 688 guas
adultas, oriundas de 15 plantis, envolvidas em programas de transferncia de embries nos estados do Rio de
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Janeiro (n=9) e So Paulo (n=6). Nove plantis com histrico de mortes embrionrias e abortamentos recentes
formaram o Grupo A, enquanto seis plantis sem histrico de alteraes reprodutivas dignas de nota passaram a
compor o grupo controle, ou Grupo B. Os animais do Grupo A foram ainda sub-divididos em dois grupos: grupo
das doadoras de embrio e o grupo das receptoras de embrio. As doadoras apresentaram falha na taxa de
recuperao embrionria de 16,2%. J o grupo das receptoras apresentou morte embrionria precoce (20,7%),
abortamentos (21,8%) e morte neonatal (5%), totalizando 47,6% de falhas reprodutivas. J no Grupo B todas
as guas receptoras estavam prenhas no momento da coleta das amostras, e, portanto no foi observada a
ocorrncia de falhas reprodutivas. No que se refere ao Grupo A, dentre as 437 amostras testadas por
soroaglutinao microscpica com antgenos vivos, 301 (68,9%) foram reativas (ttulos 200). Neste grupo, em
relao distribuio por serovares, Bratislava foi o mais frequente, correspondendo a 195 amostras (64,8% das
reativas). Reatividade perante o serovar Copenhageni tambm foi observada, em 106 amostras (35,2%). J no
Grupo B, das 251 amostras testadas, apenas 26 (10,4%) foram reativas. Neste grupo, Copenhageni foi o serovar
mais frequente, em 16 amostras (61,5% das reativas). Reatividade perante o serovar Bratislava tambm foi
observada em 10 amostras (38,5%). Em uma etapa seguinte, os plantis em que os animais apresentaram
falhas reprodutivas e que se mostraram sororeativos foram selecionados e, dos animais destes planteis, 61
amostras de urina foram colhidas para processamento bacteriolgico e molecular. Ao exame direto em
microscopia de campo escuro no se observou a presena de leptospiras em nenhuma das amostras
examinadas. Tambm no foi possvel isolar o microrganismo a partir de nenhuma das amostras testadas.
Foram processadas para PCR um total de 29 amostras de urina, oriundas de dois plantis (de nmeros 5 e 8),
com 15 e 14 amostras, respectivamente. Na PCR, no plantel de nmero 8 identificou-se DNA especfico de
Leptospira ssp. patognica em 50% das amostras (7/14), enquanto no outro plantel (nmero 5) identificou-se tal
DNA em 60% das amostras (9/15). Concluiu-se que a leptospirose representa uma importante enfermidade da
esfera da reproduo, estando associada a ocorrncia de morte embrionria precoce, abortamentos e morte
perinatal nas receptoras, porm no nos ndices de recuperao embrionrio nas doadoras. Adicionalmente, o
serovar Bratislava, mantido pelos equinos, mostrou-se predominante e mais frequentemente associado a falhas
reprodutivas do que o serovar Copenhageni, embora este ltimo tambm as determine. Por ltimo, concluiu-se
que a evidenciao de DNA bacteriano por PCR mostrou-se uma tcnica de diagnstico direto rpido e definitivo
para a infeco por leptospiras em equinos. Palavras chave: Leptospirose, equinos, abortamentos, reproduo.

PINNA, Aline Emerim. Serological study, bacteriological and molecular leptospirosis in mares
involved in embryo transfer program. 2011. Tese. Universidade Federal Fluminense. 2011.

ABSTRACT
9

In Brazil, despite the large herd of horses, there are few studies on leptospirosis in those
animals. The occurrence of reproductive failure in embryo transfer programs (ET) is high and
occurs for different reasons. The present study was divided in two steps. At first, we studied
688 adult mares from 15 flocks, involved in embryo transfer programs in the states of Rio de
Janeiro (n = 9) and So Paulo (n = 6). Nine herds with a history of embryonic deaths and
abortions formed Group A, while six herds with no history of reproductive alterations were
included as control group, or Group B. Animals in Group A were sub-divided into two groups:
the embryo donors and embryo recipients . The donors had a rate of failure in embryo
recovery of 16.2%. The group of recipients presented early embryonic death( 20.7%),
abortions (21.8%) and neonatal death ( 5%) totaling 47.6 % of reproductive failure. In Group
B all recipient mares were pregnant at the time of sample collection, and therefore
reproductive failure was not observed. With regard to Group A, among the 437 samples
tested by microscopic agglutination test, 301 (68.9%) were reactive (titers 200). In this
group, in relation to the distribution of serovars, Bratislava was the most frequent,
corresponding to 195 samples (64.8% of reactive). Reactivity to the serovar Copenhageni
was also observed in 106 samples (35.2%). In Group B, of the 251 samples tested, only 26
(10.4%) were reactive. In this group, Copenhageni was the most frequent serovar in 16
samples (61.5% of reactive). Reactivity to the serovar Bratislava was also observed in 10
samples (38.5%). In a further step, the flocks in which the animals showed reproductive
failure and that proved seroreactive were selected, and from thosee animals , 61 urine
samples were collected for bacteriological and molecular processing. On direct examination
at darkfield microscopy leptospires could not be observed. Additionally the microrganism was
not isolated in any sample tested. PCR were processed for 29 urine samples from two flocks
(numbers 5 and 8), with 15 and 14 samples, respectively. In PCR, specific DNA of
pathogenic Leptospira spp.was observed in seven out of 14 samples from flock number 8,
while in the other flock (number 5) that DNA was identified in 60% of the samples (9/15). We
concluded that leptospirosis is an important disease of the reproductive sphere, being
associated with early embryonic death, abortions, and perinatal death in recipients, but not in
embryo recovery rates in donors. Additionally, serovar Bratislava, maintained by horses, was
prevalent and frequently associated with reproductive failure than serovar Copenhageni,
although the latter also determines. Finally, it was concluded that the demonstration of
bacterial DNA by PCR showed a diagnostic technique for rapid direct and definitive
Leptospira infection in horses.

Key words: Leptospirosis, horses, abortion, reproduction.

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LISTA DE TABELAS

Tabela 1: Antgenos utilizados para o diagnstico sorolgico da leptospirose por
soroaglutinao microscpica em equinos

Tabela 2: Avaliao reprodutiva de guas envolvidas em programas de transferncia de
embrio (doadoras) oriundos de plantis com histrico de falhas reprodutivas (Grupo A)

Tabela 3: Avaliao reprodutiva de guas envolvidas em programas de transferncia de
embrio (receptoras) oriundos de plantis com histrico de falhas reprodutivas (Grupo A)

Tabela 4: Avaliao sorolgica (anticorpos anti-Leptospira) de guas envolvidas em
programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com (Grupo A) e sem (Grupo
B) histrico de falhas reprodutivas

Tabela 5: Anlise de associaes entre sororeatividade (anticorpos anti-Leptospira) de
guas envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com
histrico de falhas reprodutivas e ocorrncia de falha reprodutiva

guas (doadoras) envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de
plantis com histrico de baixa recuperao embrionria (BRE)

guas (receptoras) envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de
plantis com histrico de morte embrionria precoce (MEP)

plantis com histrico de abortamento
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plantis com histrico de morte perinatal

Tabela 10: Anlise de associaes entre sorovariedade de guas envolvidas em
programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de falhas
reprodutivas e ocorrncia de falha reprodutiva

Tabela 11: Anlise de associaes entre sorologia negativa e sorologia positiva para
Bratislava de guas envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de
plantis com histrico de falhas reprodutivas e ocorrncia de falha reprodutiva

Tabela 12: Associaes entre sororeatividade para Copenhageni de guas envolvidas em
programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de falhas

Tabela 13: Associaes entre sorovariedade de guas (doadoras) envolvidas em programas
de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de baixa recuperao
embrionria (BRE)

Tabela 14: Associaes entre sororeatividade para Bratislava de guas (doadoras)
envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de
baixa recuperao embrionria (BRE)

Tabela 15: Associaes entre sororeatividade para Copenhageni de guas (doadoras)
baixa recuperao embrionria (BRE)

Tabela 16: Associaes entre sorovariedade de guas (receptoras) envolvidas em
programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de morte
embrionria precoce (MEP)

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Tabela 17: Associaes entre sororeatividade para Bratislava de guas (receptoras)
morte embrionria precoce (MEP)

Tabela 18: Associaes entre sororeatividade para Copenhageni de guas (receptoras)
morte embrionria precoce (MEP)

programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de abortamento

abortamento

abortamento

programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de morte
perinatal

morte perinatal

morte perinatal

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LISTA DE GRFICOS

Grfico 1: Distribuio dos serovares de Leptospira interrogans em guas envolvidas em
programas de transferncia de embrio oriundos de plantis com (Grupo A) e sem (Grupo
B) histrico de falhas
reprodutivas......................................................................................................
14

LISTA DE FIGURAS

Figura 1: Eletroforese em gel de agarose 2% dos fragmentos amplificados pela tcnica da
PCR a partir do DNA extrado da urina de guas envolvidas em programas de TE.

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LISTA DE ABREVIATURAS

BRE Baixa Recuperao Embrionria
DNA cido desoxirribonuclico
EMJH Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris
FR Falhas Reprodutivas
MAT Soroaglutinao microscpica com antgenos vivos
MEP Morte Embrionria Precoce
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MN Morte Neonatal
OIE Escritrio internacional de Epizootias
OMS Organizao Mundial da Sade
PCR - Reao em Cadeia da Polimerase
RE - Recuperao Embrionria
TE Transferncia de Embrio

1 INTRODUO

A leptospirose uma doena infecto-contagiosa que acomete os animais
domsticos, silvestres e os seres humanos sendo, portanto, classificada como uma
zoonose. Esta enfermidade vem assumindo grande importncia, tanto nos pases
17

em desenvolvimento quanto nos desenvolvidos, afetando a sade animal, a
economia de produo e a sade pblica. Causada pelas diversas sorovariedades
da espiroqueta pertencente Ordem Spirochaetales, Famlia Leptospiraceae,
Gnero Leptospira e espcie L. interrogans (sensu lato), a doena pode ter evoluo
aguda ou crnica. O agente no se cora pelos mtodos usuais, sendo visualizado
em microscopia de campo escuro ou em microscpio ptico pelo mtodo de
impregnao pela prata. Seu cultivo demorado e necessita de meios de cultura
especiais, enriquecidos com soro de coelho ou albumina bovina. Por este motivo, a
doena freqentemente diagnosticada por meio de evidncias sorolgicas.
A ocorrncia de leptospirose em equinos varivel em diferentes partes do
mundo, podendo observar-se tanto de forma espordica quanto endmica. Os surtos
ocorrem por exposio gua contaminada com urina ou tecidos provenientes de
animais infectados.
Existem vrios ciclos epidemiolgicos na leptospirose, que envolvem
diferentes reservatrios e mecanismos de transmisso, mas as condies
ambientais so sempre muito importantes para a ocorrncia da doena. Cada
sorovariedade tende a ser mantida por um hospedeiro especfico e a prevalncia do
mesmo pode ser influenciada pela regio envolvida.
Em 1994, Ellis analisou a patognese e controle da leptospirose em pases
tropicais e observou a ocorrncia de diferentes sorovariedades de Leptospira,
dividindo-os em dois grandes grupos: um grupo de amostras adaptadas e mantidas
pelo prprio hospedeiro, que independe da regio e do ndice pluviomtrico para se
manter no hospedeiro, e o grupo das amostras mantidas por outras espcies
domsticas ou silvestres, mais dependentes de influncia ambiental e responsveis
pelas denominadas infeces incidentais.
Alm dos danos econmicos que a leptospirose pode determinar aos
criadores de equinos, cabe ressaltar que esta uma zoonose de reconhecida
importncia na sade pblica. O impacto da leptospirose sobre a sade pblica
reflete-se no alto custo do tratamento nas pessoas acometidas e na alta letalidade,
da ordem de 5 a 20%. No entanto, quanto sade animal, as conseqncias dessa
infeco encontram-se particularmente na esfera econmica, tendo em vista as
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perdas diretas, como os gastos com o tratamento e morte do animal e as indiretas,
quando da queda da produtividade, aumento do intervalo de partos e queda de
desempenho esportivo. Quanto s manifestaes clnicas associadas a esta
afeco, destacam-se problemas reprodutivos e oculares; porm, muitos eqinos
sororeativos no exibem sinais clnicos evidentes desta enfermidade.
A introduo de novas tcnicas na rea da reproduo eqina vem permitindo
um maior aproveitamento do potencial gentico e reprodutivo dos animais
melhoradores ou de alta performance. A transferncia de embrio (TE) tornou-se um
mercado crescente dentro da indstria equina, gerando grandes investimentos por
parte de criadores que desejam obter maior nmero de produtos de guas
selecionadas. Porm, perdas embrionrias e baixa taxa de recuperao embrionria
ocorrem por diversas causas e assim determinam a queda nos resultados dos
programas de TE.
Neste contexto, o presente estudo visa contribuir para a identificao das
sorovariedades circulantes em nosso meio, gerando avanos no conhecimento do
agente infeccioso e de amostras locais, assim como de novas amostras a serem
identificadas, permitindo o conhecimento de sua origem, bem como o
aperfeioamento de mtodos de diagnstico adaptados as nossas condies,
contribuindo desta forma para o conhecimento e controle da enfermidade em guas
envolvidas em programa de transferncia de embries.

2 REVISO DE LITERATURA

2.1 AGENTE ETIOLGICO
A palavra leptospira deriva do grego e traduz-se lepts - fino, pequeno,
19

delicado e speira, espiral. So bactrias helicoidais de 6 a 20 m de comprimento e
0,1 m de dimetro (LEVETT, 2001), filamentosas, delgadas, podendo apresentar
uma ou ambas as extremidades curvadas em formato de gancho (LEVETT, 2001;
TORTORA, FUNKE e CASE, 2003). Nestas extremidades, as leptospiras, que so
espiroquetas, possuem dois flagelos polares conhecidos como filamentos axiais ou
flagelos periplasmticos, que lhes garantem alta motilidade (FAINE et al., 2000;
LEVETT, 2001; BARTHI et al., 2003). Assim, podem realizar movimentos de rotao
e translao ao longo do seu eixo, em linha reta ou em crculos (FAINE et al., 2000;
LEVETT, 2001; TORTORA, FUNKE e CASE, 2003).
O lipopolissacardeo que compe a membrana externa das leptospiras se
assemelha ao das bactrias Gram-negativas, porm possui menor atividade
endotxica (SHIMIZU et al., 1987). Estas espiroquetas no se coram pelos mtodos
usuais de colorao, sendo visualizadas apenas em microscopia de campo escuro
ou em microscopia de campo claro de contraste de fase, ou ainda, em preparaes
impregnadas pela prata (FAINE et al., 2000).
Condies aerbicas so essenciais e determinam seu crescimento

(LEVETT,
2001; TORTORA, FUNKE e CASE, 2003). Uma concentrao ainda indefinida de
CO
2
indispensvel para o incio do crescimento acima citado. Desenvolvem-se em
temperatura tima de 28 a 30C e pH 7,2 a 7,6 (FAINE et al., 2000). Demandam
meios especiais de cultivo, no crescendo na ausncia de albumina (opta-se
geralmente pela bovina a qual se acrescenta 1% ao meio) ou soro (sendo mais
utilizado o de coelho na proporo de 10%) (FAINE et al., 2000; TORTORA, FUNKE
e CASE, 2003), sendo que vitaminas B1, B12, fosfato, clcio, magnsio, amnia e
ferro so nutrientes essenciais para o seu desenvolvimento (FAINE et al., 2000;
LEVETT, 2001). A sua principal fonte de energia so os cidos graxos de cadeia
longa (BASEMAN e COX, 1969). O meio de cultura mais utilizado para o seu cultivo
o meio lquido de Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH), que contm
cido olico, soroalbumina bovina como detoxificante e tween 80 como fonte de
carbono (ELLINGHAUSEN e MCCULLOUGH, 1965; JOHNSON e HARRIS, 1967).
As leptospiras patognicas possuem longo tempo de gerao, variando de 8 a 18
horas. O crescimento em meio de cultura pode variar de dois a 30 dias (FAINE et al.,
2000), podendo levar at 26 semanas em isolamentos primrios (ELLIS et al., 1983).
20

As bactrias do gnero Leptospira sp so pouco resistentes, sendo
rapidamente eliminadas pela desidratao e temperatura entre 50-60C. A
resistncia aos desinfetantes bastante pequena. So inibidas em pH inferior a 6,8
ou superior a 8,0 e temperaturas inferiores a 10C. No entanto, quando em
condies favorveis, sobrevivem na gua e em cultura por longos perodos (FAINE
et al., 2000). Solos, lama, colees de gua doce, rios (NELSON e COUTO, 2006),
pntanos, rgos e tecidos de animais vivos ou mortos so tambm citados como
possveis habitats para a espiroqueta. As espcies patognicas podem sobreviver
no ambiente, mas preferencialmente encontram-se no hospedeiro, onde se
multiplicam (FAINE et al., 2000).
As leptospiras saprfitas e patognicas tendem naturalmente a formar
agregados em colees de gua (TRUEBA et al., 2004; GANOZA et al., 2006) e so
capazes de formar biofilmes in vitro (RISTOW et al., 2008). Agregados de leptospiras
tambm so observados nos tbulos renais de ratos colonizados (ATHANAZIO et
al., 2008).
2.1.1 Taxonomia
As leptospiras pertencem a Ordem Spirochaetales, a qual faz parte de um filo
bacteriano nico, Spirochaetes. A famlia Leptospiraceae compreende o gnero
Leptospira sp, o qual composto por bactrias saprfitas e patognicas. A
taxonomia e classificao das leptospiras so bastante complexas e vm sofrendo
diversas alteraes ao longo dos ltimos anos (PEROLAT et al., 1998; BRENNER et
al., 1999; LEVETT et al., 2005). At 1989 o gnero Leptospira sp era classificado de
acordo com as caractersticas sorolgicas, baseando-se na variabilidade do
lipopolissacardeo de parede, e de acordo com o fentipo bacteriano; sendo dividido
em dois grandes grupos, Leptospira biflexa sensu lato, contendo as leptospiras
saprfitas ou ambientais e Leptospira interrogans sensu lato, contendo as
leptospiras patognicas (BARTHI et al., 2003).
Diversos serovares foram identificados de acordo com a aglutinao
sorolgica que era observada (FAINE et al., 2000) e os que se relacionavam
antigenicamente foram reunidos em sorogrupos, os quais no fazem parte da
taxonomia, mas so indispensveis compreenso da epidemiologia e diagnstico
da doena. Sabe-se que existem mais de 250 serovares agrupados em 24
21

sorogrupos (LEVETT, 2001).
A classificao fenotpica vem sendo substituda pela genotpica, baseada na
hibridizao DNA-DNA, a qual agrupou as leptospiras em diversas espcies
genmicas, correspondendo ento a grupos com DNA relacionado (LEVETT et al.,
2005; MATTHIAS et al., 2008). At o momento, foram identificadas 14 espcies e
quatro genomoespecies (ainda no denominadas), com cepas contendo 70% ou
mais de relao DNA-DNA (PEROLAT et al., 1998; BRENNER et al., 1999; LEVETT
et al., 2005; MATTHIAS et al., 2008). Como a reclassificao do gnero manteve os
nomes das espcies L. interrogans e L. biflexa, para evitar confuso na
nomenclatura chama-se L. interrogans sensu lato e L. biflexa sensu lato quando se
refere antiga nomenclatura sorolgica, e L. interrogans sensu strictu e L. biflexa
sensu strictu quando se refere as genomoespcies (LEVETT, 2001). O maior
problema da classificao genotpica que muitas vezes um mesmo serovar pode
representar mais de uma espcie genmica (BRENNER et al., 1999).
A classificao molecular no amplamente utilizada para a microbiologia
clnica e a epidemiologia, sendo aceito referir-se s leptospiras pela classificao
sorolgica (BARTHI et al., 2003).

2.2 EPIDEMIOLOGIA
A leptospirose uma doena que acomete humanos e animais, tem
distribuio mundial em reas urbanas, silvestres e rurais e sua ocorrncia est
ligada a fatores ambientais e climticos (FAINE et al., 2000; VASCONCELLOS,
2000; LEVETT, 2001; TORTORA, FUNKE e CASE, 2003; BATISTA, 2004), podendo
manifestar-se em nveis endmicos ou gerar surtos epidmicos (VASCONCELLOS,
2000; BLAZIUS et al., 2005). Possui carter sazonal descrito por diversos autores,
estando diretamente relacionada a perodos chuvosos, quando h elevao do
ndice pluviomtrico (JOUGLARD e BROD, 2000; BATISTA, 2004; BLAZIUS et al.,
2005).
22

Os roedores so os principais reservatrios do agente, em especial do
serovar Icterohaemorrhagiae, onde a ratazana de esgoto (Rattus norvegicus) tem
papel fundamental na transmisso da doena no meio urbano (WORLD HEALTH
ORGANIZATION, 2003). H uma grande diversidade de reservatrios ou
hospedeiros de manuteno de leptospiras, compreendendo animais silvestres e
domsticos, como caninos, bovinos, sunos, caprinos, eqinos e ovinos. Cada
serovar tende a ser mantido por um hospedeiro animal especfico, sendo ento este
serovar considerado adaptado determinada espcie animal (FAINE et al., 2000).
Nos reservatrios animais, estas infectam cronicamente os rins por diferentes
serovares de Leptospira (LEVETT, 2001; ATHANAZIO et al., 2008). Assim, a
transmisso da leptospirose ocorre pela eliminao de leptospiras na urina, havendo
a contaminao da gua e solo, constituindo assim o principal veculo de
transmisso da doena (JOUGLARD e BROD, 2000; MCBRIDE et al., 2005). As
leptospiras podem persistir no trato genital, sendo desta forma eliminadas pelo
smen e secrees vaginais e, portanto transmitidas pela cpula ou inseminao
artificial (FAINE et al., 2000).
Acredita-se que as leptospiras sejam eliminadas em altas concentraes na
urina de ratos, visto que foi demonstrado que ratos experimentalmente infectados
eliminam at 10
7
bactrias/mL de urina (NALLY et al., 2005). O estado de portador
renal dos hospedeiros de manuteno um elemento chave na transmisso da
leptospirose. As leptospiras naturalmente tendem a formar agregados na gua, o
que pode estar relacionado sua manuteno no meio ambiente (TRUEBA et al.,
2004).
As vias de infeco clssicas da leptospirose so atravs do contato da
bactria com a pele lesada e mucosa. O conhecimento dos serovares e seus
hospedeiros de manuteno so essenciais para a compreenso da epidemiologia
da doena em uma dada regio (LEVETT, 2001).
Os animais que sobrevivem fase aguda da leptospirose podem desenvolver
a condio de portadores convalescentes, onde as leptospiras instalam-se e
multiplicam-se nos tbulos renais e so eliminados para o meio ambiente por
perodos variveis. Imunoglobulinas especficas so normalmente achadas na urina
(FAINE et al., 2000).
23

A enfermidade nos animais domsticos apresenta diversas manifestaes
clnicas, dependendo da espcie animal, do serovar infectante e do ambiente
envolvido. Serovares adaptados tendem a causar doena crnica e por vezes
subclnica nos hospedeiros de manuteno; enquanto que serovares no adaptados
causam doena aguda e grave. Os eqinos, alm dos distrbios reprodutivos,
apresentam uvete recorrente causada pela presena de leptospiras ou anticorpos
especficos nas cmaras oculares, e que pode evoluir para a cegueira
(HARTSKEERL et al., 2004; LON et al., 2006).
2.3 A LEPTOSPIROSE EM EQUINOS
O primeiro caso de leptospirose em eqinos foi publicado na Rssia em 1947.
Na Amrica do Norte tem sido reportada desde 1952 com casos de abortamento,
ocorrncia de natimortos, disfuno renal, disfuno heptica e oftalmia peridica.
Desde ento, casos similares foram reportados no mundo todo (LEES e
GALE,1994). A leptospirose em equinos uma importante enfermidade da esfera da
reproduo, uma vez que determina o nascimento de crias fracas, natimortalidade
ou mortalidade neonatal e abortamento (comumente no sexto ms de gestao),
como seqela comum aps invaso sistmica. O abortamento sem prvia doena
clnica tambm comum (LILENBAUM, 1998; RADOSTITS et al., 2002). Os
equinos podem apresentar infeco subclnica e usualmente tem um curso brando,
j nas infeces agudas e subagudas apresentam um distrbio sistmico transitrio,
com sinais de hipxia, depresso e relutncia em se mover (RADOSTITS et al.,
2002).
Os sorotipos Kennewicki e Pomona so os mais comumente reportados como
agentes causadores de abortamentos, embora Bratislava, Icterohaemorrhagiae,
Grippotyphosa, Hardjo e Canicola tambm tenham sido descritos. Estes ocorrem em
idades gestacionais que variam entre 140 e 250 dias de gestao. Em alguns locais
a leptospira pode ser considerada como a principal causadora de abortamento, onde
as infeces fetoplacentrias so responsveis por um tero dos natimortos e da
morte perinatal que, em 75% dos casos, ocorrem em virtude de infeco bacteriana
(RADOSTITS et al., 2002).
A infeco por leptospiras tem sido confirmada como uma enfermidade da
esfera da reproduo, causando abortamentos e natimortalidade em eqinos
24

(DONAHUE et al., 1991; VASCONCELLOS, 2000). O abortamento relacionado a
leptospirose conseqncia da leptospiremia fetal, pela passagem das leptospiras
atravs da placenta. Quando a infeco por uma sorovariedade mantida pelos
eqinos, geralmente o abortamento ocorre no tero final da gestao e quando a
sorovariedade envolvida incidental, este pode ocorrer a qualquer momento da
gestao (VASCONCELLOS, 2000).
No Brasil, apesar do considervel plantel de cavalos, existem poucos estudos
sobre a leptospirose em equinos. Evidncias da infeco, caracterizadas pela
identificao de aglutininas especficas anti-leptospiras em equinos, tm sido
relatadas h mais de 50 anos (CORREA et al., 1955), com relatos espordicos em
diversos estados, como Minas Gerais (CORDEIRO et al., 1974), Rio Grande do Sul
(PESCADOR et al., 2004) e no Rio de Janeiro (LILENBAUM, 1998; RAMOS et al.,
2006). A maior parte dos estudos sorolgicos realizados em equinos no Brasil
registra a predominncia de sororeatividade para Icterohaemorrhagiae, Pomona e
Grippotyphosa, enquanto sororeatividade para Bratislava mais raramente relatada
(VASCONCELLOS, 2000; FAVERO et al., 2002; LANGONI et al., 2004; PINNA et al.,
2007).
Pouco tem sido descrito na literatura sobre o isolamento de leptospiras e seu
papel na etiologia da doena em equinos. O diagnstico definitivo da leptospirose
difcil e a maior parte dos laboratrios no buscam seu isolamento, pois a cultura do
agente difcil, pela sua fragilidade e longo perodo de incubao (DONAHUE et al.,
1991).
Ellis et al. (1983), durante um surto de abortamento em guas, verificaram a
infeco por leptospira em nove fetos. Foram examinados 22 fetos pelo mtodo de
imunofluorescncia e cultura. Os sorogrupos isolados foram Australis, Pomona,
Hebdomadis e Icterohaemorrhagiae. Yasuda et al. (1986) relataram o isolamento da
Leptospira biflexa sorotipo Ranarum, pertencente ao grupo de leptospiras saprfitas,
de um aborto equino.
Hodgin et al. (1989), identificaram a leptospirose como causa de quatro
abortamentos e uma morte neonatal em Louisiana, EUA. O diagnstico foi baseado
na visualizao das leptospiras dos tecidos provenientes do rim, fgado e placenta.
25

J Sebastian et al. (2005) descreveram um caso de inflamao do cordo umbilical
associado infeco por leptospira da placenta de potro prematuro da raa
Thoroughbred. Os autores sugeriram que a primeira parte da placenta a ser afetada
seria o cordo umbilical, e que se identifique a infeco por leptospiras a partir dele.
Dhaliwal et al. (1997), em estudo para verificar o efeito da infeco por
Leptospira interrogans serovar Hardjo na concentrao de progesterona em
novilhas, sugeriram que a infeco talvez tenha efeito direto na fertilizao e/ou
morte embrionria precoce. Eles verificaram que as novilhas infectadas
apresentaram menor concentrao de progesterona, que as novilhas no infectadas.
A infeco por leptospira em equinos tem sido associada uvetes
recorrentes, febre, ictercia e mais frequentemente, abortamentos e outras
desordens reprodutivas (ELLIS et al., 1983, VEMULAPALLI et al., 2005). Estudos
sorolgicos indicam que a infeco subclnica muito comum em equinos, chegando
a 70% dos casos (HODGIN et al., 1989).
Ellis et al.(1983) em um estudo realizado na Irlanda do Norte, sugeriram que
Bratislava talvez tenha se adaptado aos equinos, devido a grande prevalncia de
anticorpos contra Bratislava e o isolamento deste serovar dos rins de sete de 91
equinos adultos. Porm, os sintomas clnicos determinados pela infeco por esta
sorovariedade ainda no esto esclarecidos. A sorovariedade Bratislava j foi
descrita no Rio de Janeiro, mas sua correlao com casos clnicos ainda requer
maiores estudos (LILENBAUM, 1998; PINNA et al., 2007).
Na Irlanda, Egan e Yearsley (1986), ao examinarem 530 amostras de sangue
de equinos de vrias regies do pas, verificaram que os serovares predominantes
foram Bratislava, Copenhageni e Pyrogenes. Segundo Kitson-piggot e Prescott
(1987), o serovar Bratislava foi o mais prevalente durante um estudo sorolgico
realizado em Ontrio, Canad. Ainda no mesmo pas, Lees et al. (1994),
encontraram ttulos de Icterohaemorrhagiae, Bratislava, Copenhageni e Autumnalis
como as mais comuns. Na Argentina, Bordoy (1985) realizou um estudo sorolgico
em trs provncias; de 561 eqinos examinados, 321 (57,22%) foram reagentes,
sendo que os serovares mais freqentes foram Bratislava, Pomona, Tarassovi e
Icterohaemorrhagiae.
26

Donahue et al. (1991), verificaram em Kentucky, EUA, durante a estao de
monta de 1989, que a infeco por leptospira pde ser demonstrada em 15 de 594
casos de abortamentos e natimortalidade. Isolou-se leptospiras a partir de dois
casos, e identificou-se a sorovariedade Kennewicki. Um posterior estudo na mesma
regio avaliou a prevalncia de abortamentos induzidos pela leptospira no perodo
de trs estaes de monta (1991-1993). Durante os trs anos, 74 (3,3%) de 2.264
abortamentos, foram causados pela leptospirose. Leptospiras foram isoladas de 45
(60,8%) dos 74 casos (DONAHUE et al., 1995).
No Brasil, o primeiro trabalho sobre a infeco por leptospiras em equinos foi
realizado por Corra et al., (1955). Os autores realizaram um inqurito sorolgico em
118 equinos no estado de So Paulo e confirmaram a ocorrncia de anticorpos
especficos em cavalos no Brasil. Como resultado, registraram uma taxa de 16,9%
de sororeatividade pela tcnica de soroaglutinao microscpica com predominncia
dos serovares Australis, seguido de Icterohaemorrhagiae e Sejre.
Santa Rosa et al. (1968) pesquisaram soros de equinos abatidos em
matadouro e equinos de corrida nas proximidades de So Paulo pela tcnica de
soroaglutinao microscpica. Foi considerado o ttulo inicial de 200 como
significativo para uma reao positiva. Dos 419 soros obtidos de equinos de
matadouro, 37,9% tiveram reaes positivas, sendo os serovares Pomona e
Canicola os mais freqentes, enquanto que em animais de corrida, dos 217 soros
pesquisados, 6,9% estavam positivos, sendo Pomona (2,8%) e Icterohaemorrhagiae
(2,3%) os mais encontrados. Foi ainda descrita correlao de Pomona e
Icterohaemorrhagiae com a oftalmia peridica.
Cordeiro et al. (1974) pesquisaram soros de 404 equinos de vrios grupos,
dentre eles, animais de sela e puro sangue ingls do Jockey Clube, nos municpios
de Belo Horizonte, Vianpolis e Barbacena. Os autores consideraram positivas as
reaes com ttulos iguais ou maiores que 100. Verificaram a ocorrncia de 14,8%
de animais reagentes, sendo Pomona o serovar mais encontrado em cavalos de sela
(26,1%) e Bataviae em cavalos de corrida (26,9%).
Giorgi et al. (1981) realizaram um inqurito sorolgico da leptospirose em
1.653 equinos puro-sangue de carreira na cidade de So Paulo. Foram encontradas
75 (4,5%) reaes positivas com ttulos iguais ou maiores que 200 pela da prova de
27

aglutinao microscpica, e os serovares mais freqentes foram
Icterohaemorrhagiae (41,3%) e Javanica (30,7%). Alm disso, os autores
conseguiram isolar pela primeira vez no Brasil o agente Leptospira interrogans,
serovar Icterohaemorrhagiae de rins de um feto abortado.
Pinheiro et al. (1985) pesquisaram 1.145 amostras de soros de equinos e
muares procedentes de Gois, Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Paran e So
Paulo, utilizando prova de aglutinao microscpica. Foi encontrada uma freqncia
de 10,5% de animais reagentes com ttulos iguais ou superiores a 200. Os serovares
predominantes foram Pomona, Javanica e Canicola.
Abuchaim (1991) examinou soros de 420 equinos provenientes de nove
municpios do Rio Grande do Sul por meio da prova de aglutinao microscpica.
Constatou que 37,4% dos soros apresentaram ttulos iguais ou maiores que 100. Os
serovares mais encontrados foram Icterohaemorrhagiae e Pomona. Alm disso,
observou que 55,6% dos animais testados estavam clinicamente sadios, podendo
ser importante fonte de contaminao para o homem e para outros animais.
Pellegrin et al. (1994) realizaram sorologia em 150 equinos provenientes de
dez fazendas localizadas no Pantanal. Todos os rebanhos foram considerados
positivos e 139 (92,6%) dos soros testados reagiram com ttulos iguais ou maiores
que 100 para deteco de aglutininas anti-leptospiras. Os serovares mais
observados foram Icterohaemorrhagiae e Hardjo. Segundo os autores, a evidncia
da infeco por Hardjo nos equinos pode acontecer por contato direto ou indireto
com bovinos, visto serem estes os hospedeiros de manuteno deste sorotipo.
Lilenbaum (1998) avaliou achados sorolgicos em 547 guas de seis
rebanhos do Rio de Janeiro, durante o perodo de 1993-1996. Encontrou 235
reaes positivas com ttulos iguais ou maiores que 100. Os serovares
predominantes foram Icterohaemorrhagiae (43,4%), Bratislava (27,2%), Pomona
(14,4%) e Hardjo (4,26%). O autor atribuiu a alta predominncia de guas positivas
para Icterohaemorrhagiae presena de roedores, pois esses so portadores sadios
da doena e so, portanto fonte de contaminao dos equinos.
Langoni et al. (2004) analisaram 1.402 amostras de soros de equinos dos
estados So Paulo, Gois e Mato Grosso do Sul, desse total 754 (54%) estavam
28

positivos para um ou mais serovares com ttulos iguais ou maiores que 100. Os
serovares mais encontrados foram Icterohaemorrhagiae (37,0%), Castellonis
(16,9%), Djasiman (6,1%), Copenhageni (4,5 %) e Hardjo (4,3%).
Oliveira e Pires Neto (2004) realizaram um estudo no Rio Grande do Sul
sobre o diagnstico e a ocorrncia da infeco por leptospiras em vrias espcies,
dentre elas a eqina. Realizaram exames sorolgicos, no perodo de 2000 a 2002
em 992 equinos, destes 727 (73,3%) foram positivos com ttulos iguais ou superiores
de 100, com predominncia de Bratislava e Copenhageni.
Em um estudo realizado por Linhares et al. (2005) na microrregio de
Goinia, entre os 16 serovares pesquisados, apenas cinco foram detectados, sendo
que, dos 82 soros positivos, 68,4% reagiram para Icterohaemorrhagiae, 13,4% para
Pomona, 8,5% para Wolffi, 6,1% para Hardjo e 3,6% para Canicola. A alta
prevalncia encontrada foi justificada pelos autores pelo manejo higinico-sanitrio
deficiente.
Pinna et al. (2007) avaliaram um rebanho com 148 guas que apresentavam
um nvel elevado de abortamento (12%), morte embrionria (10%) e bitos neonatais
(8%). Foi realizado o teste de soroaglutinao microscpica (MAT) onde 87,8%
foram sororeativos ao serovar Bratilslava, 7,3% ao serovar Icterohaemorrhagiae e
4,9% ao serovar Australis. Os animais sororeativos foram tratados com
dihidroestreptomicina e vacinados. Aps um ano, sororeatividade e ocorrncia de
abortamentos, morte embrionria e neonatal declinou.
2.4 PATOGENIA
A patogenia da leptospirose complexa e multifatorial. Equinos podem
adquirir a doena pelo contato com a urina de roedores, ces, porcos, vacas e
outros animais de fazenda. Evidncias indicam que equinos podem excretar
leptospiras viveis na urina por 14 semanas ou mais. Uma vez na corrente
sangunea, as leptospiras se distribuem por todo o organismo do animal. A
localizao renal a mais importante do ponto de vista epidemiolgico, pois a urina
passa a ser a principal via de eliminao dos microrganismos. A leptospirria pode
persistir por meses ou anos e os animais tornam-se fontes de infeco junto ao
rebanho. Desta forma, a leptospirose deve ser encarada como doena coletiva, e
29

no apenas como molstia individual, que frequentemente passa despercebida
pelas dificuldades de diagnstico verificadas a campo. A motilidade e morfologia das
leptospiras favorecem a sua penetrao atravs da pele lesada e mucosas ntegras.
Aps a infeco segue-se uma rpida disseminao da bactria na corrente
sangunea do hospedeiro, ocorrendo multiplicao ou leptospiremia com durao
mdia de trs a 10 dias. Este perodo compreende a primeira fase da doena, no
imune e com sintomatologia branda e inespecfica. Aps esta fase, ocorre o
desenvolvimento de anticorpos especficos pelo sistema imune e as leptospiras iro
se concentrar nos rgos alvo, como rins, fgado, pulmes e musculatura
esqueltica, provocando a sintomatologia clssica (FAINE et al., 2000).
Uma vez a infeco instalada, pode haver a evoluo para doena aguda em
hospedeiros sensveis, bem como o desenvolvimento de imunidade protetora e
eliminao do microrganismo, ou desenvolvimento do estado de portador crnico
(FAINE et al., 2000). Nos ratos, reservatrios de Icterohemorrhagiae, as leptospiras
disseminam-se por todos os tecidos durante a primeira semana de infeco e depois
so apenas encontradas nos rins (ATHANAZIO et al., 2008). Nos animais de
produo acometidos, as leptospiras tm sido evidenciadas tanto na urina como no
smen e em secrees vaginais, o que confirma no s a colonizao dos tbulos
renais como tambm dos rgos da reproduo e das suas glndulas anexas
(ELLIS, 1994; LILENBAUM et al., 2009).
Sebastian (1994) verificou que na leptospirose a intensidade das leses
teciduais est intimamente relacionada estirpe do serovar e a adaptabilidade do
hospedeiro. Posteriormente, o mesmo grupo (SEBASTIAN et al., 2005) identificou a
Leptospira como uma importante causa de abortamento infeccioso e natimortalidade
em equinos. De acordo com Pescador et al. (2004), a placentite caracteriza-se por
trombose, vasculite e infiltrao de celular inflamatrias no estroma juntamente com
hiperplasia adenomatosa cstica e necrose de epitlio.
2.5 A ENFERMIDADE
A leptospirose nos animais domsticos apresenta diversas manifestaes
clnicas, dependendo da espcie animal, do serovar infectante e do ambiente
envolvidos. Serovares adaptados tendem a causar doena crnica e por vezes
subclnica nos hospedeiros de manuteno, enquanto serovares no adaptados
30

causam doena aguda e grave. Os eqinos, alm dos distrbios reprodutivos,
apresentam uvete recorrente (tambm conhecida como oftalmia peridica; cegueira
da lua) causada pela presena de leptospiras ou anticorpos especficos nas cmaras
oculares, e que pode evoluir para a cegueira (HARTSKEERL et al., 2004; BRAGA et
al., 2010). De acordo com SAMAILLE (2001), a leptospirose eqina pode ainda
causar queda do desempenho esportivo.
A presena do agente no interior do globo ocular causa uvete, com
envolvimento da vea posterior (ris, corpo ciliar e coride), crnea, retina e nervo
ptico (HUNTER e HERR, 1994). Os sinais clnicos caractersticos so
lacrimejamento aumentado, blefarospasmo, fotofobia em graus variados, miose e
catarata em casos mais avanados (GELLAT, 2003).
A infeco considerada como importante causa de nascimento de crias
fracas, natimortalidade ou mortalidade neonatal e abortamento (comumente no sexto
ms de gestao), como seqela comum aps invaso sistmica. O abortamento
sem prvia doena clnica tambm comum (RADOSTITS et al., 2002).
Segundo Hong et al. (1993) e Hunter e Herr (1994) observam-se tambm a
ocorrncia de febre, ictercia e morte por nefrite intersticial.
No estudo realizado por Williams (1968) que induziu a infeco com Pomona
em equinos, observou-se febre durante trs dias que ocorreu de trs a 10 dias aps
exposio, inapetncia, leve depresso, inconstantes graus de ictercia e leucocitose
com neutrofilia. Na Argentina, Parma et al. (1985) inocularam nove eqinos adultos
com uma suspenso de uma mistura de leptospiras dos serovares Pomona,
Tarassovi, Icterohaemorrhagiae, Wolffi e Hardjo. Oito animais apresentaram
anticorpos contra os cinco sorotipos inoculados. A nica alterao clnica observada
foi opacidade da crnea na terceira semana ps-inoculao. J Van den Ingh et al.
(1989) observaram desconforto respiratrio grave, depresso e febre em doze potros
de quatro a 12 semanas de idade. Outros sinais incluam ictercia em um potro,
marcha instvel em outro potro e diarria em dois potros. A doena foi rapidamente
fatal e em todos os potros foi encontrada pneumonia hemorrgica na necrpsia. Foi
isolado a partir do sangue Leptospira interrogans serovar Iora (do sorogrupo
Australis) em um dos potros.
31

2.6 PROFILAXIA, CONTROLE E TRATAMENTO
A profilaxia e controle da leptospirose em equinos dependem primariamente
de um mtodo de diagnstico em que se procure identificar na propriedade qual a
sorovariedade predominante e quais os mecanismos de transmisso envolvidos. No
caso de infeces incidentais determinadas por sorovariedades que no so
mantidas pelos equinos, deve-se identificar de que forma o rebanho est sendo
exposto aos reservatrios naturais destas variedades, como sunos, ratos e animais
silvestres. Somente por meio de medidas de higiene e da tecnificao da criao
pode-se controlar a leptospirose no plantel. No entanto, quando a infeco for
determinada por amostras mantidas pelos equinos, seu controle se torna mais
complexo, uma vez que a principal forma de transmisso neste rebanho est entre
os prprios equinos.
O controle da infeco leptosprica pode ser realizado de duas formas
principais: aquele que objetiva a completa erradicao do agente no plantel,
baseada na progressiva identificao e tratamento de portadores; e aquela que se
prope a controlar seus efeitos sobre os animais, baseada na vacinao dos animais
e uso espordico de antibiticos (FAINE et al., 2000). Em ambas as situaes,
variveis ambientais caractersticas de pases tropicais muitas vezes no so
devidamente levadas em conta.
Poucos so os programas de controle de leptospirose que enfatizam a
adoo do controle ambiental associado a tradicional combinao de vacinao e
antibioticoterapia. No entanto, sabe-se que manejo e ambiente influenciam na
transmisso da infeco em diversas espcies, tais como em sunos (BOQVIST et
al., 2002; RAMOS e LILENBAUM, 2002), bovinos (ALONSO-ANDICOBERRY et al.,
2001; LILENBAUM e SOUZA, 2003) e caprinos (LILENBAUM et al., 2008). Em todos
estes estudos, apesar de conduzidos com diferentes espcies e consequentemente
com outros serovares de leptospiras, observou-se que tais fatores interferem de
forma marcante na distribuio da infeco leptosprica entre os rebanhos e mesmo
entre os animais do mesmo rebanho.
De acordo com Vasconcellos (2000), do ponto de vista preventivo uma das
medidas a serem tomadas a utilizao racional de antibiticos que bloqueiem a
32

eliminao de leptospiras atravs da urina, smen e secreo vaginal. A
estreptomicina aplicada por via parenteral, usualmente na concentrao de 25
mg/Kg de peso vivo, tm sido a medicao de escolha. Radostits (2002) ainda
menciona a possibilidade de tratar animais infectados por serovar de manuteno
com diidroestreptomicina G (25 mg/Kg), durante um, trs ou cinco dias. Os
esquemas de tratamento precisam ser revistos, incluindo a hiptese de emprego
integrado de tratamento e imunizao (VASCONCELLOS, 2000).
A imunidade na leptospirose eqina baseada na resposta humoral. As
vacinas so importantes na reduo da transmisso e manuteno da leptospirose
(HEATH e JOHNSON, 1994) e as atualmente utilizadas so serovar-especficas.
Assim, a vacinao contra um determinado serovar nem sempre fornece proteo
cruzada contra outros serovares, mas pode interferir na reao de aglutinao
microscpica (HAGIWARA, 2003). So compostas de bacterinas (bactrias inteiras
inativadas quimicamente) e induzem a imunidade pela opsonizao das bactrias,
resultando na apresentao de antgenos de membrana - lipopolissacardeos e
protenas da membrana externa. Elas reduzem a gravidade da doena e a sua
prevalncia, mas no impedem o desenvolvimento de estado de portador crnico
nos animais, porque nem sempre previnem a instalao das leptospiras no tecido
renal (GREENE, 2004).
No h um completo entendimento sobre o mecanismo de imunidade
protetora das vacinas. O LPS parece conferir uma parte da imunidade humoral
protetora (FAINE et al., 2000; LEVETT, 2001), havendo tambm a participao da
resposta celular (NAIMAN et al., 2001). Acredita-se, no entanto, que a vacina no
capaz de prevenir a leptospirria (BOLIN e ALT, 2001), assim como no capaz de
proteger em casos de grande exposio bactria (ANDR-FONTAINE et al.,
2003). Um dos desafios da pesquisa atual em leptospirose identificar fraes ou
subunidades bacterianas conservados, que confiram imunidade protetora de longa
durao e imunidade cruzada contra diversos serovares de leptospiras. Protenas de
membrana externa ou Omps e lipoprotenas tm sido consideradas candidatos
interessantes para o desenvolvimento de novas vacinas (BRANGER et al., 2001;
GAMBERINI et al., 2005; YANG et al., 2006; SEIXAS et al., 2007; SILVA et al.,
2007).
33

2.7 DIAGNSTICO LABORATORIAL
Quando existe uma constatao clnica da presena da enfermidade, pela
observao de sintomas clssicos, como abortamentos, reduo da eficincia
reprodutiva das matrizes, hemoglobinria e, ocasionalmente, ictercia em potros,
deve-se recorrer aos exames laboratoriais para confirmao da suspeita clnica e
posterior elaborao de um plano de controle especfico. Para tal, recomendado
colher amostras de soro de 20% dos animais da propriedade, porm em nmero no
inferior a 30, incluindo animais de vrias idades e com ou sem sintomatologia
evidente (SMITH et al., 1994).
Os diversos testes j padronizados de diagnstico laboratorial das
leptospiroses equinas podem ser classificados da seguinte forma:
2.7.1 Testes imediatos
O mais usual a visualizao de espiroquetas em microscopia de campo
escuro, principalmente a partir de urina recm eliminada. Sua maior limitao
quanto ao nmero de espiroquetas presentes na urina, que deve ser elevado a fim
de que se possa visualiz-las mesmo em uma pequena amostra. A microscopia
pode, eventualmente, ser utilizada para exame de tecidos ou contedo gstrico de
fetos abortados.
2.7.2 Testes sorolgicos
O mais comum dos testes sorolgicos para diagnstico da leptospirose a
soroaglutinao microscpica com antgenos vivos (MAT). Este , sem dvida, o
teste mais utilizado por pesquisadores de todo o mundo para diagnstico das
leptospiroses em diversas espcies de animais, sendo recomendado pela
Organizao Mundial de Sade (OMS) e pelo Escritrio internacional de Epizootias
(OIE). Baseia-se na adio do soro suspeito em diluies crescentes a culturas de
diversas sorovariedades de Leptospira sp., utilizando-se sempre as amostras mais
comuns na regio e procurando incluir ao menos um representante de cada
sorogrupo. Sua realizao, portanto, requer equipamento e pessoal especializado na
manuteno das amostras, o que limita sua realizao para centros de pesquisa ou
ensino e laboratrios especializados em leptospirose (FAINE et al., 2000). Sua maior
34

dificuldade encontra-se na interpretao dos resultados. Apesar de no existir
obrigatoriamente uma relao entre ttulo sorolgico e infeco, tradicionalmente
considera-se que, em reas endmicas, animais com ttulos acima de 200
apresentam evidncia de infeco recente. Por esta razo que, ao avaliar-se uma
propriedade, considera-se o diagnstico de forma coletiva, e no individual para
eqinos.
2.7.3 Isolamento de leptospiras
A forma mais correta e fidedigna, considerado o padro-ouro para confirmar a
infeco por leptospiras em um animal o isolamento do agente em cultura pura, a
partir de materiais clnicos como sangue, urina ou fragmentos de rgos de
abortamentos. No entanto, este procedimento apresenta vrias limitaes, como a
complexidade dos meios de cultura; a necessidade de semear o material
imediatamente aps a coleta; o longo tempo de gerao da espiroqueta, o que
demanda ao menos 10 semanas para bom crescimento; e, finalmente, a dificuldade
encontrada pelos laboratrios em obter a amostra livre de contaminantes. Desta
forma, o isolamento das leptospiras tm se mantido restrito a laboratrios
especializados, no sendo utilizado como rotina para diagnstico. Por isso, no Brasil,
existem poucos relatos de isolamento de amostras locais de leptospiras em eqinos.
Os estudos que relatam isolamento e tipificao de leptospiras foram a partir de
amostras bovinas (FREITAS et al., 1957; SANTA ROSA et al.,1961 e
MOREIRA,1994).
2.7.4 Mtodos Moleculares
Nos ltimos anos, vrias tcnicas de diagnstico baseadas em biologia
molecular, principalmente, a Reao em Cadeia da Polimerase (PCR), vm sendo
utilizadas de forma bastante eficiente no diagnstico de vrias enfermidades
infecciosas no homem e nos animais, principalmente aquelas causadas por agentes
de difcil isolamento (HEINEMANN et al., 1999). No entanto, apesar de bastante
especficos e sensveis, estes testes ainda apresentam algumas limitaes, como
seu alto custo e a dificuldade de utilizao diretamente de materiais clnicos.
Genovez et al., (2004), relataram a investigao diagnstica para leptospirose
em amostras de quatro ejaculados de um eqino PSI que apresentava ttulo de 800
35

para o serovar Icterohaemorrhagiae pela soroaglutinao microscpica (SAM). As
amostras de smen foram submetidas tcnica de cultivo e PCR com primers Lep1
e Lep2, gnero especficos para Leptospira spp., revelando-se negativas no cultivo,
e positivas na PCR apresentando um fragmento amplificado de 331pb. Confirma-se
que a tcnica de PCR representa um valioso mtodo para o diagnstico de
leptospirose tambm na espcie eqina, principalmente em animais de alto valor
gentico, cuja comercializao do smen representa um potencial risco de
transmisso. Lon et al. (2006) e Vemulapalli et al. (2005), detectaram leptospira
patognica em tecido de potro prematuro usando a tcnica de PCR.
Apesar de, no Brasil, j terem sido efetuadas investigaes epidemiolgicas
que levaram ao isolamento e tipificao de leptospiras ou na caracterizao de
reatividade sorolgica para sorogrupos de leptospiras, em diferentes hospedeiros
animais, o nmero de informaes insuficiente frente extenso do pas e a
dimenso e diversidade das populaes animais existentes. Os mtodos
laboratoriais (diretos e indiretos), atualmente disponveis para confirmao do
diagnstico da leptospirose animal possuem limitaes em termos de especificidade,
sensibilidade e praticidade e atravs de pesquisas podero ser desenvolvidos novos
procedimentos e aprimorados os j existentes.
2.8 TRANSFERNCIA DE EMBRIO EM EQUINOS

A atual conjuntura da criao de cavalos tem surpreendido com a grande
amplitude e diversificao das atividades equestres que esta espcie capaz de
desenvolver, lapidando assim a indstria equina, que hoje possui um importante
papel scio-econmico. O interesse na aplicao de biotcnicas voltadas
reproduo equina vem se fomentando cada vez mais como ferramenta para
acelerar o ganho gentico e tornando nossos animais mais competitivos. Hoje o
Brasil o segundo maior produtor de embries equinos. Estas biotcnicas tm-se
focado em obter melhores taxas de concepo de indivduos mais idosos,
portadores de subfertilidade, alm de maximizar o aproveitamento de animais frteis
de alto potencial gentico (ALVARENGA et al., 2010).
A transferncia de embrio mostrou-se de notvel importncia na espcie
eqina, contribuindo para a multiplicao de genticas superiores, favorecendo a
preservao de raas exticas e a formao de plantis a partir de um nmero
36

reduzido de animais superiores. Tambm permitiu a obteno de descendentes de
guas que se tornaram subfrteis, ou daquelas envolvidas em competies, alm de
propiciar um maior nmero de potros/ano produzidos por cada gua doadora
(ARRUDA et al., 2001; CAMILO et al., 2003).

A primeira TE bem sucedida em equinos foi relatada em 1972 por Allen e
Rowson, utilizando o mtodo cirrgico. No mesmo ano, Oguri e Tsutsumi (1972)
descreveram um mtodo no cirrgico de recuperao de embrio atravs de um
lavado uterino, porm no houve sucesso na transferncia transcervical. A primeira
transferncia transcervical bem sucedida foi relatada por Oguri e Tsutsumi em 1974
(HINRICHS, 1993). A coleta de embries mostrou melhores resultados quando
passaram a realizar o lavado em todo o tero e no apenas no corno uterino
ipsilateral ao corpo lteo. Desde ento, a utilizao desta tcnica tem crescido
constantemente nas ltimas duas dcadas, sendo atualmente realizada e permitida
na maioria das raas eqinas (SQUIRES et al., 2003).
2.8.1 Seleo de guas para o programa de transferncia de embrio
A seleo de guas doadoras e receptoras um dos pontos importantes para
o sucesso da TE e para tal, faz-se necessria uma avaliao criteriosa nos animais,
com a utilizao de mtodos adequados.
2.8.1.1 Seleo de guas Doadoras de Embries
Vrios fatores devem ser considerados na seleo de guas doadoras de
embrio, incluindo o seu histrico reprodutivo, nmero de gestaes desejadas e
valor potencial para o potro nascido (SQUIRES et al., 1999). Muitas guas
selecionadas participam de atividades esportivas ou outros eventos de performance
que limitam sua condio de procriao natural ou ainda se tornaram subfrteis
(SQUIRES et al., 1999; SQUIRES et al., 2003).
As guas doadoras so o cerne de qualquer programa de TE. Um dos
problemas diz respeito ao elevado percentual de guas idosas em programas de TE,
pois sabidamente estas tm uma eficincia reprodutiva mais baixa do que guas
jovens (HUNT et al., 2005). As falhas reprodutivas observadas em guas idosas
esto normalmente associadas com distrbios da ovulao, maturao oocitria e
37

endometrite crnica (SQUIRES et al., 2003).
2.8.1. 2 Seleo de guas Receptoras de Embrio
A seleo e o manejo das guas receptoras so os fatores mais importantes
que afetam o sucesso da TE (SQUIRES et al., 1999 ; TAVEIROS et al., 2003; DILLE
et al., 2004), de modo que um nmero significante de guas receptoras deve ser
avaliado para cada doadora (CAMILO et al., 2003).
O critrio de seleo inclui um peso timo, bom histrico reprodutivo, idade (3-
10 anos), bom desenvolvimento mamrio, ciclos estrais normais, ausncia de
anormalidades ovarianas e uterinas tais como presena de lquido, cistos, ar ou
debris (SQUIRES et al., 1999). Squires et al. (1982) citam ainda que uma receptora
deve ter passado por vrios ciclos estrais normais numa estao, antes de ser
utilizada em um programa de TE.
Geralmente as guas receptoras devem ser reavaliadas por meio de
ultrassonografia um dia antes de serem utilizadas no programa de TE. Este exame
deve incluir a avaliao dos ovrios para a deteco de um corpo lteo, classificando
sua ecogenicidade e tamanho, avaliao das caractersticas uterinas, verificando a
existncia de fluidos, cistos, pregas endometriais e determinando o tamanho e
espessura da parede uterina. J o tnus uterino avaliado na palpao transretal
(SQUIRES et al., 1988).
A sincronia de ovulaes entre doadora e receptora outro fator importante
para o sucesso da TE. Muitas vezes necessria a induo da ovulao da
receptora, utilizando-se por exemplo, a gonadotrofina corinica humana (hCG),
buscando-se uma sincronizao com a doadora de embries e preparando um
nmero expressivo de receptoras viveis para o dia da transferncia (SERTICH,
1989; CAMILO et al., 2003).
Existem pontos bsicos e irredutveis no processo de seleo de uma
receptora. Tipo e tamanho, em princpio, o mais parecido com a doadora. Nunca de
menor tamanho e to pouco, guas de raas pesadas para cavalos leves e
medianos. Muitas vezes utiliza-se guas da mesma raa e de menor valor gentico,
a fim de facilitar seu manejo. Desde os primeiros experimentos realizando
cruzamentos entre pneis e cavalos de trao at os que compararam o peso ao
38

nascimento com a rea dos microcotildones placentrios, em cruzamentos deste
tipo, foi determinado que o tamanho e categoria (primpara), so os fatores que mais
influenciam no peso ao nascimento dos produtos (ALLEN et al., 2004). A idade varia
entre quatro e 14 anos, sendo o ideal entre cinco e nove anos (SQUIRES et al.,
2003). H alguns anos atrs se preconizava que as potrancas (2- 4 anos) virgens
eram as de maior fertilidade e assim eleitas como primeira opo. Nos ltimos
anos, coincidindo com observaes empricas de criadores e veterinrios, foram
realizados interessantes experimentos que demonstraram que as placentas de
potrancas virgens e seus potros tinham menor peso quando comparados aos
controles de guas multparas e de maior idade (ALLEN et al., 2004). Associado a
esta evidncia, as potrancas apresentam ciclo estrais errticos mais freqentemente
que as adultas e, muitas vezes, indocilidade para o manejo intensivo de exames
transretais. Sendo assim, em geral, nos centros comerciais se evita o uso de
potrancas virgens como receptoras na primeira instncia.
A sanidade reprodutiva de grande importncia. Antes os requerimentos para
a compra de uma receptora, em geral, somente avaliavam a idade, tamanho, estado
corporal e um exame retal para avaliao da capacidade reprodutiva. Alonso (2005),
ao analisar dados de campo no Brasil, verificou que a taxa de perda de gestao de
guas receptoras prenhes por TE variou entre 8-20%, durante as temporadas
anteriores. Ao classificar o endomtrio de receptoras de embries relacionando com
a idade, em guas entre 2-10 anos de idade, detectou-se 27% como categoria IIb e
5% com categoria III, de acordo com a classificao histopatolgica de Kenney , o
que indica que, na populao estudada, 32% das guas com idade inferior ou igual
a 10 anos estavam seriamente comprometidas para levar uma gestao a termo e
haviam sido classificadas clinicamente como aptas e compradas como receptoras.
O ideal para um programa de TE que uma gua candidata a ser incorporada
como receptora tivesse realizado o exame de citologia e bipsia endometrial, alm
do exame ultrassonogrfico, verificar a integridade dos genitais externos e um
exame de competncia cervical. No Brasil, os veterinrios usam quase que
exclusivamente a ultrassonografia para compra ou descarte de receptoras, porm,
importante salientar que nem sempre uma gua sem fluido uterino no tem um
processo inflamatrio instalado no tero. Em funo disto, aconselha-se que pelo
menos o exame citolgico seja includo na seleo de receptoras (ALVARENGA et al.,
39

2010). A docilidade outra caracterstica bsica, visto que um programa de TE no
um programa de doma e no pode funcionar simultaneamente. Uma receptora deve,
na melhor das hipteses, passar ao menos por 10 controles ultrassonogrficos,
gestar e criar um potro, pois uma gua indcil no s comprometer o manejo,
colocando em perigo a integridade das pessoas (e a dela), como complicar o
manejo do potro (ALVARENGA et al., 2010).
A habilidade materna da gua uma caracterstica de difcil avaliao quando
se compra uma receptora que est vazia e no se conhece o histrico reprodutivo.
Certamente, deveria ser um fator de descarte inicial e avaliada independentemente
da fertilidade da receptora (ALVARENGA et al., 2010).
Em relao a sanidade das receptoras, aconselha-se que ao controle
sorolgico obrigatrio de Anemia Infecciosa Equina se incluam Babesiose e
Leptospirose. Ainda que utilizando imunizao controlada, recomenda-se o uso de
isolamento em qualquer programa de TE que inclua receptoras, alm da quarentena
para as guas que ingressam no programa. O principal problema de uma epidemia
desta enfermidade em um centro afetar no s as receptoras como tambm as
doadoras e reprodutores (ALVARENGA et al., 2010).
Na sincronizao da doadora com a receptora, aconselhvel o uso de
receptoras que estejam entre o quarto (D4) e oitavo (D8) dia aps ovulao.
Contudo, Caiado et al., (2005) demonstraram que as receptoras, quando tratadas
com progesterona exgena, podem ser utilizadas em um momento mais precoce do
ciclo. Os autores verificaram ainda que o tratamento dirio com progesterona
iniciado no dia da ovulao da receptora permitiu o uso destas j no segundo dia do
ciclo (D2 ps ovulao). Foi obtida uma taxa de prenhez prxima de 70% quando da
TE dois dias aps ovulao da receptora para receptoras tratadas com progesterona
contra 30% das guas no tratadas. Fleury et al. (2006) observaram ser possvel a
utilizao de receptoras no D3,ou seja, trs dias aps ovulao desde que estas
apresentem bom tnus uterino na avaliao ginecolgica.
As receptoras que receberam um embrio devem passar a uma categoria
especial dentro do sistema. Na medida em que o programa e as instalaes
permitam, devem permanecer tranqilas, sem mudanas at a data do primeiro
controle ps transferncia, com a melhor alimentao disponvel e sombra, visto
40

que, geralmente, coincide com o vero, perodo de temperaturas mximas, fator que
pode interferir na manuteno da gestao inicial (ALVARENGA et al., 2010).
2.8.1.3 Ultrassonografia na seleo de guas para TE
A ultrassonografia foi utilizada mais intensamente na reproduo animal a partir
da dcada de 1980. Inicialmente seu uso restringia-se apenas deteco da
gestao. Mais recentemente tem se mostrado um mtodo muito eficiente em
diagnstico no sistema reprodutor, contribuindo para o monitoramento da dinmica
folicular, previso e confirmao da ovulao, avaliao da morfologia do corpo
lteo, e no diagnstico de anormalidades e irregularidades ovarianas e uterinas
(SQUIRES et al., 1988; TAVEIROS et al., 2003). Este exame tem ainda possibilitado
detectar vesculas embrionrias com 10 ou 11 dias aps a ovulao da gua, alm
de observar sinais precisos sobre a evoluo e subseqente perda da prenhez
(DUARTE et al., 2002).
Devido ao seu acesso no invasivo e sua rpida visualizao do trato
reprodutivo, a ultrassonografia com a utilizao de um transdutor de 5MHz tornou-se
uma ferramenta indispensvel no processo de transferncia de embries (SQUIRES
et al., 1988). Alonso (2007) demonstrou uma correlao entre determinadas
caractersticas ultrassonogrficas uterinas e taxa de prenhez em receptoras de
embrio. As receptoras que apresentavam, no dia da transferncia de embrio, uma
marca da diferena entre miomtrio e endomtrio ao exame ultrassonogrfico
apresentaram quedas acentuadas das taxas de prenhez aps transferncia de
embrio.

2.8.2 Resultados obtidos em programas de TE
Vrios fatores podem interferir na taxa de recuperao embrionria, como: o
dia da coleta; o efeito do operador no lavado uterino, no rastreamento e na
manipulao do embrio; a idade da doadora; efeito do garanho, endometrite e
outros (SQUIRES et al., 1985).
A maioria dos embries recuperada nos dias sete e oito aps a ovulao,
pelo lavado do lmen uterino da doadora (CARNEIRO, 2003). Para SQUIRES et al.
(1982), no h diferena na recuperao embrionria realizada nestes dias, sendo
41

estes preferidos por apresentar maiores taxas de recuperao e porque neste
momento a maioria dos embries est na forma de blastocistos expandidos, sendo
mais facilmente visualizados ao microscpio estereoscpio. Ocasionalmente
embries em estgio de mrula so coletados neste perodo, condio tpica de
doadoras mais velhas (McCUE, 2003).
Carnevale et al., (1993) descreveram uma taxa de fertilizao
significativamente maior em guas jovens comparadas a guas velhas no dia 1,5
ps-ovulao (88% versus 45% respectivamente). Estes dados se correlacionam
com as maiores taxas de recuperao embrionria em guas doadoras jovens
versus velhas. Contudo, os embries produzidos so normais e adequados para
serem transferidos. Alonso et al., (2005), observaram que embries provenientes de
guas idosas (>18 anos) tm a mesma chance que os de guas mais jovens de
permanecerem viveis aps transferncia, pois o ndice de prenhez aos 15 e 50 dias
foi similar entre os grupos.
Carnevale e Ginther (1995) utilizando modelos in vivo, demonstraram pela
primeira vez na gua a relao entre idade cronolgica e danos aos ovcitos e
embries em estgios iniciais de desenvolvimento. Desta forma, importante
ressaltar que, na maioria das vezes, o fator implicado na baixa recuperao
embrionria de guas idosas a qualidade do ovcito.
Outro fator que interfere na recuperao embrionria a qualidade
espermtica do garanho. Nenhum programa pode sustentar-se comercialmente se
no houver um completo e objetivo diagnstico androlgico e uma estimativa da
capacidade reprodutiva dos reprodutores. Muitas vezes, falhas relacionadas
manipulao do smen levam queda nos ndices de fertilidade que no so
percebidas pelo tcnico. Dados publicados no Brasil demonstram haver uma grande
variao nos ndices de recuperao embrionria entre diferentes garanhes.
Quando comparados cinco garanhes entre si, verificou-se grande variao nas
taxas de recuperao embrionria, de 25% e 85 % (FLEURY et al., 2001).
Em estudos recentes, so reportados avanos no percentual da recuperao
embrionria, com taxas de 81,19% (95/117) (KUMAR et al., 2008). Em equinos, as
taxas de gestao obtidas ps-transferncia do embrio, tm sido documentadas,
variando de 27% a 82,9% (WILSON et al., 1987; LEIDL e BRAUM, 1988; TAVEIROS
42

et al., 2003; ROCHA FILHO et al., 2004).
2.9 CAUSAS DA INTERRUPO DA GESTAO
A perda da gestao um dos principais fatores de subfertilidade na espcie
equina. Tanto a fase da gestao em que esta ocorre quanto a incidncia das
perdas relacionam-se diretamente com a sade do trato reprodutivo (GINTHER et
al., 1985), variando ainda, entre diversos fatores, em funo da idade das guas
(BALL et al., 1986) e condio nutricional do rebanho sob estudo (WOODS et al.,
1987).
Registros encontrados na literatura indicam variao de 5 a 45% nos ndices
de perdas (BALL, 1993), refletindo diferenas entre criatrios e dificuldades de
diagnstico. A ultrassonografia, utilizada mais intensamente em medicina veterinria,
tem aumentado a eficcia dos exames clnicos, possibilitando detectar vesculas
embrionrias com 10 ou 11 dias ps-ovulao, e observar sinais precisos sobre a
evoluo e subsequente perda da gestao (PALMER & DRIANCOURT, 1980).
2.9.1 Morte Embrionria Precoce (MEP)
A MEP em guas um dos maiores fatores de subfertilidade e reduo de
taxas de gestao. Esta definida como a morte e expulso do concepto no
perodo entre a fertilizao e o quadragsimo quinto dia ps-ovulao.
A porcentagem de perda embrionria entre os 14 e 40 dias de 10% em guas
saudveis e de 22% em guas com problemas (BALL, 1993).
Considerando que o inicio da manuteno embrionria requer vrios processos
combinados intrinsecamente, algumas guas no podem sustentar a gestao alm
da fase embrionria. Isto pode resultar em enorme perda econmica, visto que 30-
40% das gestaes terminam nas duas primeiras semanas da concepo
(BETTERIDGE, 2000). As taxas de gestao aps transferncia de embrio so
influenciadas pela variabilidade do mtodo de transferncia, o tcnico, tamanho e
idade do embrio, morfologia embrionria, estao do ano, sincronizao entre
doadoras e receptoras, procedimentos para cultura e armazenagem de embries, e
idade e histrico reprodutivo de doadoras de embrio (CARNEY, et al., 1991;
McKINNON & SQUIRES, 1988; SQUIRES & SEIDEL, 1995). Provavelmente, o
aspecto mais importante do manejo clnico da perda embrionria precoce
43

reconhecer que esta ocorrer inevitavelmente em algumas guas, e o curso mais
apropriado seria diagnosticar sua ocorrncia assim que possvel para prover uma
oportunidade de aproveitar novamente a gua durante a mesma estao de monta.
A descoberta da perda embrionria precoce pode ser realizada por meio de exames
ultrassonogrficos a cada 10 dias ou duas semanas durante o incio da gestao
(VANDERWALL, 2008).
Os ndices de morte do concepto no incio da gestao so mais elevados
quando comparados com estgios mais avanados (GINTHER et al., 1985).
As causas de MEP so fatores endcrinos, como baixas concentraes de
progesterona, em decorrncia da baixa produo pelo corpo lteo e baixas
concentraes de estrgeno produzido pelo embrio; ambientes da tuba uterina e
uterino imprprios, como a presena de salpingites e endometrites, ou presena de
cistos de origem linftica ou devido a fibrose das glndulas uterinas, determinando
assim a no ocorrncia do processo de reconhecimento materno da gestao; idade
materna avanada, devido ao fato dos embries destas guas ter menor nmero de
clulas totais; uso do cio do potro, por assim podermos ter o retardo na involuo do
tero; estresse de manejo, de transporte, devido a ocorrncias de doenas
infecciosas ou devido a presena de dor excessiva; nutrio inadequada,
relacionada principalmente a baixo consumo de protenas e energia; exposio a
altas temperaturas e conseqente morte embrionria; fatores iatrognicos, como
palpao retal traumtica ou a realizao excessiva de ultrassonografia e
administrao de substncias abortivas inadvertidamente; fatores embrionrios,
como alteraes genticas (VANDERWALL, 2008).
O diagnstico de MEP realizado por meio de exame ultrassonogrfico do
tero, onde constatada a ausncia ou morte do embrio aps um primeiro exame
positivo. Outras alteraes ultrassonogrficas possveis na MEP, so presena de
lquido no tero e sinais inflamatrios caractersticos. O retardamento do
desenvolvimento embrionrio, caracterizado no exame ultrassonogrfico pela
presena do embrio com dimenses abaixo da mdia e com morfologia alterada,
podem ser sinais de futura morte embrionria (McKINNON et al., 1988). Como
preveno, as guas devero ser examinadas semanalmente aps a deteco da
gestao at completarem 40 dias de gestao, assim pode-se avaliar possveis
44

alteraes uterinas e embrionrias e serem evitadas as causas de MEP citadas
acima.
2.9.2 Abortamento
O abortamento em guas, como em qualquer espcie, representa uma perda
econmica e motivo de frustrao para mdicos veterinrios e criadores. Na gua
por muitas vezes no possvel determinar a etiologia do abortamento. Entre as
causas envolvidas temos as de origem infecciosa e outras no infecciosas. Por
definio, este consiste na perda da prenhez aps a organognese esteja completa,
ou seja, a partir dos 45 dias de gestao. A ocorrncia de abortamento em guas
estimada entre oito e 15%. A morte do feto pode resultar em abortamento ou sua
reteno no interior do tero com subsequente macerao ou mumificao. A
mumificao relativamente rara em guas, podendo ocorrer quando h gestao
gemelar com morte precoce de um dos fetos. Este feto mumificado geralmente
eliminado por ocasio do parto ou eventual abortamento (ACLAND, 1993).
O abortamento em guas pode ser classificado conforme a causa, no entanto
em cerca de 50% das vezes um diagnstico definitivo do agente causal no
alcanado. Esta dificuldade de se obter o diagnstico deve-se a complexidade do
abortamento em si. A interrupo da gestao poder se dar por doenas ou falhas
envolvendo a placenta, a me ou o feto, individual ou simultaneamente. Na tentativa
de se obter o diagnstico, faz-se necessrio colher informaes da gua, da
placenta e do feto. Deve-se inicialmente realizar anamnese detalhada, incluindo
histrico reprodutivo da gua, manejo vacinal do rebanho, trnsito de animais,
ocorrncia de doenas, potenciais causas de stress materno, possvel acesso a
toxinas, manejo nutricional, etc. O segundo passo seria realizar exame clnico
detalhado da gua com ateno especial ao aparelho reprodutivo, o que envolve
palpao e ultrassonografia. Sorologia pareada, com coleta de sangue com intervalo
de duas semanas pode demonstrar se houve contato recente com um agente
infeccioso causador de abortamento (TROEDSSON, 1997).
O feto e a placenta devero ser examinados minuciosamente. Algumas
leses na placenta, principalmente na regio da estrela cervical, podem evidenciar
uma placentite (TROEDSSON, 2003). Um feto ictrico em processo de autlise pode
ser indicativo de leptospirose (NEWMAN et al., 2007). Na tentativa de isolar o
45

agente, fragmentos do feto como fgado, pulmo, rins, contedo estomacal, e da
placenta devem ser refrigerados e enviados para laboratrio. Fragmentos dos
mesmos rgos tambm podero ser fixados em formalina 10% para exame
histopatolgico.
Entre os abortamentos infecciosos se faz necessria a distino entre aqueles
que podem ou no ser contagiosos. Entre os abortamentos de origem no infecciosa
a causa mais comum seria a gestao gemelar. Outras causas no infecciosas de
abortamento em guas so verificadas, entre elas as anormalidades placentrias
so particularmente importantes em guas mais velhas, onde se verifica um maior
comprometimento do endomtrio que pode ser comprovado por bipsia uterina.
guas que apresentam extensa fibrose endometrial por muitas vezes so capazes
de emprenhar, mas a gestao nem sempre vai a termo. Podemos ainda verificar
anormalidades no cordo umbilical como tores, com consequente interrupo do
afluxo sanguneo para o feto. A deficincia de progesterona tem sido por vrias
vezes incriminada como causa de abortamento em guas. Outros fatores envolvidos
no abortamento no infeccioso seriam m formao, anormalidades genticas,
nutrio inadequada, deficincias minerais ou de vitaminas e intoxicaes (ACLAND,
1993) .
A principal causa infecciosa e no contagiosa de abortamento seria a
placentite. Geralmente a infeco da placenta se d de forma ascendente atravs da
crvix. A placentite pode ser causada por fungos ou bactrias, tendo sido
considerada a principal causa entre 3.000 abortamentos estudados no Kentucky,
EUA, entre 1986 e 1991. Os principais patgenos envolvidos foram Aspergillus sp.,
Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Escherichia coli, Pseudomonas sp. e
Klebsiella sp. (TROEDSSON, 2003).
Geralmente o abortamento devido infeco da placenta precedido por
sinais clnicos que evidenciam um abortamento eminente. Verifica-se o aumento do
bere com extravasamento de leite e descarga vaginal. Na ultrassonografia
transretal observa-se um aumento na espessura da placenta, sendo que em
algumas situaes possvel evidenciar a separao do alantocrio do endomtrio.
Quando do abortamento por placentite, muitas vezes o feto no apresenta
alteraes dignas de nota. Geralmente observa-se aumento de lquido abdominal e
torcico, e hepatomegalia. A principal alterao macroscpica estaria na placenta,
46

geralmente a rea mais afetada estaria nas proximidades da crvix (estrela cervical)
onde a placenta apresenta uma colorao entre amarelo e marrom, com edema e
eventual presena de muco. O agente etiolgico poder ser isolado da placenta ou
de diversos rgos do feto, principalmente do estmago (LEBLANC, et.al., 2003).
O tratamento da placentite envolve a administrao de antibiticos de amplo
espectro, antiinflamatrios e progestgenos. Por muitas vezes possvel levar a
gestao a termo, mas nem sempre o potro nasce com peso e tamanho normal,
podendo ter seu desenvolvimento comprometido definitivamente. Como alternativa
de preveno, devemos assegurar que as estruturas anatmicas que so as
barreiras naturais contra a infeco ascendente estejam ntegras. Sempre que
tivermos dvidas quanto a qualidade do fechamento da vulva, deve-se promover
cirurgias reparadoras (vulvoplastias). Em casos de laceraes cervicais deve-se
verificar a necessidade e a viabilidade de estar realizando a reparao cirrgica
(TROEDSSON, 2003).
Abortamento infeccioso e contagioso causa preocupaes para mdicos
veterinrios e criadores, pois a contagiosidade pode tomar grandes propores
acarretando graves prejuzos criao. Um dos mais importantes agentes do
abortamento contagioso seria o Herpesvirus Eqino Tipo 1. Trata-se de um vrus
respiratrio que pode causar abortamento e mortalidade perinatal. Os abortamentos
so agudos, no sendo precedidos de qualquer evidncia clnica, ao contrrio da
placentite. Avaliao sorolgica pode ser realizada na gua e no feto abortado, mas
como o abortamento eventualmente ocorre vrios dias aps a infeco, algumas
guas no apresentaro ttulos elevados contra o herpesvirus no momento do
abortamento. A estratgia de preveno do herpesvrus relativamente simples e
bastante eficaz. Consiste na vacinao das guas no quinto, stimo e nono ms de
gestao (TROEDSSON, 1997).
A leptospirose at recentemente era incriminada como agente causal
ocasional de abortamento em guas. No entanto nos ltimos anos tem aumentado
consideravelmente os diagnsticos de abortamento envolvendo esta infeco.
Partos prematuros e natimortos so frequentes. As guas afetadas podem
apresentar sinais sistmicos por trs ou quatro dias, que incluem ligeira depresso,
hipertermia, anorexia e leve ictercia. O abortamento ocorre semanas aps a
infeco. Fetos abortados apresentam ictercia e alguma autlise. O diagnstico
pode ser feito pelo isolamento do agente e visualizao atravs de
47

imunofluorescncia, e testes sorolgicos, preferencialmente. As guas afetadas
devero ser isoladas das demais, sendo tratadas com estreptomicina. Como
estratgia de preveno as guas podero ser vacinadas por volta do quinto ou
sexto ms de gestao. Na primovacinao se faz necessrio um reforo aps
quatro semanas. O combate a roedores e armazenamento adequado de gros e
raes deve ser encarado como prioridade (FAVERO, et. al., 2002).
Outras doenas que podem levar ao abortamento, porm com menor
importncia so a Anemia Infecciosa Equina e Arterite Viral Equina. guas com
histrico de abortamento devero ser cuidadosamente examinadas para avaliao
de sanidade reprodutiva e quando encontrados problemas, estes devem ser
prontamente corrigidos. Conformao vulvar anormal e endometrite predispem a
uma infeco placento-fetal durante a gestao. A presena de fibrose uterina em
exames de bipsia indicam alto risco de aborto. A vacinao contra agentes
infecciosos dever ser rigorosa dentro de um plantel (ACLAND, 1993;
TROEDSSON, 1997).

3 OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GERAL
Contribuir para o conhecimento da leptospirose enquanto doena da esfera da
reproduo em guas envolvidas em programa de transferncia de embrio, de
forma a avaliar seu impacto na eficincia reprodutiva com o intuito de aumentar a
produtividade.

48

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
a) Avaliar a ocorrncia da leptospirose em guas doadoras e receptoras de embrio
por mtodos sorolgicos e identificar os serovares mais frequentes nestes
grupos.
b) Identificar animais sororeativos e isolar o agente infeccioso a partir de amostras
clnicas de animais sororeativos.
c) Utilizar mtodo molecular, como a PCR, para o diagnstico direto da infeco e
identificao de portadores nos grupos estudados.
d) Associar os achados laboratoriais com as falhas reprodutivas dos animais.

4 MATERIAL E MTODO

4.1 DESENHO DO ESTUDO
O estudo foi desenvolvido em duas etapas. No perodo de Agosto de 2008
Maro de 2010, um inqurito sorolgico foi conduzido em 688 guas envolvidas em
49

programa de transferncia de embrio, sendo 80 doadoras e 608 receptoras,
oriundas de nove plantis com elevados ndices de perdas reprodutivas e seis
plantis com baixos ndices de perdas reprodutivas. Os plantis foram divididos em
plantis com histrico de alta ocorrncia de falhas reprodutivas (Grupo A), este
composto de 437 guas (80 doadoras e 357 receptoras) e com baixo ndice de
ocorrncia de falhas reprodutivas (Grupo B), composto por 251 receptoras
gestantes, demostrando que esses animais apresentavam boa fertilidade. Os
animais do Grupo A foram divididos em dois subgrupos: subgrupo das doadoras de
embrio e o subgrupo das receptoras de embrio. Paralelamente, fichas
reprodutivas com detalhamento das perdas foram preenchidas, com o auxlio do
mdico veterinrio responsvel pelo plantel. As informaes oriundas das fichas
foram ento estudadas para avaliao da associao da sororeatividade com
parmetros de eficincia reprodutiva nos animais estudados.
Em uma etapa seguinte, no perodo de Maro de 2010 Agosto de 2010, os
plantis nos quais os animais apresentaram transtornos reprodutivos e que se
mostraram sororeativos foram selecionados para comporem um grupo de trabalho.
Dos animais destas propriedades, amostras de urina e fetos abortados, alm de
placentas, foram colhidas para processamento bacteriolgico e molecular.

4.2 ANIMAIS
Foram estudadas 688 guas adultas, de 15 plantis, envolvidas em
programas de transferncia de embries nos estados do Rio de Janeiro (n=9) e So
Paulo (n=6), sendo 80 doadoras e 608 receptoras. Os plantis estudados foram
selecionados de acordo com os critrios de incluso, a saber: presena de
assistncia veterinria e acompanhamento reprodutivo individual, ausncia de
programas de controle de leptospirose, presena de programa de imunoprofilaxia
(vacinao) para rinopneumonia (herpes vrus). Nove plantis com histrico de baixa
recuperao embrionria, morte embrionria precoce, abortamentos recentes e
natimortos formaram o Grupo A (80 doadoras e 357 receptoras), enquanto seis
plantis sem histrico de alteraes reprodutivas dignas de nota passaram a compor
o grupo controle, ou Grupo B (251 receptoras gestantes).
Na segunda fase do estudo apenas animais fortemente sororeativos
50

(ttulos800) foram retestados. Dos que e mostraram sororeativos ao segundo teste
foram colhidas amostras de urina (n=57) e aborto (n=4) para procedimentos
bacteriolgicos de isolamento e tipificao de amostras locais de leptospiras e de
Biologia Molecular (n=29). Amostras de fetos abortados e placentas destes animais
tambm foram colhidas e processadas para isolamento de leptospiras e
evidenciao molecular do agente.

4.3 ANLISE REPRODUTIVA
A anlise reprodutiva foi realizada atravs da interpretao das fichas
individuais dos animais (Anexo 1), associado ao exame clnico geral detalhado do
animal, histrico e anamnese, considerando principalmente os aspectos da eficincia
reprodutiva e criao dos potros, tais como falha na recuperao embrionria
(doadoras), morte embrionria precoce (at 45 dias ps fecundao), ocorrncia de
abortamentos (de 45 dias at o perodo previsto para o nascimento) e morte
perinatal (at trs dias de nascido) (receptoras), os animais foram divididos em
grupos, de acordo com o histrico de abortamentos recentes e de gestao positiva.
O exame do sistema reprodutivo foi conduzido por palpao transretal e
ultrassonografia. Efetuou-se a palpao transretal para identificar as estruturas do
sistema genital da reprodutora (crvix, tero e ovrios). O exame ultrassonogrfico
em tempo real foi realizado com um equipamento de ultrassonografia veterinria
(Aloka 500 equipado com transdutor 5MHz). As estruturas previamente
identificadas foram registradas atravs de imagem formada na tela do ultrassom. Os
folculos presentes no ovrio e a ecotextura do endomtrio foram avaliados. As
guas foram examinadas ao longo de toda a estao de monta e as receptoras
aps diagnstico positivo para prenhez foram submetidas ao exame
ultrassonogrfico ao 15, 45, 90, 180 e 270 dias de gestao.
4.4 AVALIAO LABORATORIAL DE AMOSTRAS
4.4.1 Anlise sorolgica

Nos plantis, as guas foram escolhidas randomicamente, caracterizando um
mnimo de 20% de cada plantel estudado. Amostras sanguneas foram colhidas em
tubos contendo vcuo atravs de puno na veia jugular de cada animal. Em
seguida, estas foram resfriadas e transportadas at o laboratrio, onde foram
51

centrifugadas e o soro foi estocado em tubos plsticos do tipo Eppendorf
a -20C
para posterior anlise.
O diagnstico sorolgico para leptospirose foi realizado de acordo com a
recomendao tcnica da Organizao Mundial de Sade, pela tcnica de
soroaglutinao microscpica com antgenos vivos e leitura em microscpio
equipado com condensador de campo escuro, conforme LILENBAUM e SANTOS
(1995). Utilizou-se como antgenos a coleo do Laboratrio de Bacteriologia
Veterinria do Departamento de Microbiologia e Parasitologia da Universidade
Federal Fluminense, composta de 21 serovares distintos de leptospiras,
representando 16 sorogrupos (Tabela 1).
A tcnica da soroaglutinao microscpica com antgenos vivos foi realizada
fazendo uma diluio inicial de 1:50 (4,9 mL de salina + 100L de soro do animal
testado). Em uma prxima diluio, 20L da diluio anterior (1:50) + 20 L do
antgeno vivo foram colocados em uma placa de microaglutinao e incubados na
estufa 37 C por 2 horas. A leitura foi realizada em microscpio equipado com
condensador de campo escuro da soluo em diluio de 1:100. Todas as amostras
com atividade aglutinante foram posteriormente testadas contra o antgeno reativo
usando diluies em srie de razo dois at que o ttulo mais alto fosse obtido, a fim
de identificar o serovar infectante. Consideraram-se como reativas as amostras com
ttulo mnimo de 200. Reaes com ttulos 100 foram consideradas inespecficas e
classificadas para o presente estudo como negativas.

52

Tabela 1. Antgenos utilizados para o diagnstico sorolgico da leptospirose
por soroaglutinao microscpica em equinos
Sorogrupo Serovar Amostra de Referncia
AUSTRALIS Australis Ballico
Bratislava Jez Bratislava
AUTUMNALIS Autumnalis Akiyami A
Butembo Butembo
BALLUM Ballum Mus 127
Castellonis Castellon 3
BATAVIA Bataviae Van Tienen
CANICOLA Canicola Hond Utrecht IV
CELLEDONI Whitcombi Celledoni
CYNOPTERI Cynopteri 3522 C
GRIPPOTYPHOSA Grippotyphosa Moskva V
HEBDOMADIS Hebdomadis Hebdomadis
ICTEROHAEMORRHAGIAE Icterohaemorrhagiae RGA
Copenhageni M 20
JAVANICA Javanica Veldrat Batavia 46
53

PANAMA Panama CZ 214 K
POMONA Pomona Pomona
PYROGENES Pyrogenes Salinem
SEJROE Hardjo Hardjoprajitno
Wolffi 3705
TARASSOVI Tarassovi Perepelicin
1

4.4.2 Bacterioscopia e Isolamento
Aps rigorosa limpeza da genitlia externa dos animais, amostras de urina
foram colhidas por sondagem, colhendo-se aproximadamente 20mL em frasco
estril descartvel de 100mL. Em caso de fetos abortados, os materiais de eleio
para tentativa de isolamento do agente foram lquido gstrico, fgado, rins, e sangue.
As amostras de urina foram imediatamente diludas a 1:10 em soluo salina
fosfatada estril, acondicionadas em frascos estreis, armazenado sob refrigerao
e encaminhadas at o laboratrio para processamento.
As amostras foram primeiramente examinadas em microscopia de campo
escuro. Posteriormente, 1mL de cada amostra foi semeada em sries de cinco tubos
para cada amostra contendo meio de cultura EMJH com soro de coelho com
antibiticos (5-fluoruracil, cloranfenicol, cido nalidixico, neomicina e vancomicina)
por 24hs. Posteriormente a subcultura foi semeada em meio EMJH sem antibiticos
e mantida a 28C. Os tubos foram analisados em microscopia de campo escuro
semanalmente por at 16 semanas (FAINE et al., 2000).
4.4.3 Mtodos moleculares
A utilizao de mtodos moleculares objetivou amplificar pela PCR a regio do
gene LipL32 utilizando iniciadores especficos do gene LipL32 descritos por
Stoddard et al. (2009) (LipL32_45F 5 AAG CAT TAC CGC TTG TGG TG 3 e o
LipL32_286R 5 GAA CTC CCA TTT CAG CGA TT 3), os quais geram um
fragmento de 242pb.; a partir de amostras de urina de guas envolvidas em
programas de transferncia de embries.
O DNA das amostras amostras foi extrado a partir de 2 mL de urina pelo kit
da promega Wizard SV genomic DNA Purification System

modificado.
Como molde para o controle positivo da reao foi utilizado o DNA genmico
de Leptospira interrogans serovar Copenhageni L1-130 na concentrao de 1ng/l
de DNA estimada atravs de espectrofotometria no fluormetro Qubit fluorometer
(Invitrogen), diludo 1:1000 (concentrao de 10pg).
2

Para a reao da PCR, em um volume final de 25L, foram adicionados 2,5 L
de Tampo 1X (200mM Tris-HCl [pH 8,4], 500mM KCl- Invitrogen); 3 L de MgCl
2
2.4 mM (Applied Biosystems, Foster City, USA); 3 L de dNTP 0.3 mM (Invitrogen,
San Diego, USA); 6 L de cada primer F e R (0.6M de cada); 1L Taq Polymerase
Biotools (1U/L); 3.5 L DNA. No controle negativo da PCR foi adicionado o volume
de gua DEPC referente ao de DNA (3.5 L). No controle negativo da extrao foi
utilizado gua DEPC que foi realizada a extrao com mesmo kit utilizado nas
amostras e na PCR foi adicionado o volume de gua DEPC referente ao de DNA
(3.5 L).
As reaes de amplificao foram feitas em tubos de 0,2 mL e conduzidas em
um termociclador GeneAmp 9700 (Applied Biosystems, Foster City, USA). Essa
mistura foi aquecida inicialmente a 94 C por dois minutos, 35 ciclos com: 1)
desnaturao a 94 C por 30 segundos; 2) anelamento a 53 C por 30 segundos; 3)
extenso a 72 C por 30 segundos. Foi realizada uma extenso final de 72 C por 5
minutos. Os produtos amplificados foram avaliados por eletroforese em gel e
agarose 2% diluda em tampo TAE 1X (40 mM Tris-acetato, 1 mM EDTA). No
preparo das amostras, 25 L da reao de PCR foram adicionados a 5 L de
corante de corrida (azul de bromofenol 0,25% glicerol 30%). A eletroforese foi
realizada a 5 v/cm
2
110 V, por 35 minutos em cuba horizontal utilizando-se como
tampo de corrida TAE 1X (40 mM Tris-acetato, 1 mM EDTA). Em seguida, os gis
foram incubados em soluo de brometo de etdio 0,5 g/mL, visualizados e
fotografados em um transiluminador de luz ultravioleta. Para confirmao do
tamanho do amplicon foi utilizado o padro de peso molecular 1 kb DNA ladder
(Invitrogen).
4.5 ANLISE ESTATSTICA DOS RESULTADOS
As anlises foram realizadas utilizando o teste no paramtrico do qui-quadrado
( X
2
) para avaliar as associes e calcular o risco relativo. Quando foi verificado que
em uma das caselas do qui-quadrado haviam nmero de observaes igual ou
menor a quatro, o Teste Exato de Fischer foi utilizado.

3

5 RESULTADOS

5.1 AVALIAO CLNICA
Considerando-se os parmetros analisados, a saber: comportamento/atitude,
estado nutricional, apetite, pelagem, presena de ectoparasitos, classificao da
secreo nasal e mucosas, turgor cutneo, retrao de globo ocular, palpao de
linfonodos, aferio de temperatura retal, pulso e tempo de preenchimento capilar,
alm da ausculta digestiva, pulmonar e cardaca, os animais estudados no
apresentaram alteraes dignas de nota no momento da avaliao clnica.

5.2 ANLISE REPRODUTIVA

Os animais do Grupo A (com histrico de falhas reprodutivas) foram divididos
em dois subgrupos: subgrupo das doadoras de embrio e o subgrupo das
receptoras de embrio. As doadoras apresentaram falha na taxa de recuperao
embrionria de 16,2% (13/80), embora no apresentassem falhas no processo de
ovulao ou endometrite com sinais clnicos (Tabela 2). J o grupo das receptoras
apresentou ndice de morte embrionria precoce de 20,7% (74/357), ndice de
abortamentos de 21,8% (78/357) e ndice de morte perinatal de 5%(18/357) (Tabela
3), totalizando 47,6% (170/357) de falhas reprodutivas no grupo das receptoras. No
que se refere ao Grupo B, todas as guas receptoras estavam gestantes no
momento da coleta das amostras, e, portanto no foi observada a ocorrncia de
falhas reprodutivas.

4

Tabela 2: Avaliao reprodutiva de guas envolvidas em programas de
transferncia de embrio (doadoras) oriundos de plantis com histrico de
falhas reprodutivas (Grupo A)
Plantel Estado N
o
de guas
Doadoras
Falha na Recuperao
Embrionria
1 RJ 12

1 (8,3%)
2 RJ 25 2 (8,0%)
3 SP 2 0
4 RJ 0 0
5 RJ 15 0
6 SP 10 3 (30,0%)
7 SP 9 4 (44,4%)
8 RJ 5 2 (40,0%)
9 SP 2 1 (50,0%)
TOTAL 80 13 (16,2%)
5

Tabela 3: Avaliao reprodutiva de guas envolvidas em programas de
transferncia de embrio (receptoras) oriundos de plantis com histrico de
falhas reprodutivas (Grupo A)

MEP: Morte embrionria precoce; MP: Morte perinatal ; FR: Falhas reprodutivas

Plantel Estado N
o
guas
receptoras
Falhas Reprodutivas (%)
MEP Abortamento M.P. Total F.R.
1 RJ 53 5 (9,4%) 16 (30,2%) 7 (13,2%) 28 (52,8%)
2 RJ 79 11(13,9%) 37 (46,8%) 5 (6,3%) 53 (67,1%)
3 SP 21 2 (9,5%) 3 (14,2%) 2 (9,5%) 7 (33,3%)
4 RJ 33 0 8 (24,2%) 4 (12,2%) 12 (36,4%)
5 RJ 18 7 (38,8%) 10 (55,5%) 0 17 (94,4%)
6 SP 16 8 (50,0%) 0 0 8 (50,0%)
7 SP 49 5 (10,2%) 1 (2,0%) 0 6 (12,2%)
8 RJ 26 5 (19,2%) 3 (11,5%) 0 8 (30,7%)
9 SP 62 31 (50,0%) 0 0 31 (50,0%)
TOTAL 357 74 (20,7%) 78 (21,8%) 18 (5,0%) 170 (47,6%)

6

5.3 ANLISE SOROLGICA
No que se refere aos animais do Grupo A, dentre as 437 amostras testadas,
301 (68,9%) foram reativas (ttulos 200). Neste grupo, em relao distribuio
por serovares, Bratislava foi o mais frequente, correspondendo a 195 amostras
(64,8% das reativas). Reatividade perante o serovar Copenhageni tambm foi
observada, em 106 amostras (35,2%). J no que se refere distribuio por ttulos,
verificou-se que 183 animais apresentaram ttulos de 200, 42 de 400 e 76
apresentaram altos ttulos ( 800), distribudos por todos os planteis examinados.
J no Grupo B, das 251 amostras testadas, 26 (10,4%) foram reativas, sendo
23 com ttulos de 200 e trs de 400. Nenhum animal deste grupo apresentou altos
ttulos ( 800). Neste grupo, Copenhageni foi o serovar mais frequente, em 16
amostras (61,5% das reativas). Reatividade perante o serovar Bratislava tambm foi
observada, em dez amostras (38,5%) (Tabela 4 e Grfico 1).

5.4 BACTERIOSCOPIA E ISOLAMENTO
Dos 76 animais sororeativos com altos ttulos ( 800) do Grupo A, selecionou-
se trs plantis com o maior nmero de animais nesta condio para as etapas de
evidenciao do agente (nmeros 1,5 e 8). Assim, foram colhidas 57 amostras de
urina, uma por animal, mais quatro oriundas de um aborto (fgado, rins e liquido
gstrico), totalizando 61 amostras.
Ao exame direto (bacterioscopia em campo escuro) no se observou a
presena de leptospiras em nenhuma das amostras examinadas. No que se refere
ao isolamento de leptospiras, tambm no foi possvel isolar em nenhuma das
amostras testadas.
5.5 MTODOS MOLECULARES
Dentre as 61 amostras colhidas para bacteriologia, foram processadas para
PCR um total de 29 amostras de urina, oriundas de dois plantis (de nmeros 5 e 8),
com 15 e 14 amostras, respectivamente. Na PCR, no plantel de nmero 8
identificou-se DNA especfico de Leptospira ssp. patognica em 50% das amostras
(7/14), enquanto no outro plantel (nmero 5) identificou-se tal DNA em 60% das
7

amostras (9/15). Foi observada a amplificao da regio do gene LipL32 utilizando
os primers LPL32 nas amostras de urina dos animais 5,6, 7, 9, 10, 12 e 13. O
controle positivo foi amplificado e o controle negativo da PCR e da extrao no,
como esperado. E na parte de baixo do gel foi observada a amplificao da regio
do gene LipL32 utilizando os primers LPL32 nas amostras de urina dos animais 15,
16, 19, 22, 25, 31 35, 36 e 39. O controle positivo foi amplificado e o controle
negativo da PCR e da extrao no, como esperado (Figura 1).

Figura 1: Eletroforese em gel de agarose 2% dos fragmentos amplificados pela
tcnica da PCR a partir do DNA extrado da urina de guas envolvidas em
programas de TE. M- Marcador de peso molecular X174 (GE LifeSciences);
CNe- Controle Negativo da extrao; CNp- Controle Negativo da PCR (gua
DEPC); CP- Controle positivo (DNA de L1130, concentrao de 10 pg) e 1- 38 e
15- 44 amostras de urina de guas dos plantis 8 e 5 respectivamente.

8

Tabela 4: Avaliao sorolgica (anticorpos anti-Leptospira) de guas
envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de plantis
com (Grupo A) e sem (Grupo B) histrico de falhas reprodutivas

Plantel Estado N Testadas Seroreatividade (%) Serovar predominante
Grupo A
1 RJ 65 55 (84,6) Bratislava
2 RJ 104 77 (74,0) Copenhageni
3 SP 23 16 (69,5) Bratislava
Sub-Total 5 RJ x 4 SP 437 301 (68,9)
A
7 Bra x 2 Cop
Grupo B
6 SP 57 8 (14) Bratislava
Sub-Total 4 RJ x 2 SP 251 26 (10,3)
B
2 Bra x 4 Cop
TOTAL 9 RJ x 6 SP 688 327 (47,5) 9 Bra x 6 Cop
A, B letras diferentes, diferem (p<0,001)

9

Grfico 1: Distribuio dos serovares de Leptospira interrogans em guas
envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de plantis
com (Grupo A) e sem (Grupo B) histrico de falhas reprodutivas

10

5.6. CORRELAO ENTRE ACHADOS REPRODUTIVOS E SOROLGICOS

Ao analisar-se as associaes entre sororeatividade (anticorpos anti-
Leptospira) de guas envolvidas em programas de transferncia de embrio
(doadoras e receptoras) oriundos de plantis com histrico de falhas reprodutivas e
ocorrncia de falha reprodutiva, observou-se que a sororeatividade para leptospirose
est fortemente associada a ocorrncia de falhas reprodutivas no grupo das
receptoras (p<0,001). Nestes animais, observou-se ainda que guas receptoras
sororeativas tm probabilidade (risco relativo) 2,88 vezes maior de apresentar falhas
reprodutivas quando comparados as soronegativas. J no grupo das doadoras, a
sororeatividade no se mostrou associada a ocorrncia de falhas reprodutivas
(p=0,938), conforme Tabela 5.
No que se refere analise de cada falha reproduttiva, verificou-se que a baixa
recuperao embrionria (BRE) das doadoras no est associada a sororeatividade
(p=0,325), conforme Tabela 6. J no grupo das receptoras, verificou-se que a
sororeatividade para leptospirose est relacionada morte embrionria precoce
(p<0,001) com um risco relativo de 6,81 (Tabela 7), assim como a ocorrncia de
abortamentos (p<0,001), com risco relativo de 203,82 (Tabela 8). Adicionalmente, a
sororeatividade para leptospirose est relacionada a morte perinatal (p<0,001) com
um risco relativo de 13,23, conforme Tabela 9.
No que se refere distribuio por serovares de leptospiras, verificou-se
que no grupo das doadoras no houve diferena entre os serovares (Bratislava e
Copenhageni) (p=0,584), enquanto no grupo das receptoras, esta ocorreu
(p<0,001), com risco relativo de 3,68, isto , uma gua receptora com sorologia
positiva para Bratislava apresenta 3,68 mais chances de apresentar problemas
reprodutivos que a receptora com sorologia positiva para Copenhageni (Tabela 10).
Ao analisar-se especificamente os animais reativos para Bratislava,
observou-se que no houve diferena (p=0,525) no grupo das doadoras, enquanto
no grupo das receptoras houve diferena (p<0,001) com risco relativo de 3,55
(Tabela 11). No que se refere ao serovar Copenhageni, igualmente no houve
diferena (p=0,548) no grupo das doadoras, enquanto no grupo das receptoras
houve diferena (p<0,001) com risco relativo de 2,26 (Tabela 12).
11

No que se refere analise de cada falha reproduttiva associada
sororeatividade para cada serovar, observou-se que no houve diferena (p=0,042)
no ndice de baixa recuperao embrionria (BRE) entre as doadoras soropositivas
para Bratislava e as soropositivas para Copenhageni (Tabela 13). Igualmente no
houve diferena ao comparar-se as soropositivas para Bratislava com as
soronegativas (p=0,276), ou comparando as soropositivas para Copenhageni e as
soronegativas (p=0,236) (Tabelas 14 e 15).
No que se refere s guas receptoras, verificou-se que as receptoras
soropositivas para Bratislava apresentam 5,31(risco relativo) mais chances de
apresentarem MEP, do que as receptoras soropositivas para Copenhageni
(p<0,001), conforme Tabela 16. Adicionalmente, as receptoras soropositivas para
Bratislava apresentaram 2,33 mais chances de apresentarem MEP que as
receptoras soronegativas, ao passo que as receptoras soropositivas para
Copenhageni apresentaram 1,37 mais chances de apresentarem MEP que as
receptoras soronegativas (Tabelas 17 e 18).
J no que se refere ocorrncia de abortamento, verificou-se que as
receptoras soropositivas para Bratislava apresentam 1,61(risco relativo) mais
chances de apresentarem abortamento, que as receptoras soropositivas para
Copenhageni (p=0,022)(Tabela 19). Adicionalmente, as receptoras soropositivas
para Bratislava apresentaram 2,38 mais chances de apresentarem abortamento que
as receptoras soronegativas, enquanto as receptoras soropositivas para
Copenhageni apresentaram 1,88 mais chances de apresentarem abortamento que
as receptoras soronegativas (Tabelas 20 e 21).
Com relao ocorrncia de morte perinatal, verificou-se que as receptoras
soropositivas para Bratislava apresentaram 4,51(risco relativo) mais chances de
apresentarem morte perinatal que as receptoras soropositivas para Copenhageni
(p<0,01)(Tabela 22). Adicionalmente, embora tenha havido diferena na comparao
entre as receptoras soropositivas para Bratislava e as soronegativas (p<0,001), no
houve diferena comparando as receptoras soropositivas para Copenhageni e as
soronegativas (p=0,164). Assim, as receptoras soropositivas para Bratislava
apresentam 1,22 mais chances de apresentarem morte neonatal que as receptoras
soronegativas (Tabelas 23 e 24).
1

Tabela 5: Associaes entre sororeatividade (anticorpos anti-Leptospira)
de guas envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos
de plantis com histrico de falhas reprodutivas e ocorrncia de falha
reprodutiva

Classe de
guas
Sorologia
Falha reprodutiva
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Doadoras Negativo 5 16,7 25 83,3
0,938 1,05 0,31 3,56
Positivo 8 16,0 42 84,0
Receptoras Negativo 7 1,9 354 98,1
<0,001 2,88 2,42 3,43
Positivo 163 66,0 84 34,0
P nvel de significncia; RR risco relativo; CI intervalo de confiana

Tabela 6: Associaes entre sororeatividade (anticorpos anti-Leptospira)
de guas (doadoras) envolvidas em programas de transferncia de
embrio oriundos de plantis com histrico de baixa recuperao
embrionria (BRE)

Classe de
guas
Sorologia
BRE
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
0,325 1,71 0,58 5,05
Positivo 15 30,0 35 70,0

2

Tabela 7: Anlise de associaes entre sororeatividade (anticorpos anti-
Leptospira) de guas (receptoras) envolvidas em programas de
transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de morte
embrionria precoce (MEP)

Classe de
guas
Sorologia
Morte embrionria precoce
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptora Negativo 21 5,5 360 94,5
<0,001 6,81 3,96 11,70
Positivo 54 28,4 136 71,6

transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de
abortamento

Classe de
guas
Sorologia
Abortamento
P RR CI 95%
Sim No
n % N %
<0,001 203,82 28,07 1479,92
Positivo 77 36,2 136 63,8

3

transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de morte
perinatal

Classe de
guas
Sorologia
Morte perinatal
P RR CI 95%
Sim No
n % N %
<0,001 13,23 3,77 46,43
Positivo 15 9,9 136 90,1

Tabela 10: Anlise de associaes entre sorovariedade de guas
envolvidas em programas de transferncia de embrio oriundos de
plantis com histrico de falhas reprodutivas e ocorrncia de falha
reprodutiva
Classe de
guas
Serovar
Falha reprodutiva
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Doadoras Bratislava 9 18,0 41 82,0
0,584 1,42 0,40 5,11
Copenhageni 4 13,3 26 86,7
Receptoras Bratislava 109 43,3 143 56,7
<0,001 3,68 2,54 5,34
Copenhageni 61 17,1 295 82,9

4

Tabela 11: Anlise de associaes entre sorologia negativa e sorologia
positiva para Bratislava de guas envolvidas em programas de
transferncia de embrio oriundos de plantis com histrico de falhas

Classe de
guas
Sorologia
Falha reprodutiva
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
0,525 1,60 0,37
6,28
Brat 4 14,8 23 85,2
Receptoras
Negativo 3 2,8 103 97,2
<0,001 3,55 2,72
4,63
Brat 106 72,6 40 27,4

Tabela 12: Associaes entre sororeatividade para Copenhageni de guas
plantis com histrico de falhas reprodutivas e ocorrncia de falha
reprodutiva

Classe de
guas
Sorologia
Falha reprodutiva
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Doadoras Negativa 0 0,0 7 100,0
0,548 1,21 1,00
1,46
Cop 4 17,4 19 82,6
Receptoras
Negativa 4 1,6 251 98,4
<0,001 2,26 1,80
2,82
Cop 57 56,4 44 43,6

5

Tabela 13: Associaes entre sorovariedade de guas (doadoras)
plantis com histrico de baixa recuperao embrionria (BRE)

Classe de
guas
Serovar
BRE
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Doadoras Bratislava 17 34,0 33 66,0
0,042 2,55 0,95 6,86

Tabela 14: Associaes entre sororeatividade para Bratislava de guas
(doadoras) envolvidas em programas de transferncia de embrio
oriundos de plantis com histrico de baixa recuperao embrionria
(BRE)

Classe de
guas
Sorologia
BRE
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
0,276 1,95 0,58
6,50
Bratilsava 11 40,7 16 59,3

6

(doadoras) envolvidas em programas de transferncia de embrio
oriundos de plantis com histrico de baixa recuperao embrionria
(BRE)

Classe de
guas
Sorologia
BRE
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
0,236 1,21 1,00
1,46
Copenhageni
4 17,4 19 82,6

Tabela 16: Associaes entre sorovariedade de guas (receptoras)
plantis com histrico de morte embrionria precoce (MEP)

Classe de
guas
Serovar
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptora Bratislava 59 25,2 175 74,8
<0,001 5,31 3,14 8,99

7

(receptoras) envolvidas em programas de transferncia de embrio
oriundos de plantis com histrico de morte embrionria precoce (MEP)

Classe de
guas
Sorologia
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 3 2,9 102 97,1
<0,001 2,33 1,84
2,96
Bratislava 56 58,3 40 41,7

oriundos de plantis com histrico de morte embrionria precoce (MEP)

Classe de
guas
Sorologia
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 1 0,4 251 99,6
<0,001 1,37 1,17
1,60
Copenhageni
16 27,1 43 72,9

8

plantis com histrico de abortamento

Classe de
guas
Sorovar
Abortamento
P RR CI 95%
Sim No
n % N %
0,022 1,61 1,06 2,43
Copenhageni 40 11,1 321 88,9

oriundos de plantis com histrico de abortamento

Classe de
guas
Sorologia
Abortamento
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 0 0,0 85 100,0
<0,001 2,38 1,87
3,00
Bratislava 55 57,9 40 42,1

9

oriundos de plantis com histrico de abortamento

Classe de
guas
Sorologia
Abortamento
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 1 0,4 251 99,6
<0,001 1,88 1,53
2,30
Copenhageni
39 47,0 44 53,0

plantis com histrico de morte perinatal

Classe de
guas
Serovar
Morte perinatal
P RR CI 95%
Sim No
n % N %
<0,01 4,51 1,63 12,45

10

oriundos de plantis com histrico de morte perinatal

Classe de
guas
Sorologia
Morte perinatal
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 0 0,0 84 100,0
<0,001 1,22 1,09
1,37
Bratislava 13 18,3 58 81,7

oriundos de plantis com histrico de morte perinatal

Classe de
guas
Sorologia
Morte perinatal
P RR CI 95%
Sim No
n % n %
Receptoras
Negativa 252 98,8 3 1,2
0,164 0,26 0,04
1,54
Copenhageni
43 95,6 2 4,4

11

6 DISCUSSO
A leptospirose em equinos uma importante enfermidade da esfera da
reproduo, uma vez que determina o nascimento de crias fracas,
natimortalidade ou mortalidade neonatal e abortamento, como sequela comum
aps invaso sistmica. O abortamento sem prvia doena clnica tambm
comum (LILENBAUM, 1998; SZEREDI & HAAKE, 2006; LON et al., 2006).
Lilenbaum et al. (1998), ao estudarem problemas reprodutivos em guas
devido leptospirose no estado do Rio de Janeiro, Brasil, notaram que apesar
de nas outras espcies a leptospirose ser reconhecida como causa de grandes
problemas reprodutivos, nos equinos esta relao menos estudada. Mais
recentemente, Pinna et al. (2007) demonstraram a ocorrncia de problemas
reprodutivos em um plantel de equinos determinado por leptosprias do serovar
Bratislava.
No presente estudo no foi verificada a presena de alteraes clnicas
compatveis com quadros agudos de leptospirose, o que refora a hiptese de
que a infeco por leptospiras em equinos muitas vezes ocorre de forma sub-
clnica (ELLIS et al., 1983; FAINE et al., 2000; HARTSKEERL et al., 2004;
LON et al., 2006). Entretanto, apesar da ausncia de sinais clnicos, registrou-
se alta ocorrncia de aglutininas anti-leptospiras, o que concorda com
DONAHUE et al (1991) e PINNA et al. (2007), que reportaram perda
reprodutiva associada infeco por leptospiras em equinos sororeativos sem
outros sinais clinicos. Tal fato particularmente mais frequente no caso de
12

infeces pelo serovar Bratislava, considerado adaptado espcie equina e
que, apesar de determinar infeco sub-clnica e muitas vezes inaparente, vem
cada vez sendo mais reconhecido na etiologia da leptospirose em equinos,
com importantes prejuzos, em especial na esfera reprodutiva (ELLIS et al.,
1983; FAINE et al., 2000; PINNA et al., 2007).
No presente estudo, por meio de mtodos sorolgicos e, em alguns
plantis, pela evidenciao direta de DNA do agente, confirmou-se a infeco
por leptospiras nos plantis com histrico de falhas reprodutivas. Os animais
destes plantis apresentavam sororeatividade significativamente maior do que
as guas dos plantis sem histrico de falhas reprodutivas (68,9% versus
10,3%), o que refora a associao entre a infeco por leptospiras e a
ocorrncia de falhas reprodutivas diversas em guas envolvidas em programas
de transferncia de embrio, conforme demonstrado por diversos autores no
Brasil (LILENBAUM 1998; PINNA et al., 2007) e em outros pases
(SEBASTIAN et al., 2005; SZEREDI & HAAKE, 2006).
Tal associao se mostrou importante em guas receptoras, embora
no tenha se confirmado em guas doadoras de embrio. Nestes ltimos
animais, o parmetro reprodutivo estudado foi o indicie de recuperao
embrionria, e este se mostrou comparvel entre os animais sororeativos ou
no, independentemente do serovar envolvido. Segundo Squires et. al. (1985),
vrios fatores podem interferir na taxa de recuperao embrionria, como o dia
da coleta do embrio, o efeito do operador no lavado uterino, no rastreamento
do embrio, a idade da doadora, efeito do garanho e endometrite. Apesar da
leptospirose ter sido referenciada como agente de salpingites e endometrites
em vacas, alm de baixos nveis de progestrona (Dhaliwal et al. 1997), com
efeito direto na fertilizao, tal fato jamais foi referenciado em guas. Os
achados do presente estudo sugerem que a infeco por leptospiras na forma
sub-clinica, como verificado em algumas das doadoras estudadas, no seria
suficiente para interferir na taxa de fertilizao e consequentemtne no ndice de
recuperao embrionria. Desta forma, no caso especfico das guas utilizadas
apenas como doadoras de embrio, a leptospirose sub-clinica,
13

independentemente do serovar causativo, no significa importante enfermidade
da esfera da reproduo.
No que se refere ao grupo das receptoras, no entanto, observou-se
importante e significativa diferena quando se correlacionou sororeatividade
para leptospirose com a ocorrncia de falhas reprodutivas. As receptoras
soropositivas apresentaram 2,88 mais chances de apresentarem falhas
reprodutivas que as soronegativas. As principais falhas observadas foram a
ocorrncia de morte embrionria precoce, de abortamentos e de morte
perinatal, todas igualmente significativas. Desta forma, diferentemente de
outras enfermidades infecciosas da esfera da reproduo, como a infeco por
herpesvirus, que tende a determinar falhas reprodutivas no tero final da
gestao (Ellis et al., 1976), verificou-se que a leptospirose atua em qualquer
momento da gestao.
A associao entre infeco por leptospiras e a ocorrncia de
abortamentos sobejamente conhecida e ocorre principalmente pelo
desenvolvimento de placentite. Segundo Troedsson (2003), a placentite foi
considerada a principal causa entre 3.000 abortamentos estudados no
Kentucky entre 1986 e 1991 e pode ser causada por diversos patgenos. Em
alguns locais a infeco por leptospiras pode ser considerada como a principal
causadora de abortamento, onde as infeces fetoplacentrias so
responsveis por um tero dos natimortos e da morte perinatal (RADOSTITS et
al., 2002). Ellis et al. (1983), durante um surto de abortamento em guas,
verificaram a infeco por leptospiras em nove de 22 fetos examinados por
imunofluorescncia e cultura, enquanto Yasuda et al. (1986) relataram o
isolamento da Leptospira biflexa sorotipo Ranarum, pertencente ao grupo de
leptospiras saprfitas, de aborto equino no Brasil. Hodgin et al. (1989),
identificaram a leptospirose como causa de quatro abortamentos e uma morte
neonatal em Louisiana. O diagnstico foi baseado na visualizao das
leptospiras dos tecidos provenientes do rim, fgado e placenta.
Donahue et al. (1991), verificaram em Kentucky, EUA, durante a estao
de monta de 1989, que a infeco por leptospiras pde ser demonstrada em
14

casos de abortamentos e natimortalidade, com comprovao pro cultura
bacteriana. Posteriormente, surtos de leptospirose na regio levaram
abortamentos e o agente foi isolado de 45 (60,8%) dos 74 casos (DONAHUE et
al., 1995). J Szeredi et al. (2006) examinaram 96 abortamentos provenientes
de 57 fazendas. Diagnosticou-se leptospirose em trs abortamentos, de
diferentes fazendas.
No que se refere ocorrncia de morte perinatal, esta tambm se
mostrou significativamente mais comuns nas receptoras sororeativas. Apesar
da maioria dos estudos se referir a estudos com abortos, pode-se inferir que a
patogenia que leva ao nascimento de potros fracos e que sobrevivem por
poucas horas seja bastante similar aquela que leva morte intratuterina. Pinna
et al. (2007) relataram 8% de bitos neonatais em plantel de equinos no Brasil,
enquanto Donahue et al. (1991) descreveram a utilizao de mtodos de
fluorescncia indireta para diagnstico da infeco por leptospiras em potros
com morte perinatal.
Alm de abortamentos e morte perinatal, as receptoras soropositivas
apresentaram sete vezes mais chances de apresentarem morte embrionria
precoce que as receptoras soronegativas. Embora tal associao jamais tenha
sido descrita em equinos, Dhaliwal et al. (1997), em estudo para verificar o
efeito da infeco por Leptospira interrogans serovar Hardjo na concentrao
de progesterona em novilhas, sugeriram que a infeco talvez tenha efeito
direto na morte embrionria precoce. Os autores verificaram que as novilhas
infectadas apresentaram menor concentrao de progesterona em relao as
novilhas no infectadas. possivel que, por analogia espcie bovina,
tambm na espcie equina ocorra uma menor concentrao de progesterona,
talvez devido uma lutelise parcial, causada pela reao inflamatria
determinada pela presena de leptospiras no ambiente uterino, podendo levar
liberao de prostaglandina F2.
No que se refere a diferenas observadas entre animais infectados por
Bratislava e Copenhageni, verificou-se que leptospirose determinada por
Bratislava est mais ligada a problemas reprodutivos em geral do que
15

leptospirose causada por Copenhageni. Assim, uma receptora sororeativa
para Bratislava tem 3,68 mais chances de ter problemas reprodutivos do que
uma receptora sororeativa para Copenhageni, embora estes ltimos tenham
maior ndice de problemas reprodutivos do que os soronegativos. Tal
significncia foi verificada para todas as falhas reprodutivas estudadas.
Desde os trabalhos de Ellis et al.(1983) acredita-se que Bratislava seja
um serovar adaptado aos equinos, devido a grande prevalncia de anticorpos
contra Bratislava e o isolamento deste serovar dos rins de sete de 91 equinos
adultos. Adicionalmente, tal amostra transmitida no contato equino-equino
(ELLIS et al., 1983) e, portanto, no se verifica a necessidade de outras
espcies para a transmisso da infeco, em contraste com a infeco por
serovares no adaptados, como Pomona, que transmitida por sunos, ou
Copenhageni, transmitida pelo contato direto ou indireto com a urina de
roedores.
Sororeatividade para Bratislava tem sido reportada em diversos pases
(LEES e GALE, 1994; DONAHUE et al., 1991; HARTSKEERL et al., 2004;
LON et al., 2006), sempre associada infeces sub-clinicas e variados
graus de falhas reprodutivas.
Recentemente, no Brasil, Pinna et al. (2007) avaliaram um rebanho com
148 guas que apresentavam um nvel elevado de abortamento (12%), morte
embrionria (10%) e bitos neonatais (8%), e verificaram que 87,8% dos
animais foram sororeativos ao serovar Bratilslava. Os animais sororeativos
foram tratados e vacinados e, aps um ano, sororeatividade e ocorrncia de
abortamentos, morte embrionria e neonatal declinou. Apesar de apresentar
seroprevalncia varivel e de acordo com a regio, este serovar vem sendo
pouco descrito no Brasil, onde ainda predominam os relatos de infeco por
Icterohaemorrhagiae (LILENBAUM, 1998; VASCONCELLOS, 2000;
PESCADOR et al., 2004).
Assim, acredita-se que o principal problema reprodutivo em guas
receptoras a leptospirose causada por Bratislava, que sub-diagnosticada e
pouco relatada. Por ser sub-clinica e no determinar a sindrome tradicional de
16

ictercia e hemorragias, pode passar desapercebida, mas, silenciosamente,
leva diversos problemas reprodutivos, prejudicando a eficiencia reprodutiva
do plantel.
No que se refere aos mtodos de diagntico direto da infeco por
leptopsiras em equinos, verificou-se que tanto a bacterioscopia direta da urina
por microscopia de campo escuro quanto a cultura bacteriolgica no se
mostraram efetivos. O diagnstico definitivo da leptospirose
reconhecidamente difcil e a maior parte dos laboratrios no buscam seu
isolamento, pois a cultura do agente difcil, pela sua fragilidade e longo
perodo de incubao (DONAHUE et al., 1991). As leptospiras so exigentes
quanto s condies de cultura e tambm extremamente sensveis, podendo
muitas vezes se tornarem inviveis durante o transporte do material clinico at
o laboratrio (FAINE et al., 2000).
No presente estudo identificou-se DNA de Leptospira ssp. patognica
pela tcnica de PCR em 50% das amostras de urina de um plantel e 60% em
outro. Sabe-se que vrias tcnicas de diagnstico baseadas em biologia
molecular, principalmente, a PCR, vm sendo utilizadas de forma bastante
eficiente no diagnstico de vrias enfermidades infecciosas no homem e nos
animais, principalmente aquelas causadas por agentes de difcil isolamento
(HEINEMANN et al., 1999; LILENBAUM et al., 2009). Genovez et al. (2004),
relataram a investigao diagnstica para leptospirose em amostras de quatro
ejaculados de um eqino PSI que apresentava ttulo de 800 para o serovar
Icterohaemorrhagiae. As amostras de smen foram submetidas tcnica de
cultivo e PCR com primers Lep1 e Lep2, gnero especficos para Leptospira
spp., revelando-se negativas no cultivo, e positivas na PCR , como no presente
estudo. Lon et al. (2006) e Vemulapalli et al. (2005) tambm detectaram DNA
de leptospiras patognicas em tecidos de potro prematuro usando PCR. Os
resultados do presente estudo demonstram que a tcnica de PCR representa
um valioso mtodo para o diagnstico de leptospirose na espcie equina.

17

7 CONCLUSO
Com base nos resultados obtidos no presente estudo, concluiu-se que a
leptospirose representa uma importante enfermidade da esfera da reproduo
em plantis de guas envolvidas em programas de transferncia de embrio,
estando associada a ocorrncia de morte embrionria precoce, abortamentos e
morte perinatal nas receptoras, porm no nos ndices de recuperao
embrionrio nas doadoras. Adicionalmente, o serovar Bratislava, mantido pelos
equinos, mostrou-se predominante e mais frequentemente associado a falhas
reprodutivas do que o serovar Copenhageni, embora este ltimo tambm as
determine. Por ltimo, concluiu-se que a evidenciao de DNA bacteriano por
PCR mostrou-se uma tcnica de diagnstico direto rpido e definitivo para a
infeco por leptospiras em equinos, visto as limitaes verificadas na cultura
bacteriolgica.

18

8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ABUCHAIM, D.M. Presena de aglutininas anti-Leptospira em soro de equinos
no Estado do Rio Grande do Sul. Arquivo da Faculdade de Veterinria UFRGS,
v.19, p.9-14, 1991.
ACLAND, H.M. Abortion in Mares. In: MCKINNON, A.O.; VOSS, J.L. Equine
Reproduction. Philadelphia: Lea & Febiger, 1993, p.554-62.

ALLEN, W R, SANDRA, W, CLARE, T AND BUTTERFIELD, R.M. The influence
of maternal size on pre- and postnatal growth in the horse: III Postnatal growth
Reproduction , p. 67-77, 2004.
ALONSO, M.A.; FLEURY, P.D.C. ; NEVES NETO, J.R.; MACHADO, M.S.
Efeito da idade da gua doadora na taxa de perda embrionria. Acta Scentiae
Veterinariae,33 (Supl 1):204, 2005.
ALONSO, M. A. Efeito das caracteristicas uterinas e dia do ciclo na taxa de
prenhez e nveis sricos de progesterona em guas candidatas receptora de
embries. Dissertao, pg.71, 2007.
ALONSO-ANDICOBERRY C, GARCIA-PENA, F.J., PEREIRA-BUENO, J.,
COSTAS, E., ORTEGA-MORA, L.M. Herd-level risk factors associated with
Leptospira spp. Seroprevalence in dairy and beef cattle in Spain. Preventive
Veterinary Medicine v.52, p.109117, 2001.
ALVARENGA, M.A., CARMO, M.T., OLIVEIRA, J.V. Transferncia de Embries
19

na Espcie Eqina. Botucatu - SP, 2010. Cap.4. p.27-40.
ANDR-FONTAINE, G., BRANGER, C., GRAY, A.W., KLAASEN, H.L.
Comparison of the efficacy of three commercial bacterins in preventing canine
leptospirosis. Vet. Rec. n. 153, v. 6, p.165-169, 2003.
ARRUDA, R. P.; VISITIN, J. A.; FLEURY, J. J.; GARCIA, A. R.; MADUREIRA,
E. H.; CELEGHINI, E. C. C.; NEVES NETO, J. R. Existem relaes entre
tamanho e morfoecogenicidade do corpo lteo detectados pelo ultra-som e os
teores de progesterona plasmtica em receptoras de embries eqinos? Braz.
J. Vet. Res. Anim. Sci., So Paulo, v.38, n.5, p.233-239, 2001.
ATHANAZIO, D.A., SILVA, E.F., SANTO, C.S., ROCHA, G.M., VANNIER-
SANTOS, M.A., MCBRIDE, A.J., KO, A.I.; REIS, M.G. Rattus norvegicus as a
model for persistent renal colonization by pathogenic Leptospira interrogans.
Acta Trop. V. 105, n. 2, p. 176-180, 2008.
BALL, B.A., LITTLE, T.V., HILLMAN, R.B., et al. Pregnancy rates at days 2 and
14 and estimated embryonic loss rates prior to day 14 in normal and subfertile
mares. Theriogenology, v.26, p.611-619, 1986.
BALL, B.A. Embrionic death in mares. In: MCKINNON, A.O., VOSS, J.L. Equine
reproduction. Philadelphia: Lea & Febiger, 1993. Cap.61. p.517-531.
BARTHI, A. J., NALLY, J. E., RICALDI, J. N., MICHAEL, A. M., DIAZ, M. M.,
LOVETT, M. A., LEVETT, P. N., GILMAN, R. H., WILLIG, M. R., GOTUZZO, E.,
VINETZ, J. M. Leptospirosis: a zoonotic disease of global importance. Infectious
Disease, v. 3, p. 757-771, dec. 2003.
BASEMAN, J.B.; COX, C.D. Intermediate energy metabolism of Leptospira. J.
Bac. v. 97, n. 3, p. 992-1000, 1969.
BATISTA. Soroprevalncia de leptospirose em case errantes da cidade de
Patos, Estado da Paraba, Brasil. Brazilian Journal of Veterinary Research and
Animal Science, n. 41, p.131-136, 2004.

20

BETTERIDGE, K.J. 2000. Comparative aspects of equine embryonic
development. An. Rep. Sci. 60:691-702.

BLAZIUS et al. Ocorrncia de ces errantes soropositivos para Leptospira spp.
na Cidade de Itapema, Santa Catarina, Brasil. Caderno de Sade Pblica, Rio
de Janeiro, v. 21, n. 6, p.1952-1956, nov-dez, 2005.
BOLIN, C.A.; ALT, D.P. Use of a monovalent leptospiral vaccine to prevent
renal colonization and urinary shedding in cattle exposed to Leptospira
borgpetersenii serovar Hardjo. Am. J. Vet. Res. n.62, v.7, p. 995-1000, 2001.
BORDOY, A.M.R. Leptospirosis in horses in three provinces of north-eastern
Argentina. Vet. Arg. n. 2, p. 978-981, 1985.
BRAGA, J., HAMOND, C., MARTINS, G., LILENBAUM, W.; Detection of anti-
leptospira antibodies in aqueous humor of horses with naturally occurring
uveitis. Online Journal of Veterinary Research, v.14, p.212-217, 2010.
BRANGER, C., SONRIER, C., CHATRENET, B., KLONJKOWSKI, B.,
RUVOEN-CLOUET, N., AUBERT, A., ANDR-FONTAINE, G.; ELOIT, M.
Identification of the hemolysis-associated protein 1 as a cross-protective
immunogen of Leptospira interrogans by adenovirus-mediated vaccination. Inf.
Imm. n. 69, v. 11, p. 6831-6838, 2001.
BRENNER, A.F.; KAUFMANN, KR.; SULZER, AG.; STEIGERWALT, FC.;
ROGERS, RS. Further determination of DNA relatedness between serogroups
and serovars in the family Leptospiraceae with a proposal for Leptospira
alexanderi sp nov and four new Leptospira genomospecies, Int J Syst
Bacteriol., v.49, p. 839858, 1999.
BOQVIST, S.; THU, H.T.V.; VAGSHOLM, I.; MAGNUSSON, U. The impact of
Leptospira seropositivity on reproductive performance in sows in southern Viet
Nam. Theriogenology. v.58, p.132735, 2002.
CAIADO,J.R.C. ; FONSECA, F..A.; SILVA, J.F.S.; FONTES,R.S. Tratamento
de guas da raa Mangalarga Marchador com Progesterona (P4) ou
Altrenogest visando sua utilizao como receptoras de embrio no segundo dia
21

aps a ovulao. XIX Reunio anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de
Embries, Angra dos Reis. Acta Scientiae Veterinariae, p.180, 2005.
CAMILO, F.; VANNOZZI, I.; ROTA, A.; DI LUZIO, B.; ROMAGNOLI, S.; ARIA,
G.; ALLEN, W. R. Successful non-surgical transfer of horse embryos to mule
recipients. Reprod. Dom. Anim., Germany, v. 38, p. 380-385. 2003.
CARNEIRO, G. F. Biotcnicas da Reproduo na Espcie Eqina. Rev. Bras.
Reprod. Anim. Belo Horizonte, v. 27, n.2, p. 143-150. 2003.
CARNEVALLE ,EM.Gamete intrafallopian transfer.Vet Clin North Am Equine
Pract. 12(1), p. 47-60, 1993.
CARNEVALE E.M. & GINTHER O.J.. Defective oocytes as a cause of
subfertility in old mares. Biology of Reproduction Monogram. 1:209-214,1995.

CARNEY, N.J., SQUIRES, E.L., COOK, V.M., SEIDEL, G.E. & JAKSON, D.J.
1991. Comparison of pregnancy rates from transfer of fresh versus cooled,
transported equine embryos. Theriogenology 36:23-32.
CORDEIRO, F.; RAMOS, A.A.; BATISTA, J.A. Aglutininas antileptospira em
soros equinos de Minas Gerais. Pesquisa Agropecuria Brasileira, Srie
veterinria, v. 9, n. 7, p. 45-48, 1974.
CORRA, M.O.A; AMATO NETO, V; VERONESI, R; FABBRI, O.S.
Leptospiroses em equinos: inqurito sorolgico. Revista do Instituto Adolfo
Lutz, v.15, p.186-193, 1955.
DHALIWAL, G.S.; MURRAY,R.D.; DOBSON, H.; ELLIS, W.A. Effect of
Leptospira interrogans serovar hardjo infection on progesterone concentrations
in heifers. The Veterinary Record, v.140, p.19-20, 1997.
DILLE, E. A.; KING, S. S.; JONES K .L.; ROSER, J. F.; PEARL, C. A.295
Possible Dopaminergic Mechanism Regulating the Equine Corpus Luteum.
Reproduction, Fertility and Development, Australian, v. 16, n. 2, p. 267267.
2004. Abst.
22

DONAHUE,J.M.; SMITH, B.J.;REDMON, K.J.; DONAHUE, J.K.; Diagnosis and
prevalence of leptospira infection in aborted and stillborn horses. J Vet Diagn
Invest, v.3, p.148-151, 1991.
DONAHUE,J.M.; SMITH, B.J.;POONACHA,K.B.; DONAHUE, J.K.; RIGSBY,C.L
Prevalence and serovars of leptospira involved in equine abortions in central
Kentucky during the 1991-1993 foaling seasons. J Vet Diagn Invest, v.7, p.87-
91, 1995.
DUARTE, M. B.; VIEIRA, R. C.; SILVA, F. O. C. Incidncia de perda de prenhez
at o 50 dia em guas quarto de milha. Cienc. Rural, Santa Maria, v. 32, n 4,
p.643-647. 2002.
EGAN, J.; YEARSLEY, D. A serological survey of leptospiral infection in horses
in the Republic of Ireland. Vet Rec. 119 v. 20, n. 12, p. 306, sep. 1986.
ELLINGHAUSEN, H.C.; Mc CULLOUGH, W.G. Nutrition of Leptospira Pomona
and growth of 13 other serotypes: fractionation of oleic albumin complex and a
medium of bovine albumin and polysorbate 80. Am. J. Vet. Res. n. 26, p. 45-51,
1965.
ELLIS, W.A.; BRYSON, D.G.; McFERRAN, J.B.; Abortion associated with
mixed leptospira/ equid herpesvirus 1 infection. Vet. Rec., v.98, p.218-219,
1976.
ELLIS, W.A.;O BRIEN, J.J.;CASSELS J.A.; MONTGOMERY J.; Leptospiral
infection in horses in Northern Ireland: Serological and microbiological findings.
Equine Veterinary Journal, v.15, p.317-320, 1983.
ELLIS, W.A. Leptospirosis as a cause of reproductive failure. In: MILLER, R.B.
The Veterinary Clinics of North America: Food Animal Pratice, Philadelphia,
v.10, p.463-476, 1994.
FAINE, S., ADLER, B., BOLIN, C., PEROLAT, P. Leptospira and Leptospirosis.
MedSci, Melbourne, Austrlia, 2
nd
Ed., 2000.
FAVERO, A.C.M.; PINHEIRO, S. R.; VASCONCELLOS, S. A .; MORAIS, Z.M.;
FERREIRA, F. FERREIRA NETO, J. S.; Sorovares de leptospiras
23

predominantes em exames sorolgicos de bubalinos, ovinos, caprinos,
equinos, sunos e ces de diversos estados brasileiros. Cincia Rural, v. 32, n.
4, p. 613-619, 2002.
FLEURY JJ; PINTO A J; MARQUES A.

; LIMA C.G; ARRUDA R.P.Fatores que
afetam a recuperao embrionria e os ndices de prenhez aps transferncia
transcervical em eqinos da raa Mangalarga. Braz. J. Vet. Res. Anim.
Sci. v.38 n.1 So Paulo 2001.
FLEURY, P.D.C. ; ALONSO,M.A.; BALIEIRO, J.C.C. Avaliao da gua
receptora: Efeito de Caractersticas uterinas e tempo de ovulao. Acta
Scientiae Veterinariae, 34 (Supl 1):502, 2006.
FONTAINE,G and GANIERE, J. P. New topics on leptospirosis. Compendium of
immunology Microbiology and infectious disiases Vol. 13, No. 3, p. 163-168,
1990.
FOSS, R.; WIRTH, N.; SCHILTZ, P.; JONES, J. Nonsurgical Embryo Transfer
in a private Practice (1998). In: AAEP Annual Convention, 45
th
., 1999, New
Mxico. Proceedings... USA, v.45, p. 210-212. 1999.
FREITAS, D. C., VEIGA,J.S., LACERDA JR,P.M.G., LACERDA,J.P.
Identificao da leptospirose bovina no Brasil. Revista da Faculdade de
Medicina Veterinria USP, v.6, n.1, p.81-83, 1957.
GAMBERINI, M., GOMEZ, R.M., ATZINGEN, M.V., MARTINS, E.A.,
VASCONCELLOS, S.A., ROMERO, E.C., LEITE, L.C., HO, P.L. &
NASCIMENTO, A.L. Whole-genome analysis of Leptospira interrogans to
identify potential vaccine candidates against leptospirosis. Microbiol. Lett. n.
244, p. 305-313, 2005.

GANOZA, C.A., MATTHIAS, M.A., COLLINS-RICHARDS, D., BROUWER, K.
C., CUNNINGHAM, C.B., SEGURA, E.R., GILMAN, R.H., GOTUZZO, E.;
VINETZ, J.M. Determining risk for severe leptospirosis by molecular analysis of
24

environmental surface waters for pathogenic Leptospira. PLoS Med. v. 3, n. 8,
p. 308, 2006.
GELLAT, K.N. Oftalmologia eqina. In: Oftalmologia veterinria. 3. ed. So
Paulo; Manole, p. 365-369, 2003.

GENOVEZ, M.E.; OLIVEIRA, J.C.; CASTRO, V.; FERRARI, C.I.L.;
SCARCELLI, E.; CARDOSO, M.V.; PAULIN, L.M.; GREGORY, L.; LANA
NETO, P. Elevao da taxa de pario de rebanho nelore com leptospirose
endmica pelo descarte progressivo e vacinao. Revista Brasileira de
Reproduo Animal, v.27, n.3, 2003.
GENOVEZ, M.E.; SCARCELLI, E.; PIATTI, R.M.; GIRIO, R.J.S.; CARDOSO,
M.V.; MIYASHIRO, S.; CASTRO, V. Leptospira spp. em Smen de Garanho
PSI detectada pela Reao da Polimerase em Cadeia (PCR) Relato de Caso.
Arq.Inst.Biol., v.71(supl), p.1-749, 2004.
GINTHER, O.J., GARCIA, M.C., BERGFELT, D.R. Embryonic loss in mares:
Pregnancy rate, length of interovulatory intervals and progesterone
concentrations associated with loss during days 11 to 15. Theriogenology, v.24,
p.409-417, 1985.
GIORGI, W; TERUYA, J.M; MACRUZ, R; GENOVEZ, M.E; SILVA, A.S;
BORGO, F. Leptospirose em equinos: inqurito sorolgico e isolamento de
Leptospira icterohaemorrhagiae de feto abortado. Instituto Biolgico So Paulo,
v.47, n.2, p.47-53, 1981.
GREENE, C. E. Doenas bacterianas. In: ETTINGER, S. J.; FELDMAN, E. C.
(orgs.) Tratado de medicina interna veterinria. So Paulo: Manole, 2004,
cap.66. p. 410-421.
HAGIWARA, M. K. Leptospirose canina. Boletim Tcnico. Pfizer Sade Animal,
p. 1-6, nov. 2003.

25

HARTSKEERL, R.A., GORIS, M.G.A., BREM, S., MEYER, P., KOPP, H.,
GERHARDH, S; WOLLANKE, B. Classification of Leptospira from the eyes of
horses suffering from recurrent uveitis. J. Vet. Med. B, v. 51, n. 3, p. 110-115,
2004.

HEINEMANN, M. B.; GARCIA, J.F.; NUNES, C.M.; MORAIS, Z. M.; GREGORI,
F.; CORTEZ, A.; VASCONCELLOS, S.A.; VISINTIN, J. A.; RICHTZENHAIN,
L.J. Detection of leptospires in bovive semen by polimerase chain reaction.
Australian Veterinary journal, v. 77, n.1 p. 32 - 34, 1999.

HEATH, S. E.; JOHNSON, R. Leptospirosis. Clinical Update. JAVMA, vol 205,
No. 11, december 1, 1994.
HINRICHS, K. Embryo Transfer in the Mare: A Status Report. Animal
Reproduction Science, Netherlands, v.33, p.227-240. 1993.

HODGIN, E.C.; MILLER, D.A.; LOZANO,F.; Leptospira abortion in horses. J Vet
Diagn Invest, v.1, p.283-287, 1989.
HONG, C.B. et al. Equine abortion and stillbirth in central Kentucky during 1988
and 1989 following seasons. J. Vet. Diagn. Invest. n. 5, p. 560-566, 1993.
HUNT, C; AGUILAR, J; SPORLEDER, C; LOSINNO, L. The effect of donor
mare age on efficiency of a large scale embryo transfer programme. Ann Meet
Eur Soc Embryo Transf, 2005.

HUNTER, P. e HERR, S. Leptospirosis. In: COETZER, J.A.W.; THOMSON,
G.R.; TUSTIN, R.C. Infect. Dis. of Livestock. Oxford: Oxford University, 1994.
cap. 2, p. 997-1008.

IMEL, K. J.; SQUIRES, E. L. ELSDEN, R. P.; SHIDELER, R.K. Collection and
transfer of equine embryos. JAVMA, USA, v.15, n.10, p.987-991. 1981.
JOHNSON, R.C.; HARRIS, V.G. Differentiation of pathogenic and saprophytic
26

leptospires. J. Bacteriol. n. 94, p. 27-31, 1967.
JOUGLARD, S. D. D; BROD, C. S. Leptospirose em case: prevalncia e fatores
de risco no meio rural do Municpio de Pelotas, RS. Arq. Inst. Biol., So Paulo,
v. 67, n. 2, p. 181-185, jul./dez., 2000.
KITSON-PIGGOT, A.W. e PRESCOTT, J.F. Leptospirosis in horses in Ontario.
Can. J. Vet. Res. n. 51, p. 448-451, 1987.

KUMAR, D., JHAMB, D., KUMAR, N. & BADIAL, D. 2008. Foals born throught
fresh embryo transfer in India. Proceedings 10
th
International Congress of World
Equine Veterinary Association, Moscow, Russia. p.567-568.

LANGONI, H; DA SILVA, A.V; PEZERICO, S.B; DE LIMA, V.Y. Anti-
leptospirose agglutinins in equine sera, from So Paulo, Goias, and Mato
Grosso do Sul, Brazil, 1996-2001. The Journal of Venomous Animals and
Toxins including Tropical Diseases, v.10, n.3, p.207-218, 2004.

LEBLANC, M.M.; LESTER, G. Ascending Placentitis in the mare: What we
learned from an experimental model. Abstract Book, 8
th
Congress of the World
Equine Veterinary Association. 2003, p.22.

LEES, W.V.; GALE, P.S.; Titers to Leptospira species in horses in Alberta. Can
Vet J, v.35, p.636-640, 1994.
LEIDL, W.; BRAUM, J. Non-surgical embryo transfer in horses with a ET-gun
designed for use in cattle. Theriogenology, USA, v. 29. n. 1, p. 270. 1988.
LON, A., PRONOST, S., TAPPREST, J., FOUCHER, N., BLANCHARD, B.,
ANDR-FONTAINE, G., LAUGIER, G.; LECLERCQ, R. Identification of
pathogenic Leptospira strains in tissues of a premature foal by use of
polymerase chain reaction analysis. J. Vet. Diagn. Invest. n. 18, p. 218-221,
2006.
LEVETT, P.N. Leptospirosis. Clin. Microbiol. Rev. Apr, v.14, n.2, p.296-326,
27

2001.
LEVETT, P.N., MOREY, R.E, GALLOWAY, R., STEIGERWALT, A.G.; ELLIS
W.A. Reclassification of Leptospira parva Hovind-Hougen et al. 1982 as
Turneriella parva gen. nov., comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. n. 55, p.
1497-1499, 2005.

LILENBAUM, W; RIBEIRO, V; MARTIN, E; BISPO, V. Estudo sorolgico para
deteco de anticorpos anti-leptospira em Rattus norvegicus de Duque de
Caxias, Rio de Janeiro, Brasil. Revista Latino-Americana de Microbiologia, v.35,
p.357-60, 1993.

LILENBAUM, W.; SANTOS, M. R. C. Effect of Management Systems on the
prevalence of Bovine Leptospirosis. The Veterinary Record, v.138, p.570-571,
1995.
LILENBAUM, W. Leptospirosis on animal reproduction: IV. Serological findings
in mares from six farms in Rio de Janeiro, Brazil (1993-1998). Brazilian Journal
of Veterinary Research and Animal Science, v.35, n.2, p.61-63, 1998.
LILENBAUM, W., SOUZA, G.N.. Factors associated to bovine leptospirosis in
Rio de Janeiro, Brazil. Research in Veterinary Science. V. 75, p.249-251, 2003.
LILENBAUM, W., VARGES, R., MEDEIROS, L., CORDEIRO, A.G.,
CAVALCANTE, A., SOUZA, G.N., RICHTZENHAIN, L., VASCONCELLOS, S.A.
Risk factors associated with leptospirosis in dairy goats under tropical
conditions in Brazil. Research in Veterinary Science. V. 84, p. 14-17, 2008.
LILENBAUM, W; VARGES, R; RISTOW, P. C. L. V. B; CORTEZ, A; SOUZA,
S.O; RICHTZENHAIN, L; VASCONCELLOS, S. A. Identification of Leptospira
spp. carriers among seroreactive goats and sheep by Polymerase Chain
Reaction. Research in Veterinary Science, v. 87, p. 16-19, 2009.
LINHARES, G. F. C; GIRIO, R. J. S; LINHARES, D. C. L; MONDEIRO, L. C. M;
OLIVEIRA, A. P. A. Serovares de Leptospira interrogans e respectivas
28

prevalncias em cavalos da microrregio de Goinia, GO. Cincia Animal
Brasileira, v.6, p.255-259, 2005.
LOPES, M.D., PAPA, F.O., PRESTES, N.C., et al. Morte embrionria precoce
em guas: Aspectos clnicos e hormonais. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE
REPRODUO ANIMAL, 10., 1993, Belo Horizonte. Anais: CBRA, 1993.v.2,
p.231-380.
MATTHIAS, M.A., RICALDI, J.N., CESPEDES, M., DIAZ, M.M., GALLOWAY,
R.L., SAITO, M., STEIGERWALT, A.G., PATRA, K.P., ORE, C.V., GOTUZZO,
E., GILMAN, R.H., LEVETT, P.N.; VINETZ, J.M. Human leptospirosis caused
by a new, antigenically unique Leptospira associated with a Rattus Species
reservoir in the Peruvian Amazon. PLoS Neglect. Trop. Dis. v. 2, n. 4, p.
213.2008.
McBRIDE, A.J., ATHANAZIO, D.A., REIS, M.G.; KO, A.I. Leptospirosis. Curr.
Opin. Infect. Dis. n. 18, p. 376386, 2005.
McCUE, P. M. Modification on the Flush Procedure to Enhance Embryo
Recovery. Journal of Equine Veterinary Science, USA, v. 23, n.8, p. 336-337.
2003.
McKINNON, A.O., SQUIRES, E.L. Equine reproductive ultrasonography.
Colorado State University. Animal Reproduction Laboratory. 1988. P.37- 40.
(Bulletin n.4).
MOREIRA, E.C. Avaliao de mtodos para erradicao de leptospiroses em
bovinos leiteiros. Belo Horizonte, 1994. 110p. Tese (Doutorado) UFMG -
Escola de Veterinria.
MYERS, D.M. Serological Studies and Isolations of Serotype hardjo and
Leptospira biflexa Strains from Horses of Argentina. Journal of clinical
Microbiology, v.3, n6, p.548-555, 1976.

NAIMAN, B.M., ALT, D., BOLIN, C.A., ZUERNER, R. & BALDWIN, C.L.
Protective killed Leptospira borgpetersenii vaccine induces potent Th1 immunity
29

comprising responses by CD4 and gammadelta T lymphocytes. Infect. Immun.
n.69, v.12, p. 7550-7558, 2001.
NALLY, J.E., FISHBEIN, M.C., BLANCO, D.R.; LOVETT, M.A. Lethal infection
of C3H/HeJ and C3H/SCID mice with an isolate of Leptospira interrogans
serovar Copenhageni. Infect. Immun. v. 73, n. 10, p. 7014-7017, 2005.
NELSON, R. W.; COUTO, C. G. Doenas bacterianas polissistmicas. In:
Medicina interna de pequenos animais. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
cap. 100, p. 1221-1226, 2006.
NEWMAN, D.; DONAHUE, M. Equine Leptospirosis. Equine Disease Quartely,
v.16, n.3, 2007.

OGURI, N. & TSUTSUMI, Y. Nonsurgical recovery of equine eggs, and an
attempt at nonsurgical egg transfer in horses. J. Reprod. Fertil. 31:187-195,
1972.
OLIVEIRA, S.J; PIRES NETO, J.A.S. Aspecto etiolgicos e diagnstico nas
leptospiroses. Revista do Conselho Federal de Medicina Veterinria, v.10, p.36-
46, 2004.
PALMER, E., DRIANCOURT, M.A. Use of ultrasonic echography in equine
gynecology. Theriogenology, v.13, p.203-216, 1980.
PARMA, A. E.; SANTISTEBAN, C. G.; VILLALBA J. S., BORDEN; R.
A..Experimental demonstration of an antigenic relationship between Leptospira
and equine cornea. Vet. Imm. Immunopath.. Amsterdam, v. 10, p. 215-24,
1985.
PELLEGRIN, A.O; SILVA, R.A.M.S; RIBEIRO, S.C. Ocorrncia de aglutininas
anti-Leptospira em eqinos do Pantanal Mato-Grossense, sub-regio da
Nhecolndia. In: Congresso Brasileiro de Medicina Veterinria, Anais.... Olinda:
SPEMV, p.190, 1994.
PEROLAT, P., CHAPPEL, R.J., ADLER, B., BARANTON, G., BULACH, D.M.,
BILLINGHURST, M.L., LETOCART, M., MERIEN, F.; SERRANO, M.S.
Leptospira fainei sp. nov., isolated from pigs in Australia. Int. J. Syst. Bacteriol.
30

n. 48, p. 851-858, 1998.
PESCADOR, C.A; CORBELLINE, L.G; LORETTI, A.P; JUNIOR, E.W; FRANTZ,
F.J; DRIEMEIER, D. Aborto equino por Leptospira sp. Cincia rural, v.34, n.1,
p.271-274, 2004.
PINHEIRO, H.H; SILVEIRA, W; OLIVEIRA, V.C. Pesquisas de aglutininas
antileptospiras em soros equinos abatidos no frigorfico Xavante Araguari,
MG. A Hora Veterinria, v.5, n.27, p.42-44, 1985.
PINNA, M.H., VARGES, R., ABREU, R., LILENBAUM, W.; Outbreak of Equine
Leptospirosis by S. Bratislava. Online Journal of Veterinary Research, v.11, p.1-
4, 2007.
RADOSTITS, O. M; GAY, C. C; BLOOD, D. C; HINCHCLIFF, K. W. Um
tratado de doenas dos bovinos, ovinos, sunos, caprinos e equinos. 9. ed. Rio
de Janeiro, 2002, p. 874-887.
RAMOS, A.C.F., LILENBAUM, W. Fatores que influenciam na ocorrncia de
aglutininas anti-leptospira em sunos de criao tecnificada no Estado do Rio
de Janeiro. Revista Brasileira de Medicina Veterinria, Rio de Janeiro, v. 24,
n.2, p. 78-80, 2002.
RAMOS, A.C., SOUZA, G.N. & LILENBAUM, W. Influence of leptospirosis on
reproductive performance of sows in Brazil. Theriogenology, v.66, p1021-1025,
2006.
RISTOW, P.; BOURHY, P.; KERNEIS, S.; SCHMITT, C.; PRVOST, M.C.;
LILENBAUM, W.; PICARDEAU, M. Biofilm Formation by Saprophytic and
Pathogenic Leptospires. Microbio., may, n. 154, p. 1309-13017, 2008.
ROCHA FILHO, A. N.; PESSA, M. A.; GIOSO, M. M.; ALVARENGA, M .A.
Transfer of equine embryos into anovulatory recipients supplemented with short
or long acting progesterone. Animal Reproduction,v.1, n.1, p.91-95. 2004.
SAMAILLE, J.P. Leptospirose em eqinos: uma doena com mltiplas
conseqncias. A Hora Veterin., ano 21, n. 123, setembro/outubro, 2001.
31

SAMBROOK, J., FRITSCH, E.F., MANIATIS, T., 1989. Molecular Cloning: A
Laborator Manual. NewYork, Cold Spring HarborPress, 1989, 956 p.
SANTA ROSA,C.A., PESTANA DE CASTRO, A.F., TROISE,C. Isolamento de
Leptospira icterohaemorrhagiae de bovino em So Paulo. Arquivos do Instituto
Biolgico, v.28, p.113-118, 1961.
SANTA ROSA, C.A; CASTRO, A.F.P; CAMPEDELLI FILHO, O; MELLO, D.
Leptospirose em equinos. Arquivos do Instituto de Biologia, v.35, n.2, p.61-65, 1968.
SEBASTIAN, E. Leptospirosis. Journal of the American Veterinary Medical
Association. n. 205, p. 1518-1523, 1994.
SEBASTIAN, M.; GILES, R.; ROBERTS, J.; POONACHA, K.; L.HARRISON;
DONAHUE, J.; BENIRSCHKE, K.. Funisitis associated with leptospiral abortion
in an equine placenta. Vet Pathol, n. 42, p. 659-662, 2005.
SEIXAS, F.K., DA SILVA, E.F., HARTWIG, D.D., CERQUEIRA, G.M.,
AMARAL, M., FAGUNDES, M.Q., DOSSA, R.G. & DELLAGOSTIN, O.A..
Recombinant Mycobacterium bovis BCG expressing the LipL32 antigen of
Leptospira interrogans protects hamsters from challenge. Vaccine. n. 26, v.1, p.
88-95, 2007.
SERTICH, P. L. Transcervical Embryo Transfer in performance mares. JAVMA,
USA, v.195, p.940-944.1989.
SHIMIZU, T., E.; MATSUSAKA, K.; TAKAYANAGI, T.; MASUZAWA, Y.;
IWAMOTO, T.; MORITA, I.; YANAGIHARA, Y.. Biological activities of
lipopolysaccharide-like substance (LLS) extracted from Leptospira interrogans
serovar canicola strain Moulton. Microbiol. Immunol. n. 31, p.724735, 1987.
SIEGEL, S. Estatstica no paramtrica para as cincias do comportamento
So Paulo, Mc Graw Hill, 1975, 350p.

SILVA, E.F., MEDEIROS, M.A., MCBRIDE, A.J., MATSUNAGA, J., ESTEVES,
G.S., RAMOS, J.G., SANTOS, C.S., CRODA, J., HOMMA, A., DELLAGOSTIN,
O.A., HAAKE, D.A., REIS, M.G. & KO, A.I. The terminal portion of leptospiral
32

immunoglobulin-like protein LigA confers protective immunity against lethal
infection in the hamster model of leptospirosis. Vaccine. n. 25, v. 33, p. 6277-
6286, 2007.
SMITH,C.R., KETTERER,P.J., McGOWAN,M.R.,CORNEY,B.G. A review of
Laboratory techniques and their use in diagnosis of Leptospira interrogans
serovar hardjo infection in cattle. Australian Veterinary Journal, v.71, n.9,
p.290-294, 1994.
SOUZA, G.N., BRITO, J.R.F., BASTOS, R.R., RUBIALE, L. Avaliao de
associaes e similaridades em epidemiologia veterinria por meio da anlise
de correspondncia. Arq Bras Med Vet Zootec, 2002; 54:539-42.

SQUIRES, E. L.; IMEL, K. J.; IULIANO, M. F.; SHIDELER, R. K. Factors
affecting reproductive efficiency in an equine embryo transfer programme. J.
Reprod. Fertil. Suppl., England, v.32, p. 409-414, 1982.
SQUIRES, E. L; GARCIA,R.H.; GINTHER, O.J. Factors affecting success of
equine embryo transfer. Equine Vet. J., (suppl.3), p.92-95, 1985.
SQUIRES, E. L.; MCKINNON, A. O., SHIDELER, R. K. Use of Ultrasonography
in Reproductive Management of Mares. Theriogenology, USA, v.29, n.1, p. 55-
70. 1988.
SQUIRES, E.L. & SEIDEL, G.E. Collection and transfer of equine embryos.
Animal Reproduction Biotechnology Laboratory Bulletin. Colorado State
University, Fort Collins. p.397.1995.
SQUIRES, E.L.; MCCUE, P. M.; VANDERWALL, D. The Current Status of
Equine Embryo Transfer. Theriogenology, USA, v. 51, n. 1, p. 91-104. 1999.
SQUIRES, E. L.; CARNEVALE, E. M.; McCUE, P. M.; BRUEMMER, J. E.
Embryo technologies in the horse. Theriogenology, USA, v.59, n. 1, p. 151-170.
2003.
STODDARD, R. A.; GEE, J.E.; WILKINS, P.P.; McCAUSTLAND, K.;
HOFFMASTER, A.R. Detection of pathogenic Leptospira spp. Through TaqMan
polymerase chain reaction targeting the LipL32 gene. Diagnostic Microbiology
33

and Infectious Disease. v.64, p.247-255, 2009.
SZEREDI, L.; HAAKE, D.A. Immunohistochemical Identification and Pathologic
Findings in Natural Cases of Equine Abortion Caused by Leptospiral Infection.
Vet. Pathol.v.43, p.755-761, 2006.

TAVEIROS, A. W.; OLIVEIRA, M. A. L.; LIMA, P. F.; TENRIO FILHO, F.;
BARTOLOMEU, C. C.; SANTOS, M. H. B.; OLIVEIRA, L.R.S. IUNES-SOUZA,
T. C.; FREITAS, J. C. C. Ultrasonographic monitoring of 103 Recipient Mares of
Different Reproductive Status During the first 30 days after embryo transfers.
The Veterinary Record, England, v.1, p. 558-560. 2003.
TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Doenas microbianas dos
sistemas urinrio e reprodutor. In________. Microbiologia. 6. ed. So Paulo:
Artmed, 2003. cap. 26, p. 692-712.
TROEDSSON, M.H.T. Abortion. In: ROBINSON, N.E. Current Therapy in
Equine Medicine 4, Philadelphia: Saundres, 1997, p.534 - 41.
TROEDSSON, M.H.T. Placentitis. In: ROBINSON, N.E. Current Therapy in
Equine Medicine 5, Philadelphia: Saundres, 2003, p.297 - 300.

TRUEBA, G., ZAPATA, S., MADRID, K., CULLEN, P.; HAAKE, D. Cell
aggregation: a mechanism of pathogenic Leptospira to survive in fresh water.
Int. Microbiol. n. 7, p. 35-40, 2004.

VAN DEN INGH, T.S; HARTMAN, E.G; BERCOVICH, Z. Clinical Leptospira
interrogans serogroup Australis serovar Lora infection in a stud farm in The
Netherlands, Vet Q, v.11, p.175,1989.

VANDERWALL, D.K. Early embryonic loss in the mare. J. Eq.Vet. Sci. 28:691-
702, 2008.

VASCONCELLOS, S.A. Leptospirose em animais domsticos e silvestres
preveno e controle. Oficina Estado da Arte e Prioridades para P&D em
34

Leptospirose/FIOCRUZ. Salvador.2000.

VEMULAPALLI, R.; LANGOHR, I.M.; SANCHEZ, A.; KIUPEL, M.; BOLIN, C.;
WU, C.C.; LIN,T.L. Molecular detection of Leptospira kirschneri in tissues of a
prematurely born foal. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, v.17, p.67-
71, 2005.

YANG, H.L., JIANG, X.C., ZHANG, X.Y., LI, W.J., HU, B.Y., ZHAO, G.P.; GUO,
X.K. Thrombocytopenia in the experimental leptospirosis of guea pig is not
related to disseminated intravascular coagulation. BMC Infect. Dis. v. 2, n. 6, p.
19-27, 2006.
YASUDA,P.H.; SULZER, C.R.; GIORGI, W.; SOARES, M.E.G. Leptospira
Biflexa sorotipo Ranarum isolado de feto abortado de eqino. Rev. Microbiol.,
v.17(1), p.25-27, 1986.
WILLIAMS, R.D. The presence and duration of persistence of Leptospira
pomona in equine ocular tissues following experimentally induced systemic
infection. M.S. Thesis, Purdue University, Lafayette, Ind., 1968.
WILSON, J. M; ROWLEY, M. B.; ROWLEY, W. K.; SMITH, H. A.; WEBB, R. L.;
TOLLESON, D. R. Successful non-surgical transfer of equine embryos to post-
partum lactating mares. Theriogenology, USA, v.27, n. 1, p. 295, 1987.
WOODS, G.L., BAKER, C.B., BALDWIN, J.L., et al. Early pregnancy loss in
broodmares. Journal of Reproduction and Fertility, Suppl. 35, p.455-459, 1987.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. Human leptospirosis: guidance for
diagnosis, surveillance and control. Genebra, 2003.

35

9 ANEXO

FICHA INDIVIDUAL

Ficha nmero:
Nome da propriedade:
Endereo: Municpio: Estado:
Proprietrio : Telefone :
Mdico Veterinrio : Telefone :

1- NOME DO ANIMAL:
2- IDADE:
3 - CLASSIFICAO (DOADORA OU RECEPTORA):
4 - HISTRICO E ANAMNESE:

5 - EXAME CLNICO GERAL:
Comportamento/ atitude:
Estado nutricional:
Apetite:
Pelagem:
Presena de ectoparasitos:
Classificao das mucosas:
Turgor cutneo:
36

Retrao de globo ocular:
Palpao dos linfonodos:
Temperatura corporal:
Pulso:
Tempo de preenchimento capilar:
Ausculta cardaca:
Ausculta digestiva:
Ausculta pulmonar:

6- EXAME CLNICO REPRODUTIVO:
Inspeo da genitlia externa:
Palpao retal:
Ultrassonografia do aparelho reprodutivo interno:

7- NDICE DE RECUPERAO EMBRIONRIA:
8- NDICE DE MORTE EMBRIONRIA PRECOCE :
9- NDICE DE ABORTAMENTO:
10- NDICE DE MORTE PERINATAL:

Estudo Sorológico, Bacteriológico e Molecular Da Leptospirose

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