INSTRUMENTACIN

Centrifugacin
OBJETIVOS
Conocer los fundamentos e importancia de la
instrumentacin en Bioqumica.

Conocer el funcionamiento y uso de la Centrfuga
en Bioqumica.


Instrumentacin es el uso y aplicacin de
instrumentos o equipos de laboratorio para anlisis
cuantitativo o cualitativo de sustancias.
Estos equipos sirven como herramientas auxiliares
para identificar y cuantificar algunos indicadores
bioqumicos en la determinacin de enfermedades y
aplicacin de medicamentos.
Tenemos por ejemplo: La centrfuga, el
espectrofotmetro, el potencimetro, etc.

INSTRUMENTACIN
Ejemplos de Instrumentos Analticos
Balanza
pHmetro
Refractmetro
Espectrofotmetro
AA
IR
CENTRIFUGACIN
La centrifugacin es un mtodo que utiliza la
propiedad de sedimentacin de partculas para la
separacin de stas de una solucin, ya que una vez
obtenido el lisado u homogenizado celular se ha de
proceder a su fraccionamiento.
La centrifugacin se basa en la rotacin de un objeto
alrededor de un eje central el cual genera una fuerza
centrfuga sobre el objeto.
Se aplica al anlisis o a la separacin de mezclas de
partculas, clulas, orgnulos o molculas.
CENTRIFUGACIN
Las centrfugas son instrumentos que permiten someter
a las muestras a intensas fuerzas que producen la
sedimentacin en poco tiempo de las partculas que
tienen una densidad mayor que la del medio que las
rodea.
En una centrfuga el elemento determinante es el rotor,
dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos.
Existen varios tipos: Rotores basculantes o flotantes y
rotor de ngulo fijo.
Todo rotor tiene unas propiedades que determinan las
condiciones en que se podr centrifugar la muestra. Son
especialmente importantes el ngulo de giro, el radio
mnimo, medio y mximo, y la velocidad mxima de giro.

Tipos de rotores en centrfugas
Rotor de ngulo fijo
Rotor basculante o flotante
Cuando se centrifuga una solucin o
suspensin hay que considerar dos fuerzas
que se oponen a la sedimentacin de las
molculas o partculas suspendidas:
El empuje hacia arriba que sufren al
desplazar las molculas del soluto y
La friccin que se genera cuando se mueve a
travs del soluto.
CENTRIFUGACIN
Caractersticas de las centrfugas
Alcanzan velocidades entre 5000 y 16 000
rpm.
Ultracentrfugas son refrigeradas y al vaco,
alcanzando hasta 500 000 g.
Capacidad de separacin de partculas se
mide con el nomograma de Dole y Cotziar.
Determinacin
de capacidad de
separacin.
Ecuacin de equivalencias:
Fcr : 1118 x 10
-8
x r x (rpm)
2
Nomograma para el clculo de la
fuerza centrfuga relativa (fcr),
segn IEC
IEC: Comit Internacional Electrotcnico
CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL

La centrifugacin diferencial se basa en la existencia de diferentes
partculas en la suspensin que difieren en su densidad de la del medio. Si se
centrifuga en condiciones suaves (poco tiempo, poco fuerza de aceleracin)
sedimentarn las partculas mayores y/o ms densas. Se usa en clnica para
separar sedimentos de orina o componentes del plasma.


CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL
La centrifugacin zonal aprovecha el tamao y
la masa de las partculas en lugar de su
densidad para la sedimentacin.
Por ejemplo, las densidades de los anticuerpos
son muy similares, pero las masas son
distintas. As es que la separacin en base a la
masa separa las distintas clases, mientras que
la que se hace en base a la densidad no
identifica estas clases de anticuerpos.
CENTRIFUGACIN ZONAL
EXPERIENCIA
Aislamiento de fraccin de mitocondrias

Se usarn hgados, riones o corazones de pollo, rganos que se
guardarn congelados. Cortar los rganos en pequeos trozos y colocarlos
en un mortero.
Agregar aproximadamente un gramo de arena y 5 mL de buffer fosfato de
sodio pH 7,0.
Moler hasta obtener una pasta fina y agregar otros 5 mL. de buffer fosfato.
Dejar esta mezcla a la temperatura ambiente por unos 15 minutos,
revolviendo de vez en cuando para destruir substratos endgenos.
Vaciar el contenido a un tubo de centrifuga y centrifugar a baja velocidad
(600g) durante unos 10 minutos para sedimentar la arena, ncleos y
clulas enteras que haya quedado sin destruir. Conservar en hielo el
sobrenadante.
Centrifugar el sobrenadante a 4000g x 15 minutos. Separar el
sobrenadante y resuspender el pellet en 1 ml de buffer fosfato. Es en esta
suspensin donde se encuentran las mitocondrias.


3000 rpm
7000 rpm
BIBLIOGRAFA
Freifelder, D.(2003). Tcnicas de bioqumica y
biologa molecular. Revert. Cap. 11.
Mathews, C.K. y Van Holde, K.E. (2008).
Bioqumica. 5 Edicin.McGraw-Hill.
Interamericana. p 165-166.
Luque,J y Herrez, A (2001).Texto ilustrado de
biologa molecular e ingeniera
gentica.Harcourt. p 122-125 ; 136-137.
CUESTIONARIO
1.-Investigue como se clasifica la centrifugacin
segn la velocidad y segn el propsito para la
que se emplea.
2.-Escriba 02 diferencias entre la centrifugacin
diferencial y la centrifugacin zonal.
3.-Cul es el nmero de ges alcanzado en un
rotor de centrfuga de 6.5 cm de radio, que
gira a una velocidad de 15000 rpm?