Las cartillas que se usaron para amplificar el gene de la lectina de la semilla de soja han sido publicadas

(Meyer y lo dems. 1996). La soja del esumen eady cartillas espec!ficas en frijol estu"iera en parte
reci#n dise$ada y en parte deri"ati"a de %ur& y %illmund (199'). Las secuencias de las cartillas
apro"echadas y su origen es mostrado en mesa 1. Las cartillas fueron obtenidas de (ecnolog!as de )ida
(*reda+ Los ,a!ses *ajos) y fueron entregado desalado y desprotegido. -l ,. acondiciona acostumbrado
fue/ 0.1 el milimol Mg.l0+ 0 unidades de 2345polimerasa 2mplitaq+ 1 amortiguador de la 6 ,. (todo
suministr7 por ,er8in -lmer+ 4or9al8+ .onnecticut) y 011 milimol d4(,s (la :en#tica .ombinatoria de
la ,harmacia+ ;ppsala+ <uecia) en un "olumen total de 01 ul. La concentraci7n de las cartillas del gene de
la lectina de la soja en la reacci7n fue 1.= uM y de las cartillas espec!ficas en la construcci7n 1 >yM. ,ara
el ,. 1 para 0ul del 234 aislado de 01 la harina de soja del mg o los productos deri"ados en soja fue
usada. -n cada muestras tres e6perimentales de control fue incluido/ 4ing?n 234 (el espacio en blanco)+
ning?n 234 poco transg#nico (niegue control) de la soja y ning?n esumen 2listan 234 de la soja (el
control positi"o). -l primer asalto de ,. fue reali&ada ciclos @1 directos+ el segundo alrededor de ciclos
01 directos+ todo en un ,(. 011 (M. A. Bn"estigue al pueblo de <.2.+ de 2gua+ Massachusetts). ,ara todas
las combinaciones de la cartilla el siguiente programa de mano fue aplicado/ C minutos en 9C D . (la
desnaturali&aci7n)+ seguido por ciclos de @1 segundos en 9C D . (la desnaturali&aci7n)+ =C segundos en CE
D . (la cartilla endureciendo por calor) y @1 segundos en '0 D . (la elongaci7n). Finalmente un paso
adicional de elongaci7n de C minutos en '0 D . fue representado. -l producto inicial ,. fue diluido de
0C pliegues con G0H y = (6l fue usado en el segundo ,.. Los productos ,. fueron anali&ados por
medio de la electrof7resis del gel de agarosa (<ambroo8 y lo dems. 19E9). ;na escalera de 111 (las
(ecnolog!as de )ida) pares de bases fue utili&ada como marcador de peso molecular. -l 234 fue
"isuali&ado manchando con bromuro del ethidium en un transesclarecedor de la radiaci7n ultra"ioleta (@10
nm) y el resultado se grab7 por una cmara fotogrfica del dispositi"o de carga acoplada (la .orporaci7n
B<B111 3igital de <istema de ,rocesamiento de Bmgenes+ 2lpha Bnnotech+ <an Leandro+ .2).
-l m#todo de detecci7n desarrollado es un m#todo anidado ,.. .on ,.+ un fragmento espec!fico de
234 puede estar rpidamente amplificado para anlisis. -l elegido de cartillas determina el fragmento
para estar amplificada y
por all! la especificidad del m#todo. ,ues el m#todo de detecci7n+ dos sets de cartillas ha sido seleccionado
eso cru&a la secuencia del promotor de @C< y la secuencia .(,. -sta elecci7n es hecha porque es poco
probable que un .aM) y una secuencia de la petunia naturalmente e6isten juntos en semilla de soja o en
organismos que contaminan soja. -n el m#todo anidado ,. primero una combinaci7n e6terior de la
cartilla es usada y en ese entonces la reacci7n es reali&ada con una combinaci7n interior de la cartilla.
-stime 0 espectculos el principio del ,. anidado esquemticamente. -ste acercamiento de dos pasos
mejora la selecti"idad y la sensibilidad de la reacci7n. .omo un control para la presencia de 234 de la
semilla de soja un en segundo lugar ,. anidado es aplicado que eso espec!ficamente aumenta el gene de
la lectina de la semilla de soja (Meyer y lo dems. 1996). Los fragmentos a estar amplificados+ los
amplicons+ es relati"amente peque$o y por consiguiente las oportunidades de detectar las secuencias
espec!ficas en productos elaborados donde el 234 apartado puede ser degradado es aumentado. -l
m#todo final de detecci7n por consiguiente consiste en un acercamiento de dos hileras/ ,rimer+ ms
deri"ado en soja el 234 est presente en la muestra y en segundo lugar+ I es la construcci7n transg#nica
detectadaJ <7lo en esos casos d7nde ambas preguntas hacen que las respuestas positi"as poder est#
concluido que las muestras e6aminadas contienen soja transg#nica del Resumen Ready