Material e mtodos

1- Locais de coleta
A coleta de solo de rizosfera de plantas da caatinga de diversos pontos da regio
de caatinga Quixeramobim, Pacajus, Potiretama, Tibau, Itatira, Serra do mel e Sul do
Piau, entre as plantas !omaru "Amburana cearensis# $ororo "Bauhinia cheilantha
"%ong&# Steud&#, catingueira "Caesalpinia pyramidalis Tul&#, Angico "Anadenanthera
colubrina "'ell&# %renan#, faveleiro "Cnidosculos phyllacanthus, Pax e (a )offman#,
pin*o manso "Jatropha phyllacantha, $ussel#, Arueira "$+racrodruon urundeuva#,
'elane "Croton heliotropiifolius#, ,eij- "Cordia trichotoma#, .uazeiro "Zizyphus
Joazeiro#, Pereiro "Aspidosperma pyrifolium#, !atanduva "Mimosa arenosa#, /spin*eiro
"Senegalia polyphylla#, Angi0uin*o "Pityrocarpa moniliformis#, oiticica "licania rigida,
%ent*, Pleuragina umbrosissima, A& !am#, Quixabeira "Siderox+lon 1btusifolium
Penn#,etc& 2os arbustos citaremos o mofumbo "Combretum Leprosum, $art&#, ,eijo3
bravo "Crateva tapia# e marmeleiro "Crton hemiargyreus, $uell# entre as cact4cea,
mandacaru !Cereu Jamacaru 2&!&# e ,ac*eiro "Pilosocereus pachycladus# a coleta ser4
realizada retirando regio do solo onde apresente as razes solo de tr5s pontos por
plantas e mistura tr5s totalizando o peso de 677 gramas colocados em saco plastico logo
em seguida ser4 acondicionado em caixa de isopor com gelo ate c*egar no laborat-rio
de patologia pos3col*eita o solo ser4 realizado o peneiramento a secagem ao ar por 89
*oras em seguida colocados e saco plasticos e armazenados na geladeira a temperatura
de 9:!&
Tratamento do solo rizosferico e isolamento
1 solo sero pr;3tratadas com carbonato de c4lcio a 6< no solo e incubado em
c=mara >mida por 67 dias com umidade ?7 < em seguida sero secadas ao ar por um
perodo de 89 *oras, o inicio da dilui@o ser4 pesado 67 g do solo seco e acrescido em
A7 ml de solu@o salina a 7,?B< Ca!l "mDv# misturado e s*aEer por 6 *oras e logo em
seguida ser4 realizado as al0uotas adicionando 6,7 ml da solu@o base em A,7 ml de
solu@o salina 7,?B< Ca!l "vDv# dilui@o seriada, sero utilizado as al0uotas 67
39
e 67
3B
com duas repeti@Fes por dilui@o& Para o isolamento de actinobact;rias da rizosfera ser4
em $eio GaEsman "glucose, 67,7 gH peptone, B,7 gH ()
8
P1
9
, 6,7 gH $gS19 & I)
8
1, 7,B
gH Agar, 6B,7 gH 4gua destilada 6777 mJ#, 677 KJ da dilui@o ser4 inserido nas placas e
espal*ada com uma al@a de drigalsEi sobre o meio de cultivo previamente solidificado
"Antunes, 1995)& as placas sero incubadas a 8?
o
! por 67 dias ser4 realizada a
contagem das L,! "Lnidade ,ormadora de !olMnias# actinobact;rias por solo da
rizosfera "NNNNNNNN#&
Seleo antagonista dos actinomycetes contra fungo Colletotrichum musae
Para avaliar o efeito das actinobact;rias da rizosfera de plantas de caatinga sobre fungos
Colletotrichum musae ser4 realizado teste de contato direto, medindo3se o *alo de
inibi@o entre o pat-geno e o microrganismo teste& Primeiramente cada actinobact;ria
ser4 inoculada a 87 mm da extremidade da placa de petri de A7 mm contendo meio
batata dextrose 4gar "%2A# e incubada por tr5s dias para permitir a sua esporula@o,
pois a forma@o dos metab-litos secund4rios est4 relacionada com a forma@o de *ifas e
esporos "!)AT/OH )1OIC1L!)I, 877PH /JJI1TH TAJ%1T, 8779#& Ap-s este
perodo, o seguinte organismo ser4 cultivado Colletotrichum musae a uma dist=ncia de
B7 mm das lin*agens isoladas das actinobact;rias& As placas sero seladas com para
filme e incubadas em estufa a 8? :!& por um perodo ? dias&
Obteno de metablitos secundrio orgnico e a!uoso
As lin*agens sero cultivadas em caldo !zapeE dox "sacarose P7 gH CaC1
P
PgH (
8
P1
9
6gH $gS1
9
7,B gH ,eS1
9
7,B gH (!l 7,B gH 6777ml agua destilada# sob agita@o a 6I7
rpm a 8? Q! durante 6R? *oras& Ap-s esse perodo de incuba@o, 877 mJ do meio
mineral l0uido modificado contendo as lin*agens ser4 filtradas a v4cuo com filtro de
nitrocelulose de 7,88 Km& Para a extra@o ser4 utilizado o solvente org=nico acetato de
etila "6DP do volume total# para extrair os metab-litos secund4rios, em funil de
separa@o& /sse processo foi repetido tr5s vezes& As fases org=nicas sero reunidas e
secas com sulfato de s-dio anidro "reagente 0ue absorve mol;cula de 4gua#& Ap-s a
filtra@o e evapora@o do solvente em evaporador rotat-rio, obtiveram3se os extratos
org=nicos ser4 armazenada na geladeira, fase li0uida ser4 liofilizada diluda em agua
esteril, os produtos sero pesados e diludos em uma concentra@o de P7 mgDml 0ue ser4
utilizado nos experimentos posteriores "$/J1 e SAC)L/SA, 877?#&
Teste de bioati"idade dos metabolitos bruto ao fungo colletotric#um musae
1 fungo ser4 repicado em placas de petri como objetivo de obter suspenso de esporos
de 6 N673R esporos por ml, os metabolitos bruto obtidos anteriormente sero testados
sua atividade anfifungica pelo teste de disco de papel embebido contendo o metabolito
bruto sobre a suspenso de esporo espal*ada anteriormente a coloca@o do disco,
inserido 677KJ da suspen@o e espal*ada com uma al@a de drigalsEi, as placas serao
incubadas por 67 dias a temperatura de 87:!, no final desse perodo ser4 avaliado como
metabolicamente ativo os 0ue produzirem *alo de inibi@o "3# sem forma forma@o de
*alo "T# pouco forma@o do *alo e "U# forma@o do *alo muito presente&