INFORME:

Recuento de Plaquetas
y Reticulocitos
Mtodo Directo e Indirecto

ALUMNO: ARANGO REYNAGA, Juan Carlos


UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN
MARCOS
Facultad de Farmacia y Bioqumica
E.A.P. Farmacia y Bioqumica
19 de Abril del 2012
Curso: Anlisis Clnicos
Semestre acadmico: 2012-I
Profesor: Dr. Juan Parreo Tipian
Da de Prctica: Jueves 10.00 -14.00 Hrs.
Departamento Acadmico de Bioqumica


PARTE EXPERIMENTAL
Objetivo de la prctica
Realizar el recuento de plaquetas y reticulocitos.
Reactivos
Reactivo de Rees-Ecker.
Sulfato de magnesio 14%.
Colorante de Wright.
Citrato de cresil.
Materiales y Equipos
Pipeta de THOMA.
Retculo de THOMA.
Microscopio.
Cmara de Neubauer.
Procedimiento de Mtodo Directo de Recuento de Plaquetas

Tomar 0.5L de sangre
Completar hasta 101 L con el lquido diluyente (Azul
brillante de cresil).
Reposar dos minutos y depositar en el retculo de
THOMA.
Realizar el conteo.

Ecuacin:

Nx D x FC = plaqueta/mm
3

N: Nmero de plaquetas contados.
D: Ttulo de dilucin realizada (200).
FC: Factor de correccin de la profundidad para llevar a 1mm
3
(10).
N x 10 x 200 = plaquetas/mm
3



Procedimiento de Mtodo Indirecto de Recuento de Plaquetas

Agregar una gota de Mg2SO4 en el dedo indicado.
Realizar una puncin en el dedo con el Mg2SO4.
Mezclar la sangre junto al Mg2SO4 en el dedo.
Realizar un frotis.
Agregar colorante de Wright.
Identificar a los glbulos rojos, leucocitos y plaquetas por las distintas coloraciones resultantes.
Realizar el conteo de plaquetas.

N: Nmero de plaquetas contados.
H: Hematimetra.
Procedimiento de Mtodo Indirecto de Recuento de Reticulocitos

Realizar una puncin en el dedo indicado
Agregar dos gotas de sangre a un tubo de ensayo.
Agregar dos gotas de azul brillante de cresillo.
Realizar un frotis.
Agregar colorante de Wright.
Realizar el conteo de reticulocitos.

CUESTIONARIO

1. Fundamento del recuerdo de plaquetas por el mtodo indirecto o mtodo directo.
Mtodo Directo (en cmara). Se basa en evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para
lo cual se diluye una muestra de sangre con una sustancia con un lquido diluyente (Reactivo de Rees
Ecker) que hace a las plaquetas ms visibles para un recuento de plaquetas en una cmara de conteo
microscpico (cmara de Neubauer).
Mtodo Indirecto. Se fundamenta en la relacin proporcional entre plaquetas y eritrocitos en un
extendido de sangre coloreada. Las muestras de sangre obtenidas directamente mediante la puncin de la
yema del dedo se diluyen con un liquito anticoagulante que simultneamente tie las plaquetas. Luego se


determina microscpicamente la relacin de plaquetas/eritrocitos y se calcula el nmero de plaquetas a
partir del recuento de globulos rojos predeterminado (normal: de 3-8 plaquetas/100 glbulos rojos)
Significado clnico. Valor de referencia: 150.000-450.000 plaquetas/mm
3
.
2. Composicin qumica del reactivo de Rees Ecker

Rees Ecker Composicin
Azul brillante de Cresillo R.A. 1 g/L
Sodio Citrato R.A. 38 g/L
Formol neutro 22 mL
Agua desmineralizada tipo II 978 mL

3. En qu casos se produce trombopenia y trombocitosis?
Trombopenia, Trombocitopenia o Plaquetopenia. Es la disminucin de plaquetas por debajo de 130
000/mm
3
.
Causas.
Disminucion de la trombopoyesis: pancitopenia, anemia mieloctica.
Trombopeyesis eficaz: Trombopenias hereditarias, hemoglobiniuria paroxstica nocturna. Dficit de
acido flico o vitamina B12.
Aumento de la destruccin de las plaquetas: Prpura Trombocitopenia Idioptica, Prpura
Trombocitopenia Trombocitopnica, hiperesplenismo, Sepsis bacteriana, Coagulacin intravascular
diseminada.
Trombocitosis. Aumento de la concentracin de plaquetas por encima de 450 000/mm
3
.
Causas.
PRIMARIAS: Trombocitemia esencial u otros sndromes mieloproliferativos.
SECUNDARIOS: Esplenectoma, Infecciones que cursan una formacin de depsitos purulentos,
Enfermedad de Crohn, Colitis ulcerosa, Neoplasias malignas.

4. Cmo se explica el comportamiento de las plaquetas en la Prpura Trombocitopenia
Idioptica?

La Prpura Trombocitopnica Idioptica es una enfermedad hemorrgica autoinmune causada por
defecto en el numero de plaquetas circulantes en la sangre (menos de 50 000 mm
3
). Ocurre en unos 5
casos por cada 100 000 nacidos vivos menores de 15 aos. Su denominacin prpura es debida a los
hematomas (equimosis) en la piel caracterstica de la enfermedad, tromboticopenia significa una
cantidad de plaquetas por debajo del valor normal, e idioptica porque su etiologa es desconocida.






5. Fundamento del recuento de reticulocitos.

Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen restos de rRNA (cido ribonucleico
ribosomal). Cuando son sometidos a colorantes llamados supravitales, como el azul de cresilo brillante,
ste precipita sobre los restos de rRNA permitiendo observarlo en forma de cuentas de rosario, que los
eritrocitos maduros no contienen. Este recuento permite evaluar la actividad eritropoytica de la mdula
sea, se hace utilizando tinciones supravitales

6. Mtodos que existen para el recuento de retitulocitos.

En los extendidos de sangre preparados con los mtodos de Wirght, de Giemsa o de Romanowsky,
un punteado basfilo de los eritrocitos se ve en la intoxicacin con plomo. Este fenmeno no debe
confundirse con la tincin del basfilo del reticulocito la cual solo se detecta con procedimientos
supravitales (mezcla de colorantes con sangre fresca antes de la preparacin de un extendido de sangre
secado al aire). Los filamentos granulares observados o el de la coagulacin endoplasmtica por el efecto
de los coloraste lipfilos utilizados en los procedimientos supravitales. Los reticulocitos se cuentan en
forma manual media la tincin supravital de sangre fresca con una solucin de colorante anticoagulante.

El mtodo de expresin habitual es:

El recuento de reticulocitos corregidos para poder determinar con una mayor precisin clnica el grado
de anemia se calcula expresando el porcentaje de reticulocitos por L de sangre total.





Los mtodos de recuento indirectos se basan en la preparacin de una pelcula delgada de la mezcla
sangre-colorante en un portaobjeto utilizando la tcnica de Wright como tincin y los reticulocitos se
cuentan en proporcin a un recuerto de eritrocidos predeterminado. En los procedimientos directos los
reticulocitos se cuantifican en pelculas humedas sintincion. Los colorantes apropiados son el azul
brillante de cresilo, el azul de metilo y el verde Jano. Estos mtodos estn sujertos a un alto margen de
error en el conteo.
El anlisis por citrometra de flujo usando la tincin fluorescente de RNA aumenta significativamente
la precisin y la exactitud del recuento de reticulocitos. Sistemas de conteo especficos, como el
analizado de reticulocitos Sysmex R-3000 (TOA Medical Instruments), permite evaluar cientos de miles de
clulas que duran un ciclo de conteo de 45 segundos y subclasificar los reticulocitos segn la edad.


[Un aumento en el nmero de reticulocitos es un ndice de hematopoyesis acelerada y se observa en la
hemorragia aguda o en el tratamiento adecuado de la anemia ferropnica o de la anemia perniciosa. En
los casos de prdida de sangre crnica o depresin de la medula sea se observa una disminucin de la
cantidad de reticulocitos].


BIBLIOGRAFA
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColorantePlaquetasReesEckerv2.pdf
http://es.scribd.com/doc/49575164/62/Conteo-plaquetario
http://books.google.com.pe/books?id=Av4IIsyH-
qcC&pg=PA649&dq=recuento+de+plaquetas&hl=es&sa=X&ei=cCeKT9vSNsS3tweX4LnOCQ&ved=0CEIQ6
AEwAzgK#v=onepage&q=recuento%20de%20plaquetas&f=false
http://es.scribd.com/doc/44262123/Manual-Hema-Practicas-Lety-Incluidas
http://es.scribd.com/doc/82620149/28/RECUENTO-DE-PLAQUETAS-Metodo-directo-en-camara
http://es.scribd.com/doc/8551328/RECUENTO-DE-RETICULOCITOS