DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES.

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES POR LATCNICA DE MILLER

(DNS).
Bibin L. M. E., Rojas R. M. A.
Resumen
Los azcares reductores poseer un grupo carbonilo libre formando un grupo hemiacetalque le
confiere la caracterstica de poder reaccionar con otros compuestos. Ladeterminacin de estos
azcares se realiz con el objeto de obtener una curva de calibracinaplicando la tcnica de Miller
o DNS (cido dinitrosaliclico), reactivo que tiene lacapacidad de oxidar a los azcares reductores
dando resultados colorimtricos que se pueden medir con una longitud de onda de 575nm.
Palabras clave: carbohidratos, azucares reductores. Abreviaturas empleadas: DNS,
cidodinitrosaliclico
.
Introduccin
Los carbohidratos son molculasformadas por carbono, hidrogeno yoxgeno. Todos los
carbohidratos sonazucares pequeos, solubles en agua(glucosa y fructosa, por ejemplo) o bien
cadenas, como el almidn y lacelulosa, que se elaboran enlazandosubunidades de azcar.
Audesirk, Audesirk, & Byers, 2003)
En la naturaleza, los carbohidratos se presentan como monosacridos(azucares simples),
oligosacridos(contienen de dos a diez unidadesmonosacridas) y polisacridos(glcidos
polimricos ms grandes).Los monosacridos se clasifican enaldosas si tienen grupo aldehdo
ycetosas si tienen un grupo cetona.Todos los monosacridos, aldosas ocetosas y la mayora de
losdisacridos son azucares reductores(excepto la sacarosa) porque uno desus dos carbonos
anomricos no estformando enlace glucosdico.
Berg,Stryer, & Tymoczko, 2008)
Las pruebas de Fehling y de Benedict, por ejemplo, se basan en la capacidadde los azucares
reductores de reducir los iones cpricos (Cu
2+) y aportan unensayo sencillo para reconocer azucares que pueden existir comoaldehdo o
cetona libre. Los azucaresque reaccionan se llaman azucaresreductores, que pueden unirse
deforma inespecfica a otras molculas;los que no lo hacen, azucares noreductores.
(
Armstrong & Bennet,1982)

El mtodo DNS es una tcnicacolorimtrica que emplea 3,5-cidodinitrosaliclico para la hidrlisis
de polisacridos presentes en unamuestra, seguido de la determinacinespectrofotomtrica a
540nm de losazcares reductores.
Esta tcnica sirve para cuantificar los azucaresreductores producidos durante unafermentacin o
para cuantificar los productos de una reaccin enzimtica.Por lo tanto, se aplicar esta
tcnica para la construccin de una curva patrn de glucosa que ser unareferencia para prximos
experimentos. 1. OBJETO

El presente procedimiento, es utilizado para la determinacin cuantitativa de azucares
reductores mediante el mtodo del cido 3,5- Dinitrosaliclico. El presente mtodo es
determinante para la mejora gentica en diferentes vegetales.

2. CAMPO DE APLICACIN.

Se emplea para todo material vegetal cuyo empleo no sea habitual como mtodo del
control de variedades de germoplasma...


3. PRINCIPIO Y MTODO.

Se trata de determinar el contenido de azucares reductores, estableciendo como mximo
permitido un porcentaje de azucares reductores del 0.1-0.2%. Dicho contenido se calcula
utilizando la frmula 1.

El mtodo a seguir es el siguiente:

Se prepara disolucin de cido dinitrosalicilico, diluyendo 4.8 g de NaOH en 60 ml de
agua destilada. A esta disolucin se le aaden 3 g de cido dinitrosalicilico y 150 ml de
agua destilada. Se diluye totalmente y se aaden 90 g de Sal de Rochelle, enrasando a
un volumen total de 300 ml.
Posteriormente, se recogen 3 o 4 patatas por variedad y se machacan con un picador.
Se cogen 0,3 g de la patata picada diluyndolos en 1 ml de agua destilada en un tubo de
ensayo.
Posteriormente se adicionan en el tubo 2 ml de la disolucin de cido dinitrosalicilico
preparada anteriormente. Se prepara tambin, el blanco para el espectrofotmetro en un
tubo 1 ml de agua destilada y 2ml de cido dinitrosalicilico.
Se meten las muestras y el blanco al bao mara durante 5 minutos.
Posteriormente se meten a un bao de agua fra durante 2 minutos agitando y 10
minutos ms dejando reposar.
Se diluyen las muestras y el blanco cogiendo 1ml y diluyendo en 5 ml de agua destilada.
Se introduce en el espectrofotmetro el blanco y se mide a la longitud de onda de 546
nm. Por ltimo, se procede a la medida de las muestras a la misma longitud de onda.