INFORME DE LABORATORIO

PRACTICA N 2 HIDROLISIS DE POLISACARIDOS

TUTOR: MIGUEL DELGADO




Bogot noviembre 20 de 2008





HIDRLISIS DE POLISACARIDOS


OBJETIVOS:

Determinar la cantidad de azcar reductor que puede encontrarse en una solucin
de almidn utilizando 3,5 dinitrosalicilato de sodio.
Reconocer la hidrlisis de polisacridos en la solucin de almidn cuando esta
cambia de cambia de color.
realizar la medicin de espectrofotomtricamente.
















MARCO TEORICO:

POLISACARIDOS:
En este grupo se incluyen sustancias amorfas de peso molecular elevado, generalmente no
definido, que por hidrlisis dan monosas.
Su formula general es (

)n
Los polisacridos ms importantes son: el almidn, las celulosas, las dextrinas, el glucgeno
etc.
Sus principales caractersticas son:
insolubilidad en el agua, como las celulosas, otros como las dextrinas, forman
suspensiones coloidales, los almidones se hinchan formando engrudos.
son inspidos.
no son reductores.
por hidrlisis se transforman en glcidos de peso molecular cada vez menor, la
ltima etapa es la obtencin de monosacridos.
ALMIDN:
Formula general: (

)n
Se produce en las plantas con clorofila como uno de los principales productos de la
asimilacin, y se encuentra en forma de granos microscpicos en diversas partes del
vegetal, principalmente en los depsitos de reserva como las semillas o tubrculos.
En el comercio se conocen como almidn cuando procede de las semillas de cereales o
leguminosas, y fcula cuando se extrae de los tubrculos, qumicamente estas sustancias
son idnticas.

GLUCOGENO:
Llamado tambin almidn animal, existe como material de reserva en el hgado de los
mamferos. Es un polvo blanco, amorfo, que se tie de negro violceo por el yodo. Los
cidos minerales diluidos lo transforman en maltosa y glucosa.

DEXTRINA:
Son sustancias de constitucin no bien conocida que se consideran como productos
intermedios en la sacarificacin del almidn, de donde se las obtiene.
Las dextrinas son solubles en agua e insolubles en alcohol. Su olor a pan tierno es
caracterstico, se utiliza frecuentemente en la fabricacin de adhesivos (colas dextrinadas)

CELULOSA:
Est constituido por la condensacin de 100-200 molculas de glucosa formando largas
cadenas, las que se renen, a su vez, en grupos de 50 macromolculas y forman de
celobiosa.


REACTIVOS:


Solucin de almidn soluble (6 mg/ml) en buffer fosfato de sodio 0.02 M y pH 6.9
NaOH2, 4 N
HCI 4 N
Reactivo 3,5-dinitro salicilato de sodio: (disolver 5 g de cido 3,5-dinitro saliclico en 100
ml de NaOH
2N, calentar. Por separado, adicionar 150 g de nitrato de sodio y potasio a 250 ml de H2O,
calentar.
Mezclar las dos soluciones y completar a 500 ml)
Buffer fosfato de sodio 0.02 M pH 6.9 en NaCI 0.005 M.
NaOH 20%
Reactivo de Lucas. (134 g de ZnCI2 en 89 ml de HCI concentrado)











PROCEDIMIENTO:

El profesor en el momento de la prctica distribuir el trabajo de tal manera que cada grupo
realice una Hidrlisis diferente sobre el mismo polisacrido; por ejemplo el grupo 1
efectuar hidrlisis cida sobre almidn proveniente de maicena y el grupo 2 efectuar la
hidrlisis enzimtica sobre la misma muestra a fin de que puedan comparar los resultados.
La solucin del polisacrido tendr una concentracin de 6 mg/ml y se preparar en Buffer
fosfato de sodio
0.02 M pH = 6,9.
Todos los grupos realizarn la hidrlisis cida de la celulosa en presencia de ZnCl2 (o
reactivo de Lucas)

Hidrlisis cida:

Rotular ocho tubos de ensayo y agregar en orden los siguientes reactivos:


condiciones tubos
B 0 1 2 3 4 5 6
Solucin almidn, ml

- 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Agua destilada, ml

0.4 - - - - - - -
NaOH, 2.4 N

1 1 - - - - - -
HCl 4N, ml

0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6
Colocar los tubos 1 a 6 en un bao mara a ebullicin y dejarlos en los siguientes tiempos:

Tiempo de incubacin,
minutos

0 0 3 6 9 12 15 25
Finalizado el tiempo de incubacin, sacar cada tubo y detener la hidrlisis agregando:

NaOH, 2.4N, ml

- - 1 1 1 1 1 1
Reactivo 3,5-
dinitrosalicilato, ml

1 1 1 1 1 1 1 1
Introducir todos los tubos en el bao a ebullicin durante cinco minutos, enfriar y agregar 7 ml de agua destilada.
Agitar y medir transmitancia a 540 nm. Utilice el B para ajustar el 100% de transmitancia.

ANALISIS DE RESULTADOS:

La hidrlisis de los polisacridos puede seguirse midiendo el incremento en azcares
reductores mediante el Reactivo 3,5-dinitrosalicilato en solucin alcalina. El cido 3,5-
dinitrosaliclico (de color amarillo) se reduce a cido 3-amino-5 nitro saliclico, (rojizo
oscuro) produciendo una coloracin que se mide espectrofotomtricamente a 540 nm.
La extensin o porcentaje de hidrlisis se determina comparando la cantidad de azcar
reductor presente en cualquier tiempo, con la cantidad de azcar presente despus de la
hidrlisis cida total.
La hidrlisis de los polisacridos tambin puede efectuarse por medios qumicos. Los cidos
fuertes diluido catalizan el rompimiento indiscriminado de los enlaces glicosdicos, dando
como producto final glucosa.
La estructura polisacrida se demuestra en este experimento, ya que el nmero de grupos
reductores en el medio de reaccin aumenta a medida que transcurre la hidrlisis. El
progreso de la hidrlisis se mide de la misma forma que en la hidrlisis enzimtica.

TABLA DE RESULTADOS:


ABSORBANCIA A 540 nm


TUBOS
GRUPOS B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
ALBUMINA
S
0.004 0.077 0.093 0.179 0.186 0.253 0.274 0.041 0.034
GLOBULINA
S
0.069 0.107
PROLAMIN
AS
0.029 0.095 0.098 0.207
GLUTAMIN
AS












CONCLUSIONES:























BIBLIOGRAFIA

Bioqumica de Harper
Robert K. Murray
Peter A. Mayes
Daryl K. Granner
Victor W. Rodwell
Ed. El manual moderno, S.A. de C.V.
Mxico, D.F.
1988

Qumica elemental moderna
Orgnica
Celsi- Iacobucci
Ed. Kapelusz
Buenos Aires

Modulo Bioqumica
UNAD
2008