DIAGNSTICO

EM GENTICA

MOLECULAR

Hematologia

DIAGNSTICO
EM GENTICA

MOLECULAR

Hematologia

DIAGNSTICO
EM GENTICA

MOLECULAR

Hematologia

recente avano cientfico e tecnolgico dire-

trombose, sendo os mais frequentes: Fator V de Leiden,

cionado gentica promoveu excepcional

Gene da Protrombina, MTHFR, Cistationa Beta Sinteta-

desenvolvimento no diagnstico laboratorial

se e PAI-I. A pesquisa destes polimorfismos pode defi-

de diversas doenas hematolgicas de natureza he-

nir uma estratgia de ateno especial, aconselhando

reditria e mesmo adquirida. As tcnicas moleculares

a profilaxia primria para doentes assintomticos em

trouxeram simplicidade, rapidez e confiabilidade na

situaes de risco.

deteco de portadores de doenas hematolgicas e

no diagnstico preventivo de distrbios hemostticos;
o que vem sendo comprovado com a elucidao de alteraes moleculares de diversas doenas, como trombose, talassemia, leucemia, hipertenso, hemocromatose e hiperhomocisteinemia. O diagnstico molecular
aplicado a Hematologia Clnica uma ferramenta imprescindvel para a correta avaliao e diagnstico de
linfomas e leucemias.
Deve-se destacar a importncia da gentica na rea
de hipercoagulabilidade. O tromboembolismo venoso
(TEV) afeta de 1 a 3 indivduos por mil habitantes/ano e
estimado que 60% da predisposio a trombose seja
atribuda a componentes genticos. Os fatores genticos envolvidos consistem em mutaes em diferentes
genes que codificam fatores hemostticos, que podem
ocorrer isolados ou combinados entre si. Esta variabilidade gentica est relacionada com a grande variabilidade nas manifestaes clnicas. Nos ltimos anos

Alm disso, as alteraes genticas de qualquer natureza tm o risco de serem transmitidas aos descendentes diretos. Portanto, o reconhecimento destas alteraes pode motivar a pesquisa familiar, com o intuito de
identificar o grupo de pessoas que pode ter o risco de
trombose sem qualquer conhecimento e direcion-lo a
medidas de preveno.
Este catlogo tambm dirigido ao estudo de diferentes patologias hematolgicas. A base tcnica sobre a
qual sustenta esta tecnologia a Reao em Cadeia
da Polimerase (PCR), que aportou grande impacto no
diagnstico hematolgico, otimizado por sua variante
Real Time (RT-PCR quantitativa) que pode ser utilizado
em todo tipo de amostra hematolgica (sangue perifrico e medula ssea). De forma complementar, as tcnicas de Sequenciamento e MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) permitem abordar
com mais preciso o diagnstico de risco familiar.

vrios polimorfismos genticos foram associados

Para informaes adicionais e atualizaes acerca

do menu completo de exames acesse o link
www.hermespardini.com.br/helpdeexames

Alfa talassemia - Estudo molecular

Apolipoprotena B-100 defeituosa familiar Estudo molecular

Beta Talassemia - Estudo molecular

CADASIL - Estudo molecular da arteriopatia

cerebral autossmica dominante 

Cistationina Beta Sintetase - Polimorfismo

844INS68 

ndice
Gene HJV - Mutao Pontula GLY320 VAL

13

Microquimerismo em Transplante de Medula

14

PAI-1 - Polimorfismo 4G/5G 

14

Enzima Conversora da Angiotensina Polimorfismo I/D da ECA (Hipertenso) 

Predisposio gentica a
hiperhomocisteinemia 

15

Fator XII - Estudo molecular da mutao C46T 

(CBS, MTHFR C677T e MTHFR A1298C) 

15

Fator V de Leiden

G6PD, mutao 202 (G/A) 

Predisposio gentica hipertenso (ECA

I/D e Protena G C825T) 

15

Gene FLT3 - Prognstico molecular de LMA

10

Hemocromatose - Diagnstico molecular

da mutao S65C

10

Hemocromatose - Diagnstico molecular

das mutaes C282Y e H63D

11

Hemocromatose - Diagnstico molecular

das mutaes C282Y, H63De S65C

11

Hemocromatose tipo III - Mutao Y250X

no gene TFR2

12

JAK2 V617F (Policitemia vera,

Trombocitemia e Mielofibrose idioptica) 
Metilenotetrahidrofolato redutase Mutaes A1298C e C677T

Protena G (Hipertenso) - Polimorfismo C825T 16

Protrombina - Mutao

16

Rearranjo BCL1/JH t(11,14)

17

Rearranjo BCL2/JH t(14,18)

17

Rearranjo BCL6

18

Translocao BCR-ABL - Qualitativo

19

Trombofilias - Estudo gentico

20

Trombofilias Plus - Estudo gentico

21

12

Varfarina, anlise molecular ampliada da

sensibilidade a - 

21

13

Genes VKORC1 e CYP450

21

Alfa talassemia - Estudo molecular

A alfa talassemia constitui um grupo de doenas hereditrias, causadas pela deficincia de sntese de cadeias
alfa da hemoglobina. Existem quatro genes da alfa
globina, localizados no par de cromossomos 16 (regio
16p13.3) e os fentipos da alfa talassemia so determinados pela deleo de 1, 2, 3 ou 4 desses genes, ou por
pequenas mutaes pontuais. De acordo com o nmero
de genes deficientes, os fentipos observados so: portador silencioso, trao alfa talassmico, doena da hemoglobina H e hidropsia fetal por hemoglobina Barts,
respectivamente. A alfa talassemia 3.7 a forma mais
comum mundialmente, seguida de 4.2, --MED, 20.5, --SEA.
O alto grau de miscigenao na formao da populao
brasileira produziu elevadas frequncias de hemoglobinopatias no pas. A alfa talassemia, principalmente 3.7,
a alterao de hemoglobina mais comum na populao
brasileira, atingindo 20 a 25% da populao afro-descendente. Em indivduos com microcitose e hipocromia, a
frequncia de cerca de 50%, conforme estudos brasileiros.

O teste molecular til para confirmar o diagnstico,

principalmente em pacientes com microcitose e hipocromia sem anemia, no aconselhamento gentico e em
estudos populacionais.

Condio

Mtodo

PCR Multiplex
Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

At 2 dias temperatura ambiente.

At 5 dias refrigerado entre 2 a 8C.

Tempo de liberao

25 dias teis

Apolipoprotena B-100 defeituosa

familiar - Estudo molecular
A deficincia familiar de apoB100 (FDB) juntamente com
a hipercolesterolemia familiar pertencem ao tipo II/a de
hiperlipidemia primaria segundo a classificao de Fredrickson. FDB uma enfermidade autossmica dominante que resulta em hipercolesterolemia. As manifestaes clnicas so explicadas pelo acmulo em plasma
de LDL devido a apoB100 defeituosa. Estas trocas em
apoB100 produzem uma menor afinidade pelo receptor
de LDL (responsvel em 80% dos casos). As consequncias so hipercolesterolemia, xantoma tendinoso e arterosclerose prematura, que causa a apario precoce da
enfermidade cardio e cerebrovascular e morte prematura. A mutao mais comum a G10699A, a qual resulta
em substituio de Arg por Gln (R3500Q). Os portadores
da mutao apresentam maiores nveis de colesterol
em relao aos no portadores e, consequentemente,
maior risco de doena cardaca isqumica.
A FDB um dos problemas genticos mais frequentes
que podem ser tratados fenotipicamente atravs de
medicamentos que diminuem os lipdios, ou dieta.
Localizao: 2q24
Hereditariedade: Autossmica dominante

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

Exames oferecidos:
Apolipoprotena B-100 defeituosa familiar - Estudo
da mutao R3500Q
Apolipoprotena B-100 defeituosa familiar - Screening
R3500Q, R3500W, H3543Y por sequenciamento
Apolipoprotena B-100 defeituosa familiar - Sequenciamento completo

Mtodo

PCR e sequenciamento

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

30 dias teis

Beta Talassemia - Estudo molecular

A b-talassemia caracteriza-se por uma reduzida sntese
de hemoglobina de cadeia beta que resulta em anemia
microctica hipocrmica, sangue perifrico anormal
com clulas vermelhas nucleadas e reduo da quantidade de hemoglobina A. Seu surgimento ocorre aproximadamente aos 2 anos de idade com severa anemia
e hepatoesplenomegalia. O sequenciamento da regio
codificante do gene HBB detecta mutaes em 99% dos
indivduos com talassemia. Delees de extenso varivel do gene b ou do cluster HBB que do como resultado
talassemia-b ou talassemia-b complexas denominadas
talasemia-gdb e talasemia-gb so causa muito pouco
comum de talassemia-b e seu estudo est disponvel
clinicamente e se realiza mediante MLPA.
Localizao: 11p15.1
Hereditariedade: Autossmica recessiva

Mtodo

PCR e sequenciamento DO GENE HBB

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

20 dias teis

CADASIL - Estudo molecular

da arteriopatia cerebral
autossmica dominante
A arteriopatia cerebral familiar caracterizada por episdios de enxaqueca que se iniciam a partir da terceira
dcada de vida. Evolui com infartos mltiplos subcorticais e demncia entre 50 a 60 anos de idade. As alteraes antomo-patolgicas observadas so depsitos
granulares na camada mdia das arterolas.
CADASIL uma doena hereditria, autossmica dominante causada por mutaes no gene Notch3, localizado no cromossomo 19 (q12). Aproximadamente 75% das
mutaes se encontram nos exons 3 e 4 deste gene. A
mutao mais frequentemente relacionada doena
a substituio de uma citosina por timina na posio
268 do exon 3 do Notch3 (R90C).

Mtodo

PCR com primers intrnicos flanqueadores dos exons 3

e 4 do gene notch3, sequenciamento em duplo sentido
e estudo da sequencia mediante Blast

Condio

Sangue Total em EDTA.

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

35 dias teis.

Cistationina Beta Sintetase Polimorfismo 844INS68

A Cistationina Beta Sintetase (CBS) uma enzima mediadora da converso de homocistena em cistationina.
Deficincia na atividade desta enzima pode levar a hiper-homocisteinemia. Esta alterao hoje considerada
um fator de risco para doenas vasculares, incluindo a
doena coronariana, a trombose venosa e o acidente
vascular cerebral.
Muitos polimorfismos no gene da CBS tm sido relatados, sendo que alguns deles podem interferir na atividade enzimtica. Dentre eles, o polimorfismo 844ins68
em heterozigose ou homozigose, est associado com o
aumento dos nveis plasmticos de homocistena. importante lembrar que outros genes ou outras mutaes
que levam hiper-homocisteinemia no esto excludos por este exame, como a deficincia da CBS de etiologia autossmica recessiva e a deficincia da metileno
tetra-hidrofolato redutase (MTHFR).

Mtodo

PCR alelo especfico

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou
refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.
Tempo de liberao

10 dias teis

Enzima Conversora da Angiotensina Polimorfismo I/D da ECA (Hipertenso)

8

A ECA (enzima conversora de angiotensina) responsvel pela regulao da presso arterial. O gene da enzima
conversora da angiotensina (ECA) possui um polimorfismo biallico, denominado Deleo (D) e Insero (I),
que afeta diretamente a quantidade circulante desta
enzima. Portadores do gentipo DD (homozigose para
o alelo D) para a ECA apresentam concentraes sricas mais elevadas da enzima, enquanto portadores
do gentipo II (homozigose para o alelo I) apresentam
concentrao mais baixas de ECA. Segundo dados da
literatura, os portadores do gentipo DD possuem um
risco de serem acometidos por infarto aumentado em
3,2 vezes em relao aos gentipos II e ID. Observa-se,
aps amplificao e eletroforese, um produto de 490pb

na presena da insero (alelo I) e de 190pb na ausncia

de insero (alelo D), resultando em trs possveis gentipos: DD, II e I/D.
Mtodo

PCR

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

- At 2 dias temperatura ambiente.

- At 5 dias refrigerado entre 2 a 8C.

Tempo de liberao

10 dias teis

Fator XII - Estudo molecular da mutao C46T

O FXII o primeiro fator da via intrnseca da coagulao.
O polimorfismo C46T do exon 1 do gene do FXII cria um
novo stio de traduo antes do stio correto, o que diminui a eficincia da traduo e tem sido apontado como
fator de risco para doenas coronarianas.

Mtodo

PCR + Sequenciamento

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

30 dias teis

Fator V de Leiden
A deficincia do Fator V de Leiden suspeitada em pessoas com trombose venosa profunda, embolia pulmonar, em mulheres com histria de tromboembolismo
venoso durante gestao ou uso de contraceptivo oral e
em indivduos com histria pessoal ou familiar de trombose recorrente, principalmente de ocorrncia antes de
50 anos.

Este exame disponvel nos seguintes mnemnicos:

A molcula do fator V da coagulao apresenta trs stios de clivagem para a Protena C ativada (PCa). Um dos
stios tem o aminocido Arginina(R), na posio 506.
Quando ocorre uma mutao resultante da transio do
nucleotdeo G para A na posio 1691 no gene do Fator V,
o resultado a substituio do aminocido 506 Arginina por Glutamina (Q). Esta mutao conhecida como
Fator V de Leiden e responsvel pelo fentipo Resistncia Protena C ativada (RPCA). O fator V mutante torna-se menos susceptvel clivagem da PCa, mantendo-se
ativo por mais tempo como fator de coagulao sangunea. Comparado com a populao em geral, o risco para
tromboembolismo venoso em indivduos heterozigotos
aumenta aproximadamente 5 vezes, e nos homozigotos
em cerca de 50 vezes.

Mtodo

1. FVM - Fator V Leiden

2. TROMBO - Estudo gentico das trombofilias
3. TROMPL - Estudo gentico das trombofilias PLUS

PCR Real Time End Point para mutao pontual R506Q

(G1691A) do gene Fator V Leiden

Condio

- Sangue Total em EDTA.

- Swab bucal - somente com autorizao do setor
tcnico.

Conservao para envio

- Sangue: At 2 dias a temperatura ambiente ou 7 dias

refrigerado entre 2 e 8 C.
- Saliva: At 2 dias refrigerado entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

10 dias teis

G6PD, mutao 202 (G/A)

A deficincia de glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD)
o defeito enzimtico conhecido mais prevalente no
mundo. As principais manifestaes clnicas so ictercia neonatal e anemia hemoltica induzida por algumas
drogas e infeces, sendo que ambas podem ser letais.
Este estudo indicado para confirmar a suspeita de
deficincia de G6PD pelo exame de triagem neonatal
(Teste do Pezinho), para avaliar mulheres que sejam
possveis portadoras (heterozigotas) da mutao 202
(G > A) e elucidar casos em famlias onde j exista um
histrico da doena. importante lembrar que embora
mulheres heterozigotas geralmente no manifestem
crise hemoltica, a triagem gentica relevante para o
aconselhamento gentico, uma vez que filhos do sexo
masculino apresentam possibilidade de 50% de serem
deficientes de G-6-PD.
A investigao da deficincia de G6PD tambm recomendada nas reas endmicas de malria vivax antes
do emprego de tratamento com primaquina que pode
desencadear hemlise nos indivduos que apresentam
esta deficincia enzimtica.

Mtodo

PCR RFLP

Condio

1 tubo de sangue total (EDTA).

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

21 dias teis

Gene FLT3 - Prognstico molecular de LMA

FLT3 (FMS-like tyrosina kinase 3) um receptor de tirosina quinase, com funo bem conhecida na sobrevida,
proliferao e diferenciao celular. expresso normalmente em clulas progenitoras hematopoiticas, o que
no ocorre nas clulas hematopoiticas diferenciadas.
Por sua vez, a linhagem B e as leucemias mielides agudas (LMA) apresentam super-expresso da protena
FLT3.
As FLT3/ITD so duplicaes de 3 a 400 bp no exon 11,
sem mudana de matriz de leitura, que afetam cerca de
23% dos pacientes LMA, principalmente quando h contagem alta de clulas brancas sanguneas e LMA tipo
FAB M0 e M5. Sua presena indica pior prognstico em
pacientes adultos e peditricos e h evidncias que ITD
maiores representam maior desvantagem frente s ITD
menores.
A mutao pontual FLT3/D835, situada no exon 20, est
presente em aproximadamente 8 a 12% dos pacientes
LMA. A menor sobrevida relacionada a FLT3/D835 j foi
estimada em at 3 anos em comparao a pacientes
LMA com gentipo FLT3/D835 selvagem.

10

As duas mutaes so consideradas instveis, visto que

a porcentagem de alelos mutados do gene FLT3 varia durante o curso da doena, inclusive no tratamento e na(s)
recada(s); alm do prprio comprimento da ITD diferir
em um mesmo paciente, nas vrias etapas da LMA.

Deve-se dar preferncia para a pesquisa de amostras de sangue de medula ssea em EDTA, a fim de
aumentar a sensibilidade do teste, uma vez que o
sangue perifrico pode conter um nmero muito
baixo de blastos, principalmente aps tratamento
quimioterpico. Apesar do risco de resultados falso
negativos, o uso do sangue perifrico somente recomendado em casos peculiares, por exemplo, nos
quais a puno medular representa risco ao paciente.

Mtodo

Mutao FLT3-D835 - PCR - RFLP

Mutao FLT3-ITD - PCR-Fluorescente e Genotipagem
em Sequenciador Automtico

Condio

Preferencialmente sangue de medula ssea

em EDTA - 3mL
Sangue Total em EDTA: Casos especiais aps consulta
com o setor - 3mL

Conservao para envio

Enviar material (aspirado de medula ssea ou sangue)

refrigerado entre 2 e 8 C em at 3 dias.

Tempo de liberao

10 dias teis

Hemocromatose - Diagnstico
molecular da mutao S65C
A Hemocromatose Hereditria (HH), uma desordem no
metabolismo do ferro, pode estar relacionada a ocorrncia de vrias mutaes no gene HFE. Foram identificadas
cerca de 20 mutaes no gene HFE, sendo que h, dentre elas, duas mutaes do tipo missense C282Y e H63D
mais comumente associadas HH.
A mutao S65C foi recentemente relacionada a formas
leves da doena. Esta mutao determina a converso
do aminocido serina (S) na posio 65 por cistena (C),
devido a transverso do nucleotdeo adenina (A) para timidina (T), na posio 193 do gene HFE.
A frequncia da S65C em caucasianos de 0.005 a 0.03.
Na populao brasileira encontra-se em torno de 0.0087.
A populao equatoriana apresenta uma frequncia
allica de 0.04, a mais alta encontrada at o momento.
HH de menor gravidade tambm associa-se presena
de heterozigose composta de H63D/S65C e C282Y/S65C.

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

Este exame verifica a presena da mutao S65C no

gene da hemocromatose, que a terceira mutao mais
comum no gene HFE.

Mtodo

PCR - RFLP

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar ate 2 dias a temperatura ambiente.

Enviar ate 7 dias entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

15 dias teis

Hemocromatose - Diagnstico molecular

das mutaes C282Y e H63D
Hemocromatose Hereditria clssica (HH) uma desordem autossmica recessiva comum na populao
caucasiana, com uma prevalncia entre 1:200 a 1:500
indivduos. Caracteriza-se por aumento inapropriado
da absoro do ferro pelo intestino, resultando em seu
armazenamento excessivo, principalmente no fgado,
pele, pncreas, corao, articulaes e testculos. Os indivduos no tratados evoluem com fibrose heptica ou
cirrose.

alm do diagnstico pr-natal. importante ressaltar

que o encontro de um certo gentipo determina apenas
susceptibilidade gentica e no firma o diagnstico de
hemocromatose que requer, alm das alteraes clnicas, outras anlises, de acordo com os rgos afetados.

Foram identificadas cerca de 20 mutaes no gene HFE,

sendo que h, dentre elas, duas mutaes do tipo missense C282Y e H63D mais comumente associadas HH.
Cerca de 90% dos afetados so homozigotos para a mutao C282Y, ou heterozigotos compostos C282Y/H63D.
A variante H63D tem menor penetrncia e determina
formas mais brandas de HH.

PCR Real Time End Point para mutao pontual C282Y

e PCR mini sequenciamento para H63D. (Metodologia
in house)

Estudos genticos das mutaes C282Y e H63D so indicados para confirmao diagnstica, como testes preditivos para familiares de afetados que tenham risco aumentado da doena e para identificao de portadores,

Mtodo

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

10 dias teis

11

Hemocromatose - Diagnstico molecular

das mutaes C282Y, H63De S65C
Hemocromatose Hereditria clssica (HH) uma desordem autossmica recessiva comum na populao
caucasiana, com uma prevalncia entre 1:200 a 1:500
indivduos. Caracteriza-se por aumento inapropriado
da absoro do ferro pelo intestino, resultando em seu
armazenamento excessivo, principalmente no fgado,
pele, pncreas, corao, articulaes e testculos. Os indivduos no tratados evoluem com fibrose heptica ou
cirrose.

diagnstico pr-natal. O estudo gentico da hemocromatose plus avalia as 3 mutaes, C282Y, H63D e S65C
que so as mais frequentemente relacionadas com o
desenvolvimento desta doena.

Foram identificadas cerca de 20 mutaes no gene HFE,

sendo que h, dentre elas, duas mutaes do tipo missense C282Y e H63D mais comumente associadas HH.
Cerca de 90% dos afetados so homozigotos para a mutao C282Y, ou heterozigotos compostos C282Y/H63D.
A variante H63D tem menor penetrncia e determina
formas mais brandas de HH.

PCR Real Time End Point para mutao pontual C282Y,

PCR mini sequenciamento para H63D e PCR-RFLP para
S65C

A anlise molecular deve ser solicitada para a confirmao do diagnstico, em pacientes com elevao
inexplicvel da ferritina ou saturao de transferrina,
na avaliao de parentes de pacientes afetados e para

Mtodo

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

10 dias teis

Hemocromatose tipo III - Mutao

Y250X no gene TFR2
Hemocromatose tipo 3 esta ligada a mutaes no gene
do receptor de transferrina tipo 2, localizado no locus
7q22. Y250X a principal mutao relatada neste gene,
com associao a sobrecarga de ferro. A hemacromatose hereditria relacionada a TFR2 (TFR2-HHC) se caracteriza-se por uma absoro de ferro intestinal aumentada
que causa acmulo de ferro no fgado, corao, pncreas
e nos rgos endcrinos. O nico gene associado a TFR2-HHC o TFR2 que codifica para o receptor da transferrina-2. Em casos negativos para Y250X, recomenda-se realizar a anlise de mutaes pontuais p.Arg30ProfsX31,
p.Met172Lys, p.Ala621_Gln624del in TFR2, que permitem
identificar mutaes em cerca de 50% dos indivduos
com TFR2-HHC.

Mtodo

Amplificao baseada em sequncia de cido nuclico

(LOINC: NASBA)

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

- At 2 dias a temperatura ambiente.

- At 5 dias refrigerado de 2 a 8C.

Tempo de liberao

45 dias teis

JAK2 V617F (Policitemia vera,

Trombocitemia e Mielofibrose idioptica)

12

A associao de JAK2 com desordens mieloproliferativas (MPDS), incluem Policitemia Vera(PV),

Trombocitemia(ET) e Mielofibrose Idioptica(IMF). PV
est associada ao aumento do nmero de precursores
eritrides (eritrcitos),causando um aumento no volume sanguneo, tornando-o mais espesso, de modo que
o sangue passa a fluir com menor facilidade atravs dos
pequenos vasos sanguneos, podendo complicar para
eventos trombticos. Na trombocitemia, os megacaricitos tornam-se anormais e produzem plaquetas em excesso, levando formao espontnea de cogulos, que
provocam a obstruo do fluxo sanguneo. Na mielofibrose ocorre um envolvimento dos fibroblastos (clulas
que produzem tecido fibroso ou conjuntivo), que parecem ser estimulados por clulas precursoras anormais,
possivelmente megacaricitos (clulas que produzem
plaquetas).
A troca de um nucleotdeo guanina por uma timina no
xon 12 do gene Janus Quinase 2(JAK2) representa uma
mutao que pode ser adquirida e est presente na li-

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

nhagem mielide. Ocorre uma substituio do aminocido fenilalanina por valina no cdon 617,causando
uma ativao constitutiva da Tyrosina kinase, que
responsvel por crescimento celular. Esta mutao est
presente em 66% dos casos de policitemia Vera, 23,6%
de trombocitemia essencial e 35,6% de mielofibrose
crnica, tornando-a um importante auxlio diagnstico.

Mtodo

PCR qualitativo em tempo real com TAQ MAN

Condio

Sangue Total em EDTA ou Medula ssea em EDTA

Conservao para envio

At 5 dias refrigerado entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

7 dias teis

Metilenotetrahidrofolato redutase
- Mutaes A1298C e C677T
A hiperomocisteinemia o aumento da concentrao
plasmtica de homocistena, um derivado da metionina,
cuja concentrao influenciada por fatores genticos,
nutricionais e patolgicos. O aumento da homocistena
plasmtica, de natureza gentica, resulta de alteraes
funcionais das enzimas metileno tetrahidrofolato redutase (MTHFR) e cistationa beta sintetase (CBS), envolvidas no metabolismo da metionina ou da deficincia de
co-fatores enzimticos, como as vitaminas B6 e B12 e o
cido flico.
O gentipo homozigoto mutante (677TT), encontrado
em 4 a 14% da populao em geral, est associado ao aumento de 25% da concentrao plasmtica de homocistena e pode gerar defeitos neurolgicos, retardo psicomotor, doena vascular prematura e tromboembolismo.
A mutao A1298C, em homozigose, responsvel pela
reduo da atividade da MTHFR, aumentando os nveis
de homocistena. Efeitos similares aos observados para
os homozigotos 677TT ocorrem na combinao de heterozigose para as duas mutaes da MTHFR. Esta combinao de grande relevncia clnica para os eventos
vasculares, visto que a frequncia de A1298C e C677T varia de 40 a 50%, conforme as referncias bibliogrficas.
Estas mutaes esto disponveis nos seguintes mdulos:

Para anlises completas do perfil gentico de trombofilia, so oferecidos:

TROMBO - Estudo gentico das trombofilias
TROMPL - Estudo gentico das trombofilias PLUS
PRHOMO - Estudo gentico da predisposio a Hiperhomocisteinemia

Mtodo

PCR-RFLP para A1298C e PCR Real Time para C677T

Condio

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

A1298C - Mutao A1298C da MTHFR

MTHFR - Mutao C677T da MTHFR
METIL - Mutaes A1298C e C677T da MTHFR

Sangue Total em EDTA ou swab bucal.

Tempo de liberao

10 dias teis

Gene HJV - Mutao Pontula GLY320 VAL

recomendado que se inicie a pesquisa molecular para
hemocromatose tipo 2 pelo estudo da mutao pontual
Gly320Val do gene HJV, que est presente em cerca de
50% dos casos estudados. Em casos de resultado negativo para esta anlise, recomenda-se partir para o sequenciamento completo do gene.

Mtodo
Condies

PCR
Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

- At 2 dias em temperatura ambiente ou at 7 dias

refrigerado entre 2 e 8C.

Tempo de liberao

30 dias teis

13

Microquimerismo em
Transplante de Medula
Este exame indicado para pacientes que se submeteram ao transplante de medula a fim de se verificar o quimerismo. A semelhana do padro gentico observado
entre o swab bucal e o sangue/medula do paciente indica que no houve a formao de quimerismo, ou seja,
o transplante no foi eficiente. No entanto, uma vez obtido diferente padro entre o swab bucal e o sangue/
medula do paciente, h indicao da eficincia do transplante. O encontro de 3 ou mais alelos para um mesmo
marcador indica a presena simultnea de resqucios da
medula do paciente somada a nova medula recebida do
doador.

Mtodo

PCR STR Fluorescente

Condio

Sangue Total em EDTA e Swab bucal

Conservao para envio

Sangue: At dois dias em temperatura ambiente ou at

7 dias refrigerado entre 2 e 8C.
Swab: At 5 dias em temperatura ambiente.

Tempo de liberao

10 dias teis

PAI-1 - Polimorfismo 4G/5G

14

O inibidor do ativador do plasminognio tipo 1 (PAI-1)

forma um complexo com o ativador do plasminognio
tissular (t-PA), desempenhando atividade reguladora
da hemostasia. Mais exatamente, o PAI-1 tem atividade inibidora fibrinoltica. O polimorfismo 4G/5G, uma
variao comum na regio promotora do gene do PAI-1,
consiste numa insero ou deleo de uma guanosina,
a 675pb aps o stio de incio da traduo; que afeta a
transcrio deste gene e, portanto, est relacionado com
a concentrao plasmtica do PAI-1. O alelo 4G apresenta um stio de ligao para um ativador da transcrio, o
que reflete em maiores concentraes de PAI-1; enquanto o alelo 5G apresenta um stio de ligao adicional,
destinado a um repressor de trascrio, resultando em
menores nveis de PAI-1 circulantes. Homozigotos para
o alelo 4G tm concentraes 25% maiores de PAI-1 que
indivduos homozigotos para 5G.
A presena do alelo 4G est associada com o risco aumentado de eventos tromboembolticos e doenas cardiovasculares, inclusive de 20% para o infarto do miocrdio, uma vez que inibe a fibrinlise e pode exarcebar

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

leses teciduais, afetando negativamente o prognstico.

Alm disso, altas concentraes de PAI-1 so encontradas em mulheres com aborto precoce de causa desconhecida, visto que a fibrinlise prejudicada promove a
deposio de fibrina na circulao placentria precocemente.

Mtodo

PCR Fluorescente e Genotipagem em Sequenciador

Automtico do polimorfismo 4G/5G do gene PAI-1

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

10 dias teis

Predisposio gentica a
hiperhomocisteinemia
(CBS, MTHFR C677T e MTHFR A1298C)
Entre as causas hereditrias da hiperhomocisteinemia
destacam-se a deficincia funcional da cistationina b-sintetase (CBS) e a variante termolbil da metileno tetra-hidrofolato redutase (MTHFR), responsveis pela deficiente converso de homocistena em cistationina. Isto
constitui fator de risco isolado para doenas vasculares,
incluindo a doena arterial coronariana, o tromboembolismo venoso e o acidente cerebral vascular. Estudos de
meta-anlise reforam a importncia da hiperhomocisteinemia como fator de risco para o tromboembolismo
venoso. O estudo gentico, em conjunto, da CBS e da
MTHFR tem maior valor informativo quanto predisposio hiperhomocisteinemia do que quando analisado
apenas uma das enzimas.
O estudo gentico dos polimorfismos da MTHFR e CBS
indicado para indivduos com histria familiar de doena arterial coronariana, tromboembolismo venoso e acidente cerebral vascular, relacionados a hiperhomocistei-

nemia. Mutaes em outros genes ou outras mutaes

que causem hiperhomocisteinemia no esto excludas
por este exame.

Mtodo

PCR para CBS + PCR RFLP e PCR Real time para

mutaes no gene MTHFR

Condio

Sangue Total em EDTA.

Conservao para envio

Enviar em temperatura ambiente at 2 dias ou

refrigerado entre 2 e 8C em at 7 dias.

Tempo de liberao

10 dias teis

Predisposio gentica hipertenso

(ECA I/D e Protena G C825T)

15

O gentipo 825TT do GNB3 contribui para um alto risco de hipertenso e obesidade em brancos e negros e
ao gentipo thrifty. O alelo 825T associa-se ao aumento
da massa corporal e reteno de peso na populao em
geral e, principalmente, em mulheres primparas.Vrios
estudos tambm indicam o papel farmacogentico do
polimorfismo 825T, concernente a resposta farmacolgica a sibutramina, um frmaco empregado no tratamento de reduo de peso e sua manuteno. Diante
da significante variabilidade individual quanto a terapia
com sibutramina, pesquisas evidenciaram sua maior
efetividade em indivduos de gentipo CC do que em
gentipo CT ou TT.

por infarto aumentado em 3,2 vezes em relao aos gentipos II e ID. Os gentipos 825TT do GNB3 e DD da ECA
atuam independente e sinergicamente para o desenvolvimento de hipertenso. Portanto, o estudo gentico dos
polimorfismos da Protena G e da ECA indicado para
indivduos com histria familiar de hipertenso. Um resultado positivo para quaisquer dos dois polimorfismos
indica predisposio gentica hipertenso e portanto, sugere a preveno quanto ao seu desenvolvimento.

A ECA (enzima conversora de angiotensina) tambm

responsvel pela regulao da presso arterial. Portadores do gentipo DD (homozigose para o alelo D) para a
ECA apresentam concentraces sricas mais elevadas da
enzima, enquanto portadores do gentipo II (homozigose para o alelo I) apresentam concentrao mais baixas
de ECA. Segundo dados da literatura, os portadores do
gentipo DD possuem um risco de serem acometidos

Condio

Mtodo

PCR para ECA e PCR RFLP para Protena G

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

At 2 dias a temperatura ambiente.

At 5 dias refrigerado entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

10 dias teis

Protena G (Hipertenso) Polimorfismo C825T

O gentipo 825TT do GNB3 contribui para um alto risco
de hipertenso e obesidade em brancos e negros e ao
gentipo thrifty. O alelo 825T associa-se ao aumento da
massa corporal e reteno de peso na populao em geral e, principalmente, em mulheres primparas.Vrios estudos tambm indicam o papel farmacogentico do polimorfismo 825T, concernente a resposta farmacolgica
a sibutramina, um frmaco empregado no tratamento
de reduo de peso e sua manuteno. Diante da significante variabilidade individual quanto a terapia com
sibutramina, pesquisas evidenciaram sua maior efetividade em indivduos de gentipo CC do que em gentipo
CT ou TT.

Mtodo

PCR RFLP para polimorfismo C825T

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

At 2 dias temperatura ambiente.

At 5 dias refrigerado entre 2 a 8C.

Tempo de liberao

10 dias teis

16

Protrombina - Mutao
Uma transio G para A no ltimo nucleotdeo 20210 da
regio no traduzida 3do DNA complementar do gene
do fator II da coagulao (protrombina), aumenta a estabilidade do RNA mensageiro da protrombina e assim,
essa mutao eleva os nveis plasmticos de protrombina, resultando na formao aumentada de trombina
e consequentemente coagulao exacerbada e risco
aumentado para ocorrncia de TEV. Em pacientes com
eventos tromboemblicos, a prevalncia do alelo mutante da protrombina varia de 4% a 7%, enquanto que
em indivduos normais, a frequncia est estimada em
cerca de 2,3%.
Este exame disponvel nos seguintes mnemnicos:
GENPRO - Mutao no gene da protrombina
TROMBO - Estudo gentico das trombofilias
TROMPL - Estudo gentico das trombofilias PLUS

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

Mtodo

PCR Real Time para mutao pontual G20210A do gene

da Protrombina

Condio

- Sangue Total em EDTA ou saliva (swab bucal).

Conservao para envio

Sangue: At 2 dias em tempertaura ambiente ou at 7

dias refrigerado entre 2 e 8C.
Swab: At 5 dias em temperatura ambiente.

Tempo de liberao

10 dias teis

Rearranjo BCL1/JH t(11,14)

O gene codifica a ciclina D1; 295 aminocidos; 36 kDa.

Diagnstico: A deteco se faz mediante Nested PCR.

Expresso: no h uma expresso normal em linfcitos;

expresso dependente de ciclo celular: mxima em G1,
mnima em S.

O teste indicado para determinar a presena ou ausncia de rearranjo no gene BCL1 em casos recentemente
diagnosticados de linfoma de clulas do manto, linfomas no classificados ou para monitorizao de doena
residual mnima. realizada a pesquisa para fuses IgH/
BCL1, presentes na maior regio MCL2. Um resultado positivo indica a presena de translocao cromossomal
bcl-1/JH t(11;14). Um resultado negativo no exclui completamente a presena desta translocao.

Localizao: principalmente nuclear.

Funo: Controle do ciclo celular: Progresso de G1 a
G1/S; forma complexos com CDK4 e 6; fosforilao de
RB1 pela ciclina D1/CDK4; inibida por P21, P15 e P16
Entidade: t(11;14)(q13;q32)/B-cell . BCL1 - IgH.
Patologia: t(11;14) detecta-se principalmente no linfoma de clulas do manto; tambm na leucemia promieloctica, linfoma esplnico; raro em leucemia linfoctica
crnica, mieloma mltipla.
Resultado da Anomalia Cromossmica: 5 BCL1 translocado no cromossomo 14 cerca de JH (IgH) e C em 3.
Protena Anormal: No existe protena de fuso, mas
troca de promotor; o enhancer do gene da imunoglobulina estimula a expresso de bcl-1. Esta expresso acelera o trnsito celular na fase G1.

Mtodo

PCR

Condio

- Medula ssea em EDTA ou sangue total em EDTA.

Conservao para envio

- At 3 dias refrigerado entre 2 e 8 C

Tempo de liberao

15 dias teis

Rearranjo BCL2/JH t(14,18)

BCL2 apresenta 25 kDa; 205 aminocidos (BCL2b) ou 239
aminocidos (BCL2a que tem, alm disso, uma terminao hidrofbica aderida a membrana. Esta terminao
tem atividade anti-apopttica. Contm domnios BH
(homo/heterodimerizao) e NH.
Expresso: ampla; em B e T em particular.
Localizao: Principalmente em membrana mitocondrial.
Funo: antiapoptoses, mediante um processo complexo; dimerizao com BAX; papel antiapopttico formando complexos com caspase-9 e APAF1, prevenindo o
metabolismo de proteases (atravs de ativao dependente de caspase-3 citocromo C).

17
inibidor apopttico, h um atraso na morte celular e h
um acmulo celular.
O exame gentico empregado para deteco molecular da alterao cromossmica ocasionada pela t(14;18)
(q32;q21), que caracteriza 90% dos casos de linfoma folicular. O resultado da translocao a transformao
maligna das clulas afetadas e consequente alterao
da expresso gnica do BCL2, o que favorece a proliferao das clulas linfides em relao as clulas normais.
O rearranjo de BCL-2 indicado para o diagnstico de
linfomas difusos de clulas grandes e investigao e
monitorizao de Doena Residual Mnima (DRM) durante e ao final do tratamento.

Entidade: t(14;18)(q32;q21)/B-cell . IgH - BCL2

Patologia: B-cell NHL principalmente;

Mtodo

Incidncia: Encontra-se em 80% - 90 % de linfomas

foliculares, 30% de linfomas de clulas grandes difusas.

Condio

Resultado da Anomalia Cromossmica: 5 BCL2 se

transloca no cromossomo 14 cerca de JH (IgH) e C em 3.

Conservao para envio

Protena Anormal: No existe protena de fuso, mas

troca de promotor; o enhancer do gene da imunoglobulina estimula a expresso de BCL-2. Como BCL-2 um

PCR nested

- Medula ssea em EDTA ou Sangue Total em EDTA

- At 3 dias refrigerado entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

15 dias teis

Rearranjo BCL6
Patologia: O maior nmero de translocaes que afetam o gene BCL-6 so encontrados nos linfomas B no-Hodgkin

18

Incidncia: Detecta-se de 15%-40% dos casos em linfomas de clulas B grandes (DLBCL), 6%-15% de linfomas
foliculares e 50% dos casos de linfomas de Hodgkin nodulares.
Expresso: Na linha germinal de clulas B e T, outros tecidos linfides, clulas musculares e queratincitos.
Localizao: Nuclear.
Funo: A protena se une a uma sequncia especfica
de DNA e reprime sua transcrio. A unio do DNA mediada atravs da sequncia TTCCT(A/C)GAA enquanto
as interaes protena-protena se realizam mediante
domnios BTB/POZ inter-atuando com outras protenas
atravs de dedos de zinco (incluindo Histone Deacetylase 1 (HDAC1) e Silencing Mediator of Retinoid and Thryoid
Receptor 1 (SMRT1). O extremo carboxi-terminal, por outra parte, responsvel pela unio especfica do DNA
atravs de seus 6 dedos de zinco.
Entidade: 3q27 /NHL (non Hodgkin linfomas).
Citogentica: Os reordenamentos em 3q27 so diversos
e incluem microdelees, mutaes pontuais e hipermutao. Em 50% destas translocaes, so afetados
os genes Ig em 14q32 (IgH), 2p12 (IgK) e 22q12 (IgL) (e.g.
t(3;14)(q27;q32)). Menos da metade afetam a outras regies cromossmicas (1q21, 2q21, 4p11, 5q31, 6p21, 7p12,

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

8q24, 9p13, 11q13, 11q23, 12q11, 13q14-21, 14q11, 15q21; 16p11...).

Alm dessas, h alteraes biallicas.
Resultado da Anomalia Cromossmica: A substituio de promotor entre BCL-6 e suas diferentes partes
do lugar a transcritos quimricos com um extremo
5 do gene participante fusionado ao local de splice do
xon 2 do BCL-6. Em alguns casos possvel encontrar
quimeras recprocas com a regio reguladora 5 do BCL6 fusionada com regio codificante do gene partner.
O gene BCL6, altamente expresso em clulas germinativas tipo B, desempenha uma funo central na modulao da transcrio dos genes envolvidos na ativao
linfoctica, ciclo celular, apoptose e diferenciao. Expresso alterada de BCL6 em clulas B germinativas tem
funo oncognica, provavelmente por inibir a apoptose
e aumentar a proliferao celular. So conhecidas mutaes na regio 5 no codificante, relacionadas a estes
eventos.
Mtodo

PCR multiplex

Condio

Medula ssea em EDTA ou Sangue Total em EDTA.

Conservao para envio

At 3 dias refrigerado entre 2 e 8 C..

Tempo de liberao

15 dias teis

Translocao BCR-ABL - Qualitativo

A Leucemia Mielide Crnica (LMC) a doena mieloproliferativa mais comum, representando cerca de 20%
a 25 % de todos os casos de leucemia e cerca de 3% das
leucemias infantis, sendo que sua incidncia de 1 caso
a cada 100.000 pessoas em pases ocidentais. Acomete
principalmente indivduos entre 45 e 55 anos, sendo que
30% dos pacientes diagnosticados tm mais de 60 anos.
A LMC caracteriza-se pela presena do cromossomo Philadelphia (Ph), que resulta da fuso de parte do oncogne ABL no cromossomo 9 com o gene BCR no cromossomo 22. Esta fuso denominada translocao BCR/
ABL (p210) ou translocao t(9;22) e apresenta dois tipos
caractersticos: b2a2 e b3a2.
Embora o diagnstico da LMC possa ser feito por anlise citogentica, tendo uma sensibilidade de 90%, a deteco da translocao BCR/ABL atravs de Reao em
Cadeia da Polimerase Reversa (RT-PCR) considerada a
tcnica mais sensvel para diagnstico desta Leucemia
(aproximadamente 98% de sensibilidade), podendo
identificar uma clula maligna em at 106 clulas normais.

resistentes aps tratamento com quimioterpicos (Doena Residual Mnima) e na monitorizao de pacientes
submetidos a transplante de medula. Por fim, o controle
e a cura da LMC necessitam de um diagnstico exato,
preciso e com alta sensibilidade que s a tcnica da Reao em Cadeia da Polimerase Reversa (RT-PCR) pode
oferecer.
Mtodo

Reao em Cadeia da Polimerase Reversa (RT-PCR)

Condio

Sangue de Medula ssea em EDTA ou Sangue Total em

EDTA

Conservao para envio

Enviar material refrigerado entre 2o e 8o em ate 7

dias.
No congelar.

Tempo de liberao

10 dias teis

Devido a sua alta sensibilidade, a RT-PCR a tcnica

mais indicada no s para o diagnstico inicial da LMC,
mas tambm para identificao de clulas malignas

19

Trombofilias - Estudo gentico

Trombofilias so doenas multifatoriais, em que, fatores
genticos de suscetibilidade e fatores ambientais determinam tendncia trombose venosa, geralmente de
carter familiar.
O Fator V Leiden resulta na resistncia do FV clivagem
pela protena C ativada, aumentando o risco de eventos
vasoclusivos venosos, em portadores em homozigose ou
heterozigose dessa mutao. Os pacientes heterozigotos possuem um risco trombtico sete vezes maior e os
homozigotos ate 80% maior do que indivduos controle.
Os eventos trombticos relacionados a esta mutao
so comumente de origem venosa, acometendo principalmente vasos profundos de membros inferiores e menos frequentemente o sistema porta, veias superficiais
e cerebrais.
A mutao G20210A no gene da Protrombina acarreta
elevao nos nveis plasmticos desta protena na ordem de 30%, resultando na formao aumentada de
trombina e consequente coagulao exarcebada, com
risco aumentado para trombose venosa, cerca de 3 vezes
em comparao populao em geral. Este polimorfismo tambm predispe a embolia pulmonar e trombose venosa cerebral, sendo que alguns autores sugerem
tambm um risco de trombose arterial.

20

A variante termolbil da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) uma responsvel gentica pela deficiente converso de homocistena em cistationina, causando a hiperhomocisteinemia. Isto constitui fator de risco
isolado para doenas vasculares, incluindo a doena arterial coronariana, o tromboembolismo venoso e arterial
e o acidente cerebral vascular. Estudos de meta-anlise

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

reforam a importncia da hiperhomocisteinemia como

fator de risco para o tromboembolismo venoso.
Em suma, a presena isolada ou em conjunto destes polimorfismos deve ser vista como um fator predisponente trombofilia e deve direcionar o indivduo portador a
medidas de preveno.
Equivale
Fator V Leiden
Metilenotetrahidrofolato Redutase C677T
Gene Da Protrombina

Mtodo

PCR Real Time End Point para mutao pontual R506Q

(G1691A) do gene Fator V Leiden, PCR em tempo
Real End Point para a mutao pontual C677T no
gene MTHFR, PCR Real Time End Point para Mutao
G20210A do gene da Protrombina

Condio

- Sangue Total em EDTA

- swab bucal

Conservao para envio

- Sangue: At 2 dias a temperatura ambiente ou 7 dias

refrigerado entre 2 e 8 C.
- Saliva: At 2 dias refrigerado entre 2 e 8 C.

Tempo de liberao

10 dias teis

Trombofilias Plus - Estudo gentico

O Estudo Gentico das Trombofilias Plus avalia as 6 mutaes mais relevantes para o desenvolvimento de eventos trombticos. (Ver tambm PAI-1, CBS e A1298C).
A importncia do ESTUDO GENTICO DAS TROMBOFILIAS PLUS se baseia em dois fatos:
1. A trombose por tratar-se de uma modificao gentica, em grande porcentagem dos casos, apresenta um
risco de ocorrncia e recorrncia permanente. Esse
conhecimento d condio ao mdico de proteger o
paciente atravs de medicamentos e outras atitudes
muito bem estabelecidas em estudos mundiais.
2. As alteraes genticas de qualquer natureza tm
o risco de serem transmitidas aos descendentes
diretos. Portanto, o reconhecimento destas alteraes
pode motivar a pesquisa familiar, com o intuito de
identificar o grupo de pessoas que pode ter o risco de
trombose sem qualquer conhecimento e direcion-lo
a medidas de preveno.

Equivale
Fator V Leiden
Gene Da Protrombina
Metilenotetrahidrofolato Redutase C677T
Metilenotetrahidrofolato Redutase A1298C
Polimorfismo 4G/5G no Gene PAI-1
Polimorfismo 844INS68 da CBS
Mtodo

PCR Real Time End Point para mutacao pontual R506Q

(G1691A) do gene

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

- At 2 dias em temperatura ambiente ou at 7 dias

refrigerado entre 2 e 8C.

Tempo de liberao

10 dias teis

Varfarina, anlise molecular

ampliada da sensibilidade a Genes VKORC1 e CYP450
Terapia anticoagulante oral com derivados cumarnicos,
realizada principalmente com varfarina, usada amplamente para profilaxia de tromboembolismo, trombose arterial e venosa e sua recorrncia, bem como para
pacientes com vlvula cardaca mecnica. No entanto,
o controle da anticoagulao oral geralmente dificultada pela variabilidade individual quanto as doses
requeridas para preveno adequada. Os cumarnicos
representam o grupo dos antagonistas da vitamina K
e a varfarina sdica a droga mais comumente usada.
O polimorfismo gentico C1173T na subunidade 1 do
complexo da vitamina K epxi redutase (VKORC1) altera a atividade da enzima vitamina K epxi redutase,
influenciando a ativao dos fatores de coagulao.
Pacientes que apresentam o gentipo 1173TT podem
apresentar um maior risco de desenvolver hemorragias
quando medicados com varfarina, enquanto o gentipo
1173CC est relacionado com maiores doses requeridas
deste anticoagulante, para se atingir o equilbrio da hemostasia.

21

O citocromo P-450 CYP2C9 catalisa a converso do

enantimero mais potente S-varfarina em seus metablicos inativos, com 100% de atividade para o alelo CYP2C9*1. Respectivamente, os alelos CYP2C9*2
e CYP2C9*3 tm 12% e 5% da atividade enzimtica.

Mtodo

PCR em tempo real para polimorfismo G1639A do

gene VKORC1 PCR RFLP para polimorfismos CYP2C9*2 e
CYP2C9*3

Condio

Sangue Total em EDTA

Conservao para envio

- At 2 dias a temperatura ambiente.

- At 5 dias refrigerado.

Tempo de liberao

7 dias teis

O Hermes Pardini prioriza a constante atualizao

bilizamos testes moleculares para diagnstico

de tcnicas avanadas e metodologias precisas do

preciso e precoce de diversas doenas infecciosas

mundo cientfico, buscando a prestao de servios

e acompanhamento de pacientes, permitindo um

com excelncia na rea de Gentica Molecular. Isto

tratamento mais direcionado e o monitoramento

permite atender e superar as expectativas de nos-

da resposta do paciente terapia.

sos clientes na qualidade de nossos exames, permitindo com a mxima preciso, detectar a presena
de agentes patognicos responsveis pelas doenas infecciosas, diagnosticar desordens genticas e
oferecer testes com total confiabilidade.
O

diagnstico

Dentre as metodologias empregadas temos a Reao em Cadeia de Polimerase(PCR), PCR em Tempo

Real, Anlise de Perfil de Fragmentao por Enzima
de Restrio, Captura Hbrida e Sequenciamento
Gentico.

gentico

molecular vem adquirindo

papel preponderante na
prtica da medicina. Muitos
mdicos, em sua atividade
clnica, tm se encontrado
por diversas vezes diante
da necessidade de confir-

Como importantes dife-

DIAGNSTICO
EM GENTICA

MOLECULAR

mar uma hiptese diagnstica relacionada com

uma doena gentica. Deste modo, as alternativas

renciais de qualidade, a
rea apresenta pessoal altamente qualificado para
a execuo de todos os
diagnsticos moleculares e
automao total para diagnstico de alguns microor-

ganismos infecciosos.

apresentadas neste CATLOGO so propostas do

A rea ocupada pela diviso foi desenhada para

Laboratrio Hermes Pardini para dar suporte aos

atender aos mais altos padres de qualidade, com

Laboratrios Conveniados e profissionais mdicos,

fluxo unidirecional, evitando contaminaes e ga-

oferecendo estas e futuras alternativas diagnsti-

rantindo segurana no diagnstico.

cas.

Neste CATLOGO DE DIAGNSTICO EM GENTICA

A Gentica de Microorganismos do Hermes Pardi-

MOLECULAR, os exames so oferecidos ao cliente

ni reconhecida por oferecer um amplo menu de

apresentados por especialidade mdica para prati-

exames que auxiliam nas decises clnicas como

cidade e otimizao da consulta.

contribuio para a melhoria da sade. Disponi-

24

DIAGNSTICO EM GENTICA MOLECULAR - Hematologia

Responsvel Tcnico: Ariovaldo Mendona - CRMMG 33477 / Inscrio CRM 356 - MG