INMUNOFIJACION

Combina los principios de la electroforesis

y la inmunoprecipitacin.
La tcnica fue descrita en 1964 por
Wilson.
Posteriormente modificada por Alper y
Johnson en 1969.

Utilizada para la identificacin monoclonal
de inmunoglobulinas, en el estudio del
polimorfismo proteico y para estudios
genticos tales como alfa-1-antitripsina.

En la inmunofijacin de protenas, la
muestra es colocada sobre un gel de
agarosa en diferentes posiciones, y
sometida a un corrimiento electrofortico.
Posteriormente, cada corrimiento por
separado es cubierto con un suero
monoespecfico para IgG, IgA, IgM, kappa
y lambda.
Despus de un perodo de incubacin en donde
se forman los complejos inmunes antgeno
anticuerpo, si es que existe una cantidad
equilibrada de anticuerpo un exceso, se harn
evidentes los complejos inmunes formados, ya
que son muy grandes e insolubles para ser
eliminados por lavado, mientras que la fraccin
de anticuerpo no unida y las dems protenas
son removidas, dejando slo los
inmunoprecipitados.

muestras
Suero fresco o refrigerado
LCR
ORINA
NO UTILIZAR PLASMAS PORQUE EL
FIBRINOGENO PRESENTA EN LA
MUESTRA OCASIONA INTERFERENCIA
VENTAJAS
1. El proceso es ms rpido que una Inmunoelectroforsis.
Aproximadamente 2 1/2 hrs.
2. Es fcil distinguir las diferentes bandas cuando tenemos
una gamapata biclonal con movilidad similar y de la
misma clase de inmunoglobulina.
3. El personal no requiere gran experiencia para interpretar
las bandas como en el caso de la Inmunoelectroforsis.
4. La inmunofijacin es ms exacta en la deteccin de la
protena de Bence Jones.
5. La inmunofijacin tiene una mejor resolucin de bandas
pequeas bandas muy cercanas entre s.
INMUNOCROMATOGRAFIA:
PRUEBAS RAPIDAS
Tcnicas Inmunolgicas
Las tcnicas de serologa diagnstica
caen en tres categoras generales:
Pruebas de unin primaria (miden directamente el
enlace Ag-Ac)
Pruebas de unin secundaria (miden los resultados
de la interaccin Ag-Ac in-vitro)
Pruebas de unin terciaria (miden el efecto
protector real de los Ac en un animal)
Pruebas Inmunodiagnsticas
Unin Primaria: - Enzimticas: ELISA, IHQ, Dot Blot,
Western Blot.
- Fluorescentes: IFD, IFI.
- Radiactivas: RIA.
- Metales: Inmunocromatografa
Union Secundaria: - Aglutinaciones.
- Precipitaciones.
- Fijacin del Complemento.
Union Terciaria: Sistemas Vivos
Pruebas de unin primaria
Este tipo de pruebas se realizan combinando
antgenos y anticuerpos y despus midiendo
directamente las cantidades de
inmunocomplejos que se hayan formado.
Son tcnicas de inmunomarcado. Se utilizan
marcadores como radioistopos, colorantes
fluorescentes, o enzimas para identificar uno
de los reactivos.
CONCEPTO
La inmunocromatografa es una de las
tcnicas de inmunodiagnstico ms
modernas cuyas principales ventajas son
la sencillez y rapidez del test.
No es necesario reactivos ni
instrumentacin adicional, como en el
campo clnico. El ejemplo ms conocido
son los test de embarazo de las
farmacias.
Membrana de nitrocelulosa o nylon hay
absorbidos en la lnea de reaccin
anticuerpos contra el antgeno que buscamos
La lnea control anticuerpos anticonjugado,
de forma que cuando la muestra contiene
antgeno, este fluye por la membrana
quedando retenido en la lnea de reaccin.
El conjugado, que tambin es un anticuerpo
especfico frente al antgeno que buscamos,
est marcado con una molcula de oro
coloidal, que tambin fluye por la membrana,
.
Es retenido por el antgeno en la lnea de
reaccin y por el anticuerpo en la lnea
control.
En el caso de muestras negativas que no
contienen antgeno, el conjugado es
retenido nicamente en la lnea control.
Ests tcnicas son rpidas, obtenindose
resultados en 15-30 minutos
Inmunocromatografa
Son tcnicas cualitativas sencillas que utilizan
anticuerpos marcados con metales pesados
como el oro (color rosa) o el selenio (color azul).
El ejemplo ms clsico es la prueba de
embarazo en humanos.

La tcnica consiste en hacer que una solucin de Ag (por ej. sangre
entera) fluya a travs de una tira porosa. El Ac puede estar marcado
con oro (banda color rosa) o con selenio (banda color azul).

Sobre una membrana de nitrocelulosa, se encuentran
absorbidos en la lnea de reaccin anticuerpos contra el
antgeno que buscamos y sobre la lnea control
anticuerpos anti-conjugado, de forma que cuando la
muestra contiene antgeno, este fluye por la membrana
quedando retenido en la lnea de reaccin.
El conjugado, que tambin es un anticuerpo especfico
frente al antgeno que buscamos, est marcado con una
molcula no contienen antgeno, el conjugado es retenido
nicamente en la lnea control. Ests tcnicas de oro
coloidal, que tambin fluye por la membrana, es retenido
por el antgeno en la lnea de reaccin y por el anticuerpo
en la lnea control.
En el caso de muestras negativas, el conjugado ser
retenido nicamente en la lnea de control. Los resultados
se dan visualizan entre 15 y 30 minutos.



TCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFA
C T S
FUNDAMENTO DE INMUNOCROMATOGRAFA
PARA DETECCIN DE ANTGENOS
TIRA NITROCELULOSA
Antgeno en muestra
Anticuerpo de Captura
contra antgeno
especfico
Anticuerpos de deteccin
marcados con
Oro Coloidal
Anticuerpo de Captura
contra anticuerpo
de deteccin


PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
POSITIVO
NEGATIVO
El mtodo basado en el oro coloidal como marcador ha
tenido un gran desarrollo en los ltimos aos y sto por
diversas razones:
En primer lugar las partculas de oro se pueden fabricar
en diferentes tamaos, de entre 2-3 nm a 100-150 nm,
con todas las posibles medidas intermedias.
Estas partculas pueden fabricarse en el laboratorio
aunque actualmente existe una amplia disponibilidad
comercial.
Las partculas de oro absorven todo tipo de protenas
formando complejos muy estables.
Muchas de las protenas acomplejadas con oro
mantienen sus propiedades y actividad biolgica.
Los tamaos de 2 a 3 nm son los menores disponibles
para un marcador y por ello el oro es el marcador que
permite la mxima resolucin.

La utilizacin del oro como marcador unido a protena A,
anticuerpos u otras protenas, se ha limitado tradicionalmente a la
microscopa electrnica, pero recientemente el desarrollo de
mtodos de amplificacin de la seal mediante precipitacin de
plata metlica ha permitido su aplicacin en microscopa ptica.
Los mtodos de amplificacin de seal se basan en la propiedad
del oro de catalizar la reduccin de iones plata a plata metlica en
presencia de un agente reductor. Durante este proceso las
partculas de oro son rodeadas por plata metlica haciendose
visibles al microscopio ptico con una coloracin marrn
oscuro. Se utiliza el lactato de plata como donador de iones y la
hidroquinona como reductor a un pH de aproximadamente 3.5.
Actualmente el oro coloidal unido a anticuerpos o a protena A es el
marcador ms empleado en microscopa electrnica.