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Este documento describe experimentos de cromatografía sobre papel y en capa fina para separar y identificar sustancias orgánicas como aminoácidos, analgésicos y tintas de marcadores. Se explican los principios básicos de la cromatografía y los procedimientos experimentales utilizados, incluyendo la separación de los pigmentos de los marcadores, la detección de aminoácidos mediante la reacción con ninhidrina y la mejor separación de analgésicos usando acetato de etilo-ácido acético como solvente
Este documento describe experimentos de cromatografía sobre papel y en capa fina para separar y identificar sustancias orgánicas como aminoácidos, analgésicos y tintas de marcadores. Se explican los principios básicos de la cromatografía y los procedimientos experimentales utilizados, incluyendo la separación de los pigmentos de los marcadores, la detección de aminoácidos mediante la reacción con ninhidrina y la mejor separación de analgésicos usando acetato de etilo-ácido acético como solvente
Este documento describe experimentos de cromatografía sobre papel y en capa fina para separar y identificar sustancias orgánicas como aminoácidos, analgésicos y tintas de marcadores. Se explican los principios básicos de la cromatografía y los procedimientos experimentales utilizados, incluyendo la separación de los pigmentos de los marcadores, la detección de aminoácidos mediante la reacción con ninhidrina y la mejor separación de analgésicos usando acetato de etilo-ácido acético como solvente
(1) Laboratorio de Qumica Orgnica I, Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad de los Andes, Mrida 5101, Venezuela. (1) analioj@hotmail.com; analioj@gmail.com Entregado: 19-01-2012.
Resumen Se estudi experimentalmente la separacin e identificacin de diversas sustancias orgnicas como los aminocidos, analgsicos y tintas de los marcadores, mediante la cromatografa de papel y en capa fina, la cromatografa es una tcnica de separacin de una mezcla de solutos en solucin, donde una fase mvil desplaza los componentes a travs de una fase estacionaria, que interacciona con los solutos; esta tcnica se utiliza en la qumica orgnica y en muestras biolgicas. Encontrndose que los marcadores se separaron en sus pigmentos bases, los aminocidos al reaccionar con la ninhidrina, se tornan de un color morado, los analgsicos se separaron mejor en el solvente 12.1 Acetato de Etilo-cido Actico, y la muestra A contena cafena, las muestras B y C Acetaminofen. Palabras Clave: Cromatografa; Aminocidos; Analgsicos; Pigmentos; Fase Estacionaria; Fase Mvil.
Abstract The separation and identification of various organic substances such as amino acids, analgesics and marker inks was studied experimentally by paper chromatography and thin layer chromatography, the chromatography is a technique for separating a mixture of solutes in solution, where a phase mobile moves component through a stationary phase, that interacts with the solutes; its used in organic chemistry and biological samples. Finding out that the markers were separated in their pigment bases, the amino acids react with the ninhydrin, they turn a purple color, the painkillers are better separated for the solvent 12.1 Acetic Acid-ethyl acetate, and the sample contained caffeine, samples B and C acetaminophen. Keywords: Chromatography; Amino Acids; Analgesics; Pigments; stationary phase; mobile phase.
Introduccin La cromatografa es una tcnica de separacin de una mezcla de solutos en solucin, basndose en las diferencias relativas de las velocidades, con que se mueven cada uno de los componentes de la mezcla, a travs de un medio slido poroso insoluble, y arrastrados por un disolvente en movimiento. 1
La cromatografa sobre papel es una de las tcnicas cromatogrficas ms simples y antiguas, la separacin se realiza sobre tiras u hojas de papel de filtro, especialmente elaborado. La fase estacionaria consiste en molculas de agua absorbidas en las fibras de papel y la fase mvil es el solvente, por lo tanto, esta cromatografa es una tcnica de particin lquido- lquido. La fase mvil, que se mueve y arrastra a
los distintos componentes, permite que en el sistema formado operan dos tipos de fuerzas: fuerzas propulsoras y retardantes. 1 Uno de los aspectos ms importantes de la cromatografa, es que un sistema cromatogrfico dado, el movimiento relativo de un compuesto, con respecto al frente de solvente, es una propiedad caracterstica y reproducible. Se expresa como un valor R f . 1 El R f se define como:
La cromatografa en capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido, en donde la fase estacionaria es slida y la fase mvil es lquida. Se lleva a cabo sobre una capa delgada uniforme de adsorbente adecuado, extendido sobre una lamina de vidrio, y activada por un calentamiento en un horno de 100 C. Influyen dos factores, las fuerzas de atraccin entre los solutos y los adsorbentes y las fuerzas que tienden a separar todos los solutos. 1 Ilustracin 1. Cromatografa sobre Papel. Constante de Rf. 1
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Ilustracin 2. Cromatografa en Capa Fina. Separacin de los Componentes. 1 La cromatografa es una de las tcnicas ms empleadas en las muestras complejas como las sustancias biolgicas, por separar con una gran eficiencia mezclas de aminocidos, analgsicos y muchas molculas orgnicas. 2 Los aminocidos es la unidad bsica de los pptidos o protenas, es decir, uno de los componentes ms importantes para el desarrollo para la vida; consisten en un grupo amino alfa o beta, a un carboxilato. 2 Los analgsicos son compuestos que tienen actividad biolgica, que se utilizan para aliviar o eliminar el dolor en los organismos vivos. 9 Parte Experimental Reactivos: N-butanol, cido Actico, Agua Desionizada, Etanol, Amoniaco, Lisina, cido Asprtico, Metionina, Leucina, Ninhidrina, Iodo, Cafena, Acetaminofen, cido Acetilsalcilico y Acetato de Etilo. 1 Materiales: Lpiz mongol, 2 escuadras grandes, 1 regla, marcadores negro y de colores, papel filtro, Cilindro graduado de 250 mL, 2 clips, tapn, Estufa, pipeta, capilar, Vasos de precipitado de 800-1000 mL,12 placas de vidrio, papel aluminio y vidrio de reloj. 1
Procedimiento Experimental: Cromatografa sobre papel. Cromatografa ascendente de tinta de marcador: a) El papel: maniplelo con mucho cuidado. Determine la orientacin de la fibra del papel. Corte una tira de papel de 23 x 2,5 cm (el lado debe ser paralelo a la direccin de orientacin de la fibra). Trace a 1 cm de uno de los extremos una raya paralela al borde, (use lpiz de grafito). 1 b) La muestra a aplicar: es tinta de marcador negro. Se aplicar directamente con el marcador, trazando una lnea de 1 cm de longitud sobre la raya de grafito, a igual distancia de los lados. Deje secar la tinta. 1 c) La cmara de desarrollo: (cubeta cromatogrfica): la constituye un cilindro graduado de 250 ml con un tapn monohoradado. 1 d) El disolvente: es la fase orgnica de una mezcla de n-butanol, cido actico y agua, en la proporcin 4:1:5 (en volumen). 1
e) Procedimiento: con dos clips, suspenda la tira de papel del tapn. Ajuste el tapn (con la tira de papel suspendida) en la boca del cilindro graduado. Suba o baje uno de los clips hasta que el extremo de la tira de papel quede lo ms cerca posible del fondo del cilindro (1 cm). Retire el tapn con la tira de papel. Coloque el disolvente en el cilindro procurando no mojar las paredes, y en cantidad suficiente de manera que toque ligeramente la tira de papel. Introduzca la tira de papel y ajuste bien el tapn. Asegrese que el nivel del disolvente no est por encima del punto de aplicacin de la muestra. La tira de papel debe quedar centrada; evite que se pegue a las paredes del cilindro. Al cabo de 2 y horas saque el cromatograma. Marque inmediatamente el frente del disolvente. Seque el cromatograma. 1 f) Anlisis del cromatograma: marque con un lpiz el borde de cada mancha que observe a simple vista. Ilumine el cromatograma con luz ultravioleta. En caso de que aparezcan nuevas manchas, delinee stas anotando el color que presentan. 1 1.2.- Repita la cromatografa anterior, usando como disolvente una mezcla de n-butanol, etanol y amonaco 2N, en la proporcin 2:1:2 (en volumen). Analice el cromatograma y compare los resultados con los obtenidos en el cromatograma 1. 1 Cromatografa ascendente de aminocidos a.- El papel: manipule el papel con mucho cuidado. Evite todo contacto directo de los dedos con el papel. Determine la orientacin de 3
la fibra y corte una pieza rectangular (22 x 12 cm) de papel. La direccin de la fibra debe ser paralela al lado de 12 cm. Trace a 1 cm de cada borde del lado ms grande una raya paralela. (use lpiz de grafito). Sobre una de las rayas marque trece puntos, con 1,5 cm de separacin entre cada uno de ellos; el primero y el ltimo deben quedar a 2 cm del borde: 1
b.- Las muestras a aplicar: son soluciones de 4 aminocidos (3 mg/ml) en etanol-agua (1:1) y extractos preparados de jugo de limn, naranja y tomate. Con capilares finos (o micropipetas) aplique las siguientes muestras: punto N 1, dos gotas de solucin de lisina (LYS), punto N 2, dos gotas de solucin de cido asprtico (ASP), punto N 3, dos gotas de solucin de metionina (MET) punto N 4, dos gotas de solucin de leucina (LEU), punto N 5, dos gotas de cada una de las soluciones de los cuatro aminocidos, punto N 6, dos gotas de extracto de jugo de limn, punto N 7, cuatro gotas de extracto de jugo de limn, punto N 8, dos gotas de extracto de jugo de naranja, punto N 9, cuatro gotas de extracto de jugo de naranja, punto N 10, dos gotas de extracto de jugo de tomate, punto N 11, cuatro gotas de extracto de jugo de tomate, punto N 12, tres gotas de solucin de cada uno de los cuatro aminocidos y punto N 13, tres gotas de solucin de cido asprtico. Las manchas aplicadas no deben tener un dimetro mayor de 2 cm. Deje secar cada gota antes de aplicar la siguiente. Antes de introducir el papel en el disolvente las manchas deben estar secas. 1 a. La cmara de desarrollo: La constituye un vaso de precipitados de 800-1000 ml, el cual, se cubre con un trozo de papel aluminio. 1
b. El disolvente: es el n-BuOH, AcOH, H 2 O (4:1:5) usado en la primera cromatografa. 1
c. Procedimiento: En el vaso de precipitados coloque 10 ml del disolvente y tpelo hermticamente. Doble la pieza de papel hasta obtener un cilindro. Una los extremos, sin que estos se toquen, mediante tres grapas. Introduzca el cilindro de papel en la cmara de desarrollo; al cabo de dos horas aproximadamente, el frente del disolvente debe alcanzar 11 cm. Saque el cromatograma e inmediatamente marque con un lpiz el frente del disolvente. Seque el cromatograma. Rocelo con la solucin reveladora (ninhidrina al 0,5% en n- butanol), y llvelo a la estufa (120 C) durante 10 minutos. Marque con un lpiz el borde de cada mancha. 1 d. Anlisis del cromatograma: Calcule el R f de cada mancha. Tabule los resultados, indicando el color y el R f de cada mancha, as como el disolvente usado y la temperatura. Por comparacin indique cuantos aminocidos estn presentes en los extractos de los jugos e identifique algunos de ellos. 1
Cromatografa ascendente de varias tintas de marcadores: Repita la cromatografa 3. Use el mismo disolvente. Las muestras a aplicar son tintas de diferentes colores y marcas. La aplicacin se hace directamente con el marcador. Analice el cromatograma. Establezca si en tintas diferentes de una misma marca hay colorantes iguales. Establezca si tintas de marcas diferentes tienen los mismos colorantes. 1 Experimentos de Cromatografa en capa fina. Preparacin de las placas. Lave bien con agua y jabn 12 placas de vidrio (portaobjetos), escrralas y squelas completamente sobre papel adsorbente. Evite que a las placas se le pegue residuos del papel. Adhiera dos placas y sujetndolas por uno de sus extremos introdzcalas lentamente en una suspensin de 60 gramos de gel de slice tipo G en 150 ml de una mezcla de cloroformo - metanol (2:1). Saque las placas lentamente con velocidad continua; escurra la suspensin sobrante en el extremo de la placa apoyando el borde inferior de las placas en la pared del envase que contiene la suspensin. Con un movimiento de los dedos, despegue las placas. Permita que el solvente se evapore y proceda a limpiar con la punta del dedo el exceso de adsorbente que se haya permanecido en los bordes y en la superficie no cubierta de la placa. Repita el proceso con las otras 10 placas 4
restantes. Active 10 de las placas en una estufa a 120C durante 1 hora. 1 Cmaras de desarrollo. Lave bien y seque completamente los envases que servirn como cmaras de desarrollo. Coloque en su interior una banda de papel de filtro que alcance para cubrir las 2/3 partes de las paredes internas de los envases. 1 En cada uno coloque un volumen de solvente a usar tal que alcance una altura de aproximadamente 3 mm sobre el fondo del envase ( 5 ml). Tape el recipiente con un crculo de papel aluminio o con un vidrio de reloj y deje en reposo para permitir que el papel de filtro interno se impregne completamente con el solvente. Agregue ms solvente hasta alcanzar el nivel inicial. 1 Cmara de revelado con vapores de yodo. Use un recipiente, lvelo bien y squelo completamente. Coloque en su interior unos cristales de yodo. Tape el envase y djelo en reposo. 1 Aplicacin de las muestras. Debe utilizar un capilar fino para cada una de las soluciones a ser utilizadas. Llene el capilar con la solucin a cromatografiar, aplique una pequea cantidad de la solucin, procurando que la mancha obtenida no tenga un dimetro superior de 2mm. Evite romper la capa de adsorbente con la punta del capilar. La aplicacin debe hacerse a 6 mm aproximadamente del extremo de la placa. 1
Cuando haya aplicado todas las muestras trace una raya con un lpiz de grafito de punta fina en el extremo opuesto de la placa a 3 mm aproximadamente del borde del adsorbente. Esto se consigue raspando el absorbente con la punta del lpiz. 1 Cromatografa de varios analgsicos. Las muestras a analizar son soluciones de cuatro analgsicos en cloroformo. Aplique las muestras a intervalos de 5 mm, use un capilar para cada solucin. Evite en todo momento confundirlos, de lo contrario contaminar las soluciones y los resultados sern impredecibles. Placa N 1: primer punto: 2 gotas de solucin de cafena, segundo punto: 2 gotas de solucin de cido Acetilsaliclico y tercer punto: 2 gotas de solucin de Acetaminofen. Desarrolle el cromatograma usando acetato de etilo como solvente. Inmediatamente despus de obtenido el cromatograma, localice las manchas usando una lmpara Ultravioleta, mrquelas con un lpiz y luego introduzca la placa en la cmara de yodo y observe si aparecen nuevas manchas. Placa N 2. Aplique las mismas soluciones que us para la placa N 1. Use Heptano como solvente. Placa N 3 Aplique las mismas soluciones que us para la placa N 1. Use Acetato de Etilo-cido Actico 12.1 como solvente. Placa N 4. Aplique las mismas soluciones que us para la placa N 1. Use Acetato de Etilo-Etanol-cido Actico 25.1.1 como solvente. Placa N 5. Aplique las mismas soluciones que us para la placa N 1. 1 Use une mezcla de como solvente Acetato de Etilo-Etanol-cido Actico 7.3.1,2. Placa N 6. Aplique las siguientes muestras patrones en una placa grande: primer punto: 2 gotas de solucin de cido Acetilsaliclico, segundo punto: 2 gotas de solucin de cafena, tercer punto 2 gotas de solucin de Acetaminofen, cuarto punto: 2 gotas de Muestra A, quinto punto: 2 gotas de Muestra B y sexto Punto 2 gotas muestra C. Use como solvente aquel que haya desarrollo el mejor cromatograma en las cinco primeras placas. 1
Observaciones Experimentales Cromatografa de Tinta de Marcador Negro El marcador negro se aplic sobre el papel, luego, se sumergi ligeramente sobre el solvente n-butanol, Acido Actico y amoniaco 4.1.5. Otro papel se meti sobre el solvente n- butanol, etanol y amoniaco 2.1.2; obtenindose a los segundos, en ambos casos, una separacin de color azul sobre la mancha inicial del marcador por el desplazamiento del solvente; al final se separaron los colores carne, rojo, amarillo, verde (solo Solvente 2.1.2), azul y azul claro. 5
Cromatografa de Tintas de Marcadores a color Se recort un papel rectangular, marcndose 13 colores diferentes; al colocarlo en el solvente se puede observar la separacin en colores como amarillos, rojo, azul, azul claro, rosado y amarillo por la ascensin del solvente. Al aplicarles la lmpara de UV el color rosado se volvi fluorescente.
Ilustracin 5. Cromatografa sobre Papel de Marcadores de Colores
Aminocidos Las soluciones de aminocidos, extractos de limn, tomate y naranja son incoloros. Se colocaron los puntos sobre el papel, y el solvente 2.1.2 en el vaso de precipitado; se vea el desplazamiento del solvente por el papel y la separacin en los diferentes colores. Se sac el papel cuando el solvente llego casi al final. Al aplicarle Ninhidrina se formaron compuestos coloreados violetas y blancos. Ilustracin 6. Cromatograma sobre Papel de Aminocidos
Capa Fina de Analgsicos Se colocaron las manchas de cafena Acetaminofen y cido Acetilsaliclico sobre las 5 placas y se agreg sobre el solvente; con la lmpara de UV se observ el desplazamiento de manchas de color violeta. Luego, se pas a una cmara de iodo, se vio que una de las manchas se tornaba de color marrn. En una placa grande se colocaron 3 muestras desconocidas, Acetaminofen, cafena y cido Acetilsalcilico con el solvente que separo mejor, observndose 3 manchas y otras 2 se desplazaron la mismas distancias.
Ilustracin 7. Cromatografa Capa Fina de Analgsicos Acetaminofen, cafena y cido Acetilsalcilico. (a) Solvente Heptano (b) Solvente Acetato de Etilo-Etanol 12.1 (c) Acetato de Etilo-Etanol-cido Actico 25.1.1 (d) Acetato de Etilo (e) Acetato de Etilo, Etanol y cido Actico 7.3.1,2.
Ilustracin 8. Capa Fina Analgsicos Muestras (a) Cafena (b) Acetaminofen (c) cido Acetilsalcilico (d) Muestra A (e) Muestra B (f) Muestra C. (Solvente Acetato de Etilo-Etanol 12.1)
Resultados Tabla N 01. Rf Cromatografa sobre Papel Marcador Negro Color Rf Solvente 4.1.5 Solvente 2.1.1 Carne 0,02 0,06 Rojo 0,11 0,19 Naranja 0,27 0,40 Verde - 0,46 Azul 0,36 0,56 Azul Claro 0,54 0,74
Tabla N 02.Cromatografia sobre Papel Tintas de Marcadores (solvente n-butanol, etanol y amoniaco 2.1.1) Marcador Color Rf Naranja Amarillo 0,07 Rosado 0,17 Carne Amarillo 0,04 Rosado Claro 0,17 Gris Amarillo 0,03 Rosado Claro 0,15 Azul Claro 0,52
Tabla N 04. Cromatografa Capa Fina de Analgsicos Solvente Asignacin Rf Color Heptano Acetaminofen, Cafena y cido Acetilsaliclico 0 Violeta(UV) Marrn (I) Acetato de Etilo Acetaminofen 0,80 Violeta(UV)/ Marrn (I) Cafena y cido Acetilsaliclico 0,46 Violeta (UV) Acetato de Etilo- Etanol- Acido Actico 7.3.1,2 Acetaminofen 0,82 Violeta(UV)/ Marrn (I) Cafena y cido Acetilsaliclico 0,55 Violeta (UV) Acetato de Etilo- Etanol 12.1 Acetaminofen 0,33 Violeta(UV)/ Marrn (I) cido Acetilsaliclico 0,76 Violeta (UV) Cafena 0,98 Violeta (UV) Acetato de Etilo- Etanol- Acido Actico 25.1.1 Acetaminofen 0,75 Violeta(UV)/ Marrn (I) Cafena y cido Acetilsaliclico 0,49 Violeta (UV)
Tabla N 05. Cromatografa Capa Fina de Analgsicos Muestras A, B y C. (solvente n-butanol, etanol y amoniaco 2.1.1) Compuesto Asignacin Rf Color Cafena Cafena 0,97 Violeta (UV) Acido Acetilsaliclico Acido Acetilsaliclico 0,94 Violeta (UV) Acetaminofen Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/ Marrn (I) 7
Muestra A Cafena 0,97 Violeta (UV) Muestra B Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/ Marrn (I) Muestra C Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/ Marrn (I)
Anlisis de Resultados Los marcadores estn compuestos por muchos pigmentos, pueden ser acuosos, es decir, el solvente utilizado para disolver los pigmentos es agua. Al aplicar el marcador negro sobre papel, los pigmentos, al ser solubles en agua, se sitan sobre la humedad del papel. Despus, cuando el solvente orgnico comienza a subir por el efecto de capilaridad, se forma sobre la humedad una capa u otra fase lquida del solvente, es decir, se constituye una particin liquido-liquido, donde una de las fases, es el agua, que contiene los pigmentos, y la otra, consiste en el solvente. 3,1 Los pigmentos son compuestos orgnicos generalmente con anillos aromticos fusionados con grupos funcionales polares, por lo cual, tienen solubilidad en solventes orgnicos y en medios acuosos. Entonces, en la particin lquida-lquida debe existir una competencia entre las dos fases, por los solutos, por lo cual, se repartirn de acuerdo con la ley de reparto, y a medida que el solvente va subiendo por el papel, va desplazndolos, de acuerdo a la estructura de dichos compuestos, regenerando una nueva capa de solvente puro. Por tal razn, se pueden ver como los pigmentos ms afines al solvente orgnico tienen un mayor Rf, ya que son arrastrados ms fcilmente por el solvente. 4,1 Al comparar el solvente n-butanol, Acido actico y agua 4.1.5 con el solvente n- butanol, etanol y amoniaco 2.1.2, se pudo observar una mejor separacin de los pigmentos, con el solvente 2.1.2, por tener mayores valores de Rf de los distintos compuestos e incluso una mayor diferencia (ver Tabla N 01). Esto ocurre, ya que los pigmentos poseen distintas estructuras, ms afines a los compuestos orgnicos, es decir, se desplazan con mejor eficiencia en el solvente ms apolar. Adems, las pequeas diferencias de grupos funcionales polares entre los pigmentos, permite que el solvente tenga una mayor sensibilidad a la estructura del compuesto, dando lugar a una mayor separacin de los componentes. Demostrado por la separacin del color verde (Solvente 2.1.2), que en el solvente 4.1.5 no se observa. Luego, al estudiar la cromatografa de marcadores de distintos colores, se pudo ver que estn compuestos por mezcla de los mismos pigmentos (Principalmente rojo, azul claro y amarillo), corroborndose por los valores de Rf semejantes entre ellos (ver Tabla N 02). Los distintos colores se forman por la variacin en la concentracin de los componentes, o el uso de otro pigmento de diferente color. 3,1
El marcador morado (marca sharpie) no posee como solvente agua, sino un solvente orgnico; porque se desplaz la mancha de los pigmentos con el frente de solvente, por lo tanto, se puede decir que no se forma la particin lquido-lquido entre la humedad del papel, con los solutos, y el solvente. Los pigmentos del Marcador Sharpie no son iguales al marcador Faber Castell, por tener valores de Rf distintos (Ver Tabla N 02) y colores diferentes. Se separ mediante la cromatografa sobre papel, una mezcla de 4 aminocidos, de cido asprtico, metionina, lisina y leucina, comparndolos con muestras patrones. Se encontr para la Lisina un valor de Rf de 0,28, el Acido Asprtico 0,11, la Metionina 0,5 y la Leucina 0,62, con respecto a los patrones son resultados exactos. El valor mayor de Rf fue para la leucina, y el menor el acido asprtico; esto ocurri por la polaridad del solvente, es poco polar, y los aminocidos estudiados como la leucina poseen una estructura mas apolar, con el grupo isobutilo, por lo tanto, se desplaza mejor en el solvente que la metionina, lisina y acido asprtico. En cambio, la metionina tiene un tomo de azufre en el grupo R, la lisina un grupo amino y el cido asprtico un grupo carboxilato, que le dan cierta polaridad. Entonces, como el grupo carboxilato es mas polar se desplaza menos en el solvente, por tal, su valor bajo de Rf. 5 8
Ilustracin 10. Aminocidos estudiados. El extracto de limn contena cido asprtico, de acuerdo al valor de Rf de 0,11 encontrado, y Prolina por la formacin con ninhidrina de un complejo de color blanco. 6 En el extracto de naranja se encontr la presencia de Prolina, cido asprtico y lisina, con valores de Rf del cido Asprtico de 0,11, lisina 0,26 y el complejo blanco con ninhidrina, al compararlo con los patrones tomados, son resultados muy exactos. 7 El extracto de tomate est compuesto por Prolina y acido asprtico, por obtenerse un valor de Rf de 0,11 acido asprtico y color blanco del primer punto, caracterstico de la Prolina. 8
La adicin de un exceso de la muestra a cromatografiar, afecta ligeramente a los valores de Rf, ya que la mancha es ms grande y puede perder ms fcilmente la forma, lo cual dificulta tomar la distancia de la mancha, por consiguiente, el valor de Rf no es muy exacto. La cromatografa de capa fina permite determinar con mucha mayor precisin los componentes de las muestras, al aplicar la muestra sobre la placa, ocurre una interaccin entre los compuestos y el adsorbente denominada adsorcin, se forma una particin slido-lquido. Cuando el solvente sube, los compuestos comienzan a ser desplazados, dependiendo de la fuerza de adsorcin y la solubilidad de los solutos, siendo liberados hacia el flujo de solvente. 1
El solvente que mejor separa la mezcla de analgsicos, cafena, acido Acetilsalcilico y Acetaminofen, fue el Acetato de Etilo-Etanol 12.1, por poseer una polaridad determinada, necesaria para solubilizar diferencialmente a los 3 compuestos, los cuales, son polares. 1 Ilustracin 11. Analgsicos Estudiados.
La muestra A es la cafena, ya que posee un valor de Rf de 0,97. Mientras, la muestra C y B eran Acetaminofen, por el valor de 0,23 de Rf; al compararlas con los patrones estudiados. (Ver Tabla N 05). Al aplicarles radiacin UV a las placas, los orbitales moleculares de la muestras interaccionan con la radiacin, por tener grupos cromforos (carbonilos, aminas) y enlaces , ocurriendo la transicin electrnica
* , que se transforma en la liberacin de energa, en forma de luz violeta. Luego, al introducirlas en la cmara de iodo, las muestras reaccionan formando complejos con iodo coloreados. Conclusin La cromatografa sobre papel se basa en la separacin en una particin lquido-lquido, mientras la cromatografa en capa fina consiste en una particin slido-lquida. Los marcadores estn compuestos por una serie de pigmentos, los cuales, son compuestos aromticos, que se separan mejor en un solvente apolar. Los extractos de tomate y limn contienen cido Asprtico y Prolina, en cambio el extracto de naranja posee cido Asprtico, Prolina y Leucina. Los aminocidos al reaccionar con la ninhidrina se forman complejos violetas, a excepcin de la Prolina que se torna blanco. Las frutas contienen aminocidos entre sus componentes principales. La muestra A contiene Cafena, la muestra B y C Acetaminofen. Referencias Bibliogrficas 1) Uzcategui N. Manual de Laboratorio de Qumica Orgnica IA. Mrida, Venezuela. Cromatografa sobre Papel y Capa Fina. 2) Mathews Christopher. Bioqumica. Madrid, Espaa. Introduccin a las Protenas. Editorial Pearson/Addison Wesley. (2002) 3) Tintas de Marcadores. http://www.quiminet.com/pr4/TINTA%2BPAR A%2BMARCADORES.htm 4) Pigmentos. http://es.wikipedia.org/wiki/Pigmento 5) Laguna, J. Bioqumica. (1968). Segunda Edicin. Editorial Fournier S.A. Mxico D.F. 6) Aminocidos del Limn. http://alimentos.org.es/aminoacidos-limon 7) Aminocidos de la Naranja. http://alimentos.org.es/aminoacidos-naranja 8) Aminocidos del Tomate. http://alimentos.org.es/aminoacidos-tomate 9) Analgsicos. http://es.wikipedia.org/wiki/Analg%C3%A9sico O NH 2 C H 3 CH 3 OH Leucine (Leu) O NH 2 S C H 3 OH Methionine (Met) Lysine (Lys) O NH 2 N H 2 OH OH O H NH 2 O O Aspartic Acid (Asp) O O CH 3 O OH cido Acetilsalcilico CH 3 C H 3 CH 3 O O N N N N Cafena O H NH O CH 3 Acetaminofen