Cdigo: I- FQUI-LAC-08

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5/Enero/2009
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Instructivo para eI procesamiento
de Espermatobioscopas.
1.- OBJETIVO
Analizar muestras biolgicas de esperma obtenidas de usuarios que acuden al Laboratorio de Anlisis
Clnicos de la Facultad de Qumica UADY recolectadas en condiciones adecuadas para su
procesamiento.
2.- ALCANCE
Aplica a muestras biolgicas de esperma, que cumplan con las condiciones para el procesamiento de
la espermatobioscopa.
3.- DESCRIPCIN DE LA OPERACIN
Para el procesamiento de Espermatobioscopas, el qumico responsable de realizar el anlisis deber:
1. Portar la bata de laboratorio, as como material de proteccin y guantes.
2. Registrar los datos del usuario (nombre, edad, sexo), nmero de orden de la muestra, fecha y hora de
recoleccin y motivo del anlisis en el formato F-FQU-LAC-06
Para el procesamiento de Espermatobioscopas, el usuario deber:
3. Cumplir como mnimo, con tres das de abstinencia sexual previos al estudio.
4. Realizar un aseo del rea genital previo a la recoleccin de la muestra biolgica.
5. Recolectar la muestra mediante masturbacin en un frasco limpio y estril, debidamente identificado con
el nombre del usuario, fecha y hora de recoleccin de la muestra.
PASOS PARA EL ANLISIS DE ESPERMATOBIOSCOPIAS
EXAMEN DE LOS CARACTERES ORGANOLPTICOS
El lquido seminal est formado por la secrecin de los conductillos seminferos, del aparato seminal y de las
glndulas relacionadas (vesculas seminales, glndulas prostticas y bulbouretrales). En esencia el contenido
lquido se origina en la prstata y vesculas seminales. Recin eyaculado el semen es lquido; coagula con
rapidez y experimenta una licuacin alrededor de los 15 minutos despus de haber sido emitido. No contiene ni
protrombina ni trombina, pero si fibringeno y tromboplastina; aun cuando no se conoce muy bien el mecanismo
de la coagulacin, este parecera producirse por la transformacin del fibringeno en fibrina. La licuacin ocurre
por la actividad enzimtica de la fibrinolisina.
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Inmediatamente de ser recepcionada Ia muestra incubar a (37 C) durante 30 minutos.
SUPERVSAR LA MUESTRA Y REGSTRAR EL TEMPO DE LCUEFACCN
Tiempo de Iicuefaccin.- La muestra de esperma normal puede contener cuerpos gelatinosos que no se licuan.
La presencia de moco puede interferir en el anlisis. Una vez licuada la muestra, se debe mezclar suavemente
con un movimiento rotatorio para reducir el error en la determinacin de la concentracin espermtica. Tiempo
normal entre 15-30 minutos a 37 C.
Entre Ios 30 y 60 minutos observar Ia muestra y determinar:
1. CoIor.- Las muestras deben ser evaluadas a temperatura ambiente, dentro de la primera hora despus
de emitida. Una muestra normal tiene una apariencia homognea, un color blanco opalescente a gris
amarillento. En el caso en los que existe leucocitos, se observa un color amarillo intenso. El rojo indica
hemospermia (sangre) y puede ser consecuencia de neoplasia o un traumatismo en los conductos
seminales. Un color verdoso est relacionado con infeccin de Pseudomonas.
2. Reaccin.- Medir el pH de la muestra con tiras indicadoras del pH.
3. Aspecto.- El aspecto translucido est relacionado con una concentracin espermtica baja y no hay
clulas de la espermatognesis, leucocitos hemates o grmenes. Cuando queda material sin licuar se
reporta como heterogneo.
4. Viscosidad (FiIancia).- Esto se realiza introduciendo un aplicador de madera en la muestra, y se mide la
Filancia de esta en mm con una regla.
5. VoIumen.- Se refiere a la cantidad de muestra y se realiza con la ayuda de una pipeta Pasteur graduada
transportndola a un tubo limpio para continuar con su anlisis. El volumen se reporta en mL.
EXMEN MCROSCPCO MOTLDAD
1. Realizar la observacin microscpica colocando directamente una gota de semen en un portaobjetos.
2. Poner un cubreobjetos y se observa al microscopio la morfologa y la motilidad de los espermatozoides.
3. Dependiendo del movimiento, se reportan en porcentaje los espermatozoides inmviles (cuando tienen
ausencia de movimiento), espermatozoides con movimiento lento o difcil y espermatozoides con
movimiento moderado o vivo.
A Ias 2 horas reaIizar:
Prueba de Vitalidad de los espermatozoides inmviles.
Recuento de espermatozoides
Determinaciones bioqumicas (Capacidad Fecundante y determinacin de Fructosa)
VTALDAD DE LOS ESPERMATOZODES NMVLES
Esta prueba se realiza utilizando eosina, ya que este colorante tie solo clulas muertas.
1. En un porta objetos colocar una gota de la muestra y una gota de colorante eosina.
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2. Se mezcla con un aplicador de madera y se coloca un cubreobjetos.
3. Se observa al microscopio en 40X y se realiza un conteo aproximado de los espermatozoides no teidos
(vivos) y teidos (muertos) dentro de las primeras dos horas.
Nota: Repetir el procedimiento anterior a las 12 horas de la obtencin de la muestra.
RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES
Se realiza en cmara de Newbauer y solucin de Macomber y Saunders. El formol del reactivo inmoviliza a los
espermatozoides, mientras que el bicarbonato al fluidificar el moco, facilita la observacin.
La cantidad normal por mL vara entre 28 a 225 millones y se considera en general como lmite inferior de la
fecundidad un mnimo de 60 millones por mL.
1. En un tubo de ensayo de 15 x 1.5 cm, se realiza una dilucin 1:20 tomando 50 L de la muestra
espermtica + 950 L de la solucin de Macomber y Saunders.
2. Se homogeniza y se carga la cmara de Neubauer con una pipeta automtica.
3. Se coloca la cmara de Neubauer en el microscopio y se ubica la zona para recuento de glbulos
blancos con el objetivo de 40x (Figura 1).
4. Con la ayuda de un contador de clulas se realiza el conteo de los espermatozoides.
5. El conteo se realiza de la misma forma descrita para el recuento de los glbulos blancos (los cuatro
cuadrantes perifricos).
6. El valor obtenido al sumar los cuatro cuadrantes corresponde a 1 mm
3
de esperma, multiplicado por
1000 expresar la cantidad de espermatozoides por mL.
Conteo cmara de Neubauer x 50 x 1000 = Espermatozoides por mL.
Espermatozoides por mL x Vol. Eyaculado = Espermatozoides por eyaculacin
DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD FECUNDANTE
1. En un tubo de ensayo colocar 0.5 mL de colorante azul de metileno y 0.5 mL de la muestra biolgica,
mezclar y llenar un tubo de hematocrito con la ayuda de una cnula.
Figura 1.- Cmara de Neubauer. Los cuadrados de las esquinas marcados con una L,
estn destinados para el recuento de espermatozoides.
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2. Tapar el tubo de hematocrito con parafilm y colocar en la estufa bacteriolgica a 37 C.
3. Anotar el tiempo y hacer observaciones cada 5 min. hasta anotar el momento en que empieza la
decoloracin, se anota este tiempo.
4. Se continan las observaciones hasta que se produzca la decoloracin total.
5. Se informa tiempo de comienzo de la decoloracin y tiempo de la decoloracin total (ptima cuando esta
entre 15 a 30 minutos, moderada cuando esta entre 30 a 60 o mala cuando el tiempo tiene mas de 60
minutos)
DETERMINACIN DE FRUCTOSA. (MTODO ROE ADAPTADO).
Esta basada en la reaccin de Selivanoff, que consiste en provocar la formacin de furfural, que origina con la
resorcina una coloracin rosada.
1. Se saca el reactivo de resorcina previamente refrigerada para atemperar.
2. Se toman tres tubos de ensayo de vidrio de 15 x 1.5 cm.
3. Con la ayuda de una pipeta automtica, se realizar una dilucin 1:50 colocando en un tubo de ensayo
980 L de agua destilada + 20 L de muestra espermtica.
4. En un segundo tubos se coloca 1 mL de la solucin estndar (200 mg/dL).
5. En un tercer tubo, colocar 1 mL de agua destilada.
6. A los tres tubos, se aade 1 mL de resorcina y 3 mL de HCl al 30% como se muestra en la siguiente
tabla:
PACIENTE
(P)
ESTANDAR
(St)
BLANCO
(B)
Dilucin de Esperma
(1:50)
1 mL -- --
Estndar (200 mg/dL) -- 1 mL --
Agua destilada -- -- 1 mL
Resorcina 1 mL 1 mL 1 mL
HCl al 30% 3 mL 3 mL 3 mL
7. Mezclar los tubos y colocar en bao mara a 80 C durante 8 minutos.
8. Retirar los tubos, atemperar y leer las absorbancias del paciente y estndar frente al blanco a 546 nm.
9. Realizar los siguientes clculos:
Abs de Paciente x Conc. de Estndar = Conc. de Fructosa seminaI en mg/dL.
Abs de Estndar
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PREPARACIN DE REACTIVOS
1.- Reactivo de eosina azul.
Eosina azul 0.5 g.
Solucin Fisiolgica 100 mL.
2.- Solucin de Macomber y Saunders.
Bicarbonato de Sodio 5 g
Formol 1 mL
Agua destilada 100 mL
3.- Azul de Metileno (para capacidad fecundante).
Azul de metileno 0.01g
Solucin fisiolgica 100 mL
4.- Solucin de Resorcina al 0.1% en alcohol etlico de 95 (Renovarla cada 2 meses)
5.- Solucin clorhdrica al 30% (para 100 mL)
HCl concentrado 30 mL
Agua destilada. 70 mL
6.- Solucin Madre de fructosa al 1% en solucin saturada de cido benzoico.
7.- Solucin estndar de fructosa
Se prepara el estndar conteniendo 0.02 mg de fructosa por mL, diluyendo la solucin madre (0.2 mL de
solucin madre y aforar a 100 ml con agua destilada). Este estndar corresponder a la concentracin de
200 mg % de fructosa en esperma.
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4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Cdigo
(cuando apIique)
Nombre deI documento Lugar de aImacenamiento
P-FQU-LAC-04 Procedimiento para el anlisis de muestra LACSC
N/A
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Proteccin
ambiental Salud ambiental Residuos peligrosos
biolgico infecciosos Clasificacin y especificaciones
de manejo.
LACSC
MGC-CPLADE-CC-01 Manual de Gestin de la Calidad PAGNA WEB DEL SGC
Identificacin
(cdigo)
Nombre deI
registro
Lugar de
aImacenamiento
ResponsabIe de
su proteccin
Tiempo
de
retencin
Disposicin de
Ios registros
F-FQU-LAC-06
Espermatobiosco
pa
rea de trabajo
Responsable de
rea
1 ao Archivo muerto
F-FQU-LAC-24
Formato para el
registro diario de
la temperatura de
la refrigerador
rea de trabajo
Responsable de
rea
1 ao Archivo muerto
F-FQU-LAC-40
Formato para el
registro diario de
la temperatura de
la congelador
rea de trabajo
Responsable de
rea
1 ao Archivo muerto
F-FQU-LAC-19
Formato para el
registro diario de
la temperatura de
la estufa
rea de trabajo
Responsable de
rea
1 ao Archivo muerto
5.- CONTROL DE REGISTROS
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6.- GLOSARIO
6.1.- SIGLAS
UADY: Universidad Autnoma de Yucatn
LACSC: Laboratorio de Anlisis Clnicos de Servicio a la Comunidad.
6.2 .- DEFINICIONES
Muestra bioIgica. Parte anatmica o fraccin rganos o tejido, excreciones o secreciones obtenidas de un ser
humano o animal vivo o muerto para su anlisis.
Usuario. Cualquier persona que acuda al laboratorio para solicitar algn anlisis clnico
Formato de Trabajo. Trmino que engloba a todos los formatos utilizados para reportar los resultados de sus
anlisis.
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Nota: La seccin 7 ser utiIizada a partir de Ia primera modificacin a este documento. La revisin 00, se
mantendr en bIanco.
7.- CONTROL DE REVISIONES
NIVEL DE
REVISIN
SECCIN
Y/O PGINA
DESCRIPCIN DE LA MODIFICACIN Y MEJORA
FECHA DE
MODIFICACIN
01
Pg. 4, 7, 10,
11
Se cambio el termino "muestras biolgicas de origen
seminal por "muestras de esperma. Se modific el
diagrama. Se volvi a redactar el paso 1 del recuento
de espermatozoides. Se volvi a redactar el paso 1 de
la determinacin de fructosa
26 de Abril de 2010
02
Pag. 1 Cambio de responsable de rea 02 de Febrero de 2011
03
Pg. 5
Pg. 8
Modificacin de la preparacin de reactivos (Solucin
clorhdrica al 30% y Solucin estndar de fructosa)
Cambio al nuevo formato para instructivos
Cambio de responsable sanitario
09 de Julio de 2013
04
Pg. 1-5
Pg. 8
Cambio de redaccin en todo el documento
Cambio de Director.
16 de Agosto de 2013
05
Pg. 8 Cambio de responsable sanitario.
12 de Noviembre de
2013
EIabor
QFB. Isis Noem vila Caldern. EBC
Responsable rea de Hematologa
Revis
M en C. Gabriel ngel Montero Lara
Responsable sanitario
Aprob
Dra. Zulema Osiris Cantillo Ciau
Directora de la Facultad de Qumica
Las firmas avaIan Ia responsabiIidad de Ias personas que: eIaboran eI documento, revisan su
adecuacin y aprueban para su impIementacin dentro deI Sistema de Gestin de Ia CaIidad de Ia
Universidad Autnoma de Yucatn.