PARED CELULAR

INTRODUCCIN
La mayor parte de los procariotas posee una pared celular (P.C.) rgida rodeando al protoplasto. Las excepciones son los micoplasmas (dentro del dominio Bacteria) y algunas arqueas, como Thermoplasma. Al microscopio electrnico se puede observar como una capa en ntimo contacto con la membrana citoplsmica, con un espesor que oscila entre 10 y 80 nm (segn especies) -frente a los 8 nm de la membrana celular- , y con una estructura ms o menos compleja, segn los tipos bacterianos. a) Las paredes celulares ms frecuentes en eubacterias siguen dos modelos alternativos que, como veremos comparten un componente comn: paredes de tipo Gram-positivo o de tipo Gram-negativo. b) Unas pocas eubacterias (como las del gn. Planctomyces) poseen paredes a base de protenas. c) Las Arqueas poseen paredes diferentes a las de eubacterias y se pueden agrupar en diversos tipos. La pared celular bacteriana est hecha de peptidoglicano (tambin denominado murena), que est formado por cadenas de polisacrido entrecruzadas por pptidos inusuales que contienen aminocidosD

. Las paredes celulares bacterianas son diferentes de las paredes de plantas y hongos que estn hechas de celulosa y quitina, respectivamente. Tambin son diferentes de las paredes de Archaea, que no contienen peptidoglicano. La pared celular es esencial para la supervivencia de muchas bacterias En las bacterias Gram-positivas la pared celular contiene una capa gruesa de peptidoglicano adems de cidos teicoicos, que son polmeros de glicerol o ribitol fosfato. Los cidos teicoicos se unen al peptidoglocano o a la membrana citoplasmtica. En las bacterias Gram-negativas la capa de peptidoglicano es relativamente fina y se encuentra rodeada por a una segunda membrana lpida exterior que contiene lipopolisacridos y lipoprotenas. La capa de petidoglicano se une a la membrana externa por medio de lipoprotenas. La mayora de las bacterias tienen una pared celular Gram-negativa y solamente Firmicutes y Actinobacteria (conocidas previamente como bacterias Gram-positivas de contenido GC bajo y bacterias Grampositivas de contenido GC alto, respectivamente) tienen paredes Grampositivas

 La tincin de Gram es la ms importante entre las tinciones llamadas diferenciales (aquellas que no tien de la misma manera a todos los tipos de bacterias), esta tincin consta de varios pasos: 1. Imaginemos un frotis en porta de vidrio con una muestra de varios tipos de bacterias, que se han fijado por calor. En la primera fase, esta preparacin de trata con un primer colorante llamado violeta cristal o violeta de genciana. 2. A continuacin se aade una solucin de lugol (yodo-ioduro), que acta como mordiente, formando una laca relativamente resistente con el violeta. En este momento todas las bacterias estn teidas de color violeta 3. Ahora realizamos una descoloracin diferencial con etanol o una mezcla de etanol y acetona. Lo que ocurre es que algunas bacterias (las que llamaremos Gram-negativas) pierden el color violeta (quedaran prctimante transparentes al microscopio), mientras que otras (las Grampositivas) resisten el tratamiento, y retienen el colorante violeta. 4. Finalmente, tratamos el porta con un segundo colorante (colorante de contraste): se trata de un colorante de color rojo o rosa, como la fucsina o la safranina. Este colorante tie ahora a las bacterias previamente descoloradas por el etanol. Por lo tanto, el resultado en la observacin al microscopio es que las bacterias Gram-positivas se ven de color violeta, y las Gram-negativas de color rosa o rojo.

Tincin de Gram

3. Ahora realizamos una descoloracin diferencial con etanol o una mezcla de etanol y acetona. Lo que ocurre es que algunas bacterias (las que llamaremos Gram-negativas) pierden el color violeta (quedaran prcticamente transparentes al microscopio), mientras que otras (las Gram-positivas) resisten el tratamiento, y retienen el colorante violeta.

4. Finalmente, tratamos el porta con un segundo colorante (colorante de contraste), de color rojo o rosa, como la fucsina o la safranina. Este colorante tie ahora a las bacterias previamente descoloradas por el etanol. Por lo tanto, el resultado en la observacin al microscopio es que las bacterias Gram-positivas se ven de color violeta, y las Gram-negativas de color rosa o rojo.

Como veremos enseguida, esta diferencia de comportamiento ante la tincin de Gram refleja el hecho de que ambos tipos de eubacterias poseen dos tipos estructuralmente diferentes de pared celular, aunque ambas posean en comn la posesin de peptidoglucano. A continuacin estudiaremos con cierto detalle la pared celular de eubacterias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

BACTERIAS CIDO-ALCOHOL RESISTENTES

PAREDES DE LAS EUBACTERIAS

COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA BSICAS DEL PEPTIDOGLUCANO Est formado por repeticiones de una unidad disacardica fundamental unida a su vez a un tetrapptido. Distintas cadenas (formadas por el esqueleto de azcares) se unen entre s por determinados enlaces peptdicos entre tetraptidos de cadenas diferentes. La unidad disacardica repetitiva: consiste en Nacetilglucosamina (NAG) unida por enlace (14) a N-acetilmurmico (NAM). Obsrvese que el NAM es el 3-O-D-lactil-ter de la NAG (o sea, se deriva de unir el cido D-lctico con el OH del C-3 de la NAG). Las distintas unidades disacardicas se van uniendo entre s por enlaces (14) entre el NAM de una unidad y la NAG de la siguiente. Este enlace es susceptible a la rotura catalizada por el enzima lisozima. El nmero de repeticiones (n) puede oscilar entre 10 y 100. La cadena tetrapeptdica: Desde el grupo carboxilo de cada cido NAM, y mediante un enlace amido, se encuentra unido el tetrapptido. Un tetrapptido tpico de muchas bacterias es: L-alanina - D-glutmico - meso-diaminopimlico - D-alanina

Frmula de un peptidoglucano tpico. Observar: La unidad disacardica NAG-NAM Las distintas unidades disacardicas se unen entre s por enlaces (14) entre el NAM de una unidad y el NAG de la siguiente. Este enlace es susceptible de rotura por lisozima en muchas bacterias El tetrapptido, con su alternancia de aminocidos en L y en D

Comparacin entre el meso-diaminopimlico (m-DAP) y la Llys. Ambos son diaminocidos. El m-DAP se puede considerar como una Lys en la que el H terminal de la cadena lateral est sustituido por un carboxilo (-COOH)

m-DAP

L-lys

LA ESTRUCTURA GLOBAL:
Las distintas cadenas polisacardicas, con sus respectivos tetrapptidos, se unen entre s por medio de puentes o enlaces peptdicos, entre un aminocido de una cadena (p. ej., el aminocido n3, como el meso-DAP del ejemplo) y otro aminocido de una cadena adyacente (la D-ala terminal). De este modo, la estructura global es una sola macromolcula gigante que envuelve al protoplasto, formando un sculo rgido, a modo de tejido continuo, que tiene el volumen y la forma de la bacteria respectiva

Ejemplos de entrecruzamientos en el peptidoglucano

Directo (muchas Gram-negativas)

Puente pentaglicina (algunas Gram positivas

Comparacin de las envolturas celulares bacterianas. Arriba: Bacteria Grampositiva. 1-membrana citoplasmtica, 2peptidoglicano, 3fosfolpidos, 4protenas, 5-cido lipoteicoico. Abajo: Bacteria Gramnegativa. 1-membrana citoplasmtica (membrana interna), 2espacio periplasmtico, 3-membrana exterior, 4fosfolpidos, 5peptidoglicano, 6lipoprotena, 7protenas, 8lipopolisacridos, 9porinas.

BACTERIA GRAM NEGATIVA

Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan slo una membrana lipdica y la pared de peptiglicano es mucho ms gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tincin de Gram. Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran nmero de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serrati marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi). Otros estn asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii

EL PEPTIDOGLUCANO DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS

En la mayor parte de Gram-negativas el peptidoglucano corresponde a la composicin y estructura que acabamos de describir. Sin embargo, en las espiroquetas, el diaminocido en posicin 3, en vez de ser meso-DAP, est sustituido por la L-ornitina (que tambin es un diaminocido). El enlace entre cadenas polisacardicas se realiza normalmente mediante unin peptdica directa entre el grupo carboxilo de la D-ala terminal y el grupo amino del meso-DAP. Ahora bien, en este enlace participan solamente el 50% de los tetrapptidos. Los dems pptidos no participan en enlaces, y entre estos ltimos se encuentran incluso dipptidos y tripptidos. El resultado es una capa simple de PG (de 1 nm de espesor), a modo de malla floja, y con grandes poros (los huecos dejados por las zonas donde no hay enlace peptdicos). Ello explica el comportamiento de las bacterias Gram-negativas en la tincin de Gram: al aadir el alcohol, se produce una deshidratacin que tiende a contraer la estructura del PG, pero los poros son grandes y por ellos sale el primer colorante (el violeta de genciana). El ulterior tratamiento de la preparacin con el colorante de contraste (fuchsina o safranina) tie a estas bacterias de rojo.

La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas est compuesta por una membrana citoplasmtica (membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias. Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa se localiza el espacio lsmico relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutricin en estas bacterias. La membrana externa contiene diversas protenas, siendo una de ellas las porinas o canales protecos que permiten el paso de ciertas sustancias. Tambin presenta unas estructuras llamadas lipopolisacridos (LPS), formadas por tres regiones: el polisacrido O (antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A (endotoxina). Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede en las Gram-positivas. Si presenten flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en lugar de los dos de las bacterias Grmapositivas porque tienen dos membranas. No presentan cidos teicoicos ni cidos lipoteicoicos, tpicos de las bacterias Gram-positivas. Las lipoprotenas se unen al ncleo de polisacridos, mientras que en las bacterias Grampositivas estos no presentan lipoprotenas. La mayora no forma endosporas (Coxiella burnetti, que produce estructuras similares a las endosporas, es una notable excepcin).

PARED GRAM NEGATIVA

Otra imagen general de las envueltas de una bacteria Gramnegativa (vale la pena recordar...!. Observa la estructura general de la pared celular: el espacio periplsmico contiene el PG, el cual se une covalentemente con la lipoprotena de Braun, que a su vez contacta con la lmina interna de la membrana externa la membrana externa es una bicapa proteolipdica muy asimtrica:

su lmina externa contiene el LPS (observa las cadenas laterales proyectadas hacia el exterior)
atravesando la membrana externa hay varios tipos de protenas, incluyendo los trmeros de porinas, con sus correspondientes canales internos, que solo dejan pasar molculas hidrfilas por debajo de cierto tamao

El lipopolisacrido
El lpido A: Dos unidades de glucosamina unidas por enlace (16), pero donde todos los grupos -OH (menos uno) y -NH2 estn sustituidos (unidos a otras molculas): Obsrvese que existen 5 (a veces 6) cidos grasos, todos ellos saturados, con predominio de -hidroximirstico (un cido graso C14). El -OH original en 4 est sustituido por arabinosaminafosfato. El -OH en 1 est sustituido por fosforil-etanolamina (a veces pirofosforil-etanolamina). El oligosacrido medular (tambin llamado corazn o ncleo): se une al lpido A a travs del -OH en 3. Se pueden considerar dos fracciones: ncleo interno, a base de dos tipos de azcares exclusivos de Gram-negativas: 2-ceto-3-desoxioctnico (KDO) y L-glicero-D-manoheptosa (Hep).. Alguna de las Hep y alguno de los KDO pueden a su vez estar unidos a fosforil-etanolamina (o pirofosforil-etanolamina). Esta regin es muy rica en grupos cargados, especialmente con carga negativa (de los fosfatos y KDO). La fraccin del ncleo externo est constituida a base de hexosas (glucosa, galactosa, NAG, y a veces algunas hexosas ms raras). Cadena lateral especfica: polisacrido repetitivo, que se proyecta hacia el exterior celular. Consiste en la repeticin (n<40 veces) de unidades tri-, tetra- o pentasacardicas (en estos dos ltimos casos uno de los azcares de cada repeticin queda lateral respecto del esqueleto lineal que forman los dems).

A.G. saturados (C-14): betahidroximirstico

Unidad repetitiva de la cadena lateral

Ncleo externo

Ncleo interno

Glucosamina(16)glucosamina, con OH en 1 sustituido con Petanolamina

Bacteria Gram positiva

La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas de cido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, estas bacterias no presentan una segunda membrana lipdica externa. Incluyen especies tanto mviles como inmviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintticas, pero la mayora son hetertrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables.

La clula bacteriana est rodeada por una envoltura que observada al microscopio electrnico, se presenta como una capa gruesa y homognea denominada pared celular. Entre la membrana plasmtica y la pared celular se encuentra el periplasma o espacio periplasmtico, luego en seccin (corte) se observa una estructura semejante a dos lneas paralelas formada separando una capa menos densa; esto corresponde a la llamada envoltura bacteriana. En el interior de la membrana plasmtica se encuentra el citoplasma que est constituido por una disolucin acuosa, el citosol, en el cual se encuentran ribosomas y otros agregados de macromolculas, y en el centro se ubica la zona menos densa llamada nucleoide, que contiene una madeja de hebras difcil de resolver (distinguir) y cuyo principal componente es el ADN. La pared externa de la envoltura celular de una bacteria Gram positiva tiene como base qumica fundamental el peptidoglucano, que es un polmero de Nacetil-2-D-glucosamina, unido en orientacin -1,4 con N-acetil murmico, a ste se agregan por el grupo lactilo 4 ms aminocidos.

Esta molcula se polimeriza gran cantidad de veces, de modo que se forma una malla especial, llamada sculo de murena. Dicho compuesto es de vital importancia para conservar la forma y darle rigidez a la clula bacteriana (si este compuesto no existiese, la clula reventara debido a su gran potencial osmtico). Las siguientes caractersticas son presentes generalmente en una bacteria Grampositiva: Membrana citoplasmtica. Capa gruesa de peptidoglicano. cido teicoicos y lipoteicoicos, sirven como agentes quelantes y en ciertos tipos de adherencia. Polisacridos de cpsula Si un flagelo est presente, este contiene dos anillos como soporte en oposicin a los cuatro que existen en bacterias Gram-negativas porque las bacterias Grampositivas tienen solamente una capa membranal. Tanto las bacterias Gram-positivas y las Gram-negativas pueden tener una membrana llamada capa S. En las bacterias Gram-negativas, la capa S est unida directamente a la membrana externa. En bacterias Gram-positivas, la capa S est unida a la capa de pptidoglicano. Es nico a las bacterias Gram-positivas la presencia de cidos teicoicos en la pared celular. Algunos cidos teicoicos particulares, los cidos lipoteicoicos, tienen un componente lipdico y pueden asistir en el anclaje del pptidoglicano, en tanto el componente lipdico sea integrado en la membrana.

Un cido ribitol-teicoico

cidos teicurnicos: Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un rgimen de limitacin de fosfato son incapaces de sintetizar cidos teicoicos, pero en su lugar producen cidos teicurnicos. Los teicurnicos consisten en polmeros aninicos formados por la alternancia de cidos urnicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozcares como la N-acetil-galactosamina.

cidos lipoteicoicos: Estn presentes en todas las bacterias Gram-positivas, aun en condiciones de carencia de fosfato. Se trata simplemente de cidos glicerol-teicoicos que se encuentran unidos a la membrana citoplsmica, concretamente se unen por enlace fosfodister con glucolpidos de membrana, mientras que el otro extremo de la cadena queda expuesto al exterior.

Otra imagen que muestra la estructura global de la pared de Gram-positivas. Observar que el PG est inmerso en la matriz a base de: Teicoicos (unidos al PG) Lipoteicoicos (unidos a glucoprotenas de la pared celular) Ambos tipos de polmeros pueden sobresalir de la pared hacia fuera. Funciones de los polmeros de la matriz: Parece ser que su papel principal es suministrar una carga neta negativa a la pared celular, lo que permite captar cationes divalentes (p. ej., Mg++), que a su vez se necesitan para muchas actividades enzimticas de la membrana citoplsmica o del espacio periplsmico, que participan de la morfognesis y divisin de la pared celular. Como ya dijimos, los cidos teicoicos y teicurnicos son buenos antgenos. Cuando no estn cubiertos por estructuras ms externas (como cpsulas), constituyen el antgeno somtico O de las bacterias Gram-positivas. Finalmente, en algunas bacterias, sumistran, junto con el PG, receptores especficos para la adsorcin de ciertos bacterifagos.

PARED DE LAS BACTERIAS CIDO-ALCOHOL RESISTENTES (AAR)

Pared especial de ciertas Gram-positivas: Nocardia, Mycobacterium Resisten la decoloracin con clorhdrico-etanol ( cido-alcohol resistentes) Esta propiedad deriva de: cidos miclicos, Glucolpidos, Y Ceras cidos miclicos Son -hidroxicidos grasos ramificados en , de cadena muy larga Forman parte de un esqueleto muy peculiar de la pared celular: PGarabinogalactanocidos miclicos Otros lpidos de en la pared de bacterias AAR Glucolpidos: Micolatos de trehalosa Sulfolpidos de trehalosa Micsidos (unin ster entre miclicos y azcares) Ceras: unin de miclicos con alcoholes ramificados de cadena larga (C30-C34) Papeles conferidos por la pared AAR Aspecto y consistencia crea de las colonias en placas de Petri En lquidos crecen formando grumos Gran impermeabilidad Resistencia a desecacin Resistencia a agentes antibacterianos Detergentes Oxidantes cidos y bases

PARED CELULAR ACIDO-ALCOHOL RESISTENTE: 1-lpidos externos, 2cido miclico, 3-polisacridos (arabinogalactano), 4-peptidoglicano, 5-membrana plasmtica, 6-lipoarabinomanano (LAM), 7-fosfatidilinositol manosido, 8-esquema de la pared celular.