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PRODUCTOS NATURALES pROMOTORES DEL CRECIMIEnTO VEGETAL COMO ESTIMULAnTES DE MICORRIZAS ARBUSCULARES
Hongos micorrcicos en plantas medicinales usados por comunidades Mapuches Desamargo del lupino Anlisis molecular en hechos delictivos ambientales Snack de charqui de caballo con distintos aditivos Arndanos en alta densidad como alternativa de primeros aos Efectos del programa de recuperacin de suelo Digestin ruminal de protenas Hidrolizado de pescado en la concentracin de polifenoles en plntulas Toxicidad por aluminio en arndanos
Direccin: Dr. Alejandro Velsquez B. Comit Editor: Dr. Gabriel Vivallo P. Dr. Rodrigo Arias I. Dr. Marcelo Toneatti B. Dra. Claudia Castillo R. Dra. Ximena Araneda D. Dra. Gina Leonelli C. Dr. Jaime Solano S. Dr. Marcelo Rodrguez B. Dr. Orlando Andrade V. Recepcin de trabajos, revisin y 1 seleccin: MSc. Ricardo Tighe N. Ing. Agr. Armin Cuevas R. Diseo, diagramacin y edicin: Ing. Agr. Armin Cuevas R. Publicacin electrnica y pgina web: Ing. Agr. Armin Cuevas R. Secretaria: Srta. Roco Burgos Universidad Catlica de Temuco, Escuela de Agronoma. Rudecindo Ortega 02950, Edificio Cincuentenario, 3er piso. Fono: 45-205521, 45-205534. Edicin Digital Chile, Temuco, Diciembre 2012.
INDICE
EDITORIAL...........................................................................................................................................................................................5 El Valor SalUd de la aliMeNtaCiN aNCeStral...........................................................................................................6 ProdUCtoS NatUraleS proMotoreS del CreCiMieNto VeGetal CoMo eStiMUlaNteS de MiCorriZaS arBUSCUlareS............................................................................................................................................8 ProGraMa de diFUSiN Y traNSFereNCia para el MeJoraMieNto de la CoMpetitiVidad de laS eMpreSaS del rUBro apCola de la reGiN de la AraUCaNa....................................................................10 EQUIPAMIENTO PARA EL MEJORAMIENTO DOCENTE UNIVERSITARIO............................................................................12 PUBliCaCioNeS CIENTFICAS AGroNoMa UC TeMUCo....................................................................................................15 PROSPECCIN DE HONGOS MICORRCICOS ARBUSCULARES (HMA) EN PLANTAS MEDICINALES UTILIZADAS POR COMUNIDADES MapUChe PERTENECIENTES A LA REGIN DE LA ARAUCANA......................................16 DESAMARGADO DE LUPINO (Lupinus albus L.) MEDIANTE EXTRACCIN DE ALCALOIDES..........................................21 ANliSiS MoleCUlar de eVideNCia periCial eN el CoNtexto de loS heChoS deliCtiVoS aMBieNtaleS.......................................................................................................................................................................34 EVALUACIN DE UN SNACK TIPO CHARQUI DE CARNE DE CABALLO (Equus caballus L.) CON DISTINTOS ADITIVOS ELABORADO EN CONDICIONES DE LABORATORIO.................................................................................40 PLANTACIN DE ARNDANOS EN ALTA DENSIDAD, UNA ALTERNATIVA PARA LOS PRIMEROS AOS DE PRODUCCIN.........................................................................................................................................................................52 EFFECTS OF A PROGRAM FOR THE RECOVERY OF ACIDIC VOLCANIC ASH SOILS IN THE ARAUCANIA REGION (SOUTH CHILE): IMPACTS ON ACIDITY AND PHOSPHORUS AVAILABILITY............................................................57 DIGESTIN RUMINAL DE PROTENAS.........................................................................................................................................65 EFECTO DE UN HIDROLIZADO DE PESCADO SOBRE LA PRODUCCIN DE BIOMASA Y CONCENTRACIN DE POLIFENOLES TOTALES EN PLNTULAS DE AJ (Capsicum annuum L.).....................................................................72 ASPECTOS FISIOLGICOS, BIOQUMICOS Y MOLECULARES DE LA TOXICIDAD POR ALUMINIO (Al3+) EN ARNDANOS CULTIVADOS EN EL SUR DE CHILE........................................................................................................76
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EDITORIAL
PALABRAS DIRECTOR DE ESCUELA

Vivimos en un mundo vertiginoso, donde el cambio es permanente a todo nivel, tanto en el conocimiento cientfico-tecnolgico como en el de las comunicaciones y muchas otras reas. La gran cobertura de los medios y de la Internet nos permiten manejar una gran cantidad de informacin. Sin embargo, no toda esa informacin circulante es confiable y una visin sesgada de la misma, con o sin intencin, puede resultar en grandes prejuicios o errores de interpretacin. En este sentido, en el plano nutricional cada cierto tiempo surgen ciertas modas que la sociedad en su conjunto sigue sin mayores cuestionamientos, asumindolas como verdades absolutas casi de forma inmediata. As por ejemplo, hasta hace algunas dcadas atrs se recomendaba reducir el consumo de grasas en la dieta, dada su asociacin positiva con diversas enfermedades. En esos aos, las grasas fueron demonizadas entendindose que todo alimento que tuviese grasa era daino. Posteriormente, se ha descubierto que no todas las grasas tienen un efecto negativo en la salud de las personas y que en efecto muchas de ellas son necesarias y benficas. Este periplo incluy dentro de los primeros focos de atencin el contenido de colesterol de los alimentos, incluso a fines de la dcada de los 80s se promocionaban una serie de productos con 0% colesterol. Luego, surgi el tema del cido linoleico conjugado (tambin conocido como CLA) y sus propiedades benficas para la salud de las personas. Casi paralelamente se sealaba que se deba poner especial cuidado con la ingesta de cidos grasos de tipo trans, dada su negativa relacin con enfermedades cardiovasculares. Ms recientemente, en 1994, se descubri que el tejido adiposo secreta una importante hormona leptina, que inhibe el apetito y la ingesta calrica. Final y ms recientemente, el tema se ha centrado en los cidos grasos mono y polinsaturados, particularmente la relacin omega-3:omega-6 y los beneficios de incluirlos en la dieta en forma equilibrada. Un caso similar al recin presentado se observ con las recomendaciones de consumo de huevo, el que pas de ser fuertemente restringido a ser nuevamente promocionado, sin mayores restricciones. En la actualidad, no existe lugar a dudas de que en general una gran mayora de las personas estn cada vez ms preocupadas de los alimentos que ingieren, no slo desde el punto de vista nutritivo sino tambin de su inocuidad y sustentabilidad. No obstante, a pesar de la mucha informacin disponible y de su fcil acceso, persiste an un gran desconocimiento respecto de elementos bsicos del origen y del como se producen los alimentos. Asimismo, ciertos grupos activistas han demonizado ciertas tecnologas productivas del rubro agropecuario, acusndolos de ser contaminantes y destructivos, promoviendo otras que no permiten dar respuesta a la creciente demanda mundial de alimentos. A mi juicio no existe un sistema productivo superior, sino que cada realidad particular determina el mejor sistema posible, siendo factible que todos ellos cumplan con la urgente necesidad de ser sustentables y amigables con el medioambiente. Para ello, el pas debe implementar un marco regulatorio que permita fiscalizar con facilidad los aspectos antes mencionados y contar con profesionales slidos tanto desde el punto de vista tcnico como tico. Esto ltimo, es nuestro gran desafo como institucin formadora, educar a las futuras generaciones de agrnomos con esas cualidades, pero tambin tenemos el desafo de instruir a la sociedad en su conjunto sobre el origen de los alimentos que consumen as como tambin la forma en que stos se producen y las propiedades que poseen, por ello somos los ingenieros de la vida. Finalmente, los artculos que se presentan en esta edicin de nuestra revista apuntan en esta direccin antes planteada. Esperamos que el lector disfrute de los temas que aqu se presentan y estos contribuyan a una mejor compresin del tema alimentario. Dr. Rodrigo A. Arias Inostroza Director Escuela de Agronoma UC Temuco
El valor salud de la
alimentacin ancestral
A partir de iniciativas vinculadas a I+D, donde un equipo de profesionales de la Escuela de Agronoma pudo visualizar la necesidad de conocer el valor salud de los alimentos y cmo este se modifica con diversos procesos industriales o artesanales en que estn presentes los mismos principios cientfico-tecnolgicos y desarrollando estudios de posgrado y trabajando con las familias campesinas en un programa de innovacin territorial alimentario Mapuche junto a la Fundacin para la Innovacin Agraria (FIA) se plantea la importancia que la sociedad valore la ciencia y tecnologa asociada a estos procesos y el potencial que tienen los alimentos ancestrales para nuestra alimentacin y salud, de esta manera nace esta iniciativa denominada El valor salud de la alimentacin ancestral financiada por EXPLORA CONICYT en el marco del I Concurso nacional de apoyo a la realizacin de actividades de apropiacin social de la Ciencia y Tecnologa.
En el transcurso de esta iniciativa se contempla que a travs de talleres se den a conocer el proceso de elaboracin y conservacin del alimento Mapuche, tal como es el merkn, el mote, la harina tostada, las galletas de quinua, entre otros. El proyecto est enfocado principalmente a los alumnos de educacin bsica y media del Complejo Educacional La Granja de Cajn y la Escuela Truf Truf de Padre Las Casas, y tiene como objetivo principal, aumentar la visibilidad, inters y valoracin de la comunidad por la alimentacin ancestral Mapuche saludable, vinculada al origen a travs de la Ciencia y Tecnologa. En cada oportunidad, se realizarn charlas acompaadas de un desayuno saludable en ambos establecimientos. Dentro de los invitados principales, participar la especialista e investigadora del alimento Mapuche, Mara Seplveda Vivanco, quien trabaja hace ms de 5 aos en el rea de la Gastronoma Intercultural. Expresa que se ha perdido la tradicin de cmo se prepara la comida Mapuche, y por eso la comunidad no le saca todo el potencial al proceso de preparacin de alimentos saludables Mapuche.
Durante las actividades del proyecto se desarrollarn: Cafs cientficos: a travs de cinco encuentros, los expositores relatarn al pblico objetivo temas tales como: la historia de la alimentacin del pueblo Mapuche, su gastronoma tpica, la importancia de la alimentacin saludable, la calidad e inocuidad alimentaria y conservacin de alimentos ancestrales. Taller de gastronoma: el pblico objetivo podr conocer y practicar los procesos de elaboracin y conservacin de alimentos tpicos de la cultura Mapuche tales como: harinas de cereales y de otros frutos y semillas, mote, merkn, bebidas e infusiones como chicha de manzana y muday, t de canelo, locro, chuchoca, galletas de quinua, entre otros. Exposiciones: estas se realizarn en espacios pblicos, donde se darn a conocer los mecanismos utilizados en la elaboracin y conservacin de los alimentos desarrollados por los propios participantes. Concursos: se realizar un concurso para premiar la receta ms atractiva y saludable elaborada por el pblico seleccionado, utilizando los conocimientos adquiridos. Feria: se realizar en un espacio pblico donde se expondrn los trabajos realizados por los participantes; adems, de todas las actividades desarrolladas.
Autor: Dra. Gina Leonelli, Ricardo Tighe y Armin Cuevas.
En la actualidad, los mtodos tradicionales utilizados en la agricultura usan grandes cantidades de fertilizantes para incrementar los rendimientos de los cultivos causando contaminacin del suelo y el agua; por lo tanto, la agricultura ecolgica se presenta como una solucin a este problema mundial. Esta disciplina evita el uso de productos qumicos y busca alternativas que no causen daos a los ecosistemas agrcolas. Entre los manejos conservacionistas, se encuentra el uso de biofertilizantes, que incluyen a los hongos micorrcicos arbusculares (HMA), los cuales forman asociaciones simbiticas mutualistas con la mayora de los cultivos de inters agrcola, incrementando la cantidad de nutrientes absorbidos por la planta, especialmente P, Cu y Zn. Sin embargo, los HMA son simbiontes obligados, es decir, no se reproducen en ausencia de una planta hospedera, lo que limita la inoculacin, restringindola a nivel de frutales y plantas de vivero y almcigo. Por lo tanto, a nivel de cultivos extensivos slo se podran manipular las poblaciones HMA a travs del uso de diferentes sistemas agrcolas, que incluyen por ejemplo, la rotacin de cultivos.
CRECIMIEnTO VEGETAL COMO ESTIMULAnTES DE MICORRIZAS ARBUSCULARES
PRODUCTOS NATURALES pROMOTORES DEL
Por otra parte, existen productos naturales (PN) que se utilizan en la agricultura para estimular el crecimiento de las plantas. Algunos de ellos incluyen como ingrediente activo, la formononetina, un isoflavonoide que se extrae de las races del trbol rosado. Estudios recientes, han demostrado que este PN tambin tiene un efecto estimulante sobre los HMA. Sin embargo, no se ha estudiado la influencia de otros PN que se aplican actualmente en la agricultura extensiva. Por tanto, el proyecto Fondecyt de iniciacin N 11090014 en ejecucin investiga el efecto de algunos productos de uso nacional e internacional en la estimulacin temprana de la micorrizacin y diversidad HMA en cultivos extensivos que son de inters agrcola para la zona centro-sur de Chile, como trigo. Para realizar esta investigacin, se han montado varios ensayos a nivel de cmara de crecimiento e invernadero, buscando PN que permitan estimular la colonizacin HMA en las races del trigo, y de acuerdo a los resultados obtenidos, se han seleccionado algunos PN para ensayarlos en campo. As, se han establecido parcelas con trigo en rotaciones de ciclo corto, con plantas hospederas y no hospederas HMA, como trigo-avena y trigo-lupino o trigo-raps, respectivamente. En tres localidades de la Regin de La Araucana Huichahue, Fundo El Carmen y Vilcn, actualmente se estudia la interaccin entre estos PN y las poblaciones de HMA nativas de los suelos, junto con la micorrizacin temprana, proyectando que la adicin de dichos PN a un sistema de cultivo determinado aumentar el rendimiento del cereal, como resultado de una aceleracin en el desarrollo de la colonizacin HMA en los primeros estadios de la simbiosis.
Autor: Dra. Claudia Castillo R.
LA COMpETITIVIDAD DE LAS EMpRESAS DEL RUBRO
PROGRAMA DE DIFUSIn Y TRAnSFEREnCIA pARA EL MEJORAMIEnTO DE ApCOLA DE LA REGIn DE LA ARAUCAnA
La Universidad Catlica de Temuco, a travs de su Escuela de Agronoma, postul y se adjudic durante el ao 2011 un Programa de Difusin Tecnolgica del rubro Apcola, para 36 empresas de la regin de La Araucana, iniciativa generada a travs de la Asociacin Gremial de Apicultores de la Regin de La Araucana, Red APINOVENA A.G. y el equipo tcnico de la Universidad Catlica de Temuco. Escuela de Agronoma de la Facultad de Recursos Naturales. El objetivo de la propuesta se orient en Mejorar la competitividad del rubro apcola en La Araucana, por medio de la prospeccin, difusin y transferencia de nuevos conocimientos y tecnologas apcolas que contribuyeran a la incorporacin de innovacin, desarrollo de estrategias productivas sustentables y consolidacin de nuevos mercados y productos.
El programa que se desarroll en dos etapas: Etapa 1, donde se realiz una prospeccin que incluy una Misin Tecnolgica Internacional a Buenos Aires - Argentina - para visitar una feria apcola mundial APIEXPO, participacin en Apimondia, que es el congreso apcola de mayor importancia a nivel mundial y donde se realizaron visitas tcnicas a explotaciones apcolas complementarias al evento cientfico. La Etapa 2 fue compuesta por la Difusin y Transferencia Tecnolgica, donde se desarrollaron quince actividades conformadas por ocho cursos de formacin, dos seminarios que incluyeron tres trada de expertos internacionales, dos giras nacionales y dos das de campo. En la segunda etapa del programa se realiz un diagnstico y seguimiento de la competitividad de las empresas beneficiarias del programa, se transfiri tecnologas en produccin, transformacin, gestin y comercializacin a travs de sus 15 iniciativas de difusin, con nfasis en la diversificacin de la oferta y la agregacin de valor, la promocin de las BPA, cumplimiento de normas y estndares de calidad del mercado nacional e internacional. Los resultados del programa fueron el desarrollo de un diagnstico de capacidades y problemticas en las empresas apcolas beneficiarias, el fortalecimiento de competencias tcnico profesionales en los apicultores, el aumento de la produccin y comercializacin de miel, la diversificacin y valor agregado en productos apcolas y la implementacin de buenas prcticas apcolas y normativas de aseguramiento de calidad. El costo total de la iniciativa ascendi a $71.373.000, considerando un aporte de Innova Chile de $56.023.000.- (78% de participacin) ejecutable en 15 meses, y contempl un aporte de contraparte del 22% del costo total equivalente a $15.350.000.-
Autor: Dra. Ximena Araneda, Mixsy Neira, Ral Flores y Daniza Morales.
EQUIPAMIENTO PARA EL MEJORAMIENTO DOCENTE UNIVERSITARIO

La Escuela de Agronoma de la UC Temuco mejora sus ambientes educativos mediante la adquisicin de nuevo equipamiento de laboratorio ($90.000.000), intercambio estudiantil ($20.000.000), recursos humanos ($15.000.000) y un nuevo invernadero en campus Norte ($35.000.000), gracias al Proyecto FIAC2 Mejoramiento de la calidad en la formacin de ingenieros agrnomos: estrategias de enseanzaaprendizaje para la implementacin del modelo educativo UC Temuco.
Jornadas de Agronoma 2012
Publicaciones Cientficas Agronoma UC Temuco
PROSPECCIN DE HONGOS MICORRCICOS ARBUSCULARES (HMA) EN PLANTAS MEDICINALES UTILIZADAS POR COMUNIDADES Mapuche PERTENECIENTES A LA REGIN DE LA ARAUCANA
Claudia G. Castillo Rubio1, Juan I. Espinoza Morales1. 1 Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: ccastill@uct.cl; fono: 45-205541.
Introduccin Segn la medicina Mapuche una enfermedad tiene un origen sobrenatural y se produce por seres o fuerzas csmicas como el wecufu (fuerza del mal) que causa un dao y desequilibrio no slo en el individuo, sino en la familia dentro de la comunidad, es decir, en la mapu (tierra). La salud, es una armona entre el hombre y las fuerzas csmicas y en una enfermedad, fsica o mental, deber buscarse nuevamente el equilibrio (Carbonell, 2001). Al tratar al paciente, primero se invocan los espritus y Antunian (alma del sol) y de acuerdo con lo que percibe el sanador, prepara la medicina utilizando plantas, flores o cortezas de rboles que son mezcladas con agua medicinal siendo las machis las personas que conocen las propiedades curativas de las plantas. En nuestro pas, una alta densidad de Mapuches se concentra en la Regin de La Araucana y desde sus orgenes han estudiado y utilizado el patrimonio vegetal con fines medicinales conociendo las propiedades curativas de las plantas (Montes y Wilkomirsky, 1987). Dentro de las plantas medicinales Mapuche, slo tienen aceptacin cientfica 132 encontrndose este sub-grupo constituido principalmente por especies introducidas y aclimatadas en nuestro pas, lo que implica que la flora autctona medicinal contina desconocida y el amplio universo de las plantas medicinales an adolece de validacin (alrededor del 88% del total). Antiguamente, en la zona de Lonquimay se recogan alrededor de 200 variedades de hierbas medicinales, las cuales se han ido extinguiendo por ausencia de un manejo sustentable y en la actualidad nacen, crecen y se reproducen alrededor de unas 100 especies nativas (Mapulawen, 2009). Por otra parte, el desarrollo de la herbolaria tradicional Mapuche, requiere en primer lugar conocer la magnitud de dicho universo, tarea prioritaria por tres razones: a) la flora est desapareciendo aceleradamente ante la degradacin de zonas naturales y transformacin de las culturas tradicionales, b) el conocimiento especfico de las culturas aborgenes se encuentra seriamente amenazado por el avance en el desarrollo de la cultura dominante, que no respeta y an destruye los ecosistemas naturales, y c) la cultura de las comunidades Mapuche est sufriendo cambios muy acelerados, en particular, por la escolarizacin de las nuevas generaciones, seguida de emigracin a las ciudades. A partir de los aos setenta, el comercio internacional de hierbas medicinales se ha triplicado de acuerdo con el crecimiento de la poblacin mundial y en nuestro pas, en relacin a la produccin agronmica de este tipo de cultivo, la zona Centro-Sur, posee caractersticas edafoclimticas favorables que la hacen una potencial productora a gran escala de este tipo de productos (Wilckens et al. 2005).
Las primeras etapas del ciclo de vida de una especie y el establecimiento de la plntula depender de la adquisicin eficiente de nutrientes y adems, de que las races se encuentren protegidas de patgenos, lo que en la mayora de los cultivos se logra a travs de los hongos micorrcicos arbusculares (HMA) (Smith y Read, 1997), los que incrementan principalmente la captacin de nitrgeno (N), fsforo (P), cobre (Cu) y zinc (Zn) (Souchie et al. 2006) y reducen la aplicacin de fertilizantes y fitosanitarios (Sieverding, 1991). La simbiosis cumple un rol fundamental en el desarrollo y mantenimiento de los ecosistemas encontrndose HMA en todos los suelos y climas terrestres. Dentro de la variedad de plantas medicinales utilizadas comnmente en las comunidades Mapuches de la Regin de La Araucana resulta interesante conocer cules se encuentran asociadas con HMA, para poder realizar estudios sobre inoculacin con HMA nativos, con la finalidad de aumentar el rendimiento de este tipo de cultivos. De aqu que, el objetivo de este estudio fue realizar en la localidad de Cunco, Regin de La Araucana, una primera prospeccin de plantas herbceas, arbustivas y arbreas de la herbolaria medicinal Mapuche para determinar cuales forman asociaciones simbiticas con los HMA. MATERIALES Y MTODOS Recoleccin de muestras del herbolario Mapuche. En las localidades de Colico, Cunco, Leufuche y Los Laureles pertenecientes a la comuna de Cunco, Regin de La Araucana (3856; 7202) se realiz un muestreo de herbceas, arbustivas y arbreas medicinales. La seleccin se realiz de acuerdo a entrevistas personales con el Lawentuchefe de dichas comunidades basndose principalmente en las propiedades medicinales que presenta la vegetacin del sector, la utilizacin recurrente por las comunidades y la extincin sistemtica de algunas especies, con la consiguiente prdida cultural para las comunidades Mapuche. Colonizacin HMA en las races de plantas medicinales (%). Las races se tieron con solucin de azul de tripn al 0,05% y para la lectura de la colonizacin HMA, se utiliz el mtodo del intercepto de lneas (Giovannetti y Mosse, 1980). RESULTADOS Y DISCUSIN En el Cuadro 1, se observa el porcentaje de colonizacin HMA en las races de las 25 herbceas medicinales muestreadas. Se obtuvo un amplio rango de colonizacin que fluctu entre 3,7% para la alcachofa y 71,9% en manzanilla, con una media de 31,1%; mientras que, en tres especies ajo, ter y tuslago no se observ presencia HMA. Este promedio resulta elevado si se compara con otros cultivos agrcolas de la regin (Castillo et al. 2008), lo que sealara que la mayora de las herbceas pertenecientes a la localidad de Cunco, son simbiontes obligados, con una alta dependencia micorrcica, en particular, la manzanilla.
Cuadro 1. Efecto medicinal y porcentaje de colonizacin por hongos micorrcicos arbusculares (HMA) en races de plantas herbceas de la localidad de Cunco, Regin de La Araucana.
Nombre vernacular Ajo Alcachofa Apio Avena Cadillo Cardo mariano Cilantro Culle colorado ter Hierba San Juan Hinojo Llantn Manzanilla Menta blanca Menta negra Ortiga Paico Perejil Pichoa Poleo Siete venas Toronjil Toronjil cuyano Tuslago Violeta Nombre cientfico Allium sativum Cynara scolymus Apium glaveolens Avena sativa Acaena ovalifolia Silybum marianum Coriandrum sativum Oxalis rosea Artemisia abrotanum Hypericum perforatum Foeniculum vulgare Plantago major Matricaria chamomilla Mentha piperita Mentha arvensis Urtica dioica Chenopodium ambrosioides Petroselinum hortense Euphorbia portulacoides Mentha pulegium Plantago lanceolata Melossa officinalis Marrubium vulgare Tussilago farfara Viola odorata Antifngico, antiparasitario Antifebril, antifngico Antiasmtico, diurtico Antidepresivo, diurtico Astringente, diurtico Hipertensor Antiespasmdico, antifngico Emenagogo Analgsico, sedante Antidepresivo Digestivo, antiinflamatorio Antibacteriano Antialrgico, antiinflamatorio Analgsico, antifngico Analgsico, antifngico Diurtico, antianmico Antiparasitario, antidepresivo Diurtico, antiinflamatorio Antirreumtico Expectorante, diurtico Cicatrizante, antiinflamatorio Antidepresivo, estimulante Depurativo, cicatrizante Expectorante Antiinflamatorio 0 3,7 0,8 8,5 1,2 15,7 4,5 33.1 4,3 16,5 0,3 5,6 0,2 27,4 8,0 0 61,1 16,5 13,3 3,7 38,3 2,3 71,9 11,5 70,2 2,5 12,0 3,1 9,6 3,1 21,9 9,5 23,3 2,8 51,2 1,7 41,1 3,2 23,3 2,3 25,4 0,1 55,0 3,4 0 56,6 7,8 Uso HMA (%)
Este promedio resulta elevado si se compara con otros cultivos agrcolas de la regin (Castillo et al. 2008), lo que sealara que la mayora de las herbceas pertenecientes a la localidad de Cunco, son simbiontes obligados, con una alta dependencia micorrcica, en particular, la manzanilla.
En el Cuadro 2, se muestran los resultados obtenidos para la presencia y porcentaje de colonizacin HMA en 10 arbustivas medicinales de la localidad de Cunco. La nica arbustiva que no present colonizacin HMA fue la quila mientras que, en las restantes arbustivas el porcentaje fluctu entre 1,2% para el natre y hasta 50,9% en ajenjo, con una media de 27,2%, levemente inferior a la media obtenida para las herbceas.
Cuadro 2. Efecto medicinal y porcentaje de colonizacin por hongos micorrcicos arbusculares (HMA) en races de plantas arbustivas de la localidad de Cunco, Regin de La Araucana.
Nombre vernacular Ajenjo Chasco Hierba de la plata Natre Organo Quila Rosa Mosqueta Ruda Salvia Zarzamora Nombre cientfico Artemisia absinthium Thymus vulgaris Equisetum giganteum Solanum ligustrinum Origanum vulgare Chusque quila Rosa moschata Ruta glaveolens Salvia officinalis Rubis discolor Estimulante, digestivo Antisptico, antiespasmdico Depurativo, diurtico Antifebril, hipertensor Antiespasmdico, cicatrizante Antirreumtico, diurtico Antidiarreico, antiinflamatorio Antiespasmdico, antiparasitario Sedante, antiinflamatorio Hemosttico, astrigente 50,9 3,9 10,1 1,7 29,4 6,2 1,2 0,6 48,1 15,8 0 28,8 8,9 20,5 0,1 19,4 6,4 36,2 7,5 Uso HMA (%)
En el Cuadro 3, se observa que de los rboles medicinales seleccionados slo el laurel y maqui, no estuvieron colonizados por HMA; sin embargo, las otras especies presentaron una colonizacin similar, pero baja. As, el castao alcanz slo un 6,1% en comparacin con el cerezo que fue la ms elevada alcanzando 19,9%, con una media de 11,2%, bastante menor que la encontrada para las herbceas y arbustivas medicinales. Probablemente, la ausencia o baja colonizacin HMA obtenida fue resultado de que la mayora de las especies arbreas boscosas se encuentran colonizadas por otro tipo de hongos simbiontes, los llamados hongos ectomicorrcicos. Cuadro 3. Presencia y porcentaje de colonizacin por hongos micorrcicos arbusculares (HMA) en races de plantas medicinales arbreas de la localidad de Cunco, Regin de La Araucana.
Nombre vernacular Araucaria Avellano Canelo Castao Cerezo Durazno Eucaliptus Roble Laurel Maqui Nombre cientfico Araucaria araucana Corylus avellana Drymis winteri Castanea sativa Prunus avium Prunus persicae Eucalyptus globulus Nothofagus obliqua Laurus nobilis Aristotelia chilensis Cicatrizante, diurtico Astringente, antipirtico Antifngico, antibacteriano Antihemorrgico, astringente Diurtico, analgsico Diurtico, analgsico Antitsico, antisptico Antitsico Antirreumtico, diurtico Antidiarreico, antiespasmdico 10,0 0 8,3 4,5 10,2 5,6 6,1 2,7 19,9 9,1 12,9 2 12,5 3,5 10,0 4,1 0 0 Uso HMA (%)
En este estudio se encontraron familias que no presentaron colonizacin como Quenopodiaceae y Liliaceae, lo que concuerda con lo informado por Azcn-Aguilar y Barea (1997) quienes informaron que las asociaciones micorrcicas se producen en la mayora de las plantas vasculares con algunas excepciones como las familias Crucferas, Quenopodiceas, Ciperceas, Liliceas, Cariofilceas y Juncceas. Una de las familias que present mayor porcentaje de colonizacin fue Asteraceae con un promedio de 18,4%, corroborado con lo informado por Melgares de Aguilar et al. (2004) en lechuga del tipo Iceberg, variedad Fortunas, perteneciente a la misma familia mencionada anteriormente, que despus de realizado el trasplante desde almcigo a campo, alcanz cifras cercanas al 20% de colonizacin. De acuerdo con los resultados obtenidos en el estudio, donde se comprob que la mayora de las plantas medicinales utilizadas por comunidades Mapuche de la Regin de La Araucana se encuentran colonizadas por HMA se podra proyectar que la inoculacin con HMA en cultivos de plantas medicinales podra considerarse como una alternativa viable para mejorar la rentabilidad de este tipo de cultivos en comunidades Mapuche, por disminucin en la aplicacin de fertilizantes y factores asociados, proyectando una agricultura sustentable y conservacionista, minimizando los daos ambientales. Finalmente, este estudio permiti conectar un trabajo cientfico con la cultura Mapuche mediante la participacin activa del Lawentuchefe y dirigentes de las comunidades, quienes son los principales protagonistas del exterminio sufrido en la flora, con la consiguiente prdida cultural que trae consigo dicho proceso. CONCLUSIONES Del total de especies medicinales evaluadas, en 84% de ellas se observ presencia de hongos micorrcicos arbusculares, correspondiendo este porcentaje a 88% de herbceas, 90% de arbustivas y 80% de arbreas. El porcentaje de colonizacin promedio de las herbceas fue 34,6%, de las arbustivas 27,1% y arbreas 9,8 %. LITERATURA CITADA Azcn-Aguilar C., and Barea, J.M. 1997. Applying mycorrhiza biotechnology to horticulture: Significance and potentials. Scientia Horticulturae 68: 124 Castillo, C., I. Astroza, F. Borie, y R. Rubio. 2008. Efecto de cultivos hospederos sobre propgulos micorrcicos arbusculares. Revista de la Ciencia del Suelo y Nutricin Vegetal 8(1): 37-54. Carbonell, B. 2001. La cultura Mapuche y su estrategia para resistir estructuras de asimilacin. Experiencias antropolgicas en Patagonia fundamentan alternativas de cambio para superar conflictos tnicos. Universidad de Fasta. Argentina. Disponible en http//www.ugr.es/~pwlac/G17_05Beatriz_Carbonell. html. Ledo el 12 de octubre de 2012. Giovanetti, M., and Mosse, B. 1980. An evaluation of techniques for measuring vesicular-arbuscular mycorrhizal infection in roots. New Phytologist 84: 489-500. Melgares de Aguilar, J., D. Gonzlez-Martnez, A. Gutirrez, M. Honrubia, y A. Morte. 2004. Efectos del hongo endomicorrcico Glomus intraradices en el cultivo ecolgico de lechuga tipo Iceberg. 6 p. VI Congreso de la sociedad Espaola de agricultura ecolgica. Septiembre 2004. Almera, Espaa. Montes, M., y T. Wilkomirsky. 1987. Medicina tradicional Chilena. 205 p. Editorial de la Universidad de Concepcin. Concepcin, Chile. Mapulawen. 2009. Hierbas medicinales Mapuche. Manejo sustentable y desarrollo participativo. Disponible en http://www.mapulawen.cl/hierbas.htm. Ledo el 12 de julio de 2010. Sieverding, E. 1991. Vesicular arbuscular mycorriza management in tropical agrosystems. 371 p. GTZ, Eschborn, Germany. Smith S.E., and D.J. Read. 1997. Mycorrhizal symbiosis. 154 p. Academic Press, London, England. Souchie, E. L., R. Azcn, J.M. Barea, O. J. Saggin- Jnior, and E.M. Ribeiro da Silva. 2006. Phosphate solubilization and synergism between P-solubilizing and arbuscular mycorrhizal fungi. Pesquisa Agropecuaria Brasileira 41(9): 1405-1411. Wilckens, R., M. Berti, H. Felicitas, y S. Fischer. 2005. Adaptacin de plantas medicinales en la zona CentroSur y Sur de Chile. 162 p. Fundacin para la Innovacin Agraria. Chilln, Chile.
DESAMARGADO DE LUPINO (Lupinus albus L.) MEDIANTE EXTRACCIN DE ALCALOIDES

Ximena Araneda1, Marco Duguet1, Rufino Pereda1, Isabel Martnez1, Marcelo Toneatti1. 1 Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: xaraneda@uct.cl; fono: 45-205526.
ABSTRACT The Lupin its a leguminous plant pre-Incan originally amply distributed. By its alkaloids concentration mostly in its seeds presents toxic characteristics. As been used as an ingredient to the elaboration of human and animal food. In Chile it cultivates principally to exportation to middle orient countries, where is processed and sold it as snack. Bitter lupin (Lupinus albus) Boroa-INIA variety was submitted to hydration, cooking and rinsing process to finally determine the alkaloids concentration by the qualitative comparison of snack samples and lupine without treaty. Was possible to take bitter lupin seeds whit a good final caliber and disbittered. It discusses processes and final quality of elaborate products. Key Words: lupin, disbittered, alkaloids, toxicity.
RESUMEN El lupino es una planta leguminosa de origen preincaico ampliamente distribuida. Debido a la concentracin de alcaloides mayoritariamente en sus semillas, presenta caractersticas txicas. Ha sido usado como ingrediente para la elaboracin de alimento para consumo animal y humano. En Chile se cultiva principalmente para la exportacin a pases del medio oriente, donde es procesado y vendido como snack. Lupino amargo (Lupinus albus) variedad Boroa-INIA fue sometido a procesos de hidratacin, coccin, enjuague para finalmente determinar la concentracin de alcaloides mediante comparacin cualitativa de muestras tipo snack comercial y lupino sin tratado. Fue posible obtener semillas de lupino amargo con buen calibre final y desamargadas. Se discute procesos y calidad final de productos elaborados. Palabras clave: lupino, desamargado, alcaloides, toxicidad.
INTRODUCCIN A nivel mundial, la superficie cosechada de lupino ha ido en descenso en los ltimos aos, llegando a 687 mil hectreas en 2009 (ODEPA, 2011). En este mercado el lupino dulce es el que lidera las exportaciones, producto utilizado como forraje o leguminosa de grano (Toledo et al., 2004). En tanto, el lupino amargo tiene en la Regin de La Araucana su principal zona productora, donde es exportado para luego ser procesados como snack. Se trata de una variedad que tiene un 40% de protena en el grano, el cual lentamente se instala en diferentes segmentos productivos debido a su capacidad de adaptacin a suelos pobres y climas secos, principalmente de la zona secano interior (Vallejos et al., 2004) (Vallejos, Silva, & Acevedo, 2004). El lupino amargo es un cultivo propio de la agricultura familiar campesina (Galdames y Neira, 2007), por esto es que existe la posibilidad de dar un valor agregado al lupino de descarte que no es exportado y que adems posee un bajo precio para su venta en mercado nacional siendo muchas veces utilizado para resiembras o como desecho debido a que no puede ser consumido por animales o humanos por su alto contenido de alcaloides, compuestos orgnicos generalmente de origen natural, que en altas dosis pueden generar la muerte de quien lo ingiere (Rodrguez, 2009). Origen El lupino, altramuz o lupini (Lupinus albus L.) corresponde a un conjunto de plantas del gnero Lupinus de la familia Leguminoseae, subfamilia Papinoloideae (Toledo et al., 2004). El gnero Lupinus comprende alrededor de 500 especies, de las cuales 10 se encuentran en Chile. Entre stas, cuatro estn consideradas nativas (Marticorena y Quezada, 1985). Los pobladores preincas domesticaron esta planta, lo cual fue plasmado en cermicas y tejidos, sin embargo, fue desplazada por la introduccin de cultivos europeos (Jacobsen y Mujica, 2006). El primer lupino introducido en Chile fue el Lupinus angustifolius, de flor azul, amargo y dehiscente. Fue utilizado como abono verde en vias a partir de los inicios del siglo pasado. En 1949 comienzan a introducirse el Lupinus albus (lupino blanco), de flor blanca, destinado como forraje animal y Lupinus luteus (de flor amarilla). Ambas especies denominadas dulces o de bajo contenido de alcaloides (componente que confiere caracterstico sabor amargo) (Toledo et al., 2004). Caractersticas El lupino es una leguminosa, cuya principal caracterstica de importancia para la agricultura es fijar nitrgeno atmosfrico en cantidades apreciables de 100 kg ha-1 segn estimaciones realizadas por Jacobsen y Mujica (2006). Segn Toledo et al. (2004), es una leguminosa capaz de aportar 50 a 200 unidades de nitrgeno por hectrea al ao, restituyendo la fertilidad del suelo cultivada en el rea andina desde pocas preincaicas. Barrientos et al. (2002) demostraron la alta capacidad de fijar nitrgeno de L. albus (282 kg de N ha-1) y L. angustifolius (197 kg de N ha-1) en el Sur de Chile. Esta planta se desarrolla en valles templados y reas alto-andinas. El cultivo y consumo del grano paulatinamente est disminuyendo en los pases andinos, sobre todo en Colombia, Argentina y Chile por falta de difusin de las formas de uso a pesar de su gran valor nutritivo y resistencia a factores climticos adversos en las zonas donde se siembra (Jacobsen y Mujica, 2006). La variedad Boroa-INIA proviene de una seleccin individual por peso de grano dentro de una poblacin tipo local mediante la cosecha de ste en tres comunas de la Regin de La Araucana, comenzando los ensayos en temporada 2001-2002 hasta que en la temporada 2004-2005 se establecieron macroparcelas de multiplicacin de semilla de las tres lneas seleccionadas, decidiendo al final de la temporada la liberacin de una de ellas (Boroa-INIA) debido a que mantuvo mejor peso promedio de grano (Galdames y Neira, 2007).
Se trata de una variedad que tiene un 40% de protena en el grano y que lentamente se instala en diferentes segmentos productivos. En el Sur de nuestro pas es una alternativa para la rotacin de cultivo. De acuerdo a ODEPA (2011) para la temporada 2011-2012 se proyecta una recuperacin de la produccin, con una variacin de 13%, determinada principalmente por un aumento de 12% en los rendimientos. A partir de estas estimaciones, se proyecta que la produccin mundial de lupino se situar cerca de 1.000.000 de toneladas para la temporada 2011-2012. Situacin del cultivo Histricamente, la produccin mundial de lupino ha sido ampliamente liderada por Australia, su participacin en 2010 alcanz a 67%, seguida por Alemania (7%), Ucrania (6,7%) y Bielorrusia (4,2%). Chile, con una produccin aproximada de 39.500 toneladas, se ubic en el mismo nivel de este ltimo pas, ocupando la cuarta posicin a nivel mundial (ODEPA, 2012). El principal competidor de Chile es Australia, pas que ofrece un lupino catalogado por los importadores como de calidad superior al chileno, el que se usa en la industria de elaboracin de alimentos para animales, aunque en el ao 2010 los principales destinos de los envos de lupino chileno fueron Portugal, Espaa, Egipto, Israel, Italia y el Lbano, donde es consumido como snack (ODEPA, 2011). Galdames y Neira (2007) sealan que el lupino amargo no se consume en Chile, sino que tiene un nicho de exportacin en pases europeos del Mediterrneo, principalmente Espaa, y pases de Medio Oriente, principalmente Egipto. El mercado europeo es ms exigente y ofrece mejores precios de acuerdo al tamao o calibre del grano, demandando grano de calibre 13 mm o superior. Al mercado rabe se exportan calibres entre 8 y 12 mm y tambin se pagan mejor los calibres mayores. El rea sembrada y la produccin de lupino en Chile han pasado por ciclos variables de alzas y bajas, principalmente asociados al desarrollo de la industria productora de salmones que es una de las ms importantes fuentes de demanda de lupinos dulces, utilizados en la elaboracin de alimentos para estos peces (Toledo et al., 2004). (Toledo, y otros, 2004). El lupino amargo, es cultivado en Chile mayormente por pequeos agricultores de etnia Mapuche (Galdames y Neira, 2007), el cual es de gran importancia para la agricultura en la Regin de La Araucana, donde se encuentran concentrados la mayor parte de las comunidades y agrupaciones indgenas del pas. En las ltimas dos temporadas se ha observado una importante disminucin en la superficie sembrada con lupinos, lo que junto con una baja de rendimientos, ha hecho que en este lapso la produccin haya disminuido a casi la mitad de la que se obtuvo en 2009/10, histricamente una de las ms altas obtenidas y que alcanz a 73.707 toneladas (ODEPA, 2012). La reduccin de siembras se encuentra relacionada, en principio, con que el repunte de 2009/10 fue demasiado rpido, luego de que paulatinamente se comenzara a controlar el virus ISA en la industria salmonera a partir del ao 2008. As, dicho repunte tendi a generar cierta sobreoferta en el mercado e influy en que los precios no fuesen tan atractivos como los que esperaban los productores agrcolas. De all que en las temporadas siguientes no hubo incentivos significativos para seguir incrementando las siembras de lupino (ODEPA, 2012). En el caso del lupino dulce, en la ltima temporada se aprecia un aumento de siembras cercano a 3.000 ha, probablemente como consecuencia de la entrada en escena de la empresa Copeval, que habra contratado siembras por una superficie similar a la sealada, sin embargo, el incremento fue a expensas de una cada de siembras del lupino australiano, en tanto que las siembras de lupino amargo, aunque bajaron 12% respecto a la temporada anterior, se mantuvieron en torno a 10.000 ha, aproximadamente, con lo que siguieron representando cerca de 50% del total (ODEPA, 2012).
Variedades de lupino dulce y amargo Todas las variedades de lupino originalmente fueron amargas, pero a travs del mejoramiento gentico se han obtenido variedades de lupino dulce, que corresponden a aquellos en que el contenido de alcaloides es inferior a 0,05%. Los amargos presentan de un 1 a un 2% de alcaloides (Toledo et al., 2004). De acuerdo a este criterio es que se pueden clasificar las variedades de lupino ms utilizadas (Cuadro 1). Cuadro 1. Variedades de lupino ms importantes cultivadas.
Especie L. albus Variedad Multolupa Amargo Victoria Rumbo B Typtop B Grano Blanco dulce Blanco amargo Blanco dulce Blanco dulce Blanco dulce Amargo, semilla L. angustifolius Azul gris dehiscente Dulce, semilla Australiano blanca Dulce, semilla Gungurru blanca Blanca Precoz Blanca Precoz Azul Semi-tardo Flor Azul clara Azul clara Azul clara Azul clara Azul oscuro Ciclo Tardo Tardo Tardo Semi-tardo Semi-tardo
Fuente: Toledo et al. (2004). L. albus variedad Boroa-INIA (lupino blanco) La variedad Boroa-INIA tiene un hbito de crecimiento indeterminado, plantas con este hbito mantienen su crecimiento vegetativo luego de iniciada la fase reproductiva, desarrollndose y produciendo floraciones hasta que la humedad del suelo es escasa y se presentan mayores temperaturas (Toledo et al., 2004). Sembrada en otoo-invierno (abril-junio), la variedad Boroa-INIA alcanza normalmente 1,7 a 2,0 m de altura, ligeramente inferior a la de los lupinos provenientes de Italia y Marruecos. Tambin la altura es inferior en siembras realizadas a salidas de invierno o en suelos compactados (Galdames y Mera, 2007). El grano de Boroa-INIA es blanco marfil, sin ornamentacin, de cotiledones amarillos, de forma ms o menos cuadrangular, con una ligera depresin central en ambos lados. Estas caractersticas son comunes a la gran mayora del lupino amargo cultivado en el pas (Galdames y Neira, 2007). Alcaloides Segn lo sealado por Rodrguez (2009) se considera alcaloide a un compuesto orgnico de origen natural (generalmente vegetal), nitrogenado, derivado generalmente de aminocidos, de carcter ms o menos bsico, de distribucin restringida, con propiedades farmacolgicas importantes a dosis bajas y que responde a reacciones comunes de precipitacin. Se han descrito 26 alcaloides diferentes, todos derivados de la quinolizidina y cuya naturaleza vara segn la especie de lupino (Schmidt-Hebbel, 1986). De acuerdo a las caractersticas de esta definicin se pueden clasificar en:
- Alcaloides verdaderos, los que cumplen estrictamente con las caractersticas de la definicin de alcaloide, por lo que son formados a partir de aminocidos, tienen siempre un nitrgeno intracclico, son de carcter bsico y existen en la naturaleza normalmente en estado de sal. - Protoalcaloides, son aminas simples con N extracclico, de carcter bsico y son productos del metabolismo de los aminocidos. - Pseudoalcaloides, presentan algunas de las caractersticas de la definicin de alcaloide, pero no son derivados de aminocidos. - Alcaloides imperfectos, son derivados de bases pricas, no precipitan con los reactivos especficos para alcaloides. La funcin de los alcaloides en las plantas no es an muy clara, existen algunas sugerencias sobre el rol que juegan estas sustancias en los vegetales, tal como ser productos de desecho o almacenamiento del N sobrante, esta funcin es equivalente a la del cido rico o de la urea en los animales (Rodrguez, 2009). Saavedra (1995) seala que los principales alcaloides presentes en el lupino son sustancias nitrogenadas que poseen anillos quinolizindicos sintetizados a partir de la lisina. Asimismo Rodrguez (2009) plantea que stos son la lupanina en un 46%, la espartena en un 14%, la 4-hidroxilupanina en un 10%, la n-metilangustifolina en un 3% y la 13-hidroxilupanina en un 1%. En concordancia con Cubillos et al. (1999) quienes establecen la concentracin de lupanina en un 70,9% confirmndola como el alcaloide de mayor importancia en las semillas de L. albus. La lupanina es el alcaloide que se encuentra en mayor concentracin en el lupino, pudindose encontrar la d y l-lupanina, as como tambin sus mezclas. La d-lupanina es un lquido espeso cristalino con diferentes puntos de ebullicin que la l-lupanina, el cual es un aceite viscoso que posee actividad antibacteriana, nematcera, que puede utilizarse como insecticida contra lepidpteros y colepteros (Rodrguez, 2009). Lo que puede ser una aplicacin potencial de los alcaloides en lupino en el control de plagas y parsitos intestinales de los animales. En general, todas las partes de una planta de lupino contienen alcaloides, aunque su biosntesis se limita a los tejidos verdes, especialmente las hojas. Los alcaloides se producen en cantidades abundantes en las semillas, que son tambin una buena fuente de protenas y lpidos (Muzquiz et al., 1994). Toxicidad de los alcaloides del lupino En trminos de ecologa qumica, los alcaloides confieren importante resistencia a patgenos y herbvoros (Muzquiz et al., 1994). Afirmando esto, Saavedra (1995) y Rodrguez (2009) exponen que la toxicidad de los alcaloides ha sido demostrada en animales y seres humanos, siendo los sntomas principales de envenenamiento la midriasis, calambres, trastornos visuales, cianosis, parlisis respiratoria, violentos dolores estomacales, vmitos e incluso coma. Los efectos txicos de estos alcaloides no son acumulativos y son rpidamente excretados por el rin, siempre que la cantidad total de alcaloides no exceda un determinado nivel. Los lmites de toxicidad que estn aceptados son 0,02% para nutricin humana y 0,03% para nutricin animal. Es por lo tanto importante conocer la cantidad de alcaloides presentes y los niveles txicos de los alcaloides individuales ya que no todos tienen la misma toxicidad (Muzquiz et al., 2006). Los alcaloides comunican al lupino cierto sabor amargo y son de carcter txico, por lo que deben eliminarse. Esto se logra por el procedimiento convencional, usado desde tiempos antiguos en la regin andina: coccin en agua de la semilla entera, remojada previamente durante unos 30 min, seguida de inmersin prolongada (3 a 4 das) en corriente de agua. Una alternativa de tipo industrial consiste en una extraccin previa con hexano del aceite, el cual puede usarse como comestible pues no retiene prcticamente alcaloides y contiene, en cambio, cido linoleico y gama-tocoferol (Schmidt-Hebbel, 1986).
El objetivo del presente trabajo fue realizar la extraccin de alcaloides de manera semiartesanal mediante hidratacin e identificar la presencia o ausencia de alcaloides en lupino de descarte variedad Boroa-INIA para ser utilizado en alimentacin humana. MATERIALES Y MTODOS La investigacin se realiz en el Laboratorio de Bromatologa de la Escuela de Agronoma de la Universidad Catlica de Temuco ubicado en Edificio Cincuentenario del Campus Norte, Rudecindo Ortega N 02950. Se seleccionaron manualmente 700 g de semillas de descarte de lupino amargo (L. albus) variedad BoroaINIA, destinado al mercado externo donde es procesado. Para esta tarea fueron seleccionados granos que estuviesen libres de hongos, residuos, semillas de mala calidad o con alguna anormalidad. Luego, utilizando una forma de extraccin mediante calor se procedi al remojo y lavado de las semillas, para esto se utiliz un recipiente de acero inoxidable donde las semillas fueron hervidas. Una parte del material resultante se utiliz para realizar las pruebas cualitativas de presencia de alcaloides deshidratndolas. Metodologa de desamargado de lupino La tcnica utilizada se bas en lo que describe Jacobsen y Mujica (2006) donde se establecen mtodos de deslupinizacin industriales y artesanales, caracterizndose estos ltimos por los procesos de remojo e hinchado del lupino (Cuadro 2). El mtodo utilizado para el desamargado del lupino posee varias etapas descritas por Palacios y Ortega (1998) dentro de las cuales incluye: Medicin de parmetros fsicos. Se midieron semillas de lupino Boroa-INIA de descarte, aproximadamente 1 kg, donde se obtuvo un promedio de esta medicin, la cual fue repetida al trmino del proceso de hidratacin y desamargado de la muestra. Hidratacin inicial. En balanza electrnica (marca SHIMADZU modelo TX2202L), se pes 0,7 kg de grano de lupino Boroa-INIA, luego en un recipiente se vertieron 2,5 L de agua potable, por un tiempo estimado de 12 h observndose el aumento en la turbiedad de sta, logrando as la hidratacin completa de los granos. Coccin a presin. Posterior a la hidratacin del lupino, se realiz un hervido y un cambio de agua a igual temperatura. Remojo del grano. Luego de 24 h se realiz un cambio de agua y comenzaron las etapas de remojo con agua fra y caliente sobre cocinilla cada 6 h. Lavado. Transcurridos 6 d de haber realizado el proceso de remojo del grano, se procedi a lavar la muestra con aproximadamente 5 L de agua fra escurriendo, haciendo disminuir a temperatura ambiente. Conservacin. A -18C, y en 2,5 L de agua fra, se procedi a guardar en refrigerador la muestra, para luego realizar la separacin de sta con distintas soluciones experimentales. A continuacin se detallan las diferentes etapas y procedimientos que se llevaron a cabo sobre las muestras de lupino en base a lo descrito por Jacobsen y Mujica (2006).
Cuadro 2. Resumen procedimientos realizados en laboratorio.

Fecha 14-06-2011 Hora N maceraciones Agua Fra Caliente 100C Caliente 100C Fra Fra Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Caliente 100C Agua (L) Gramos (g) 2,5 700
22:00 1 Maceracin /12h
15-06-2011
10:00
1 Hervido 1h
2,5
700
15-06-2011
10:30
Cambio de agua
2,5
700
15-06-2011 15-06-2011
11:00 17:00
1 Maceracin 2 Maceracin
2,5 2,5
700 700
15-06-2011
23:00
3 Maceracin
2,5
700
16-06-2011
5:00
4 Maceracin
2,5
700
16-06-2011
23:00
5 Maceracin
2,5
700
16-06-2011
17:00
6 Maceracin
2,5
700
16-06-2011
23:00
7 Maceracin
2,5
700
17-06-2011
5:00
8 Maceracin
2,5
700
17-06-2011
11:00
9 Maceracin
2,5
700
17-06-2011
17:00
10 Maceracin
2,5
700
17-06-2011
23:00
11 Maceracin
2,5
700
Metodologa de determinacin de alcaloides en forma cualitativa La muestra previamente hidrolizada se proces en molinillo elctrico, al igual que una muestra de semillas sin desamargar del mismo origen y semillas comerciales de producto importado denominado CANTOLIVA (Tremoco extra), elaborado en Portugal con semillas de primera seleccin producida en Chile. Obteniendo de esta manera tres muestras de harina de lupino como se observa en la Figura 1.
Figura 1. Harinas de lupino procesadas. A) lupino desamargado, B) lupino sin desamargado C) lupino comercial (CANTOLIVA). Identificacin de muestras Para identificar la presencia o ausencia de alcaloides en las muestras procesadas, se utilizaron tres reactivos; el primero de ellos conocido como reactivo de Mayer, el cual se emplea para la caracterizacin no especfica de alcaloides, ste se basa en la acidez de stos en su forma de sales (clorhidratos) debido que en medios bsicos el reactivo de Mayer no precipita. La mayora de los alcaloides reaccionan dando un precipitado blanco o amarillo claro, amorfo o cristalino (Vargas, 2009). Este reactivo es preparado mediante la disolucin de 1,358 g de cloruro de mercurio II en 60 mL de agua, lo que se agrega a una solucin de 5 g de yoduro de potasio en 10 mL de agua; finalmente se agrega agua hasta completar 100 mL (Villanueva, 2006). El reactivo de Hager consiste en una solucin saturada de cido pcrico en agua, este reactivo precipita la mayora de los alcaloides, los picratos se pueden cristalizar y ello permite por medio de resinas intercambiadoras, separar los alcaloides (Arango, 2008). El reactivo de Bouchardt (yodo ioduro de potasio), consiste en una solucin de 2 g de yodo y 4 g de yoduro de potasio en 100 mL de agua, la cual genera precipitados de color rojo pardo en presencia de alcaloides. El procedimiento para estos reactivos comenz con la evaporacin de dos a tres gotas del extracto etanlico en los tubos de ensayo que se encuentran con harina de lupino. Se agregaron luego dos a tres gotas de cido clorhdrico 5% hasta solubilizar los residuos. Posteriormente se procedi a centrifugar las soluciones a 6000 rpm durante 10 min hasta que se extrajeron de la centrifuga y a cada tubo de ensayo se le agreg una gota del reactivo correspondiente agitando la muestra para su posterior anlisis visual. Por ltimo, se midieron con un calibrador milimtrico, 100 semillas de lupino secas luego de pesadas y luego aquellas semillas que resultaron del proceso de hidratacin.
Envasado y conservacin de lupino La muestra de lupino proveniente de la hidratacin y que no fue procesada como harina de lupino, fue envasada con agua destilada para posteriormente ingresar a autoclave durante 15 min a 121C siendo congelada durante 21 das a -18C para determinar si es posible utilizar lupino desamargado previamente congelado, siendo sta una posibilidad para el agricultor de acumular materia prima para pocas de mayor escasez. Al trmino de este periodo, se procedi a descongelar en agua tibia y utilizar las muestras en tres frascos con 100 g de lupino, 100 mL de agua destilada con cido ctrico y sal al 1%, 100 mL de agua destilada con vinagre de manzana y sal al 1% y finalmente un frasco con slo 100 mL de agua destilada. Estas fueron ingresadas a autoclave y puestas en conservacin durante 12 meses en condiciones de oscuridad y temperatura ambiente (Figura 2). Los datos obtenidos de cada evaluacin fueron comparados y discutidos en base a la literatura existente a fin caracterizar el proceso y calidad final de productos elaborados.
Figura 2. Lupino envasado, 12 meses. A) 100 mL de agua destilada con cido ctrico y sal al 1%, B) 100 mL de agua destilada con vinagre de manzana y sal al 1%, C) 100 mL de agua destilada. RESULTADOS Y DISCUSIN Proceso de desamargado de lupino El lquido resultante de los sucesivos remojos y hervidos fue un extracto acuosos de color amarillo obscuro, debido a la liberacin de los alcaloides. Segn Cubillos et al. (1999) y Rodrguez (2009), la mayor concentracin de alcaloides est dada por la presencia de lupanina. La mayor coloracin acuosa se present al comenzar el sexto da, 24 h despus de lo descrito por Palacios y Ortega (1998) quienes tambin sealan que los tratamientos que aumentan sus tiempos de exposicin al lavado, presentan ciertos grados de putrefaccin del grano, situacin que no ocurri en las pruebas prcticas llevadas a cabo en el laboratorio. Segn Rodrguez (2009) el agua resultante puede ser utilizada para el control de plagas. Sin embargo, Quintana et al. (2011) estiman que el extracto o infusin de lupino no posee una accin insecticida significativa, sino que posee un efecto insectistico sobre eclosin de huevos de determinados insectos, lo cual debe ser estudiado con mayor profundidad. Dado que los alcaloides parecen jugar un papel muy importante en el sistema defensivo de la planta se ha estudiado la capacidad antigerminativa (Muzquiz et al., 1994), fungicida (De la Cuadra et al., 1994) y bactericida (De la Vega et al., 1996) de los alcaloides mayoritarios de las diferentes especies del gnero Lupinus a fin de evaluar la posibilidad de emplearlos en el desarrollo de plaguicidas naturales.
Es posible observar que el calibre promedio del lupino hidratado es mayor que el lupino deshidratado, con diferencia de 2,72 mm, esto debido a la hidratacin que sufrieron los granos de lupino luego de los diferentes procesos a los cuales fueron sometidos para la extraccin de alcaloides y almacenaje en distintas soluciones. De esta manera, el proceso de hidratacin del lupino aporta a mejorar caractersticas fsicas, otorgando un mayor tamao al producto final el cual pueda competir con productos derivados de la exportacin. Sin embargo, estos valores an no pueden ser comparables con el del lupino comercial, Galdames y Neira (2007) determinaron que ms de 80% del grano de Boroa-INIA puede alcanzar un calibre 13 mm o superior, dependiendo esto de la poca de siembra y disponibilidad de agua, lo que concuerda con el calibre de la muestra comercial CANTOLIVA evaluada, la cual present un calibre promedio de 15,6 mm hidratada, aproximadamente 2,6 mm ms que lupino de inters comercial (Cuadro 3 y Figura 3). Cuadro 3. Calibre de lupino Boroa-INIA de descarte v/s lupino comercial.
Figura 3. Semillas de lupino. A) calibre de lupino sin procesar, B) procesado, C) comercial. Resultado determinacin de alcaloides en forma cualitativa Despus de realizadas las pruebas de Mayer, Hager y Bouchardt se observa el resultado de las muestras con la aplicacin de estos diferentes reactivos sobre muestras de harina de lupino amargo sin procesar, lupino desamargado y lupino comercial, resultando diferentes reacciones de cido pcrico, mercurio y yodo sobre las muestras centrifugadas anteriormente. Fue posible determinar mediante la condensacin de la muestra la presencia o ausencia de alcaloides en la muestra de lupino, aunque se puede observar la mayor o menor condensacin por concentracin de alcaloides en cada una de ellas.
Se pudo observar la respuesta de las tres muestras analizadas frente a cada uno de los reactivos evaluados, donde se apreci la alta condensacin que se present principalmente en la muestra nmero tres (lupino amargo) la que se utiliz como base para realizar una comparacin visual, ms an, con la respuesta a reactivos de Mayer y Bouchardt, donde se pudo apreciar una disminucin significativa en las condensaciones sobre todo en la muestra uno (deslupinizada) donde incluso no se observ fragmentos mayormente condensados, principalmente en la muestra donde se aplic el reactivo de Mayer (Figura 4).
Figura 4. Resultados de reactivos. Se estima de este modo, que los niveles de alcaloides presentes en la muestra tratada disminuyeron luego de ser hidrolizada lo que podra concordar con Koleva et al. (2012) que luego de llevar a cabo este proceso, obtuvieron una disminucin de concentracin de alcaloides de 1 a 2% a 0,05%. Sin embargo se debe tener en cuenta que la presencia de stos en bajas dosis, son incluso beneficiosas para la salud ya que con dosis de 0,03% incorporadas a pacientes que presentan diabetes tipo II, los alcaloides tienen efectos hipoglicemiantes, siendo una alternativa factible y de bajo costo para tratamientos de enfermedades crnicas como la hiperglicemia (Fornasini et al., 2012).
Resultado envasado y conservacin de lupino Se puede determinar que el proceso de congelamiento, descongelamiento y conservacin de las muestras de lupino desamargada no influy en la calidad de las semillas tratadas, tanto en su sabor como composicin fsica, la cual se verific en laboratorio 12 meses despus del envasado mediante determinacin de grado de acidez pH 4,7 y la ausencia de agentes extraos en las soluciones. Aunque s se not un cambio de color por turbiedad en una solucin con sal abierta a los 6 meses de haber sido envasada (Figura 5). Segn Mohamed y Rayas-Duarte (1995) la composicin, color y pigmentos totales son importantes propiedades del lupino el cual puede ser utilizado como ingrediente para consumo humano o fuente de protena animal.
Figura 5. Lupino conservado. A) muestra agua destilada con sal abierta 12 meses, B) muestra agua destilada con sal abierta hace 6 meses. CONCLUSIONES Es posible hidrolizar alcaloides con mtodos artesanales replicables a la pequea agricultura y evaluar su presencia con tcnicas de condensacin de muestras. En las muestras evaluadas se pudo determinar mediante pruebas cuantitativas la ausencia de alcaloides, principalmente con reactivo de Mayer y Bouchardt. Se puede utilizar lupino de descarte desamargado para ser procesado de diferentes formas y elaborar un producto tipo snack manteniendo las cualidades iniciales del producto conservado. A travs de la hidrolizacin y desamargado de lupino se logran aumentos de calibres en granos de descarte siendo esto una oportunidad para el agricultor de dar un valor agregado a un producto que normalmente se comercializa sin procesar. Los residuos acuosos del proceso de desamargado podran ser evaluados para su utilizacin en control de insectos, debido al alto ndice de alcaloides quinolizidnicos entre otros.
Arango, G. 2008. Alcaloides y compuestos nitrogenados. 88 p. Universidad de Antioquia. Medellin, Ecuador. Barrientos, L., A. Montenegro, y I. Pino. 2002. Evaluacin de la fijacin simbitica de nitrgeno de Lupinus albus y L. angustifolius en un Andisol Vilcn del Sur de Chile. Terra Latinoamericana (Mxico) 20:39-44. Cubillos, A., M. Gdicke, D. Von baer, y F. Ahumada. 1999. Determinacin de la dosis letal media (DL50) de alcaloides del lupino en pollas de reposicin blancas y marn. Archivos Medicina Veterinaria (Chile) 31:249-256. De la cuadra, C., J. Tello; M. Muzquiz, and R. Calvo. 1994. Poder fungicida in vitro de espartena y gramina, alcaloides del lupino amargo. Studia Botnica (Espaa) 13:99-101. De la vega, R., M. Gutierrez, C. Sanz, R. Calvo, R. Robredo, C. De la cuadra, and M. Muzquiz. 1996. Bactericide-like effect of Lupinus alkaloids. Industrial Crops and Products (Espaa) 2:141-148. Fornasini, M., J. Castro, E. Villacrs, and L. Narv. 2012. Hypoglycemic effect of Lupinus mutabilis in healthy volunteers and subjects with dysglycemia. Nutricin Hospitalaria (Ecuador) 27:425-433. Galdames, R., y M. Neira. 2007. Boroa-Inia, primera variedad de lupino (Lupinus albus) amargo exportable obtenida en chile. Agricultura Tcnica (Chile) 67:320-324. Jacobsen, S., y S. Mujica. 2006. El tarwi (Lupinus mutabilis Sweet.) y sus parientes silvestres. Botnica Econmica de los Andes Centrales (Per) 28:458-482. Koleva, I., T. van Beek, A. Soffers, B. Dusemund and I. Rietjens. 2012. Alkaloids in the human food chain-Natural occurrence. Molecular Nutrition & Food Research (The Netherlands) 56:3052. Marticorena, C., y M. Quezada. 1985. Catlogo de la flora vascular de Chile. Gayana Botnica 42:1-2. Mohamed, A., and P. Rayas-Duarte. 1995. Composition of Lupinus albus. American Association of Cereal Chemists 72:643-647. Muzquiz, M., M. Pedrosa, E. Varela, E. Guillamon, C. Goyoaga, C. Cuadrado, y C. Burbano. 2006. Factores no-nutritivos en fuentes proteicas de origen vegetal. Su implicacin en nutricin y salud. Brazilian Journal of Food Technology (Brazil) 87-98. Muzquiz, M., C. Cuadrado, G. Ayet, C. De la Cuadra, C. Burbano, and A. Osagie. 1994. Variation of alkaloid components of lupin seeds in 49 genotypes of Lupinus albus L. from different countries and locations. Agricultural Journal Food Chemistry (Espaa) 42:1447-1450. ODEPA. 2011. Perspectivas del lupino. Disponible en http://www.odepa.gob.cl. Ledo el 17 de mayo de 2012. ODEPA. 2012. El mercado del lupino en 2012/13: perspectivas. Disponible en http://www.odepa.gob.cl. Ledo el 01 de octubre de 2012. Palacios, J., y R. Ortega. 1998. Efecto del tiempo de remojo, coccion y lavado sobre el contenido de alcaloides y proteina en chocho (Lupinus mutabilis S.). 67 p. Tesis Ingeniero en Alimentos. Universidad Tcnica de Ambato. Ambato, Ecuador. Quintana, R., A. Palma, and R. Rebolledo. 2011. Effect of an infusion of canelo and bitter lupin on Aegorhinus superciliosus adults. Ciencia e Investigacion Agraria (Chile) 38:397-403. Rodriguez, A. I. 2009. Evaluacin in vitrode la actividad antimicrobiana de los alcaloides del agua de coccin del proceso de desamargado del chocho (Lupinus mutabilis Sweet). 83 p. Tesis Bioqumico Farmacutico. Escuela Politcnica de Chimborazo. Riobamba, Ecuador. Saavedra, L. 1995. Intoxicacin por agua de Lupinus mutabilis (Chocho). Boletin Sociedad Peruana de Medicina Interna (Per) 8:35-37. Schmidt-Hebbel, H. 1986. Txicos qumicos en alimentos. Avances en su identificacin, previsin y desintoxicacin. 82 p. Editorial Universitaria. Santiago, Chile. Toledo, M. I., E. V. Baer, G. Olivares, P. Soto, A. Manriquez, C. Harrison, D. Mex, y F. Garrido. 2004. Lupino dulce, leguminosa en la produccin de alimentos para salmnidos. 44 p. Pontificia Universidad Catlica de Valparaiso. Santiago, Chile. Vallejos, E., P. Silva, y E. Acevedo. 2004. Evaluacin del rendimiento de nueve genotipos de lupino en la zona central. 37 p. Facultad de Ciencias Agronmicas de la Universidad de Chile. Santiago, Chile. Vargas, A., L. La Torre, N. Luciani, y L. Mamani, 2009. Alcaloides. 33 p. Laboratorio de Qumica Orgnica IV. Universidad Nacional Federico Villareal. Lima, Per. Villanueva, M. 2006. Manual de reactivos qumicos. 87 p. Universidad Catlica de Temuco. Temuco, Chile.
LITERATURA CITADA
Anlisis molecular de evidencia pericial en el contexto de los HecHos delictivos ambientales Jaime Solano1, Leonardo Anabalon3, Mario Romero3, Gabriel Vivallo1, Marcelo Toneatti1, Gustavo Donoso2, Carlos Esse2, Ximena Cofre1, Anglica Francois3, Ramiro Daz3, Oriana Betancour4, Alexander Ortloff4, Patricio Pea4, Alejandra Figueroa5, Cristian Lizama5 y Juan Carlos de la Fuente5. 1 Escuela de Agronoma UC Temuco, 2Escuela de Ciencias Forestales UC Temuco, 3Escuela de Ciencias Ambientales UC Temuco, 4Escuela de Medicina Veterinaria UC Temuco, 5Polica de Investigaciones de Chile. Proyecto FONDEF: D11I1024. INTRODUCCIN Los delitos ambientales corresponden a aquellos delitos vinculados a las plantaciones de especies arbreas introducidas y a los bosques de especies nativas (robo de madera, lea, metro ruma, rollizo). En este grupo de delitos se pueden incorporar tambin aquellos delitos econmicos vinculados a la falsificacin de muebles de madera, comercializados de ellos y el transporte de madera. Por otra parte, los datos estadsticos muestran que el 40% de la superficie forestal de la Regin de La Araucana, se encuentra en poder de las grandes empresas forestales, mientras que el 60% de la superficie restante se encuentra en manos de pequeos y medianos productores forestales. En este contexto, entre los aos 2004 y 2010 las cifras de CONAF (Corporacin Nacional Forestal) muestran que los delitos ambientales que involucran a los productos de la foresta (metro ruma, lea, etc.), alcanzaron los 495 casos denunciados y estn relacionados principalmente con la tala ilegal de madera nativa. Por otra parte, el Ministerio Pblico seala de recibir al menos una denuncia semanal por el delito de robo o hurto de madera desde predios forestales, lo que en el anlisis por especie ello incide en un 64% a pino, en un 32% a eucaliptus y el resto a otras especies forestales. Con todo, el problema radica en el hecho de la existencia de un importante nmero de delitos que concluye sin imputados, a causa de la falta de pruebas que permitan sostener registros para un juicio, lo cual se explica y vincula con una limitada disponibilidad de pericias botnicas que permitan esclarecer en forma cientfica dichos delitos. La Botnica forense es la aplicacin de la ciencia de la flora a las investigaciones penales. Esta es una disciplina relativamente nueva que incorpora varias sub-disciplinas: palinologa (estudio del polen), la dendrocronologa (estudio del crecimiento de los rboles), limnologa (el estudio de los ambientes marinos), la sistemtica (la clasificacin de las plantas), ecologa (el estudio de los ecosistemas), y la biologa molecular (disciplina que estudia los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular, ADN). El objetivo principal en botnica es establecer relaciones entre la evidencia y un delito. Al igual que todos los investigadores de criminalstica, los botnicos deben reunir, documentar y preservar sus pruebas con mucho cuidado para asegurarse de que sus interpretaciones sean vlidas y admisibles en los tribunales. Por ejemplo, el polen puede ser utilizado para conectar a un sospechoso con una vctima o con el escenario del crimen.
Por otra parte, la actual incapacidad de aplicacin rutinaria, de manera rpida y precisa de pruebas de identificacin botnica en rastros remanentes, sigue siendo el principal obstculo de la botnica forense, y dada la falta de informacin en base de datos, diferentes autores han utilizado con xito la bsqueda de homologa de secuencias de ADN en bases de datos utilizando partidores universales, para as poder identificar correctamente muestras desconocidas (especies forestales nativas). Diversas tcnicas de biologa molecular estn hoy disponibles para la deteccin de la variabilidad gentica a nivel de secuencia del ADN; es decir, para determinar el polimorfismo gentico. Estas tcnicas permiten la obtencin de un nmero virtualmente ilimitado de marcadores moleculares cubriendo todo el genoma del organismo. Estas tcnicas permiten evidenciar variaciones (polimorfismo) en la secuencia del ADN, modifiquen o no su fenotipo. En vegetales son utilizados en estudios evolutivos y de gentica de poblaciones, manejo de bancos de germoplasma, identificacin, proteccin legal de germoplasma, mapeo, seleccin asistida y clonado de genes. Un marcador molecular ideal debe ser altamente polimrfico o variable dentro o entre especies, de herencia mendeliana no espisttica (sin interaccin entre genes), insensible a los efectos ambientales, codominante, de rpida identificacin y simple anlisis y de posible identificacin en los estadios tempranos del desarrollo de la planta. En los anlisis genmicos, se han utilizado varios tipos de marcadores genticos; morfolgicos, isoenzimas, protenas y marcadores basados en ADN. Un marcador de ADN es simplemente un punto de referencia en un cromosoma, que puede o no corresponder a un gen. Luego, diversas tcnicas de biologa molecular se encuentran disponibles para detectar la variabilidad en la secuencia de ADN. Despus de la invencin de la reaccin en cadena de polimerasa (PCR) (Mullis y Faloona, 1987), un gran nmero de mtodos para la generacin de marcadores moleculares basados en PCR fueron detallados, debido principalmente a su aparente sencillez y alta probabilidad de xito. El uso de cebadores aleatorios super la limitacin del conocimiento antes de la secuencia para el anlisis de PCR y facilit el desarrollo de marcadores genticos para una variedad de propsitos. Las tcnicas basadas en PCR se puede subdividir en dos categoras: (1) PCR basadas cebadores arbitrarios y (2) las tcnicas de PCR basadas en secuencia especficos. Los marcadores se pueden agrupar en al menos tres grupos: 1.- Los marcadores basados en hibridacin del ADN. Los ms ultilizados en plantas son los RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). En el proceso el ADN en estudio es digerido con una enzima de restriccin. Los fragmentos clivados por la enzima de restriccin se separan por su tamao mediante electroforesis y se transfieren a una membrana donde son hibridados con una sonda. 2.- Marcadores basados en amplificacin del ADN, mediante PCR. Para que exista amplificacin del fragmento es imprescindible que ambos oligonucletidos hibriden en secuencias complementarias presentes en las hebras del ADN en estudio. La presencia de mutaciones en el sitio de hibridacin de cualquiera de los oligonucletidos impide la amplificacin del fragmento. En este grupo encontramos los RAPDs (Random Amplified Polymorphic DNA), en este caso el polimorfismo que se puede observar entre distintos individuos est dada por la presencia o ausencia de fragmentos de ADN amplificado.
La disminucin de los costos de secuenciacin y del PCR, junto a la creciente informacin sobre los genomas de plantas y animales, ha permitido el desarrollo de marcadores basados en PCR con diferentes caractersticas, entre ellos el ms frecuentemente utilizado es: SSR (simple sequence repeats o microsatelites). Los microsatlites son repeticiones en tndem de secuencias cortas o simples repeticiones montonas de muy corto (de uno a cinco) motivos de nucletidos, que se producen como elementos intercalados repetitivos en todos los genomas eucariticos (Tautz y Renz, 1984). La variacin en el nmero de unidades repetidas en tndem se debe principalmente a deslizamientos de la hebra de ADN durante la replicacin de ste. Es decir, se produce la escisin o la adicin de juego de bases repetida (2-6 pb). Como el deslizamiento en la replicacin es ms probable que las mutaciones puntuales, los loci de microsatlites tienden a ser hipervariables. Ensayos de microsatlites muestran extenso polimorfismo entre individuos (Schlotterer y Tautz, 1992). Los SSR muestran una alta reproducibilidad entre los laboratorios y presentan una base gentica codominante y por lo general, pueden detectar todos los alelos de un locus. Por lo general, el grado de polimorfismo aumenta con la longitud total de la SSR (Ortiz et al., 2000). La reproducibilidad de los microsatlites es tal, que pueden ser utilizados de manera eficiente por los laboratorios de investigacin diferentes generando datos consistentes. Marcadores microsatlitales basados en sitio especfico han sido registrado en muchas especies de plantas como el tomate (Solanum lycopersicum L.) (Benor et al.,2008), arveja (Pisum sativum L.) (Gong, et al., 2010), cebada (Hordeum vulgare L.) (Saghai Maroof et al., 1994), arroz (Oryza sativa L.) (Wu and Tanksley, 1993), y papa (Solanum tuberosum L.) (2005; Ghislain et al., 2004; Ghislain et al., 2006; Ghislain et al., 2009a; Ghislain et al., 2009b). Trabajos en especies forestales han sido reportados por Rojas et al., (2010). stos autores utilizaron marcadores microsatelitales (SSR) en el proceso de seleccin de Eucaliptus globulus tolerante a sequa mediante 10 marcadores SSR, de los cuales tres pertenecen a la serie EMCRC y siete son de la serie EMBRA. Ambas series son capaces de diferenciar claramente los distintos clones de eucaliptus provenientes de los cruzamientos entre material resistente a la sequa y material de alta productividad. A modo de ejemplo, en el Cuadro 1, se muestran partidores especficos del tipo plastdicos, mitocondrial y nuclear usados por Deguilloux et al., (2002), para pruebas de amplificacin (PCR) del ADN de Querqus petraea (Matt.) Liebl para estudios de certificacin de madera y de botnica forense. Cuadro 1. Secuencia de pares de partidores usados para pruebas de amplificacin, de muestras de ADN aisladas de madera (Querqus petraea (Matt.) Liebl).
Fuente: Deguilloux, Pemonge and Petit (2002).

3.- Marcadores mixtos. Por ejemplo, los marcadores AFLP (amplified fragment length polymorphisms), pueden considerarse como una combinacin de RFLP y RAPDs. Esta tcnica consiste en esencia de cuatro etapas: Cortar el ADN con enzimas de restriccin, adherir adaptadores de doble cadena en forma especfica a los extremos de los fragmentos obtenidos en el paso anterior, generando as un molde para la amplificacin del ADN, amplificacin selectiva por la accin de primer especficos que fueron diseados para reconocer la secuencia de los adaptadores que fueron ligados en el segundo paso, el sitio de la enzima de restriccin, ms una a tres bases selectivas al azar agregadas en el extremo 3. Finalmente, el anlisis de la subpoblacin de fragmentos amplificados mediante su desnaturalizacin por electroforesis de alta resolucin (poliacrilamida) y visualizacin por autoradiografia o tincin con nitrato de plata. Estos marcadores presentan un alto poder de deteccin de la variabilidad gentica, ya que se explora simultneamente el polimorfismo de ausencia/ presencia de sitios de restriccin y la ocurrencia o no de amplificacin a partir de secuencias arbitrarias. Para el anlisis de la variabilidad gentica, a futuro se podr evaluar la aplicacin de nuevos marcadores moleculares o nueva clase de elementos de ADN, los cuales incrementan la cobertura del genoma, tales como retrotransposones, DNA mitocondrial y DNA cloroplasto, etc. Los marcadores moleculares Y la evidencia pericial Forestal En una primera etapa, la aplicacin de los marcadores moleculares en un programa de mejoramiento gentico permiten la identificacin genticamolecular de clones producidos por los programas de mejoramiento. Esta informacin es de gran utilidad en el proceso de propagacin clonal, planificacin de las plantaciones operacionales (plantacin de un clon en forma masiva, del que ser el bosque) y seleccin de clones para plantaciones en mosaico (corresponde a la plantacin operacional de varios clones, separados entre ellos, pero dentro de un mismo sector). Adems, favorece y controla el intercambio de material gentico entre las empresas nacionales y extranjeras (con lo que se evitan duplicidades), estimula la apropiacin de clones elites generados por las diversas empresas, e impulsa la certificacin de calidad del material gentico producido por los programas de mejoramiento forestal. Una segunda aplicacin es la identificacin de hbridos provenientes de programas de cruzamientos controlados, intra (pino y eucalipto) e inter especficos (eucalipto). La nodiscriminacin o identificacin inadecuada del material gentico puede traer serias consecuencias en el cumplimiento de las metas planteadas en los programas de mejoramiento gentico, con las consiguientes prdidas econmicas para las empresas. Por ejemplo, si se identifica material autofecundado significa que el cruzamiento dirigido no fue exitoso, y estaremos seleccionando o usando algo que no es un hbrido. Tambin, la presencia de material con polen contaminante y errores en el etiquetado son problemas comunes en diferentes programas de cruzas controladas, que resultan difciles de detectar mediante la inspeccin visual de los rboles. La aplicacin de marcadores moleculares podra permitir la eliminacin temprana del material no deseado, y la intensificacin del trabajo en el material adecuado, para, de esta manera, ahorrar importantes recursos. En evidencias forenses, rastros de fragmentos de hojas y de polen pueden ser utilizados como evidencia. Histricamente la identificacin de rastros botnicos se han sustentado sobre anlisis morfolgicos e histolgicos. Con la tcnica de PCR y la posibilidad secuenciar el ADN dentro de bases de datos (GeneBank) va taxonoma molecular, permitirn alcanzar la identificacin de plantas en diferentes especies vegetales. En botnica forense se requiere primero de la identificacin de la especie para la extraccin de su ADN, la amplificacin y la secuenciacin. La generacin de informacin desde bases de datos de ADN de plantas, pueden ser usados para realizar correlaciones de marcadores especficos de una especie, para establecer ligamiento forense usando herramientas homlogas y luego, usar secuencias similares. El NCBI (National Center for Biotechnology Information) contiene miles de secuencias de ADN de plantas que son tiles para tales identificaciones.
Estos locis incluyen genes nucleares ITS1, ITS2 (regin espaciador transcrito interno) y genes del cloroplasto que codifican para la ribulosa 1,5 bis phosphate carboxylase (rbcL), ATP synthase Beta (atpB), y subunidad 5 NADH deshidrogenasa (ndhF). El locis ms usado es el del gen rbcL, de aproximadamente 1400 pares bases de largo, que es moderadamente conservado entre diferentes especies y que ha sido reportado por sobre 6500 especies de plantas. Se realizan amplificaciones por PCR del Locus rbcL mediante juegos universales de cebadores rbcL o locus ITS utilizando un conjunto variado de primers ITS. En este contexto, Ferri et al., (2008), desarrollaron un sistema de identificacin molecular basada en ADN, igual como una clave taxonmica morfolgica tradicional que ofrece criterios que progresivamente permiten identificar una muestra de plantas desconocidas para un rango taxonmico. La generacin de informacin en bases de datos ADN de plantas, se puede utilizar para ser correlacionada con marcadores especficos conocidos y establecer la vinculacin forense esgrimiendo como herramientas de bsqueda la similitud y la homologa de secuencias, lo que sugiere un sistemtica de marcadores de cdigos de barras para investigar a nivel de especie en base a amplificacin utilizando partidores universales. La actual incapacidad de aplicacin rutinaria, de manera rpida y precisa de pruebas de identificacin botnica en rastros remanentes, sigue siendo el principal obstculo de la botnica forense, y dada la falta de informacin de las bases de datos, estos autores han utilizado con xito este enfoque para identificar correctamente muestras desconocidas, lo que confirma la utilidad de este mtodo y la posibilidad de aplicacin a gran escala en el mbito forense. Para lo anterior, se han evaluado diferentes partidores (primer) de regiones conservadas, usando el programa PRIMER3. Las especies forestales que han sido analizadas buscando secuencias homlogas usando BLAST son Pinus nigra, Pinus sylvestris. En base a lo anterior, se puede concluir, que la Botnica forense es la aplicacin de la ciencia de la flora a las investigaciones penales y es una disciplina relativamente nueva que incorpora varias sub-disciplinas: palinologa, la dendrocronologa, limnologa, la sistemtica, la ecologa y la biologa molecular. El objetivo final en botnica es establecer relaciones entre la evidencia y un delito. Los problemas principales radican en el hecho de la existencia de un importante nmero de delitos que concluye sin imputados, lo cual est vinculado con una limitada disponibilidad de pericias botnicas que permitan esclarecer en forma cientfica estos delitos ambientales. Glosario Amplificacin: Proceso por la que secuencias gnicas se replican diferencialmente en un termociclador. ADN: cido desoxirribonucleico. Principal molcula que contiene informacin gentica. Est conformada por cadenas polinucleotdicas antiparalelas. pb: pares de bases. ATP: trifosfato de adenosina. PRIMER: Partidor o cebador de la reaccin en cadena de la polimerasa. POLIMORFISMO: Existencia de dos o ms fenotipos discontinuos que segregan en una poblacin. PCR: Reaccin en cadena de la polimerasa. Mtodo para amplificar segmentos de ADN que utiliza ciclos de denaturalizacin, de emparejamiento a cebadores y de sntesis de ADN, dirigida por la DNA polimerasa. AFLP: Amplified Fragment Length Polymorphisms. RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism. RAPDs: Random Amplified Polymorphic. SSR: Simple Sequence Repeats o Microsatlites. ITS: Espaciadores internos transcritos (Internal transcribed spacer).
LITERATURA CITADA Benor, S., M. Zhang., Z. Wang and H. Zhang. 2008. Assessment of genetic variation in tomato (Solanum lycopersicum L.) inbred lines using SSR molecular mrkers. Journal of Genetic and Genomics 35: 373379. Deguilloux, M., Pemonge, M. and R. Petit. 2002. Novel perspectives in wood certification and forensics: dry wood as a source of DNA. Proc. R. Soc. Lond B. 269: 1039-1046. Ferri, G., M. Alu`, B. Corradini, A. Angot, and G. Beduschi. 2008. Land plants identification in forensic botany: Multigene barcoding approach. Genetics Supplement Series 1:593-595. Ghislain. M., D. Andrade., F. Rodrguez., R. Hijmans and D. Spooner. 2006. Genetic analysis of the cultivated potato Solanum tuberosum L. Phureja Group using RAPDs and nuclear SSRs. Theor Appl Genet. 113:1515-1527. Ghislain. M., J. Nuez. M. del R. Herrera and D. Spooner. 2009a. The single Andigenum origin of NeoTuberosum potato materials is not supported by microsatellite and plastid marker analyses. Theor. Appl. Genet. 118:693-969. Ghislain. M., J. Nuez. M del R. Herrera., J. Pignataro., F. Guzman., M. Bonierbale and D. Spooner. 2009b. Robust and highly informative microsatellite-based genetic identity kit for potato. Mol. Breeding. 23:377-388. Gong, Y., S. Xu., W. Mao., Q. Hu., G. Zhang., J. Ding and Y. Li. 2010. Developing new SSR markers from ESTs of pea (Pisum sativum L.). Biomed & Biotechnol. 11(9):702-707. Mullis KB, Faloona F (1987) Specific synthesis of DNA in vitro via polymerase chain reaction. Methods Enzymol 155:350355 Rojas, P., B. Gutierrez. C. Muoz, M. Molina, O. Ortiz, L. Koch, A. Bello, M. Pino., C. Muoz, H. Prieto, G.Sellez, P. Hinrinchsen y M. Reyes. 2010. Generacin y produccin de plantas de Eucaliptus globulus tolerantes a la sequa. En: V Congreso Chileno de Ciencias Forestales. Universidad Catlica de Temuco. 220 p. Ortiz, J., I. Aguimagalde and J. Martn. 2000. Varietal identification. P. 515-560. In: F. Nuez y J.M. Carrillo (eds). Los marcadores genticos en la mejora vegetal. Editprial de la UVP, Valencia, Espaa. Saghai Maroof M. A., R. M. Biyashev., G. P. Yang., Q. Zhang and R. W. Allard. 1994. Extraordinarily polymorphic microsatellite DNA in barley: species diversity, chromosomal locations, and population dynamics. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91:54665470. Schlotterer, C. and D. Tautz. 1992. Slippage synthesis of simple sequence DNA. Nucleic Acids Res 20:2211 2215. Tautz, D. and M. Renz. 1984. Simple sequences are ubiquitous repetitive components of eukaryotic genomes. Nucleic Acids Res 12(10):41274138. Van de Wiel, C., P. Arens and B. Vosman. 1999. Microsatellite retrieval in lettuce (Lactuca sativa L.). Genome 42:139149. Wu, S. D. and K. S. Tanksley. 1993. Abundance, polymorphism and genetic mapping of microsatellites in rice. Molecular and General Genetics vol 241:225235.
EVALUACIN DE UN SNACK TIPO CHARQUI DE CARNE DE CABALLO (Equus caballus L.) CON DISTINTOS ADITIVOS ELABORADO EN CONDICIONES DE LABORATORIO Gina Leonelli1, Melissa Aguilera1, Rodrigo Arias1, Ricardo Tighe1. 1 Escuela de Agronoma, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: ginalc@uct.cl; fono: 45-205521 INTRODUCCIN La palabra charqui o charky proviene del quechua charki y su origen es ancestral, usado principalmente para cnticos y rituales (INDECOPI, 2006), y se define como carne que se conserva por salazn y secado (MamaniLinares y Gallo, 2011). Para elaborar este producto se utiliza carne cortada en lminas finas que son marinadas y secadas. El marinado segn la RAE (2012a) es un proceso por el cual se conserva en crudo ciertos alimentos con adobo de hierbas y especias, con el fin de que se ablanden y adquieran aroma. Se puede preparar una gran variedad de charquis empleando carne de vacuno, cerdos, aves y otras especies (Lonnecker et al., 2010). La deshidratacin es una de las tcnicas ms ampliamente utilizadas para la conservacin de alimentos (Nijhuis et al., 1996; Marin et al., 2006). Este es un proceso que se emplea para la preservacin de alimentos, el cual consiste en la eliminacin del agua libre de un slido, permitiendo la reduccin de las reacciones qumicas e inhibiendo el crecimiento microbiano, y por ende, prolongando la conservacin de los materiales biolgicos (Garca et al., 2010). El charqui, adems de ser un producto nutritivo rico en protenas y bajo en grasa, es estable al medio ambiente y tiene una gran demanda en el mercado (Mamani-Linares y Gallo, 2011). La carne de caballo presenta slo 2,1 mg 100 g-1 de grasa, contenido similar a la pechuga de pollo (EROSKI, 2010). Adems, la carne de caballo es la fuente de hierro ms alto de origen animal (4 mg 100 g-1), presentando un color rojo oscuro y opaco (Mamani-Linares y Cayo, 2011) mientras que la carne de vacuno slo presenta 3,5 mg 100 g-1 y antioxidantes como el beta-caroteno, el cual se obtiene por el consumo de pasturas y forrajes verdes, este mismo puede decaer dramticamente hasta un 97% en dos meses si el animal es insertado en un sistema de alimentacin con granos (Grupo CEO, 2005). Debido a que los caballos son principalmente alimentados en pasturas y con forrajes verdes la carne de caballo es considerada como un alimentos funcional (Marin et al., 2006). Este es un producto magro (Leistner, 1987), lo que permite que sea integrado en la dieta de personas que padecen enfermedades crnicas no transmisibles. En cuanto a los aditivos utilizados en el snack tipo charqui, cinco de ellos son hierbas, como el laurel, el romero, el tomillo o frutos de alguna especie aromtica como la pimenta o las semillas de cilantro, a excepcin del merkn que es un condimento elaborado artesanalmente por la etnia Mapuche de la Regin de La Araucana, en base a ecotipos locales de aj rojo Cacho de cabra (Capsicum annuum L.), cuyos frutos son secados, ahumados, tostados y molidos y mezclados con sal y otros condimentos, como semillas de cilantro tostadas y molidas (Thomet y Seplveda, 2006). Con base a lo anterior, el objetivo de este estudio fue evaluar la aceptabilidad de un snack tipo charqui obtenido a base de carne salada, sazonada y deshidratada con un flujo de proceso que presenta caractersticas nuevas en relacin a un flujo base.
MATERIALES Y MTODOS El desarrollo de los snacks tipo charqui fue realizado en el Laboratorio de Alimentos de la Escuela de Agronoma de la Universidad Catlica de Temuco, entre noviembre de 2011 y junio de 2012. Las muestras crneas utilizadas para este ensayo corresponden a posta rosada equina, obtenida de una carnicera equina establecida en la ciudad de Temuco. El aditivo esencial para la elaboracin de este producto es la sal, para este ensayo se utiliz sal fina de mesa. Los aditivos adicionales utilizados fueron tomillo, merkn, semillas de cilantro secas y molidas, romero, pimienta blanca y laurel. Cuadro 1. Materia prima, lugar de adquisicin, presentacin y valor de cada una de los insumos utilizados.
Muestra Carne Sal Tomillo Merkn Semillas de cilantro Romero Pimienta blanca Laurel Lugar de adquisicin Carnicera Venegas, Temuco Supermercado local Supermercado local Feria libre Feria libre Supermercado local Supermercado local Supermercado local Presentacin (g) Granel Envases de 1000 Envases de 7 Granel Granel Envases 10 Envases 15 Envases 5 Valor por kilo ($) 3990 300 99857 6000 3000 26000 23333 54000
Flujo base El proceso artesanal de produccin de charqui tiene como caracterstica principal el ser estacional, debido a que la fuente de calor usada para deshidratar la carne es el sol y el aire tibio circulante en pocas de verano, es por esto que las tiras de carne marinadas con sal son colgadas en cordeles o dispuestas en secadores hechos de malla, para evitar que insectos o algn otro animal pueda tener acceso a la carne durante el secado, y de esta forma son expuestas al sol durante las horas ms calurosas del da, y retiradas durante las horas de la noche para evitar que absorban humedad nuevamente. La Figura 1 muestra el flujo base o flujo A, con el cual la seora Mara Anglica Valdeavellano, productora local, elabora su producto, sobre el cual se realizaron algunas variaciones dadas por el alio agregado a cada tratamiento, enfocadas a un mercado que busca una forma ms fcil de consumir alimentos que sean tambin nutritivos.
Figura 1. Flujos de proceso, A) flujo base, B) flujo con moltura de alio, C) flujo con alios ya molidos. Elaboracin de snack tipo cHarqui Una vez obtenida la muestra de carne fresca se llev al laboratorio. Posteriormente, se dimensionaron las muestras a 10 cm de largo, 5 cm de ancho y 1 cm de grosor. Las muestras se agruparon en seis tratamientos, con tres repeticiones cada uno, cada tratamiento fue identificado con una letra y un nmero, siendo estos: T1: sal y tomillo, T2: sal y merkn, T3: sal y semillas de cilantro, T4: sal y romero, T5: sal y pimienta blanca y T6: sal y laurel. Para los tratamientos 1, 3, 4 y 6 se sigui el flujo B de la Figura 1 y para los tratamientos 2 y 5 el flujo C de la misma figura. La proporcin utilizada para todos los tratamientos fue de 50 g de sal por cada kilo de carne fresca y 1 g del aditivo seleccionada para cada tratamiento por cada kilo de carne fresca. El tiempo de marinado fue de 10 horas, a una temperatura de 4C para evitar la contaminacin y descomposicin de la carne. Una vez concluido el tiempo de marinado de la carne sta fue llevada a estufa de aire forzado (Binder, modelo FD 23), ya que el aire caliente es el mtodo de deshidratacin ms usado en la industria alimentaria (Krokida et al., 2003), en donde fueron dispuestas aleatoriamente sobre un papel aluminio, para evitar contacto directo con las rejillas de la estufa. El proceso de secado comenz a una temperatura de 45C, por 30 minutos, los siguientes 30 minutos fueron a una temperatura de 55C. Pasado este perodo de tiempo se comenz un nuevo ciclo trmico a 75C por 30 minutos, trascurrido este perodo de tiempo la temperatura se mantuvo a 75C, las muestras fueron evaluadas cada 1 hora hasta lograr un peso constante. El paso siguiente fue el ablandado de la carne deshidratada, el que se realiz utilizando un mortero de piedra con el cual se golpe la carne, hasta evidenciar un cambio de coloracin y textura del producto. La carne una vez seca fue ablandada, este proceso se realiz envolviendo la carne en una tela limpia y gruesa para luego, golpearla con un mazo tambin envuelto en tela, hasta obtener la textura deseada para este producto y lograr un cambio en la coloracin. Posterior a esto se separ por peso y se envas en bolsas de celofn.
Determinacin de humedad Transcurrido cada lapso de tiempo del proceso de deshidratado, se realiz una evaluacin del peso de la muestra, el que se registr hasta obtener un peso constante, utilizando la Ecuacin 1 (Gonzlez et al., 2008). El porcentaje de humedad fue determinado para los productos elaborados en este estudio, ya que es un factor determinante en la calidad de este tipo de productos.
Donde: Pi: peso inicial de la muestra. Pf: peso final de la muestra.
(Ecuacin 1)
Volumen de la muestra y rendimiento Los parmetros de peso, largo, ancho y grosor fueron registrados al comienzo de la etapa de secado y al finalizar los diversos ciclos trmicos para evidenciar los cambios de volumen. En base a esta magnitud se pudo calcular la variacin del volumen de las muestras. La determinacin de los parmetros de largo, ancho y grosor se realizaron utilizando un pie de metro, debido a su unidad de medida (mm). Los resultados obtenidos se multiplicaron para obtener el volumen. El rendimiento de este producto se determin basado en la relacin entre la materia inicial y el producto final obtenido (RAE, 2012b). Para determinar el peso de las muestras se utiliz una balanza analtica (marca OHauss, modelo AS200). Evaluacin sensorial Los snack tipo charqui fueron envasados en bolsas de celofn y puestos a disposicin de un panel de jueces no entrenados para ser evaluados. Se utiliz una escala hednica de cinco puntos en la cual cada juez eligi entre las siguientes opciones, las que en orden descendente son: me agrada mucho, me agrada, me es indiferente, me desagrada y me desagrada mucho (Pacheco-Delahaye y Testa, 2005). En una primera evaluacin se cont con la participacin de seis jueces no entrenados de ambos sexos y edades comprendidas entre 18 y 27 aos, pertenecientes a la comuna Temuco, los cuales evaluaron los seis tratamientos. Los jueces necesitaron utilizar los sentidos del olfato, vista, gusto y tacto para completar la encuesta de evaluacin sensorial de los productos (Benson Institute, 1996). Para las calificaciones se consideraron las notas del 1,0 al 5,0, tomando como nota mnima para que el producto sea aceptable la nota igual o sobre 4,0 (Astorga, 2012). La aceptabilidad, fue considerada como el promedio de todos los parmetros evaluados, este parmetro es de gran importancia en el desarrollo de productos, ya que determina si ste ser aceptado o rechazado por el consumidor, o simplemente si le ser indiferente (Fellow, 1994). Con los resultados obtenidos de la primera evaluacin se realiz una segunda evaluacin sensorial, donde 18 jueces no entrenados tuvieron que utilizar las habilidades sensitivas antes mencionadas, para juzgar a los tres tratamientos elegidos por el primer panel. Para esta evaluacin los jueces comprenden individuos de ambos sexos y edades entre 18 y 59 aos, pertenecientes a las comunas de Parral, Santiago, Gorbea, Quilln y Temuco, esta cantidad de jueces fue mayor a la utilizada por Morales de Len et al. (2000); Hurtado et al. (2001); Alasino et al. (2008). La evaluacin sensorial se realiz sobre los mismos parmetros y utilizando la misma escala hednica de calificacin que en la primera evaluacin.
Anlisis de datos Los resultados obtenidos se sometieron a un anlisis de varianza y a la prueba de comparacin mltiple de Tukey (p>0,05), en el programa JMP 8.0. El anlisis de los datos para la evaluacin sensorial se realiz comparando las medias obtenidas en las encuestas y con un nivel de significancia del 5%. RESULTADOS Y DISCUSIN Evaluacin de humedad Los porcentajes de humedad obtenida en el desarrollo de esta lnea de proceso, para cada uno de los tratamientos se muestran en la Figura 2. Los porcentajes de humedad fluctuaron entre 27,03 y 32,45%, valores por debajo de los presentados por Youssef et al. (2007) quienes informan un rango de 46,4 a 48,8%, y asegurando una durabilidad de los snacks de hasta un ao, almacenndolos en condiciones ptimas de temperatura y humedad.
Figura 2. Porcentaje de humedad de todos los tratamientos. T1: carne con sal y tomillo, T2: carne con sal y merkn, T3: carne con sal y semillas de cilantro, T4: carne con sal y romero, T5: carne con sal y pimienta blanca, T6: carne con sal y laurel. La humedad de los snack fue determinada en distintas instancias, siendo ste el parmetro utilizado para determinar que el producto ya estaba listo y no necesitaba ms tiempo de deshidratado, lo que permiti deshidratar la carne el tiempo adecuado para as evitar tener residuos grasos en la carne consecuencia de un tiempo de secado insuficiente o una carne sobre secada, lo cual habra afectado los parmetros organolpticos como el color, textura, aroma y apariencia de la misma. Estos parmetros pueden ser usados para definir la calidad sensorial de un alimento (Di Monaco et al., 2008). La textura es uno de los factores ms importantes para la eleccin de un alimento por parte de un consumidor (Bertozzi y Panari, 1993), se define como la propiedad sensorial de los alimentos, que es detectada por los sentidos del tacto, la vista y el odo, y que se manifiesta cuando el alimento sufre una deformacin (Razeto et al., 2004), adems de ser el parmetro en el que tiene mayor influencia el proceso de deshidratado, ya que un sobre secado o falta de ste podra ocasionar una mala textura, siendo una desventaja para ste o cualquier producto deshidratado.
La eleccin de temperaturas para el ciclo trmico se realiz apuntando a favorecer la deshidratacin paulatina inicial de la carne, para evitar un inconveniente comn cuando se quieren alcanzar niveles altos de deshidratacin, que es el incremento casi en igual medida de la ganancia en slidos, lo cual no siempre es conveniente, debido a que se alteran considerablemente las propiedades organolpticas del producto y se dificulta la eliminacin de la humedad remanente, en el caso en que el soluto ganado se acumule superficialmente formando una corteza (Zapata-Montoya y Castro-Quintero, 1999). Curva de deshidratado Para determinar la curva de deshidratado, se realizaron evaluaciones del peso de las muestras en distintas intervalos de tiempo de deshidratado, resultado de esto se determin que el tiempo de secado total para todos los tratamientos fue de 5,5 horas, alcanzando un peso constante a las 4,5 horas. El realizar esto, permiti conocer los tiempos necesarios para planificar la lnea de proceso, ya que los productos deshidratados tienen mltiples beneficios. Algunos de los ms importantes y de gran valor para la sociedad de hoy en da, que busca el ahorro de energa tanto en el almacenaje como otras etapas de la produccin de alimentos. Adems, esta tcnica previene el colapso de las estructuras internas, prdida de textura, desarrollo microbiano y decoloracin, problemas frecuentes al momento de determinar la calidad de un alimento. Por otro lado, los productos deshidratados permiten ser almacenados a temperatura ambiente por largos perodos de tiempo (Jarayaman y Das Gupta, 1995). Por lo mismo, se hace necesario controlar estos factores, con el propsito de minimizar su impacto sobre la calidad y garantizar la vida til del alimento (Watada et al., 1990). Los pesos obtenidos en las distintas etapas del deshidratado de la carne fueron registrados en la Figura 3, la cual evidencia que a partir de los 270 minutos de secado las muestras no variaron su peso, lo que se mantuvo as por tres evaluaciones consecutivas. Esto permiti determinar cundo concluir el deshidratado de la carne.
Figura 3. Curva de deshidratado de los snack tipo charqui. Variacin de volumen Las variaciones de volumen entre la carne fresca y la carne deshidratada, se muestran en la Figura 4. Estas fluctuaron entre un 70,8 y un 78,2%, lo que demuestra una gran variacin de volumen durante el proceso de secado. Los tratamientos T3 y el T2 fueron los que presentaron la mayor y menor variacin, respectivamente.
Figura 4. Cambio de volumen de los snack tipo charqui. La contraccin de las muestras durante el secado afect a cada uno de los parmetros medidos para obtener el volumen de forma diferente, el parmetro que ms vari fue el largo de las muestras debido a que el dimensionado se orient en favor de las fibras musculares, el que en promedio vari 78,82%, seguido por el ancho de las muestras que vari en promedio 73,9% y por ltimo el parmetro que menos fue alterado por el deshidratado fue el grosor, el cual vari un 37,15%. A continuacin, en el Cuadro 2 se muestran el valor inicial, el valor final y el porcentaje de variacin para cada tratamiento. Cuadro 2. Variacin porcentual de los parmetros medidos (E.E).
Parmetro Largo Tratamiento T1 T2 T3 T4 T5 T6 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T1 T2 T3 T4 T5 T6 Inicial (mm) 134,87,4 1155,1 138,73,7 109,12,0 115,16,8 119,457 59,83,9 58,42,7 56,70,4 58,32,7 62,52,8 64,37,8 9,61,0 9,41,0 10,30,3 8,40,3 12,01,0 9,80,2 Final (mm) 108,78,7 84,80,3 113,30,9 83,76,1 92,76,2 95,15,5 45,74,4 41,12,5 43,71,1 44,11,5 46,32,0 44,12,0 3,40,1 3,60,2 3,80,1 3,90,2 3,50,2 3,60,4 Porcentaje de variacin (%) 80,63 73,73 81,68 76,71 80,53 79,64 76,42 70,37 77,07 77,07 74,08 68,58 35,41 38,29 36,89 46,42 29,16 36,73
Ancho
Grosor
Estos valores son de gran utilidad en una lnea de proceso para reducir las prdidas, ya que al tener en conocimiento cmo se comportar el material primario durante el proceso de deshidratado permite dimensionar el material fresco, considerando la forma en la que la carne variar de tamao al secarse. Esto permite que el producto se adecue al tamao del envase final.
Rendimientos El rendimiento para los productos realizados en este ensayo se muestra en el Cuadro 3. Cabe destacar que el tratamiento que mayor rendimiento obtuvo fue el charqui con sal y merkn con un 38,1% y el que menor rendimiento present fue el tratamiento de charqui con sal y semilla de cilantro seca con 32,3%. No hubo diferencia significativa entre los tratamientos para el rendimiento. Cuadro 3. Rendimientos para todos los tratamientos (E.E).
Producto T1 T2 T3 T4 T5 T6 Peso inicial (g) 657,6 60,34,4 67,73,2 55,52,0 59,75,1 64,15,3 Peso final (g) 21,31,8 19,22,0 25,80,7 20,30,4 21,21,6 22,21,6 Rdto. (%) 32,3 38,1 31,8 36,6 35,5 34,6
diferencia significativa segn prueba de Tukey (P > 0,05) No hubo
En general, el rendimiento de los productos deshidratados es bajo, pero presentan variadas ventajas ya que al reducir el contenido de humedad de ellos se previene el crecimiento de microorganismos y se minimizan las dems reacciones que los deterioran (Doymaz y Pala, 2003), conservando as los mismos nutrientes y vitaminas en un menor volumen de producto. Adems, el valor de estos productos es elevado, ya que por lo general se comercializan como productos gourmet. Panel sensorial Los seis tratamientos fueron evaluados para obtener una calificacin que permitiera determinar si son aceptables o no para los jueces evaluadores. De acuerdo con Risvik et al. (1997), el realizar una evaluacin por parte de un panel sensorial permite conocer la percepcin popular de un producto y con esto reconocer las preferencias de los consumidores. El Cuadro 4 muestra las calificaciones de todos los tratamientos para los parmetros de apariencia, color, textura, aroma y sabor, con lo que se calcul la aceptabilidad de los productos elaborados en este estudio. Cuadro 4. Promedios de la evaluacin sensorial realizada a los seis snack tipo charqui (E.E).
Tratamiento Apariencia Color T1 3,20,3 a 2,50,2 b T2 4,00,3 a 4,00,2 a 3,00,3 a 3,00,2 ab T3 4,30,3 a 3,80,4 a T4 4,00,3 a 4,00,2 a T5 3,00,2 a 3,80,1 a T6 Textura 3,00,4 ab 4,30,3 a 2,80,3 b 4,20,3 ab 4,30,3 a 3,30,3 ab Aroma 2,80,5 b 4,00,2 ab 3,00,2 ab 4,30,2 a 3,80,3 ab 4,30,3 a Sabor 3,50,3 a 4,70,2 a 3,70,2 a 4,70,3 a 4,70,2 a 3,70,4 a Aceptabilidad* 3,0 b 4,2 a 3,1 b 4,3 a 4,2 a 3,6 ab
Letras distintas dentro de las columnas indican diferencias estadsticamente significativas para la prueba Tukey (p>0,05). *La nota que define la aceptabilidad de los tratamientos es sobre 4,0.
Los resultados obtenidos de esta primera evaluacin permitieron seleccionar los tres tratamientos con la diferencia significativa de mejor aceptabilidad. Estos fueron T2: merkn, T4: romero y T5: pimienta blanca. Adems, de contar con la aceptabilidad de los jueces, stos poseen, gracias a sus aditivos, otras caractersticas que los hacen interesantes para el desarrollo de un producto alimenticio. Dentro de los tratamientos uno de los que presenta buena aceptabilidad es el charqui con merkn. Este condimento es elaborado ancestralmente por la etnia Mapuche de la Regin de La Araucana (Leonelli et al., 2011) el que adems presenta un componente cultural y tiene una reconocida aceptacin en diversas preparaciones, incluyendo las carnes rojas. Incluido dentro del grupo de los mejor evaluados el charqui con romero, que es un condimento que va muy bien con las carnes rojas en trminos culinarios (Castillo, 2011), y pimienta blanca tambin es uno de los que por su aceptabilidad es una apuesta innovadora apuntando a paladares ms refinados, por tener un sabor suave y a la vez intenso, adems por sus aceites esenciales es un buen antioxidante y tiene propiedades anticancergenas (Montane, 2012). Una vez seleccionados los tres tratamientos, se revisaron los comentarios de los jueces en relacin a estos productos, los tratamientos que no fueron seleccionados fueron mayormente criticados por, su apariencia y textura, ya que los alios como el tomillo y laurel, tien levemente la carne, dndole as una apariencia negativa para los consumidores. La textura de las semillas de cilantro no fue agradable al paladar. Los jueces tambin tuvieron comentarios para los tratamientos con una mejor aceptabilidad, entre los que destacaba que el sabor de los productos no fue claramente identificable y tenan un sabor muy suave, sin tener influencia negativamente en la evaluacin del producto. Con esta informacin se realizaron algunas mejoras, como moler ms los alios con el fin de mejorar la impregnacin y con esto el sabor final del producto. Una vez realizadas estas mejoras a los tres tratamientos seleccionados, se realiz un panel sensorial, con un mayor nmero de jueces, los que evaluaron los productos utilizando el mismo sistema que en la primera evaluacin sensorial (Cuadro 5). Cuadro 5. Aceptabilidad para los tratamientos elegidos por los jueces (E.E).
Tratamientos Apariencia T2 4,30,1 T4 4,00,2 4,20,2 T5 Color 4,30,2 4,20,1 4,10,1 Textura 4,20,2 4,40,2 4,30,1 Aroma 4,50,1 4,10,1 4,30,1 Sabor 4,50,1 4,60,1 4,70,1 Aceptabilidad 4,4 4,2 4,3
No hubo diferencia significativa segn prueba de Tukey (P >0,05) El anlisis de las evaluaciones de los tratamientos seleccionados no evidenci diferencia significativa para los parmetros evaluados. En cuanto a la apariencia, para todos los tratamientos evaluados en esta segunda instancia fue considerada buena ya que presentan evaluaciones sobre 4,0 siendo los tres tratamientos bien evaluado debido a que la presencia de estos aditivos en la carne le da un aspecto descrito como apetitoso y deseable a este producto. El color de los snack tipo charqui, se ve influenciada por los aditivos, en el caso del merkn influy que este aditivo mantiene su coloracin durante el deshidratado y esto se nota en el producto final, dndole as un color que a criterio de los jueces lo hace apetitoso al realzar los colores naturales de la carne. En tanto, para el charqui con romero y el charqui con pimienta blanca, la evaluacin del color fue igual de satisfactoria ya que el romero fue molido evitando as que las partculas de la hierba fueran muy notorias y la pimienta blanca no es detectable, dejando slo el color de la carne como nico detectable.
Por otra parte, el aroma de un producto es un parmetro muy importante para la evaluacin de un alimento, si algo no huele bien no apetece comerlo, es por esto que un aroma extremadamente fuerte es tan perjudicial como un aroma poco perceptible. Para este parmetro los evaluadores consideraron que el aroma a pesar de ser suave y no evidenciar fuertemente el aditivo asignado era agradable y deseable. El sabor de un alimento est influenciado por todas las etapas de su procesamiento, tanto las etapas previas a algn proceso trmico como la coccin o el deshidratado, y en los tiempos o en los ingredientes que se le aadan. Al ser un aspecto tan importante en la evaluacin esta cualidad es determinante para la aceptabilidad del snack tipo charqui. Los tres tratamientos fueron bien evaluados para este parmetro y algunos de los comentarios de los jueces se basaban en lo poco usuales que eran para un charqui, el cual asociaban con sabores descritos como montonos o tpico, dejando as al producto aqu desarrollado con comentarios como innovador y novedoso. La aceptabilidad general es el promedio de las calificaciones de todos los parmetros evaluados, los tres tratamientos elegidos tuvieron buenas calificaciones lo que gener una buena aceptabilidad de los productos desarrollados. El charqui con romero, si bien present una aceptabilidad buena, sufri crticas en la apariencia, debido a que las partculas de la hierba, aunque se redujeron de tamao an son visibles y poco apetecidas por los jueces. CONCLUSIONES La evaluacin del snack tipo charqui a base de carne de caballo salada y aromatizada obtuvo nota 4,0 dentro de una escala hednica del 1,0 a 5,0, considerndose un producto apetecible para el consumidor. La lnea de proceso tuvo una duracin de alrededor de 20 horas hasta obtener un producto terminado, lo que podra ser mejorado con algunas implementaciones tecnolgicas de baja complejidad, haciendo de esta lnea de produccin, una lnea eficiente para el desarrollo de alimentos. Todos los tratamientos para los snacks tipo charqui presentan una potencialidad en el mercado ya que fueron bien evaluados por los jueces en los parmetros de apariencia, color, aroma, textura y sabor. LITERATURA CITADA Astorga, A. 2012. Protocolo para la elaboracin de harina y snack crocante de garbanzo (Cicer arientinum L.). 21 p. Tesis Ingeniero Agrnomo. Facultad de Recursos Naturales. Universidad Catlica de Temuco. Temuco, Chile. Alasino, M., O. Andrich, y N. Sabbag. 2008. Panificacin con harina de arvejas (Pisum sativum) previamente sometidas a inactivacin enzimtica. Archivos Latinoamericanos de Nutricin 58(4): 397-402. Bertozzi, L., and G. Panari. 1993. Cheeses with Appellation dOrigine Controle (AOC). Factors that affect quality. International Dairy Journal 3:297-312. Benson Institute. 1996. Aceptabilidad de tortillas elaboradas a base de maz + soya en tres comunidades del oriente de Guatemala. Disponible en http://www.bensoninstitute.org/Publication/RELAN/V14/ Aceptabilidad.asp. Ledo el 15 enero de 2012. Castillo, E. 2011. El acento en la cocina. Disponible en http://www.estampas.com/2011/05/29/el-acento-en-lacocina.shtml. Ledo el 24 de agosto de 2012. Di Monaco, R., S. Cavella, and P. Masi. 2008. Predicting sensory cohesiveness, hardness and springiness of solid foods from instrumental measurements. Journal Texture Studies 39:129-149. Doymaz, I., and M. Pala. 2003. The thin-layer drying characteristics of corn. Journal of Food Engineering 60(2): 125-130.
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PLANTACIN DE ARNDANOS EN ALTA DENSIDAD, UNA ALTERNATIVA PARA LOS PRIMEROS AOS DE PRODUCCIN Marcelo Rodrguez B.1. Cristbal Castillo B., Christian Gallegos M2. 1 Escuela de Agronoma, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: marodrig@uct.cl; fono: 45-205536. 2Viveros Maranello. christian@maranello.cl INTRODUCCIN En las especies frutales cada vez se ha ido aumentando la densidad de plantas por hectrea, para frutales mayores se han utilizado patrones enanizantes, como en el caso de los cerezos, los portainjertos Gisela han sido probados y posteriormente, plantados en forma importante en los principales pases productores de cerezas, llegando a ser el portainjerto enanizante y semienanizante ms utilizado en el mundo. Para el caso de berries el uso de patrones e injertos no es una alternativa, ya que en su mayora poseen una estructura de multieje, no obstante, desde que fue introducido el arndano en Chile, el marco de plantacin se ha ido disminuyendo, especialmente la distancia sobre hilera. Es as como en los inicios de las plantaciones de arndano en Chile se utilizaban marcos de plantacin de 1,5 m x 3,0 m, por lo que la densidad de plantacin era de 2200 plantas por ha. Posteriormente, a partir del ao 2000 se utilizaron distancias de 1,0 m x 3,0 m lo que corresponde a 3.333 plantas por ha. No obstante lo anterior, las empresas han ido aumentando la densidad de plantas a fin de optimizar sus recursos y obtener un mayor ingreso econmico por superficie, estos ensayos comnmente no son publicados y a veces carecen de rigor cientfico para su validacin, razn por la cual se presenta el siguiente estudio (Muoz y Moreira, 2002). En las ltimas dos dcadas, se puede ver un incremento notable de la produccin frutcola en la zona sur del pas, una de las razones es el aumento de la demanda a contra estacin. El hecho de producir fruta en los meses de escasez en los grandes mercados consumidores de arndano fresco de calidad, ha sido una gran ventana para las exportaciones chilenas, lo cual ha llevado a un incremento importante en el sector frutcola y en la industria de los frutos congelados. Su cultivo comercial se inicia a mediados de los 80 en el sur del pas. Durante la temporada 2007- 2008 presenta aumentos en el volumen exportado del orden de las 30 mil toneladas, mostrando un incremento de un 42%, con respecto a la temporada anterior, con valores superiores a los 195 millones de dlares (US$ FOB) (Contreras, 2010). En los ltimos aos, la produccin frutcola es una de las ms importantes actividades econmicas de Chile. Esto se debe fundamentalmente, a las ventajas comparativas que posee el pas, para enfrentar las exigencias de los mercados externos, ya sea de contra estacin o bien, de aquellos pases que por condiciones climticas se ven limitados de una buena produccin. El arndano es un frutal que en los ltimos aos ha logrado posicionarse como un fruto de importancia en nuestro pas. Esto se debe a dos motivos principales: las caractersticas nutricionales del fruto, el cual es rico en antioxidantes, vitaminas y minerales y por otro lado, por poseer un mercado capaz de demandar fruta por sobre las 250.000 toneladas al ao (Estados Unidos). Dado estos antecedentes, ms la ventaja de Chile de producir fruta en contra estacin, hacen de este rubro una alternativa de produccin muy interesante y con buenas perspectivas (Garca, 2006).
Una de las decisiones ms importante al momento de hacer una inversin, es saber cmo optimizar los recursos, y qu tan pronto se recuperar la inversin. Es por esto, que saber cuntas plantas se pondrn por ha-1 y su rendimiento estimado, es fundamental dentro de cualquier proyecto. El rendimiento de los frutales vara en funcin de la edad de las plantas: a medida que avanzamos en el tiempo, el rendimiento aumenta hasta llegar a un tope que se mantiene durante algunos aos, entre estos factores que influyen, estn las enfermedades, malezas y plagas, granizo, heladas, lluvia y otros (Forbes et al., 2009). Otros aspectos relevantes en el rendimiento, es la variedad a utilizar y el clima de la zona, por ejemplo el arndano alto highbush puede alcanzar rendimientos cercanos a los 7000 kg ha-1 en variedades tempranas, variedades tardas cercano a los 11.000 kg ha-1 en su pick de produccin. Se estima que el arndano tiene un pick de produccin a los 7 aos, al menos con los marcos de plantacin ms utilizados en los ltimos aos respectivamente (Muoz, 2010), la produccin se inicia al segundo o tercer ao de la plantacin, pudiendo obtenerse entre 1 y 4 t ha-1. Esta cosecha se incrementa de forma gradual hasta alcanzar la plena produccin al sexto o sptimo ao, estabilizndose en torno a las 12 a 15 t ha-1. En algunos casos, con determinados cultivares pueden superarse las 20 t ha-1 (Garca y Garca, 2011). MATERIALES Y MTODOS Ubicacin del huerto y material vegetal El ensayo se llev a cabo en la temporada 2010-2011, en el Fundo el Sauce, ubicado en la comuna de Nacimiento, kilmetro 3 Nacimiento, Regin del Biobo, Chile. Ubicacin: 373012 lat. Sur, 724042 long. Oeste. El clima de la regin corresponde a mediterrneo templado. El cultivo utilizado fue arndanos (Vaccinium sp.), variedad Duke de 3 aos de edad. Descripcin de la variedad Duke Esta variedad presenta una alta precocidad con un perodo tardo de floracin. Como arbusto es muy vigoroso, erecto y abierto. El fruto es de tamao mediano en comparacin a otras variedades como Blueray pero de sabor suave y se vuelve ms aromtico al cabo de varias horas en fro, al contrario de la antes nombrada la cual presenta un sabor pobre. Es de color azul claro, firme, cicatrizacin pequea y seca. Una de las ventajas de esta variedad es tener una maduracin uniforme, por lo que es apropiado para cosecha mecnica. Es susceptible al cncer del tallo (Forbes et al., 2009). Condiciones del ensayo El suelo correspondi a serie negrete, textura franco arcilloso. La plantacin se encuentra sobre camellones de 20 cm de altura x 70 cm de ancho, en hileras separadas a 0,3 m y 0,6 m sobre la hilera y 3,20 m entre hilera, lo que daba una poblacin de 10.417 y 5.208 plantas ha, orientacin Norte-Sur. El predio tiene un sistema de riego goteo de 2 L h -1 por gotero, con una distancia de goteros de 30 cm, con un riego de 20,8 m3 h -1 ha -1, y con una frecuencia de riego 3,5 horas (tiempo de riego toda la temporada), menor cada 3 das (enero a febrero), y mayor cada 5 das los meses de (octubre-noviembre-diciembre). Tratamientos y diseo experimental Se estudiaron dos tratamientos el primero con un marco de plantacin de: 0,3 m x 3,2 m (Tratamiento 1) y el segundo de 0,6 m x 3,2 m (Tratamiento 2). Cada tratamiento estuvo constituido por 12 plantas con tres bloques al azar, dando un total de 36 plantas por tratamiento.
Las mediciones realizadas fueron: nmero de frutos por planta, peso y calibre de frutos. El nmero de fruto se evalu con el fruto en estado de pinta, el peso y calibre de fruto se evalu en estado de cosecha. Para el conteo de frutos totales por planta, se marcaron con pegote (cinta de papel), desde la base a la copa, comenzando con los brotes de corona de la base, de izquierda a derecha, marcando cada ramilla con cinta. A los resultados se les aplic anlisis de varianza (ANDEVA), al nivel P= 0,05. Para todo el anlisis se us el programa estadstico SPSS 15.0. En la temporada de cosecha 2011, de cada planta se cosecharon cinco frutos al azar. Estos frutos fueron pesados individualmente en una balanza de precisin (0,01 g). Los pesos fueron registrados en una hoja de campo, para posteriormente ser registrados en una base de datos. El calibre fue medido con un pie de metro digital (marca Veto). RESULTADOS Y DISCUSIN Efecto de la densidad de plantas sobre rendimiento El inicio de cosecha fue el 04 de diciembre 2010, las densidades de plantacin de 0,3 m x 3,2 m (10.416 plantas ha-1), present un mayor rendimiento por ha, siendo muy superior como se observa en la Figura 4, dentro de este grfico se observan diferencias significativas del Tratamiento 1 sobre el Tratamiento 2. Ambos, marcos de plantacin se consideran de alta densidad, en Chile a partir del ao 1979, el marco de plantacin para arndano alto ha evolucionado de 2 m x 3 m a 1 m x 3 m, es decir de 1.667 a 3.333 plantas ha-1. Por razones prcticas, asociadas al uso de maquinaria agrcola, la distancia de 3 m entre hileras se ha mantenido inalterable, por la cual el incremento de la densidad de plantacin se realizado ajustando la distancia sobre la hilera. No obstante, se considera que Chile utiliza altas densidades de arndano en comparacin a las utilizadas por otros pases. En la actualidad predomina la idea que las plantas deben ser distribuidas en rectngulo (Muoz, 2010). Uno de las razones que explica la utilizacin de una baja densidad de plantacin, es que antiguamente exista la necesidad de regar por surcos y controlar malezas en forma mecnica. Actualmente, el uso de riego por goteo, de herbicidas y mulch, permiten una mayor densidad (Donoso y Lemus, 2008). La mayor densidad de plantacin es una tendencia en la fruticultura mundial y entre los factores que justifican su utilizacin estn: el mayor rendimiento sobre todo en los primeros aos de produccin, y en algunos casos una mayor precocidad, es decir, las plantas entran en la etapa productiva ms temprano. En una alta densidad en arndano, se espera que la etapa de formacin sea ms corta que en plantaciones de baja densidad, de modo que la entrada en produccin sea precoz, principal objetivo de la alta densidad (COPEFRUT, 2007). Para el caso de frutales mayores el uso de portainjertos enananizantes a permitido un incremento significativo de la densidad de planta, especialmente en manzano y cerezo. Para el caso del avellano europeo se a utilizado como estrategia una alta densidad inicial para reducir el periodo de baja productividad inicial y aumentar los rendimientos; posteriormente, se eliminan rboles hasta quedar con la densidad adecuada para plantas adultas. Este manejo de la densidad se conoce como marco dinmico (Ellena, 2009).
Figura 4. Rendimientos promedio de arndano (V. corymbosum) en plantas de 3 aos bajo dos densidades de siembra. La lnea sobre la barra indica el error estndar de la media. Calibre del fruto Para ambos tratamientos se logr obtener un calibre promedio que califica en su totalidad dentro de los parmetros de calidad para la exportacin de fruta fresca, 14,2 mm para ambos tratamientos sin diferencias estadsticas. Para no tener rechazo no puede tener un tamao menor a 10 u 11 milmetros (Forbes et al., 2009). Al respecto, Contreras (2010) seala que existen factores genticos que inciden en el desarrollo del calibre del fruto, como ejemplo, menciona el arndano bajo (lowbush), cuyo carcter dominante es el calibre pequeo. Estudios realizados en arndano ojo de conejo (rabbiteye), sealan que el tamao de la fruta y el nmero de semillas estaran ligados genticamente. Otro aspecto importante, es el nmero de frutos por planta lo cual se regula con la poda, lo que incide finalmente en el calibre del fruto (Baados, 2009). Peso del fruto En el peso del fruto tampoco se encontraron diferencias estadsticamente significativas. Los pesos promedio de los tratamientos fueron para el Tratamiento 1 (30 cm) 1,45 g y para el Tratamiento 2 (60 cm) 1,47 g. Estos datos reflejan pesos promedios aceptables para exportacin, el peso va muy ligado al calibre, por ejemplo los frutos que registran el mayor calibre ecuatorial presenta el mayor peso promedio, y que stos a su vez presentan el mayor porcentaje de firmeza, lo que mejora la calidad de la fruta, y la hace mejor viajera a la hora de exportar. Nmero de frutos por planta Los promedios de nmero de fruto por plantas fueron: Tratamiento 1, 516 frutos planta-1, y el Tratamiento 2, 544 frutos planta-1. Realizado el anlisis de varianza, se puede inferir que en esta variable no se observaron diferencias estadsticamente significativas entre los tratamientos 1 y 2. De lo anterior se puede inferir que las densidades de plantas utilizadas en este ensayo no afectaron al nmero de flores por planta, ni la polinizacin y cuaja. El nmero de frutos puede ser modificado a travs de la intensidad de la poda invernal, ya que sta define el nmero de yemas florales que quedaran en cada planta (Baados, 2005).
CONCLUSIONES El incremento de la densidad de plantas no afect el calibre promedio del fruto, ni el peso del fruto, ambos parmetros superaron la exigencias mnimas para la exportacin, tampoco se registr un efecto en el nmero de frutos por planta. Por otra parte tampoco se observaron diferencias significativas en el calibre; sin embargo, puede ser que a medida que el cultivo avance en edad las diferencias sean significativas por efecto de la competencia. El tratamiento 1, con un marco de plantacin de 0,3m*3,20m, tuvo un mayor rendimiento por ha, debido bsicamente a la mayor densidad utilizada en comparacin al tratamiento 2. Si bien es cierto la mayor densidad involucra un mayor costo de establecimiento debido al mayor nmero de plantas utilizadas, no obstante, el establecimiento de arndanos en alta densidad debe considerarse como una alternativa para obtener un ms rpido retorno de la inversin inicial. Tambin, debemos considerar que el costo de la planta de arndano a disminuido en los ltimos aos, esto responde a una sobreoferta de los viveros y una desaceleracin de la superficie plantada. No obstante, los buenos resultados obtenidos con alta densidad, se necesita seguir evaluando los prximas temporadas ya que probablemente la diferencial de rendimiento se estrechar; por otra parte, es probable que pudieran tambin haber cambios en la fenologa en especial con la fecha de cosecha LITERATURA CITADA Baados, P. 2009. Algunos factores de pre-cosecha que inciden en la produccin de arndanos de calidad. Disponible en http://www.asoex.cl/admin/PaginaWeb/Biblioteca/Archivos/bajar2.asp?id_ c=1554&tabla=biblio_archivo. Ledo el 26 de septiembre de 2011. Baados, P. 2005. Claves para la poda de arndano. Agronoma y Forestal U.C. 25(1): 28-31. Contreras, M. 2010. Efecto de la aplicacin de CPPU sobre calidad de fruta en arndano alto (Vaccinium corymbosum L.) cultivar Elliott. 52 p. Tesis Ingeniero Agrnomo. Universidad de la Frontera. Facultad de Recursos Naturales. Escuela de Agronoma. Temuco, Chile. COPEFRUT S.A. 2007. Especial de Arndanos. Revista frutcola Copefrut S.A. 28 (3): 118. Donoso, J., y G. Lemus. Establecimiento de huertos frutales. 104 p. Boletn INIA N 173. Rengo, Chile. Ellena, M. 2009. Frutales y vias, avellano europeo. Tierra Adentro N 83 p. 27- 28. Forbes, P., E. Mangas y N. Pagano, 2009. Produccin de arndanos.67 p. Tesis ingeniero en Administracin de Negocios Agropecuarios. Universidad Nacional de la Pampa, Facultad de Agronoma. La Pampa, Argentina. Garca, F. 2006. Uso de distintos tipos de mulch como alternativa orgnica de control de malezas en arndano (Vaccinium corymbosum L.) Oneal. 21 p. Tesis Ingeniero Agrnomo. Universidad de Concepcin, Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales. Chillan, Chile. Muoz, C. 2010. Cultivo del arndano en Chile. p. 52 55. In V Simposio Nacional do Morango IV Encontro sobre Pequenas frutas e Frutas Nativas do Mercosul. Embrapa, Pelotas Ro Grande Do Sul. 21 - 23 de septiembre del 2010. Embrapa, Pelotas Rio Grande, Brasil. Muoz, C., y I. Moreira. 2002. Prcticas actuales recomendadas para el cultivo de arndanos. Tierra Adentro N 47 p. 28.
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Marcelo Toneatti B1., Jean Roger-Estrade2. rea de Produccin Animal, Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: mtoneatt@uct.cl. 2 AgroParisTech, Francia.
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INTRODUCTION In the Southern temperate part of Chile, Andisols are the dominant soil type. In this area (the Region Araucania), they are called Trumaos . Those soils exhibit a clay fraction dominated by allophane, which induces a strong retention of phosphorus (P), and, consequently, a low availabilty of this nutrient, essential for plant growth. Moreover, acidity is high in those soils, which is also detrimental to phosphorus availability (Pinochet et al., 2005) and promotes a high level of aluminium (Al3+), toxic for crops (Besoain, 1999). These characteristics considerably limit soil productivity, especially in the meadows, which are vital for small cattle breeders. The same characteristics not only hinder plant growth in general but also block the growth of legumes (Ritchie, 1989). Native pastures of this region thus have a very low productivity and express a very peculiar flora, which consists essentially of grass, some legumes adapted to the high acidity of the soil, and some other aluminiumtolerant species adapted to an acidic environment (Mora et al., 2000). Moreover, since they have been used for agriculture, these soils received minimal doses of fertilizers, calcium and organic amendments. This has worsened the problems. Finally, overgrazing caused also problems of erosion. These conditions are very hard on the Mapuche farmers of this area, whose main activity is cattle breeding (ovine and bovine) and whose farms are very small. As a response, since 1997 the State of Chile has developed a program called Incentive System for the Recovery of Degraded Soils (hereafter called the SIRSD program), whose aim is to help producers improve the fertility of trumaos lands. The program focuses on improving the availability of P through phosphate supplements and liming, in order to decrease acidity and the content of free aluminium in the soil. The program also aims at establishing a meadow (generally a mixture of grass and legumes) to ensure a permanent coverage of the soil, thus limiting erosion and increasing productiviy and quality of forages. The program also includes other actions (such as the creation of terrasses to fight erosion, the set up of cover-crops, etc.) but these have been seldom applied in the area object of this study, and therefore they will not be discussed in this paper. This program has been operational for more than a decade. The aim of this study is to evaluate its effects on soil properties and on meadow productivity in the region of the Araucania, home of small producers Mapuche. In order to answer these questions, we selected a series of fields that participated in the program in four municipalities of the precordillera and in one municipality of the Andes Cordillera. We analysed the soil in those fields, for two consecutive years characterized by very different weather conditions: year 2007 was relatevely humid and hot, while year 2008 was marked by a severe drought, a cold winter and a cold beginning of spring.
Materials and metHods Hypothesis on the effects of the SIRSD program on P availability Arrows in Figure 1 shows relations between program actions and changes expected in the soil. The liming supplied brings about an increase in the pH. This, in turn, causes an increase in the mineralization of organic matter (arrow 1a) (Campillo, 1995) and, by favouring the insolubilization of aluminium, affects the quantities of exchangeable aluminium (arrow 1c) and extractable Al (arrow 2). The decrease of extractable aluminium favours phosphorous availability (arrow 3) (De la Fuente and Herrera, 1999), and decreases exchangeable aluminium. The establishment of grasslands increases the restoration of organic matter, which contributes to the fixation of H+ ions (arrow 1b). Phosphoric fertilizers affect directly P availability (Helyar, 1998). Finally, the productivity and the quality of the meadow benefit from the decrease in pH (arrow 7), the decrease of exchangeable aluminium and the increased availability of P (arrow 5).
Figure 1. Hypothesis on the effects of the program SIRSD. The actions of the program (establishment of the meadow, liming, phosphoric fertilization) are boxed with continuous lines, the soil properties acted upon are boxed with thick dashed lines, the sought-after quality and productivity of the meadow are boxed with fine dotted lines. Site description We worked in four municipalities in the precordillera zone of the Araucania Region (Curacautn, Vilcn, Cunco et Villarrica) and in one municipality in the Cordillera area (Lonquimay). We chose a synchronic approach. In each area, we selected fields that had not been subjected to the program (these old permanent grasslands were considered to represent the soils in their natural, poor fertility status, and therefore these soils were used to estimate the baseline or initial soil test values for the properties considered in this study). They were compared to fields subjected to the program one, two, three or four years earlier. The number of fields studied and the dates of the treatment are shown in table 1. In each community the locations have been selected in order to cover the spectrum of trumaos soils of the region. In Lonquimay, the soil appears as N. R. (not registred in the map of soils): it is a very recent soil of vulcanic origin, still in the process of formation. It shows characteristics different from those typical of trumaos, and there is almost no literature about it (Mella and Khne, 1985).
The fields received calcium carbonate (2 tha-1) and superphosphate (450 kg P2O5.ha-1). They were sown with a mixture grass/legume in the Precordillera area, and with Alfalfa (Medicago sativa) at Lonquimay, in the cordillera. Phosphorus and calcareous lime were added only once 2, 3, 4 and 5 years before soil analysis (performed in 2007 and 2008). All fields that did not receive the SIRSD program (the controls) supported very old native pastures. Each value in Figures 2-4 is the average of 4 to 8 measured values. For a better analysis of time related variations, data are presented with their relative value in reference to the control. Table 1. Subdivision of the 32 fields sampled in each municipality, with reference to the application of the program at the time of measurement.
Soil analysis Soil samples were taken in October 2007 and in October 2008, using a gauge. The 0-20 cm layer was sampled. We mixed the soil of eight sub-samples for each field. Each sample was analyzed at the soil laboratory of the Catholic University of Temuco. All samples were prepared and analysed according to the rules of the Commission for Normalisation and Accreditation of the Chilean Society of Soil Science (Sadzawka et al., 2004). To determine the pH value, 20 g of soil were suspended in water (ratio soil/solution = 1/2.5); the pH of the solution was measured after 2 hours. For the analysis of exchangeable aluminium, 10 g of dry soil were added to a solution of KCl 1 M, then shaken for 30 minutes at room temperature. After filtering, measurements were taken using an atomic absorbtion spectrophotometer. For the analysis of extractable aluminium, 5 g of dry soil were added to a solution of ammonium acetate 1 M, and shaken for 30 minutes, before filtering. 1 mL of filtrate was then mixed with 9 mL of a potassium chloride solution. Then the concentration of aluminium was measured with an atomic absorbtion spectrophotometer. To determine the amount of organic matter, we weighed 2 g of dry soil in an Erlenmeyer flask, then we added 10 mL of sodium dichromate 0.5 mol L-1 and 20 mL of sulphuric acid. After a gentle shake, we let the solution rest for 30 minutes, then added 70 mL of water. After an additional night rest, we measured the organic matter using a colorimetric reaction with reduced chrome. In order to measure phosphorus, we took a sample of 2.5 g of dry soil, we added 0.3 g of active carbon and 50 mL of sodium bicabonate 0.5 M. The solution was shaked for 30 minutes and filtered. The phosphorus was determined by colorimetry with the blue of molybdene method, using ascorbic acid as a reducing agent.
Results and discussion Application of the program had different effects on the pH of the soil in the different locations studied (Figure 2). At Vilcn and Villarrica, the program had no effect, and the pH remained unchanged. The increase in pH was temporary at Curacautn and Cunco, where the pH returned to its initial value four years after the program was applied. At Lonquimay, the pH was stable over the whole period, and slightly higher than the control value 4 years after the programm was applied.
Figure 2. Relative pH value in the five studied localities. Different letters above bars correspond to significant differences (p=5% ; the absence of letter indicates the absence of difference). pH values of the controls are 5.83, 5.38, 5.31, 5.51, and 5.80, respectively for Lonquimay, Vilcn, Cunco, Villarrica, and Curacautn.
These changes show poor effectiveness of the program in the precordillera area. This can be ascribed to a number of reasons. First, liming in the precordillera was insufficient (2t.ha-1); this is probably the case for Vilcn and Villarrica, where the pH was not altered and at Curacautn, where liming did not prevent soil acidification. Second, liming had a temporary effect: within three to four years, the pH value returned to the same level as before the program, as in Cunco. This outcome is consistent with a number of studies on liming in Southern Chile, and it can be explained by the high rainfalls in the region, causing significant leaching of bases and release of H+ ions.
Figure 3. Relative content of the exchangeable Al (Alex) in the five studied municipalities. Different letters above bars correspond to significant differences (p=5% ; the absence of letter corresponds to an absence of difference). Alex values of the controls are 0.15, 0.24, 0.73, 0.16, and 0.13 (cmol kg-1), respectively for Lonquimay, Vilcn, Cunco, Villarrica, and Curacautn.
The program had also contrasted effects on the exchangeable Aluminium (Alex) content (Figure 3). Alex decreased significantly at Lonquimay, while it increased at Vilcn and Curacautn between the first and the fourth year after the program was applied. Alex remained unchanged at Villarica and Cunco. We can put forward different hypotheses explaining these results. First of all, it appears that the actions taken in the program are unable to correct consistently the pH in all municipalities but in Lonquinay. The program consisted of only one lime addition, and lime quantity was small. Lime addition was not sufficient to achieve the results observed by Prez (1986) or by Pinochet et al. (2005), who showed pronounced effects on the levels of exchangeable aluminium (and on the saturation rate of the complex by aluminium). A second possible explanation of the disappointing results can be given by the generalized use of urea for nitrogen fertilization (in this area, it is the cheapest nitrogen source). Urea acidifies soils and can cause an increase in the amount of exchangeable aluminium. Finally, the impact of the program on P availability (P-Olsen) was also different between municipalities (Figure 4). At Lonquimay, P-Olsen initially significantly increased, showing a positive short-term effect of the program. However, P-Olsen gradually decreased after the first year, until it returned to its initial level. In this location, the decrease of P-Olsen probably results from phosphorus consumption by alfalfa. This explanation is more likely than the fixation by the soil, as the content of exchangeable aluminium is less than 500 mg kg-1. In this area phosphoric fertilizer was first applied (200 kg.ha-1 of P2O5) just before the alfalfa was sown. During the first year of alfalfa cropping, a second fertilization was performed (200 kg.ha-1 of P2O5). These two fertilizations were not sufficient to guarantee the maintenance of available phosphorus levels in the years after the application of the program. Moreover, alfalfa is able to absorb significant quantities of phosphorus, thanks to its well-developed root system. At Vilcn, an increase with time of the P-Olsen content was observed during the whole period. The quantity of exchangeable aluminium was the highest among the all our samples, which caused high toxicity and a poor growth in the grassland; this, in turn, strongly limited phosphorus uptake, which probably explains the observed imbalance. At Vilcn, the untreated control sample was a pasture whose flora is adapted to the particular conditions of the soil. That flora consists mainly of grasses (Agrostis Modesta, Holcus Lanatus). Establishing ray-grass and violet clover (Trifolium pratense L.), not well adapted to acid soil, caused poor productivity in the meadows and, consequently, very low phosphorus uptake. At Curacautn, Villarrica and Cunco, the P-Olsen increased during the first years after the application of the program, but began to decline at the end of the period. In those locations, phosphorus uptake by grasses was hampered by the presence of free aluminium. Moreover, grasslands in those municipalities are grazed, as opposed to Lonquimay, where only hay is harvested. It is likely that the presence of livestock implies P return to the soil via the animal manure.
Figure 4. Relative content of the P-Olsen content in the five studied municipalities. Different letters above bars, correspond to significant differences (p=5% ; the absence of letter corresponds to an absence of difference). P-Olsen values of the controls are 8.0, 4.10, 3.60, 4.25, and 3.50 mg.kg-1 respectively for Lonquimay, Vilcn, Cunco, Villarrica, and Curacautn.
Conclusions This analysis leads us to propose several possible ways to improve the programs effectiveness. 1. The quantities of lime provided initially must be reconsidered and, most of all, it is necessary to repeat the liming (every 3-4 years) in order to have more lasting effects on the pH. An even more important aspect is to curb the washing out of bases, an important risk in this area prone to conspicuous rainfalls. 2. In a similar way to the liming, the phosphoric fertilization must be part of a global strategy for improving P availability. Such strategy should be based on a balance of P that takes into account the increase of output with the increase of the meadow productivity. P supply should be repeated in time. Lastly, this strategy must also integrate phosphurus recycling through cattle manure. This whole strategy is essential to keep a sufficient proportion of legumes in the meadow. 3. The program should also integrate some actions on the meadow management. For example, new methods of nitrogen fertilization, based on a nitrogen balance, should be spread. Use of urea should be avoided; cattle population per surface area should be limited, to avoid overgrazing. ReFerences Besoain, E. 1999. Los suelos volcnicos y la fertilizacin fosfatada. p. 13-21. In Besoain, E., W. Rojas, y A. Montenegro (Eds.). Las rocas fosfricas y sus propiedades de uso agrcola en Chile. Coleccin de libros INIA. Santiago, Chile. Campillo, R. 1995. Encalado de alfalfa en suelos Trumaos del Sur de Chile. 16 p. Boletn Tcnico N 223. Centro Regional de Investigacin Remehue. Osorno, Chile. De la Fuente, J., and L. Herrera. 1999. Advances in the understanding of aluminum toxicity and the development of aluminum-tolerant transgenic plants. Advanced in Agronomy 66:103-120. Helyar, K. 1998. Efficiency of nutrient utilization and sustaining soil fertility with particular reference to phosphorus. Fields Crops Research 56:187-195. Mella, A., y A. Khne. 1985. Sistemtica y descripcin de las familias, asociaciones y series de los suelos derivados de materiales piroclsticos de la zona Central-Sur de Chile. p. 548-716. In Tosso, J. (Ed.). Suelos volcnicos de Chile. Instituto de Investigaciones Agropecuarias. Santiago, Chile. Mora, M.L., F. Gallardo, F. Borie, y R. Demanet. 2000. Algunos avances en la relacin suelo-planta en suelos cidos de Chile. Boletn de la Sociedad Chilena del Suelo, 14: 163-168. Ordez, R., D. Kheraiwish, M.J. Polo, J. V. Girldez, y P. Gonzlez. 2005. Influencia del encalado sobre la movilidad de metales en un suelo contaminado en el valle del Ro Guadiamar (Sevilla). Estudios de la Zona No Saturada del Suelo 7: 29-32. Prez, R. 1986. Efectos del encalado en la neutralizacin del aluminio intercambiable y sobre el crecimiento del tomate (Lycopersicon esculentum). Agronoma Tropical 36(1-3): 89-110. Pinochet, D., F. Ramrez, y D. Surez. 2005. Variacin de la capacidad tampn en suelos derivados de cenizas volcnicas. Agricultura Tcnica 65(1): 55-64. Ritchie, G. 1989. The chemical behavior of aluminium, hydrogen and manganese in acid soils. p. 1-60. In Robson, A. (Ed.). Soil acidity and plant growth. Academic Press, Australia. Sadzawka, A., M. Carrasco, R. Grez, y M. Mora. 2004. Mtodos de anlisis recomendados para los suelos chilenos. 113 p. Comisin de Normalizacin y Acreditacin, Sociedad Chilena de la Ciencia del Suelo (CNA). Santiago, Chile.
DIGESTIN RUMINAL DE PROTENAS Alejandro Velsquez1, Rodrigo Arias1. 1 rea de Produccin Animal, Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: avelasquez@uct. cl; fono: 45-553929. Ncleo de Investigacin en Produccin Alimentaria. ABSTRACT In this review it examines the importance of understanding the dynamics of protein degradation in the rumen ecosystem. It stands for these purposes a component of efficiency and sustainability in productive ruminants systems. Also, it introduces the concepts of synchronization energy-nitrogen, microbial protein synthesis and proteolysis kinetics. Moreover, it discusses the factors of physiology and protein digestibility in the rumen. Key words: proteins, digestin, rumen. INTRODUCCIN La prediccin de la dinmica de degradacin de las protenas en el ecosistema ruminal, constituye una informacin de trascendental importancia para obtener una alta y sustentable eficiencia en la nutricin de rumiantes productivos. Su dimensin conceptual y prctica puede ser apreciada en los sistemas de formulacin de raciones, en la fisiologa de la utilizacin del nitrgeno y de la energa en el rumen, en la bsqueda del bienestar animal y en el impacto ambiental de la excrecin de compuestos nitrogenados desde el rumiante a su entorno natural (Givens et al., 2000; Van Duinkerken et al., 2005; Kaswari et al., 2007; Riasi et al., 2008). Los alimentos poseen diferentes compuestos nitrogenados en su constitucin qumica y presentan una alta variabilidad en su composicin molecular, magnitud y ubicacin celular, provocando un comportamiento nutricional y en su cintica de degradacin en el rumen muy impredecible (Van Soest, 1994; Stern et al., 1997; Encinias et al., 2005). La falta de informacin insesgada respecto a la real degradabilidad de las protenas en el rumen, puede provocar errores importantes al momento de alimentar a los rumiantes. La subestimacin del verdadero aporte de N al medio ruminal, es un fenmeno que normalmente sucede en las estrategias de nutricin, incrementando de esta forma los compuestos nitrogenados disponibles. Si bajo estas circunstancias se produce adems una baja disponibilidad de energa para los microorganismos, se incrementar la excrecin de N fecal. Simultneamente, el epitelio ruminal tender a absorber el exceso de N, no utilizado por los microbios, para mantener el equilibrio nitrogenado en el rumen, y para generar una homeostasis entre este ltimo y el nivel plasmtico de N en el animal. Esta alta absorcin de N traer posteriores consecuencias metablicas a nivel heptico, renal y en la glndula mamaria, con el consecuente incremento de compuestos nitrogenados en la orina y en la leche (Kornegay, 1996; Van Duinkerken et al., 2005). La variacin en la disponibilidad de nitrgeno para los microorganismos del rumen, tiene efectos mltiples, no slo en la cintica de degradacin de las protenas y en la sntesis de protena microbiana, sino que tambin, en la dinmica de degradacin del resto de los nutrientes de la dieta, principalmente de los carbohidratos estructurales y no estructurales de las clulas vegetales (Stern et al., 1994; Kornegay, 1996; Yan y Agnew, 2004; Hristov et al., 2008). Tambin, se debe considerar el perjuicio econmico para el productor al incluir en forma desajustada suplementos proteicos en las raciones alimenticias. Luego, el conocimiento de la real disponibilidad de los compuestos nitrogenados, para los planos de alimentacin en rumiantes, constituye una informacin, que en parte, deber provenir de tablas de aporte de nutrientes de los alimentos cuyos datos se basen en mtodos para la prediccin de la degradabilidad de las protenas lo ms exactos y representativos del ecosistema ruminal (Givens et al., 2000). Si bien las metodologas usadas comnmente para predecir la cintica de proteolisis en el rumen estiman dicha degradabilidad con un cierto grado de aproximacin y seguridad, la mayora de estas tcnicas, en general, presentan una serie de limitaciones y factores perturbadores, los cuales pueden provocar estimaciones sesgadas de la real degradabilidad de las protenas en el medio ruminal (Nocek y Grant, 1987; Broderick, 1987; Russell et al., 1992; Sniffen et al., 1992; Robinson et al., 1996; Mustafa et al., 2001; Yan y Agnew, 2004; Encinias et al., 2005).
Estas limitaciones en las metodologas tradicionales, constituyen uno de los principales obstculos para optimizar la eficiencia del uso de los recursos proteicos en la alimentacin de rumiantes, creando la necesidad de investigar alternativas metodolgicas innovadoras, de tal forma que permitan establecer sistemas de prediccin de la degradabilidad de las protenas lo ms representativas de los eventos hidrolticos involucrados en la proteolisis ruminal (Roe et al., 1991; Calsamiglia et al., 1992; Shannak et al., 2000; Broderick et al., 2004). Factores y fisiologa de la proteolisis ruminal La cintica de degradacin de las protenas en el rumen se ve afectada por factores biticos y abiticos, los cuales regulan y determinan la dinmica de hidrlisis de los compuestos nitrogenados y tambin, la variabilidad del metabolismo nitrogenado en el ecosistema ruminal. Entre los factores abiticos ms relevantes del medio ruminal, se pueden citar, junto a sus valores normales: temperatura (39C); pH (6,0 a 7,0); osmolalidad (300 a 400 mOsml-1); potencial de oxidacin (Eh=-250 a -450 mV); concentracin de O2 (10-22 M); CO2 (58 a 65%); H2 (0,15 a 0,2%); CH4 (20 a 27%); N2 (6 a 7%); NH4 (1 a 100 mM) y H2O, proporcin variable (Asplund, 1994; Van Soest, 1994; Pawelek et al., 2008). Los factores biolgicos ms incidentales tienen relacin con la disponibilidad de energa y nitrgeno para los microorganismos del rumen, involucrando todos los procesos de fermentacin de los carbohidratos (estructurales y no estructurales) y de los compuestos nitrogenados. Ocupan adems un lugar destacado dentro de los factores biticos, las interacciones entre los microbios y los sustratos a degradar (mecanismos de adherencia y colonizacin de partculas), el reciclaje del N a nivel ruminal e intermediario del rumiante, tambin, todos los mecanismos de regulacin (genticos y no genticos) de la actividad proteoltica microbial, la cintica de escape de partculas y retencin ruminal, as tambin, el consumo y frecuencia de alimentacin. Se agrega a lo anterior, la interaccin hidroltica que exhiben los grupos de microorganismos al momento de degradar la materia orgnica en el rumen. El hecho que bacterias proteolticas presenten simultneamente una actividad amiloltica o fibroltica, determina los acontecimientos sintrficos que exhiben los consorcios microbiales del rumen al degradar las protenas de los alimentos. En efecto, se pueden citar como ejemplo las bacterias Succinimonas amylolytica; Bacteroides amylophilus; Selenomonas ruminantium y Streptococcus bovis, las cuales presentan simultneamente actividad proteoltica y amiloltica, o las bacterias Prevotella rumincola y Butirivibrio fibrisolvens, cuya actividad hidroltica se sustenta tanto en la degradacin de protenas como de celulosa. Estos grupos de bacterias exhiben una estrecha relacin trfica en la de-polimerizacin de celulosa (amorfa o cristalina), hemicelulosa o almidn. En la degradacin de los carbohidratos estructurales (pared celular), diversos tipos de microorganismos aprovechan este fenmeno para poder hidrolizar protenas ubicadas en estas paredes y tambin, para poder ingresar al interior de las clulas y as proseguir con su actividad proteoltica. Tambin, protenas comprometidas fsico-qumicamente con complejos almidonosos, de difcil accesibilidad, pueden ser liberadas producto de la accin de amilasas bacterianas o de algunos grupos de protozoos. Este fenmeno de sintrofa es probablemente la principal estrategia trfica que presentan los consorcios microbiales del rumen al degradar la materia orgnica de los alimentos (Chamberlain y Choung, 1995; Kornegay, 1996; Bull, 2001; Hristov et al., 2008). En consecuencia, estos fenmenos degradativos permiten establecer que la actividad proteoltica depende en forma importante de la accin cooperativa y sinrgica de diversas enzimas hidrolticas ruminales (Kornegay, 1996). Cabe sealar, que las protenas de los alimentos son degradadas a pptidos, oligopptidos, dipptidos y aminocidos en el rumen, bajo la accin nucleoflica llevada a cabo por diversas proteasas sobre los enlaces peptdicos, cuya estrategia de ataque puede ser endoproteoltico o exoproteoltico. Esta proteolisis ocurre generalmente al exterior de las clulas, en algunos casos ntimamente asociada a la pared bacteriana (adsorcin de protenas) y en otros, en forma libre en el medio ruminal. Algunas bacterias hidrolizan pptidos intracelularmente, dependiendo de la especie y cepa bacteriana, y tambin, del tamao y caractersticas bioqumicas de los pptidos a degradar (Asplund, 1994). Los protozoos, por otro lado, suelen engullir protenas, partculas, bacterias e incluso otros protozoos.
Por lo tanto, su actividad proteoltica generalmente sucede a nivel intracelular. De esta forma, se esperara una alta concentracin de proteasas al interior de los protoplasmas de estos microbios, en el periplasma de las bacterias, en la superficie de stas, como as tambin, en el medio ruminal ms ntimo y cercano al microhbitat establecido al interior y exterior de las partculas alimenticias colonizadas (Figura 1).
Figura 1. Fluido ruminal de vaca mostrando algunas interacciones biticas de este ecosistema; degradacin de la materia orgnica por bacterias y protozoos, previa colonizacin y adherencia de estos microorganismos sobre las partculas de alimento (Velsquez, 2008). Los aminocidos generados luego de la proteolisis ruminal, segn la estrategia metablica, pueden ser destinados directamente para la sntesis de protena microbial, o bien, deaminados, produciendo amonio e isocidos. Probablemente, esta ltima opcin sea la ms recurrente. Por ejemplo, en la deaminacin de valina, leucina e isoleucina se obtienen como productos finales de la reaccin isobutirato, isovalerato y 2-metilbutirato, respectivamente, ms amonio y dixido de carbono. Estos cidos pueden constituir factores de crecimiento para muchos organismos celulolticos y otras especies de bacterias que utilizan estos cidos grasos como cadenas carbonadas. Estos isocidos ms amonio, normalmente sirven para la sntesis de novo de aminocidos microbianos (rskov, 1992; Van Soest, 1994; Chamberlain y Choung, 1995; Bull, 2001). Esta sntesis de aminocidos es regulada en parte por la actividad de las enzimas glutamina sintetasa, NADP-glutamato dehidrogenasa y NAD-alanina dehydrogenasa, cuyos Km para la fijacin de amonio son de 1,8; 1,8 a 3,1 y 70 mM de amonio, respectivamente (Asplund, 1994). Este grado de afinidad enzima sustrato, implicar por un lado, que el nivel de actividad de las enzimas precedentemente sealadas, depender de la concentracin de N en el medio ruminal e intracelular de los microorganismos (Figura 2). A su vez, esta variabilidad en la accin de estas enzimas, influir en la magnitud y en la diversidad de los aminocidos sintetizados y consecuentemente, en el posterior anabolismo proteico de las bacterias y protozoos del rumen. Esto ltimo, por extensin, influir en los niveles de disponibilidad de proteasas para hidrolizar los polipptidos de los alimentos (Chamberlain y Choung, 1995; Bull, 2001). Se ha sugerido adems, que la concentracin de amonio, aminocidos y pptidos en el ambiente ruminal e intracelular, pueden regular la expresin gnica de las enzimas amino-sintetasas y tambin, la dinmica de sntesis de protena microbiana.
ENZIMA
REACCIN
NADH NAD Transaminasas piridoxalfosfato SNTESIS AMINOCIDOS
NAD-glutamato dehidrogenasa
! -Oxoglutarato NH3
Glutamato
Km (amonio mM)
20 - 33
PROTENA MICROBIAL
Principal medio de asimilacin de amonio
Figura 2. Mecanismo de asimilacin de amonio por microorganismos ruminales, sealando la constante de afinidad enzima-sustrato (Km) y las enzimas involucradas en este proceso (Asplund, 1994). Bajo otro aspecto, se ha demostrado que la actividad proteoltica de los microorganismos puede ser sometida a una sustrato-induccin in vitro, enriqueciendo por ejemplo, los medios de cultivo de fluido ruminal con sustratos proteicos y energticos, estimulando de esta forma la sntesis y secrecin de peptidasas y carbohidrasas microbiales en forma especfica, segn sea el nicho ecolgico que presenten los microorganismos inducidos (Hungate, 1966; Velsquez y Pichard, 2010). Este fenmeno, por extensin, sucede tambin in vivo. Diferentes tipos de dietas tendran un efecto sobre la biodiversidad microbiolgica del rumen. Se ha sugerido que un plano de alimentacin rico en fibra (FDN), estimulara la actividad enzimtica de consorcios microbiales celulolticos (Bacteroides succingenes; Ruminococcus albus; Fibrobacter succinogenes; Ruminococcus flavefaciens o Butyrivibrio fibrisolvens). Luego, esta condicin favorecera la va Piruvato-Acetyl-CoA-Acetato o PiruvatoAcetyl-CoA-Aceto-acetil-CoA-Butirato, en desmedro de la va Piruvato-Lactato-Acrilato-Propionato. Estos cambios en la biodiversidad microbiolgica, y como consecuencia en el balance de los cidos grasos voltiles, puede influir, por ejemplo, en el contenido porcentual de grasa en la leche (aumento a mayor produccin de cido actico), o en el estatus y perfil proteoltico del ecosistema ruminal (Asplund, 1994; Van Soest, 1994). Luego, las dietas debern ser lo suficientemente balanceadas en fibra, energa y fuentes nitrogenadas para poder mantener un steady state ruminal en forma ms permanente (Kaswari et al., 2007). Otro fenmeno ecolgico que se presenta en el rumen, es la interaccin trfica conocida como cross-feeding, la cual se observa normalmente entre diversos grupos de microorganismos del rumen. Este hecho involucra, por ejemplo, que bacterias que crecen activamente utilizando aminocidos o amonio, no son proteolticas, pero s fibrolticas (Ruminococcus albus), proveyendo de esqueletos carbonados a aquellas proteolticas que liberan aminocidos o amonio al medio ruminal. Un caso notable de cross-feeding es observado entre Fibrobacter succinogenes y Selenomonas ruminantium, donde la primera degrada la celulosa en presencia de CO2, generando celobiosa, succinato, acetato y formato. A su vez, el succinato es fermentado secundariamente por Selenomonas sp., generando propionato, acetato y CO2, este ltimo, requerido por Fibrobacter sp. (Van Soest, 1994).
Se ha establecido que la extensin y tasa de los eventos hidrolticos de los sustratos alimenticios en el rumen dependen del balance y disponibilidad de ATP, el cual es utilizado normalmente para la sntesis de protena, excrecin de enzimas, colonizacin y adherencia microbial en las partculas alimenticias, y tambin, para el crecimiento y divisin celular. En efecto, si la tasa de degradacin proteica excede a la capacidad de sntesis de protena microbiana, asociada a una baja fermentacin de carbohidratos en el tiempo preciso (insuficiente energa fermentable ruminal), se acumular amonio en el medio y en los microbios, siendo afectado negativamente el crecimiento poblacional de los consorcios microbianos, implicando una menor produccin de biomasa celular. Esta situacin conducir a un detrimento en la sntesis total de protena, trayendo como consecuencia una disminucin de la actividad proteoltica y de la eficiencia de utilizacin del N a nivel ruminal (Chamberlain y Choung, 1995; Van Duinkerken et al., 2005). Cuando la condicin nutricional es inversa, existiendo un exceso de energa disponible con un dficit de N, los microorganismos almacenan estas potenciales fuentes energticas estratgicamente para un uso posterior, a travs de inclusiones carbonadas en los protoplasmas. La ulterior utilizacin de estas fuentes de energa, en presencia de N, demandar una sntesis extra de carbohidrasas, con el consecuente gasto de ATP involucrado en la sntesis de estas enzimas (Figura 3).
Figura 3. Factores y eficiencia de la sntesis de protena microbial en el rumen, indicando la importancia de la energa metabolizable fermentable ruminal (FME); protena degradable ruminal (PDR), donde A, B, Kd y Kp, representan la fraccin de N soluble no precipitable con TCA (Nitrgeno No Proteico), fraccin nitrogenada enzimticamente digerible, tasa de proteolisis y tasa de escape ruminal de fracciones nitrogenadas, respectivamente; sincronizacin energa/N; velocidad de paso (escape) de partculas; consumo de alimento y factores ambientales en el ecosistema ruminal (Sniffen et al., 1992; Velsquez, 2008). Bajo otro aspecto, es interesante destacar desde un punto de vista cintico, que el proceso de degradacin de las protenas tiene especial importancia en tiempos tempranos postingesta (1-6 h), debido a la rpida disponibilidad de los compuestos nitrogenados que presentan la mayora de los forrajes y suplementos proteicos.
Para el caso de los forrajes frescos se debe considerar, adems, la activacin de proteasas endgenas del vegetal al momento de su corte, y tambin, la posterior induccin de estas enzimas en el medio ruminal, como una respuesta al efecto de la temperatura y la condicin anaerobia del rumen. Como resultado de este aumento de la actividad de peptidasas endgenas sobre las propias protenas del vegetal, se producira un incremento en la concentracin de N en el medio, momento en que las proteasas y carbohidrasas microbianas an no han iniciado su actividad hidroltica, tiempo de retraso (lag), generando una marcada asincrona energa/N (Zhu et al., 1999; Kaswari et al., 2007; Riasi et al., 2008). LITERATURA CITADA Asplund, J.M. 1994. Principles of Protein Nutrition of Ruminants. Animal Science Research Center. University of Missouri. Columbia. USA. CRC Press. 5:71-111. Broderick, G.A. 1987. Determination of protein degradation rates using a rumen in vitro system containing inhibitors of microbial nitrogen metabolism. Br. J. of Nutr. 58:463-475. Broderick, G.A., P. Udn, M.L. Murphy and A. Lapins. 2004. Sources of variation in rates of in vitro ruminal protein degradation. J. Dairy Sci. 87:1345-1359. Bull, L.S. 2001. Ruminant Protein Nutrition-Basic and Application. Animal and Poultry Waste Management Center. XXVI Reunin Anual. Sochipa. 207-215. Calsamiglia, S., M.D. Stern and B.A. Crooker. 1992. Effects of diets formulated to contain different amounts of rumen non-degradable protein on microbial fermentation and nutrient flow from a continuos culture system. Anim. Feed Sci. Tech. 39:239-252. Chamberlain, D.G. and J.J. Choung. 1995. The importance of rate of ruminal fermentation of energy sourges in diets for dairy cows. Recent Advances in Animal Nutrition. 1:3-27. Encinias, A.M., G.P. Lardy, J.L. Leupp, H.B. Encinias, L.P. Reynolds and J.S. Caton. 2005. Efficacy of using a combination of rendered protein products as an undegradable intake protein supplement for lactating, winter-calving, beef cows fed bromegrass hay. J.Anim. Sci. 83:187-195. Givens, D.I., E. Owen, R.F.E. Oxford and H.M. Omed. 2000. Forage Evaluation In Ruminant Nutrition. UK Biddles Ltd, Guildford and Kings Lynn. pp:480. Hristov, A.N., C.E. Basel, A. Melgar, A.E. Foley, J.K. Ropp, C.W. Hunt and J. Tricarico. 2008. Effect of exogenous polysaccharide-degrading enzyme preparations on ruminal fermentation and digestibility of nutrients in dairy cows. Animal Feed Science andTechnology. 145: 182193. Hungate, R.E. 1966. The rumen and its microbes. Academic Press, N.Y. Kaswari, T., P. Lebzien, G. Flachowsky and U. Meulen. 2007. Studies on the relationship between the synchronization index and the microbial protein synthesis in the rumen of dairy cows. Animal Feed Science and Technology. 139 : 122. Kornegay, E.T. 1996. Nutrient Management of Food Animals to Enhance and Protect the Environment. Lewis Publishers. 11: 151-165. Mustafa, A.F., D.A. Christensen and J.J. McKinnon. 2001. Ruminal degradability of neutral detergent insoluble protein of selected protein sources. Can. J. Anim. Sci. 81:601-603. Nocek, J.E. and A.L.Grant. 1987. Characterization of in situ nitrogen and fiber digestion and bacterial nitrogen contamination of hay crop forages preserved at different dry matter percentages. J. Anim. Sci. 64:552564. Orskov, E.R. 1992. Protein Nutrition in Ruminants. 2 E. Academic Press. The Rowett Research Institute Aberdeen. P:171. Pawelek, D.L., J.P. Muir, B.D. Lambert and R.D. Wittie. 2008. In sacco rumen disappearance of condensed tannins, fiber, and nitrogen from herbaceous native Texas legumes in goats. Animal Feed Science and Technology. 142: 116.
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EFECTO DE UN HIDROLIZADO DE PESCADO SOBRE LA PRODUCCIN DE BIOMASA Y CONCENTRACIN DE POLIFENOLES TOTALES EN PLNTULAS DE AJ (Capsicum annuum L.). Ricardo Tighe Neira1, Gina Leonelli Cantergiani1, Armin Cuevas Riquelme1 y Joaqun Yiancamn Gatica1. 1 Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco. Rudecindo Ortega 02950. Temuco. Email: rtighe@uct.cl; fono: 45-553901. INTRODUCCIN La fertilizacin foliar corresponde a la nutricin a travs de las hojas. Este sistema se ha convertido en una prctica comn, ya que corrige las deficiencias nutricionales de las plantas, favorece el buen desarrollo de los cultivos, mejora el rendimiento y calidad del producto; sin embargo, no substituye a la fertilizacin tradicional (Fregoni, 1986). Durante siglos se han usado principalmente dos fuentes de fertilizantes naturales, los extractos vegetales y los hidrolizados de pescado y algas (HP). Los primeros, se utilizan como alternativa de productos naturales que inciden en el crecimiento, desarrollo y composicin de las plantas, su funcin puede estar relacionada con grupos fito-hormonales endgenos que actan como retardantes del crecimiento, inductores de floracin, promotores de madurez y estimuladores de la produccin de biomasa, entre otros Lpez (2003) y Russo et al., (1995). Por otra parte, los HP constituyen una segunda alternativa de productos naturales que contienen una amplia variedad de minerales, carbohidratos y vitaminas, cuyas aplicaciones contribuyen al aumento del vigor, la salud y el rendimiento de los cultivos (SAG, 2009). De acuerdo a lo sealado por Mitchell y Chassy (2009) los nutrientes de las plantas se clasifican en metabolitos primarios (grasas, carbohidratos, aminocidos y azcares simples) y metabolitos secundarios (cidos fenlicos, flavonoides, alcaloides y terpenoides), existiendo normalmente una relacin equilibrada de ambos. En cultivos convencionales los metabolitos primarios son maximizados debido a la optimizacin de las prcticas tradicionales de cultivo. Diversos autores confirman lo anterior, sealando adems, que los vegetales bajo condiciones de estrs desarrollan fitoqumicos producto del metabolismo secundario (Edreva et al., 2008) tales como polifenoles, los que se definen como un conjunto heterogneo de molculas que comparten la caracterstica de poseer en su estructura varios grupos bencnicos sustituidos por funciones hidroxlicas. La sntesis de estos metabolitos depende de la etapa de desarrollo de la planta y sus niveles constitutivos se incrementan frente a estrs abitico o bitico (Seplveda et al., 2003). Son importantes para la fisiologa de las plantas, ya que contribuyen a la resistencia de estas ante microorganismos e insectos, tambin ayudan a protegerlas en su continua exposicin a ambientes con radiaciones ultravioletas y temperaturas altas (Gutirrez, 2002). Garca et al., (2005) sealan que las concentraciones de polifenoles totales se ven afectadas por los niveles de fertilizacin, variedad, poca y el clima, as como tambin de la conservacin del material vegetal. Adems, son considerados benficos para la salud humana debido a su carter de antioxidante (Zhao et al., 2007). En base a lo expuesto, el propsito del presente estudio es evaluar el efecto de distintas dosis de un hidrolizado de pescado comercial sobre variables productivas y concentracin de polifenoles totales en plntulas de aj (Capsicum annuum L.).
MATERIALES Y MTODOS El ensayo se llev a cabo en el campus norte de la Universidad Catlica de Temuco, bajo condiciones de invernadero donde se establecieron plntulas de aj (Capsicum annuum L.) cv. Cacho de cabra en contenedores de 1000 cm3, constituyendo la unidad experimental. El HP evaluado contena un 2% de N y 5% de P2O5, fue aplicado en cuatro dosis conformando los tratamientos del experimento (Cuadro 1). Cuadro 1. Tratamientos del experimento, dosis de producto y agua equivalente por hectrea.
Tratamiento T1 T2 T3 T4 T5 HP dosis 1 HP dosis 2 HP dosis 3 HP dosis 4 Testigo (agua destilada) Dosis HP (L ha-1) 2 4 6 8 0 Agua (L ha-1) 398 396 394 392 400
El producto dosificado se asperj sobre las plntulas a los 53 y 63 das despus de la emergencia (DDE) entre 5 y 7 cm de altura y dos hojas verdaderas, en un volumen total de 3,6 mL por planta, por medio de un aspersor manual de 500 mL. Las evaluaciones correspondieron a muestras destructivas de las plntulas a los 53 DDE (da 0, inicio ensayo), 63 DDE (da 10) y 73 DDE (da 20). Una vez tomadas las muestras se determin MS parcial a 60C por 48 horas a la fraccin radicular y area en estufa de secado con aire forzado (Binder FD, 5-300C). Finalmente, las plntulas deshidratadas se molturaron en un molino elctrico (Cyclotec 1093 Sample Mill) y se guardaron en bolsas plsticas para determinar concentracin de polifenoles totales. Para ello se utiliz el mtodo de FolinCiocalteau, descrito por Georg et al., (2005), los resultados se expresaron en mg equivalentes cido glico (mgEAG 100 g-1) base materia seca (BMS). El diseo experimental fue completamente al azar con cinco tratamientos incluido el testigo y siete repeticiones. Las variables de respuesta fueron sometidas a un anlisis de varianza (ANDEVA) y prueba de comparacin mltiple de Tukey (p0,05), utilizando el software JMP 5.0. RESULTADOS Y DISCUSIN La distribucin de la produccin de MS indica alta homogeneidad (p>0,05) al da 53 DDE (Figura 1). No existen diferencias (p>0,05) en la produccin de MS de raz (Figura 1A), excepto a los 73 DDE donde el testigo presenta valores significativamente mayores (p0,05). En la produccin de MS de la fraccin area (Figura 1B) se aprecian diferencias significativas (p0,05) en el testigo a los 73 DDE, respecto de T3. Finalmente, en materia seca total (Figura 1C) se repite la diferencia (p0,05) en favor del testigo sobre T3.
Figura 1. Materia Seca (g) de plntulas de C. annuum. A) sistema radicular, B) sistema areo y C) total. Letras distintas en columnas de igual tono indican diferencias estadsticamente significativas para la prueba de Tukey (p0,05).
Los resultados no concuerdan con lo observado por Canales (2000) quien afirma que la aplicacin de fertilizantes preparados con extractos de algas marinas en plantas de C. annuum incrementan la produccin de biomasa en un 26,6%, y que al ser aplicados en forma conjunta en el follaje y suelo tienen los mejores rendimientos. Por otra parte, Bula-Meyer (2000) seala que este tipo de fertilizantes tiene distinto efecto dependiendo de la cantidad y momento de aplicacin, y que adems, depende de la poca de recoleccin de las algas, su estado fenolgico y su forma de aplicacin, por lo que es posible la respuesta encontrada sea atribuible a un efecto de este tipo. La evolucin del contenido de MS de raz para cada tratamiento en el tiempo, independiente de la dosis, no sigue la misma tendencia creciente que en las hojas, lo anterior se puede deber a un efecto localizado del producto. Este efecto diferencial ha sido observado en aplicaciones de bioestimulantes orgnicos en otras especies (Russo et al., 1995). En trminos de concentracin de MS es posible destacar el valor del testigo (T5) que a los 53 y 73 DDE no difiere estadsticamente (p>0,05) de los dems tratamientos (Cuadro 2), lo que no sugiere la presencia de bioestimulacin por efecto del HP, puesto que los valores ms altos se encuentran en las dosis ms baja e intermedia del producto y ambas no difieren (p>0,05) del testigo. Cuadro 2. Porcentaje de Materia Seca total de plantas de C. annuum.
Tratamientos T1 T2 T3 T4 T5 53 16,2 0,015 b 22,5 0,032 a 20,4 0,014 ab 20,3 0,015 ab 20,5 0,012 ab DDE 63 23,3 0,008 ab 19,5 0,007 c 22,1 0,001 abc 20,4 0,008 bc 24,8 0,009 a 73 21,9 0,004 a 20,3 0,004 b 21,9 0,004 ab 21,2 0,003 b 23,4 0,006 ab
Letras distintas en las columnas indican diferencias estadsticamente significativas para la prueba de Tukey (p0,05). A diferencia de la homogeneidad inicial en la produccin de MS, en altura se aprecian variaciones en el inicio de las mediciones (Figura 2), puesto que las plntulas que constituyeron T1 fueron estadsticamente ms altas (p0,05) que T2 y T3. Situacin que cambia a los 63 DDE de evaluacin, dado que T1 present menores valores (p0,05). A los 73 DDE T1 posee mayor altura (p0,05) que los dems tratamientos. A partir de ello, se puede inferir un efecto de la menor dosis (T1) sobre la altura. Resultados de este tipo son atribuibles al efecto directo del HP. Al respecto, Ramos (2000) encontr respuesta en la dosis ms baja y la ms alta para este parmetro en aplicacin de cidos hmicos sobre otra especie.
Figura 2. Altura (cm) de plntulas de aj para cada tratamiento. Letras distintas en columnas de igual tono indican diferencias estadsticamente significativas para la prueba de Tukey (p0,05). En relacin a la concentracin de polifenoles totales, la condicin inicial (53 DDE) muestra (Figura 3) diferencias significativas (p0,05) para T3 y T4 sobre los dems tratamientos con valores superiores a 550 mg EAG equivalente a un 33% en promedio a los encontrados a los 63 y 73 DDE de evaluacin, los que se encuentran en el orden de los 2100 mg EAG. Esto seala indirectamente la activacin del metabolismo secundario de las plantas, producto de un estrs bitico o abitico (Seplveda et al., 2003) previo a la aplicacin de los tratamientos. En las aplicaciones sucesivas se observan valores inferiores a la condicin inicial, lo que es esperable puesto que el HP genera un efecto bioestimulante, disminuyendo una posible condicin de estrs reflejada en la concentracin de polifenoles totales. A los 63 DDE se evidencia un efecto estadsticamente menor (p0,05) de la dosis mayor (T4) sobre el testigo.
Figura 3. Concentracin (mg EAG 100g-1 BMS) de polifenoles totales en plntulas de C. annuum. Letras distintas en columnas de igual tono indican diferencias estadsticamente significativas para la prueba de Tukey (p0,05). CONCLUSIN No existe efecto de las diferentes dosis del hidrolizado de pescado sobre la produccin de MS, s en altura y concentracin de polifenoles totales. No se evidencian efectos claros de bioestimulacin como consecuencia por el producto aplicado; sin embargo, se observa un efecto supresor del estrs, reflejado en la concentracin de polifenoles totales. LITERATURA CITADA Bula-Meyer, G. 2000. Las macroalgas marinas en la agronoma y el uso potencial del Sargassum flotante en la produccin de fertilizantes en el archipilago de San Andrs y Providencia, Colombia. Revista del Instituto de Investigaciones Tropicales 1(1):91-103. Canales, B. 2000. Enzimas-algas: posibilidades de su uso para estimular la produccin agrcola y mejorar los suelos. Terra 17(3):271-276. Edreva, A., Velikova, V., Tsonev, T., Dagnon, S., Grel, A., Aktas, L., and Gesheva. E. 2008. Stress protective role of secondary metabolites: diversity of functions and mechanism. General and Applied Plant Physiology 34 (1-2): 67-78. Fregoni, M., 1986. Some aspects of epigean nutrition of grapevines. p. 205-211. In Alexander, A. (Ed.). Foliar fertilization. Proceedings of the First International Symposium of Foliar Fertilization by Schering Agrochemical Division, Berlin, Alemania. Garca, D., Medina, M., y Ojeda, F. 2005. Efecto de la fertilizacin orgnica, la variedad y la poca en el perfil polifenlico de Morus alba L. Revista Avances en Investigacin Agropecuaria 9(2):69-85. Georg, S., Brat, P. Alter, P., y Amiot, M. 2005. Rapid determination of polyphenols and vitamina C in plantderived products. Journal of Agricultural and Food Chemistry 53(5):1370-1373. Gutirrez, A. 2002. Vino, polifenoles y proteccin a la salud. Revista Cubana de Alimentacin y Nutricin 16(2):134-41. Lpez, H. 2003. Efecto de bioestimulantes en cultivos de papa (Solanum tuberosum) en la zona central de Chile. Resumenes 54 Congreso Agronmico. Simiente 73(3-4):15-61 pp. Mitchell, A., and Chassy, A. 2009. Atioxidants and the Nutritional Quality of Organic Agriculture. Annual meeting of the American Advancement of Science in Chicago. pp. 12-16. SAG. 2009. Sistema nacional de certificacin de productos orgnicos agrcolas. 115 p. Servicio Agrcola y Ganadero. Gobierno de Chile Ministerio de Agricultura, Santiago, Chile. Seplveda, G., Porta, H., y Rocha, M. 2003. La participacin de los metabolitos secundarios en la defensa de las plantas. Revista Mexicana de Fitopatologa 21(3):355-363. Ramos, R. 2000. Aplicacin de sustancias hmicas comerciales como productos de accin bioestimulantes. Efectos frente al estrs salino. Tesis Doctoral. 335 p. Russo, R., Lugo, J., Arreola, O. 1995. Efecto de un bioestimulante hmico extrado del raquis de banano (pinzote) sobre el crecimiento de plntulas de banano (musa aaa subgrupo cavendish don gran enano).
ASPECTOS FISIOLGICOS, BIOQUMICOS Y MOLECULARES DE LA TOXICIDAD POR ALUMINIO (Al3+) EN ARNDANOS CULTIVADOS EN EL SUR DE CHILE
Claudio Inostroza-Blancheteau1,2, Marjorie Reyes-Daz3,4, Miren Alberdi3,4 1 Ncleo de Investigacin de Produccin Alimentaria, 2Escuela de Agronoma, Facultad de Recursos Naturales, Universidad Catlica de Temuco, Av. Rudecindo Ortega 02950, Temuco. 3Departamento de Qumica y Recursos Naturales, Facultad de Ingeniera, Ciencias y Administracin, Universidad de La Frontera, Av. Francisco Salazar 01145, Temuco. 4Center of Plant, Soil Interaction and Natural Resources Biotechnology, BIOREN-UFRO, Universidad de La Frontera, Temuco.
INTRODUCCIN La toxicidad por aluminio (Al), es uno de los principales factores que limitan la productividad de especies cultivadas en suelos cidos alrededor del mundo (Ryan et al., 2011). Cuando el pH es inferior a 5,0 las formas txicas de aluminio (Al3+) son solubilizadas en la solucin del suelo inhibiendo el crecimiento y la funcin de las races (Figura 1), lo que repercute posteriormente en el rendimiento y calidad de los cultivos (Kochian et al., 2005; Inostroza-Blancheteau et al., 2008). Por otro lado, se ha observado que a nivel fisiolgico el Al puede provocar alteraciones a nivel celular, afectando las membranas lipdicas, induciendo desrdenes enzimticos, as como tambin perturbaciones en la biosntesis de los cidos nucleicos como ADN nuclear y ARNm (Achary et al., 2010; Inostroza-Blancheteau et al., 2012). Adems se ha discutido el efecto de la interaccin Al-Calcio (Ca), donde se ha observado una perturbacin en el Ca2+ citoplasmtico, sugiriendo que Al afecta la homeostasis (Al3++Ca2+) de Ca debido a un incremento de la actividad del Ca2+ en el citoplasma (Rengel and Zhang, 2003). Aluminio interacta con los lpidos de membrana, afectando el metabolismo y causando una rigidificacin de la membrana plasmtica (Yamamoto et al., 2001). Esto inducira estrs oxidativo a nivel celular por el incremento de las especies reactivas de oxigeno (EROS) (Yamamoto et al., 2003; Inostroza-Blancheteau et al., 2012), lo que podra causar muerte celular programada va transduccin de seales activada por EROS en las clulas de la raz (Pan et al., 2001). Por otro lado, se ha observado que a nivel fisiolgico la toxicidad por Al afecta negativamente la fotosntesis neta, el desempeo fotoqumico del fotosistema II, la conductancia estomtica, la transpiracin, entre otros parmetros (Reyes-Daz et al., 2009; 2010; Inostroza-Blancheteau et al., 2011a; Mukhopadyay et al., 2012). Sin embargo, las plantas han desarrollo sofisticados sistemas para hacer frente a la toxicidad y el estrs oxidativo inducido por Al (Kochian et al., 2002). Aunque muchas especies de plantas son sensibles a esta toxicidad, la variacin gentica en la resistencia a Al ha sido reportada en muchas especies (Kumari et al., 2008). La resistencia a Al puede clasificarse en dos tipos de mecanismos: uno basado en la exclusin del Al en la rizsfera, y otro basado en la tolerancia una vez que Al ha ingresado al citoplasma celular (Kochian et al., 2004). Tambin, el sistema antioxidante, cobra real importancia al contrarrestar el estrs oxidativo inducido por Al (Tabaldi et al., 2009; Panda and Matsumoto, 2010).
Figura 1. Efecto de la toxicidad por Al sobre el crecimiento total (A) y de raz (B) del cultivar Bluegold en comparacin a plantas no tratadas con Al (control). El cultivar fue crecido durante 20 d en solucin hidropnica no suplementada y suplementada con 100 M de aluminio como cloruro de aluminio (AlCl3) a pH 4.5.
El arndano alto (Vaccinium corymbosum L.) es una importante especie a nivel mundial que posee altos contenidos en antioxidantes que son beneficiosos para la salud humana (Prior et al.,1998; Ehlenfeldt and Prior, 2001). En Chile, esta especie fue introducida en la dcada de los 90, con muy buenos resultados adaptativos. Actualmente, la superficie cultivada de arndano alto en nuestro pas supera las doce mil hectreas, actividad que se concentra en la zona centro-sur y sur de Chile, caracterizada por poseer suelos cidos derivados de cenizas volcnicas recientes (Andisoles), que limitan significativamente el crecimiento y produccin de los cultivos (Mora et al., 2006). Aunque el arndano alto se adapta bien a los suelos cidos (Ireland and Wilk, 2006), poco se conoce sobre los posibles mecanismos y respuestas fisiolgicas, bioqumicas y moleculares a la interaccin entre un sustrato cido y la toxicidad por Al en arndano. En la presente revisin nosotros discutimos sobre los recientes avances asociados a los posibles mecanismos y efectos de la toxicidad por Al en arndanos cultivados en el sur de Chile. ACUMULACIN Y DISTRIBUCIN DEL Al EN PLANTAS CON ESPECIAL MENCIN DEL ARNDANO Los mecanismos de resistencia a Al, ya sea resistencia por exclusin o tolerancia por acumulacin son mediados por procesos de transporte o acumulacin en diversas especies (Klug et al., 2011). El Al libre ejerce directamente su efecto txico en las races de las plantas. En muchos casos es poco absorbido o translocado a la parte area, excepto por algunas especies tales como Hydrangea macrophylla, Fagopyrum esculentum y Melastoma malabathricum que pueden ser consideradas acumuladoras. Estas especies son capaces de acumular altas concentraciones de Al (> 3000 mg kg-1 DW) en las hojas, formando complejos Al-aniones orgnicos como mecanismo de tolerancia y quelando el Al en diferentes tejidos (principalmente en la vacuola de las hojas) (Zheng et al., 1998; Barcel and Poschenrieder, 2002; Jones and Ryan, 2003). Especies como Richeria grandis, Melastoma malabathricum y Vaccinium macrocarpon, que se adaptan a suelos cidos acumulan ms de 1000 mg kg-1 DW en las races y las hojas (Cuenca et al., 1990; Osaki et al., 1997; Watanabe et al., 1998). En el caso de arndano, estudios recientes muestran una acumulacin diferencial de Al en hojas y races de los cultivares Brigitta, Legacy y Bluegold crecidos en Chile (> 1000 mg kg-1 DW), encontrndose la mayor acumulacin en hojas del cultivar Brigitta (Reyes-Daz et al., 2009). Otro estudio realizado por los mismos autores en races teidas con hematoxilina (reactivo que evidencia la acumulacin de Al) demostr una alta acumulacin de Al a las 24 y 48 h de tratamiento en el cultivar Bluegold sin manifestacin de recuperacin (24 h sin Al) (Figura 2A). Por el contrario, los cultivares Brigitta (Figura 2B) y Legacy (Figura 2C) slo acumularon Al en los primeros milmetros del pice radical recuperndose posteriormente. La mayor acumulacin de Al en hojas est directamente asociada con la tolerancia a este elemento, lo que coincide con lo descrito para cultivares de Soghum bicolor (Gonalves et al., 1996).
Figura 2. Acumulacin de Al en races de tres cultivares de arndano crecidos en solucin hidropnica durante 48 h y su posterior recuperacin a las 24 h sin Al. La tincin fue realizada con hematoxilina. A: cultivar Bluegold, B: cultivar Brigitta y C: cultivar Legacy.
Por otro lado, cuando las plantas de Fagopyrum esculentum son expuestas a Al, oxalato es rpidamente secretado de los pices radicales de esta especies (Zheng et al., 1998). En recientes investigaciones tendientes a dilucidar el mecanismo de resistencia a Al y/o manganeso (Mn2+) en V. corymbosum se evalu la exudacin de aniones orgnicos (oxalacetato, citrato, malato y succinato) en los cultivares Brigitta, Legacy y Bluegold. Los resultados mostraron diferencias significativas en los cidos orgnicos exudados desde las races que dependieron de la concentracin del catin y del cultivar. En los cultivares Legacy y Brigitta el cido orgnico mayormente exudado fue oxalacetato seguido de citrato, mientras que Bluegold mostr los niveles mas bajos de cidos orgnicos en el tratamiento con Mn2+ txico (Millaleo et al., 2011). Malato y succinato no mostraron una clara tendencia en V. corymbosum. Tres de estos cuatro aniones orgnicos son capaces de formar complejos con Al, con el siguiente orden de efectividad: citrato>oxalacetato>malato (Jones y Ryan, 2003). Esto estara directamente asociado con el nivel de tolerancia a metales en las diferentes especies de plantas. PRINCIPALES EFECTOS DE LA TOXICIDAD POR Al EN ARNDANO Comparativamente existe menos informacin sobre los efectos del Al en las hojas que en las races. En hojas, la toxicidad por Al induce malformaciones en los cloroplastos, an cuando no se detecta altas concentraciones de Al en este organelo, indicando efectos indirectos sobre el funcionamiento de los cloroplastos (Moustakas et al., 1995). Varios estudios en distintas especies indican una disminucin en el contenido de clorofila total y de la fotosntesis acompaada de una inhibicin parcial del transporte de electrones en el fotosistema II (PSII) en respuesta al Al (Chen et al., 2005a; 2005b; Peixoto et al., 2002; Pereira et al., 2000). Es sabido que las alteraciones del aparato fotosinttico por efecto del estrs afectan el metabolismo y productividad de muchos cultivos (Rao and Cramer, 2003). Estudios realizados en arndano bajo tratamientos con Al de tiempo corto indican que los parmetros fotoqumicos disminuyen fuertemente en Bluegold (hasta un 98% de inhibicin) y en Lagacy (hasta un 80%) sin una recuperacin total. Por el contrario, Brigitta mostr un mejor desempeo fotoqumico (Reyes-Daz et al., 2009). Por otro lado, en experimentos de tiempo largo (20 d), Bluegold mostr un decrecimiento significativo en la eficiencia fotoqumica efectiva del PSII y del transporte de electrones (ETR), el que fue ms bajo que en Legacy en los tratamientos con Al (Reyes-Daz et al., 2010). Este decrecimiento se reflej tambin en el crecimiento total del cultivar Bluegold (Figura 1A). En races, el sntoma ms evidente de la toxicidad por Al es la rpida inhibicin de su crecimiento que puede ocurrir dentro de los primeros 60 minutos en algunas especies como Triticum aestivum (Delhaize et al., 1993; 1995). Sin embargo, en V. corymbosum, este fenmeno es algo ms difcil de determinar. No obstante, hemos podido determinar la tasa relativa de crecimiento en arndano alto, en cultivares sometido a estrs por Al y bajo condiciones cidas por 20 d en solucin hidropnica, donde se observa que a medida que aumenta la concentracin de Al disminuye significativamente la tasa de crecimiento relativo de la raz en el cultivar Bluegold, mostrando su sensibilidad a este elemento (Reyes-Daz et al., 2010) (Figura 3). Otra importante evidencia del efecto txico del Al en las races de arndano fue recientemente publicado por InostrozaBlancheteau et al. (2011a), donde a travs de estudios de cortes histolgicos utilizando cultivares de tolerancia contrastante al Al se analizaron las alteraciones estructurales bajo una misma condicin de estrs (100 M AlCl3), observndose que el genotipo resistente a Al (cultivar Brigitta), no exhibe notables modificaciones anatmicas despus del tratamiento con Al, comparado con el control y con el cultivar sensible (Bluegold).
Figura 3. Cambios en la tasa de crecimiento relativo en cultivares de arndano alto sometidas a dosis crecientes de aluminio bajo condiciones de acidez por 20 d. Las letras minsculas indican diferencias significativas entre los diferentes tratamientos de Al. Los asteriscos indican diferencias significativas entre los cultivares (Tukey test HSD, con P0.05). La fuerte interaccin del Al con la membrana plasmtica es debida mayoritariamente a la carga negativa de los fosfolpidos (Jones y Kochian, 1997). Esta unin causa rigidificacin de la membrana, traducindose en una menor fluidez de sta, lo que finalmente afecta su metabolismo (Oteiza, 1994). La peroxidacin de lpidos de membrana es considerada un temprano sntoma en plantas sometidas a estrs por Al, siendo muy buen indicador de estrs oxidativo como fue descrito en races de Pisum sativum por Yamamoto et al. (2001) y Yamamoto et al. (2003). Este fenmeno ha sido investigado en V. corymbosum, en hojas y races de los cultivares Legacy y Bluegold, por 20 d de tratamiento, en Bluegold se observ un incremento de alrededor de 7 veces de la peroxidacin lipdica de la races comparado con el control en todos los tratamientos de Al (Reyes-Daz et al., 2010). En estudios realizados con Brigitta, Legacy y Bluegold, se observ el mismo efecto, sin embargo, al aplicar sulfato de calcio a la solucin, la peroxidacin de lpidos de membrana disminuy significativamente en hojas y races en los tres cultivares (Reyes-Daz et al., 2011). En la actualidad, es ampliamente aceptado que el Al induce estrs oxidativo, por la induccin de EROS, lo que tambin podra contribuir a la inhibicin del crecimiento radical (Tams et al., 2004), para mitigar el dao oxidativo, iniciado por EROS. Como se enunci ms arriba, las plantas poseen sofisticados sistemas antioxidantes enzimticos y no enzimticos (InostrozaBlancheteau et al., 2012). El sistema enzimtico involucra enzimas tales como superoxido dismutasa (SOD), ascorbato peroxidasa (APX), glutatin S-transferasa (GST) y Catalasa (CAT). En arndano alto (cultivar Brigitta) el sistema antioxidante es tempranamente inducido ante el estrs por Al, incrementndose la actividad SOD alrededor de 4 veces en hojas despus de 2 h de tratamiento, contrariamente a lo ocurrido con Bluegold (Inostroza-Blancheteau et al., 2011a). En las races la actividad SOD, fue similar en ambos cultivares, con un incremento de slo 1,7 veces despus de la 6 h de tratamiento y que disminuy gradualmente hasta las 48 h. En este mismo estudio la actividad CAT, present un comportamiento similar a SOD en hojas y un incremento significativo a las 24 h de tratamiento en races de arndano. En relacin a los componentes no enzimticos, la actividad antioxidante total en un tratamiento largo de exposicin a Al en races de V. corymbosum, se observ un alta capacidad antioxidante en el cultivar Legacy, comparado con el control a los 7 d de tratamiento con Al y una casi nula respuesta de la actividad antioxidante en Bluegold (Reyes-Daz et al., 2010). Recientemente se ha reportado la capacidad antioxidante del fruto de diferentes estados de madurez de estos cultivares, observndose una excepcionalmente alta capacidad antioxidante comparado con el Hemisferio Norte (Ribera et al., 2010). En la actualidad es bien reconocida la cualidad antioxidante de los frutos de arndano. Sin embargo, se ha demostrado que la actividad antioxidante en las hojas puede ser 3 veces superior a la encontrada en los frutos (Kim and Um, 2011), esto le brinda propiedades protectoras excepcionales a esta especie frutcola.
EFECTOS DEL Al SOBRE EL TRANSCRITOMA DE ARNDANO ALTO Muchos esfuerzos a travs del mejoramiento tradicional del arndano alto han sido realizados sobre el desarrollo de cultivares con una amplia adaptacin climtica, como por ejemplo: sobre el incremento de la tolerancia al fro, adaptacin a crecer en suelos con pH ms altos, resistencia a enfermedades y aumento en la calidad de los frutos son algunas de la aproximaciones que se han realizado en esta especie (Rowland et al., 2012). El desarrollo de herramientas moleculares podra facilitar ms rpidamente el mejoramiento de esta especie. Algunos avances se han realizado para secuenciar el transcriptoma, definido como el estudio del conjunto de los cidos ribonucleicos (ARNs), de arndano alto principalmente asociado a la tolerancia al fro, debido al dao que se produce en los brotes florales y posteriormente en la flor (Walworth et al. 2012). En experimentos con cultivares aclimatados y no aclimatados al fro se han generado ms de 1500 ESTs, del ingls Expressed Sequence Tag (Dhanaraj et al., 2007), que son secuencias expresadas bajo una determinada condicin. Posteriormente, a travs de hibridacin subtractiva se identificaron ms de 500 genes asociados con la aclimatacin al fro (Naik et al., 2007). As como tambin se esta avanzando con la identificacin de marcadores moleculares asociados con la tolerancia al frio en arndano alto para generar un mapa gentico y mapear lo QTL asociados a esta condicin (Rowland et al., 2003). Recientemente, Li et al. (2012), utilizando perfiles de transcriptoma comparativa identificaron 92 genes expresados diferencialmente, que podran regular el metabolismo y el contenidos de antocianos en los frutos de arndano. Estudios recientes asociados a la evaluacin del efecto del estrs por Al sobre el transcriptoma de arndano alto han sido conducidos en genotipos de arndanos contrastantes a la tolerancia a Al (Brigitta, resistente y Bluegold sensible). Utilizando cDNA-amplified fragment length polymorphism (cDNA-AFLP), se pudieron identificar mas de 70 TDFs (Fragmentos derivados de Transcritos), agrupados en 8 categoras funcionales (Figura 4) (Inostroza-Blancheteau et al., 2011b). En la categora de respuesta a estrs se identificaron algunos genes asociados a estrs oxidativo como glutatin S-transferasa (GST), aldehdo deshidrogenasa (ALDH). Estos genes en otros estudios han conferido resistencia a la toxicidad por Al como es el caso de la GST en maz (Canado et al., 2005). La ALDH ha sido reportada para conferir resistencia a diversos estreses abiticos (Kotchoni et al., 2010).
Figura 4. Distribucin de los fragmentos derivados de transcritos (TDFs) expresados diferencialmente bajo estrs por aluminio en arndano alto. Un total de 70 clones (fragmentos de cDNA-AFLP) fueron agrupados en ocho categoras funcionales y clasificados sobre la base de su homologa con las secuencias depositadas en las bases de datos.
La sobre-expresin de ALDH en plantas transgnicas de Arabidopsis thaliana increment la tolerancia a NaCl y a metales pasados como Cu2+ y Cd2+. Esto se explica por la disminucin de la peroxidacin de lpidos derivados de aldehdos reactivos comparados con el tipo silvestre (Sunkar et al., 2003). La expresin de estos genes ha sido evaluada en hojas y races de arndano alto sometidas estrs por Al, en los cultivares Brigitta y Bluegold, observndose una mayor expresin de estos genes en las hojas de Brigitta (resistente a Al) (Inostroza-Blancheteau et al., 2011a). Por otro lado, en este mismo estudio se evalu la actividad antioxidante total en ambos tejidos y cultivares encontrndose dos veces ms actividad en las hojas que en races, sugiriendose que uno de los posibles mecanismos para hacer frente a la toxicidad por Al en arndano alto, seria la activacin de la maquinaria antioxidante a nivel areo. Sin embargo, mas esfuerzos a nivel molecular son requeridos, ya que los actuales no son suficientes para un mejor entendimiento de los mecanismos moleculares asociados a la tolerancia a Al en arndano.
CONCLUSIONES Se ha logrado determinar una respuesta diferencial a la toxicidad por Al en los arndanos cultivados en el sur de Chile. stos se han basado principalmente en estudios fisiolgicos, histolgicos y bioqumicos, ya sea en periodos cortos o largos de tratamiento con Al. Se determin que el cultivar Brigitta es resistente y el cultivar Bluegold, sensible a la toxicidad por Al. Por otro lado, se comprob que a pesar de que la especie V. corymbosum, se desarrolla muy bien en suelos cidos, el efecto txico del Al soluble bajo estas condiciones produce una disminucin de la tasa de crecimiento relativo a nivel radicular, as como tambin fue demostrado el dao en las clulas de la epidermis y endodermis de los pices radicales en los cultivares. A nivel molecular, en arndano alto se han identificados nuevos genes inducidos por Al, algunos de respuesta a estrs. Estos genes podran explicar el mecanismo de resistencia a la toxicidad por Al en arndano y podran ser usados en estudio posteriores como genes candidatos para la resistencia a Al en plantas leosas. De acuerdo a los estudios que se han llevado a cabo, el arndano alto expuesto a estrs por Al, incrementa la actividad de sistema antioxidante, principalmente a nivel areo. Por otro lado, y de acuerdo a los niveles de Al encontrado en las races y hojas de esta especie, as como tambin la exudacin de cidos orgnicos como oxalato y citrato (cidos orgnicos altamente quelantes) podemos sugerir que V. corymbosum no activa slo un mecanismo especfico para contrarrestar la toxicidad por Al sino ms bien activa varios mecanismos al igual como se ha descrito para otras especies leosas. AGRADECIMIENTOS Estas investigaciones realizadas en arndano alto han sido financiadas por Fruit Consortium, 07Genoma01, the Millennium Nucleus for Plant Functional Genomics (P06-009-F), y los proyectos FONDECYT N 11080231 y 1080372. REFERENCIAS Achary VMM, Panda BB (2010) Aluminium-induce DNA damage and adaptive response to genotoxic stress in plant cells are mediated through reactive oxygen intermediates. Mutagenesis 25:201-209. Barcel J, Poschenrieder C (2002) Fast root growth responses, root exudates, and internal detoxification as clues to the mechanisms of aluminium toxicity and resistance: a review. Environmental and Experimental Botany 48:75-92. Canado GMA, De Rosa Jr VE, Fernndez JH, Maron LG, Jorge RA, Menossi M (2005) Glutathione S-transferase and aluminum toxicity in maize. Functional Plant Biology 32: 1045-1055. Chen LS, Qi YP, Liu XH (2005b) Effects of aluminum on light energy utilization and photoprotective systems in citrus leaves. Annals of Botany 96:35-41. Chen LS, Qi YP, Smith BR, Liu XH (2005a) Aluminum-induced decrease in CO2 in citrus seedlings is unaccompanied by decreased activities of key enzymes involved in CO2 assimilation. Tree Physiology 25:317-324. Cuenca G, Herrera R, Medina E (1990) Aluminum tolerance in tres of a tropical cloud forest. Plant and Soil 125:169-175. Delhaize E, Ryan P (1995) Aluminum Toxicity and Tolerance in Plants. Plant Physiology 107:315-321. Delhaize E, Ryan PR, Randall PJ (1993) Aluminum tolerance in wheat (Triticum aestivum L.). II. Aluminumstimulated excretion of malic acid from root apices. Plant Physiology 103:695-702. Dhanaraj AL, Alkharouf NW, Beard HS, Chouikha IB, Matthews BF, Wei H, Arora R, Rowland LJ (2007) Major differences observed in transcript profiles of blueberry during cold acclimation under field and cold room conditions. Planta 225:735-751. Ehlenfeldt MK, Prior RL (2001) Oxygen radical absorbance capacity (ORAC) and phenolic and anthocyanin concentrations in fruit and leaf tissues of highbush blueberry. Journal of Agricultural and Food Chemistry 49:2222-2227.
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