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ESPECIALIDAD: LABORATORIO CLINICO III UNIDAD: MANUAL DE PRCTICAS SEMESTRE: 5

XALAPA, VERACRUZ A 5 DE DICIEMBRE DE 2012.

Historia Clnica Folleto de Autoexclusin Practica 1.. Grupo Sanguneo Directo e Inverso Practica 2.. Variante DU

Practica 3.. Determinacin de Hemoglobina

Practica 4.. Determinacin de Hematocrito

Practica 5.. Clulas Control de Coombs

Practica 6.. Pruebas Cruzadas o de Compatibilidad

Practica 7.. RPR (Prueba Rpida o de Reagina)

Practica 8.. Brucelosis (Rosa de Bengala)

Practica 9..

Tincin de Wright para Determinacin de Trypanosoma sangunis en Rana. Practica 10 Determinacin de Chagas en Suero Practica 11 Determinacin de Hepatitis B

Practica 12 Determinacin de Hepatitis C

Practica 13 Determinacin de Paludismo

Practica 14 Determinacin de VIH

Practica 15 Flebotoma

Preguntas..

GRUPO SANGUNEO DIRECTO E INVERSO

Fundamento:
Grupo sanguneo, sistema de clasificacin de la sangre humana basado en los componentes antignicos de los glbulos rojos. La tipificacin de grupo es un requisito necesario para las transfusiones de sangre. A principios del siglo XX, los mdicos descubrieron que el fracaso frecuente de las transfusiones era debido a la incompatibilidad entre la sangre del donante y la del receptor. En 1901, el patlogo austriaco Karl Landsteiner estableci la clasificacin de los grupos sanguneos y descubri que se transmitan segn el modelo de herencia mendeliano (en funcin de las leyes de Mendel).

Objetivo:
1. Identificar la importancia de la determinacin delos grupos sanguneos. 2. Tipificar los grupos de los sistemas A-B-O y Rh en muestras sanguneas. 3. Comprobar los grupos sanguneos con la prueba inversa.

Generalidades:
El ms importante de los diversos sistemas de clasificacin de la sangre es el del grupo sanguneo ABO. Los cuatro tipos sanguneos que se contemplan en esta clasificacin son el A, el B, el AB y el O. Las clulas sanguneas del grupo A tienen el antgeno A en su superficie. Adems, la sangre de este grupo contiene anticuerpos contra el antgeno B presente en las clulas rojas de la sangre del grupo B. En el suero del grupo AB no existe ninguno de los dos anticuerpos previos, pero los glbulos rojos contienen los antgenos A y B. El grupo O carece de estos antgenos en los eritrocitos, pero este suero es capaz de producir anticuerpos contra los hemates que los contengan. Como los eritrocitos de la sangre del grupo O no contienen ningn antgeno en su superficie, la sangre de este grupo puede ser empleada con xito en cualquier receptor. Las personas del grupo AB no producen anticuerpos, y pueden por tanto recibir transfusiones de cualquiera de los cuatro grupos. As, los grupos O y AB se denominan donante universal y receptor universal respectivamente. El antgeno Rh fue descubierto en 1941 por los hematlogos Landsteiner y Wiener, que utilizando sueros de conejos y cobayas inmunizados mediante glbulos rojos del mono Rhesus, comprobaron que los anticuerpos contenidos en los sueros, adems de aglutinar los glbulos rojos del Rhesus, producan ese mismo efecto en el 85% de la poblacin blanca de

Nueva York, que fue sobre la que se hizo la prueba. El inicial Rh corresponde al macaco Rhesus, un mono cuya sangre tiene la propiedad de poseer un factor aglutingeno de glbulos rojos. Es el sistema de mayor importancia transfusional despus del ABO. Desde el reconocimiento inicial del antgeno D, cerca de 50 antgenos diferentes se conoce que forman parte del sistema Rh. La mayora de los anticuerpos de grupo sanguneo Rh son inmunes, originados en respuesta al estmulo por embarazo o transfusin.

Equipo:
Centrifuga Bao Mara

Material:
Tubos de ensayo Gradilla Pipeta Pasteur con bulbo

Material Biolgico:
Sangre con E.D.T.A

Tcnica:
Mtodo en Placa:
1. Extraer sangre en un tubo de tapn morado con E.D.T.A. 2. Clocar una gota de sangre en la placa. 3. Coloque una gota de reactivo de grupo sanguneo correspondiente (anti A, anti B o anti AB) en una placa. 4. Mezcle bien las clulas y el reactivo, utilizando diferentes aplicadores de madera para cada prueba. 5. Agite la placa despacio y con suavidad durante 2 minutos y observe la aparicin de aglutinacin macroscpica. 6. Transcurridos dos minutos, las pruebas que no muestren aglutinacin se interpretaran como negativas.

Mtodo Directo en Tubo:

1. Preparar una suspensin de eritrocitos al 5 % que desee analizar en solucin salina isotnica. 2. Coloque una gota del reactivo de grupo sanguneo correspondiente (anti A, anti B o anti AB) en un tubo de ensayo debidamente etiquetado. 3. Aada en el tubo una gota de la suspensin de eritrocitos preparada del 5%. 4. Mezcle bien el contenido del tubo. 5. Centrifugue por 1 minuto a 1500 R.P.M. 6. Re-suspenda suavemente el sedimento de eritrocitos y observe la aglutinacin macroscpica.

Hemolisinas:
1. Prepare una suspensin de eritrocitos al 5% con solucin salina de A y B. 2. Una muestra del grupo O Rh Positivo sin anticoagulante. 3. Se centrifuga a 3400 R.P.M. por 5 minutos. 4. Separar el suero y montar 2 tubos cada mesa, se etiqueta A y B. 5. Depositar 100 l de suero a A y B 6. Agregar 100 l de clulas A al tubo A y 100 l de clulas B al tubo B (mezclar bien). 7. Incubar 30 minutos a 37C o una hora y media (1 ). 8. Sacar de Bao Mara los tubos y centrifugar a 3400 .R.P.M. por un minuto. 9. Interpretar resultados.

Resultados:
Donador: Gustavo Alejandro Villalobos Snchez. Edad: 18 aos Sexo: Masculino Fecha: /10/2012

En placa

Directo (en tubo)

Inverso

B Rh positivo

B Rh positivo

B Rh positivo

Fuentes de Referencia:
http://es.scribd.com/doc/1028985/MANUAL-COMPLETO-DE-INMUNOHEMATOLOGIA www.quimicaclinicauv.blogspot.com http://www.buenastareas.com/ensayos/Grupo-Sangu%C3%ADneo/372306.html

VARIANTE DU
Fundamento:
Cerca de los sujetos de raza blanca tienen reduccin en la expresin del antgeno D, conocida como variante D dbil (DU). Se ha observado que la sustitucin de aminocidos en la variante D dbil se puede localizar en los segmentos de protena de transmembrana, la cual indica que los sujetos con fenotipo D dbil, si bien no todos, es debido a una alteracin cuantitativa de la protena Rh D.

Objetivo:
Determinar si los individuos identificarlos como Rh D negativos no poseen la variante D dbil (DU). Ya que esto puede producir anti-D de forma similar a la de los sujetos Rh D positivo la cual es una causa de hizo inmunizacin relacionada con la transfusin sangunea.

Generalidades:
Esta prueba se basa en la determinacin a la variante D dbil en la superficie de los eritrocitos mediante los reactivos de grupo sanguneo anti-D teniendo la necesidad de emplear anti-globulina humana (suero de Coombs) para optimizar la reaccin, ya que en estos individuos la cantidad de sitios antignicos es mucho menor que en los Rh positivos. En 1940, el Dr. Landsteiner descubri un grupo de antgenos que se denominaron factores Rhesus (factores Rh), porque fueron descubiertos durante unos experimentos con monos Rhesus. Las personas con factores Rhesus en su sangre se clasifican como Rh positivas; mientras que aquellas sin los factores se clasifican RH negativas. Las personas Rh negativas forman anticuerpos contra el factor Rh, si estn expuestas a sangre Rh positiva. Los antgenos del sistema Rh son de naturaleza proteica. El antgeno D posee la mayor capacidad antignica. Los genes responsables de este sistema se localizan en el cromosoma 1. Existen dos teoras sobre el control gentico: Teora de Fisher: Tres genes C, D, E (presentan antgeno D aquellas combinaciones que contengan el alelo D como por ejemplo cDe). Teora de Wiener: En determinados casos se expresa un antgeno D dbil Du (rh-). Bajo el termino Du se engloban todos los Ag D o Rh + dbiles. En el laboratorio la investigacin del Ag Du se lleva a cabo mediante una prueba de Coombs indirecta o bien mediante enzimas. Se aconseja la determinacin del Rh dbil en los siguientes casos: * En la mujer embarazada y el RN de madre Rh * En los centros de transfusin al determinar el Rh de los donantes

Esta reaccin puede hacerse visible aadiendo anti-globulina humana, despus de que se haya producido la reaccin Ag- Ac entre el Du de los hemates problema y el suero anti- D usado como reactivo.

Equipo:
Centrifuga Bao Mara

Material:
Gradilla Pipeta Pasteur con bulbo Tubo de ensaye

Material Biolgico:
Sangre con E.D.T.A. (O Rh Negativo)

Tcnica:
1. Marcar 2 tubos, 1 problema y 2 control. 2. Colocar en cada tubo 1 gota de la suspensin de eritrocitos al 5% 3. En el tubo problema agregar una gota de anti D 4. En el tubo control agregar una gota de albumina bobina al 22% 5. Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm. 6. Observar si no hay aglutinacin 7. Incubar 30 minutos a 37C 8. Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm. 9. Observar si presenta o no aglutinacin 10. Lavar 3 veces con solucin salina al 0.9% 11. Agregar 2 gotas de suero de Coombs (Anti-globulina humana). 12. Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm.

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13. Observar presencia o ausencia de aglutinacin. 14. Si no hay aglutinacin agregar 2 gotas de clulas sensibilizadas (clulas control de Coombs) 15. Centrifugar15 segundos a 3400 rpm. 16. Observar y anotar resultados

Interpretacin de Resultados:
Si al agregar el suero de Coombs no hay presencia de aglutinacin la variante D (DU) se reportara como negativa esta prueba queda validada tanto como en el resultado del tubo control como por las clulas sensibilizadas que al ser agregadas a ambos tubos se observara la presencia de aglutinacin corroborando un resultado negativo. Grupo: Rh: DU:

Resultados:
Donador: Jess Galicia Huerta Edad: 15 aos Sexo: Masculino Fecha: 22-10-2012

Detectar Variante DU
GRUPO O Rh Negativo DU Negativo

Fuentes de Referencia:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Determinacion-Variante-Du/3105283.html http://mesa8labd.blogspot.mx/ http://books.google.com.mx/books?id=T8FfLxZ6Py4C&pg=PA74&lpg=PA74&dq=tecnica+d e+la+variante+DU&source=bl&ots=ImZHPBTR6c&sig=aTDbvB65tnKlWRFBn7XMQa_6Z zg&hl=es-419&sa=X&ei=IFuXUOfJF8TdqAHroCICQ&ved=0CBwQ6AEwAA#v=onepage&q=tecnica%20de%20la%20variante%20DU&f =false

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DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA
Fundamento:
La hemoglobina de la sangre problema es transformada en cianometahemoglobina por la adicin de ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio (o de sodio). El ferrocianuro convierte al Hierro ferroso de la Hemoglobina en frrico para metahemoglobina, la cual se combina con el cianuro de potasio para formar la cianometahemoglobina estable. La densidad del color producido es proporcional a la cantidad de hemoglobina presente en la muestra

Objetivo:
Determinar la concentracin de hemoglobina, que contiene una muestra de sangre problema. Este examen mide la cantidad de hemoglobina en la sangre. Esto es usado para saber cuanto oxgeno est siendo cargado por sus glbulos rojos. Esto tambin es usado en el tratamiento de trastornos de glbulos rojos como anemia ferropnica.

Generalidades:
La hemoglobina es una heteroproteina de la sangre de masa molecular 64.000 (64 kDa), de color rojo caracterstico, que transporta el oxgeno desde los rganos respiratorios hasta los tejidos, en vertebrados y algunos invertebrados. La hemoglobina es una protena de estructura cuaternaria, que consta de cuatro subunidades. Su funcin principal es el transporte de oxgeno. Esta protena hace parte de la familia de las hemoproteinas, ya que posee un grupo hemo. La forman cuatro cadenas poli peptdicas (globinas) a cada una de las cuales se une un grupo hemo, cuyo tomo de hierro es capaz de unir de forma reversible una molcula de oxgeno. El grupo est formado por: 1. Unin de succinil- CoA ( formado en ciclo de Krebs o ciclo de acido ctrico) al aminocido glicina formando un grupo pirrol. 2. Cuatro grupos pirrol se unen formando la protoporfirina IX 3. La protoporfirina IX se une a un ion ferroso (Fe2+) formando el grupo hemo. La hemoglobina es una protena tetrmera, que consiste de cuatro cadenas poli peptdicas con estructuras primarias diferentes. La hemoglobina presente en los adultos (HbA) tiene dos cadenas de alfa y dos cadenas beta. La cadena alfa consiste de 141 aminocidos y una secuencia especfica, mientras que la cadena beta consiste de 146 aminocidos con una cadena diferente.

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Equipo:
Espectrofotmetros Cronometro

Material:
Gradilla Tubo de ensaye 13x75 Diluyente de drakin (solucin de cianometa) Pipetas de Thoma con boquilla Pipetas volumtricas de 5ml Solucin patrn de hemoglobina de 60 mg/dl Pipetas serolgicas de 5ml

Material Biolgico:
Sangre venosa con E.D.T.A

Tcnica:
1. En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin. 2. Obtener sangre venosa con anticoagulante (EDTA). 3. Con una pipeta automtica o pipeta de Thoma se toma exactamente 0,02 mL (20 L) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta. 4. La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. 5. Mezcle la solucin de Drabkin con la sangre por inversin y con mucha precaucin (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un veneno). 6. Dejar en reposo 10 minutos. Para que se efecte la reaccin. 7. Leer en absorbancia llevando a cero el fotmetro con agua destilada / Drabkin

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HEMOGLOBINA VALORES DE REFERENCIA

EDAD Recin nacido 1 mes a 2 aos 3 a 10 aos 11 a 60 aos 11 a 60 aos Mas de 60 aos SEXO F/M F/M F/M FEMENINO MASCULINO F/M VALORES 12.8 A 8.0 gr/dl 11.0 a 13.0 gr/dl 12.0 a 14.5 gr/dl 12.0 a 16.0 gr/dl 14.0 a 18.0 gr/dl 12.5 a 14.5 gr/dl

Resultados: Hemoglobina =
0.38 20.08 0.41

= 18.6

Fuentes de Referencia:
http://biometriahematica.blogspot.mx/2010/05/tecnicas-para-determinacion-de.html http://www.buenastareas.com/ensayos/Practica-Determinacion-DeHemoglobina/4394046.html http://aline-monserrat.blogspot.mx/2012/04/practica-7-determinacion-de-la.html

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DETERMINACIN DE HEMATOCRITO
Fundamento:
El hematocrito o volumen globular porcentual, mide el porcentaje del volumen total de sangre ocupado por glbulos rojos su determinacin se basa en la separacin de eritrocitos y el plasma mediante una centrifuga capas de empacar a los hemates en el menor volumen posible este ser llevado al 100% con el total de sangre por lo que el resultado se expresara como un porcentaje. El volumen del plasma que queda atrapado entre las clulas debe ser el menor posible para evitar mediciones errneas. Es obvio que el anticoagulante utilizando para realizar esta determinacin sea capaz de mantener inalterado el volumen eritrocitario.

Objetivo:
El alumno ser capaz de identificar la importancia y utilidad clnica de la determinacin de hematocrito. Ejecutar correctamente la determinacin de hematocrito usando macro y micro mtodo. Justificar las ventajas de ambos mtodos.

Generalidades:
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que est compuesta de glbulos rojos. Esta medicin depende del nmero de glbulos rojos y de su tamao. El resultado se expresa en porcentaje. El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguneo completo (hemograma). Para la realizacin de esta prueba, con el macromtodo, la sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano. Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil. Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las clulas, depositndose en el fondo y presentando un color rojo intenso. Para la realizacin del micromtodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este ltimo es el ms usado, por ser ms rpido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.

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Equipo:
Lector de hematocrito Centrifuga Microcentrifuga

Material:
Gradilla Mechero de Bonsen Tubos capilares Regla

Material Biolgico:
Sangre venosa con E.D.T.A.

Tcnica:
1. Mezclar la sangre por 5 minutos. 2. Llenar las 2 terceras partes (2/3) de un tubo capilar por el lado no marcado. 3. Sellar el extremo o puesto, esto se hace girando el tubo capilar en el fuego. 4. Centrifugar en la microcentrifuga de 5 a 8 minutos. 5. Se lee usando una regla.

Resultados:
La altura del volumen de eritrocitos y del volumen total de la muestra.
ltura de eritrocitos (mm) ltura del volumen total (mm)

Hematocrito:

100

Hematocrito:

2.3 mm 5 mm

100 = 46 %

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Valores de Referencia del Hematocrito

Edad Recin nacido 1 mes a 2 aos 3 a 10 aos 11 a 60 aos 11 a 60 aos Ms de 60 aos Sexo F/M F/M F/M FEMENINO MASCULINO F/M Valores (%) 44 a 26 33 a 37 37 a 45 36 a 48 42 a 54 37 a 45

Fuentes de Referencia:
http://aline-monserrat.blogspot.mx/2012/03/practica-3-determinacion-del.html http://stephanyrenaud.blogspot.mx/2012/03/practica-no3-determinacion-de.html

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CELULAS CONTROL DE COOMBS

Fundamento:
Obtencin de clulas mediante la centrifugacin y se usaran en caso de presencia de anticuerpos bloqueados o incompletos las clulas Coombs permitirn demostrar presencia de anticuerpos usando un segundo anticuerpo denominado antiglobulina.

Objetivo:
Obtener clulas control de coombs aprender y conocer el procedimiento que se realiza para preparar clulas control de coombs para poder emplearlas en pruebas posteriores.

Generalidades:
Las clulas control de Coombs y las clulas control de Coombs (fuerte) son clulas rojas humanas sensibilizadas con IgG Grupo O Rhesus D-positivo, que han sido sensibilizadas in vitro con diferentes cantidades de anticuerpos anti-D (IgG). Las clulas control de Coombs han sido preparadas para producir una aglutinacin menos fuerte en la presencia de reactivos activos de antiglobulina. Las clulas control de Coombs (fuerte) han sido preparadas para producir una fuerte aglutinacin en la presencia de reactivos activos de antiglobulina. Las clulas control de Coombs moderadamente sensibilizadas con IgG muestran una indicacin ms sensible y fiable de la neutralizacin (parcial) de los reactivos de antiglobulina. Las clulas control de Coombs son lavadas y re-suspendidas en un medio conservante especial y pueden ser aadidas directamente a los tubos de ensayo. De los sistemas serolgicos para demostrar la presencia de antgenoso anticuerpos de grupos sanguneos, la Prueba de Coombs o antiglobulina humana es considerada como la ms eficiente y de mayor valor en el Banco de Sangre.

Equipo:
Pipeta Automtica Bao Mara Centrifuga

Material
Tubo de ensaye Frasco Pipeta Pasteur con bulbo Papel Parafina

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Material Biolgico:
Sangre venosa con E.D.T.A.

Tcnica
1. Hacer un pool de eritrocitos grupo O y lavar 3 veces con solucin salina isotnica. 2. En un tubo de 13x100 mm agregar 200 l de reactivo de anti-D. 3. Agregar a este mismo tubo 800 l de solucin fisiolgica al 0.9 % 4. Tapar con parafina y mezclar por inversin 20 veces. 5. Agregar 1000 l de los eritrocitos previamente lavados. 6. Tapar con parafina y mezclar por inversin 20 veces. 7. Incubar durante 30 minutos a 37C. 8. Lavar 2 veces con solucin salina isotnica. 9. En un frasco poner 9.5 de solucin salina y 0.5 de eritrocitos sin remanente (sin excedente de anti-D). 10. Probar si funcionan las clulas agregando en un tubo una gota de estas con una gota de reactivo de Coombs y si aglutinan estn listas para su uso. Nota: Esta preparacin es efectiva durante 1 semana.

Resultados:

Fuentes de Referencia:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Celulas-Reactivas-Control-De-Coombs/3895060.html http://iso9001.inr.gob.mx/Descargas/iso/doc/MOP-SDP-06.pdf

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PRUEBAS CRUZADAS PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

Fundamento:
Se pone en contacto los Glbulos Rojos del donador y el suero del receptor, y los glbulos rojos del receptor con el suero del donador, en presencia del suero de Coombs.

Objetivo:
Es una prueba Inmuno-hematolgica cuyo principio es la hema-aglutinacin y su objetivo es evitar la destruccin eritrocitaria de un receptor.

Generalidades:
Las pruebas cruzadas 8pruebas de compatibilidad) son estudios practicados in-vitro empleando muestras de sangre del disponente y del receptor, para comprobar la existencia de afinidad reciproca entre clulas de uno y el suero de otro para efectos transfusionales. Hasta la actualidad la transfusin de eritrocitos es el uso teraputico de la sangre ms utilizados, la compatibilidad entre donador y receptor implica sin lugar a dudas al sistema ABO y Rh, aunque existen otros sistemas sanguneos que pueden intervenir en la compatibilidad del donador y el receptor de sangre y que tambin son detectados o puesto en manifiesto atraves de las pruebas de compatibilidad. As pues las pruebas pre-transfusionales no solo sirven para cuando se van a transfundir eritrocitos si no tambin para algunos otros componentes sanguneos como son: el plasma, frio precipitados y plaquetas. Aunque la transfusin sangunea se ha convertido en rutina en la prctica clnica, todava ocasiona peligros definidos, inmunitarios e infecciosos. La mayor parte de los riesgos puede evitarse mediante pruebas de ambas sangres, la del donador y la del receptor, antes de la transfusin. La transfusin sangunea puede complicarse por reaccin inmunolgica o por contaminacin de agentes infecciosos. Cuando se hacen pruebas cruzadas y seleccin de anticuerpos antes de la transfusin, es muy raro que se presenten reacciones de incompatibilidad de los eritrocitos. Las reacciones graves por lo general se deben a errores administrativos en el rotulado de los tubos de muestra o la identificacin correcta del paciente. La prueba cruzada de la sangre del donador con la del receptor puede constar de dos partes, conocidas como fase mayor y fase menor. La fase mayor recibe ese nombre porque permite descubrir en el suero del receptor los anticuerpos que suelen presentar la causa ms comn de las reacciones hemolticas graves o fatales ante las transfusiones. La reaccin a la transfusin suele ser leve, cuando se debe a incompatibilidad en la fase menor de la prueba cruzada

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Equipo:
Centrifuga Bao Mara

Material:
Gradilla Pipeta Pasteur con bulbo Tubo de ensaye Reactivos Solucin Salina Isotonica

Material Biolgico:
Sangre con E.D.T.A.

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Tcnica Colocar
Plasma o suero del receptor. Plasma o suero del donador. Glbulos Rojos al 5% del receptor. Glbulos Rojos al 5% del donador. 1 gota

Prueba Mayor Prueba Menor

2 gotas

Auto-testigo
2 gotas

2 gotas

1 gota

1 gota

Centrifugar a 3500 R.P.M. por 90 segundos. Albumina al 22 % 3 gotas 3 gotas 3 gotas

Centrifugar a 3500 R.P.M. por 90 segundos.

Incubar a 37C durante 30 a 60 minutos.

Centrifugar a 3500 R.P.M. por 90 segundos.

Lavar 3 veces con solucin salina isotnica al 0.9 % Suero de Coombs 2 gotas 2 gotas 2 gotas

Centrifugar a 3500 R.P.M. por 15 segundos. Clulas Control de Coombs. 1 gota 1 gota 1 gota

Centrifugar a 3500 R.P.M. por 90 segundos.

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Interpretacin de Resultados:
La existencia de aglutinacin en la prueba mayor nos indica la presencia de anticuerpos que aglutinan a los eritrocitos del donador, la existencia de aglutinacin en la prueba menor es indicativa de anticuerpos en el plasma del donador y que aglutinan a los antgenos del receptor. La existencia de aglutinacin en el tubo marcado (control) es indicativo de anticuerpos.

Resultados:
Donador: Tonatiuh Acosta Vega Receptor: Laura Elena Morales Jorge. Edad: 17 aos Sexo: Masculino

Edad: 17 aos

Sexo: Femenino

Interpretacin
Nombre
Tonatiuh

Grupo
O

Rh
Positivo

Resultado

COMPATIBLES Laura O Positivo

Fuentes de Referencia:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Pruebas-Cruzadas/1663890.html

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PRUEBA RAPIDA DE REAGINA (RPR - SIFILIS)

Fundamento:
La prueba de RPR es una prueba de floculacin no treponmica macroscpica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas, un anticuerpo anti-lipdico encontrado en el suero o plasma de personas con sfilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crnicas en otras condiciones aparte de la sfilis. El antgeno utilizado en el equipo es una modificacin del antgeno VDRL el cual contiene macropartculas de carbn para realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculacin con las partculas de carbn contenidas en la suspensin del antgeno, lo cual aparece como un acmulo negro. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris.

Objetivo:
Es una prueba de deteccin para sfilis, que busca anticuerpos presentes en la sangre de personas que tengan esta enfermedad.

Generalidades:
La sfilis es una enfermedad venrea causada por el Treponema pallidum, que invade las mucosas intactas o la piel en reas de abrasiones. El contacto sexual es la forma ms comn de transmisin. La deteccin y tratamiento de la enfermedad en sus estadios tempranos es fundamental a fin de evitar complicaciones graves como sfilis cardiovascular, neurosfilis y sfilis congnita. El diagnstico de esta enfermedad sufre la carencia de un mtodo para cultivar el microorganismo en medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la enfermedad en los que no se observan lesiones epidrmicas. Sin embargo, desde el comienzo de la infeccin aparecen en el suero del individuo infectado ciertas sustancias denominadas "reaginas", que reaccionan con antgenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clnicos son por lo tanto los procedimientos ms rpidos y tiles disponibles para diagnstico de sfilis.

Equipo:
Centrifuga

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Material
Gradilla Tubo de Ensaye Pipeta Pasteur con bulbo Aplicadores de Madera Placa (plstico) Reactivos

Material Biolgico
Sangre con E.D.T.A

Procedimiento:
1. Lleve a temperatura ambiente la suspensin del antgeno de RPR, los controles y las muestras. 2. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene presionado dicho extremo, coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para permitir que la pipeta aspire un poco de la muestra. 3. Sostenga en posicin vertical la pipeta/agitador directamente sobre un crculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta rea. 4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del crculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el mismo procedimiento para cada muestra. 5. Agite el frasco de la suspensin del antgeno antes de utilizarlo. Sostngalo en posicin vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de que el paso por la aguja es correcto. 6. Agite por 8 minutos a 100 R.P.M. en un rotador mecnico. 7. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agite breve y suavemente. 8. Lea macroscpicamente bajo una lmpara de luz intensa.

Interpretacin de resultados:
Reactivo: Presencia de Flculos grandes o pequeos en el centro o la periferia del circulo de prueba. Dbil reactivo: Presencia de Flculos pequeos pero definidos.

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No reactivo: Apariencia lisa, uniforme pero sin Flculos visibles.

Resultados:
Donador: Tonatiuh Acosta Vega Sexo: Masculino Edad: 17 aos Fecha: 16 de Noviembre del 2012

Determinacin de Sfilis (RPR)

NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://www.umm.edu/esp_ency/article/003533.htm http://www.wiener-lab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/6392_rpr_slide_test_sp.pdf

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BRUCELOSIS (ROSA DE BENGALA)

Fundamento:
La prueba se basa en la inhibicin-inactivacin de algunas aglutininas inespecficas a ph bajo. Es una prueba cualitativa muy sensible para detectar IgG1 y su positividad persiste por mucho tiempo. Los anticuerpos tienen la capacidad de unirse a 2 antgenos y estos a su vez se unen a varios anticuerpos, formando una malla entrelaza observable directa.

Objetivo:
Prueba de aglutinacin rpida en placa para la deteccin temprana de aglutininas especificas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis).

Generalidades:
La prueba del Rosa Bengala o prueba del antgeno tamponado de Brucella, es una tcnica rpida de aglutinacin en porta para la deteccin de anticuerpos anti-Brucella en sueros animales y 1-3 humano . La suspensin bacteriana es reactiva tanto con anticuerpos IgG como IgM, siendo los primeros detectados ms precozmente (infecciones sub-clnicas) y por un perodo ms largo de tiempo (fase crnica) que con el procedimiento convencional de tubo. La determinacin se efecta ensayando la suspensin tamponada (pH 3,6) de Brucella coloreada con Rosa Bengala frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de anticuerpos en las muestras ensayadas. Es una zoonosis que se transmite al hombre por contacto directo con animales infectados o con sus excretas, a travs de la piel en maniobras obsttricas en bovino, las secreciones fetales son muy contaminantes, y por ingestin de leche, queso fresco, carnes, verduras y agua contaminada; hay casos por inhalacin de polvo de excretas o lana; persona a persona es muy comn. La puerta de entrada es digestiva, respiratoria o cutnea, a travs de lesiones en la piel y mucosas. La producen la Brucella melitensis, B. abortus y B. suis. En Espaa, B melitensis es la responsable de la mayora de los casos de infeccin. Es la prueba ms empleada por permitir una aproximacin diagnstica inmediata. De especial utilidad en zonas no endmicas, en las que se realiza como mtodo de "despistaje". Utiliza como antgeno una suspensin bacteriana a la que se ha aadido el colorante rosa de bengala,

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enfrentndola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximacin diagnstica pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado correlacin con la seroaglutinacin y, por su simplicidad, es muy til como prueba despistaje inicial o screening. Sus falsos negativos se limitan a enfermos con procesos pocos das de evolucin y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

en de de de

Equipo:
Centrifuga

Material:
Placa para la prueba Pipeta Pasteur con Bulbo Controles positivo y negativo Aplicadores de madera Antgeno Rosa de Bengala

Material Biologico:
Sangre con E.D.T.A

Procedimiento:
1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero. 2. Utilizando la pipeta automtica adicione 30 l de la muestra del paciente en un circulo de la placa. 3. Mezcle suavemente el antgeno de Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogneo, despus coloque 30 l en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador, (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles. 4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. 5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado importante: Despus de este tiempo la lectura ya no es valida.

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Interpretacin de resultados:
No Aglutinacin: suero Negativo Cualquier cantidad de aglutinacin: Presencia de anticuerpos especficos. Suero Positivo.

Resultados:
Donador: Tonatiuh Acosta Vega Sexo: Masculino Edad: 17 aos Fecha: 16 de Noviembre del 2012

Determinacin de Brucelosis NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://www.cyrlab.com.mx/Portals/0/Insertos/Licon/antigeno-de-rosa-de-bengala.pdf http://es.wikipedia.org/wiki/Brucelosis_humana

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TINCION DE WRIGHT PARA DETERMINACIN DE Tripanosoma sangunis EN RANA

Fundamento:
El colorante utilizado es una solucin de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azur B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metlico. Dada la presencia de metanol en la composicin del colorante, no es necesario un paso previo de fijacin antes de la coloracin. Slo si se van a guardar las extensiones sin teir de un da para otro precederemos a su fijacin para evitar el deterioro del frotis.

Objetivo:
Bsqueda de Trypanosoma sangunis en rana atraves de un frotis de sangre de la rana, teida con el mtodo de Wright y observada a microscopio con la lente de 100 X.

Generalidades:
Los tripanosomas parsitos de animales eran conocidos desde 1841 a travs del trabajo de Gustav Valentin, profesor de la Universidad de Berna, que los encontr en truchas. En 1843, David Gruby describi por primera vez un tripanosoma descubierto en la sangre de ranas: el Trypanosoma sanguinis. Entretanto, fue solamente al final del siglo XIX que ese grupo de protozoarios fue asociado a enfermedades de animales domsticos y posteriormente al hombre.

Equipo:
Microscopio Puente para Tincin

Material
Guantes. Colorantes de Wright

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 Portaobjetos Aceite de Inmersin Jeringa .

Material Biolgico:
Sangre fresca de rana

Procedimiento:
1. Realizar un frotis sanguneo muy fino. Dejar secar al aire. 2. Sobre la extensin colocada horizontalmente en el puente de tincin verter eosina-azul de metileno. 3. Dejamos actuar 15 min. y lavamos con agua destilada.. Dejamos escurrir y secar en posicin vertical. 4. Mezclamos bien y cubrimos con esta dilucin la extensin. 5. Teimos durante 3-5 minutos y lavamos con agua del grifo. Dejamos escurrir y secar en posicin vertical.

Interpretacin de Resultados:
Depositamos una gota de aceite de inmersin y observamos con el objetivo de 100 x. Las clulas se observan coloreadas moradas.

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Resultados:

Donador: Tonatiuh Acosta Vega Sexo: Masculino

Edad: 17 aos Fecha: 16 de Noviembre del 2012

Determinacin de Trypanosoma sangunis NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://www.fiocruz.br/chagas_esp/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?sid=50 http://www.google.com.mx/imgres?q=Trypanosoma+sanguinis&num=10&hl=es419&tbo=d&biw=1024&bih=408&tbm=isch&tbnid=jfGgY6c5GIOTKM:&imgrefurl=http://w ww.edicionesmedicas.com.ar/layout/set/print/Actualidad/Ultimas_noticias/Avances_en_la_enf ermedad_del_sueno&docid=NrGCt5l834Tz_M&imgurl=http://www.edicionesmedicas.com.ar /var/edicionesmedicas_com_ar/storage/images/media/images/trypanosoma_brucei_www.flick r.com_photos_ajc1/30357-1-esl.html

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DETERMINACION DE CHAGAS EN SUERO

Fundamento:
El Cassette XERION Chagas Ab Combo es una prueba rpida Inmunocromatogrfica de flujo lateral para la deteccin cualitativa de anticuerpos IgG anti-Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en suero, plasma o sangre Total Est destinada a ser utilizada como una prueba de deteccin y como ayuda en el diagnstico de la infeccin por T. cruzi. Cualquier modelo reactivo con el Test Chagas Ab Combo Prueba Rpida deber ser confirmada con un mtodo de ensayo alternativo y los hallazgos clnicos.

Objetivo:
Determina la bsqueda de la enfermedad de Chagas producida por el parasito de Trypanosoma cruzi. Est diseado para la deteccin cualitativa rpida de anticuerpos t. cruzi en suero humano, plasma o sangre total. La prueba detecta sobre todo anticuerpos IgG los anticuerpos IgM pueden ser reactivos en caso de altas concentraciones.

Generalidades:
La enfermedad de Chagas es una infeccin zoontica transmitidas por un insecto protozoario Trypanosoma cruzi, que causa una infeccin sistmica de los seres humanos con manifestaciones agudas y secuelas a largo plazo. Se estima que el 16-18 millones de personas infectadas en el mundo, mueren aproximadamente 50.000 personas cada ao por la enfermedad de Chagas crnica (Organizacin Mundial de la Salud). Trypanosoma cruzi agente causante de la enfermedad de Chagas, es un protozoario flagelado que durante su ciclo de vida, utiliza dos hospederos: insectos de la familia Reduvidae, que hacen las veces de vector, y mamferos, incluyendo al ser humano, como reservorio. El examen de la capa leucocitaria y xeno diagnstico solan ser los mtodos comnmente empleados en el diagnstico de infeccin aguda por T. cruzi. Sin embargo, ambos mtodos llevan mucho tiempo y tienen poca sensibilidad. Recientemente, la prueba serolgica se convierte en un elemento fundamental en el diagnstico de la enfermedad de Chagas. El Cassette XERION Chagas Ab Combo es una prueba de anticuerpos IgG que detecta al instante los anticuerpos de la T. cruzi en 15 minutos sin ningn tipo de instrumento. Mediante la utilizacin de antgenos cruzi recombinantes

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Material:
Pipeta Pasteur con Bulbo Tubo de Ensaye Equipo de extraccin Reactivos

Procedimiento:
1. Deje la muestra, TEST y DIL alcanzar la temperatura ambiente antes de efectuar la prueba. 2. Extraiga TEST de su bolsa y etiqutelo para identificar al paciente. 3. Haciendo uso de pipetas desechables agregue 1 gota (25 l) de suero o plasma o 2 gotas (50 l) de sangre total en la ventana de muestra en la parte inferior de TEST. 4. Aadir 4 gotas (aprox. 150 ml) de [DIL] en la ventana de muestra. Evitar burbujas en la ventana de muestra al aadir lquidos. 5. Lea los resultados de l prueba a los 10-15 min. en un lugar bien iluminado. Las pruebas muy reactivas producirn una lnea de prueba ya despus de 10 minutos. Para muestras de baja reactividad puede ser necesario el tiempo de incubacin mas largo de 15 min. Sin embargo, no interprete las pruebas si transcurren ms de 15 minutos.

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Interpretacin de Resultados:
Negativo: Aparece nicamente una banda de color en la regin de control (C). No hay una banda visible en la regin de prueba (T) o sta es ms clara que la banda de control (C). El resultado negativo indica que no se detectaron Anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en la muestra. Positivo: Aparecen dos bandas de color, una en la regin control (C) y otra en la regin de prueba (T). La banda de prueba (T) es igual o ms oscura que la banda de control (C).

Resultados:
Donador: Mara Cristina Alemn Lpez. Sexo: Femenino Edad: 17 aos Fecha: 23 Noviembre - 2012

Determinacin de Chagas:
NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://www.bionity.com/en/companies/15671/human-gesellschaft-fuer-biochemica-unddiagnostica-mbh.html http://www.atgen.com.uy/uploads/File/en/Celquest%20CHAGAS%20002.pdf

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DETERMINACION DE HEPATITIS B
Fundamento:
La hepatitis es la inflamacin del hgado provocada por infeccin de un virus, y ms raramente por intoxicacin. El sntoma principal es la ictericia (coloracin amarilla de la piel). Como consecuencia de la inflamacin, se bloquea el paso de la bilis que produce el hgado al descomponer la grasa, y se altera la funcin del hgado. Cuando una persona contrae hepatitis, el hgado se inflama y deja de funcionar correctamente.

Objetivo:
La prueba rpida Insta Test HBsAg es un ensayo inmunocromatogrfico diseado para la determinacin cualitativa de Hepatitis B (HBsAg) en suero o plasma humano, se utiliza como auxiliar en el diagnostico de la Hepatitis B.

Generalidades:
El virus de la hepatitis B est en la sangre y en menor medida, la saliva, el semen y otros fluidos corporales de la persona infectada. Se contagia mediante el contacto directo con fluidos corporales infectados, generalmente a travs de un pinchazo de aguja o por contacto sexual. El virus de la hepatitis B no se contagia por contacto casual. La mayora de las personas que adquieren el virus de la hepatitis B se recupera sin consecuencias. Esta forma de infeccin, que dura menos de 6 meses, se conoce como hepatitis B aguda. Por el contrario, cuando la infeccin perdura por ms de 6 meses, se conoce como hepatitis B crnica. Aproximadamente el 5% de los adultos que adquieren la infeccin desarrollan la forma crnica. La probabilidad de desarrollar una hepatitis B crnica depende de la edad y del estado inmunitario (defensas) del sujeto, siendo mayor cuando se adquiere en la infancia que cuando se adquiere siendo adulto.

Equipo:
Centrifuga

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Material:
Pipeta Pasteur con Bulbo Cassette para Hepatitis B Cronometro

Material Biolgico:
Sangre con E.D.T.A. Plasma o Suero

Procedimiento:

1. Lea las instrucciones de recoleccin del espcimen. 2. El dispositivo de prueba, la muestra y controles debern estar a temperatura ambiente (18-30 C) antes de iniciar la prueba. 3. Saque el Cassette de su empaque, identifique cada dispositivo con los datos del paciente. 4. Agregue 120 l (4 gotas aproximadamente) de la muestra adjunta. 5. Esperar 10-20 min. y leer los resultados. Es importante que el fondo sea claro antes de leer cualquier resultado.

Interpretacin de Resultados:
Negativo: Si aparece nicamente una banda de color en la zona control (C), y no hay ninguna banda en la zona de prueba (T). Positivo: Adems de la banda control, en la zona de prueba deber aparecer un lnea coloreada. Invalido: La ausencia total de lneas en ambas zona so e una lnea solo en el rea de prueba, nos indican que hubo u error en el procedimiento o que los reactivos se han deteriorado.

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Resultado:
Donador: Carlos Alberto Ramrez Viveros. Sexo: Masculino Edad: 18 aos Fecha: 26 Noviembre - 2012

Determinacin de Hepatitis B (HBsAg)

NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://www.cdc.gov/hepatitis/HBV/PDFs/HepBSexualHealth_sp.pdf http://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2011/myl117-8b.pdf http://www.ejournal.unam.mx/rfm/no43-3/RFM43306.pdf http://www.health.ny.gov/es/diseases/communicable/hepatitis/hepatitis_b/docs/fact_sheet.pdf

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DETERMINACIN DE HEPATITIS C
Fundamento:
La hepatitis C es una enfermedad infectocontagiosa que afecta al hgado, producida por infeccin con el virus de la hepatitis C (VHC). La hepatitis produce inflamacin heptica, ocasionando que deje de funcionar correctamente. La hepatitis C se propaga por medio del contacto de sangre sin infectar, con sangre de una persona infectada (transmisin por va parenteral), normalmente no es una enfermedad de transmisin sexual ya que no se transmite a travs del semen como en el caso de la hepatitis B o el VIH-SIDA. Objetivo: One Step ANTI HCV es una prueba rpida directa para la deteccin visual de anticuerpos de Hepatitis C (ANTI HCV) en suero y ayuda en el diagnostico de la infeccin de la hepatitis. Esta prueba se basa en el principio Inmuno-ensayo de doble antgeno en sndwich para la determinacin de ANTI HCV en suero.

Generalidades:
El virus de la Hepatitis C pertenece a la familia de los ARN Flavivirus, con transmisin fundamentalmente parenteral, incluyendo especficamente agujas contaminadas por acupuntura, tatuajes y piercings. Tambin se puede transmitir a travs de las mucosas (va sexual, cepillos de dientes...) Una vez ocurrida la infeccin primaria, los anticuerpos frente al VHC (Anti-VHC) por Enzimoinmunoanlisis de segunda generacin (EIA 2) son detectables entre las 3 a 9 semanas posteriores (un 80% de pacientes infectados son detectados a las 4 semanas), aunque puede retrasarse ms en casos puntuales. Una vez presentes, los anti VHC quedan de por vida en el suero del paciente. Durante este perodo de ventana la deteccin de Anti-VHC ser negativa, por lo que la utilizacin de sta prueba en una muestra nica no descarta la infeccin. Toda prueba positiva debe ser comprobada por tcnica de confirmacin (RIBA o Immunoblot) preferiblemente en una nueva muestra. Durante este perodo si la paciente forma parte de un grupo de alto riesgo, o existe sospecha clnica fundada, puede estar indicada la prueba del ARN-VHC que aparece como positiva entre 1 y 3 semanas despus de la exposicin. Su principal incoveniente es por el momento, su precio. El grupo de pacientes con anti VHC se caracteriza por haber pasado

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la infeccin de un modo asintomtico, y por tener las transaminasas moderadamente altas, aunque en determinadas etapas pueden normalizarse. Los pacientes con VHC son siempre considerados como potencialmente infecciosos. No existe de momento vacuna ni gammaglobulina especfica. S hay tratamiento con interfern, cuya eficacia se monitoriza, entre otras pruebas, con la determinacin de la carga viral. La determinacin de anti-VHC se refiere de modo general a anticuerpos tipo IgG, ya que no se ha demostrado la utilidad de los anticuerpos de tipo IgM como marcadores precoces. Slo se consideran tiles como indicadores de recidivas en pacientes trasplantados o crnicos.

Equipo:
Centrifuga

Material:
Pipeta Pasteur con Bulbo Tubo de Ensaye Cassette para Hepatitis C Material Biolgico: Sangre Fresca con E.D.T.A. Suero o Plasma.

Procedimiento:
1. Cuando se realice la prueba. Abra la bolsa sellada romper por la ranura. Remueba la prueba de la bolsa. 2. Tome l (alrededor de 6 gotas) de muestra en la pipeta, y dispense sobre la regin de nuestra indicada en el Casserre. 3. Espere de 10-20 min. para leer los resultados.

Interpretacin de Resultados:
Negativo: Solo aparece una banda de color de la regin del control, No aparece ninguna banda en la regin de prueba.

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Positivo: Ademas de la banda rosa que aparece en la regin de control, se distingue una banda de color rosa en la regin de prueba. Invalida: Una total ausencia de color de ambas regiones indicada u error el el procedimiento y/o el reactivo a deteriorado.

Resultado:
Donador: Daniela Perez Vallejo Sexo: Femenino Edad: 17 aos Fecha: 26 Noviembre 2012

Determinacin de Hepatitis C (HCV) NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://es.wikipedia.org/wiki/Hepatitis_C www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000284.htm www.cdc.gov/hepatitis/HCV/PDFs/HepCGeneralFactSheet_sp.pdf www.cdc.gov/hepatitis/c/cfaq.htm

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DETERMINACION DE PALUDISMO
Fundamento:
La malaria (del italiano medieval mala aria, mal aire) o paludismo (latn palus, pantano) es una enfermedad producida por parsitos del gnero Plasmodium, y es probable que se haya transmitido al ser humano a travs de los gorilas occidentales. Es la primera enfermedad en importancia de entre las enfermedades debilitantes.

Objetivo:
Es determina si el donador tiene Paludismo o no mediante una prueba de Gota Gruesa que es solo un piquete pequeo en el dedo y sus primeras 2 gotas de sangre con el cual se hace un frotis y se examinara.

Generalidades:
El examen de un preparado de sangre en "gota gruesa" es el primer paso para el diagnstico. Si son vistos parsitos, se debe hacer un extendido para verificar la especie. La malaria es una enfermedad producida por un parasito llamado PLASMODIUM, el cual ingresa al cuerpo de una persona por medio de la picadura de un zancudo infectado. El parasito se desarrolla y se multiplica en la sangre de la persona, causndole los sntomas de la enfermedad. La malaria se presenta en zonas calientes, humedas y de baja altura. Las principales zonas de trasmisin de la malaria en colombia son: costa pacfica, choc, uraba, regin amaznica y Orinoqua.

Material:
Portaobjetos Lancetas Torundas Aceite de inmersin

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Material Biolgico:
Sangre con E.D.T.A

Procedimiento:
1. Seleccionar el sitio de puncin. 2. Romper la envoltura de la lanceta desechable y se descubre la punta de la misma. 3. Impregnar una torunda con alcohol y limpie perfectamente el sitio de la puncion, dejar secar al aire. 4. Picar el dedo en el sitio de eleccin con la punta de la lanceta por medio de un movimiento brusco, firme y seguro que le haga penetrar a travs de la piel 2 o 3 mm de profundidad. 5. Una vez pucionado el dedo se hace salir la primera gota de sangre la cual se limpia con algodn absorbente sin alcohol. 6. Se obtiene la segunda gota de sangre pequea. Se pone en contacto nicamente con la sangre no con la piel una de las caras de lamina. 7. Se coloca uno de los bordes menores de la lamina auxiliar formando un angulo de 45 8. Se aproxima la alamina auxiliar a la gota de sangre se extiende entre el borde de esta lamina y la cara de la primera. 9. Se desliza el borde la lamina auxiliar sobre la cara de la primera sin detener ni despegarlo. 10. Sobre la misma cara de la lamina donde se hizo el extendido se coloca una segunda gota de sangre mas grande que la primera en el punto medio de la otra mitad de la lamina. 11. Con el extremo del borde mayor de la lamina auxiliar se esparce la gota por medio de 2 o 3 movimientos. 12. Debe limpiarse con un algodn la lamina auxiliar.

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13. Se deja secar la preparacin colocando la lamina sobre la superficie horizontal para proteger la preparacin del polvo, viento, mosca, etc.

Resultados:
Donador: Laura Elena Morales Jorge Sexo: Femenino Edad: 17 aos Fecha: 30 Noviembre 2012

Determinacin de Paludismo NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://salud.edomexico.gob.mx/html/doctos/zoonosis/06%20Generalidades%20del%20Paludis mo.pdf http://biologikas.blogspot.mx/2009/01/qu-es-el-examen-de-gota-gruesa.html

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DETERMINACION DE VIH
Fundamentos:
Una vez que el VIH es introducido al cuerpo, el sistema inmunolgico comienza a producir anticuerpos (qumicos que forman parte del sistema inmunolgico que reconocen a invasores como bacterias e intentan combatir la infeccin). En el caso del VIH, estos anticuerpos no pueden combatir la infeccin, pero su presencia es utilizada para detectar si una persona tiene el VIH en su cuerpo. En otras palabras, la mayora de las pruebas para el VIH buscan los anticuerpos que combaten el VIH en lugar de buscar el VIH por si solo. Hay pruebas que buscan directamente el material gentico del VIH, pero estas no estn en uso generalizado. La prueba del VIH ms comn utiliza la sangre para detectar la infeccin del VIH. Las pruebas que utilizan saliva u orina estn tambin disponibles. Para obtener los resultados de algunas de las pruebas toma varios das, pero la prueba rpida del VIH le puede dar los resultados en solo 20 minutos. Todas las pruebas del VIH que resultan positivas deben ser seguidas por otra prueba para confirmar el resultado positivo. Los resultados de esta prueba confirmatoria pueden tomar algunos das o semanas.

Objetivo:
Poder determinar si el paciente tiene VIH por un mtodo de prueba rpida de sangre y asi poder darle o no tratamiento dependiendo del resultado.

Generalidades:
La Prueba de deteccin del VIH, desde el punto de vista del diagnstico molecular, consiste en una prueba como ELISA o Western blot, en el que se inmovilizan en el gel protenas especficas del virus (de la envuelta, la polimerasa, etc.), que interaccionarn con los anticuerpos que ha desarrollado un paciente enfermo que estn presentes en la sangre. Este complejo protena-anticuerpo es revelado mediante la adicin de un anticuerpo unido a una enzima que produce una reaccin colorimtrica. Esta prueba solo permite distinguir entre presencia o ausencia del virus (aunque, segn el prospecto del propio test, ni siquiera permite eso), pero no el grado de virulencia, para lo que hay que realizar pruebas de carga viral mediante tcnicas de PCR o RT-PCR que permitan cuantificar el n de copias del virus por ml, mediante una amplificacin especfica de zonas concretas de su genoma.

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Equipo:
Centrifuga

Material:
Pipeta Pasteur con Bulbo Tubo de ensaye Cassette de VIH

Material Biolgico:
Sangre Fresca con E.D.T.A Suero o Plasma

Procedimiento:
1. Se extrae una muestra sangunea del paciente 2. Se mete a centrifugar 3 min. a 3500 R.P.M. 3. Se separa el Plasma de la sangre y se deposita en un tubo de ensaye. 4. Se abre la envoltura donde viene el Cassette y su aplicador una asita. 5. Con la asita se toma un poco de plasma y se deposita en el rea de una ruedita y se espera alrededor de 15 a 20 minutos. 6. Se lee la muestra. Despus del tiempo establecido el resultado ya no es seguro.

Interpretacin de Resultados:
Positiva: Se marcara las 2 lneas. Negativa: Solo se marcara 1 lnea.

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Resultados:
Donador: Tonatiuh Acosta Vega. Sexo: Masculino Edad: 18 aos Fecha: 30 Noviembre 2012

Determinacin de VIH NEGATIVO ()

Fuentes de Referencia:
http://geosalud.com/sida/pruebavih2.htm http://www.positive.org/DiQueSi/pruebavih.html

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FLEBOTOMIA
Fundamentos:
La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar.

Objetivo:
El personal que ha de realizar la coleccin de la muestra sangunea, debe tener presente que en el trato correcto del paciente, su orientacin y la habilidad para realizar su trabajo, est la cara del Laboratorio Clnico ante la comunidad que ha de servir.

Generalidades:
Se llama sangra a varios procedimientos relacionados con la sangre, pero por lo general este trmino se atribuye a una modalidad de tratamiento mdico que consiste en la extraccin de sangre del paciente para el tratamiento de dolencias. Fue de uso muy comn hasta bien entrado el siglo XIX, a pesar de los riesgos y de carecer casi siempre de efecto curativo. Puede ser hecha de diversas maneras, incluyendo el corte de extremidades, uso de la flebotoma o la utilizacin de sanguijuelas. Consiste el primero en el procedimiento de extraccin de sangre desde una vena perifrica, travs de sistema estril con aguja, equipo y bolsa de colecta, semejante al procedimiento para la transfusin de sangre.

Material:
Bolsang Pelotita Torundas Camilla

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Procedimiento:
1. Se extrae la sangre de una vena (venopuncin), a menudo una vena de la parte interior del codo o la parte posterior de la mano. 2. Se limpia el sitio de la puncin con un antisptico y se coloca una banda elstica o un esfigmomanmetro alrededor del antebrazo para aplicar presin y limitar el flujo sanguneo a travs de la vena, lo cual hace que las venas debajo de la banda se dilaten (se llenen de sangre). 3. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermtico, en una jeringa o en otro lugar. Durante el procedimiento, a veces se retira la banda para restablecer la circulacin. 4. Una vez que se ha recolectado la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.

Fuentes de Referencia:
es.wikipedia.org/wiki/Sangra_(tratamiento_mdico) es.mimi.hu Medicina www.grupomoscaro.com/pdf/catalogo/FLEBOTOMIA.pdf

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