PROGRAMA DE PS GRADUAAO EM GESTO AMBIENTAL-UFES

Avaliao de Bioindicadores de Qualidade de guas

Prof. Servio Tulio Cassini Labsan - PPGEA-UFES Programa de Ps-Graduao em Engenharia Ambienta/UFES

Microbiologia de guas
Tipos e Usos das guas Legislao

Metodologias

Tubos Multiplos (NMP) Membrana Filtrante (MF) Substrato Cromogni o (SC)

Exemplo de Biomonitoramento de ambiente costeiro (Vitoria, E.S.)

%rincipais )ipos e *sos das guas

Abastecimento Domstico rriga!"o #ecreacional $%roduto &omercial 'an!amentos $#euso(

DOENAS DE VEICULAO HDRICA

Patgeno Aeromonas s&&

Pseudomonas

#nfe$o %gua #nfe$'es de feridas e do$e/marinha gastroenterites Campylobacter s&& Enteritis do$e/marinha Candida albicans (ermatites do$e/marinha Clostridium s&& )otu*ismo+ t,tano+ gangrena do$e/marinha gasosa+ gastroenterites Cryptosporidium s&& Gastroenterites do$e/marinha Escherichia coli OSH11 Gastroenterites do$e/marinha Giardia s&& Gastroenterites do$e/marinha Pseudomonas s&& (ermatite fo*i$u*ar+ otite do$e/marinha e-terna Salmonella s&& Febre ent,ri$a+ gastroenterite do$e/marinha Shigella s&& (isenteria ba$i*ar do$e/marinha Staphylococcus s&&. #nfeo de te$idos+ do$e/marinha ba$teremia Vibrio s&& /*era+ infe$'es de feridas estuarina/marinha Fonte: Efstratiou (2 !" Yersinia s&& Gastroenterites do$e/marinha

OS BIOINDICADORES

Indicam a POSSIBILIDADE de ocorrncia de pat !eno" na amo"tra Ocorrencia "im#$tanea com pat !eno" com a pre"en%a de &e'e" e"!oto" dome"tico" (#ito caro e tra)a$*o"o + ta$,e' impo""-,e$. a,a$iar diretamente /ODOS o" pat !eno" na" amo"tra" de 0!#a"1

Indicador Biol ico Ideal

Presen!e e" !odos os !i#os de $ ua %corr&ncia e desa#areci"en!o conco"i!an!e co" #a!o &nicos 'ensidade #o#ulacional dire!a"en!e relacionada co" o rau de con!a"ina()o *aior sobrevida +ue a dos #a!o &nicos

Aus&ncia e" $ ua #o!$vel F$cil de!ec()o e recu#era()o labora!orial ,)o #re-udicial . #essoas e ani"ais *ani#ula()o se ura

Bioindicadores Uti i!ados

/ / / / / / &oli+ormes totais &oli+ormes )ermotolerantes (+ecais) &oli+orme espec,+ico- !s "eri "ia oli Estreptococcus +ecais (!ntero o us) Pseudomonas aeruginosa o.os de /elmintos

0Colifor"es
/ Bacilos 0ram1negati.os n"o esporulados / Aer2bios ou Anaer2bios +acultati.os / 3ermentam a lactose com produ!"o de g4s (56 / a 78o& ou 55,8 o&) / Desen.ol.em col9nias .ermel/as com bril/o .erde met4lico (:5 / a 78o&) em meio Endo contendo 'actose / Apresentam ati.idade de B1galactosidase (en;ima <ue desdobra a lactose ou substratos an4logos tais como o =>%0 desen.ol.endo cor amarelada no meio)

Gru#o Colifor"e
/ Indicador referenciado na le isla()o / Al1" da E. coli inclui os &neros2
3 Klebsiella 3 Enterobacter 3 Citrobacter

Coliformes Ambientais

"o i#or$es Ter$oto erantes

/ 4I - colifor"es !er"o!oleran!es2 bac!1rias ra"ne a!ivas5 e" for"a de bacilos5 o6idase-ne a!ivas5 carac!eri7adas #ela a!ividade da en7i"a - alac!osidase. / Pode" crescer e" "eios con!endo a en!es !ensoa!ivos e fer"en!ar a lac!ose nas !e"#era!uras de 889 8:9C5 co" #rodu()o de $cido5 $s e alde;do. / Al1" de es!are" #resen!es e" fe7es <u"anas e de ani"ais <o"eo!1r"icos5 ocorre" e" solos5 #lan!as ou ou!ras "a!ri7es a"bien!ais +ue n)o !en<a" sido con!a"inados #or "a!erial fecal= / A>) 0AME>)E E E##==>EAME>)E DE>=M >ADAS &=' 3=#MES 3E&A S

O 2RUPO COLI3OR(E
Bac!1rias En!1ricas2 >Gra" ? ou -@ E62 Staphylococcus aureus5 Bacteroides fragilis5 e Enterococcus faecalis Enterobacteriaceae 2 >Gra" -@. G&neros2 E.coli, Shigella, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus

2r#po Co$i&orme4 co$i&orme" totai" e &ecai" +termoto$erante".

Ter"o!oleran!es2 E. coli, Klebsiella, Enterobacter e Citrobacter.

E. coli

E.coli

Res%$o& Entero'act(rias e "o i#or$es

Enterobact ria s
Coliformes Totais ou Ambientais Coliformes fecais Escherichia coli

Enterococc%s
#ioindi ador re$eren iado na legislao C%N&M& '()*'+++

Caractersticas: Cocos Gram (+) grupo Estreptococos fecais Intestino de Animais homeotermicos ---> polui o fecal > !olerancia a am"ientes marinhos

'egisla!"o ?ual. guas

/ &=>AMA :@A6B 78C DCA@7A:@@8
de lan!amento de e+luentes, e d4 outras pro.idFncias.

Nova Legisla o

DispEe sobre a classi+ica!"o dos corpos de 4gua e diretri;es ambientais para o seu en<uadramento, bem como estabelece as condi!Ees e padrEes

/ :C5A:@@@
DispEe sobre a <ualidade das 4guas, em rela!"o aos n,.eis estabelecidos para a balneabilidade, de +orma a assegurar as condi!Ees necess4rias G recrea!"o de contato prim4rioH

/ MS 7BAI@ 1111111J D5BIA:@@@

Especi+ica os re<uisitos de amostragem e analises de aguas de abastecimento pKblico

=MS DII7 #ecomenda!Ees

PADR5ES DE BALNEABILIDADE RESOLUO CONA(A 67896:::

/ategorias (9:P/! m*" E-$e*ente :uito )oa Satisfatria #m&r&ria !+2>.! 2+>.! 2+ .! 2>
? 2 2

Par<metro /= /F E. coli Entero$o$os

!

2+> .! >+ .! A+ .! >

? 2 2

>+ .! !+ .! 2+ .! !+ .!

? ? 2 2

@ >+ .! @ 2+>.! @ 2+ .! @ A+ .!

?5 ?5 ?5 25

0egenda: as 1guas na $ategorias e-$e*ente+ muito boa e satisfatria so assim $onsideradas em 2 3 ou mais de um $on4unto de amostras obtida em $in$o semanas+ no mesmo *o$a*. 5 6a*or obtido na 7*tima amostragem ! Padro da 0egis*ao /89A:A 2 /2;.

LE2ISLAO DE BALNEABILIDADE NO BRASIL E NO (UNDO

Pa-" USA EPA +mar. USA EPA +0!#a doce. Canad0 +0!#a doce. Canad0 +mar. Vene'#e$a +mandat rio. 3ran%a Bra"i$ +mar. Bra"i$ +0!#a doce. C1 3ecai" = = = >::: <::: 6:: 6<:: 6<::
m*.

E. coli >6? 6:: = 6:: 8:: <:: 6::: 6:::

Enterococo" ;< ;; = ;< = = = 8:: =

Fonte: Ada&tado de Efstratiou a&ud BC8/ US EPA (!DDD".

0egenda: n7mero de mi$rorganismos/!

Cuidados na cole!a
/ Col<er a a"os!ra e" reci#ien!e es!erili7ado / A!1 8A: da ca#acidade do frasco / B ua co" cloro2 C5D "l de !iossulfa!o a DCE / B ua bru!a +ue con!en<a "e!ais #esados2 C5F "l E'TA a D:E

(E/ODOLO2IAS (AIS U/ILI@ADAS PARA REALI@AO DOS /ES/ES (ICROBIOLA2ICOS

)ubos MKltiplos

Membrana 3iltrante

Substrato &romogFnico

Tubos *Gl!i#los >,*P@

(%rocedimento pA 8 ou D@ )ubos)
nocular tubos com &aldo 'auril )riptose

%resunti.o
04sA4cidoO%ositi.o )rans+ere pA &aldo Verde Bril/ante ncubar 56 L 3 /rsA78 0.5 N &

:5L: /rs M78 L @.8N &

Sem g4s A 4cidoO>egati.o ncubar mais :5 /r (56L7 /r total)

&on+irmati.o
04sO%ositi.o Sem g4sO>egati.o

04sA 4cido

Sem g4sO>egati.o

&ontinua com ensaio completo

Tubos Mltiplos - NMP

Fer"en!a()o Caldo Lauril Tri#!ose
Diagnstico: Coliforme positivo para 2 tubos

For"a()o de G$s

NMP: teste confirmativo

&on+irma!"o- 3ermenta!"o com &aldo Verde Bril/ante 'actose
? ?

G$s

*e!odolo ia da *e"brana Fil!ran!e >*F@

Su&ortes de fi*trao de &o*issu*fona+ 6idro e ao de AE mm manifo*d de PF/ e bomba 61$uo

"o$o #%nciona a $e$'rana #i trante

&aldo m1 Endo A &oli+ormes )otais

),picas (Bril/o met4lico) At,picas

Meio m-FC para detec o de Coliformes fecais

Metodo o)ia co$ S%'strato "ro$o)*nico + F %oro)*nico

// Baseia-se Baseia-se na na u!ili7a()o u!ili7a()o de de subs!ra!os subs!ra!os an$lo an$lo os os . . lac!ose lac!ose >> lico#iranos;deos@ lico#iranos;deos@ #rocessados #rocessados so"en!e so"en!e #or #or Escherichia Escherichia coli coli.. // E6e"#los2 E6e"#los2 %,PG2 %,PG2 %r!o %r!o ,i!rofenil ,i!rofenil alac!o#iranos;deo alac!o#iranos;deo e e *UG2 *UG2 *e!il*e!ilU"beliferone U"beliferone Galac!o#iranos;deo Galac!o#iranos;deo // Ferra"en!a Ferra"en!a #oderosa #oderosa #ara #ara inden!ifica()o inden!ifica()o de de Escherichia Escherichia coli coli >!es!e >!es!e confir"a!ivo@ confir"a!ivo@

Deteco Deteco de de Coliformes Coliformes em em Amostras Amostras De De guas guas

Detec!"o de !, oli em Agar >utriente com M*0

Teste P+A

Adio do meio com substrato amostra

Incuba o por 2 "esultados

h!

Incolor# Negativo$ Amarelo Coliforme total %$

Teste ,%antitati-o
'
Mesmas placas amarelas submetidas a luz ultra-violeta (UV)

"esultado A&ul Ecoli )e *-+ e amarelo C! Total

Negativo amarelo e positivo a&ul anomalo *impossvel+ Tabelas de NM.

"esultados em numeros/'00 ml

Pro"eto #absan-$AC%& C '(((-'(()

Resultados de Biomonitoramento da Praia de Camburi Vitoria - !

Bioindicadcadores U!ili7ados
Coliformes Totais Coliformes Fecais E. Coli Enterococus Candida ( e!edura" ##$ areia

(A/ERIAL B (C/ODOS4
DREA DE ES/UDO4 PRAIA DE CA(BURI9 VI/ARIA9ES1

!+ !A e !) 2+ 2A e 2) D+ DA

Fonte: GGG.&m6.es.go6

(E/ODOLO2IAS
An0$i"e" )acterio$ !ica" "e!#ndo APHA +>EE<.4 C3 meio A>F C/ e E.coli Co$i$ertGF Enterococo" Entero$ertGF Candida meio BI22H1

An0$i"e de Candida com (3

Carte$a" do te"te Co$i$ert

:,dias Geom,tri$as dos )ioindi$adores /o*iformes =otais /o*iformes Fe$ais

9:P /=/! m* ou ! g de areia se$a

!+EH ? !+EH 2 !+EH ! !+EH ! !A !) 2 2A Pontos de /o*eta 2) D DA

9:P /F /! m* ou ! g de areia se$a

!+EH ; !+EH > !+EH A

Fero

8utono

#n6erno

Prima6era

!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH

Fero ; > A ? 2 ! !

8utono

#n6erno

Prima6era

!A !) 2 2A Pontos de /o*eta

2)

DA

E.coli
9:P Entero$o$os /! m* ou! g de areia se$a

Entero$o$os
#n6erno Prima6era

Fero
!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH 9:P E. coli /! m* ou ! g de areia se$a ; > A ? 2 ! !

8utono

Fero
!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH ; > A ? 2 ! !

8utono

#n6erno

Prima6era

!A

!) 2 2A Pontos de /o*eta

2)

DA

!A

!) 2 2A 2) Pontos de /o*eta

DA

Entero$o$os/Fero
Sem. !
9:P Entero$o$os/! m* ou ! g de areia se$a

Entero$o$os/8utono
Sem. > :,dia Sem. !
9:P Entero$o$os/! m* ou ! g de areia se$a

Sem. 2
!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH ; > A ? 2 ! !

Sem. ?

Sem. A

Sem. 2
!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH ; > A ? 2 ! !

Sem. ?

Sem. A

Sem. >

:,dia

!A

!) 2 2A 2) Pontos de /o*eta

DA

!A

!) 2 2A 2) Pontos de /o*eta

DA

Entero$o$os/#n6erno
Sem. !
9:P Entero$o$os/! m* ou ! g de areia se$a

Entero$o$os/Prima6era
:,dia

Sem. 2
; > A ? 2 ! !

Sem. ?

Sem. A

Sem. >

Sem. !
9:P Entero$o$os/! m* ou ! g de areia se$a !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH

Sem. 2
; > A ? 2 ! !

Sem. ?

Sem. A

Sem. >

:,dia

!+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH !+EH

!A

!) 2 2A 2) Pontos de /o*eta

DA

!A

!) 2 2A 2) Pontos de /o*eta

DA

/8:PAKAMN8 E9=KE #9(#/A(8KES

%ontos D DA DB : :A :B I IA % % % % % % % % S% S% S% S% S% S% S% S% % % % % % % &oli+ormes )otais V = % S % % % % % % % % MB % % % % &oli+ormes 3ecais V = % S S % % % % % % % % S % % S % % S % % S% S% S% S% S% S% V S% S% !, oli = S S% S% S% S% % E S% S% E S% S% S% S% S% S% S% S% S% S% Enterococos V = % S% S% S% S% S% S% S% S%

Amostragens rea*iIadas na &raia de /amburi durante as esta'es do ano em $in$o semanas $onse$uti6as+ $*assifi$ao Juanto as $ategorias de &r&ria (na 1gua: E-$e*ente+ :uito )oa e Satisfatria" e im&ro&ria &ara 1gua e areia de a$ordo $om a Keso*uo /89A:A e 0imite Pro&osto em Portuga* res&e$ti6amente. 0egenda: V(6ero"+ O (outono"+ I (in6erno"+ P (&rima6era"L I (im&r&rio"+ P (&r&rio"+ E (e-$e*ente"+ S (satisfatrio"+ (B (muito boa"

&andida %onto DA DB :A :B IA = D D % D 8 D % % % 8 % 7 : % D 5

Amostragens na &raia de /amburi durante as esta'es do ano+ em $in$o semanas de monitoramento &ara a *e6edura do gOnero Candida de a$ordo $om o 0imite Pro&osto em Portuga*. 0egenda: O (outono"+ I (in6erno"+ P (&rima6era"+ P (&r&rio". 8s n7meros re&resentam a freJuen$ia em Jue o &onto amostrado fi$ou im&r&rio em $ada estao do ano.

A radeci"en!os2
/ UFES >CT-'HS@ / Labora!rio de Sanea"en!o CT'HS / *icrobiolo is!as 0!i#o colifor"es / e... Sua #aci&ncia / *. %bri ado