EMOGLOBINA E MIOGLOBINA

Emoglobina e Mioglobina sono proteine globulari in grado di legare lossigeno molecolare. Queste due proteine si differenziano tra loro per le funzioni e per le caratteristiche chimico-fisiche che mostrano nei confronti dellO2 che le differenziano significativamente.

Lemoglobina (Hb) una proteina in grado di legare molecole di O2 (quattro in tutto) a livello polmonare e di trasportarla nel sangue fino ai tessuti ed alle cellule che si trovano ad immediato contatto del letto capillare del sistema vascolare. Al contrario in grado di trasportare dai tessuti ed organi periferici fino ai polmoni, CO2 e protoni (H+)

La mioglobina (Mb) una proteina capace di legare o liberare O2 a seconda della sua concentrazione nel citoplasma delle cellule muscolari; essa presenta una catena polipeptidica ed un sito di legame per lossigeno, al contrario dellemoglobina, costituita da quattro catene globiniche, contenente ognuna un sito di legame per lO2 ed a due a due uguali.

Lemoglobina HbA1 la forma maggiormente rappresentata nelluomo (circa il 98%) ed costituita da due catene globiniche , di 141 residui aminoacidici ciascuno e due costituite da 146 residui. E anche presente lHbA2 (circa il 3%) in cui le due catene sono sostituite da due catene .

Emoglobine umane e loro subunit Fonte principale Simbolo Subunit Adulto Hb A1 2 2 Adulto HbA2 22 Fetale HbF 22 Embrionale HbGower-2 22 (stato fetale precoce)

Sia le quattro catene globiniche dellemoglobina che quelle della mioglobina contengono un gruppo prostetico in grado di legare una molecola di O2 (gruppo Eme).

Leme ha una struttura porfirinica contenente un atomo di ferro centrale. Questa porfirina (protoporfirina IX) contiene otto catene laterali e pi precisamente.

O - due residui di acido propionico X - quattro gruppi metilici legati agli anelli pirrolici + - due gruppi vinilici

Latomo di ferro presente nelleme presenta un numero di ossidazione 2+ ed in grado di formare 5 o 6 legami di coordinazione. Quattro legami di coordinazione sono formati con i quattro atomi di azoto degli anelli pirrolici della protoporfirina e giacciono sullo stesso piano degli anelli pirrolici quando lHb ossigenata, mentre quando lO2 assente il ferro si trova ad una distanza dal piano di 0.6 . Il quinto legame di coordinazione lo ione Fe2+ lo forma con un atomo di azoto presente nellanello imidazolico di un residuo di istidina (istidina distale F8) della catena polipeptidica.

Il sesto legame pu essere libero o impegnare il ferro con la molecola di ossigeno. Questi due ultimi legami sono perpendicolari al piano dellanello tetrapirrolico delleme. Quando lossigeno legato allo ione Fe2+ si verr a trovare in prossimit dellanello imidazolico di un secondo residuo di istidina della catena polipeptidica (istidina distale E7).

Quando leme non legato a proteine, la reazione dellossigeno con uno dei due siti di coordinazione del ferro (perpendicolari al piano dellanello porfirinico) genera lossidazione irreversibile del Fe2+ a Fe3+. Quando leme inserito in una proteina, questa reazione non avviene in quanto il gruppo eme immerso in profondit nella struttura proteica laccessibilit ai siti di coordinazione limitata. Limportanza dellimpedimento sterico presentato dallambiente in cui si trova il sito di legame delleme, sia nellemoglobina che nella mioglobina, dimostrata dallaffinit di queste due proteine per il monossido di carbonio, che compete con lossigeno per tale sito. In soluzione acquosa laffinit del monossido di carbonio per leme libero circa 25.000 volte maggiore di quella dellossigeno, mentre laffinit del CO nei confronti delleme legato alla proteina solo 250 volte superiore a quella dellossigeno. Questo a causa dellimpedimento sterico determinato dallistidina E7 (Figura (b), che causa uninclinazione nella conformazione del complesso globina-

CO con conseguente riduzione dellaffinit di legame. Anche il monossido di azoto (nitric oxide) (NO), si pu coordinare al ferro delleme con una affinit anche in questo caso superiore a quella dellossigeno.

Quando si lega lossigeno, le propriet elettroniche del ferro si modificano; ci spiega il diverso colore che ha il sangue venoso povero di ossigeno (rosso scuro) rispetto al sangue arterioso ricco di ossigeno (rosso brillante). Il gruppo eme si trova alloggiato allinterno di una tasca idrofobica formata dal ripiegamento di ciascuna catena polipeptidica allinterno del quale le catene laterali di circa 18 aminoiacidi stabiliscono allincirca ottanta interazioni non covalenti con gli atomi di carbonio delleme. Le due catene di acido propionico sono invece stabilizzate dalla interazione con la catena laterale priva di carica di un residuo di istidina e con molecole dacqua, entrambe presenti sulla superficie esterna dellamolecola. La diffrazione ai raggi X ha mostrato che le catene globiniche dellemoglobina cosi come quelle della mioglobina si presentano costituite da numerose regioni ad -elica interrotte per la presenza di residui di prolina, che permettono il ripiegamento della catena a cui si accompagna spesso una inversione della direzione della stessa catena. Questo tipo di andamento fa assumere a queste catene globiniche una struttura grossolanamente sferoidale. Le catene a sono caratterizzate da sette zone ad -elica, mentre le da otto. Lo studio delle sequenze aminoacidiche delle catene globiniche di diverse specie animali ha evidenziato una notevole variabilit anche se la variazione nella composizione aminoacidici tale da permettere sempre le interazioni apolari ed a idrogeno con i residui che si trovano sulla superficie delle altre unit globiniche.

Si assiste, invece, alla costante presenza dei due residui di istidina prossimale e distale e degli altri residui presenti nella tasca idrofobica, dove si posizione leme, necessari per la stabilizzazione del gruppo prostetico con la proteina. Questo permette alle catene globiniche di conservare una struttura secondaria e terziaria simile, anche se piccole variazioni in punti specifici della loro struttura comportano delle differenze significative nelle propriet delle catene come ad esempio avviene tra le catene , , , .

Esiste una notevole somiglianza tra la struttura della catena globinica della mioglobina (A) e la subunit dellemoglobina (B). Queste, infatti, si differenziano soltanto per la disposizione del residuo carbossilico e amminico terminale. Il posizionamento verso lesterno di tali gruppi, nella catena dellemoglobina permetter linterazione tra le due catene beta.

La funzione fisiologica della mioglobina e della emoglobina dipende dalla reversibilit del legame fra ossigeno e gruppo eme, processo il cui andamento descritto dalle curve di saturazione con lO2.

Figura: Rappresentazione in grafico del legame di un ligando. La frazione di siti di legame occupata dal ligando, , messa in grafico in funzione della concentrazione di ligando libero. Entrambe le curve sono iperboli rettangolari. (a) Una curva di legame ipotetica del ligando L. La [L] a cui met dei siti totali sono occupati corrisponde a 1/Ka, oppure a Kd,. La curva ha un asintoto orizzontale quando = 1 e un asintoto verticale (non mostrato) quando [L] = l/Ka. (b) Curva di legame dell'ossigeno alla mioglobina: la pressione parziale di ossigeno presente nell'aria in contatto con la soluzione espressa in kilopascal (kPa). L'ossigeno si lega saldamente alla mioglobina con una P50 di soli 2,6 kPa.

In genere, il legame reversibile di un ligando (L) a una proteina (P) pu essere descritto dall'espressione all'equilibrio: P+L PL

La costante di equilibrio, Ka, di questa reazione [PL] Ka = [P] [L] (1)

II termine Ka la costante di associazione (da non confondere con la Ka che indica la costante di dissociazione di un acido). La costante di associazione una misura dell'affinit del ligando L per la proteina P. Ka ha come unit M-l; un valore di Ka elevato corrisponde a un'elevata affinit del ligando per la proteina. Un riarrangiamento dell'equazione 1 mostra che il rapporto tra proteina con il ligando legato e proteina libera direttamente proporzionale alla concentrazione del ligando libero: [PL] Ka [L] = [P] (2)

Quando la concentrazione del ligando molto pi alta della concentrazione dei suoi siti di legame sulla proteina, il legame del ligando alla proteina non modifica in modo apprezzabile la concentrazione del ligando libero (non legato), cio [L] resta costante. Questa condizione applicabile a molti ligandi che si associano a proteine nelle cellule e semplifica la nostra descrizione dell'equilibrio di legame. Consideriamo l'equilibrio di legame mettendo in rapporto i siti di legame occupati con i siti di legame presenti nella proteina, (theta): siti di legame occupati = totale dei siti di legame [PL] = (3) [PL] + [P]

Sostituendo il termine Ka [L][P] a [PL] (Equaz. 2) e riarrangiando i termini, si ha

Ka [L][P] = = Ka [L][P] + [P]

Ka [L] [PL] [L] = (4) Ka [L] + l [L] + 1/Ka

II termine Ka pu essere determinato dal grafico di in funzione della concentrazione del ligando libero [L] (Figura). Qualsiasi equazione nella forma di x = y (y + z) descrive un'iperbole e quindi una funzione iperbolica di [L]. La frazione di siti che legano il ligando occupata tende ad arrivare asintoticamente a saturazione quando [L] aumenta. Il valore di [L] a cui met dei siti di legame sono occupati dalligando (a =

0,5) corrisponde a l/Ka. Qualche volta intuitivamente pi semplice considerare la costante di dissociazione, Kd, cio il reciproco di Ka (Kd = 1/Ka) , espressa in unit di concentrazione molare (M). Kd la costante di equilibrio della reazione di rilascio del ligando. [L] [PL] Kd = (5) [PL] [P] [L] [PL] = (6) Kd [L] = (7) [L] + Kd Quando [L] uguale a kd met dei siti di legame sono occupati dal ligando. Quando [L] minore di Kd, la quantit di ligando legata alla proteina piccola. Perch il 90% dei siti di legame siano occupati, il valore di [L] deve essere nove volte pi alto di quello di Kd. In pratica, il termine Kd viene usato molto pi spesso di Ka per esprimere l'affinit di una proteina per il suo ligando. Notate che un valore molto basso di Kd corrisponde a un'elevata affinit della proteina per il ligando.

La matematica pu ridurre questo concetto a una semplice asserzione:

Kd corrisponde alla concentrazione di ligando a cui met dei siti di legame disponibili sono occupati dal ligando. A questo punto la proteina ha raggiunto met della saturazione rispetto ai siti di legame. Quanto pi saldamente la proteina lega il ligando, tanto pi bassa la concentrazione di ligando necessaria a occupare met dei siti di legame e minore il valore di Kd. Il legame dell'ossigeno alla mioglobina ha un andamento simile a quello discusso prima; essendo l'ossigeno un gas, bisogna effettuare alcune variazioni nell'equazione. Dobbiamo semplicemente sostituire la concentrazione di ossigeno disciolta a [L] nell'Equazione 7: [O2] = (8) [O2] + Kd

Come accade per ogni ligando, Kd corrisponde alla [O2] a cui met dei siti disponibili sono

occupati e quindi uguale a [O2]0,5. L'Equazione 8 diventa: [O2] = (9) [O2] + [O2]0,5

La concentrazione di una sostanza volatile in una soluzione sempre proporzionale alla sua pressione parziale nella fase gassosa in equilibrio con la soluzione. Negli esperimenti in cui viene usato ossigeno come ligando, la pressione parziale di questo gas, pO2, che viene variata, in quanto molto pi facile misurare quest'ultima che non la concentrazione del gas disciolta nella soluzione. Se definiamo la pressione parziale di ossigeno [O2]0,5 come P50, sostituendo nell'Equazione 9 otteniamo pO2 = (9) pO2 + P50 Nel caso in cui una proteina leghi pi di una molecola di ligando come nel caso dellemoglobina Lequazione (9) diventer: [pO2]n = (10) P50 + [pO2]n

Questa equazione rappresenta la forma non linearizzata della equazione di Hill ed n rappresenta

il coefficiente di Hill. Se il valore di n risulta diverso da 1, la proteina legante o lenzima presenter fenomeni cooperativi.. In particolare per n<1 saranno presenti fenomeni cooperativi negativi, mentre per n>1 la proteina presenter fenomeni cooperativi positivi. Non essendo possibile calcolare dallequazione (10), se non con lausilio di un calcolatore, il valore di n viene utilizzato la sua forma linearizzata.

Forma linearizzata dellequazione di Hill

Keq

[Hb]+nO2

Hb(O2)n

vf= K1[Hb(O2)n] (1); vr=K-1[Hb]*[O2]n (2) [Hb] = [Hbt]-[Hb(O2)n] (3) quando [Hbt] = [Hb(O2)n] tutta lemoglobina sar saturata ed avremo che: vf= K1[Hb(O2)n] sar uguale a Vmax = K1[Hbt] ponendo Vmax (100% di saturazione) uguale ad 1 avremo: 1 = K1[Hbt] (4) se moltiplichiamo tutti i membri delleq. (3) per K1 otteremo: K1 [Hb] = K1 [Hbt] - K1 [Hb(O2)n] (5) e sostituendo i termini comuni con la (1) e al (2) otterremo: K1 [Hb] = Vmax-v ovvero: dividiamo ambo i membri per leq. (1) K1 [Hb] 1-y = (10) K1[Hb(O2)n] v Se applichiamo la legge di azione di massa allequilibrio di saturazione dellHb avremo: [Hb] [O2]n Keq = [Hb(O2)n] riarrangiando leq. precedente questa diventer: K1 [Hb] = 1-y

[Hb] Keq = [Hb(O2)n] [O2]n sostituendo nella (10) e facendo il reciproco otterremo: y [pO2]n v [O2]n = ovvero = 1-y Keq 1-y P50 questa espressa in forma logaritmica diventer: y Log = nLog [pO2]n Log P50 1-y

La presenza nellemoglobina di quattro subunit non differenzia questa proteina dalla

mioglobina soltanto per il numero di molecole di O2 legate ma anche per la presenza di fenomeni cooperativi positivi. Tutto ci comporter che il legarsi della prima molecola di O2 alla emoglobina render pi semplice il legarsi delle successive alle altre subunit dellHb, cosi come il distacco della prima molecola di O2 comporter un aumento nella velocit di rilascio delle successive. La presenza di fenomeni cooperativi ha un preciso significato e svolge un ruolo significativo nel regolare lattivit nh 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 Rx 6560 1520 533 243 132 81,0 Osservazioni metabolica della proteina. Infatti, come mostrato in tabella, dalla Cooperativit negativa da substrato Assenza di cooperativit valutazione dellindice di

cooperativit (Rx) si evince come una variazione di 4,8 volte la pO2 sia in grado di far passare lo stato di saturazione dellHb dal 10% al 90% mentre per la Mb (coeff. di Hill 1) sia necessario un incremento di 81 volte.

1,5 2,0 2,8 3,5 6,0 10,0 20,0

18,7 9,0 4,8 3,5 2,1 1,6 1,3 Cooperativit positiva da substrato

Da quanto detto si evince come la velocit di saturazione e di

desaturazione sia accelerata dalla presenza di fenomeni di cooperativit positiva. Al contrario, fenomeni di

cooperativit negativa decrementano la velocit di saturazione allaumentare della concentrazione del ligando.

Il legarsi dellossigeno allemoglobina regolato non solo dalla cooperativit, ma anche da

interazioni allosteriche (dal greco allos, altro; steros, spazio). Si tratta di interazioni che hanno luogo quando una particolare molecola, di piccole dimenzioni, si unisce a una proteina, modulandone lattivit. Tali molecole sono chiamate effettori allosterici e possono essere classificate come attivatori o come inibitori, a seconda della loro influenza sulla funzionalit della proteina a cui si legano. La proteina la cui attivit modulata da un effettore allosterico viene definita proteina allosterica. Leffettore allosterico non deve essere considerato come un interruttore che accende o spegne lattivit della proteina ma piuttosto come un potenziometro in grado di regolarne lattivit. Verranno ora presi in esame due modelli per le interazioni allosteriche: un modello concertato (Monod-Wyman-Changeux) e uno sequenziale (Koshland, Nmethy e Filmer). In seguito si cercher di chiarire la base molecolare delle interazioni allosteriche che regolano il legarsi dellossigeno alle quattro subunit dellemoglobina.

Un modello concertato dellinterazione allosterica: il modello di Monod-WymanChangeux

L'emoglobina un tipico esempio di proteina allosterici; pertanto, ogni teoria proposta per spiegare il comportamento delle proteine allosteriche deve essere applicabile anche ad essa. Negli anni sessanta, J. Monod, J. Wyman e J.P. Changeux hanno presentato un modello di cinetica enzimatica che riusciva a spiegare la curva di saturazione con l'ossigeno dell'emoglobina e di altre proteine oligomere con caratteristiche analoghe per quanta riguarda il legame del ligando. Questo modello si basa sulle seguenti ipotesi: 1. Le proteine allosteriche sono oligomeri Ie cui subunita occupano posizioni equivalenti nella struttura. 2. Ogni subunit possiede uno specifico sito di legame per ciascuno dei possibili ligandi. Poich le subunit occupano posizioni equivalenti, i ligandi occupano anch'essi posizioni equivalenti. 3. Ciascuna subunit e limitata nella sua conformazione dal fatto di essere associata alle altre subunit dell'oligomero. 4. L'oligomero puo esistere in due diverse conformazioni: uno stato teso, o rigido, T, che ha un'affinit minore per il substrato, e uno stato rilassato, R. I due stati T e R sono in una situazione di equilibrio, regolata dalla costante allosterica L:
L

T; L = T/R

La figura mostra l'effetto di differenti valori di L sulla frazione di saturazione (Y) di una proteina allosterica con il suo ligando primario.

Un inibitore allosterico sposta l'equilibrio tra le conformazioni R e T verso la forma T, facendo cosi aumentare il valore di L. Un attivatore allosterico, al contrario, sposta l'equilibrio verso la conformazione R, facendo diminuire L e aumentare la frazione di saturazione della proteina per una data concentrazione di ligando. 5. Quando un ligando si unisce allo stato T, ha luogo un cambiamento conformazionale concertato che provoca il passaggio allo stato R. Questo cambiamento conformazionale, a volte detto anche transizione allosterica, coinvolge tutte le subunit della proteina. Cio, il modello di Monod-Wyman-Changeux ipotizza che non siano possibili conformazioni intermedie in cui alcune subunit siano R e altre T (figura), ed per questo che esso viene anche chiamato modello concertato per le proteine allosteriche.

Il ligando primario di una proteina allosterica (per l'emoglobina, l'ossigeno) pu unirsi all'una o all'altra delle due conformazioni T e R. Il modello di Monod-Wyman-Changeux ipotizza che l'affinit di una subunit per un certo ligando dipenda solo dalla particolare conformazione di quella subunit e non dall'eventuale occupazione dei siti di legame nelle altre subunit. Di conseguenza, sono necessarie solo due costanti di dissociazione per specificare l'interazione tra un ligando e una proteina allosterica: una costante, KT relativa alla dissociazione dei ligandi (S) dallo state T, e una costante, KR, relativa alla dissociazione dei ligandi S dallo stato R:

Nel caso dell'emoglobina le due costanti di dissociazione sono molto diverse: l'ossigeno si lega, infatti, in modo preferenziale alla conformazione R. Analogamente, in quasi tutte le proteine allosteriche, una delle due conformazioni ha unaffinit per il ligando primario superiore a quella dell'altra conformazione.

Il modello sequenziale dell'interazione allosterica ipotizza l'esistenza di conformazioni intermedie

II modello concertato piuttosto restrittivo poich consente solo due stati conformazionali per ogni proteina. Questa limitazione non esiste in un modello alternativo, proposto per la prima volta nel 1925 da G. S. Adair e successivamente sviluppato da D. E. Koshland, G. Nemethy e D. Filmer. Il modello sequenziale dell'interazione allosterica prevede una serie di cambiamenti nelle conformazioni delle subunit. Cio, nel corso della transizione dallo stato tutto-T a quello tutto-R possono formarsi conformazioni intermedie, in cui alcune subunit sono nello stato T e altre sono nello stato R (figura).

Il modello sequenziale si fonda su tre ipotesi:

1. In assenza di ligandi la proteina esiste in una sola conformazione. 2. L'unione di un ligando a una subunit induce in questa un cambiamento conformazionale. 3. II cambiamento conformazionale influisce sull'affinit delle subunit adiacenti per i ligandi.

Si pu fare un'analogia tra la transizione allosterica di un oligomero e una fila di birilli che cadono: secondo il modello concertato essi cadono tutti in una volta; secondo il modello sequenziale cadono in rapida successione. II modello sequenziale, che ipotizza l'esistenza di molti pi stati conformazionali di quelli previsti dal modello concertato, simula meglio la realt, ma concettualmente pi complesso. Per entrambi i modelli di transizione allosterica, la curva della frazione di saturazione in funzione della concentrazione del ligando una sigmoide. In alcuni casi per possibile fare una scelta tra i due modelli grazie ad una ben precisa differenza. Nel modello di Monod-Wyman-Changeux un substrato sposta sempre l'equilibrio allosterico verso la conformazione a cui il substrato stesso si lega preferenzialmente. Di conseguenza, secondo questo modello, tutti gli effetti cooperativi sono positivi e non c'e posto per un meccanismo grazie al quale l'unione del primo ligando inibisce quella del ligando successivo, un fenomeno noto come cooperativit negativa. II modello sequenziale, invece, permette anche questo comportamento, perch il cambiamento conformazionale, provocato dall'interazione di un ligando con una subunit, pu indurre nelle subunit adiacenti modificazioni che sfavoriscono l'unione del ligando con tali subunit.

La funzione dell'emoglobina comporta modificazioni conformazionali. Il legame con l'ossigeno produce un cambiamento conformazionali nell'emoglobina.
Quando cristalli di emoglobina conservati sotto azoto vengono a contatto con l'ossigeno, si sbriciolano perch il legame con l'ossigeno determina un rilevante cambiamento conformazionale, sufficiente a vincere le forze che tengono assieme le molecole di emoglobina nel reticolo cristallino. Come conseguenza, infatti, del legarsi dell'ossigeno una coppia di subunit a ruota di circa 15 rispetto all'altra coppia (vedi fig.).

Si tratta di un cambiamento nella struttura quaternaria che, in parte, di natura elettronica e, in parte, di natura sterica. Gli effetti elettronici sono determinati dalla struttura elettronica dello ione Fe2+. Nella deossiemoglobina, infatti, dei sei elettroni dell'orbitale d dello ione Fe2+ quattro sono spaiati e due formano un doppietto; sono perci possibili legami con cinque ligandi (i quattro atomi di azoto porfirinici e l'istidina F8). In questa situazione, l'atomo di ferro paramagnetico e si trova nello stato ad alto spin, che si trasforma in stato a basso spin quando l'ossigeno si lega al gruppo eme. In questa nuova situazione gli elettroni del frro sono disposti in tre doppietti e l'atomo di ferro diamagnetico. Il passaggio dalla forma ad alto spin a quella a basso spin, provocato dall'ossigenazione, dovuto in parte alla repulsione fra gli elettroni dell'ossigeno e gli elettroni spaiati dello ione Fe2+ ad alto spin. Come effetto del cambiamento dello stato di spin, si riduce la distanza di legame tra lo ione Fe2+ e l'istidina F8. Inoltre, l'ossigenazione rende pi forti i legami fra l'atomo di ferro e gli atomi di azoto porfirinici, in quanto ne accresce il carattere covalente. L'ossigenazione produce anche effetti sterici che alterano la struttura dell'emoglobina. Lo ione Fe2+, quando nello stato ad alto spin, ha un volume atomico maggiore di quando nello stato a basso spin, perch i suoi quattro elettroni spaiati sono distribuiti in quattro orbitali anzich in due. Nella deossiemoglobina, a causa della repulsione sterica fra gli atomi di azoto porfirinici e l'istidina F8 e fra gli elettroni della porfirina e gli orbitali dello ione Fe2+, l'atomo di ferro viene a trovarsi al di fuori del piano della porfirina di circa 0,06 nm. In seguito all'ossigenazione, la

configurazione elettronica dello ione Fe2+ cambia ed esso si sposta verso il piano della porfirina di circa 0,039 nm fino a una posizione che 0,021 nm al di fuori del piano stesso. Sembra inverosimile che un cambiamento conformazionale cos piccolo possa influire da un punto di vista biologico; eppure, questo leggero spostamento dell'atomo di ferro innesca una complessa serie di modificazioni conformazionali, di vitale importanza sotto l'aspetto fisiologico. Nello spostarsi, lo ione Fe2+ trascina con s l'intera catena polipeptidica dell'emoglobina.

Cambiamenti conformazionali indotti dall'ossigenazione.

La deossiemoglobina rappresentata in verde, l'ossiemoglobina in blu.
(Disegno di Mike Webb.) Baldwin, J.; Chothla, C. (1979) Hemoglobin: the structural changes related to ligand binding and its allosteric mechanism J. Mol. Biol. 129:175-179

Al momento dell'ossigenazione, l'elica F della subunit si avvicina all'elica H spingendo la tirosina HC2 (vicina all'estremit C-terminale) al di fuori di una tasca in cui normalmente, viene mantenuta tramite un legame idrogeno con il gruppo carbonilico della catena peptidica al livello della valina FG5. Lo spostamento della tirosina HC2 costringe la valina FG5 a spostarsi, rompendo le coppie ioniche che formano legami trasversali fra le catene polipeptidiche della deossiemoglobina. Quando l'ossigeno si lega allo ione Fe2+ di una subunit, il conseguente cambiamento conformazionale di quella subunit si trasmette alle altre subunit. L'emoglobina resiste inizialmente all'ossigenazione perch le coppie ioniche conferiscono stabilit alla deossiemoglobina. Tuttavia, il legarsi dell'ossigeno cooperativo, perch, quando le interazioni

elettrostatiche tra le coppie ioniche in una subunit si interrompono, le altre subunit risentono meno delle modificazioni conformazionali indotte dal formarsi del legame con l'ossigeno.

L'acido 2,3-bifosfoglicerico fa diminuire l'affinit dell'emoglobina per lossigeno

La curva di saturazione dell'emoglobina con l'ossigeno nel sangue intero e la curva corrispondente in soluzioni acquose tampone non contenenti tutte le sostanze normalmente disciolte nel sangue presentano molte differenze. Anche se le loro forme sono simili, l'emoglobina nel sangue intero ha un'affinit per l'ossigeno minore di quella che presenta l'emoglobina in vitro, in soluzione acquosa. Il componente del sangue, responsabile della minore affinit dell'emoglobina per l'ossigeno, un effettore allosterico, l'acido 2,3-bifosfoglicerico [2,3-BPG (2,3-bisphosphoglycerate)].

Negli eritrociti la concentrazione di 2,3BPG e di emoglobina sono all'incirca uguali (4,5 mM). La cavit centrale dell'emoglobina tappezzata dalle catene laterali, dotate di carica positiva, della lisina 82, dell'istidina 2, dell'istidina 143 e del residuo N-terminale di ciascuna delle due subunit . La disposizione di questi residui con carica positiva nella cavit centrale della deossiemoglobina complementare alla conformazione e alla carica del 2,3BPG.

Le due catene sono unite al 2,3BPG mediante legami ionici che conferiscono stabilit alla conformazione della deossi-emoglobina e diminuiscono l'affinit di questa per l'ossigeno

I cambiamenti conformazionali che hanno luogo, con l'ossigenazione rompono il sito di legame con il 2,3BPG, sicch questo composto non pu pi legarsi all'ossiemoglobina. I siti di legame per l'ossigeno e quello per il 2,3BPG sono diversi. Questo non impedisce che i legami allosterici, che queste due sostanze stabiliscono con la proteina, si escludono a vicenda.

L'effetto Bohr influenza il legarsi dell'ossigeno con l'emoglobina

Agli inizi del secolo, Christian Bohr, fisiologo danese, padre del celebre fisico Niels Bohr, osserv che l'anidride carbonica prodotta dal metabolismo dei tessuti fa diminuire l'affinit dell'emoglobina per l'ossigeno (vedi fig.).

20 40 60 80 100 Figura: Effetto dellanidride carbonica sul legame tra emoglobina e ossigeno. Lanidride carbonica prodotta dal metabolismo dei tessuti fa diminuire la frazione di saturazione (Y) dellemoglobina con lossigeno, per qualunque valore della pressione parziale dellossigeno. (Disegno di Patricia Johnson.)

Nei globuli rossi del sangue l'anidride carbonica catalizza la reazione in cui, a partire da anidride carbonica e acqua, si formano uno ione bicarbonato e un protone. La formazione di H+ determina una diminuzione del pH all'interno dei globuli rossi. CO2 + H2O H2CO3 HCO3- + H+

La diminuzione del pH, ancor pi che la stessa anidride carbonica, fa diminuire l'affinit dell'emoglobina per l'ossigeno. Questo fenomeno noto come effetto Bohr. Anche se, al diminuire del pH, la curva di saturazione con l'ossigeno si sposta verso destra, il meccanismo di legame con l'ossigeno rimane cooperativo.

Figura: Effetto Bohr. La diminuzione del pH da 7,8 a 7,2 fa diminuire laffinit dell'emoglobina per l'ossigeno, spostando a destra la curva cl saturazione con l'ossigeno.

In realt, i protoni che causano l'effetto Bohr non sono effettori allosterici dell'emoglobina, dato che non interagiscono con un particolare sito della molecola proteica. L'effetto del pH sullaffinit dell'emoglobina per l'ossigeno legato al grado di protonazione di vari gruppi coinvolti in coppie ioniche esistenti fra le subunit. Uno di questi lo ione imidazolio del residuo di istidina Cterminale (Istidina 146) di ciascuna delle due catene che, nella deossiemoglobina, forma una coppia ionica con il gruppo carbossilico dell'acido aspartico 94. Il cambiamento conformazionale che avviene in seguito allossigenazione spezza queste coppie ioniche e gli ioni imidazolio liberano protoni.

Coppia ionica fra ione imidazolio e ione carbossilato nellHb. In ciascuna delle due catene della deossi Hb lo ione imidazolio del residuo di istidina 146 (la.a. C-terminale) reso pi stabile dal gruppo carbossilato adiacente della catena laterale dellacido aspartico 94, con cui forma un legame ionico. Lossigenazione rompe tale legame: lo ione carbossilato si allontana e si libera un protone. Il pKa dello ione imidazolio quindi minore nellossiemoglobina che nella deossiemoglobina. Una diminuzione del pH, favorisce la formazione di coppie ioniche. Pertanto, la diminuzione del pH favorisce la formazione della deossiemoglobina, la cui conformazione resa pi stabile da tali coppie ioniche.

Anche i gruppi amminici N-terminali della deossiemoglobina sono coinvolti nelle coppie ioniche la cui formazione favorita da minori valori di pH. Esiste un equilibrio tra forma protonata e forma neutra dell'emoglobina. Il pKa della prima 8,0. L'equazione di Henderson-Hasselbalch permette di calcolare il rapporto, a pH 7,4, tra i gruppi amminici N-terminali neutri (Hb-NH2) e protonati (Hb-NH3+): pH = pK'+log[Hb-NH2]/[Hb-NH3+] (1) 7,4 = 8,0 + log[Hb-NH2]/[Hb-NH3+] (2) [Hb-NH2]/[Hb-NH3+] = 0,25 (3)

Una diminuzione del pH fa diminuire il rapporto tra la forma neutra e quella protonata,

favorendo cos la conformazione deossi- con coppie ioniche. Nei tessuti, dove avviene la respirazione, la concentrazione di anidride carbonica relativamente elevata e, pertanto, il pH relativamente basso. Per l'effetto Bohr, che favorisce la formazione della deossi-emoglobina, lossigeno ceduto efficientemente dallemoglobina ai tessuti. Nei polmoni, si ha una situazione esattamente opposta: il pH pi elevato favorisce la formazione dell'ossiemoglobina. A differenza del trasporto dell'ossigeno, il trasporto dell'anidride carbonica dai tessuti ai polmoni fondamentalmente un fenomeno passivo. Lo ione bicarbonato in soluzione trasportato mediante il sangue ai polmoni dove si ricombina con i protoni liberati dall'emoglobina ed eliminato con l'espirazione sotto forma di anidride carbonica. Una parte dell'anidride carbonica trasportata dalla stessa emoglobina. Dall'eq. (3) risulta infatti che a pH 7.4, circa il 25% dei residui N-terminali dell'emoglobina non protonato. Questi gruppi amminici neutri possono reagire con l'anidride carbonica formando derivati dell'acido carbamminico (Vedi Figura)

La reazione di formazione di tali derivati facilmente reversibile. Nei tessuti, sede di attivit metaboliche, la pressione parziale dell'anidride carbonica relativamente elevata e, pertanto, l'equilibrio della suddetta reazione spostato nel senso della formazione di tali derivati. A livello dei polmoni, dove la pressione dell'anidride carbonica molto pi bassa, l'equilibrio della reazione si sposta in senso inverso e si libera l'anidride carbonica.

Meccanismo di trasporto della CO2 da parte dellHb

Il meccanismo del trasporto indiretto isoidrico della CO2, da parte dell'emoglobina schematizzato nella figura seguente.

A livello dei tessuti la CO2 che entra nel sangue idratata, per azione dellanidrasi carbonica tissutale, a H2C03 che si dissocia in HCO3- e H+. L'aumento di H+ facilita il rilascio di O2 dalla ossiemoglobina (HbO2-). La deossiemoglobina che si forma lega i protoni ([H+]) sottraendoli al mezzo.

Trasportati dal sangue venoso, HbH e HCO3- (questi ultimi salificati con Na+ e K+) arrivano ai polmoni dove la HbH, combinandosi con l'O2, diventa HbO2- che dissocia H+. Questi si associano con l'HCO3- formando H2CO3 mentre la HbO2- si mette in equilibrio con Na+ e K+. Il ricostituito H2CO3, per azione dell'anidrasi carbonica polmonare, si dissocia in CO2 che viene eliminata e H2O. Si noti che la riserva alcalina", cio l'insieme dei K+ e Na+, nel sangue venoso associata agli HCO3-, in quello arterioso alla HbO2-. Durante l'intero processo i protoni non sono mai liberi, in quanto vengono catturati dalla HbO2- in corrispondenza dei tessuti, o dagli anioni HCO3- in corrispondenza dei polmoni. Per questo in condizioni fisiologiche non vi mai nel sangue

variazione dellacidit attuale, ma soltanto una leggerissima diminuizione del pH nel sangue venoso rispetto a quello arterioso. Processi di questo tipo che avvengono senza variazioni attuali della concentrazione idrogenionica (pH) si chiamano isoidrici. A livello dei tessuti una buona parte dello ione HCO3- formatosi entro gli eritrociti esce nel plasma, con contemporaneo passaggio di ioni Cl- negli eritrociti. A livello polmonare avviene il processo inverso: l'eliminazione di CO2 provoca una diminuzione di HCO3- negli eritrociti, con richiamo di HCO3plasmatico e fuoriuscita di Cl- dagli eritrociti. E questo lo "scambio dei cloruri" tra eritrociti e plasma che accompagna il trasporto isoidrico della CO2 nel sangue.

VARIANTI FISIOLOGICHE DELL'EMOGLOBINA

Nei globuli rossi degli individui normali sono presenti diverse emoglobine a seconda delle varie fasi dello sviluppo, e precisamente (vedi anche la Fig. 5.13): 1) la Hb-E (22) o emoglobina embrionale (HbGower-2), che la forma prevalente di Hb nel sangue dell'embrione nelle prime fasi dello sviluppo (4-10 settimana); 2) la Hb-F (22) o emoglobina fetale, caratteristica del feto (3-9 mese). La Hb-F, non legando 2,3BPG ha una affinit per 1'02 pi elevata della emoglobina adulta: ci consente il trasferimento dell'O2 dal sangue materno a quello fetale. Nel contempo, essendo la pO2 del sangue periferico fetale pi bassa che nel sangue p1acentare (10-12 mm Hg contro 25-40), l'Hb-F rilascia efficacemente O2 ai tessuti fetali (Fig. 5.14); 3) la Hb-A1 (2 2), che costituisce pi del 90% dell'emoglobina totale durante la vita postnatale (sopra i 7 mesi di vita), insieme alla Hb-A2 (22), presente nella percentuale del 3%. Tutte le emoglobine posseggono le due catene , mentre diversificano per le due catene non (, , , ). Le catene "non " hanno tutte la stessa lunghezza (146 residui di amino acidi), ma si differenziano per la natura di alcuni residui nella sequenza. La Figura mostra la variazione delle catene polipeptidiche costituenti le emoglobine umane nelle varie fasi di sviluppo.

Il significato delle varianti di emoglobina va probabilmente ricercato in un adattamento alle condizioni ambientali che si succedono nel corso della vita intra- ed extrauterina.

DERIVATI DELLEMOGLOBINA
Metaemoglobina. La metaemoglobina, o ferriemoglobina, il prodotto di ossidazione (non di ossigenazione) della emoglobina. Nella metaemoglobina il ferro dell'eme allo stato ossidato (Fe3+) e non capace di legare 1'O2. La metaemoglobina quindi inefficiente nel trasporto dell'O2. La formazione di metaemoglobina accompagnata da quella dell'anione superossido O2-, specie radicalica dell'O2. Nell'uomo adulto normale la metaemoglobina presente nella percentuale del 1,7% dell'emoglobina totale. Una pi elevata quantit di metaemoglobina (metaemoglobinemia) pu conseguire o ad aumentata formazione di metaemoglobina (come ad esempio dopo somministrazione di certi farmaci: antipirina, fenacetina, ecc.), o a sua diminuita riduzione da parte dei sistemi enzimatici, presenti negli eritrociti, normalmente addetti alla riconversione della metaemoglobina in emoglobina desossigenata (vedi figura).

Questi sono imperniati sull'azione della metaemoglobina riduttasi che provvede alla riduzione della metaemoglobina a spese del NADH(H+), e della superossido dismutasi ed enzimi ancillari, che rimuovono l'anione superossido, con generazione di O2 molecolare, a spese del NADPH(H+). La metaemoglobina riduttasi deficitaria in una malattia ereditaria, la metaemoglobinemia familiare, nella quale la percentuale di metaemoglobina raggiunge il 30-40%, il che comporta, episodicamente, insufficienza respiratoria e cianosi.

Carbossiemoglobina o carbonilemoglobina (Hb-CO). L'emoglobina lega l'ossido di carbonio (CO) con una affinit 250 volte superiore a quella per l'O2, Legandosi con l'emoglobina in corrispondenza del Fe2+ dell'eme, il CO impedisce all'O2 di legarsi all'emoglobina, di qui la sua elevata tossicit. Anche legando si ad uno solo dei 4 gruppi eme dell'emoglobina, il CO diminuisce notevolmente l'affinit per l'O2 dei rimanenti 3. Per questa ragione la tossicit del CO molto pi elevata di quanto sia prevedibile in base alla sua concentrazione nel sangue. Si spiega cos perch la semisaturazione di CO nel sangue mortale, mentre la disponibilit del 50% di emoglobina, come si pu avere nelle anemie, non compromette affatto la vita. Cianometaemoglobina. L'azione tossica micidiale del cianuro (CN-) dovuta alla sua capacit di legarsi alla citocromo ossidasi bloccando cos la respirazione mitocondriale. Il cianuro non reagisce con l'emoglobina ma si combina con grande facilit con la metaemoglobina per formare la cianometaemoglobina. Data la elevata affinit del cianuro per la metaemoglobina e la scarsa tossicit della cianometaemoglobina, nella intossicazione da cianuro si cerca di trasferire questo tossico dalla citocromo ossidasi alla metaemoglobina, favorendone la formazione dalla emoglobina per somministrazione endovenosa di sodio nitrato. Contemporaneamente si somministra anche sodio tiosolfato che reagisce con il cianuro per formare tiocianato, prodotto non tossico e facilmente eliminabile attraverso i reni.

EMOGLOBINE ATIPICHE
Si tratta di emoglobine anomale nella loro struttura primaria e soprapprimaria (malattie molecolari), a causa di mutazioni dei geni che le codificano. Le pi tipiche sono:

1. Emoglobina S 2. Emoglobina M 3. Emoglobina Riversale-Bronx 4. Talassemie

Emoglobina S (Hb-S). Questa denominazione deriva dalla forma a falce (falce = sickle, donde la sigla S) che assumono gli eritrociti degli individui che ne sono affetti quando siano esposti a basse tensioni di O2. La emoglobina S costituita da due catene normali e da due catene modificate nella struttura primaria per un errore genetico. Nella posizione 6 a partire dall'amino acido Nterminale contengono infatti un residuo di valina al posto di un residuo di acido glutammico: 2 2val6. La sostituzione di un residuo apolare (valina) ad un residuo polare (acido glutammico), localizzato sulla superficie dell'emoglobina, impartisce allemoglobina S propriet elettroforetiche diverse da quelle della emoglobina normale. Possedendo infatti due cariche negative in meno la Hb-S migra pi lentamente verso il polo positivo (vedi figura).

Anche la solubilit della Hb-S allo stato deossigenato notevolmente diminuita (25 volte meno solubile della forma deossigenata della Hb-A) a causa di una interazione idrofobica fra valina terminale di una delle due catene e la valina-6 dell'altra. La polimerizzazione che ne deriva da luogo ad un precipitato fibroso (si parla dell'Hb-S come di emoglobina appiccicosa) che induce

la deformazione a falce del globulo rosso. I globuli rossi falciformi hanno una vita media pi breve dei normali, sono pi facilmente emolizzabili e agglutinabili nei piccoli vasi che ne possono essere ostruiti, creando piccole zone ischemicbe. Gli eritrociti falciformi sono facilmente fagocitati dai reticoli endoteliali e rimossi dal circolo, donde lo stato anemico (anemia). Il decorso cronico della malattia costellato da crisi accessuali cianotiche, che si manifestano allorch i pazienti si trovino esposti a relativamente basse tensioni di O2, per esempio dopo sforzo prolungato. L'anemia falciforme una malattia ereditaria, che si esprime in forma conclamata solo negli omozigoti, vale a dire nei figli che ricevono il gene anomalo da entrambi i genitori. Negli omozigoti la Hb-S la sola forma di emoglobina presente negli eritrociti. Gli omozigoti non vivono generalmente oltre l'et di 25 anni. Gli eterozigoti, cio i figli che ricevono il gene anomalo da uno solo dei genitori, posseggono il 50% di Hb-S ed il 50% di Hb-A. In essi l'anemia falciforme asintomatica, salvo crisi sporadiche che possono verificarsi in condizioni di bassa tensione di O2: maschio falciforme (sickle cell trait). L'anemia falciforme molto comune nelle popolazioni africane. Tale elevata percentuale viene raggiunta nelle zone malariche. Si ritiene infatti che l'anemia falciforme costituisca un adattamento difensivo del globulo rosso contro il Plasmodium falciparum. In effetti una fase del ciclo vitale di questo parassita si svolge nei globuli rossi: la emolisi immediata dei globuli rossi falciformi, allorch vengono invasi dal parassita. ne interrompe il ciclo vitale. Emoglobina M. Listidina prossimale all'eme, in entrambe le catene e sostituita da tirosina, che si lega con legame coordinativo al ferro delleme stabilizzandolo nella forma ferrica (Fe3+). Da ci la sigla M, iniziale di Metaemoglobina. In tale condizione leme non pu legare l'O2 e la malattia infatti letale per gli omozigoti. Lanemia da emoglobina M si manifesta con cianosi, pi o meno intensa ed estesa, dovuta a carenza di O2 nei piccoli vasi dei tessuti periferici. Emoglobina Riverdale-Bronx. In questa emoglobina un residuo di glicina delle catene , viene sostituito da uno di arginina, molto pi ingombrante. La struttura terziaria del protomero ne viene deformata in modo tale da non essere pi in grado di tener legato l'eme. Cos si spiega come lemoglobina Riversale-Bronx possegga 2 o 3, ma non 4 gruppi eme.

Talassemie. Sono emoglobinopatie causate da errori genetici che si traducono nella difettosa sintesi non di un solo aminoacido -vedi emoglobine atipiche- ma di una o pi catene

polipeptidiche (subunit) costitutive. Si distinguono in talassemie e a seconda che il difetto sia a carico della subunit o . Le talassemie sono dovute a delezione di uno o pi geni codificanti le subunit . I due geni codificanti le subunit sono localizzati, uno adiacente all'altro, nel cromosoma 16, per cui un soggetto normale, diploide, ne possiede 4 copie. Se di queste ne manca una si ha la talassemia -l, se ne mancano due la talassemia -2. Entrambi i casi comportano una modesta anemia. Quando invece mancano 3 dei 4 geni, e conseguentemente la subunit pressoch assente, si ha produzione di un tetramero 4. Se tutti i geni sono deleti, la malattia letale. Le talassemie sono prodotte da delezione dei geni che codificano le subunit o alla incapacit di essere espressi. Nella variante omozigote, cio nella talassemia , nella quale tutte le subunit sono assenti si ha la produzione compensatoria di subunit che continuano ad essere sintetizzate anche dopo il parto. Si ha cos emoglobina fetale (22), la cui produzione continua fino alla fanciullezza, seguita sempre dalla morte. Le emoglobine delle talassemie analogamente alla emoglobina fetale possono trasportare l'ossigeno, ma non sono sede dell'effetto Bohr e quindi insensibili all'effetto allosterico degli H+. Pertanto l'affinit per l'O2 aumentata ed il rilascio dell'O2 ai tessuti insufficiente. Oltre alle numerose emoglobinopatie associate ad uno stato patologico pi o meno grave, sono possibili alterazioni della molecola dell'emoglobina che, non comportando alcuna disfunzione della molecola. si definiscono "silenti". Ci si verifica quando l'anomalia, genetica implica la sostituzione di amino acidi non essenziali per la funzionalit dell'emoglobina.

BIOSINTESI DELLEME

Sia nei batteri che negli animali i gruppi prostetici delleme dellemoglobina, della mioglobina, del citocromo c, delle per ossidasi, della catalasi e del sistema policiclico corrinico della vitamina B12, derivano tutti dalla glicina e dal succinil-CoA. Nella biosintesi delleme, la reazione che determina la velocit dellintero processo la condensazione della glicina con il succinil-CoA,

che avviene con la perdita di anidride carbonica. Questa reazione di condensazione catalizzata dalla -aminolevulinico sintetasi, PLP dipendente, presente nei mitocondri. Questo enzima controllato dalleme; leme, infatti, in grado sia di inibire allostericamente questattivit enzimatica sia di reprimerne la sintesi. La successiva tappa biosintetica prevede la condensazione di due molecole di acido aminolevulinico con sintesi di porfobilinogeno (Vedi schema seguente). Tale reazione catalizzata dalla -aminolevulinico deidratasi.

Questa reazione sensibile al piombo e in caso di avvelenamento da Pb si verificher la eliminazione, con le urine, di grandi quantit di acido -aminolevulinico. Dalla successiva condensazione di quattro molecole di porfobilinogeno, si produrr il tetrapirrilmetano. La reazione catalizzata dalla Uroporfobilinogeno I-sintetasi. Quando presente soltanto questo enzima (Uroporfobilinogeno I-sintetasi) il tetrapirrilmetano ciclizza dando luroporfobilinogeno I che possiede doppi legami simmetrici rispetto ai piani di simmetria della molecola e gruppi acetato e proprionato al centro della molecola (vedi schema successivo).

Affinch si sintetizzi luroporfobilinogeno III, che il vero precursore delleme, lUroporfobilinogeno I-sintetasi deve agire in presenza dellUroporfobilinogeno III-cosintetasi (Vedi schema seguente).

La cosintetasi tautomerizza i doppi legami dellanello D del tetrapirrilmetano e la successiva ciclizzazione da origine ad un composto asimmetrico, le cui catene di acetato e propionato non sono disposte simmetricamente rispetto al centro della molecola.

LUroporfibilinogeno III verr trasformato in protoporfirina IX, il diretto precursore delleme. Nella prima reazione, per decarbossilazione dei gruppi acetato in gruppi metinici, si origina il coproporfobilinogeno III. La reazione catalizzata dallUroporfobilinogeno decarbossilasi.

Successivamente, i gruppi proponici degli anelli A e B verranno convertiti in gruppi vinilici ad opera della Coproporfobilinogeno ossidasi, con formazione del Protoporfirinogeno IX. Infine i quattro legami metilenici, che uniscono gli anelli pirrolici, verranno ossidati in gruppi metenici dalla Protoporfirinogeno ossidasi con produzione della Protoporfirina IX.

A tal punto una Ferrochelatasi inserir lo ione ferroso (Fe2+) nella Protoporfirina IX formando leme.

Gli errori congeniti del metabolismo dell'eme sono noti complessivamente come porfirie. Ne esistono tre classi. Nella porfiria congenita eritropoietica, la concentrazione dell'uroporfirinogeno III-cosintetasi pari a circa un terzo di quella normale. Di conseguenza, vengono sintetizzate notevoli quantit di uroporfirina I, che sono accumulate nei tessuti e, alla fine, eliminate con le urine e con le feci. Gli individui affetti emettono un'urina rossa e i loro denti sono fluorescenti alla luce ultravioletta. Inoltre, soffrono di una grave fotosensibilit cutanea, spesso debilitante. Questa malattia ereditaria trasmessa come carattere autosomico recessivo. La seconda classe di porfiria ereditaria comprende la protoporfiria eritropoietica, che ha sintomi analoghi, ma generalmente pi lievi, della porfiria congenita eritropoietica. Pare sia dovuta a una parziale deficienza della ferrochelatasi ed trasmessa come carattere autosomico dominante. La porfiria intermittente acuta, che rappresenta la terza classe, una malattia autosomica dominante, che pu provocare forti dolori addominali e disfunzioni neurologiche. Dal punta di vista biochimico, caratterizzata da un incremento nell'escrezione urinaria dell'acido amminolevulinico e di porfobilinogeno. Un tempo si riteneva che fosse dovuta a un difetto primario nella regolazione della -amminolevulinico-sintetasi, ma studi pi recenti hanno

dimostrato che il difetto primario e rappresentato, invece, dalla parziale (50%) deficienza della uroporfirinogeno I-sintetasi. Ne risulta uno stato di relativa carenza di eme e una mancanza di inibizione retrograda della -amminolevulinico-sintetasi da parte dell'eme, il che conduce a un incremento della sintesi di acido -amminolevulinico e di porfobilinogeno per compensare il blocco parziale della reazione catalizzata dall'uroporfirinogeno I-sintetasi nella biosintesi dell'eme. La maggior parte degli individui affetti da porfiria intermittente acuta sono asintomatici fino a quando non assumono farmaci come estrogeni, sulfamidici, barbiturici e altre sostanze che influiscono sulla sintesi dell'acido -amminolevulinico.