A major side effect associated with controlled ovarian hyperstimulation (COH) in patients with polycystic ovary (PCO) is ovarian

hyperstimulation syndrome (OHSS) (1). In vitro maturation (IVM) of immature oocytes represents an alternative for those who require assisted reproductive technology (ART). It has been reported that priming with hCG before immature oocyte retrieval in patients with PCOS improves oocyte maturation and pregnancy rates (PRs) (2, 3). Studies have also shown that a significant proportion of IVM cycles involve retrieval of in vivomatured oocytes (35). Ejaculated and surgically retrieved spermatozoa have been used in cases of male factor infertility using intracytoplasmic sperm injection (ICSI) (6, 7). Many azoospermic patients may have sperm retrieved surgically by testicular sperm extraction (TESE) as part of their IVF procedure. Limited studies have been published on the influence of sperm collection on the clinical outcomes in IVM. The published experience on pregnancies derived from IVM oocytes fertilized by spermatozoa retrieved from the testis or the epididymis remains limited to only some case reports (811) and a very small series of treatments (12, 13). We therefore performed this study to evaluate the fertilization rate and embryo development resulting from ICSI of spermatozoa retrieved by TESE in programmed IVM cycles

MATERIALS AND METHODS

Medical records of couples who underwent IVM from July 2005 to June 2012 at McGill University Health Centre, Montreal, Canada, were evaluated. The retrospective study was approved by the Institutional Review Board of the McGill University Health Centre.

Patients A total of 21 patients (33.4 _ 2.4, n 24 cycles) who underwent IVM treatment were included in this analysis. Inclusion criteria were patients who had PCO ovaries (Table 1) with male partners requiring TESE for nonobstructive azoospermia. All patients with nonobstructive azoospermia were counseled regarding their reproductive options of IVF or IVM. Twenty-one couples opted for IVM as some patients (n 5) had OHSS before and some couples (n 16) preferred to do IVM to avoid stimulation with exogenous gonadotropin and high risk of OHSS. The treatment cycle was initiated on the basis of an ultrasound scan on days 35. In oligomenorheic patients, menstruation was provoked with P. Transvaginal ultrasound scans were repeated on days 79 and repeated at 1- to 3-day intervals until the leading follicle reached 1012 mm and the endometrial thickness was R6 mm. At this point 10,000 IU hCG was administered (5). An age-matched control group (n 12) was selected among women undergoing IVM and ICSI with ejaculated sperm. Oocyte Collection Oocyte retrieval was performed 3638 hours after hCG priming. Transvaginal ultrasound-guided collection of oocytes was performed using a 19-gauge aspiration needle (K-OPS-7035-RWH-ET; Cook) with a reduced aspiration pressure of 7.5 kPa. The aspirates were collected in tubes with prewarmed heparinized saline. Oocyte collection was

performed according to accessibility of the follicles and oocyte maturity was assessed. To avoid the possibility of missing oocytes with a small amount of cumulus cells, the remaining follicular aspirates were filtered using a 70-mm mesh in hole size (Falcon, Becton Dickinson). They were washed with oocyte wash medium (Cooper Surgical) that contained N-2-hydroxyethylpiperazine-N0-2-ethanesulfonic acid (HEPES) buffer supplemented with recombinant human serum albumin and the oocytes were isolated under a stereomicroscope.

In Vitro Maturation The nuclear maturity of the collected oocytes was assessed under the dissecting microscope with high magnification (_80) using the spreading method (14). Oocytes that were mature on the collection day (day 0, 06 hours) were inseminated on the same day, whereas the immature oocytes were cultured in IVM medium (Cooper Surgical) supplemented with 75 mIU/mL FSH and LH. After culture on day 1 (2830 hours), the oocytes were denuded of cumulus cells with hyaluronidase and mechanical pipetting. TESE Procedure The day before oocyte retrieval, a TESE procedure was performed. Briefly, a midline incision was made in the scrotum, and the scrotal content was pushed out preferentially from the side of the larger testis. The tunica vaginalis was opened and the testis covered with the tunica albuginea was visualized. After the tunica albuginea was opened, small samples (510 mg) were excised from the larger, more opaque tubules. Each excised testicular tissue specimen was further cut into small pieces to allow spermatozoa to be released from the inside of the seminiferous tubules. Each sample was examined immediately for the presence of the testicular spermatozoa by placing dispersed tissue suspension on a tissue culture dish under a phase-contrast microscope at _200 magnification. If no spermatozoa were identified in the initial sample, subsequent samples were taken from the same testis and, if needed, from the contralateral testis. Dissection was performed through all regions of testicular tissue, preserving the testicular blood supply. After the TESE procedure, the testicular samples were further teased to release spermatozoa, pooled in 5-mL oocyte wash medium (COOK Science) and centrifuged quickly to remove teased tubules, cell debris, and red blood cells (RBCs). Afterward

Efek samping utama yang terkait dengan hiperstimulasi ovarium terkontrol ( COH ) pada pasien dengan ovarium polikistik ( PCO ) adalah ovarium sindrom hiperstimulasi ( OHSS ) ( 1 ) . Dalam pematangan in vitro ( IVM ) dari oosit yang belum matang merupakan alternatif bagi mereka yang memerlukan teknologi reproduksi yang dibantu ( ART ) . Telah dilaporkan bahwa priming dengan hCG sebelum pengambilan oosit matang pada pasien dengan PCOS meningkatkan pematangan oosit dan kehamilan tarif ( PR ) ( 2 , 3 ) . Studi juga menunjukkan bahwa signifikan

proporsi siklus IVM melibatkan pengambilan di vivomatured oosit ( 3-5 ) . Ejakulasi dan pembedahan diambil spermatozoa memiliki telah digunakan dalam kasus-kasus infertilitas laki-laki menggunakan intracytoplasmic injeksi sperma ( ICSI ) ( 6 , 7 ) . banyak azoospermia pasien mungkin sperma diambil pembedahan oleh testis ekstraksi sperma ( TESE ) sebagai bagian dari prosedur IVF mereka . Penelitian yang terbatas telah dipublikasikan pada pengaruh koleksi sperma pada hasil klinis pada IVM . itu diterbitkan pada pengalaman kehamilan yang berasal dari IVM oosit dibuahi oleh spermatozoa diambil dari testis atau epididimis masih terbatas hanya beberapa laporan kasus ( 8-11 ) dan seri yang sangat kecil perawatan ( 12 , 13 ) . kami Oleh karena itu dilakukan penelitian ini untuk mengevaluasi pemupukan Tingkat dan embrio pembangunan yang dihasilkan dari ICSI dari spermatozoa diambil oleh TESE dalam siklus IVM terprogram. BAHAN DAN METODE Catatan medis dari pasangan yang menjalani IVM dari Juli 2005 sampai Juni 2012 di McGill University Health Centre , Montreal , Kanada , dievaluasi . Penelitian retrospektif telah disetujui oleh Institutional Review Board dari McGill University Health Centre . pasien Sebanyak 21 pasien ( 33,4 _ 2,4 , n 24 siklus ) yang pengobatan IVM menjalani dimasukkan dalam analisis ini . Kriteria inklusi adalah pasien yang memiliki PCO ovarium ( Tabel 1 ) dengan mitra laki-laki membutuhkan TESE untuk nonobstruktif azoospermia . Semua pasien dengan nonobstruktif azoospermia dikonseling mengenai reproduksi mereka Pilihan IVF atau IVM . Dua puluh satu pasangan memilih untuk IVM karena beberapa pasien ( n 5 ) memiliki OHSS sebelum dan beberapa pasangan ( n 16 ) lebih suka melakukan IVM untuk menghindari rangsangan dengan eksogen gonadotropin dan risiko tinggi OHSS . itu siklus pengobatan dimulai berdasarkan USG scan pada hari 3-5 . Pada pasien oligomenorheic , menstruasi diprovokasi dengan P. transvaginal ultrasound scan yang diulang pada hari 7-9 dan diulangi pada 1 - untuk interval 3 hari sampai folikel terkemuka mencapai 10-12 mm dan ketebalan endometrium adalah R6 mm . Pada titik ini 10.000 IU hCG diberikan ( 5 ) . Sebuah kelompok kontrol seusianya ( n 12 ) terpilih di antara wanita yang menjalani IVM dan ICSI dengan sperma ejakulasi . oosit Collection Pengambilan oosit dilakukan 36-38 jam setelah hCG priming . Transvaginal koleksi USG - dipandu oosit dilakukan dengan menggunakan aspirasi jarum 19 -gauge ( K - OPS 7035 - RWH - ET , Masak ) dengan aspirasi berkurang tekanan 7,5 kPa . Para aspirasi dikumpulkan dalam tabung

dengan saline heparinized prewarmed . Koleksi oosit adalah dilakukan sesuai dengan aksesibilitas folikel dan oosit jatuh tempo dinilai . Untuk menghindari kemungkinan oosit hilang dengan sejumlah kecil sel-sel kumulus, tersisa aspirasi folikel disaring menggunakan 70 - mm jala di dalam lubang ukuran ( Falcon , Becton Dickinson ) . mereka adalah dicuci dengan media oosit wash ( Cooper Surgical ) yang contained N - 2 - hydroxyethylpiperazine - N0 - 2 - ethanesulfonic acid ( HEPES ) penyangga dilengkapi dengan manusia rekombinan albumin serum dan oosit diisolasi di bawah stereo . Pematangan In Vitro Jatuh tempo nuklir dari oosit yang dikumpulkan dinilai di bawah mikroskop bedah dengan pembesaran tinggi ( ? 80 ) dengan menggunakan metode penyebaran ( 14 ) . Oosit yang jatuh tempo pada hari pengumpulan ( hari 0 , 0-6 jam ) yang diinseminasi pada hari yang sama , sedangkan yang belum dewasa oosit dikultur dalam medium IVM ( Cooper Bedah ) dilengkapi dengan 75 mIU / mL FSH dan LH . setelah budaya pada hari 1 ( 28-30 jam ) , oosit yang gundul cumulus sel dengan hyaluronidase dan pipetting mekanik . Prosedur TESE Sehari sebelum pengambilan oosit , prosedur TESE adalah dilakukan . Secara singkat , insisi garis tengah dibuat di skrotum , dan isi skrotum didorong keluar istimewa dari sisi testis yang lebih besar . Tunika vaginalis dibuka dan testis ditutupi dengan tunika albuginea divisualisasikan . Setelah tunika albuginea dibuka , kecil sampel ( 5-10 mg ) yang dipotong dari yang lebih besar , lebih buram tubulus . Setiap spesimen jaringan testis dipotong Lebih lanjut potong kecil-kecil untuk memungkinkan spermatozoa akan dirilis dari bagian dalam tubulus seminiferus . setiap sampel diperiksa segera untuk kehadiran testis yang spermatozoa dengan menempatkan suspensi jaringan yang tersebar di hidangan kultur jaringan di bawah mikroskop fase kontras pada ? 200 pembesaran . Jika tidak ada spermatozoa yang diidentifikasi dalam sampel awal , sampel berikutnya diambil dari testis yang sama dan , jika diperlukan , dari testis kontralateral . Pemotongan dilakukan melalui seluruh wilayah testis jaringan , menjaga suplai darah testis . Setelah TESE yang prosedur , sampel testis yang lebih menggoda untuk melepaskan spermatozoa , dikumpulkan dalam 5 - mL media oosit mencuci ( COOK Sains ) dan disentrifugasi cepat untuk menghapus menggoda tubulus , puing-puing sel , dan sel-sel darah merah ( sel darah merah ) . setelah itu