OBTENCION DE ACIDO ACETICO MEDIANTE FERMENTACION DIRECTA DEL ALCOHOL ETILICO UTILIZANDO ACETOBACTER ACETI, A PARTIR DE SUBPRODUCTOS AGRICOLAS

QUE CONTENGAN O SEAN PRECURSORES DE AZUCARES FERMENTABLES PARA SU TRANSFORMACION EN ALCOHOL ETILICO POR MEDIO DE UNA FERMENTACION ALCOHOLICA. 316 732 76 78 olga MARCO TEORICO El cido actico tambin conocido como cido metilencarboxlico, se puede encontrar en forma de ion acetato. ste es un cido que se encuentra en el vinagre, siendo el principal responsable de su sabor y olor agrios. El vinagre es definido como un lquido ajustado para el consumo humano, producido por materias primas de origen agrcola, que contienen almidn y azcares, por un proceso de doble fermentacin (alcohlica y actica) y conteniendo una cantidad especfica de cido actico (FAO/WHOFood Standards programme, 1987 citado por TESFAYE et al., 2002). Es de inters para la qumica orgnica como reactivo, para la qumica inorgnica como ligando, y para la bioqumica como metabolito (activado como acetil-coenzima A). Tambin es utilizado como sustrato, en su forma activada, en reacciones catalizadas por las enzimas conocidas como acetiltransferasas, y en concreto histona acetiltransferasas. El cido actico actualmente es producido por sntesis y por fermentacin bacteriana. Hoy en da, la ruta biolgica proporciona cerca del 10% de la produccin mundial, pero sigue siendo importante en la produccin del vinagre, dado que las leyes mundiales de pureza de alimentos estipulan que el vinagre para uso en alimentos debe ser de origen biolgico. El cido actico tiene diversas aplicaciones en una gran variedad de campos de la industria como la apicultura, la industria qumica, equivale biotecnologa, los campos de la medicina y en la industria alimentos. Durante la mayor parte de la historia de la humanidad, el cido actico, en la forma de vinagre, ha sido preparado por bacterias del gnero Acetobacter. En presencia de suficiente oxgeno, estas bacterias pueden producir vinagre a partir de una amplia variedad de alimentos alcohlicos. Algunos insumos comunes son la sidra, el vino, cereal fermentado, malta, arroz, o patatas. Una solucin diluida de alcohol, inoculada con Acetobacter y mantenida en un lugar clido y aireado se har vinagre en el transcurso de algunos meses. Los mtodos industriales de preparacin de vinagre tipo alimentario aceleran este proceso al mejorar el suministro de oxgeno a las bacterias. Probablemente, la primera produccin vinagre fue consecuencia de errores en la fermentacin durante el proceso de elaboracin de vino. Si el mosto se fermenta a temperatura demasiado alta, acetobacter dominar a la levadura presente naturalmente en las uvas. Al aumentar la demanda de vinagre para fines culinarios, mdicos y sanitarios, los productores de vinos aprendieron rpidamente a usar otros materiales orgnicos para producir vinagre en los meses clidos de verano, antes que las uvas maduren y estn listas para ser procesadas en vino. Sin embargo, este mtodo era lento y no siempre exitoso, y los productores de vino no entendan el proceso. Hasta principios del siglo XIX, el nico medio de obtener vinagre era la acidificacin espontnea del vino, en 1.864 Pasteur descubre unos microorganismos llamados Mycoderma aceti entonces invent un mtodo que pas a llamarse Mtodo Pasteur

 mtodo Orleans que consista en llenar toneles de vino y vinagre, espontneo, en la misma proporcin, y cada vez que se sacaba vinagre se le rellenaba con mas vino. El cual traa la desventaja de que era un proceso muy lento. Acto seguido, Schuetzenbach inventa un mtodo que trae su nombre, el cual consiste en un Conjunto de barriles de tal forma que queden apilados en niveles, debe tener una especie de doble fondo perforado. Se llenan con virutas de madera para que se alojen all las bacterias. La perforacin del fondo permite el paso del aire para que se difunda por toda la viruta, mientras por la parte superior se va vertiendo el lquido alcohlico, el cual se dispersa entre las virutas hasta precipitarse al fondo, donde por esas perforaciones caen al barril siguiente (ver figura1). En cada nivel se aumenta la concentracin de cido actico entre 1 y 2%. Figura 1. Planta productora de acido actico utilizando el mtodo de Schuetzenbach Otro mtodo es el del cultivo superficial, esta elaboracin se produce con reactores donde ya va controlada la temperatura, aire y suministro del producto. Aqu tambin se utiliza la viruta de madera la cual cada cierto tiempo hay que cambiarla pues se obstruye. Es un sistema de bajo rendimiento pero se obtiene un vinagre de calidad. Otro mtodo es el del cultivo sumergido que a diferencia del anterior la fermentacin se produce en toda la masa liquida por lo cual se evita el material de filtracin. Este mtodo tiene una produccin muy alta. 1821 Davy realiza fermentaciones con mtodos netamente qumicos, dio origen a un proceso fermentativo de acetificacin sin M.O vivos, donde una parte de alcohol se oxida a aldehdo. El acido actico En la actualidad La produccin mundial total de cido actico virgen se estima en 5 Mt/a (millones de toneladas por ao), aproximadamente la mitad es producida en los Estados Unidos. La produccin de Europa es aproximadamente 1 Mt/a y est en descenso, y 0,7 Mt/a son producidos en Japn. Otro 1,5 Mt es reciclado cada ao, llevando el mercado mundial total a 6,5 Mt/ao. Los dos mayores productores de cido actico virgen son Celanese y BP. Otros productores importantes son Millennium Chemicals, Sterling Chemicals, Samsung, Eastman Chemical Company y Svensk Etanolkemi. Actualmente existen diferentes mtodos de produccin como los que se enuncian a continuacin: CARBONILACIN DEL METANOL Es el principal mtodo de produccin a nivel mundial. En este proceso, el metanol y el monxido de carbono reaccionan para producir cido actico, con la ayuda de unos catalizadores. Es un proceso sinttico. OXIDACIN DEL ACETALDEHDO El acetaldehdo puede ser producido por oxidacin del butano o nafta ligera, o por hidratacin del etileno. Cuando el butano o la nafta ligera son calentados con aire en la presencia de varios iones metlicos, incluyendo los de manganeso, cobalto y cromo; se forma el perxido yluego se descompone para producir cido actico segn la ecuacin qumica: 2 C4H10 + 5 O2 4 CH3COOH + 2 H2O OXIDACIN DEL ETILENO El acetaldehdo puede ser preparado a partir del etileno por medio del proceso Wacker. El proceso est catalizado por un catalizador metlico de paladio en un

soporte de heteropolicido, tal como el cido tungstosilcico POR MEDIO DE PROCESOS DE FERMENTACION La fermentacin es un proceso catablico en el cual tanto el dador como el aceptor final de electrones son compuestos orgnicos. Por lo general, ante el dador como el aceptor final; Son metabolitos de un nico sustrato que durante el proceso se escinde en dos. Uno que acta como dador de hidrgenos (se oxida) y otro que acta como aceptor final de hidrgenos (se reduce). Por ejemplo, en la fermentacin alcohlica de la glucosa, C6 H12 O6 ----> 2(CH3 CH2OH) + 2 CO2 , se puede observar que la glucosa, sin que se produzca una reaccin con ninguna otra molcula, se ha escindido en una sustancia sin hidrgenos (CO2 ), es decir, la sustancia oxidada, y en otra con tres hidrgenos (CH3 - CH2OH), la sustancia reducida. En otras ocasiones, el aceptor de hidrgenoses una molcula externa. La fermentacin es un proceso que realizan muchos microorganismos, efectuando reacciones sobre algunos compuestos orgnicos y liberando energa. Hay muchos tipos diferentes de fermentacin, pero en condiciones fermentativas solamente se efecta una oxidacin parcial de los tomos de carbono del compuesto orgnico y, por consiguiente, slo una pequea cantidad de la energa potencial disponible se libera. La fermentacin es un proceso anaerbico y en l no interviene la cadena respiratoria. En la industria, sin embargo, se suele llamar fermentacin a todo proceso que se realice en un fermentador o, dicho de otro modo, a todo proceso cuyo producto final es un compuesto orgnico. All se habla de fermentacin anoxidativa cuando no se precisa aireacin, es decir, cuando se trata de una autntica fermentacin, y de fermentacin oxidativa en el caso de que haya que insuflar aire, o sea, cuando el aceptor final de hidrgenos es el oxgeno y, evidentemente, a travs de la cadena respiratoria, como, por ejemplo, en la mal llamada fermentacin actica; que en realidad es una respiracin aerbica de oxidacin incompleta. C2H5OH + O2 Acetobacter aceti CH3COOH + H2O Las fermentaciones son propias de los microorganismos (ciertas levaduras y bacterias), aunque alguna, como la fermentacin lctica, puede realizarse en el tejido muscular de los animales cuando no llega suficiente oxgeno. La fermentacin es un proceso catablico de oxidacin incompleta, totalmente anaerbico, siendo el producto final un compuesto orgnico. Siendo estos productos finales son los que caracterizan los diversos tipos de fermentaciones. As, se habla de fermentacin alcohlica, fermentacin lctica, fermentacin butrica, fermentacin ptrida. Fermentacin anaerobia Algunas especies de bacterias anaerbicas, incluyendo miembros del gnero Clostridium, pueden convertir los azcares en cido actico directamente, sin usar etanol como intermediario. C6H12O6 3 CH3COOH Fermentacin actica En realidad es un proceso de fermentacin aerbica; es decir en presencia de oxgeno. Se basa en la oxidacin de lquidos fermentadores (10-15% alcohol) que en presencia de oxigeno el Acetobacter aceti produce una solucin del 3 al 7% cido actico en forma de vinagre. Algunos insumos comunes son la sidra, el vino, cereal fermentado, malta, arroz, o patatas.

La reaccin qumica general facilitada por estas bacterias es: C2H5OH + O2 CH3COOH + H2O ------------------------------------------------La razn por la cual se ha profundizado en la descripcin terica de la fermentacin radica como se puede verificar ms adelante; en que el objeto estudio de este trabajo se fundamenta esencialmente en la fermentacin de azcares fermentables en la primera etapa del proceso y en la segunda etapa en una fermentacin actica ------------------------------------------------ANTECEDENTES GENERALES Los mtodos para la produccin de cido actico por va biolgica y las posibles fuentes potenciales de azcares fermentables son los que realmente nos interesan en esta investigacin. Por consiguiente se ha de prestar especial atencin a los principales factores que influyen de manera directa en la produccin del cido actico. Respecto a las fuentes potenciales que se pueden utilizar en la produccin del mismo existen una gran cantidad de fuentes que parece inagotable. Como resultado de la propia naturaleza y del gran despilfarro agrcola, agroindustrial y urbano al que estamos enfrentando actualmente. Dado que el proceso se lleva a cabo en dos etapas como se haba mencionado antes, donde en la primera etapa el objetivo es producir el sustrato (alcohol etlico) a partir de diversos residuos agroindustriales como sustrato y en la segunda etapa utilizando el alcohol etlico como sustrato para la produccin de cido actico. En este orden de ideas nos enfrentamos al problema de determinar las diferentes fuentes y mtodos de los que se dispone actualmente para la produccin de alcohol etlico bien sea para la produccin de acido actico como se ha planteado anteriormente o para otro propsito. Aunque en realidad actualmente, su principal importancia radica en hacer frente a la crisis energtica a la que poco a poco vamos emergiendo. En este orden de ideas, acto seguido se presentan todos los temas que de una u otra manera influyen en la presente investigacin. 1. Alcance de la produccin de etanol a partir de materiales alternativos La industria especficamente la de los combustibles y los combustibles, ha prestado una atencin especial en los ltimos tiempos a la produccin de alcohol etlico como una posible solucin a la crisis energtica. Reavivando el inters en la produccin de alcohol potable e industrial por fermentacin de carbohidratos que contienen las materias primas. Situacin que se puede aprovechar tambin para la produccin de acido actico y no por eso ha de perder importancia. En este orden de ideas la biomasa ha demostrado que tiene un potencial promisorio para la produccin de alcohol etlico en industria de los combustibles (Gutirrez-Correa et al, 1999; Yamada y Uno, 1999). Por lo tanto es posible utilizar los residuos agrcolas, industriales y urbanos para la produccin de energa a partir de alcohol etlico como tambin para la produccin de acido actico, entre otras aplicaciones industriales. La mayora de los pases en va de desarrollo como Colombia los residuos agrcolas, industriales y urbanos son abundantes, los cuales pueden utilizarse para una importante produccin de fuentes baratas de energa, insumos para la industria Como el etanol. Desde el punto de vista industrial el etanol producido por va biolgica provendra de una fuente renovable que se produce por fermentacin de azcares. Como es el caso del maz que en las ltimas aos ha sufrido un aumento dramtico en la demanda para la produccin de alcohol etlico, situacin que no es prctica cuando

hay otras posibles fuentes que no estaran desplazando la produccin de alimentos y piensos. Una fuente potencial para la produccin de alcohol etlico de bajo costo es utilizar materiales lignocelulosicos tales como residuos de cultivos, pastos, forrajes, aserrn, viruta de madera, los residuos slidos de los animales (Sun y Cheng, 2002) y residuos industriales. 2. La disponibilidad de residuos agrcolas y otros desechos En este pas por fortuna o por desgracia; se pensara que las fuentes de etanol a partir de residuos agrcolas y otros desechos son de unas proporciones considerablemente significativas. Para empezar partamos de la industria del arroz; la industria del arroz en Colombia es significativa y su residuo principal como fuente potencial de etanol es el Straw-rice o cscara de arroz, un residuo de baja densidad, subproducto de la molienda del arroz y que representa un volumen del 20% en peso de la produccin bruta de arroz. A diferencia de los cereales, cultivos como el algodn, produccin de cultivos de carcter leoso, la produccin de residuos de diferentes cultivos, coco y caa de azcar se estiman con base en estudios de investigacin (CES, 1995; Ravindranath y Hall, 1995). El salvado de trigo industrial representa el 14-19% del grano y comprende los revestimientos exteriores y los restos de almidn del endospermo (Pomeranz, 1988). Para darnos una idea de la enorme cantidad de residuos de los cuales podemos disponer para la produccin de etanol y de las cantidades, observemos slo los que se producen en la india, los cuales los cuales no tienen mucha diferencia con los que se producen ac nuestro pas. Como se puede observar en la siguiente tabla. Fuente: CES (1995) y CMEI (1997). Respecto a los respecto a los residuos slidos urbanos que se generan a diario, y que son transportados y depositados en las afueras de pueblos y ciudades. A pesar de que se pueden clasificar como materiales reciclables y darles un nuevo uso. Pueden existir otras formas de manipulacin como el compostaje, la incineracin, la produccin de etanol, etc. que tambin se pueden llevar a cabo en cierta medida. La cantidad total de residuos slidos generados en las ciudades ms grande se ha estimado para una poblacin urbana de la india en 20,7 millones de toneladas anuales en 1991. Esto se espera que aumente a 56 millones de toneladas anuales en el 2010 (Ahmed y Jamwal, 2000). Si comparamos esto con los que se puede generar a diario en la ciudad de Bogot y en las otras principales ciudades del pas no estaremos muy lejos de esta misma realidad. Adems de los residuos slidos urbanos, gran cantidad de aguas residuales se genera en determinadas plantas industriales como fbricas, ingenios azucareros, destileras, induce tan formacin de alimentos, industria del papel y de pulpas. Fuera de esto los alimentos y las industrias en Colombia son soportadas sobre la base agrcola como pas tercermundista que somos, lo que representa en conjunto un gran reto y una gran oportunidad para aprovechar. Por lo tanto, dado que los residuos agrcolas, urbanos e industriales estn presentes en gran cantidad cada vez mayor y da a da, si bien no pueden ser todos utilizados una gran alternativa sera la produccin de etanol a partir de los mismos. Que a su vez reducira su demanda y tambin se reduce el problema de la eliminacin de desechos a su vez que ayuda al medio ambiente. 3. Tecnologas que intervienen en la produccin de etanol y cido actico a partir de

desechos. GENERALIDADES Como ya se ha mencionado antes, aunque el objetivo es obtener cido actico a partir de residuos agroindustriales, aunque el principal problema radica en la biodisponibilidad de alcohol etlico como sustrato para el y precursor del cido actico por el mtodo de fermentacin actica o mal llamada fermentacin oxidativa. Entre los mtodos por medio de los cuales se puede producir etanol se pueden dividir en dos grupos que son por medio de la fermentacin o por sntesis qumica. Sin embargo la fermentacin es el mtodo por excelencia. Para la fermentacin se utilizan azcares simples (sacarosa, glucosa y fructosa) y carbohidratos Complejos (almidn, celulosa, entre otros). El proceso de produccin de etanol por medio de la fermentacin de azcares simples es un proceso simple valga la redundancia, mientras que en el proceso de la produccin de etanol por medio de carbohidratos complejos, el proceso es ms dispendioso. Hoy en da se utilizan varios tipos de materias primas de origen biolgico para la produccin a gran escala de etanol (bioetanol): * Sustancias con alto contenido de sacarosa * caa de azcar * remolacha * melazas * sorgo dulce * Sustancias con alto contenido de almidn * maz * papa * yuca * Sustancias con alto contenido de celulosa * madera * residuos agrcolas (incluyendo los residuos de los ctricos ). El proceso a partir de almidn es ms complejo que a partir de sacarosa, pues el almidn debe ser hidrolizado previamente para convertirlo en azcares. Para ello se mezcla el vegetal triturado con agua y con un grupo de enzimas (amiloglucosidasa y amilasa) o en su lugar con cido, y se calienta la papilla obtenida a 120 - 150 C. Posteriormente se cuela la masa, en un proceso llamado escarificacin, y se enva a los reactores de fermentacin. El proceso de produccin de etanol a partir de celulosa es an ms complejo que la anterior, numerosas investigaciones se han llevado a cabo acerca de la transformacin de materiales lignocelulosicos (Azzam, 1989; Dale et al, 1984; Duff y Murray, 1996; Martin et al, 2002;. Reshamwala et al, 1995. ; Yanase et al, 2005). Esta conversin incluye los procesos: 1. la hidrlisis de la celulosa en los materiales lignocelulsicos para fermentar los azcares reductores y 2. la fermentacin de los azcares en etanol. La fermentacin de los azcares es llevada a cabo por microorganismos (levaduras o bacterias) y produce etanol, as como grandes cantidades de CO2. Adems produce otros compuestos oxigenados indeseables como el metanol, alcoholes superiores, cidos y aldehdos. Tpicamente la fermentacin requiere unas 48 horas. La hidrlisis es por lo general, catalizadas por enzimas de celulosa y la fermentacin se lleva a cabo por las levaduras o bacterias. Los factores que se han identificado a

afectar a la hidrlisis de la celulosa son porosidad, el rea de exposicin es decir, la superficie accesible de los materiales de desecho, la cristalinidad de la fibra de celulosa y lignina y el contenido de hemicelulosa (McMillan, 1994). La presencia de lignina y hemicelulosa hace que el acceso de las enzimas de celulosa a la celulosa sea difcil, lo que reduce la eficacia de la hidrlisis. El contenido de celulosa, hemicelulosa y lignina en algunos residuos agrcolas y desechos se presentan en la Tabla 2. . La remocin de lignina y hemicelulosa, la reduccin de la cristalinidad de la celulosa y el aumento de la porosidad en los procesos de pre-tratamiento puede mejorar significativamente la hidrlisis (McMillan, 1994). El tratamiento previo debe cumplir con los los siguientes requisitos: (1) mejorar la formacin de azcares o la capacidad para formar posteriormente los azcares mediante hidrlisis enzimtica, (2) evitar la degradacin o la prdida de hidratos de carbono, (3) evitar la formacin de subproductos inhibitoria a la hidrlisis y fermentacin posterior procesos, (4) ser rentable (Sun y Cheng, 2002). Tabla 2. Tomado de: EL PRE TRATAMIENTO DE MATERIALES LIGNOCELULOSICOS Los materiales de desecho puede ser tratados por una combinacin de astillado, trituracin y molienda para reducir la cristalinidad de la celulosa (Sun y Cheng, 2002). Por medio de un molino vibratorio de bolas se ha encontrado que puede ser ms eficaz la descomposicin de la celulosa de pino y virutas de lamo y la mejora de la digestibilidad de la biomasa (Millet et al., 1976). La pirlisis se ha utilizado tambin para el tratamiento previo de los materiales lignocelulosicos. Cuando los materiales son tratados a una temperatura superior a 300 C, la celulosa se descompone rpidamente para producir productos gaseosos y otros residuos (Shafizadeh y Bradbury, 1979). La descomposicin es mucho ms lenta y menos generadora de productos voltiles cuando se lleva a cabo a temperaturas ms bajas. Actualmente la descomposicin por vapor es el mtodo ms utilizado para el tratamiento previo de los materiales lignocelulosicos (McMillan, 1994). En este mtodo, la biomasa astillada se trata con alta presin saturada vapor y entonces la presin se reduce rpidamente, lo que hace que los materiales se descompongan. El proceso causa la degradacin de la hemicelulosa y la transformacin de la lignina gracias a la presin y la alta temperatura, lo que a su vez se ha reflejado en el incremento del potencial de hidrlisis de la celulosa (Sun y Cheng, 2002). El mtodo de descomposicin por vapor es mucho ms eficiente y ms econmico en trminos energticos, con la limitacin de que puede generar sustancias inhibidoras para la posterior fermentacin (Mackie et al., 1985). Debido a la formacin de productos de degradacin que inhiben el crecimiento microbiano, la hidrlisis enzimtica y la fermentacin, el tratamiento previo de la biomasa ya descompuesta debe ser lavada con agua para eliminar las materias inhibidoras, junto con la hemicelulosa soluble en agua (McMillan, 1994). Otro mtodo es descomposicin de la fibra en presencia de amonaco (AFEX) por sus siglas en ingles; este es otro tipo de pre tratamiento fsico-qumico en el que los materiales lignocelulosicos son expuestos a amonaco lquido a alta temperatura y presin por un perodo de tiempo y entonces la presin se reduce rpidamente. AFEX puede mejorar significativamente las tasas de sacarificacin de diversos cultivos herbceos y

pastos. Puede ser utilizado para el tratamiento previo de muchos materiales lignocelulosicos como la alfalfa,paja de trigo (Mes-Hartree et al., 1988), paja de cebada, paja de arroz, rastrojo de maz (Vlasenko et al., 1997), los residuos slidos urbanos , madera blanda, peridico, (Holtzapple et al., 1992), hierba, pasto aguja (Reshamwala et al., 1995), hojas de lamo (Tengerdy y Nagy, 1988) y el bagazo de caa (Holtzapple et al., 1991). Sin embargo, El tratamiento previo AFEX no solubiliza significativamente la hemicelulosa en comparacin con los tratamientos con cido y descomposicion de vapor de cido catalizada (Mes-Hartree et al, 1988; Vlasenko et al, 1997.) Pero no requiere un lavado posterior. Otro mtodo que se utiliza en la descomposicin en presencia de CO2 a altas presiones, donde se plantea que el CO2 forma cido carbnico y esto es lo que aumenta la tasa de hidrlisis, aunque el proceso es menos eficiente comparado con la descomposicin por los mtodos antes mencionados. Pero es ms efectivo comparado con la hidrlisis enzimtica sin tratamiento previo (Dale y Moreira, 1982). Zheng et al. (1998). El ozono puede ser utilizado para degradar la lignina y la hemicelulosa presente en muchos materiales lignocelulsicos como la paja de trigo (Ben-Ghdalia y Miron, 1981), el bagazo, paja verde, man, pino (Neely, 1984), la paja de algodn (BenGhdalia y Shefet, 1983) y aserrn populares (Vidal y Molinier, 1988). La degradacin se ha limitado esencialmente a la lignina y hemicelulosa aunque tambin ataca un poco la celulosa, pero result poco afectada. Pre tratamiento Ozolysis tiene algunas ventajas, como por ejemplo, elimina eficazmente la lignina y no produce residuos txicos para el proceso posterior de fermentacion. Las reacciones tambin se llevan a cabo a temperatura ambiente y presin (Vidal y Molinier, 1988). Sin embargo, una gran cantidad de ozono es necesaria, por lo que el proceso es costoso (Sun y Cheng, 2002). La hidrlisis cida, se puede llevar a cabo en presencia de acido sulfrico concentrado y cido clorhdrico. A pesar de que son buenos agentes de gran alcance para la hidrlisis de la celulosa, pero tienen la desventaja de ser txicos, corrosivos y peligrosos y requieren de reactores resistentes a la corrosin aunado de la recuperacin del cido despus del proceso de hidrlisis para que el proceso sea econmicamente viable (Sivers y Zacchi, 1995). La hidrlisis enzimtica de la celulosa se lleva a cabo por las enzimas celulasas, que son altamente especficos (Bguin y Aubert, 1994). Las Celulasas suelen ser una mezcla de varias enzimas. Por lo menos tres grandes grupos de celulasas estn involucrados en el proceso de hidrlisis: endoglucanasas, exoglucanasas y glucosidasas, Adems de los tres grupos principales de enzimas celulasas, tambin hay una serie de enzimas auxiliares (Duff y Murray, 1996). Durante la hidrlisis la celulosa es degradada por las celulasas a azcares reductores, que pueden ser fermentados por levaduras o bacterias para el etanol (Sun y Cheng, 2002). La relacin costo utilidad de la hidrlisis enzimtica es mas favorable para si, comparada con la hidrlisis cida o alcalina, ya la hidrlisis enzimtica es generalmente llevado a cabo en condiciones suaves (pH 4.8 y temperatura de 45 a 50 C) y no tiene un problema de corrosin (Duff y Murray, 1996). Tanto las bacterias y los hongos pueden producir celulasas para la hidrlisis de los materiales lignocelulosicos. Estos microorganismos pueden ser aerbico / anaerbico, mesfilos / termfilos. Los factores que afectan la hidrlisis enzimtica de la celulosa son la concentracin

del sustrato, la actividad de celulosa y las condiciones de reaccin (Sun y Cheng, 2002). La Concentracin de sustrato es uno de los principales factores que afectan el rendimiento y la velocidad inicial de hidrlisis enzimtica de la celulosa. En los niveles de sustrato bajo, un aumento en la concentracin de sustrato normalmente resulta en un aumento de la tasa de rendimiento y la reaccin de la hidrlisis (Cheung y Anderson, 1997). Sin embargo, la concentracin de sustrato alta puede causar la inhibicin de la enzima, lo que reduce considerablemente la velocidad de hidrlisis y el grado de inhibicin de sustrato depende de la proporcin del sustrato total con el total de enzima (Huang y Penner, 1991; Penner y Liaw, 1994). LOS PROCESOS DE PRODUCCION DE ETANOL La produccin de etanol a partir de biomasa por fermentacin es posible mediante el uso de clulas libres o inmovilizadas. Ambos tienen ventajas y desventajas. Los microorganismos utilizados en la industria se seleccionan para proporcionar la mejor combinacin posible de las caractersticas del proceso y equipo utilizado. Las cepas seleccionadas deben tener tolerancia a altas concentraciones de azcar y alcohol. El uso de clulas inmovilizadas sobre todo en los procesos industriales ha atrado una considerable atencin durante los ltimos aos, debido a las ventajas que trae comparadas con los procesos tradicionales. La inmovilizacin es la restriccin de la movilidad celular dentro de un espacio definido. La inmovilizacin proporciona altas concentraciones de clulas y la reutilizacin de la clula. Tambin elimina los problemas de lavado adems de las tasas de dilucin y los costosos procesos de la recuperacin de la clula y el reciclado de la misma. Altos rendimientos volumtricos tambin se pueden obtener con la combinacin de altas concentraciones de clulas y las altas tasas de flujo. La inmovilizacin puede tambin mejorar la estabilidad gentica (Caylak y VardarSukan, 1998). El etanol puede ser producido por cuatro tipos principales de operaciones industriales: lotes, continua, alimentada por lotes y semi-continuo. En la fermentacin por lotes, el sustrato y la cultura de la levadura se cargan en el biorreactor, junto con los nutrientes. La mayora del etanol producido hoy en da se hace la operacin por lotes ya que los costos de inversin son bajos, no requieren mucho control y se puede lograr con mano de obra no calificada (Caylak y Vardar Sukan, 1998). En los procesos por lotes, la esterilizacin y el control de las materias primas son ms practicos que en los dems procesos. La otra ventaja de la operacin por lotes es la mayor flexibilidad que se puede lograr mediante el uso de un biorreactor con especificaciones diferentes para cada tipo de necesidad. En el proceso de alimentacin continua, la principal complejidad se genera debido a que el bioreactor contiene sustrato, medio de cultivo y otros nutrientes necesarios, el cual se bombea continuamente en un recipiente agitado, donde los microorganismos estn activos. El producto, que se toma desde la parte superior del biorreactor, contiene etanol, las clulas, y el azcar residual (Maiorella et al., 1981). Limitaciones del Proceso La determinacin de los factores que limitan la gliclisis fermentativa del etanol son complejos debido a la interrelacin existente y a la naturaleza de los parmetros intervinientes durante el proceso de fermentacin. Algunos de ellos se deben tener en cuenta en la fermentacin alcohlica industrial. En las limitaciones que surgen durante el proceso se pueden enumerar algunos de los ms importantes como son: a) Concentracin de etanol resultante

Una de las principales limitaciones del proceso, es la resistencia de las levaduras a las concentraciones de etanol (alcohol) que se llegan a producir durante la fermentacin, algunos microorganismos como el saccharomyces cerevisiae pueden llegar a soportar hasta el 20% de concentracin en volumen. En ingeniera bioqumica estos crecimientos se definen y se modelizan con las ecuaciones de crecimiento celular dadas por las ecuaciones de Tessier, Moser y de la ecuacin de Monod. b) Acidez del sustrato El pH es un factor limitante en el proceso de la fermentacin ya que las levaduras se encuentran afectadas claramente por el ambiente, bien sea alcalino o cido. Por regla general el funcionamiento de las levaduras est en un rango que va aproximadamente desde 3.5 a 5.5 pH (ideal pH=4.5). Los procesos industriales procuran mantener los niveles ptimos de acidez durante la fermentacin usualmente mediante el empleo de disoluciones tampn. Los cidos de algunas frutas (cido tartrico, mlico) limitan a veces este proceso. c) Concentracin de azcares La concentracin excesiva de hidratos de carbono en forma de monosacridos y disacridos puede frenar la actividad bacteriana. De la misma forma la baja concentracin puede frenar el proceso. Las concentraciones lmite dependen del tipo de azcar as como de la levadura responsable de la fermentacin.20 Las concentraciones de azcares afectan a los procesos de osmosis dentro de la membrana celular. d) Contacto con el aire Una intervencin de oxgeno (por mnima que sea) en el proceso lo detiene por completo (es el denominado Efecto Pasteur).28 Esta es la razn por la que los recipientes fermentadores se cierren hermticamente. e) La temperatura El proceso de fermentacin es exotrmico, y las levaduras tienen un rgimen de funcionamiento en unos rangos de temperatura ptimos, se debe entender adems que las levaduras son seres mesfilos. Si se expone cualquier levadura a una temperatura cercana o superior a 55 C por un tiempo de 5 minutos se produce su muerte. La mayora cumple su misin a temperaturas de 30 C. f) Ritmo de crecimiento de las cepas Durante la fermentacin las cepas crecen en nmero debido a las condiciones favorables que se presentan en el medio, esto hace que se incremente la concentracin de levaduras. PRODUCCION DE ACIDO ACETICO POR FERMENTACION DEL ALCOHOL ETILICO Ya obtenido el alcohol etlico por fermentacin alcohlica sobre la biomasa tratada por cualquiera de los tres mtodos preliminares (fermentacin directa, hidrolisis del almidn o degradacin de la biomasa), la segunda etapa del proceso consiste en llevar a cabo la transformacin del alcohol etlico utilizando acetobacter aceti. Aunque el proceso es relativamente simple, ya que solo consiste en una oxidacin de soluciones fermentadas (que contengan alcohol) en presencia de oxigeno. Donde los principales aspectos a tener en cuenta son bsicamente factores intrnsecos como la concentracin de alcohol etlico, la concentracin de azucares, la concentracin del mismo acido, el modo de operacin del bioreactor, la concentracin del M.O, el PH y caractersticas de la M.P principalmente.

Las condiciones ptimas de fermentacin por medio de acetobacter aceti se refieren a la ventaja de conocer la informacin acerca de la cintica de crecimiento bacteriano y de los procesos automatizados de fermentacin (LLAGUNO y POLO, 1991). a) caractersticas de la materia prima ( alcohol etlico) Segn LLAGUNO y POLO (1991), el sustrato alcohlico, debe estar libre de sabores y olores extraos, limpio, sin restos de azcares fermentables que puedan provocar contaminaciones posteriores con levaduras. En cuanto a su graduacin alcohlica, se ha venido considerando que los vinos utilizados en el proceso de acidificacin deben ser de baja graduacin, aunque se permite utilizar vinos con una graduacin alcohlica de 10 a 12 % v/v. En cuanto a la concentracin de etanol, Gmez citado por DE ORY et al. (2002) plantea la influencia de la concentracin de etanol sobre la fermentacin actica y entrega una concentracin ptima de 13 g/L. Aunque este valor depende de la concentracin de otros compuestos presentes. b) Concentracin del acido actico Otro factor que influye sobre la fermentacin actica es la concentracin de cido actico. Bar citado por DE ORY et al. (2002), afirma que el cido actico tiene un carcter de activador y a la vez de inhibidor, sobre la actividad del microorganismo Acetobacter aceti, por lo que han propuesto un efecto de activacin sobre el crecimiento del microorganismo cercano a 10 g/L para el metabolismo bacteriano. La FIGURA 1 muestra los rangos ptimos de las concentraciones de etanol y cido actico y su influencia sobre el crecimiento bacteriano. FIGURA 1. Influencia de la concentracin de etanol y cido actico sobre el crecimiento bacteriano de Acetobacter aceti. Tomado de. http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2005/fap695o/doc/fap695o.pdf c) Influencia de la temperatura. La temperatura del medio influye sobre el crecimiento de microorganismo. LLAGUNO y POLO (1991), DE ORY et al. (1998) y (2004) proponen una temperatura ptima de fermentacin actica comprendida dentro del rango de 30 a 31 C; de esta forma, el proceso de fermentacin es viable entre los 28 y 33 C. Sin embargo, cuando la temperatura es superior a 33 C o est por sobre la temperatura ptima, ocurre un proceso de desactivacin bacteriana, en el cual las enzimas son desnaturalizadas, la membrana celular es daada, causando que los constituyentes se dispersen y el organismo sea ms sensible a los efectos txicos de la clula, adems de aumentar las prdidas de alcohol y productos voltiles. d) Influencia de la aireacin. El factor aireacin, se considera fundamental, dado que las bacterias acticas requieren de un suministro constante de oxgeno, adems de una agitacin orbital para homogeneizar el contenido y garantizar la aireacin. La concentracin de oxgeno disuelto en el medio se debe mantener constante, en torno a 2 mg/L y la cantidad de aire suministrado debe ser aproximadamente de 50 mL/min para 100 ml de medio lo que equivale a 0,5 vvm que es el volumen de aire introducido, por unidad de volumen

de fermentador por minuto. La incorporacin de aire es un proceso esencial, dado el carcter aerobio de las bacterias acticas. Adems de la cantidad de aire suministrado, se debe considerar la pureza y calidad de ste, las bacterias acticas son sensibles a contaminantes presentes en el aire (LLAGUNO y POLO, 1991). No obstante, algunos autores mencionan que el proceso de Fermentacin actica es estrictamente dependiente sobre el oxgeno abastecido a la fase lquida y se requiere de un sistema de distribucin gas lquido para la transferencia de oxgeno, ya que afecta directamente sobre la productividad del proceso de fermentacin (FREGAPANE et al., 1999). e) Concentracin del inculo. Las condiciones del inculo, es un parmetro importante para una ptima fermentacin. El cultivo selectivo de Acetobacter aceti debe estar en fase exponencial de crecimiento, con una concentracin de biomasa total, del orden de 500 x 106 cel./ mL, de acuerdo a DE ORY et al. (2002). Para SOO et al. (1989), la produccin de cido actico se lleva a cabo con una concentracin de clulas viables del orden de 1,9 a 4,7 x 108 cel/mL aumentando la productividad de cido actico. MTODOS DE PRODUCCIN DE VINAGRE. Existen diversos mtodos de produccin de vinagre, especficamente dos esquemas bsicos en que se realiza la fermentacin actica, estos son fermentacin en cultivo superficial (lento) y fermentacin en cultivo sumergido (rpido). a) Fermentacin en cultivo superficial. La fermentacin en cultivo superficial, se caracteriza porque las bacterias acticas se encuentran en contacto directo con oxgeno gaseoso, o situadas en la interfase lquido gas, como es el caso del mtodo Orleans o bien, fijadas a soportes de materiales tales como virutas de madera. Este sistema constituye el primer paso hacia la industrializacin del proceso de fabricacin de vinagre y es tambin precursor de las bacterias inmovilizadas. A pesar del avance tecnolgico, ste mtodo presenta desventajas, como la prdida de sustancias voltiles por evaporacin; el material de soporte, como las virutas de madera, se contamina fcilmente y es preciso reemplazarlo cada ao; adems es un proceso lento, por lo que se ha optado por el proceso de fermentacin sumergida (WEISER, 1962 y LLAGUNO y POLO, 1991). b) Fermentacin en cultivo sumergido. La fermentacin en cultivo sumergido ha sido descrita por EBNER et al. (1993 y 1999) los cuales sugieren una fermentacin semicontinua y continua. Este sistema se basa en ciclos, comenzando con concentraciones de cido actico iniciales en cada ciclo del orden de 7 a 10 % y cerca de 5% de etanol. Cuando la concentracin de etanol est entre un rango de 0,05% y 0,3%, se procede a descargar el fermentador y comenzar un nuevo ciclo. LEVONEN y LLAGUNO (1978); EBNER et al. (1993 y 1999); se refieren al mtodo Frings, el cual es usado en todo el mundo para la produccin de vinagre. El Acetator Frings consiste en un depsito provisto de agitacin donde

el mismo dispositivo consigue la aireacin y la mezcla de aire con el lquido. Este dispositivo es una turbina y un esttor. La turbina succiona lquido y lo mezcla con el aire y enva esta mezcla homognea a travs del esttor al depsito. El dispositivo logra la aspiracin sin usar aire comprimido. El Acetator Frings es totalmente automatizado y as garantiza una acetificacin rpida y uniforme. La introduccin de una nueva carga y descarga del vinagre terminado del proceso semicontinuo de acetificacin puede ser realizada automticamente de acuerdo al contenido de alcohol residual, ya que el Acetator contiene un instrumento automtico para medir la cantidad de etanol en el lquido fermentado y el control de la refrigeracin y aireacin tambin son automticos. ANTECEDENTES DEL VINAGRE DE FRUTAS Como materia prima para la elaboracin de vinagre existen diversas frutas que se utilizan en procesos de fermentacin, usualmente las manzanas son las ms usadas para la elaboracin de vinagre, otras frutas o materias primas que producen fermentacin alcohlica son las uvas, peras, meln, ciruelas, miel, almbar y cerveza, entre otras. En orden de producir un producto de calidad, la materia prima utilizada debiera estar sin contaminacin y en su estado mximo de maduracin (WEISER, 1962 y WOOD, 1985). La fruta debe ser molida y prensada, para obtener un jugo rico en carbohidratos (especficamente dextrosa) para ser posteriormente puesto en fermentadores. De esta forma ocurre una fermentacin espontnea que toma lugar en corto tiempo, debido a los microorganismos presentes en el producto (WEISER, 1962 y WOOD, 1985). BORTOLINI et al. (2001) consideran al vinagre de frutas superior en calidad sensorial y nutritiva, comparado con los otros tipos de vinagres, presentando caractersticas de sabor y aroma propio. En lo que se refiere a su aspecto nutricional, est compuesto por vitaminas, cidos orgnicos, protenas y aminocidos provenientes del fruto y de la fermentacin alcohlica. ANTECEDENTES DEL VINAGRE A PARTIR DE ALCOHOL Segn LLAGUNO y POLO (1991) el vinagre de alcohol es el que se obtiene mediante la fermentacin de soluciones acuosas de alcohol. Este debe proceder de la fermentacin alcohlica de materias agrcolas. Por esto en la mayora de los pases se emplea alcohol, con este tipo de origen, para la fabricacin de vinagre, ste se diluye a concentraciones semejantes a las que se encuentra en el vino, siendo el proceso de fabricacin similar al vinagre vnico. No obstante, el alcohol no contiene los nutrientes que contiene el vino, por lo que han de aadirse para que ocurra la multiplicacin y el desarrollo de las bacterias acticas. Segn STEPHANOPOULOS (1993) uno de los factores ms importantes en la optimizacin de un proceso de fermentacin es el diseo de un medio adecuado de crecimiento y produccin. El medio debe cumplir con las necesidades para la sntesis

de materiales de la clula y para los procesos de biosntesis, as como tambin con los requerimientos del microorganismo. Los constituyentes que tienen mayor influencia sobre la produccin de metabolitos son: a) Fuente de carbono El carbono es el principal constituyente de la clula, constituyendo aproximadamente el 50% en peso seco. Los carbohidratos y los compuestos no carbohidratos (metanol y alcanos) son usados como fuente de energa y carbono y usualmente son los sustratos principales en el medio de cultivo. b) Fuente de nitrgeno. El nitrgeno se encuentra en segundo lugar en trminos de cantidad e importancia. Constituye aproximadamente el 10 % del peso seco. Est disponible para los microorganismos en forma de sales de amonio, nitratos o urea, aminocidos, pptidos, purina, pirimidinas y sirve como base para la sntesis de protenas y otras molculas macromoleculares. c) Micro elementos. Los micro elementos incluyen fsforo (P) el cual es requerido por la clula para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos; el azufre (S) el cual es fundamental por ser un elemento estructural en los aminocidos cistena y metionina. La mayora del azufre celular procede de fuentes inorgnicas, ya sean sulfatos o sulfuros. El potasio (K), es requerido especficamente por una gran cantidad de enzimas, incluyendo varias implicadas en la sntesis de protenas. El magnesio (Mg) estabiliza los ribosomas, las membranas celulares, los cidos nucleicos y se requiere para la actividad de muchas enzimas. d) Elementos trazas. Los elementos trazas incluyen al fierro (Fe), manganeso (Mn), zinc (Zn), cobre (Cu), cobalto (Co), nquel (Ni), boro (B), cloro (Cl),sodio (Na) y silicio (Si). Estos son requeridos en concentraciones extremadamente bajas, sin embargo, son tan importantes como los micronutrientes para las funciones celulares especficas. Los elementos trazas son metales, muchos de los cuales forman parte de las enzimas que son los catalizadores celulares. SUREZ y LEVONEN (1981), estudiaron la composicin adecuada de un medio sinttico nutritivo para la obtencin de vinagre de alcohol. Los autores consideraron que la produccin de vinagre por bacterias acticas a partir de vino como sustrato no presenta problemas en cuanto a las necesidades nutritivas del microorganismo, en cambio cuando se utiliza cualquier otro sustrato, es necesario conocer la composicin de ste y dotar al microorganismo de los nutrientes necesarios para conseguir una buena velocidad de acidificacin. El vinagre obtenido a partir de etanol como medio base presenta ventajas, entre las que se destacan la no produccin de color ni turbidez. En trminos generales, la solucin de etanol utilizada como sustrato debe enriquecerse con fuentes de carbono (glucosa) y nitrgeno (fosfato diamnico), sales minerales (cloro, sodio, magnesio, manganeso y fierro) que aporten los oligoelementos

imprescindibles y vitaminas (tiamina) necesarias para que ocurra el proceso de fermentacin. Algunas materias primas no requieren la adicin de nutrientes extras, sin embargo, para la produccin de vinagre de alcohol, se requiere una mezcla de nutrientes, considerando que las bacterias acticas necesitan para una ptima fermentacin los siguientes nutrientes: glucosa, potasio, sodio, magnesio, calcio, amonio como fosfato de amonio, sulfato y cloro. Adems de minerales trazas como fierro, manganeso, cobalto, cobre, molibdeno, vanadio y zinc (EBNER, 1993). DEFINICIN DEL PROBLEMA Debido a que Colombia es un pas netamente agrcola, y observando el no aprovechamiento de una inmensa cantidad de subproductos provenientes de estas fuentes, nos hemos puesto en la tarea de encontrar la forma de sacar provecho de algunos residuos agroindustriales con el objetivo de extraer una sustancia o compuesto importante presente en estos subproductos y tratar de darle un uso industrial. Por otro lado, si los resultados obtenidos son satisfactorios, podemos pensar en darle va libre a esta excelente propuesta y de esta forma capacitar gente menos favorecida del sector rural que est desaprovechando una oportunidad de tener su propia microempresa y perdiendo una buena fuente de ingresos. JUSTIFICACIN Muchos de los residuos agrcolas en nuestro pas son aprovechados a nivel industrial extrayendo compuestos importantes y que estn presentes en gran cantidad en el residuo como tal. Muchos otros subproductos no se le est dando el uso adecuado debido al poco conocimiento que se tiene acerca de ellos, no obstante estos subproductos puede tener un potencial de aprovechamiento que no esta siendo explotado econmicamente dando ligar a sistemas masivos de produccin mas eficientes. por otro lado se pretende contribuir al desarrollo econmico, social y ambiental de la regin. OBJETIVO General Extraccin de acido actico a partir de un subproducto agrcola por fermentacin oxidativa. Especficos i) Diagnosticar bibliogrficamente las principales fuentes potenciales que sean considerados como subproductos en la cadena agroindustrial para la produccin de acido actico. ii) Evaluar rendimientos con base en el porcentaje de acido actico obtenido. iii) Sugerir con base en los resultados obtenidos un proyecto a gran escala que sea auto sostenible y as de esta manera contribuir al desarrollo agroindustrial. PROCEDIMIENTO El procedimiento mediante el cual vamos a llevar a cabo el proyecto se presenta de manera esquemtica a continuacin. CRONOGRAMA BIBLIOGRAFIA

Madigan, T.M., et al. Biologa de los microorganismos. Decima edicin. Pearson Educacin S.A. Madrid, 2005. Production report. Chem. Eng. News: pp. pp. 6776. Suresh, Bala (2003), Acetic Acid, Chemicals Economic Handbook, SRI International, pp. 602.5000, http://www.sriconsulting.com/CEH/Public/Reports/602.5000/ Martinez, M.C. (1980). Historia del vinagre.