Prtica10:Anlisedaqualidadedeguautilizandoindicadoresbacteriolgicos Introduo: A qualidade dagua das praias necessita sermonitorizada regularmente, de modo a se certificar que a mesma prpria para

ara os banhistas. Vrios parmetros so necessrios analisar nestas guas, incluindo os parmetros microbiolgicos (ver Directiva Comunitria n76/160/EEC). Como sabemos vrios patognios podem ser transmitidos ao homem atravs da gua (ver Ali et al. 2004; Noble et al. 2003). Nas publicaes da Organizao Mundial de Sade de 1998 e 2000 (WHO, 1998, 2000) podem igualmente encontrarse informaes sobre os patognios transmitidos atravs da gua. De modo a avaliar a qualidade microbiolgica de uma dada massa de gua, analisamse as concentraes das chamadas bactrias indicadoras. Estas bactriasnosoemprincipiobactriaspatognicas,masvistoestarempresentesem locais onde existe contaminao antropognica, pressupese que nesses locais se encontremtambmmicrorganismospatognicos. Usualmenteasbactriasindicadorasmonitorizadasemguasdepraiasso: ColiformesTotais(TC) ColiformesFecais(FC) Enterococci(EC) Para a pesquisa destes indicadores so utilizados meios de cultura selectivos e metodologias padronizadas, de modo a obter comparabilidade dos resultados obtidos.OsvaloresdasbactriasindicadorasemtermosdeCFUs/ml,estotabelados por directivas comunitrias e nacionais, e podem ser consultados em Shibata et al. (2004)eBordalo(2003). Metodologia para anlise bacteriolgica de gua do mar, pelo mtodo MF (FiltraoporMembrana): 1. Amostragem: Quantidade de gua a colher: 500 ml de cada local de colheita, os locais de colheita sero: (A) a meio da praia, entrando na gua at cintura colher a gua a cerca de 30 cm da superfcie; (B) no extremo da praia junto ao paredo do complexo do Lido, colher a amostra de gua igualmente a 30 cm de profundidade. Parmetros a anotar: data e hora de colheita, mar, temperatura da gua, aspecto dagua,condiesatmosfricas.

 Toda a gua ser filtrada atravs de filtros de membrana, com auxlio de uma rampa de filtrao. A amostra A ser distribuda por 3 funis, no 1 filtrar 200ml, no 2 200ml e no 3 100ml. Aps a filtrao retirar o filtro com auxlio da pina e colocar em cima do meio selectivo, um filtro por meio. O 1 e 2 nos meios KF e Lauril,o3nomFC.ProcederdomesmomodoparaaamostraB. 2. DeterminaodeEnterococcifecais: IsolamentoemmeioKFStreptococcusagar(OXOIDCM701) Filtrar a amostra de gua atravs do filtro (0.45m) de membrana esterilizada Manejarofiltrocompinasesterilizadas. Incubarofiltroemcimadomeio,a3537oCpor48h. Se crescerem colnias vermelhas, castanhas ou rosas, reaco (+), proceder ao testeconfirmatriopor, Isolamento de um n representativo de colnias e sementeira em meio Bilis Esculina Azide Agar (BEAA), ou transferncia do filtro para este meio. Estemeio precisa de ser praquecido a 44 oC. A temperatura de incubao tambm 44 oC por1ha48h. Colniascastanhasoupretasrodeadasdehalosnegros,reaco(+), Efectuartestedacatalase,se()confirmaseapresenadeEnterococcifecais. 3. DeterminaodeColiformesTotais(E.coli,Citrobacter,) IncubarofiltroemmeioMembraneLaurylSulphateAgar(OXOID)por24h,a 37oC. Secresceremcolniasamarelas,efectuartestedaOxidase(comosbastonetesda OxidasedaOXOID,tocandocomapontaacastanhadadobastonetenacolnia). SeOxidase()(pontadobastonetenomudadecor),entocoliformestotais Coliformes Totais so os aerbios e anaerbios facultativos, gram (), sem formao de esporos, com forma de bastonete, fermentativos da lactose c/produodegsecidoaps2448hacercade37oCea44oCem48h. Isolar colnias e inocular meio Kliger Iron Agar (OXOID),( o slant e o butt do meio) utilizando uma ansa recta. Observar a actividade fermentativa e aproduodegs. 4. DeterminaodeColiformesFecais:(Oscoliformesdasfezes) IncubarofiltroemmeiomFC(DIFCO)comsoluode1%decidoroslicoem 0.2NNaOH(jfoiadicionadoocidoroslicopreviamente). Aincubaodofiltrofazsepor2426ha4445oC. Se colnias azuis, reaco (+), indica a presena de coliformes fecais. Coliformes no fecais (do ambiente) do colnias cinzentas ou creme. E. coli atpica pode dar colniasamareloplido.

ResultadoseDiscusso: Os resultados obtidos, aps os perodos de incubao e testes confirmatrios, sero expressos em n de bactrias/100ml de acordo com as normas relativas a anlisemicrobiolgicadegua.Acontagemdascolniasserfeitacomauxiliode umalupa,quandonecessrio. Bibliografiaparaamostragemeresultados: Bordalo,A.A.(2003).Microbiologicalwaterqualityinurbancoastalbeaches:the influenceofwaterdynamicsandoptimizationofsamplingstrategy.Water Research37:32333241. DirectivadoParlamentoEuropeuedoConselhorelativaqualidadedasguas balneares.COM(2002)Bruxelas. Shibata,T.,SoloGabriele,H.M.,Fleming,L.E.,Elmir,S.(2004).Monitoring marinerecreationalwaterqualityusingmultiplemicrobialindicatorsinanurban tropicalenvironment.WaterResearch38:31193131. WHO (1999) Healthbased monitoring of recreational waters: the feasibility of a newapproach(TheAnnapolisProtocol),Geneva,1999. WHO(2000).MonitoringBathingWaters:APracticalGuidetotheDesignand ImplementationofAssessmentsandMonitoringProgrammes.