Exudado Vaginal

Acumulacin de secreciones o material lquido desde una mucosa o tejido profundo afectado por un proceso inflamatorio, en el rea genital. Razones por las que se realiza el anlisis o prueba El examen se puede realizar para determinar la causa de vaginitis, dolor plvico, un flujo vaginal inusual u otros signos de infeccin. Tambin se usa para la deteccin de enfermedades de transmisin sexual. La evaluacin microscpica requiere evaluar tres caractersticas: - aspecto de las clulas epiteliales - aspecto del germen dominante y/o morfotipos presente - la presencia o ausencia de leucocitos.

Forma en que se realiza el anlisis o prueba -Se utiliza un espejo vaginal para revisar el crvix. En caso de gonorrea no se hace ningn tipo de limpieza y se recoge una muestra de exudado con ayuda de un hisopo; la muestra se debe sembrar de inmediato en la placa de agar de Thayer Martin y slo que sto no sea posible, se puede transportar en medio de Stuart. Cuando se sospecha de infeccin por clamidias, se limpia el exocrvix con un hisopo de algodn para eliminar el moco y el exudado, se introduce el hisopo (de alginato de calcio o de dacrn, nunca de algodn) o el cepillo unos 2 a 4 cm dentro del canal endocervical y se rota cuidadosamente presionando contra la pared, evitando el contacto con las superficies vaginales. Con esta muestra se deben hacer de inmediato frotes en portaobjetos limpios que se fijan de inmediato con acetona.

Preparacin para el anlisis o prueba No utilizar ningn medicamento ni ducha vaginal antes del examen (las duchas siempre se deben evitar debido al riesgo de infecciones uterinas o tubricas) Vaciar la vejiga de la paciente (tambin es preferible un intestino vaco). Quitar la ropa de la cintura para abajo. Colocar las piernas de la paciente en los estribos de la mesa de exploracin. Cubrir la parte inferior del cuerpo con una sabana. Lo que se siente durante el anlisis o prueba La paciente sentir presin del espculo, el instrumento que se introduce en la vagina para mantener abierta el rea, de manera que el mdico pueda examinar el cuello uterino y recolectar las

muestras. Puede haber una leve sensacin de clico cuando se toca el cuello uterino con el aplicador (hisopo). Los valores normales Los organismos que generalmente se encuentran en la vagina estn all en las cantidades esperadas. Significado de los valores anormales Los resultados anormales indican la presencia de una infeccin en el aparato genital femenino. El cultivo puede detectar: -C. trachomatis -Clamidia -E. coli -Gonorrea -Herpes simple

Cules son los riesgos No hay riesgos.

Frotis en fresco Material: Especulo vaginal, hisotopo o esptula de algodn, muestra, solucin salina al 0.85%, solucin NaOH, cubre y portaobjetos. La paciente no debe de haber utilizado medicacin tpica vaginal por lo menos 5 das previos del examen, ni practicado lavados vaginales 24 horas antes. El hisopo con la muestra de secrecin o exudado del fondo de saco vaginal posterior se introduce en un tubo con solucin salina al 0.85% y se observa entre cubre y portaobjeto. En esta preparacin se puede encontrar principalmente: Tricomonas Levaduras Leucocitos

Clulas del epitelio vaginal Tincin de Gram. Durante el exudado Vaginal con un hisopo se tomara una muestra del fondo de saco vaginal posterior y de las lesiones del cuello uterino. Dicho hisopo ser utilizado para la tincin de Gram. La flora bacteriana residente del tracto genital femenino est constituido principalmente por bacilos Gram (+) (Lactobacilos) y Staphylococcus epidermis. El pH vaginal vara segn la flora bacteriana y la catidad de gligeno presente en el epitelio. Este factor a su vez depende de la funcin ovrica; en la mayor parte de los casos predomina el lactobacilo (Doderlein) junto con bacilos intestinales aerobios, especies de bacteroides y Heamophillus, Enterococos y Staphyloccocus epidermis. El crvix normal generalmente es estril o contiene algunas bacterias; los microorganismos presentes son idnticos a los encontrados en la porcin alta de la vagina. La flora bacteriana de la vulva es una mezcla de los microrganismos presentes en la piel de esa rea y las bacterias de la vagina. Microorganismos Flora patgena o potencialmente patgena Neisseria Gonorrhoeae Haemophillus Vaginalis Haemophillus Ducreyi Staphylococcus aureus Streptococcus beta hemolitico Flora no aptogena.

Gram Negativos

Gram Positivos

Neisseria Catarrhalis Neisseria Flava Bacilos Coliformes Lactobacillus acidophilus Bacilus subtilis Difteroides Streptococcus no hemolitico Streptococcus faecalis Staphyloccocus epidermis Levadoras saprofitas Mycobacterium smegmatis

Gram variable Hongos

Gardnerella vaginales Candida albicans

Protozoarios Mycobacteria

Trichomona Vaginalis Mycobacterium tuberculosis

a) Frote para tincin Gram: Con las muestras obtenidas se hacen dos frotes separados en un solo portaobjetos rotando r presionando suavemente el hisopo sobre su superficie, de manera que no se destruyan las clulas y as la observacin de grmenes intracelulares pueda realizarse con certeza. Se buscan diplococos Gram negativos dentro de los leucocitos polimorfos nucleares, levaduras, bacilos Gram positivos con morfologa del bacilo de Doderlein, bacilos Gram negativos, cocos Gram positivos y Clulas gua (clulas epiteliales cubiertas de Haemophillus Vaginalis).

b) Preparacin en fresco: El hisopo con la muestra de secrecin se introduce en un tubo con solucin salina al 0.85% y se observa entre cubre y portaobjeto. En esta preparacin se puede encontrar principalmente: Trichomonas, levaduras, leucocitos, y clulas del epitelio vaginal.

Tcnica e interpretacin. Esta tcnica es la ms empleada en bacteriologa y nos permite distinguirlas en Gram positivas y Gram negativas. Material: Asa bacteriolgica. Mechero. Fenol. Algodn. Tren de tincin de Gram. Puente de coloracin. Porta objetos. Microscopio. Papel seda. Aceite de inmersin. Muestra.

Mtodo: 1. Seleccionar una colonia, de preferencia aislada, y tomar una asada. 2. En un portaobjetos con una gota de agua colocar la asada y homogenizar. 3. Despus de dejar secar, se fija con calor, pasando rpidamente el portaobjetos cerca de la flama del mechero dos o tres veces. 4. Colocar el portaobjetos sobre el puente de coloracin y proceder con lo siguiente: Gram (+) Crista violeta 60% Se tien. Lugol durante 60 Violeta. seg. Alcohol acetona No se descoloran. 10 seg. Safranina de 20 a Violeta. 30 seg. Gram (-) Se tien. Incoloro. Se descoloran. Rosado.

Tincin Inicial Mordente Descoloracin Contraste

Entre cada paso enjuagar con agua corriente. Al trmino de la tcnica se deja secar la preparacin y se procede a observar a microscopio. Siembra en medios generales y especficos Gardnerella vaginalis

Esta bacteria se va a poder aislar en agar sangre incubado en anaerobiosos o en una atmsfera de 5% de CO2 a 35c por 48 horas. Se originan colonias translucida u opacas de 0.3 a 0.5 mm de dimetro, puntiforme, redondas, lisas, con hemolisis tipo beta. Es importante mencionar que el microorganismo es exigente y no crece en agar-sangre o agar chocolate de sangre animal. La base principal para este cultivo es: Columbia Agar Base. Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes y para la buena visualizacin de hemlisis con el agregado de sangre.

Fundamento Este medio combina las virtudes de la peptona, de la triptena, del extracto de levadura y del extracto de corazn, que favorecen el desarrollo de microorganismos exigentes y la obtencin de colonias eugnicas. El almidn incrementa el desarrollo de neisserias y las reacciones de hemlisis de algunos estreptococos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el agar es el agente solidificante. Tiene la ventaja de permitir el agregado de sangre, o de antibiticos entre otras cosas, obtenindose as, un medio mas enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo. Es la base del agar sangre, agar chocolate y tambin puede usarse como base para el medio Thayer Martin.

Con el agregado de 5-10 % de sangre (de carnero, de caballo), se logra una buena observacin de las reacciones hemolticas. Si se calienta el agar sangre durante 10 minutos a 80 C, en bao mara, se transforma en agar chocolate y as se logra un medio ideal para el aislamiento de Haemophilus influenzae y neisserias patgenas. Interpretacin de los resultados Si se ha aislado G. vaginalis de muestras vaginales, el diagnstico resultante debe compararse con cuidado con los sntomas clnicos subjetivos y objetivos. Por lo general, si Gardnerella es la causa de la vaginosis bacteriana, las pacientes padecen un flujo mayor y con mal olor. El pH de las secreciones es >4,5 y las clulas indicio se encuentran presentes en la tincin de Gram. Candida Albicans

Los medios de cultivo utilizados para identificacin: Cultivo en agar dextrosa Sabouraud con y sin cicloheximida. Medio de peptona suplementado con dextrosa para favorecer el crecimiento de hongos. Las peptonas son fuentes de factores de crecimiento nitrogenados. La dextrona proporciona una fuente de energa para el crecimiento de microorganismos. El cloranfenicol es una ntibiotico de amplio espectro con factor inhibidor para una amplia gama de bacterias gran negativas y positivas cuando se agrega a la formula. Reactivos:

Procedimiento: Licuar agar dextrosa de saborouraud en tubos A mediante ebullicin en bao mara. Enfriar a 45-50 C y verter en placas de petri y dejar solidificar durante como mnimo 30 min. Inocular muestras representativas con los cultivos. Examinar los recipientes durante un mximo de 7 dias para ver si hay crecimiento y pigmentacin Resultados previstos: Para sabouraud dextrose agar Candida albicans crecimiento a las 72 hrs.

Para sabouraud dextrose agar con cloranfenicol Candida albicans crecimiento

Crecimiento de colonias levaduriformes, de bordes enteros, limitadas, poco elevadas y de color blanco. Crecen en un promedio de 3 a 5 das a temperatura ambiente. Al examen microscpico, se observan mltiples levaduras, redondas u ovales, nicas o en gemacin y en ocasiones formando seudomicelio. Algunas cepas de C. albicans y C. dubliniensis son resistentes a la cicloheximida. El crecimiento de colonias puras aisladas del mismo producto en cultivos consecutivos, apoya el papel patgeno de Candida.

Cultivo en Agar sangre (trypticase soja agar) El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias, aunque no es medio de eleccin para anaerobios. Permite visualizar reacciones hemolticas que producen muchas especies bacterianas. Tiene por base una fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) con una pequea cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sdico y 5% de sangre. La aportacin de caseina y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran varedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida y Neisseria El cloruro sdico proporciona electrolitos esenciales. La adicin de sangre de carnero desfibrinada enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del factor CAMP. Formulacin (segn Becton Dickinson):

Digerido pancretico de caseina 15.0 Digerido papaico de haba de soja 5.0 Cloruro Sdico Agar Factores de crecimiento Sangre desfibrinada de carnero 5.0 15.0 1.5 50.0

g g g g g ml

Permite as mismo determinar la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas extracelulares que actan sobre los glbulos rojos, ya sea por lisis completa (hemlisis beta, produce un halo transparentealrededor de la colonia hemoltica), parcial (hemlisis alfa, coloracin verdosa alrededor de la colonia) o por ausencia de alteracin (hemlisis gamma). La produccin de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales como pH o atmsfera de incubacin.

Bibliografa: lvarez Gasca Araceli, Argero Licea Bertha Instrumentacin y Laboratorio Manual de Procedimientos Bsicos FES Iztacala UNAM 2012 p.42 Deska Pagana Mosbys Manual of Diagnistic and Laboratory Test 2nd Ed. Mosby 2002 ARACELI, lvarez, BERTHA, Licea. Instrumentacin y Laboratorio, manual de procedimientos bsicos, UNAM FESI 2012, 3ra reimpresin, primera edicin, pp. 32 -34, 3942. Demesa AR, Valds LA, Garca RJF http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/candidosis.html 07/03/13 ; 11:35