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bachillerato

Biologa

Antonio Jimeno
Doctor en Ciencias Biolgicas. Catedrtico de Instituto

Manuel Ballesteros
Doctor en Ciencias Biolgicas. Profesor titular de la Universidad de Barcelona

Luis Ugedo
Doctor en Ciencias Biolgicas. Catedrtico de Instituto

Direccin editorial

Jos Manuel Cerezo

Edicin adaptada a los nuevos programas oficiales

Santillana

Presentacin
a buena acogida que tuvieron las tres ediciones anteriores del texto de Biologa de COU nos ha animado ahora a escribir esta Biologa para el actual Bachillerato. Hemos intentado hacer un texto expositivo claro, riguroso y actualizado que, por su extensin y facilidad de comprensin, sea un instrumento til para el alumno. Se ha preferido que sea un texto amplio, en el que no falte ninguna informacin bsica, para que as cada profesor pueda seleccionar aquellos aspectos que considere ms relevantes para sus alumnos. Para conseguir este objetivo ha sido de gran utilidad la intercalacin de los Documentos y Cuestionarios. Los Documentos generalmente contienen detalles que no son esenciales y cuya segregacin del texto facilita la comprensin de ste. En otras ocasiones contienen textos de ampliacin, aplicaciones, temas de inters actual o aspectos cotidianos de la Biologa. Los Cuestionarios persiguen un doble objetivo: por una parte, dado que se aprende ms haciendo que solamente atendiendo, facilitar la asimilacin de los contenidos, y por otra, aprender nuevos aspectos que se han introducido a travs de los enunciados. El hecho de que los Documentos y Cuestionarios aparezcan intercalados y no al final de cada tema favorece que se lean o realicen justo en el momento adecuado. Hemos seguido el mismo estilo expositivo, presentando los conceptos mediante definiciones claras y breves que eviten las malas interpretaciones y que permitan construir el pensamiento sin errores. Se han reestructurado los contenidos de acuerdo con el nuevo temario, y se han actualizado algunos aspectos de la actividad enzimtica, de la citologa, de la fotosntesis, de la evolucin de los metabolismos, y sobre todo de la ingeniera gentica y de la inmunologa, dados los rpidos avances habidos en estos ltimos aos. El libro tiene 23 temas distribuidos en cuatro bloques. Cada tema se inicia con una pgina introductoria en la que, mediante una gran fotografa y un breve texto, se intenta despertar el inters sobre el tema. Igualmente, al final de ste, generalmente se propone una prctica de laboratorio que permite introducir al alumno en el campo de la experimentacin. Es el prembulo procedimental imprescindible para poder proponer despus el diseo de experimentos que permitan evaluar la veracidad de las hiptesis, que es la esencia del mtodo cientfico. La presente edicin es una versin revisada, corregida y ampliada con todo un nuevo captulo dedicado a la actividad enzimtica y a la funcin hormonal. Finalmente deseamos dejar constancia de nuestro agradecimiento al equipo editorial y a los doctores Manuel Chiva, Merc Durfort, Miquel Llobera y Llus Serra, profesores de la Universidad de Barcelona.

LOS AUTORES

ndice
11. La Biologa y la sociedad 4

I. Base fsico-qumica de la vida

12. Los bioelementos, el agua y las sales minerales 13. Los glcidos 14. Los lpidos 15. Las protenas 16. La actividad enzimtica y la funcin hormonal 24 44 60 74 90

II. Estructura y fisiologa celular

7. La clula: unidad de estructura y funcin 8. Las envolturas celulares, el citoplasma y el centrosoma 9. Los orgnulos celulares 10. El ncleo y los cromosomas 11. La reproduccin celular 12. El metabolismo celular. El catabolismo 13. Anabolismo auttrofo 14. Anabolismo hetertrofo 116 132 146 158 172 190 208 226

III. Gentica
15. La gentica mendeliana 16. El ADN, portador del mensaje gentico 17. La duplicacin del ADN 18. El ARN y la expresin del mensaje gentico 19. Mutacin y evolucin 20. Los genes y la ingeniera gentica 246 266 280 290 306 322

IV. Microorganismos e inmunidad

21. Los microorganismos 22. Microorganismos: enfermedades y biotecnologa 23. El proceso inmunitario 24. Anomalas del sistema inmunitario 340 358 380 396
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N D I C E
INFORMACIN 1 La Biologa y los seres vivos.
Caractersticas de los seres vivos. Los niveles de organizacin biolgica. Clasificacin y nomenclatura de los seres vivos. La Biologa como ciencia.

La Biologa y la sociedad

2 El mtodo cientfico. 3 Hiptesis sobre el origen de la vida.

La formacin de monmeros y polmeros en la Tierra primitiva. La evolucin protobiolgica. Los primeros seres vivos. Evolucin de los primeros seres vivos.

4 La Biologa a travs de la historia. 5 La Biologa hoy.

La investigacin biolgica pura y aplicada. Biologa y Medicina. Biologa industrial. Biologa agrcola y ganadera. Biologa y medio ambiente.

Ganado vacuno estabulado en el estado de Falcn, Venezuela. La mejora de razas, como la del ganado vacuno, para conseguir mayor produccin de carne o leche, ha sido posible gracias a los avances en el campo de la Gentica, una de las ramas de la Biologa.

ACTIVIDADES

Las Ciencias Biolgicas tienen una extraordinaria importancia no slo en s mismas sino por sus relaciones con otras reas de la ciencia. Algunos descubrimientos de la Biologa como la capacidad de producir antibiticos en ciertos microbios, la manera como se transmiten los caracteres hereditarios, o el simple conocimiento de la diversidad y estructura de los seres vivos han tenido una gran importancia en el desarrollo de otras ciencias como la Medicina, la Agricultura y la Ganadera, o la Paleontologa, respectivamente. Los conocimientos de las Ciencias Biolgicas, y los que aportan otras ciencias como la Qumica y la Fsica, permiten explicar el funcionamiento de los fenmenos vitales en la Tierra.

1 La Biologa y los seres vivos

La Biologa es la ciencia que estudia la vida (bios vida; logos estudio). Si analizamos los trminos de esta definicin encontramos que: La Biologa es una ciencia porque su finalidad es el estudio razonado de la materia, en este caso de la materia viva. La vida es el conjunto de cualidades propias de los seres vivos. stos se definen como seres que poseen una compleja estructura material y son capaces de nutrirse, relacionarse y reproducirse, las tres funciones vitales. La Biologa, por lo tanto, estudia los seres vivos en todas sus formas y niveles, desde los seres unicelulares a los pluricelulares, desde los seres microscpicos a los macroscpicos, sean de naturaleza vegetal o animal, desde las clulas a las asociaciones de seres vivos. Tampoco las molculas escapan al estudio de la Biologa, no slo aquellas que por su complejidad son exclusivas de los seres vivos (las biomolculas orgnicas) sino tambin aquellas ms simples que tambin tienen importantes misiones en ellos (las biomolculas inorgnicas). En relacin con estas funciones cabe destacar que: Las molculas de los seres vivos no son estticas sino que reaccionan y estn en constante transformacin, para la obtencin de energa o para la construccin de estructuras propias. El conjunto de estas reacciones qumicas se denomina metabolismo. Los seres vivos deben su estructura corporal a la informacin biolgica contenida en las molculas de los cidos nucleicos. Cada una de estas informaciones se denomina gen. Los genes que contiene un ser vivo son hereditarios, es decir, pasan de un ser vivo a sus descendientes. Los seres vivos mantienen relativamente constante su medio interno, aun cuando el medio ambiente sea variable, lo que se denomina homestasis.

1. Caractersticas de los seres vivos

Los seres vivos u organismos son necesariamente complejos. Su complejidad afecta, entre otros aspectos, a las molculas que los componen y a cmo se organizan stas en asociaciones macromoleculares para formar las diferentes estructuras de los seres vivos. Los seres vivos se componen de clulas. Para algunos seres vivos, una clula es el propio organismo, por lo que se denominan seres unicelulares; otros, en cambio, se componen de muchas clulas, por lo que se llaman seres pluricelulares. La nutricin es la capacidad que tiene el ser vivo de captar materia del exterior y utilizarla en provecho propio, para crecer en tamao y para desarrollarse (cambiar de morfologa durante la vida) o bien simplemente para mantener su estructura y realizar las dems funciones vitales. La relacin es la capacidad de captar estmulos del exterior y emitir respuestas adecuadas a los mismos. Sin esta funcin, los seres vivos seran incapaces de nutrirse y de reproducirse. La reproduccin es la capacidad de originar nuevos individuos, iguales o muy parecidos a los progenitores.

1 Grupo de lobos marinos. Los seres vivos pertenecientes a una misma especie encuentran muchos beneficios al agruparse.

2. Los niveles de organizacin biolgica

Al observar la materia viva se pueden distinguir varios grados de complejidad estructural, que son los denominados niveles de organizacin. Cada uno de ellos proporciona unas propiedades a la materia viva que no se encuentran en los niveles inferiores. Los
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siete niveles de organizacin son: el nivel subatmico, el nivel atmico, el nivel molecular, el nivel celular, el nivel pluricelular, el nivel de poblacin y el nivel de ecosistema. Los niveles subatmico, atmico y molecular son niveles de organizacin abiticos, es decir, niveles de materia que tambin existen en los seres inanimados. Los restantes niveles son de tipo bitico, puesto que ya son exclusivos de los seres vivos. Las principales caractersticas de cada uno de estos niveles son las siguientes (fig. 3): 1. El nivel subatmico lo integran las partculas ms pequeas de la materia, como son los protones, los neutrones y los electrones. 2. El nivel atmico lo componen los tomos. stos son la parte ms pequea de un elemento qumico que puede intervenir en una reaccin. Por ejemplo, un tomo de hierro (Fe), un tomo de oxgeno (O), un tomo de carbono (C), un tomo de hidrgeno (H), etc. 3. El nivel molecular est formado por las molculas, que se definen como unidades materiales formadas por la unin, mediante enlaces qumicos, de dos o ms tomos, como, por ejemplo, una molcula de oxgeno (O2), una de carbonato clcico (CaCO3), etc. A las molculas que forman la materia viva se las llama biomolculas o principios inmediatos, como, por ejemplo, la glucosa (C6H12O6). Todas las molculas que, bsicamente, estn constituidas por tomos de carbono unidos mediante enlaces covalentes se denominan molculas orgnicas, ya que se crea que solamente las podan producir los seres vivos. Actualmente se ha logrado la sntesis artificial de compuestos de carbono que nunca aparecen en los seres vivos, como, por ejemplo, los plsticos; por este motivo es preciso distinguir dentro de las molculas orgnicas entre biomolculas y no biomolculas. Dentro del nivel molecular existen varios grados de complejidad o subniveles, como, por ejemplo, las macromolculas, los complejos supramoleculares y los orgnulos celulares.

Las macromolculas resultan de la unin de muchas molculas orgnicas en un polmero. Cada una de las unidades que se repiten en el polmero es un monmero. As, por ejemplo, el almidn (macromolcula) es un polmero de glucosa (monmero) (fig. 2), las protenas (macromolculas) son polmeros formados por aminocidos (monmeros), los cidos nucleicos (macromolculas) son polmeros de nucletidos (monmeros). Varias macromolculas pueden unirse en un complejo supramolecular, como por ejemplo cuando protenas y glcidos se unen para formar las glucoprotenas. Adems, los complejos supramoleculares pueden encontrarse asociados formando orgnulos celulares, como los lisosomas, las mitocondrias, los cloroplastos, el retculo endoplasmtico, los ribosomas, el aparato de Golgi, etc. Los orgnulos celulares no son considerados todava como seres vivos, puesto que carecen de la mayora de las caractersticas de los seres vivos anteriormente citadas. Los virus son complejos supramoleculares que estn constituidos por dos tipos de macromolculas: las protenas y los cidos nucleicos. 4. El nivel celular comprende las clulas. stas son unidades de materia viva constituidas por una membrana y un citoplasma. Se distinguen dos tipos de clulas: las clulas procariotas y las eucariotas. Las clulas procariotas son las que carecen de envoltura nuclear. En ellas, por lo tanto, la informacin gentica se halla dispersa en el citoplasma, generalmente ms o menos condensada en una regin denominada nucleoide. Las clulas eucariotas son las que tienen la informacin gentica rodeada por una envoltura nuclear, constituyendo un ncleo bien diferenciado (fig. 4). Las clulas son las partes ms pequeas de materia viva que pueden existir libres en el medio. Los organismos unicelulares se componen de slo una clula, que debe desarrollar todas las funciones vitales. Son organismos unicelulares procariotas las bacterias y las arqueobacterias, mientras que son organismos unicelulares eucariotas los protozoos y las algas y hongos unicelulares. En ocasiones, los organismos unicelulares se asocian formando colonias, pero stas no se incluyen en el siguiente nivel, el pluricelular, ya que cada clula sigue realizando individualmente todas las funciones.

O O

O O

O O

2 Las molculas orgnicas suelen tener como esqueleto tomos de carbono unidos covalentemente entre s; adems, muchas de ellas son polmeros, es decir, conjuntos formados por la unin de muchos monmeros. En la molcula del almidn, el monmero que se va repitiendo es la glucosa.

1) NIVEL SUBATMICO Protones Neutrones Electrones

BIOSFERA Seres vivos y superficie terrestre.

2) NIVEL ATMICO tomos

7) NIVEL DE ECOSISTEMA Interaccin entre la comunidad y factores abiticos del biotopo.

3) NIVEL MOLECULAR Molculas Macromolculas Capacidad de llevar a cabo funciones biolgicas simples.

COMUNIDAD Poblaciones de seres vivos diferentes que habitan en el mismo medio. Interaccin entre especies: depredacin, parasitismo, simbiosis

ORGNULOS CELULARES Mitocondrias Cloroplastos Ncleo Capacidad de llevar a cabo funciones biolgicas complejas. 6) NIVEL DE POBLACIN Seres vivos de la misma especie que viven en un rea determinada. Evolucin, organizacin social.

4) NIVEL CELULAR La parte ms pequea de materia viva que puede existir en el medio. Clula: la parte ms pequea de materia viva capaz de nutrirse, reproducirse y relacionarse.

5) NIVEL PLURICELULAR Tejidos rganos Aparatos Sistemas Propiedades biolgicas complejas: inteligencia, instinto, olfato, vista

3 Niveles y subniveles de organizacin biolgica. Se puede notar cmo en cada paso se incrementa la complejidad y se aaden nuevas propiedades. Se han distinguido 7 niveles.

5. El nivel pluricelular abarca a aquellos seres vivos que estn constituidos por ms de una clula. Dentro de este nivel tambin pueden distinguirse varios grados de complejidad o subniveles: los tejidos, los rganos, los sistemas y los aparatos. El propio ser vivo multicelular puede considerarse como el grado ms alto de complejidad de este nivel: el subnivel de organismo pluricelular. Los tejidos son conjuntos de clulas especializadas muy parecidas, que realizan la misma funcin y que tienen un mismo origen. Cuando un organismo pluricelular slo tiene un tipo de clulas, se dice que tiene estructura de talo, como ocurre en las algas pluricelulares y los hongos pluricelulares. Los rganos son las unidades estructurales y funcionales de los seres vivos superiores. Los rganos estn constituidos por varios tejidos
4 Microfotografa de una neurona extrada de mdula de gato. Las neuronas (nivel celular) son las unidades bsicas del tejido nervioso (nivel pluricelular).

diferentes y realizan un acto concreto. Por ejemplo, el corazn est formado por tejido muscular, tejido epitelial y tejido nervioso y se encarga de bombear la sangre en la circulacin sangunea. Los sistemas son conjuntos de rganos parecidos, ya que estn formados por los mismos tejidos, pero que realizan actos que pueden ser completamente independientes. Por ejemplo, en el sistema muscular hay msculos que mueven la cabeza, otros que mueven los brazos, otros que mueven las piernas, etc. Otros sistemas son el seo, el nervioso y el endocrino. Los aparatos son conjuntos de rganos que pueden ser muy diferentes entre s, pero cuyos actos estn coordinados para constituir lo que se llama una funcin. Por ejemplo, el aparato digestivo est formado por rganos tan diferentes como los dientes, la lengua, el estmago, el pncreas, etc., y todos coordinados realizan la funcin de la digestin. 6. Nivel de poblacin. Abarca a las poblaciones. Se entiende por poblacin el conjunto de individuos de la misma especie que viven en una misma zona y en un momento determinado; por ejemplo, la poblacin de conejos que habita en la actualidad el macizo del Montseny (Catalua). En este nivel se consideran los organismos de la misma especie, no en cuanto a individuos concretos, sino desde el punto de vista de las relaciones que entre ellos se establecen, tanto en el espacio como en el tiempo. 7. En el nivel de ecosistema se estudian tanto el conjunto de poblaciones de diferentes seres vivos que viven interrelacionadas, la llamada comunidad o biocenosis, como el lugar, con sus condiciones fisicoqumicas, en donde se encuentran, el llamado biotopo. El conjunto de biocenosis y biotopo se denomina ecosistema. El conjunto de ecosistemas de toda la Tierra o biosfera puede ser considerado como el nivel ms complejo de organizacin de los seres vivos.

animales. Sin embargo, se puede decir que el estudio moderno y sistematizado de los seres vivos comenz en el siglo XVIII, con las ideas del sueco Carl von Linn (1707-1778), quien estableci agrupaciones jerarquizadas o taxones de seres vivos y propuso la famosa nomenclatura binomial para nombrar a las diferentes especies. Los diferentes taxones aceptados en la actualidad son, de menor a mayor, la especie, el gnero, la familia, el orden, la clase, el phylum y el reino. Tambin, segn el grupo de ser vivo de que se trate, puede haber subtaxones de los anteriores, como subphylum, subclase, suborden, etc. La parte de la Biologa que estudia la definicin de taxones de seres vivos se llama Taxonoma, y la que estudia la agrupacin y jerarquizacin de estos taxones se denomina Sistemtica. Cada uno de los tipos de seres vivos, segn la nomenclatura binomial de Linn, viene definido por los dos taxones ms inferiores, el gnero y la especie, que deben recibir un nombre en latn. Por ejemplo, el pez conocido vulgarmente como salmonete de roca se denomina cientficamente Mullus surmuletus; el primer nombre, Mullus, es el del gnero, mientras que el segundo, surmuletus, es el de la especie. Como se ve, el nombre del gnero va con la inicial en mayscula, mientras que la especie va con la inicial en minscula. Otro pez, muy parecido al anterior, es el salmonete de fango, que se denomina Mullus barbatus. Aunque se trata de una especie (barbatus) distinta de la del salmonete de roca (surmuletus), tiene unas caractersticas morfolgicas y embriolgicas muy parecidas a l, por lo que pertenece al mismo taxn genrico (Mullus). Un mismo gnero puede, por lo tanto, incluir a varias especies, pero dos tipos de seres vivos distintos no pueden tener la misma combinacin de nombres genrico y especfico. Para completar la nomenclatura binomial de los seres vivos, a continuacin del nombre especfico debe ir el nombre del cientfico que primero efectu la descripcin de la especie en cuestin, y a continuacin el ao en que fue publicada esta descripcin en una revista cientfica. En los dos ejemplos anteriores de peces, ambos fueron descritos por vez primera por Linn en 1758, de modo que el nombre de este autor y esta fecha deben ir a continuacin de los dos nombres latinos. Varios gneros similares se pueden agrupar en una familia, varias familias en un orden y varios rdenes en una clase. Varias clases de seres vivos que tienen un tipo concreto de organizacin corporal constituyen un tipo o phylum. Finalmente, el taxn ms superior es el de reino, que contiene todos los tipos que poseen un mismo patrn de complejidad estructural. En la actualidad es aceptada la existencia de cinco reinos: el reino de los mneras, el de los protoctistas, el de los hongos, el de los vegetales y el de los animales.

3. Clasificacin y nomenclatura de los seres vivos

Para estudiar las numerosas especies de seres vivos ha sido necesario ordenarlos en grupos. Se han realizado, a lo largo de la historia de la Biologa, algunos intentos para ordenar a los seres vivos, de una manera ms o menos coherente, en grupos que tuvieran caractersticas similares. As, por ejemplo, ya Aristteles, en el siglo IV a.C., dividi los seres vivos en dos grandes grupos, el de los vegetales y el de los
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 El reino de los mneras lo forman seres unicelulares procariotas, es decir, los que carecen de ncleo celular. Son las arqueobacterias y las eubacterias. El reino de los protoctistas abarca a seres hetertrofos unicelulares de digestin interna como los protozoos, o auttrofos fotosintticos, unicelulares o pluricelulares de organizacin taloftica (sin tejidos), como las algas. Los hongos son seres eucariotas, unicelulares o pluricelulares de organizacin taloftica, de nutricin hetertrofa y digestin externa. El reino de las plantas o metafitas lo constituyen los organismos eucariotas, pluricelulares, con tejidos diferenciados y con nutricin auttrofa fotosinttica, como los musgos, los helechos y las plantas superiores o espermatfitos. El reino animal o metazoos abarca los seres vivos eucariotas, pluricelulares con tejidos bien formados y de nutricin hetertrofa; ejemplos de este reino son los animales invertebrados (los moluscos, los artrpodos, los equinodermos, etc.) y los vertebrados (peces, anfibios, reptiles, aves y mamferos). Los virus se encuentran en la frontera entre la materia viva y la inanimada. Pese a presentar la funcin de reproduccin, no son considerados autnticos seres vivos, sino simplemente materia, que en determinados momentos (cuando se encuentran dentro de clulas vivas) es materia viva. Los virus que infectan a los animales no infectan a los vegetales ni a las bacterias, y viceversa. Se puede considerar a los virus como parte de los organismos a los que infectan, que se han independizado de ellos, y que pueden llevar una vida distinta. Por este motivo no constituyen una lnea filogentica distinta de los cinco reinos anteriores y, por lo tanto, no constituyen un reino (figura 5).

ocumento 1

El comienzo de la clasificacin cientfica moderna

En la segunda mitad del siglo XVIII destaca en el mundo de las ciencias naturales el sueco Carl von Linn (1707-1778), fijista y aristotlico, que perfeccion la nomenclatura de los seres vivos iniciada por Ray y estableci el sistema de nomenclatura binomial de las especies actualmente en uso. Su obra Systema naturae (1735, primera edicin), en la que nombraba y clasificaba a los animales y las plantas, sirvi de base para la sistemtica moderna.

Nomenclatura y taxonoma de la jirafa, Giraffa camelopardalis, Linn, 1758. Reino animal: phylum cordados, subphylum vertebrados, clase mamferos, orden artiodctilos, familia jirfidos, gnero Giraffa, especie G. camelopardalis.

ocumento 2

La filogenia molecular y la ordenacin de los seres vivos

Recientemente se ha propuesto otra manera de dividir a los seres vivos en macroagrupaciones o dominios basndose en la informacin que proporciona el estudio de la secuenciacin molecular de los cidos nucleicos, principalmente del ARN ribosmico. La filogenia molecular, como se conoce a este mtodo de ordenacin, determina la existencia de slo tres grupos o dominios de seres vivos: el de los Archaea, que agrupa a todas las arqueobacterias, el de las Bacteria, donde se incluyen todas las eubacterias, y el de los Eucarya, donde tienen cabida todos los dems seres vivos, es decir, los eucariotas. Estos tres tipos de seres vivos se habran originado muy temprano en la evolucin de la vida a partir de un ancestro muy arcaico, no se sabe si procariota o eucariota. Los eucariotas primitivos evolucionaron y dieron lugar a los protozoos, las algas y a los eucariotas superiores, las plantas y los animales.

4. La Biologa como ciencia

La Biologa es una ciencia extremadamente amplia no solamente porque se encarga de estudiar todos los grupos de seres vivos, sino porque adems lo hace desde diferentes puntos de vista. As, los seres vivos pueden ser estudiados desde el punto de vista de su forma y estructura, de su funcionalismo, de su comportamiento, de su desarrollo o del tipo de seres de que se trate. Todo ello determina que la Biologa tenga diferentes ramas con un objetivo concreto (cuadro I). Realmente se debe hablar ms bien de Ciencias Biolgicas que de ciencia de la Biologa.

METAFITAS ( PLANTAS)

METAZOOS ( ANIMALES)

Angiospermas

HONGOS Basidiomicetes

Anfibios Mamferos Aves Peces

Helechos Equinodermos Gimnospermas Musgos Licopodios Ascomicetes Moluscos Anlidos Nematodos Mohos Cnidarios Crustceos

Reptiles

Arcnidos

Insectos

Equisetos Algas verdes Algas pardas Algas rojas Flagelados Protozoos ameboides EUCARIOTAS Arqueobacterias Eubacterias Algas amarillas Ciliados

Platelmintos Esponjas

PROTOCTISTAS

MNERAS PROCARIOTAS

5 Los cinco reinos de seres vivos. Rama Anatoma Biofsica Bioqumica Botnica Citologa Ecologa Embriologa Etologa Evolucin Filogenia Fisiologa Objeto de su estudio Estructura de los seres vivos Procesos fsicos en los seres vivos Composicin qumica de la materia viva Los seres vegetales Estructuras y funciones de las clulas Los ecosistemas Desarrollo de los vulos fecundados Comportamiento animal Modificacin y aparicin de nuevas especies con el tiempo Relaciones evolutivas de parentesco entre los seres vivos Funciones de los seres vivos Rama Gentica Gentica de poblaciones Histologa Microbiologa Morfologa Organografa Paleontologa Sistemtica Taxonoma Virologa Zoologa Objeto de su estudio Herencia de los caracteres biolgicos Herencia de los caracteres en una poblacin de seres vivos Estructura y funciones de los tejidos Seres microscpicos Forma y origen embriolgico de las estructuras de los seres vivos Estructura de los rganos La vida en pocas pasadas Ordenacin de los taxones de los seres vivos Agrupacin de los seres vivos en taxones Los virus Los seres animales

CUADRO I. Principales ramas de la Biologa.

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El mtodo cientfico

Recogida de informacin: observacin del fenmeno, planteamiento de preguntas EXPERIMENTACIN

Formular hiptesis

Como toda ciencia, la Biologa busca explicar razonablemente los fenmenos observados en su rea, es decir, en los seres vivos. Adems, tambin intenta establecer una serie de principios generales por los cuales estos fenmenos se llevan a cabo. Todo esto se realiza mediante un modo de proceder sistemtico denominado mtodo cientfico (fig. 6). El mtodo cientfico en Biologa comienza cuando se buscan respuestas a diversos fenmenos de la naturaleza. La observacin de la naturaleza conduce frecuentemente a la obtencin de datos difciles de interpretar inicialmente. As, se llega al planteamiento de preguntas o interrogantes que es necesario contestar. El mtodo seguido para ello es establecer una o ms hiptesis sobre el funcionamiento del fenmeno estudiado. Las hiptesis, para ser aceptadas o rechazadas, deben ser sometidas a tests de experimentacin: se tienen que disear diferentes experimentos relacionados con el fenmeno estudiado, analizar los resultados obtenidos y compararlos con los que se esperaran si la hiptesis fuera cierta. El anlisis de los resultados de estos experimentos y de otros experimentos independientes puede ser suficiente para aceptar o no las hiptesis iniciales o para establecer otras nuevas hiptesis. Finalmente, cuando las hiptesis han sido repetidamente verificadas por la observacin y la experimentacin, se procede al enunciado de teoras o modelos de funcionamiento del fenmeno en cuestin. En ocasiones, algunos fenmenos en Biologa no pueden ser comprobados definitivamente, pero los datos que se tienen sobre su funcionamiento son tan numerosos y significativos que, a pesar de todo, se puede hablar de una teora para explicarlo. Tal es el caso de la teora de la evolucin de las especies, propuesta por Darwin: nunca podremos ver con nuestros ojos cmo una especie se modific y origin otra nueva especie, pero hay tantos datos de diferente tipo (paleontolgicos, morfolgicos, embriolgicos, etc.) que se tiene la certeza casi absoluta de que las especies se originan por evolucin. Uno de los primeros ejemplos de aplicacin del mtodo cientfico tuvo relacin con las ideas sobre la generacin espontnea. La idea de que algunos seres vivos podran originarse directamente de objetos inanimados, adems de mediante actos de procreacin de sus progenitores, imper en el mundo de las ciencias durante siglos. Aristteles (siglo IV a.C.), a pesar de los avances que impuls en el mundo de las Ciencias Naturales, eliminando la fantasa que exista en muchos de los tratados de sus predecesores,

Diseo de experimentos

Realizacin de experimentos Resultados esperados (si la hiptesis fuera correcta)

Comparacin

Anlisis de los resultados obtenidos

Extraccin de conclusiones Resultados de experimentos independientes Aceptacin o rechazo de la hiptesis Repetidas verificaciones Enunciado de teoras

6 Esquema de los pasos seguidos en el mtodo cientfico.

y estimulando la observacin de la naturaleza e incluso la experimentacin, admita la generacin espontnea. Esta creencia tuvo tanta aceptacin en la antigedad que se llegaron a proponer frmulas para obtener seres vivos. Las moscas, segn esta idea, provenan de la carne en putrefaccin, las anguilas del barro, las ranas de la lluvia, las ratas de la ropa sucia, y de las hojas de algunos rboles, al caer al agua, se formaban peces y al caer en la tierra se formaban pjaros. El cientfico italiano Francesco Redi, a comienzos del siglo XVII, se cuestion seriamente la generacin espontnea. En aquella poca era creencia general que los gusanos aparecan a partir de la carne en putrefaccin; sus propias observaciones indicaban que los gusanos aparecan en la carne pasados varios das despus de que las moscas se posaran en ella. Relacion la aparicin de gusanos con la presencia de moscas y elabor una hiptesis al respecto: los gusanos proceden de moscas que ponen huevos en la carne podrida. Para ver si su hiptesis era cierta o no, dise unos experimentos, que se han hecho famosos, con los que pudo comprobar que los gusanos slo aparecan en la carne a la que haban tenido acceso las moscas. Con estos resultados y con los de otros experimentos similares que llegaron a la misma conclusin, Redi estableci una teora: los gusanos de la carne no se originan espontneamente de la materia muerta sino que se forman a partir de moscas que ponen sus huevos en la carne (fig. 7).
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Moscas

Abertura sellada con cera

Abertura cerrada con gasa

Carne con gusanos

Carne sin gusanos

Carne con gusanos

Carne sin gusanos

7 Experimentos de Redi sobre la generacin espontnea. Inicialmente (a), Redi coloc restos de seres vivos en dos recipientes: uno de ellos lo mantuvo abierto y en el otro sell su abertura con cera. Comprob que slo en el abierto, en donde podan entrar moscas adultas, aparecan gusanos en la carne podrida. En un experimento posterior (b) efectu el mismo proceso, pero esta vez el segundo recipiente lo tap con un trozo de gasa, por lo que no podan entrar las moscas, pero s el aire fresco. Volvieron a aparecer gusanos sobre la carne en putrefacin del recipiente abierto, mientras que no aparecieron en la carne del recipiente cubierto de gasa. Con este segundo experimento, Redi comprob que no es la ausencia de aire fresco lo que impide la presencia de gusanos en la carne sino el impedimento que tienen las moscas para poner huevos en la carne del recipiente cubierto de gasa. La conclusin a la que lleg Redi es que los gusanos provienen de las moscas y no de la generacin espontnea.

Estos experimentos sirvieron para empezar a rebatir la idea de la generacin espontnea, pero no convencieron a todos los cientficos de la poca. Como por ejemplo, T. Needham, cientfico del siglo XVIII, que tras introducir tejidos animales y vegetales en frascos hermticos y calentarlos, haba observado la aparicin de microorganismos, por lo que defendi la generacin espontnea para los microbios. Posteriormente Spallanzani demostr que si se evitaba la presencia de aire en los frascos calentados, no aparecan microbios. Contra ello se dijo que era precisamente por falta de aire por lo que no aparecan. Quien finalmente contribuy a desmontar esta teora fue el microbilogo francs Louis Pasteur. Este cientfico realiz en 1860 un experimento similar al que efectu Redi, doscientos aos antes. Pasteur ya saba que en el aire existan pequeas estructuras que recordaban a ciertos microbios y a esporas de hongos, y postul que estos cuerpos se depositaban constantemente sobre todos los objetos y eran los causantes de la descomposicin de los cadveres de los seres vivos. El experimento de Pasteur, bsicamente, consisti en introducir un caldo de cultivo en un recipiente de cuello estrecho y largo; posteriormente dobl el cuello en forma de S mediante calor, dej su extremo abierto y calent el caldo hasta la ebullicin. Si se dejaba enfriar el caldo, y el recipiente se mantena vertical, no se produca contaminacin microbiana del caldo, incluso despus de largo tiempo. Pero si el recipiente se inclinaba hasta que el caldo contactaba con la abertura del cuello (cargada de microbios), en poco tiempo se produca la contaminacin del caldo por microbios. Con ello,
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Pasteur demostr que la falta de crecimiento en el recipiente vertical no era debida a la destruccin de algn principio vital por el calentamiento del caldo sino a la ausencia de contaminacin de bacterias del aire (fig. 8). Se dio, pues, el portazo final a la hiptesis de la generacin espontnea: los seres vivos proceden de otros seres vivos.
Polvo y microbios retenidos

Cuello del frasco curvado con calor

Caldo vertido en el frasco

Hervido del caldo

Frasco vertical. El caldo permanece sin microbios.

Frasco inclinado

Caldo contaminado con microbios

8 Experimento de Pasteur.

CUESTIONARIO 1
1. Indica las tres caractersticas ms importantes que definen a los seres vivos. 2. Seala algunas propiedades que tengan en comn los seres inanimados y los seres vivos. 3. Ordena los siguientes conceptos, de los ms complejos a los ms simples: clula, electrn, poblacin, tomo, hormiga, protena, bosque, mitocondria. 4. Indica los niveles de organizacin que tiene un grupo de clulas en la que stas son todas iguales y cada una desarrolla todas las funciones. 5. Busca en enciclopedias generales a qu taxones (desde phylum hasta especie) pertenecen los seres vivos siguientes: salmonella, coral rojo, ciprs, caracol de huerta, nscalo, saltamontes, levadura, sargazo, sardina, especie humana. 6. Qu es lo que estudian la Histologa, la Anatoma, la Morfologa y la Fisiologa? 7. Indica cmo aplicaras el mtodo cientfico para probar la siguiente afirmacin: la administracin de vitamina C reduce la incidencia del resfriado comn.

3 Hiptesis sobre el origen de la vida

Se calcula que la Tierra se form hace unos 4.500 millones de aos. Este proceso dio lugar a una corteza slida rodeada por una atmsfera reductora, puesto que careca de oxgeno. Se cree que la atmsfera primitiva se compona principalmente de metano, amoniaco, dixido de carbono, hidrgeno y vapor de agua. Se supone adems que los gases de esta atmsfera estaban sometidos a los efectos de la radiacin solar, de descargas elctricas y de erupciones volcnicas. En esta etapa tan arcaica se inici la evolucin abitica en la que se form el medio fsico-qumico que luego sirvi de alimento a los primeros seres vivos. Debi de ocurrir tambin una evolucin bioqumica en la que molculas inorgnicas de la Tierra primitiva reaccionaron para formar las primeras biomolculas orgnicas (monosacridos, aminocidos, nucletidos, etc.). El modo sobre cmo se originaron los primeros seres vivos, en forma de clulas de estructura muy primitiva, no est todava aclarado. Se han establecido una serie de hiptesis para explicarlo.

+
Electrodo Descargas elctricas 1 H2O CH4 NH3 H2

Condensador 2 Matraz con agua Algunos compuestos que se sintetizan en el experimento: Formaldehdo: HCHO cido actico: CH3COOH cido lctico: CH3CHOHCOOH Glicina: NH2CH2COOH Cianuro de hidrgeno: HCN Urea: H2NCONH2

Resistencia

9 Esquema del aparato del experimento de Miller. 1, 2, 3: vlvulas para extraer muestras.

1. La formacin de monmeros y polmeros en la Tierra primitiva

En la dcada de los cincuenta, los investigadores americanos Miller y Urey disearon un aparato con el que simularon las condiciones que se supone posea la atmsfera primitiva de la Tierra (fig. 9). Introdujeron en el recipiente esfrico diversos gases como metano, amoniaco, hidrgeno y vapor de agua y los sometieron durante varios das a descargas elctricas. Posteriormente comprobaron que en el recipiente con agua haban aparecido molculas orgnicas sencillas como aminocidos, aldehdos y cidos carboxlicos. Aos ms tarde, otros cientficos como el espaol Juan Or y el norteamericano Fox realizaron

experimentos similares y lograron obtener otros monmeros como monosacridos, urea, cidos grasos y nucletidos. De acuerdo con estos resultados, se admite que en condiciones semejantes, a partir de la atmsfera primitiva, se sintetizaron las primeras biomolculas orgnicas, que luego se fueron depositando sobre la superficie terrestre y que luego fueron arrastradas hasta el mar, formndose la sopa o caldo primitivo. Se piensa que los primeros polmeros de biomolculas se formaron cuando se concentraron molculas de monmeros en el caldo primitivo, sobre todo en las orillas del mar primitivo y de los lagos continentales, por evaporacin del agua. Se cree que para ello
13

fueron de gran importancia las arcillas de los sedimentos de mares y lagos, pues tienen una gran superficie de adsorcin, lo que pudo facilitar que ciertas molculas de monmeros se unieran a ellas y estas partculas de arcillas sirvieran de centros catalticos de las reacciones de sntesis de polmeros. Al concentrarse los monmeros, stos empezaron a unirse mediante enlaces qumicos formando biomolculas ms complejas o polmeros, como las protenas, originadas a partir de la unin de muchos aminocidos, los cidos nucleicos, compuestos de nucletidos, y las membranas de fosfolpidos, capaces de formar espontneamente esferas que engloban agua.

Almidn P Glucosa 1-fosfato

P Fosforilasa

2. La evolucin protobiolgica
Se conoce con este nombre el proceso de transformacin progresiva de los polmeros del caldo primitivo hasta llegar a la formacin de las primeras clulas. Se han propuesto diversas teoras, no excluyentes, sobre el origen de la vida en la Tierra: a) La hiptesis de los coacervados. El investigador sovitico Oparin fue el primero en indicar la necesidad de una evolucin qumica previa a la aparicin de la vida y propuso, en la segunda dcada de este siglo, los coacervados como precursores de los seres vivos en la Tierra. Este investigador define los coacervados como microscpicas gotas formadas por una envoltura de polmeros y un medio interno en el que podran existir enzimas, que quedaran aisladas del exterior. Los coacervados se habran formado en el caldo primitivo al ponerse en contacto espontneamente los polmeros en solucin acuosa. Segn Oparin, los coacervados poseeran un metabolismo muy sencillo al disponer de molculas catalticas como enzimas, lo que les permitira crecer al captar molculas del exterior y dividirse al adquirir un determinado tamao o tamao crtico (fig. 10). Oparin logr obtener coacervados en el laboratorio y al aadirles enzimas procedentes de otras clulas, como la enzima fosforilasa, consigui que se biosintetizaran, que crecieran y que se dividieran. Esta hiptesis no explica el origen de las enzimas internas de los coacervados ni cmo podran evolucionar los coacervados, al carecer stos de informacin gentica. b) La hiptesis de las microesferas proteinoides. En la dcada de los setenta, intentando encontrar un tipo de coacervado con actividad enzimtica propia, el cientfico americano Fox propuso las microesferas proteinoides como precursoras de los seres vivos. Segn Fox, en las regiones volcnicas de la Tierra primitiva prximas al mar, las mezclas de aminocidos
14

Membrana de polisacrido

10 Coacervado formado por una envoltura de polisacrido (almidn) y por protena cataltica (fosforilasa). El monmero glucosa-1-fosfato, aadido al medio donde se encuentran los coacervados, entra en el medio interno del coacervado y se une al polmero de almidn gracias a la accin de la enzima fosforilasa. Esta polimerizacin hace que el coacervado vaya aumentando de volumen y, al llegar a un tamao determinado (tamao crtico) se divide en dos coacervados hijos. Este crecimiento y divisin de los coacervados se va produciendo siempre que haya en el medio enzima fosforilasa y glucosa-1-fosfato.

del caldo primitivo se calentaron a temperaturas de entre 130 y 180 C y posteriormente se desecaron, formndose polmeros, a los que Fox llam proteinoides termales. Este hecho se ha comprobado experimentalmente en el laboratorio. Estos polmeros de aminocidos forman pequeas gotitas, las microesferas. stas tendran una cierta capacidad cataltica debida a la presencia de molculas enzimticas en su interior. Seran tambin capaces de captar energa a partir de la ruptura de enlaces de molculas del exterior y se podran dividir mediante procesos de escisin o de gemacin. Aunque las microesferas de Fox probablemente hayan sido las precursoras de los primeros seres vivos o protobiontes, esta hiptesis tampoco explica la transmisin de informacin gentica y por lo tanto la evolucin hacia los seres vivos. Se cree que en aquella fase tan temprana de la evolucin protobiolgica debi de originarse alguna molcula capaz de tener actividad cataltica. c) Hiptesis sobre el primer gen. No se sabe a ciencia cierta cmo apareci la primera molcula capaz de autorreplicarse y que tuviera la informacin de cmo controlar catalticamente todos los procesos que se daban en el protobionte. Probablemente, la primera de estas molculas que tuvo informacin biolgica, los genes,

fue un ARN que tendra capacidad de autorreplicacin y adems funcin cataltica. La evolucin funcional posterior del protobionte determinara que la molcula de ARN cediera la funcin de contener la informacin gentica a la molcula de ADN, ms estable; las funciones catalticas seran otorgadas a las protenas enzimticas del protobionte, cuyas secuencias de aminocidos estaran codificadas por el propio ADN. El ARN perdi, de esta manera, su papel de molcula principal. En los organismos actuales, el ARN aparece como molcula intermediaria entre el ADN y las protenas. Se piensa que, una vez adquirida la informacin gentica, los protobiontes, constituidos por una doble membrana de fosfolpidos en cuyo interior haba cidos nucleicos, protenas y glcidos dispersos en agua, evolucionaron hasta alcanzar la estructura celular, en una atmsfera exenta de oxgeno. Tampoco se sabe qu apareci primero, si el protobionte o la molcula con informacin gentica, el llamado gen desnudo. A propsito de esto existe, an hoy, la antigua polmica entre Oparin y el cientfico britnico Haldane: mientras Oparin opinaba que el primero en aparecer fue el protobionte, Haldane era partidario de que primero apareci el gen desnudo y posteriormente se formaron los protobiontes, que incorporaron a estas molculas con informacin gentica.

Aunque queda la incgnita sobre el origen del primer ser vivo en la Tierra, s que se tienen abundantes datos sobre cmo fueron los primeros organismos que habitaron en ella. La Paleontologa o estudio de los fsiles (restos de seres vivos que vivieron en otras pocas) es una herramienta extraordinariamente til para ello. Los organismos ms antiguos que se conocen han aparecido en rocas de Australia y Sudfrica datadas en 3.500 millones de aos. En estas rocas se han encontrado fsiles de microorganismos procariotas muy parecidos a cianobacterias filamentosas. En otras formaciones fsiles, de la misma antigedad (3.500 ma), llamadas estromatolitos, tambin aparecen cianobacterias y otros microorganismos de tipo bacteriano. Estas formaciones, que se originaron por la compactacin y consolidacin de microorganismos bacterianos entre partculas sedimentarias, tambin se forman en la actualidad en zonas someras de algunos mares clidos (fig. 11). Se piensa que los primeros seres vivos unicelulares ya podran haber existido en la Tierra hace unos 4.000 millones de aos. La evolucin qumica y protobiolgica, por lo tanto, fue un proceso relativamente rpido y se desarroll, segn se cree, en los primeros 600 millones de aos de la historia de la Tierra. El proceso de evolucin orgnica hasta la formacin de los primeros seres eucariotas fue muy lento, puesto que durante 1.500 millones de aos (desde hace 3.500 millones de aos hasta hace 2.000 ma) slo hubo microorganismos procariotas en la Tierra. Los primeros eucariotas unicelulares aparecen en rocas datadas en 2.000 millones de aos y los primeros eucariotas pluricelulares en rocas de 1.000 millones de aos. La evolucin orgnica de los eucariotas pluricelulares fue explosiva, puesto que slo 500 millones de aos despus (hace 500 millones de aos), en el Paleozoico, ya vivan en la Tierra la gran mayora de grupos de animales y plantas vivientes en la actualidad y muchos ms que se extinguieron y no han llegado a nuestros das (fig. 12).

3. Los primeros seres vivos

No se sabe exactamente cmo se form el primer tipo de ser vivo. Incluso existe una hiptesis, la de la panspermia, que apuesta por un origen extraterrestre de la vida en la Tierra. La panspermia fue propuesta inicialmente por Arrhenius a finales del siglo XIX; este fsico-qumico sueco sostuvo que los primeros seres vivos de la Tierra llegaron a ella en forma de esporas (o panspermia) procedentes de otros planetas, habindose trasladado por el espacio. Otros autores ms modernos, como Crick, quien junto con Watson descubri la estructura molecular del ADN, y Hoyle, tambin apuestan por un origen extraterrestre de la vida sobre la Tierra. En 1969, analizando la composicin qumica de los restos de un meteorito cado en Australia, se pudo comprobar la presencia en ellos de diversas molculas orgnicas como aminocidos, pirimidinas y otras muy parecidas a cidos grasos, lo que supuso un refuerzo para esta hiptesis. En 1996, se encontraron, en meteoritos procedentes del planeta Marte, lo que parecen ser restos de seres vivos muy primitivos parecidos a las bacterias actuales. La panspermia explica la aparicin de la vida en la Tierra, pero no el origen de la vida misma.

11 Fotografa de estromatolitos en Hamelin Pool, Baha Shark, Australia.

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ERAS CENOZOICO MESOZOICO PALEOZOICO

Atmsfera oxidante

0,5

DESARROLLO DE LA TIERRA EVOLUCIN DE LA VIDA Glaciaciones. Abundantes angiospermas y mamferos. Gnesis de cordilleras. Abundantes conferas y reptiles. Violentas perturbaciones climticas y geolgicas. Rpida evolucin de plantas y animales. Deriva continental.

Miles de millones de aos 0 1 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 1 Bacterias anaerobias. 2 Bacterias fotosintticas. 3 Bacterias aerobias. 4 Eucariotas. 5 Pluricelulares. 2 3 4 5

1,0

Evolucin de seres pluricelulares.

2,0

Primeras clulas eucariotas. PROTEROZOICO

2,5

Abundantes estromatolitos.

13 Cronologa aproximada de la aparicin de las primeras clulas o seres vivos.

3,0

Acumulacin de oxgeno en la atmsfera.

Proliferacin de procariotas fotosintticos.

3,5

Fsiles ms antiguos de bacterias.

4,0

4,5

Mar primitivo. Primeras clulas. Desarrollo de la atmsfera Protobiontes. primitiva. Formacin de la corteza Evolucin qumica. terrestre. Formacin de la Tierra.

La existencia de oxgeno en la atmsfera favoreci la aparicin de procariotas quimiosintticos. Estos organismos fueron capaces de oxidar compuestos inorgnicos en estado reducido, con lo que obtenan energa, gracias a la reconversin de la cadena transportadora de electrones de la fotosntesis para su nueva actividad quimiosinttica. Los primeros fsiles de eucariotas son de hace unos 2.000 millones de aos. Segn la hiptesis autgena (fig. 14) de Taylor y Dobson, la clula eucariota procede de una gran clula procariota que se compartiment mediante membranas, formndose as los orgnulos celulares (ncleo, retculo endoplasmtico, vacuolas, etc.). En cambio, segn la hiptesis de la endosimbiosis (fig. 15) de Margulis y Sagan, la clula eucariota procede de una clula procariota ancestral anaerobia que habra englobado a otras clulas procariotas, establecindose una relacin de simbiosis y transformndose, cada una de ellas, en los diversos orgnulos celulares. As, se piensa que las mitocondrias habran surgido de bacterias aerobias, los cloroplastos de cianobacterias, los cilios y los flagelos de bacterias espiroquetas, etc. La gran cantidad de energa que desprende la combinacin del oxgeno con la materia orgnica favoreci que la respiracin aerbica fuera el tipo de metabolismo predominante en los organismos areos y de los que viven en aguas ricas en oxgeno. Posteriormente, hace unos 1.000 millones de aos, aparecieron los primeros organismos pluricelulares, a partir, posiblemente, de organismos eucariotas unicelulares, que normalmente formaban grupos temporales denominados colonias y que perdieron la capacidad de separarse. Luego, unas clulas de estas colonias se especializaron en una funcin y otras clulas en otras funciones, apareciendo los tejidos. Se pas de una colonia de clulas a un organismo pluricelular de tipo vegetal o animal.

Miles de millones de aos

12 La escala del tiempo geolgico y los fenmenos de la litosfera y evolucin orgnica.

4. Evolucin de los primeros seres vivos

Se calcula que los primeros seres vivos aparecieron hace unos 4.000-3.500 millones de aos (fig. 13). Se cree que estos primeros organismos eran procariotas hetertrofos fermentadores. Como el proceso fermentativo no necesita oxgeno, ste es el metabolismo idneo en una atmsfera sin oxgeno y en un medio rico en molculas orgnicas (el caldo primitivo). Cuando estas molculas empezaron a agotarse, resultaron ms aptos aquellos organismos que haban alcanzado la capacidad para utilizar la luz para sintetizar ATP, es decir, los que eran capaces de realizar la fotosntesis anoxignica, sin desprendimiento de oxgeno, gracias a poseer los denominados fotosistemas tipo I. Hace unos 3.000 millones de aos aparecieron las cianobacterias, microorganismos que son capaces de realizar la fotosntesis oxignica, con desprendimiento de oxgeno, gracias a que adems del fotosistema I tienen el fotosistema tipo II con el que descomponen el H2O y liberan oxgeno. Esto conllev al enriquecimiento en oxgeno de la atmsfera primitiva. Los rayos ultravioleta del Sol transformaron parte de este oxgeno atmosfrico en ozono, el cual hizo de pantalla de estos rayos, posibilitando la vida fuera del agua.
16

Atmsfera reductora

1,5

Primeros seres pluricelulares.

Clula procariota ancestral anaerobia Ameboide con mitocondrias Clula procariota Formacin de los rganos celulares Clula eucariota Bacterias aerobias Clulas procariotas Algas cianoficeas Clulas eucariotas

14 Hiptesis autgena sobre el origen de las clulas eucariotas.

15 Hiptesis de la endosimbiosis sobre el origen de las clulas eucariotas.

4 La Biologa a travs de la historia

Aunque la mayora de los principales descubrimientos en el campo de las Ciencias Biolgicas se han efectuado en los dos ltimos siglos, aqullos se han podido producir slo gracias a las aportaciones que se han ido produciendo en los perodos histricos anteriores. La historia de las ideas biolgicas, como la de otras ciencias, no ha tenido una progresin constante, alternndose pocas florecientes con fases de estancamiento e incluso de regresin en cuanto a conocimientos. En el cuadro II aparecen las principales aportaciones a los conocimientos de las Ciencias Biolgicas desde la poca griega hasta el siglo XIX. En el siglo XX se ha producido una aceleracin sin precedentes del progreso cientfico. En Biologa, esta revolucin cientfica se debe tanto a la aparicin de nuevos aparatos de investigacin, por ejemplo, el microscopio electrnico que ha permitido espectaculares avances en Citologa e Histologa, como al gran aumento de cientficos y de grupos de investigacin que se dedican a esta ciencia en todo el mundo. En el cuadro III se ofrece una relacin cronolgica de los principales investigadores del siglo XX y sus aportaciones a las diferentes reas de la Biologa.

CUADRO II. La Biologa desde la poca griega hasta el siglo XIX. poca Siglo VI a.C. Siglo IV a.C. Siglo II d.C. Siglo XII Siglo XV Siglo XVI Siglo XVII Siglo XVII Siglo XVII-XVIII Siglo XVIII Siglo XIX Siglo XIX Siglo XIX Siglo XIX Siglo XIX Siglo XIX Autor y principales ideas, obra o descubrimiento Jenfanes de Colofn. Explica la presencia de restos de animales marinos en las montaas. Aristteles. Considerado el padre de la Zoologa, pues describe y ordena en grupos a numerosos animales. Galeno. Importantes descubrimientos en el campo de la Medicina. San Alberto Magno. Escribi dos grandes obras sobre plantas (De vegetalibus libri) y animales (De animalibus libri) Leonardo da Vinci. Estudia la anatoma humana. Andreas Vesalio. Introdujo nuevos mtodos de estudio de la anatoma humana basados en la diseccin de cadveres. Francesco Redi. Rebate experimentalmente la idea de la generacin espontnea. Robert Hooke. Introduce el trmino de clula al observar el tejido suberoso del corcho. A. van Leeuwenhoek. Perfecciona las lentes de aumento y observa bacterias, protozoos, clulas nerviosas, glbulos rojos, etc. Carl von Linn. Establece el sistema binomial de nomenclatura de los seres vivos. Jean-Baptiste de Lamarck. Defiende la evolucin orgnica, pero admite la heredabilidad de los caracteres adquiridos a lo largo de la vida. Georges Cuvier.Considerado padre de la anatoma comparada animal moderna. Charles Darwin. Defiende la evolucin de las especies por seleccin natural. Schwann y Schleiden. Enuncian la teora celular. Louis Pasteur. Descubre la vacuna antirrbica. Gregor Mendel. Publica sus trabajos sobre las leyes de la herencia biolgica.

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LA BIOLOGA EN EL SIGLO XX Ao 1900 1904 1905 1906 1911 16 Retratos de Lamarck y de Darwin. Aunque la idea de que los seres vivos podran no haber sido inmutables a lo largo de la historia de la vida y de que podran haber evolucionado no es original ni de Lamarck ni de Darwin, estos naturalistas fueron los que propusieron las hiptesis ms coherentes sobre la evolucin de las especies. La hiptesis de Darwin de que las especies evolucionan, segn la seleccin que efecta la propia naturaleza, es admitida actualmente, modulada por los conocimientos ms modernos de gentica. 1924 1927 1929 1930 1941 1944 Autor y descubrimiento De Vries, Correns y Tschermack. Redescubrimiento de las leyes de Mendel. Pavlov*. Estudia la fisiologa de la digestin. Koch*. Descubre el bacilo que produce la tuberculosis. Golgi y Ramn y Cajal*. Efectan importantes estudios en el campo de la Citologa. Morgan*. Estudia la recombinacin gentica y la elaboracin de mapas cromosmicos. Oparin. Establece su hiptesis del origen abitico de la vida. Mller*. Descubre el efecto mutgeno de los rayos X. Fleming*. Descubre el antibitico penicilina. Lewis. Hallazgo de restos fsiles de Ramapithecus. Beadle y Tatum*. Descubren la relacin entre genes y enzimas. Avery y McCarthy. Establecen que el ADN es la molcula portadora de los caracteres hereditarios. Miller. Obtiene aminocidos a partir NH3, CH4 y H2. Watson y Crick*. Deducen la estructura de la doble hlice de ADN. Krebs*. Descubre el ciclo de los cidos tricarboxlicos. Leakey. Descubrimiento de los restos de Zinjanthropus. Ochoa*. Descubrimiento del ARN-polimerasa. Kornberg*. Descubrimiento del ADN-polimerasa. Or. Logra la sntesis de pptidos y pentosas en el laboratorio. Monod y Jacob*. Descubren el funcionamiento de los genes y del opern. Niremberg y Khorana. Descifran el cdigo gentico. Lorenz y Frisch*. Realizan importantes estudios sobre el comportamiento animal. Mitchell*. Establece la teora quimiosmtica de la fosforilacin oxidativa de las mitocondrias. Milstein, Kler y Jerne*. Logran la sntesis de anticuerpos monoclonales. Bishop y Varmus*. Descubren los oncogenes.

5 La Biologa hoy
En la actualidad, las Ciencias Biolgicas estn tan diversificadas y extendidas que la mayora de las actividades y tcnicas de los diferentes campos de la industria estn relacionadas directa o indirectamente con la Biologa. Se necesitan conocimientos biolgicos en la industria alimentaria y conservera, en el tratamiento de las aguas para potabilizarlas, en la investigacin mdica y farmacolgica, en la aplicacin de tcnicas pesqueras racionales, en el control de plagas agrcolas, etc.

1952 1953 1953 1954 1959 1959 1961 1965 1967 1973 1978 1984 1989

1. La investigacin biolgica pura y aplicada

En Biologa se pueden distinguir dos grandes lneas de trabajo: la investigacin pura y la investigacin aplicada. La Biologa pura se ocupa de todos aquellos aspectos de la investigacin biolgica que tienen como finalidad el conocer el funcionamiento de los seres vivos en todos sus niveles, desde el molecular hasta el de poblaciones, sin buscar ninguna aplicacin inmediata. Es el saber por el saber. En Biologa pura se investiga en todos los campos, pero hay algunos de stos que, por el inters que pueden tener las aplicaciones de los avances, reciben un mayor apoyo econmico y, por tanto, tienen una popularidad mayor. Es el caso de la investigacin en Gentica, Microbiologa, Bioqumica, Ecologa, Fisiologa vegetal, animal y humana.
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(* obtencin del premio Nobel).

CUADRO III. Principales descubrimientos del siglo XX y sus autores.

La Biologa aplicada busca conocer nuevos detalles del funcionamiento de los seres vivos con el objetivo de aplicar estos conocimientos a determinados problemas y conseguir solucionarlos. Muchos conocimientos puramente biolgicos son empleados en la investigacin mdica y veterinaria, en varios campos de la industria, en la ganadera, en la agricultura, etc.

2. Biologa y Medicina
Los conocimientos de la Biologa son de ayuda inestimable para la Medicina, cuyos avances van en gran manera ligados a los de las Ciencias Biolgicas. As, la anatoma animal sirvi de base para el conocimiento de la propia anatoma humana; el conocer los detalles de la fisiologa de algunos microorganismos ha permitido elaborar antibiticos con los que se puede frenar la invasin de otros microorganismos patgenos; los avances en bioqumica e inmunologa condujeron a poder prevenir las enfermedades infecciosas mediante vacunas, a disminuir los fenmenos nocivos del rechazo de rganos en los trasplantes y mejorar los tratamientos de diferentes tipos de cncer. La ingeniera gentica permite en la actualidad obtener sustancias que, como la insulina, la hormona del crecimiento o el interfern, son imprescindibles para tratar a muchas personas enfermas. Sin embargo, an no se conocen tratamientos definitivos para enfermedades producidas por virus (gripe, hepatitis, SIDA...), o para curar el cncer, como tampoco para enfermedades tan comunes como la artrosis y el rema.

17 Piscifactora en el parque natural de Cazorla.

4. Biologa agrcola y ganadera

En el campo de la agricultura, el uso excesivo de insecticidas, principalmente del diclorodifeniltricloroetano (DDT), produjo, adems de la desaparicin de las plagas de insectos que asolaban los cultivos, la eliminacin de muchos de los depredadores naturales de los insectos, principalmente pjaros, al acumularse en sus tejidos los insecticidas de sus presas. Tambin aparecieron insectos mutantes resistentes que, en la actualidad, precisan de altas concentraciones del insecticida para ser afectados. Hoy se trabaja en la llamada lucha biolgica, que consiste en encontrar otras especies parsitas o depredadoras de los insectos de la plaga, cuyo ciclo de reproduccin sea adems ms rpido. En ganadera, la Biologa ha tenido mucho que decir en la mejora y seleccin de razas con mayor rendimiento (vacas de leche y de carne, cerdos, gallinas...). La seleccin de los cruzamientos ha conducido en agricultura a la obtencin de hbridos de elevado rendimiento agrcola, como maz con mazorcas dos o tres veces ms grandes que las normales, variedades de patatas ms grandes o ms resistentes al clima, etc.

18 Investigacin sobre el SIDA. Instituto central de epidemiologa de Mosc. Analista de laboratorio.

3. Biologa industrial
La Biologa se utiliza en la industria en el campo de las fermentaciones para obtener vinos, otras bebidas alcohlicas y pan (fermentacin alcohlica), para obtener yogur y diferentes tipos de quesos (fermentacin lctica). Tambin se trabaja en la extraccin de sustancias alcaloides y vitaminas de las plantas y de sustancias bioactivas de microorganismos. Gracias al conocimiento de su estructura, se pueden sintetizar artificialmente numerosas sustancias orgnicas como hormonas, antibiticos y vitaminas. Del petrleo podran obtenerse glcidos y lpidos, e incluso, por nitracin, protenas. El estudio sobre las posibilidades de asimilar la celulosa en el tubo digestivo humano podra contribuir a la obtencin de nuevos alimentos.

19 Cultivo experimental de lechugas en un laboratorio de investigacin ambiental.

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CUESTIONARIO 2
1. Intenta resumir los principales pasos que debieron de ocurrir en la evolucin qumica hasta la formacin de la primera clula. 2. Qu se entiende por caldo primitivo? Cules son sus principales componentes? 3. Qu dice la teora de la panspermia? Hay algn dato cientfico que permita apoyarla? 4. Cules fueron las fuentes de energa en la etapa de evolucin abitica? 5. Qu diferencia hay entre los coacervados y las microesferas? En qu se parecen? 6. Ordena la aparicin y desarrollo de los principales grupos de seres vivos (procariotas, eucariotas unicelulares, pluricelulares, plantas, animales...) e indica su antigedad aproximada. 7. Qu dice la hiptesis de la endosimbiosis a propsito de la aparicin de los organismos eucariotas? Cmo se habran originado las mitocondrias, segn esta hiptesis? Y los flagelos? 8. Cmo se habran originado los orgnulos citoplasmticos de las clulas eucariotas segn la teora autgena? 9. Cmo se cree que pudieron aparecer los seres vivos pluricelulares? Qu caracterstica ms importante

tuvieron que adquirir las clulas que formaron parte de estos primeros seres pluricelulares? 10. Indica cules son los seres vivos que se cree vivan en la Tierra hace 1.500 millones de aos. Y hace 500 millones de aos? 11. Busca en una enciclopedia la biografa de Aristteles e indaga en ella sobre sus principales obras. Cules trataron sobre los animales? Entre las ideas que dej este filsofo destaca poderosamente una que no es correcta. Sabes de cul se trata? 12. Cita algunos personajes de la historia que destacaron por sus aportaciones al campo de la Medicina e indica cules fueron stas. 13. Cul es la diferencia entre Biologa pura y aplicada? Cita algn tipo de investigacin de ambas modalidades de la Biologa. 14. De la lista de descubrimientos de la Biologa del siglo XX, cules son, para ti, los ms relevantes? Razona tu respuesta. 15. Cules son los principales problemas que plantea en la actualidad la vida sobre la Tierra? Con qu ramas de la Biologa estn relacionados? Confronta tus ideas con las de tus compaeros de clase y realiza una mesa redonda sobre los problemas ms importantes y sus principales soluciones.

5. Biologa y medio ambiente

La extensin de la especie humana en la Tierra y su desarrollo tcnico en los ltimos siglos ha conducido a variar de manera importante el equilibrio biolgico de la mayora de los ecosistemas terrestres. Las industrias contaminan la atmsfera y las aguas continentales y marinas. Se estn usando irracionalmente algunos de los recursos de la Tierra, como el agua y los bosques. Las poblaciones humanas se concentran extraordinariamente en ncleos urbanos de millones de habitantes, con la consiguiente acumulacin de basuras, mientras ms de la mitad de la Tierra est deshabitada. El impacto ecolgico no es fruto slo de un aumento de la poblacin sino tambin el resultado de una grave falta de organizacin y de previsin. Desde hace mucho tiempo se conoce la conveniencia de la existencia de ncleos de poblacin pequeos que ocupen poca superficie, permitiendo zonas amplias de bosque y que queden armonizadas con el paisaje circundante. Se llevan a cabo experiencias atmicas controladas cuyos efectos en la corteza terrestre y en seres vivos no estn perfectamente esclarecidos. Se eliminan desechos de todo tipo (industriales, chatarra, aceites, detergentes, subproductos atmicos...). Se emiten a la atmsfera gases que contribuyen a formar el efecto invernadero, por lo que aumenta la temperatura de la Tierra, o a ampliar el agujero en la capa de ozono. La Ecologa proporciona cada vez ms datos sobre la productividad de los ecosistemas de la Tierra, sobre
20

la distribucin del territorio, demarcando zonas que por su inters deben ser conservadas, sobre el impacto contaminador de los productos qumicos emitidos, de las centrales nucleares y trmicas, de las basuras en la contaminacin de las aguas, etc. (fig. 20).

20 Los impactos de las actividades humanas sobre la naturaleza pueden traernos muy serias consecuencias.

Actividades
Conceptos
1. Relaciona correctamente los diferentes elementos de las dos columnas: mitocondria protoctistas embriologa vacuna antirrbica Oparin microesferas hiptesis Watson y Crick caldo primitivo Redi desarrollo embrionario experimentacin doble hlice de ADN nivel de orgnulos coacervados Miller protobiontes algas generacin espontnea Pasteur tuberculosis.12. Rama de la Biologa que estudia la ordenacin en taxones de los seres vivos. Verticales: 1. Cientfico que descubri la penicilina.3. Precursores de los seres vivos segn Oparin.6. Una de las categoras taxonmicas; mdico del Renacimiento que impuls la investigacin basada en la diseccin de cadveres.15. Seres vivos sin ncleo definido. 3. Responde a las siguientes cuestiones: 1. Qu diferencia hay, en cuanto a estructura, materia y organizacin, entre un animal vivo y uno que acaba de morir por paro cardiaco? 2. En qu se distinguen el crecimiento de una planta y el crecimiento de unos cristales de sal al evaporarse el agua? 3. Quines produjeron el oxgeno del aire? Cundo? De dnde procede este oxgeno?. 4. Qu personajes han defendido, a lo largo de la historia, las ideas de la generacin espontnea? 5. Por qu destac Leeuwenhoek en el campo de la Biologa? 6. Con qu rama de la Biologa tienen relacin los investigadores Krebs, Or, Ochoa y Mitchell? 7. Qu medidas crees que se han de adoptar respecto al actual enfrentamiento entre el progreso industrial y la conservacin de la naturaleza? 8. Intenta explicar por qu se piensa que las mitocondrias de las clulas eucariotas pueden proceder de bacterias. 9. Por qu no existan procariotas con respiracin aerbica hace 3.500 millones de aos? 10. Cmo se pueden aplicar los conocimientos biolgicos en el rea de la ganadera y de la agricultura y qu se puede conseguir con ellos?

2. Intenta completar el siguiente crucigrama relacionado con los conceptos de este tema. Horizontales: 1. Cientfico que inici la moderna sistemtica y nomenclatura.2. Uno de los niveles de organizacin de los seres vivos.3. Una de las caractersticas de los seres vivos.4. Seres vivos con ncleo definido; cientfico del siglo XIX que es el padre de la anatoma animal moderna.5. Rama de la Biologa que estudia la estructura de los seres vivos; naturalista que propuso la teora de la evolucin moderna.6. Cientfico que experiment contra la idea de la generacin espontnea.7. Una clase de molculas del caldo primitivo (plural).8. Quien propuso las microesferas como precursores de los seres vivos; cientfico que propuso el trmino de clula.9. Tipo de rocas constituidas por microorganismos y sedimentos.10. Al revs, quien es considerado el padre de la zoologa.11. Mdico que descubri el bacilo de la

1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

7 L

8 I

9 10 11 12 13 14 15 N E O

21

BASE FSICO-QUMICA

22

DE LA VIDA
N D I C E

Tema 2.
Los bioelementos, el agua y las sales minerales

Tema 3.
Los glcidos

Tema 4.
Los lpidos

Tema 5.
Las protenas

Tema 6.
La actividad enzimtica y la funcin hormonal

Muestras de clulas humanas conservadas en nitrgeno lquido a 196 C.

Determinacin de la secuencia de una cadena de ADN.

23

2
100 80 60 40 20 0 20 10 3 62

Los bioelementos, el agua y las sales minerales

BIOSFERA (Porcentaje de cada elemento) 100 80 60 2,1 40 2,5 1,1 Cl S 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,01 0 0 20 0 O C H N Ca P K Na Mg Fe Si Al O C H N Ca P Cl S K Na Mg Fe Si Al 0,03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 ATMSFERA (Porcentaje de cada elemento) 78

N D I C E
100

INFORMACIN 1 El enlace qumico en la materia viva.

El enlace inico. El enlace covalente. Los enlaces intermoleculares.

HIDROSFERA (Porcentaje de cada elemento) 66 33

80 60 40 20 0

0 0,0 O C 0

0,02 0,3 0 0,33 0,01 0,03

0 0

2 Los bioelementos.
Los bioelementos primarios. Los bioelementos secundarios.
100 80 60 40 20 0,2 0 O C H N Ca P Cl S K Na Mg Fe Si Al 0,1 0 3,6 0,1 0 0,04 2,6 2,8 2,1 5 46,5 27,7 8,1 LITOSFERA (Porcentaje de cada elemento)

H N Ca P Cl S

K Na Mg Fe Si Al

3 Los principios inmediatos o biomolculas. 4 El agua. 5 Las sales minerales. 6 Las disoluciones y las dispersiones coloidales.
Las propiedades de las disoluciones verdaderas. Las propiedades de las dispersiones coloidales.

Vista de una playa en Sri Lanka.

LABORATORIO
Disoluciones, agua y sales minerales.

Los seres vivos ocupan la parte inferior de la atmsfera, toda la hidrosfera y la parte superficial de la litosfera. Dado que los seres vivos, para constituir su cuerpo, obtienen los elementos qumicos del medio en el que se encuentran, cabra esperar que su composicin qumica se pareciera a la de estas tres capas. Observa si los bioelementos (elementos qumicos que forman los organismos) son los elementos ms abundantes en ellas. Si no es as, propn alguna hiptesis sobre por qu se han seleccionado unos elementos y no otros, para ser bioelementos.

24

1 El enlace qumico en la materia viva

El enlace qumico es la unin entre tomos, molculas o iones. Un ion es un tomo o una molcula con carga elctrica. En la materia viva los principales tipos de enlaces son: el enlace inico entre iones, el enlace covalente entre tomos, y los enlaces intermoleculares entre molculas. electronegativos. stos, fcilmente, acaban perdiendo parte de sus electrones frente a tomos ms electronegativos que ellos (figs. 1 y 2).

2. El enlace covalente
Se forma cuando dos tomos comparten electrones. Cada par de electrones compartidos (electrones que giran alrededor de los dos ncleos atmicos), uno de un tomo y otro del otro, forma un enlace covalente. Se da entre tomos de electronegatividad alta y similar (fig. 3). Es un enlace muy fuerte. Si los tomos unidos tienen una electronegatividad similar, dan lugar a molculas apolares, por ejemplo, los compuestos formados por tomos iguales, H2, O2, N2, I2, etc., y los constituidos por carbono e hidrgeno (hidrocarburos), como CH4 (metano), C3H8 (propano), C4H10 (butano), C8H18 (octano o gasolina), C6H6 (benceno), etc. (fig. 4). Si unos tomos atraen ms hacia s los electrones, se forman molculas polares, con un polo y otro , es decir, dipolos moleculares, por ejemplo, H2O, NH3, SH2, etc. (fig. 5).

1. El enlace inico
Se da cuando uno de los tomos capta electrones del otro. El tomo que capta electrones se transforma en un ion negativo o anin, y el que los pierde, en un ion positivo o catin. El anin y el catin quedan unidos por atraccin electrosttica. El enlace inico se da entre tomos de electronegatividad muy diferente, es decir, entre tomos con una gran avidez de electrones, los muy electronegativos, y tomos que retienen con poca fuerza sus electrones, los poco

Hidrgeno H
1 e, 1 p, 0 n Nmero atmico 1 Peso atmico 1

Oxgeno O

Na

xx x

xx x x

Cl
xx

Na

Cl
xx

x x

Na

Cl

8 e, 8 p, 8 n Nmero atmico 8 Peso atmico 16

Na (catin) Cl (anin)

NaCl Cloruro sdico

Carbono C

Nitrgeno N
7 e, 7 p, 7 n Nmero atmico 7 Peso atmico 14

6 e, 6 p, 6 n Nmero atmico 6 Peso atmico 12

Red cbica del NaCl

2 Enlace inico del NaCl.

Fsforo P
15 e , 15 p, 15 n Nmero atmico 15 Peso atmico 30,9

Azufre S

xx x

O
x

x x

xx x x

x x

OO O2 Oxgeno gaseoso

16 e , 16 p, 16 n Nmero atmico 16 Peso atmico 32

1 Estructura atmica de los bioelementos primarios.

3 Enlace covalente.

25

Nitrgeno molecular (N2) Hidrgeno molecular (H2)

Oxgeno molecular (O2)

H HH

NN

OO

a) Entre bioelementos distintos del carbono

H H
F

Agua (H2O) H H

HH
F

HH
F

H2 Hidrgeno gas H2O Agua H2S cido sulfhdrico

H O H H F H S H F H S H H S H H F F N H H H H N N H H H
H H O H H O

NH3 Amoniaco H O H

b) Entre carbonos
C C F C C

C C

C C

CC F C C
F F

Enlace simple entre carbonos H Enlace doble entre carbonos

F

Metano (CH4) C H

C C C C

C C C C

CCCC

Enlaces simples entre 4 carbonos H H H C H H H

c) Entre carbonos y otros bioelementos

O C F O C

O C H

C O Grupo cetnico C O H F C O H F C OH
F F

C O

Grupo hidroxilo o alcohlico

H C

H C

C H Grupo hidrgeno

) 10 (H ) 4( C

O C H

H H H H H C C C C H C4H10 Butano (hidrocarburo) H H H H O C F C F CHO Grupo aldehdo O H H

O C O H

O H C

C O H O
F

COOH Grupo cido

C N H H

N H C

C N H H H F H C H H

C NH2 Grupo amina

H H H H C

H F H C H H

CH4 Metano

4 Diferentes representaciones de los enlaces covalentes entre bioelementos primarios: rbitas y diagrama de puntos de Lewis. En el diagrama de puntos de Lewis se indica el nmero de electrones del ltimo orbital, que son los que intervienen en los enlaces qumicos.

26

espontneamente

Enlace inico

Enlace covalente

Enlace covalente polar

Molcula no polarizada

Molcula polarizada (dipolo instantneo)

5 Comparacin de la distribucin de cargas en distintos tipos de enlaces.

Induccin de polarizacin en la molcula vecina H

7 Enlace intermolecular por fuerzas de Van der Waals.

H O

enlace, ya que hay ms posibles puntos de atraccin y las capas electrnicas se deforman ms fcilmente. Este tipo de fuerzas tambin aparecen entre molculas polares aumentando su atraccin (fig. 7).

6 Enlace intermolecular por puente de hidrgeno.

CUESTIONARIO 1
1. Sabiendo que la tendencia es tener 2 electrones en el primer orbital y 8 en el segundo y que, por ejemplo, en este ltimo, si hay menos de cuatro, la tendencia ser desprenderse de ellos, y si tiene ms de cuatro, la tendencia ser captar los que faltan para llegar a 8, decir de dos tipos de tomos, de nmero atmico 12 y 17, cul ser ms electronegativo y cul lo ser menos. 2. Siguiendo la representacin de Lewis, esquematizar el enlace del MgCl2, del N2, del HCl, CO2 y SiO2. 3. Siguiendo la representacin de Lewis, esquematizar los enlaces del MgSO4 y del MgCO3. Estas dos sales son solubles en agua dando ion magnesio (Mg2), e 2 2 ) o ion carbonato (CO3 ), respectivaion sulfato (SO4 mente. Por qu no se disocian de otra forma, por ejemplo, separndose el O del S y el O del C? 4. Ordena de mayor a menor electronegatividad los elementos N, O, H, C y S. 5. Por qu no sera posible la presencia de hidrgeno en la atmsfera terrestre actual? 6. Los dos tomos de la molcula de nitrgeno (N2) estn tan fuertemente unidos por sus tres enlaces covalentes que apenas reaccionan con otras sustancias. Qu relacin hay entre esto y la composicin de la atmsfera? 7. De dnde sale el oxgeno que respiran los peces? 8. Por qu las aguas continentales son dulces y las marinas son saladas? 9. Citar algunas pruebas sencillas que podran realizarse para distinguir si un slido es molecular, atmico o inico. (Ver documento 1 de la pgina siguiente.)

3. Los enlaces intermoleculares

Son los enlaces entre molculas. Los casos ms importantes son el enlace de hidrgeno y las fuerzas de Van der Waals. Son enlaces muy dbiles y estn debidos a fuerzas electrostticas. a) Enlace de hidrgeno. En las molculas dipolares de los hidruros (H2O, NH3, H2S, etc.), el pequeo tamao del tomo de hidrgeno permite aproximarse mucho al otro tipo de tomo, de las molculas contiguas, establecindose fuerzas dbiles de atraccin entre ellas, denominadas enlace de hidrgeno, antes denominado puente de hidrgeno. En el agua, la gran electronegatividad del oxgeno hace que las cargas del dipolo sean muy altas. Por ello, las molculas de agua se atraen tanto entre s que forman un lquido, mientras que otras de mayor peso molecular, como el H2S, son gases (fig. 6). b) Enlace por fuerzas de Van der Waals. Tambin entre molculas apolares aparecen atracciones electrostticas, debido a que, en determinados instantes, la cambiante distribucin electrnica se vuelve asimtrica, y aparecen dipolos instantneos. stos permiten la atraccin intermolecular. Cuanto ms grande sea una molcula, ms fuerza puede alcanzar este

27

O O O Si O Cristal de SiO2 Red tetradrica Punto de fusin: 1.500 C C 1,54 Si O Si

ocumento 1

Relacin entre enlaces y propiedades fsicas y qumicas

El enlace inico es un enlace fuerte. Si la atraccin electrosttica es alta, se forman slidos inicos cristalinos, de punto de fusin alto e insolubles en agua, como el Ba2SO2 4. Si la atraccin es menor, como sucede con el NaCl, el punto de fusin del slido cristalino tambin es menor, y generalmente es soluble en agua, un lquido polar, e insoluble en lquidos apolares como el benceno C6H6. En el enlace covalente, si el tamao de los tomos es muy parecido, unos rodean a los otros y viceversa, se forma un slido atmico cristalino de punto de fusin muy alto, e insoluble en agua. Es el caso, por ejemplo, del cuarzo (SiO2), y del diamante (C) (fig. 8). Si el tomo central es tan pequeo que no puede contactar con todos los tomos con los que podra establecer enlaces, porque no caben, forma molculas de pocos tomos. stas, si son apolares, quedan sueltas y forman gases a temperatura ambiente. Por ejemplo, H2, O2, N2, CO2, CH4, C3H8 , C4H10, etc. (fig. 9). Si su peso molecular es mayor, debido a fuerzas de Van der Waals, pueden ser lquidos, por ejemplo Br2, C8H18 y C6H6; y si es todava ms elevado, pueden ser slidos, como el C12H10 (naftaleno). Las molculas polares, de bajo peso molecular, si el carcter dipolar es bajo, sern gases, por ejemplo, SO2, HCl, NH3; y si es alto, sern lquidos, como el H2F2 y el H2O. Si su peso molecular es alto, forman slidos, que sern solubles en agua cuyas molculas tambin son polares, por ejemplo la glucosa (fig. 10).

Cristal de diamante (C) Red tetradrica Punto de fusin: 3.500 C

8 Slidos atmicos.
O C O CO2 Gas

Cristal de CO2 Red cbica centrada en las caras Punto de fusin: 56,4 C

9 Slido molecular.

10 Disolucin de un slido molecular de molculas covalentes polares en un lquido polar.

28

Los bioelementos

1. Los bioelementos primarios

Si se compara la composicin atmica de la biosfera, es decir, de la materia viva que hay en la Tierra, con la composicin de la atmsfera, de la hidrosfera y de la litosfera, que son las tres capas que ocupan los seres vivos, se pueden deducir las siguientes conclusiones: Los altos porcentajes de H y O en la biosfera se deben a que la materia viva est constituida por agua en un porcentaje que vara de un 65 % (organismos terrestres) a un 90 % (organismos acuticos). Ello a la vez se debe a que todas las reacciones qumicas que se realizan en los seres vivos se desarrollan en el medio acuoso. No es posible la materia viva sin agua. Todo esto se relaciona con que la vida se origin en el medio acutico. Los porcentajes del resto de los bioelementos primarios (C, N, S y P) de la biosfera son muy diferentes de los encontrados en la atmsfera, hidrosfera o litosfera, por lo que no se puede deducir que la materia viva se haya formado a partir de los elementos ms abundantes, sino a partir slo de aquellos (C, H, O, N, P y S) que gracias a sus propiedades son capaces de constituirla. Estas propiedades son: Su masa atmica es relativamente pequea, y esto favorece que al combinarse entre s se establezcan enlaces covalentes estables. Cuanto menor es un tomo, mayor es la tendencia del ncleo positivo a completar su ltimo orbital con los electrones que forman los enlaces, y, por tanto, ms estables son dichos enlaces. Dado que el oxgeno y el nitrgeno son elementos muy electronegativos, al establecer enlaces covalentes con los otros tipos de tomos con frecuencia dan lugar a molculas dipolares. Dado que el agua tambin es dipolar, estos compuestos se disuelven bien en ella y pueden reaccionar entre s, haciendo posible los procesos bioqumicos imprescindibles para la vida. El resto de las propiedades no son comunes, por lo que se exponen a continuacin por separado. a) El carbono. Tiene cuatro electrones en su periferia y puede formar enlaces covalentes estables con otros carbonos. stos le permiten constituir largas cadenas de tomos (macromolculas). Gracias a que los enlaces pueden ser simples (C C), dobles (C C) o triples (C C); y, sobre todo, gracias a los diferentes radicales formados por los otros elementos ( H, O, OH, NH2, SH, H2PO4, etc.), es posible un gran nmero de molculas diferentes, que posibilitan una gran variabilidad de reacciones qumicas, y, as, que se pueda aprovechar la gran diversidad de elementos que hay en el entorno.
29

Si se hace un anlisis qumico de cada uno de los diferentes tipos de seres vivos, se encuentra que la materia viva est constituida por unos setenta elementos, que son prcticamente la totalidad de los elementos estables que existen en la Tierra, exceptuando los gases nobles. Estos elementos que se encuentran en la materia viva se llaman bioelementos o elementos biognicos (de bios, vida, y genos, origen). Los bioelementos se pueden clasificar en dos grupos: los bioelementos primarios y los bioelementos secundarios. Los bioelementos primarios. Se llaman primarios porque son indispensables para la formacin de las biomolculas orgnicas (glcidos, lpidos, protenas y cidos nucleicos), que son las molculas que constituyen todos los seres vivos y que, adems, en la naturaleza, solamente son producidas por ellos. Por esto, a las biomolculas orgnicas tambin se las denomina principios inmediatos a la vida. Son un grupo de seis elementos, que constituyen el 96,2 % del total de la materia viva. Son el oxgeno (O), el carbono (C), el hidrgeno (H), el nitrgeno (N), el fsforo (P) y el azufre (S). Los bioelementos secundarios son todos los bioelementos restantes. En este grupo se pueden distinguir dos tipos: los indispensables, que son los que no pueden faltar porque son imprescindibles para la vida de la clula, y que, en mayor o menor proporcin, se encuentran en todos los seres vivos, y los variables, que son los que s pueden faltar en algunos organismos. Son bioelementos secundarios indispensables el calcio (Ca), el sodio (Na), el potasio (K), el magnesio (Mg), el cloro (Cl), el hierro (Fe), el silicio (Si), el cobre (Cu), el manganeso (Mn), el boro (B), el flor (F) y el yodo (I). Son bioelementos secundarios variables, por ejemplo, el bromo (Br), el cinc (Zn), el titanio (Ti), el vanadio (V) y el plomo (Pb). Otra clasificacin de los bioelementos es la basada en su abundancia. Los que se encuentran en proporciones inferiores al 0,1 % se denominan oligoelementos, y el resto bioelementos plsticos. No existe una relacin directa entre abundancia y esencialidad. Muchos bioelementos pueden ser, por ejemplo, oligoelementos, y a la vez ser indispensables, debido a que su funcin no es estructural, sino catalizadora. As, una pequea cantidad de ellos es suficiente para que el organismo viva, pero la falta total provocara su muerte.

Por otro lado, los cuatro enlaces covalentes formados estn dirigidos en el espacio hacia los cuatro vrtices de un tetraedro imaginario (figura 11). Esto permite la formacin de estructuras tridimensionales, es decir, molculas cuya forma coincida exactamente con la necesaria. As, una molcula puede servir para seleccionar molculas de su entorno, y tambin para constituir, al juntarse muchas, estructuras supramoleculares, como son las membranas plasmticas, los ribosomas, centrolos, etc. Adems, las grandes macromolculas que forma el carbono permiten que una sola pueda contener toda la informacin necesaria sobre cmo producir el resto de molculas del organismo, y, al replicarse, poder transmitir dicha informacin a los descendientes. Esto, que resulta imprescindible para la continuidad de la vida, es en esencia la gran cualidad del ser vivo.

ocumento 2

Por qu el carbono y no el silicio?

Tambin el silicio presenta cuatro electrones en su ltima capa Si s2p2, y, adems, es mucho ms abundante en la corteza terrestre que el carbono; sin embargo, la vida est basada en el carbono y no en el silicio, porque los enlaces C C, C O y C N son suficientemente fuertes como para permitir formar cadenas (lineales o ramificadas) y anillos estables, y a la vez, son susceptibles de romperse, sin excesiva dificultad, para dar lugar a otras molculas. Esto permite al ser vivo obtener la energa contenida en los enlaces qumicos de las molculas grandes, as como, cuando dispone de energa sobrante, almacenarla en dichos enlaces qumicos mediante la unin de molculas pequeas. En cambio, las cadenas formadas por tomos de silicio ( Si Si ) son inestables, y las cadenas formadas por tomos de silicio y de oxgeno, denominadas siliconas ( Si O Si O ), son tan estables que prcticamente son inalterables. Por ello, no son aptas para los procesos biolgicos. Adems, mientras el dixido de carbono (CO2) es gaseoso y soluble en agua, lo que permite que sea expelido por los animales y absorbido por las plantas mediante la fotosntesis, el compuesto de silicio equivalente, SiO2 (slice), es slido e insoluble en agua. Esto se debe a que el pequeo tamao del tomo de carbono le impide contactar con ms de dos tomos de oxgeno si se rodeara de cuatro quedara bailando dentro; por ello forma molculas de CO2 que, como no son polares, quedan separadas entre s formando un gas. El silicio, en cambio, s se une a cuatro tomos de oxgeno, situados en los vrtices de un hipottico tetraedro, formando una red ininterrumpida de tomos de Si y O. Es un slido atmico, todo el cristal de SiO2 es como una sola molcula. Por ello es insoluble en agua, muy duro y de punto de fusin elevado.

109,5

109,5

11 tomo de carbono. Sus cuatro valencias se disponen hacia los vrtices de un hipottico tetraedro.

b) El hidrgeno. Es el otro elemento que resulta indispensable para formar la materia orgnica. sta se define como la materia constituida bsicamente por carbono e hidrgeno. Por ejemplo, algunos lpidos slo estn constituidos por carbono e hidrgeno. El petrleo y sus derivados (butano, gasolina, gasleo, etc.) tambin estn constituidos slo por carbono e hidrgeno. Se los denomina por ello hidrocarburos. El petrleo es el producto del proceso de carbonizacin, prdida de oxgenos, a partir de grandes masas de plancton marino que quedaron enterradas en mares someros fuera del contacto con el aire.
30

El nico electrn que posee el tomo de hidrgeno le permite formar un enlace con cualquiera de los otros bioelementos primarios. Entre el hidrgeno y el carbono se forma un enlace covalente lo suficientemente fuerte como para ser estable, pero no tanto como para impedir su rotura, y posibilitar as la sntesis de otras molculas. Las que estn formadas slo por carbono e hidrgeno son covalentes apolares (insolubles en agua). c) El oxgeno. Es el bioelemento primario ms electronegativo. Por ello cuando se enlaza con el hidrgeno atrae hacia s el nico electrn del hidrgeno originndose polos elctricos. Debido a esto, los radicales OH, CHO y COOH son radicales polares. Si stos sustituyen a algunos hidrgenos de una cadena de carbonos e hidrgenos, pueden dar lugar a molculas como la glucosa (C6H12O6) que son solubles en lquidos polares como el agua. De-

bido a su electronegatividad el oxgeno es idneo para quitar electrones a otros tomos, es decir, para oxidarlos. Como este proceso comporta la rotura de enlaces y la liberacin de una gran cantidad de energa, la reaccin de los compuestos de carbono con el oxgeno, la llamada respiracin aerbica, es la forma ms comn de obtener energa. La otra va, la fermentacin, ha ido reducindose desde que las algas y las plantas, mediante la fotosntesis, empezaron a enriquecer con oxgeno la atmsfera primitiva. La oxidacin de los compuestos biolgicos se realiza bsicamente mediante la sustraccin de hidrgenos a los tomos de carbono. Como el oxgeno atrae hacia s el electrn del hidrgeno con ms fuerza que el carbono, consigue quitrselo. De este modo se forma agua y se libera una gran cantidad de energa, que aprovechan los seres vivos. Como el tomo de carbono pasa de compartir por igual un electrn con el hidrgeno, a compartir en menor medida electrones con el oxgeno, experimenta una prdida de electrones, es decir, se oxida: C6H12O6 6O2 6CO2 6H2O energa d) El nitrgeno. Al igual que el carbono y el azufre, presenta una gran facilidad para formar compuestos tanto con el hidrgeno (NH3) como con el oxgeno (NO 3 ), lo cual permite, en el paso de una forma a la otra, la liberacin de energa. Principalmente se encuentra formando los grupos amino ( NH2) de los aminocidos (molculas que constituyen las protenas) y las bases nitrogenadas, que son uno de los componentes de los cidos nucleicos. Es de destacar que, pese a la gran abundancia de gas nitrgeno en la atmsfera, muy pocos organismos son capaces de aprovecharlo. Prcticamente todo el nitrgeno es incorporado al mundo vivo por las algas y las plantas, que lo absorben disuelto en forma de ion nitrato (NO 3 ). e) El azufre. Bsicamente se encuentra en forma de radical sulfhidrilo ( SH) en determinados aminocidos. Estos radicales permiten establecer, entre dos aminocidos prximos, unos enlaces covalentes fuertes denominados puentes disulfuro ( S S ), que mantienen la estructura de las protenas. f) El fsforo. Este elemento permite establecer enlaces ricos en energa. Al romperse el enlace que 2 une dos grupos fosfato PO 3 PO3 PO3 , generalmente de una molcula denominada ATP, se libera al organismo la energa contenida en dicho enlace, unas 7,3 kcal por mol de

grupos fosfato liberados. En estos enlaces se almacena la energa liberada en otras reacciones, como las oxidaciones de la respiracin antes citada. Adems, el fsforo es muy importante porque interviene en la constitucin de los cidos nucleicos (ADN y ARN), de los fosfolpidos de la membrana plasmtica y de los huesos de los vertebrados, y porque ayuda a mantener constante la acidez del medio interno del organismo.

2. Los bioelementos secundarios

Los bioelementos secundarios tienen diferentes funciones. Se puede distinguir entre los que son abundantes y los que suelen ser oligoelementos. Los ms abundantes son el Na, K, Mg y Ca. Sus funciones son: los iones Na, K y Cl, que son los iones ms abundantes en los medios internos y en el interior de las clulas, intervienen en el mantenimiento del grado de salinidad y en el equilibrio de cargas elctricas a un lado y otro de la membrana plasmtica; los iones Na y K, adems, son fundamentales en la transmisin del impulso nervioso. El calcio, en forma de carbonato (CaCO3), da lugar a los caparazones de los moluscos y a los esqueletos de otros muchos animales y, como ion (Ca2), acta en muchas reacciones, como los mecanismos de la contraccin muscular, la permeabilidad de las membranas celulares, la coagulacin de la sangre, etc. El magnesio es un componente de muchas enzimas y del pigmento clorofila. Tambin interviene en la sntesis y degradacin del ATP, en la replicacin del ADN y en su estabilizacin, en la sntesis del ARN, etc. Entre los oligoelementos cabe citar, por la importancia de sus funciones, el Fe, Zn, Cu, Co, Mn, Li, Si, I y F. El hierro es necesario para sintetizar la hemoglobina de la sangre y la mioglobina, dos transportadores de molculas de oxgeno, y los citocromos, enzimas que intervienen en la respiracin celular. El cinc es abundante en el cerebro, en los rganos sexuales y en el pncreas. En este ltimo se asocia a la accin de la hormona insulina para el control de la concentracin del azcar en sangre. El cobre se requiere para formar la hemocianina, el pigmento respiratorio de muchos invertebrados acuticos, y para algunas enzimas oxidasas. El cobalto hace falta para sintetizar la vitamina B12 y algunas enzimas que regulan la fijacin del nitrgeno.
31

 El manganeso acta asociado a diversas enzimas degradativas de protenas, como factor de crecimiento, y en los procesos fotosintticos. Su deficiencia origina por ello amarilleamiento de las hojas. El litio acta incrementando la secrecin de los neurotransmisores y por ello favorece la estabilidad del estado de nimo en los enfermos de depresiones endgenas. El silicio forma parte de los caparazones de las diatomeas y da rigidez a los tallos de las gramneas y de los equisetos. El yodo es necesario para formar la hormona tiroidea, responsable del ritmo del metabolismo energtico. Su falta provoca el bocio. El flor se encuentra en el esmalte de los dientes y en los huesos. Su carencia favorece la caries de los dientes.

CUESTIONARIO 2
1. Por qu el carbono y no el silicio ha permitido la materia viva? 2. Significan lo mismo materia viva y materia orgnica? 3. Por qu el oxgeno permite obtener tanta energa a partir de la materia orgnica? 4. Por qu el fsforo permite almacenar energa de pronto uso? 5. Por qu hay bioelementos que son indispensables pese a haber slo trazas de ellos? 6. Por qu se cree que la vida apareci en el medio acuoso? 7. Corrige el siguiente texto: El carbono, el oxgeno, el hidrgeno y el nitrgeno son oligoelementos de bajo peso atmico, lo que les impide formar enlaces covalentes. Son elementos escasos en las capas ms externas de la Tierra y los compuestos qumicos que forman no se disuelven bien en agua.

3 Los principios inmediatos o biomolculas

Si se efecta un anlisis fsico de la materia viva, de forma que se pueda separar cada una de las sustancias que la componen sin que stas se alteren, se llega a los llamados principios inmediatos o biomolculas. Los mtodos utilizados para este anlisis son la evaporacin, la filtracin, la destilacin, la dilisis, la cristalizacin, la electroforesis y la centrifugacin. Los principios inmediatos pueden ser simples o compuestos (cuadro I). Se llaman simples cuando las molculas estn formadas por tomos del mismo tipo, como es el caso del oxgeno (O2); y compuestos cuando hay tomos de diferentes elementos, como, por ejemplo, el agua (H2O). Los principios inmediatos compuestos pueden ser inorgnicos, como el agua, las sales minerales (carbonatos, fosfatos, etc.) y el dixido de carbono (CO2); y orgnicos, es decir, constituidos bsicamente por polmeros de carbono e hidrgeno, como los glcidos, los lpidos, las protenas y los cidos nucleicos.
Simples PRINCIPIOS oxgeno molecular (O2) y nitrgeno molecular (N2) Inorgnicos Compuestos Orgnicos glcidos, lpidos, protenas y cidos nucleicos agua, dixido de carbono y sales minerales

Los principios inmediatos pueden tener funcin estructural, como las protenas y las sales minerales de los huesos, o los lpidos de las membranas plasmticas; funcin energtica, como las grasas; y funcin biocatalizadora, es decir, aceleradora de las reacciones bioqumicas, como las protenas enzimticas. El O2, el CO2 y el N2 son tres sustancias gaseosas a temperatura ambiente. El O2 es necesario para la respiracin aerbica, es decir, para obtener energa mediante su combinacin con la materia orgnica, tanto en las bacterias aerbicas como en las mitocondrias de las clulas animales y vegetales. El CO2 es desprendido en la reaccin anterior como un producto de excrecin, eliminndose directamente a travs de las membranas celulares en los organismos unicelulares o en los pluricelulares de organizacin sencilla. Lo captan de la atmsfera las algas y las plantas al realizar la fotosntesis en sus cloroplastos. El N2 es prcticamente un gas inerte, y por ello los vegetales son incapaces de tomarlo de la atmsfera; slo algunas bacterias del suelo (por ejemplo, Clostridium pasteurianum) y otras que son simbiontes de las races de las leguminosas (como algunas especies del gnero Rhizobium) son capaces de captarlo y aprovecharlo para sintetizar protenas. A continuacin se exponen el agua y las sales minerales, as como las propiedades de las disoluciones verdaderas y de las dispersiones coloidales. Los glcidos, lpidos, protenas y cidos nucleicos se estudian en los cuatro captulos siguientes.

CUADRO I. Los principios inmediatos o biomolculas.

32

El agua

El agua es la sustancia qumica ms abundante en la materia viva. En los humanos adultos representa el 63 % de su peso, en el embrin humano el 94 %, y en las algas el 95 %. Entre los lmites inferiores estn los huesos, con un 22 %, algunas semillas, con un 20 %, y la dentina de los dientes, con slo un 10 %. Existe una relacin directa entre contenido en agua y actividad fisiolgica de un organismo. As, los menores porcentajes se dan en seres con vida latente, como semillas, virus, etc. El agua se encuentra en la materia viva en tres formas: Como agua circulante; por ejemplo, en la sangre, en la savia, etc. Como agua intersticial, entre las clulas, a veces fuertemente adherida a la sustancia intercelular (agua de inhibicin), como sucede en el tejido conjuntivo. Como agua intracelular, en el citosol y en el interior de los orgnulos celulares. En los seres humanos, el agua circulante supone el 8 % de su peso, el agua intersticial el 15 %, y el agua intracelular el 40 %.
12 La molcula de agua.

Los organismos pueden conseguir el agua directamente a partir del agua exterior o a partir de otras biomolculas mediante diferentes reacciones bioqumicas; es lo que se denomina agua metablica. Por ejemplo, a partir de la oxidacin de la glucosa, aparece agua: C6H12O6 6O2 6CO2 6H2O El agua, a temperatura ambiente, es lquida, al contrario de lo que cabra esperar, si se considera que otras molculas de parecido peso molecular, como el SO2, el CO2, el NO2, etc., son gases. Este comportamiento fsico se debe a que en la molcula de agua los dos electrones de los dos hidrgenos estn desplazados hacia el tomo de oxgeno, por lo que en la molcula aparece un polo negativo, donde est el tomo de oxgeno, debido a la mayor densidad electrnica, y dos polos positivos, donde estn los dos ncleos de hidrgeno, debido a la menor densidad electrnica. Las molculas de agua son, pues, dipolos. Entre los dipolos del agua se establecen fuerzas de atraccin llamadas puentes de hidrgeno, formndose grupos de 3, 4 y hasta poco ms de 9 molculas. Con ello se alcanzan pesos moleculares elevados y el H2O se comporta como un lquido. Estas agrupaciones duran fracciones de segundo (de 1010 a 1021 s), lo cual confiere al agua todas sus propiedades de fluido. En la realidad, coexisten estos pequeos polmeros de agua con molculas aisladas que rellenan los huecos (fig. 12).

Estructura de la molcula de agua H 105 0,96 O H Puente de hidrgeno

Estructura del agua lquida

33

H2O NaCl

SOLUBILIZACIN

Na Cl

H2O

Na

Cl

13 Accin disolvente del agua sobre los compuestos inicos y solvatacin de los mismos.

a) Caractersticas fundamentales del agua. Elevada fuerza de cohesin entre sus molculas, debida a los puentes de hidrgeno. Ello explica que el agua sea un lquido prcticamente incompresible, idneo para dar volumen a las clulas, provocar la turgencia de las plantas, constituir el esqueleto hidrosttico de anlidos y celentreos, etc. Tambin explica que el agua tenga una elevada tensin superficial, es decir, que su superficie oponga una gran resistencia a romperse. Esto permite que muchos organismos vivan asociados a esa pelcula superficial y que la savia bruta ascienda por los tubos capilares. El fenmeno de la capilaridad depende tanto de la adhesin de las molculas de agua a las paredes de los conductos como de la cohesin de las molculas de agua entre s. Elevado calor especfico. Como el calor necesario para elevar la temperatura de una sustancia es directamente proporcional a su calor especfico (Q m ce [t1 to], siendo Q cantidad de calor, m masa, ce calor especfico, to temperatura inicial y t1 temperatura final), al ser elevado el calor especfico del agua, hace falta mucho calor para elevar su temperatura. Esto la convierte en estabilizador trmico del organismo frente a los cambios bruscos de temperatura del ambiente. Elevado calor de vaporizacin. Ello se debe a que para pasar del estado lquido al gaseoso hay que romper todos los puentes de hidrgeno. Mayor densidad en estado lquido que en estado slido. Ello explica que el hielo flote en el agua y que forme una capa superficial termoaislante que permite la vida, bajo ella, en ros, ma34

res y lagos. Si el hielo fuera ms denso que el agua, acabara helndose toda el agua. Elevada constante dielctrica. Por tener molculas dipolares, el agua es un gran medio disolvente de compuestos inicos, como las sales minerales, y de compuestos covalentes polares, como los glcidos. El proceso de disolucin se debe a que las molculas de agua, al ser polares, se disponen alrededor de los grupos polares del soluto, llegando en el caso de los compuestos inicos a desdoblarlos en aniones y cationes, que quedan as rodeados por molculas de agua. Este fenmeno se denomina solvatacin inica (fig. 13). Esta capacidad disolvente del agua y su abundancia en el medio natural explican que sea el vehculo de transporte (captacin de sales minerales por las plantas, por ejemplo) y el medio donde se realizan todas las reacciones qumicas del organismo (tal es el caso de la digestin de los alimentos). Bajo grado de ionizacin. De cada 551.000.000 de molculas de agua, slo una se encuentra ionizada: H2O H3O OH H 2O Esto explica que la concentracin de iones hidronio (H3O) y de los iones hidroxilo (OH) sea muy baja, concretamente 107 moles por litro ([H3O] [OH] 107). Dados los bajos niveles de H3O y de OH, si al agua se le aade un cido (se aade H3O) o una base (se aade OH), aunque sea en muy poca cantidad, estos niveles varan bruscamente.

b) Funciones del agua en los seres vivos. Debido a las peculiares propiedades del agua, sta desempea funciones muy importantes en el organismo vivo. Las principales son: Funcin disolvente de las sustancias. El agua es bsica para la vida, ya que prcticamente todas las reacciones biolgicas tienen lugar en el medio acuoso. Funcin bioqumica. El agua interviene en muchas reacciones qumicas, por ejemplo, en la hidrlisis (rotura de enlaces con intervencin de agua) que se da durante la digestin de los alimentos, como fuente de hidrgenos en la fotosntesis, etc. Funcin de transporte. El agua es el medio de transporte de las sustancias desde el exterior al interior de los organismos y en el propio orga-

nismo, a veces con un gran trabajo como en la ascensin de la savia bruta en los rboles. Funcin estructural. El volumen y forma de las clulas que carecen de membrana rgida se mantienen gracias a la presin que ejerce el agua interna. Al perder agua, las clulas pierden su turgencia natural, se arrugan y hasta pueden llegar a romperse (lisis). Funcin mecnica amortiguadora. Por ejemplo, los vertebrados poseen en sus articulaciones bolsas de lquido sinovial que evita el roce entre los huesos. Funcin termorreguladora. Se debe a su elevado calor especfico y a su elevado calor de vaporizacin. Por ejemplo, los animales, al sudar, expulsan agua, la cual, para evaporarse, toma calor del cuerpo y, como consecuencia, ste se enfra.

Las sales minerales

Las sustancias minerales se pueden encontrar en los seres vivos de tres formas: precipitadas, disueltas o asociadas a sustancias orgnicas. a) Las sustancias minerales precipitadas constituyen estructuras slidas, insolubles, con funcin esqueltica. Por ejemplo, el carbonato clcico en las conchas de los moluscos, el fosfato clcico, Ca3(PO4)2, y el carbonato clcico que, depositados sobre el colgeno, constituyen los huesos, el cuarzo (SiO2) en los exoesqueletos de las diatomeas y en las gramneas, etc. (fig. 14).

b) Las sales minerales disueltas dan lugar a aniones y cationes. Los principales son: b) Cationes: Na, K, Ca2 y Mg2. 2 3 2 , PO4 , CO3 , HCO3 y b) Aniones: Cl, SO4 NO3. Estos iones mantienen un grado de salinidad constante dentro del organismo, y ayudan a mantener tambin constante su pH. Los lquidos biolgicos, a pesar de estar constituidos bsicamente por agua, no varan apenas su [H3O], es decir, su pH (pH log [H3O]) por la adicin de cidos o bases. Ello se debe, en parte, a que estos lquidos contienen sales minerales que pueden ionizarse en mayor o menor grado dando lugar a H3O o a OH que contrarreste el efecto de los cidos o bases aadidos. Este fenmeno se denomina efecto tampn y a estas disoluciones se las llama disoluciones tampn o amortiguadoras. Por otro lado, cada ion desempea funciones especficas y, a veces, antagnicas. Por ejemplo, el K aumenta la turgencia de la clula, mientras que el Ca2 la merma. Esto es debido a que el K favorece la captacin de molculas de agua (imbibicin) alrededor de las partculas coloidales citoplasmticas, mientras que el Ca2 la dificulta. Otro ejemplo es el corazn de la rana, que se para en sstole si hay exceso de Ca2, y en distole si el exceso es de K. El Ca2 y el K son iones antagnicos. El medio interno de los organismos presenta unas concentraciones inicas constantes. Una variacin provoca alteraciones de la permeabilidad, excitabilidad y contractilidad de las clulas. Son conocidas las soluciones fisiolgicas de Ringer y de Tyrode, en las que se puede mantener un rgano funcionando, y la solucin nutritiva de Arnon (cuadro II).
35

14 Las sales minerales precipitadas forman estructuras slidas en los seres vivos.

NaCl Solucin fisiolgica de Ringer (para anfibios) KCl CaCl2 NaHCO3 H2O NaCl KCl CaCl2 Solucin fisiolgica de Tyrode (para mamferos) MgCl2 NaHCO3 NaH2PO4 Glucosa H2O KNO3 Ca(NO3)2 NH4H2PO4 MgSO4 7(H2O) Solucin nutritiva de Arnon (para cultivos hidropnicos) H3BO3 MnCl2 4(H2O) CuSO4 5(H2O) ZnSO4 7(H2O) H2MoO4 (H2O) FeSO4 7(H2O) cido tartrico H2O

6,0 g 0,2 g 0,2 g 0,1 g hasta 1 litro 8,00 g 0,20 g 0,20 g 0,10 g 1,00 g 0,05 g 1,00 g hasta 1 litro 1,02000 g 0,49200 g 0,23000 g 0,49000 g 0,00286 g 0,001810 g 0,000008 g 0,000022 g 0,000009 g indicios indicios hasta 1 litro

c) Las sustancias minerales asociadas a molculas orgnicas suelen encontrarse junto a protenas, como las fosfoprotenas; junto a lpidos, como los fosfolpidos, y junto a glcidos, como en el agar-agar. Las principales funciones de las sustancias minerales en los organismos son: Formar estructuras esquelticas. Estabilizar dispersiones coloidales. Mantener un grado de salinidad en el medio interno. Constituir soluciones amortiguadoras. Acciones especficas: por ejemplo, el ion ferroso Fe2 es necesario para sintetizar la hemoglobina, el yodo en la hormona tiroidea, el ion magnesio Mg2 en la clorofila, etc.

CUESTIONARIO 3
1. Por qu a temperatura ambiente el agua es un lquido, siendo el SO2 un gas? 2. Por qu el agua tiene una elevada tensin superficial, un elevado calor especfico, un elevado calor de vaporizacin, mayor densidad en estado lquido que en estado slido, una elevada constante dielctrica y un bajo grado de ionizacin? 3. Por qu el agua es un gran disolvente? Por qu no disuelve los hidrocarburos? 4. La frmula H2O no corresponde realmente al agua lquida. Por qu? 5. Qu quiere decir iones antagnicos? Ejemplos.

CUADRO II. Soluciones fisiolgicas y nutritivas.

6 Las disoluciones y las dispersiones coloidales

En los seres vivos el estado lquido est constituido por dispersiones de muchos tipos de molculas dispersas o solutos y un solo tipo de fase dispersante o disolvente, que es el agua. Los solutos pueden ser de bajo peso molecular (se denominan cristaloides) como, por ejemplo, el cloruro sdico (PM 58,5) y la glucosa (PM 180); o pueden ser de elevado peso molecular del orden de varios miles (se denominan coloides), como, por ejemplo, las protenas de tipo albmina (PM entre 30.000 y 100.000). Las dispersiones de solutos de bajo peso molecular se denominan disoluciones verdaderas o simplemente disoluciones, y las de elevado peso molecular se denominan dispersiones coloidales.
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1. Las propiedades de las disoluciones verdaderas

Las propiedades de las disoluciones verdaderas que ms inters tienen en Biologa son: la difusin, la smosis y la estabilidad del grado de acidez o pH. a) Difusin. Es la reparticin homognea de las partculas de un fluido (gas o lquido) en el seno de otro, al ponerlos en contacto. Este proceso se debe al constante movimiento en que se encuentran las partculas de lquidos y gases. La absorcin o disolucin de oxgeno en el agua es un ejemplo de difusin. b) smosis. Es el paso del disolvente entre dos soluciones de diferente concentracin a travs de una

Solucin hipotnica

Solucin hipertnica

Clula en una solucin hipertnica Membrana semipermeable

Paso de agua Solucin hipotnica Solucin hipertnica

Plasmlisis

Clula en una solucin hipotnica

Turgencia

15 smosis.

membrana semipermeable que impide el paso de las molculas de soluto (fig. 15). El disolvente, que en los seres vivos es el agua, se mueve desde la disolucin ms diluida a la ms concentrada. Ello se debe a que el porcentaje de molculas de agua es mayor en la solucin ms diluida; por tanto, el nmero de choques de dichas molculas contra la membrana es superior en el medio ms diluido. Aparece un impulso de agua hacia la ms concentrada. La membrana citoplasmtica es una membrana semipermeable y da lugar a diferentes respuestas frente a la presin osmtica del medio externo. Si ste es isotnico respecto al medio interno celular, es decir, tiene la misma concentracin, la clula no se deforma. Si el medio externo es hipotnico (menos concentrado), la clula se hinchar por ingreso de agua en su interior. Este fenmeno se llama turgencia y es observable, por ejemplo, en los eritrocitos, aadiendo agua destilada a una gota de sangre. Si el medio externo es hipertnico (ms concentrado), la clula perder agua y se arrugar, dndose un fenmeno de plasmlisis que acaba con la rotura de la membrana. Esto sucede, por ejemplo, en los eritrocitos, cuando se aade agua saturada de sal a una gota de sangre (fig. 15). Los procesos de smosis explican cmo las plantas consiguen absorber grandes cantidades de agua del suelo, y por qu el agua del mar no sacia la sed, ya que, al estar ms concentrada que el medio intracelular, provoca la prdida de agua en las clulas. c) Estabilidad del grado de acidez o pH. Antiguamente, una disolucin era considerada cida cuando su sabor era parecido al del vinagre, y bsica cuando era parecido al de la sosa (NaOH). En 1909, Srensen estableci el concepto de pH, para valorar cuantitativamente el grado de acidez, y el de pOH para el grado de basicidad de la disolucin.

El pH se define como el logaritmo decimal cambiado de signo de la concentracin de iones hidronio: pH log [H3O] Los valores del pH oscilan entre 0 y 14. As, segn superen o no el valor medio de 7, podemos distinguir los siguientes tipos de disoluciones (fig. 16): [H3O] 107 moles de H3O/litro pH 7 (disolucin bsica). [H3O] 107 moles de H3O/litro pH 7 (disolucin neutra). [H3O] 107 moles de H3O/litro pH 7 (disolucin cida). Todos los seres vivos mantienen constante el pH de su medio interno. Esto se logra, sobre todo, mediante las sales minerales disueltas, que constituyen las llamadas disoluciones tampn. Si variase el pH, muchas reacciones qumicas cambiaran su sentido de reaccin, y muchas enzimas precipitaran, con lo que se provocaran graves trastornos e incluso la muerte. Un ejemplo de disolucin tampn son los iones dihidrgeno fosfato (H2PO 4 ) y monohidrgeno fos fato (HPO2 4 ), que se encuentran en equilibrio. Se denominan sistema tampn fosfato. Este sistema mantiene constante el pH interno celular en 7,2 y est interrelacionado con los fosfatos orgnicos, como el ATP.
2 H2O H2PO 4 HPO4 H3 O

acidifica

neutraliza

Si en la clula aumentara la acidez [H3O+], la reaccin se desplazara hacia la izquierda; y si disminuyera, la reaccin se desplazara hacia la derecha. As se amortiguaran las variaciones.
37

Disolucin cida

Disolucin neutra

Disolucin bsica

Alta concentracin de iones hidrgeno H H H H H OH H

Alta concentracin de iones hidroxilo H H OH H H OH H OH Incremento alcalinidad OH OH OH OH OH OH

H H H

Incremento acidez

OH OH

H OH

10

11

12

13

14

cido clorhdrico cidos del estmago

Jugo de limn Vinagre

Caf Agua

Disolucin jabonosa Bicarbonato sdico

Sangre

Hidrxido sdico

16 La escala del pH. El H en realidad se asocia a un H2O y forma H3O.

Otro ejemplo es el sistema tampn bicarbonato: H HCO 3 H2CO3 CO2 H2O

neutraliza acidifica

2. Las propiedades de las dispersiones coloidales

La mayora de los lquidos de los seres vivos son dispersiones coloidales; de ah que sea tan importante el estudio de sus propiedades. stas son: a) Capacidad de presentarse en estado de gel. Las dispersiones coloidales pueden presentarse en dos estados: en forma de sol o estado lquido, y en forma de gel o estado semislido. El sol se produce cuando la fase dispersa es un slido y la fase dispersante es un lquido. Tiene aspecto de lquido. El gel se produce cuando la fase dispersa es un lquido y la fase dispersante es un conjunto de fibras entrelazadas entre las cuales quedan retenidas por capilaridad e hidratacin las molculas del lquido. Tiene aspecto semipastoso o gelatinoso. Presenta estado de gel el citosol que hay en la periferia de la clula (ectoplasma), mientras que el citosol interior (endoplasma) presenta estado de sol. El paso del ectoplasma a estado de sol permite la emisin de pseudpodos, y, por tanto, el movimiento ameboide y la fagocitosis. La transformacin de sol en gel, y viceversa, est en relacin con la sntesis o con la despolimerizacin, respectivamente, de protenas fibrilares. Pueden formar geles las pectinas de las frutas, con las que se hacen las mermeladas, y las secreciones mucosas de los animales. Los geles, al retener el agua, permiten mantener hmedas estructuras que se hallan en ambientes muy secos. Del estado de sol se puede pasar al de gel, pero no siempre este proceso es reversible (fig. 17).

El cido carbnico (H2CO3) es muy inestable y en seguida se descompone en CO2 y H2O. Ante una aci se une al dosis en la sangre (exceso de H+), el HCO3 + exceso de H , dando H2CO3, que se descompone inmediatamente en CO2 y H2O.

ocumento 3

Papel de los huesos en la homeostasis cido-base

El esqueleto del adulto medio contiene una gran reserva de Ca2 en forma de fosfato clcico. Si ste se disuelve produce una basificacin del plasma. En la acidosis crnica, esta gran reserva de base se va usando para ayudar a controlar el pH del plasma. De esta forma, las personas que sufren de enfermedades renales crnicas y de excrecin cida renal reducida no experimentan un descenso continuo en el pH del plasma y en la [HCO 3 ], sino que estos valores se estabilizan en unos niveles slo algo inferiores a los normales. El cambio resultante en la composicin del hueso no deja de tener consecuencias, y se tienen pruebas clnicas y roentgenolgicas de que a menudo aparece raquitismo u osteomalacia. En estos pacientes se ha observado curacin del hueso despus de una administracin prolongada de lcali en forma de bicarbonato sdico o citrato sdico, en cantidad suficiente para restaurar el nivel plasmtico de [HCO 3 ].
1. Define qu es la acidosis crnica. 2. Qu funcin tiene la administracin de bicarbonato sdico o citrato sdico en pacientes con acidosis?

38

Fase dispersante

Fase dispersa coloidal

Agua destilada

Membrana semipermeable

SOL

Tubo de dilisis conteniendo coloides y cristaloides

Gelificacin Quedan los coloides separados de los cristaloides

GEL

17 Formas de sol y de gel de una dispersin coloidal.

b) Elevada viscosidad. La viscosidad es la resistencia interna que presenta un lquido al movimiento relativo de sus molculas. Las dispersiones coloidales, dado el elevado tamao de sus molculas, son muy viscosas. c) Elevado poder adsorbente. La adsorcin es la atraccin que ejerce la superficie de un slido sobre las molculas de un lquido o de un gas. La misma cantidad de sustancia ejerce mayor adsorcin si se encuentra finamente dividida. Ejemplo biolgico de adsorcin son los contactos enzimas con sustratos. Debe evitarse confundir la adsorcin, que es la adhesin de las molculas de un fluido a una superficie sin penetrarla, de la absorcin, que es su penetracin. Ejemplos de absorcin son la captacin de agua por parte de las races, y el enriquecimiento en oxgeno del agua mediante la aireacin de la misma. d) Efecto Tyndall. El tamao de las partculas coloidales oscila entre una milimicra y 0,2 micras, que es el lmite de observacin en el microscopio ptico. As pues, las dispersiones coloidales, al igual que las disoluciones verdaderas, son transparentes y claras. Sin embargo, si se iluminan lateralmente y sobre fondo oscuro, se observa una cierta opalescencia provocada por la reflexin de los rayos luminosos. Es algo parecido a lo que ocurre cuando un rayo de luz ilumina el polvo en una habitacin a oscuras. Si la iluminacin es frontal, el polvo ya no resulta apreciable.

Partculas de cristaloide. Partcula coloidal que no puede atravesar el tubo de dilisis.

18 Dilisis.

e) Sedimentacin. Las dispersiones coloidales son estables en condiciones normales; pero si se someten a fuertes campos gravitatorios, se puede conseguir que sedimenten sus partculas. Ello se realiza en las ultracentrifugadoras, que pueden alcanzar las 100.000 revoluciones por minuto. f) Dilisis. Es la separacin de las partculas dispersas de elevado peso molecular (coloides) de las de bajo peso molecular (cristaloides), gracias a una membrana semipermeable que slo deja pasar las molculas pequeas (agua y cristaloides), pero no las grandes. Una aplicacin clnica es la hemodilisis, que es la separacin de la urea de la sangre de individuos con deficiencia renal (fig. 18). g) Electroforesis. Es el transporte de las partculas coloidales gracias a la accin de un campo elctrico a travs de un gel. Generalmente se utiliza para separar las distintas protenas que se extraen juntas en un tejido. La velocidad es mayor cuanto ms alta sea su carga elctrica global y cuanto menor sea su tamao (peso molecular). Se suelen utilizar geles de almidn o de poliacrilamida (fig. 19). En resumen, las dispersiones coloidales se diferencian de las disoluciones verdaderas en que las partculas de estas ltimas no forman geles, su viscosidad es en general baja, no son adsorbentes, son pticamente vacas, no sedimentan por ultracentrifugacin y no se pueden separar los solutos por electroforesis.
39

ocumento 4

ocumento 5

La hemodilisis
Una aplicacin prctica de la dilisis es la hemodilisis que se aplica a enfermos de rin, incapaces de eliminar la urea. Consiste en enfrentar la sangre del enfermo, cargada de urea, a una solucin especial a travs de una membrana semipermeable que permite el paso del agua, sales, urea y otras molculas pequeas. Al cabo de un tiempo, si se han enfrentado volmenes iguales, la concentracin de urea en la sangre ser la mitad. La hemodilisis dura unas ocho horas y se debe realizar una, dos o tres veces por semana.

Las membranas
1. Impermeables. No dejan pasar ninguna clase de sustancia slida ni lquida. Ciertos huevos no fecundados de peces slo son permeables a los gases. 2. Semipermeables. Se pueden construir artificialmente; dejan pasar agua exclusivamente, pero ningn soluto. Las membranas celulares no son de este tipo. 3. Permeabilidad selectiva. As son todas las membranas plasmticas, que dejan pasar agua, algunos iones y molculas pequeas, pero impiden la entrada de otros iones y otras molculas grandes y pequeas. 4. Membranas de dilisis. Son aquellas en las que la presin hidrosttica permite pasar a travs de ellas agua y cristaloides a favor de gradientes de concentracin sin que haya paso de coloides. Las membranas basales de las clulas endoteliales de los capilares y de las nefronas pueden actuar como dializadores.
1. Cul o cules de estos cuatro tipos de membranas se puede utilizar para observar una smosis? 2. Qu tipos de estas membranas se pueden utilizar para la hemodilisis? 3. Qu pasara si para hacer una prctica de smosis se utilizara una membrana de dilisis?

nodo

Fuente de corriente continua Poliacrilamida lquida Muestra de protenas bsicas Gel de poliacrilamida tras la polimerizacin Ctodo cido actico diluido Fraccin a

Solucin tampn
Se tie el gel con azul de metileno, que colorea las protenas separadas

Fraccin b Fraccin c

19 Electroforesis de una protena bsica. En primer lugar, se prepara un gel de poliacrilamida aadiendo un catalizador a una dispersin de acrilamida. Luego, las protenas que se han de separar se depositan en el extremo opuesto al ctodo si son bsicas, y se hace pasar una corriente continua a travs de una disolucin tampn que empapa el gel. Despus, se tie el gel, con lo que precipitan las protenas ya separadas en las diferentes bandas. Para observarlas se debe desteir el gel.

Se destie con una solucin acuosa de cido actico

Gel de poliacrilamida con las distintas bandas

40

ocumento 6
Las dispersiones coloidales, por otro lado, pueden presentarse en dos estados; en forma de sol o estado lquido, que es el estudiado hasta ahora, y en forma de gel o estado semislido. El paso de uno a otro es reversible, y est influido por numerosos factores, como el pH, la temperatura, la presin, la concentracin salina, etc. Si nos preguntamos cules son las causas por las que las condiciones del medio influyen en el estado de un coloide, podremos dar la siguiente respuesta: la carga de la fase dispersante interacta con las cargas elctricas de las molculas de la fase dispersa de un coloide, las cuales, a su vez, interactan entre s. Como resultado, las molculas de agua (dipolares, como sabemos) se orientan con respecto a la partcula en cuestin. Qu ocurre cuando una partcula est cargada positivamente? Pues que las molculas de agua se orientan de manera radial con respecto a ella, del siguiente modo: sus polos negativos en direccin a la partcula y los positivos hacia el exterior. La superficie de cargas positivas que se forma induce a nuevas molculas de agua a orientarse de igual modo. As se va formando un manto de hidratacin en torno a la partcula; ahora bien, las nuevas molculas de agua, conforme aumenta el nmero de capas, van perdiendo progresivamente la capacidad de agregarse de esta manera, por lo que dan lugar a un manto difuso, es decir, sin lmite definido. Por ltimo, sealar que las partculas envueltas por su manto difuso estn en equilibrio con el resto de la fase dispersante.

Tipos de dispersiones coloidales

Atendiendo a la naturaleza de la fase dispersa, se distinguen dos tipos de dispersiones coloidales: las de macromolculas, o sea, de molculas cuyo peso molecular es superior a 10.000, y las de micelas, que es el nombre que reciben las partculas resultantes de la agrupacin de cientos o miles de molculas pequeas. Por ejemplo, las micelas de azufre coloidal, que estn formadas por unas mil molculas de S8 (ocho tomos de azufre juntos). Segn el estado fsico de la fase dispersa, se distinguen dos tipos de dispersiones coloidales: suspensiones coloidales, cuando las partculas dispersas ya sean macromolculas o micelas son slidas, y las emulsiones coloidales, cuando las partculas dispersas son micelas procedentes de un lquido inmiscible con la fase dispersante. Segn la afinidad existente entre las partculas de la fase dispersa y las de la fase dispersante, se distinguen dos tipos de coloides: los coloides lifilos, cuando las molculas de la fase dispersa tienden a rodearse de una nube de molculas de la fase dispersante, y los coloides lifobos, cuando no existe esa afinidad o incluso aparece una repulsin entre las molculas de las dos fases. Cuando el medio dispersante es el agua, se habla de coloides hidrfilos (hydro- agua y filos amigo), como es el caso de las protenas y de los glcidos, y de coloides hidrfobos (fobos enemigo), como es el caso de las micelas de grasa o de las micelas metlicas; por ejemplo, el oro y el hierro coloidales.

Partcula de un coloide rodeada de un manto de hidratacin difuso.

Partcula de coloidal rodeada de un manto de hidratacin concreto.

CUESTIONARIO 4
1. Qu pasara si el medio interno de los organismos no fuera una disolucin tampn? Cmo acta el tampn bicarbonato frente a una subida y a una bajada de pH? 2. Cul es el pH de tres disoluciones en las que [H] es 1,4 108 y 4 106? 3. Diferencias entre smosis y dilisis. 4. Por qu una forma de conservar los alimentos es cubrirlos de sal, como se hace con el bacalao, las anchoas, el jamn, etc.? 5. Por qu las hojas de lechuga se ponen turgentes cuando se dejan en agua y luego al aliar la ensalada se arrugan? 6. Por qu los geles no se secan fcilmente? Cita algunos ejemplos que supongan una ventaja para los organismos. 7. Por qu el elevado poder adsorbente es una ventaja en las reacciones bioqumicas? 8. Por qu la smosis permite la absorcin de agua en las plantas y por qu el agua de mar no sacia la sed? 9. Por qu las soluciones que se administran en inyeccin endovenosa deben ser isotnicas para los glbulos rojos? Qu podra ocurrir si no fuera as? 10. De qu tipo son las membranas celulares?

41

ocumento 7

Conceptos bsicos de qumica

Con el objeto de facilitar la comprensin de los siguientes captulos, dedicados a la composicin qumica de la materia viva, la denominada bioqumica, se exponen a continuacin algunos conceptos bsicos de qumica: Elemento qumico. Sustancia que no se puede descomponer en otras mediante reacciones qumicas. Est constituida por un solo tipo de tomos. Por ejemplo, son elementos el hidrgeno (H), el oxgeno (O), el carbono (C), etc. Tambin se le denomina sustancia simple. Se conocen 104 elementos de los que 15 no se encuentran en la naturaleza sino que se obtienen artificialmente. Los elementos que ceden electrones se denominan metlicos, y los que aceptan electrones, no metlicos. tomo. Es la parte ms pequea de un elemento qumico. Se conocen 104 tipos diferentes de tomos. Est constituido bsicamente por un ncleo formado por protones (con masa igual a 1 u y una carga positiva) y neutrones (con masa igual a 1 u y sin carga), y una corteza formada por electrones (con masa 1/1.840 u y carga negativa). En general hay el mismo nmero de protones, de neutrones y de electrones. Una excepcin es el tomo de hidrgeno que tiene 1 protn y 1 electrn, careciendo de neutrn (fig. 1). u. Es la abreviacin de unidad atmica de masa. Se ha tomado como referencia el ncleo del tomo ms abundante de carbono, que, como posee 6 protones y 6 neutrones, su masa atmica vale 12. As pues, la u es la doceava parte de dicho ncleo. Nmero atmico. Es el nmero de protones (coincide con el de electrones) de un tomo. Nmero msico. Es la suma del nmero de protones y de neutrones. Cuando un tomo tiene neutrones de ms o de menos se denomina istopo. Tiene las mismas propiedades qumicas que el tomo normal, ya que stas dependen del nmero de electrones, que son los que interactan con los otros tomos, pero pesar ms o menos, respectivamente. Peso atmico. Es el peso medio de los diferentes istopos de un tomo, teniendo en cuenta su abundancia y su nmero msico. Esto explica que muchas veces no sea un nmero entero. Por ejemplo, el peso atmico del oxgeno, que tiene 8 protones y 8 neutrones, no es 16 sino 15, 99 u, y el del carbono que tiene 6 protones y 6 neutrones, no es 12 sino 12,01 u. En la prctica se utiliza el trmino peso atmico para referirse a un elemento, y masa atmica ( nmero msico) para referirse a uno de sus istopos. Sustancia compuesta. Es la formada por dos o ms elementos qumicos. Su parte ms pequea es una molcula heterognea, es decir, formada por tomos de diferente tipo. Molcula. Es la unin de dos o ms tomos. stos pueden ser del mismo tipo, por ejemplo, las molculas de los gases oxgeno (O2), nitrgeno (N2), hidrgeno (H2), etctera; o de diferente tipo, por ejemplo, el agua (H2O), el cloruro sdico (NaCl), etc. Peso molecular. Es el peso de una molcula. Por ejemplo, el peso molecular del agua (H2O), es 18 u (1 1 16 18). Mol de un elemento y mol de un compuesto. Mol de un elemento ( tomo-gramo) es el nmero de gramos de dicho elemento que coincide con su peso atmico. Por ejemplo, es 1 g de hidrgeno atmico (H), 16 g de oxgeno atmico (O), etc. Mol de un compuesto ( molcula-gramo) es el nmero de gramos que coincide con su peso molecular. Por ejemplo, es 2 g de hidrgeno molecular (H2), 18 g de agua (H2O), etc. Nmero de Avogadro. Es el nmero de tomos contenidos en un mol de un elemento, o el nmero de molculas contenidas en un mol de un compuesto. Este nmero es 6,023 1023. As pues, un mol es los gramos de una sustancia necesarios para contener el nmero de Avogadro de sus partculas (tomos o molculas).

Formulacin orgnica
Los hidrocarburos son las molculas formadas por tomos de C y de H. Pueden formar cadenas lineales, las denominadas cadenas alifticas, cadenas cerradas o cclicas, los llamados compuestos aromticos, o cadenas heterocclicas, es decir, con algn otro tipo de tomo. Las cadenas lineales, si slo hay enlaces simples entre los carbonos, se denominan segn el nmero de carbonos: metano (CH4), etano (C2H6), propano (C3H8), butano (C4H10), pentano (C5H12), hexano (C6H14), heptano (C7H16), octano o gasolina (C8H18), etc. Si hay un doble enlace, la terminacin es en -eno, y si es triple, la terminacin es -ino. Se ha de especificar con un nmero el primer carbono del enlace no simple, por ejemplo, 1-buteno (CH2 CH CH2 CH3). Si un radical hidrgeno ( H) es sustituido por un radical alcohlico o hidroxilo ( OH), la terminacin es en -ol o -lico; por ejemplo, etanol o alcohol etlico (CH3CH2OH), propanotriol o glicerina (CH2OH CHOH CH2OH); si lo es por un grupo amino ( NH2 ), la terminacin es -amina; por ejemplo, la etanoamina (CH3 CH2NH2 ); y si lo es por un grupo metilo ( CH3), etilo ( CH2 CH3), etc., se antepone como prefijo; por ejemplo, el 2-metil-1,3-butadieno, tambin llamado isopreno (CH2 C(CH3) CH CH2 ). Si presenta un grupo cetnico CO , la terminacin es en -ona; por ejemplo, la propanona o acetona (CH3 CO CH3). Si presenta un grupo aldehdo (CHO), la terminacin es -al o aldehdo; por ejemplo, el propanal o gliceraldehdo (CH3 CH2 CHO). Si presenta un grupo cido o carboxilo ( COOH), la terminacin es en -oico; por ejemplo, el cido etanoico o cido actico (CH3 COOH). En base a lo anterior, formula los siguientes compuestos: metanal, alcohol proplico, etileno, acetaldehdo, cido butanoico, metanol, cido metanoico (tambin llamado cido frmico), cido butrico (presente en la mantequilla), cido etanodioico (tambin llamado cido oxlico).

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LABORATORIO

Disoluciones, agua y sales minerales

1. LAS VARIACIONES DE pH Y LAS DISOLUCIONES TAMPN
En general, las variaciones de pH no son visibles a simple vista y precisan reactivos especiales que cambian de color segn el pH, o bien aparatos electrnicos (pHmetros). Algunas sustancias naturales cambian de color al variar el pH; por ejemplo, el pigmento morado presente en la col lombarda. Cortar finamente un trozo de hoja de col lombarda y aadir 10 cm3 de agua. Dejar macerar 10 minutos. A 5 cm3 de este lquido aadir unas gotas de vinagre. Qu ha sucedido? Cmo se podra utilizar esta propiedad en los anlisis qumicos? Para conocer si una disolucin es una disolucin tampn, se puede ir aadiendo un cido o una base y observar si el pH vara lentamente o no. Tomar dos tubos de ensayo. En uno de ellos poner unos 2 cm3 aproximadamente de saliva y en el otro, 2 cm3 de agua destilada. Mediante un pHmetro o un papel medidor de pH (para valores entre 6 y 8), medir los valores de pH de ambos medios, que suelen ser en ambos casos de 7. Aadir luego a cada tubo gotas de HCl al 0,1 % y volver a observar el pH, tras cada adicin. Qu lquido ha variado ms lentamente su pH? Por qu? A qu sustancias disueltas se debe?

vende en forma de tubo o cinta hueca. Cortar un trozo de tubo para dilisis y dejarlo en agua 24 horas. Cuando se vaya a utilizar, hacer un nudo en uno de sus extremos e introducir una disolucin de albmina de huevo. sta se puede obtener al dispersar una clara de huevo en 200 cm3 de NaCl al 1 %. Anudar el otro extremo e introducirlo en agua destilada. Pasados uno o dos das, comprobar si dentro y fuera del tubo hay o no albmina y NaCl. Para comprobar la presencia de albmina, tomar 2 cm3 de disolucin, aadir 2 cm3 de una disolucin de NaOH al 20 %, y luego unas gotas de otra disolucin de sulfato de cobre al 1 . Si aparece el color violeta, es que hay albmina. Este anlisis se denomina prueba Biuret. Para comprobar la presencia de NaCl, tomar 2 cm3 de disolucin y aadir unas gotas de una disolucin de AgNO3 al 1 %. Si aparece un precipitado blanco, es que hay Na. Cules son los resultados? Qu ha sucedido? Justifica la respuesta.

4. EXISTENCIA DE SALES MINERALES EN LOS ESQUELETOS

Para averiguar si la rigidez de una estructura esqueltica se debe o no a las sales minerales, se puede aprovechar la accin disolvente de los cidos sobre las sales. Poner un hueso largo de pollo (colgeno y sales minerales), una concha de almeja (CaCO3), un caparazn de cangrejo (quitina y CaCO3) y el exoesqueleto de un insecto (quitina) en una disolucin de cido clorhdrico al 10 % en volumen. Dejar pasar unos das y anotar lo que sucede. Qu ha sucedido en cada caso? Por qu? A qu se debe la flexibilidad de los huesos de los recin nacidos? A qu se debe la fragilidad de los huesos de los ancianos?

2. PROCESOS DE SMOSIS
Para comprobar procesos de smosis a nivel macroscpico se puede utilizar un huevo de gallina y, para hacerlo a nivel microscpico, las clulas de la col lombarda. a) Introducir un huevo de gallina en una disolucin de 50 cm3 de cido actico en 150 cm3 de agua destilada. En lugar de esta disolucin puede utilizarse vinagre. Al cabo de unas horas se habr disuelto la cscara y parte de las protenas habrn coagulado por efecto de la acidez. Cambiar entonces el medio y sustituirlo por agua destilada. Qu se observar al cabo de dos das? Habr aumentado o disminuido su tamao? Por qu? b) Tomar una hoja de color morado de la planta col lombarda. Montar tres preparaciones microscpicas. Con la ayuda de una hoja de afeitar, hacer tres cortes finos longitudinales procurando que aparezcan clulas que contengan en sus vacuolas el pigmento morado. Verter sobre uno agua destilada, sobre otro agua corriente y sobre otro agua saturada de sal. Qu suceder en cada una de ellas? Justifica la respuesta. Al cabo de unos minutos, se puede apreciar al microscopio lo que ha sucedido.

3. DILISIS
Para separar las molculas grandes (macromolculas) de las pequeas molculas (cristaloides), se ha de utilizar una membrana especial para ello, parecida al celofn. Se

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3
N D I C E
INFORMACIN 1 Los glcidos.
Concepto de glcido. Clasificacin de los glcidos.

Los glcidos

2 Los monosacridos.
Triosas. Tetrosas. Pentosas. Hexosas.

3 Los enlaces N-glucosdico y O-glucosdico. 4 Sustancias derivadas de los monosacridos. 5 Los disacridos. 6 Los polisacridos.
Almidn. Glucgeno. Celulosa. Quitina. Heteropolisacridos.

7 Glcidos asociados a otro tipo de molculas.

Hetersidos. Peptidoglucanos. Proteoglucanos. Glucoprotenas. Glucolpidos.

Araa nurse.

8 Funciones generales de los glcidos. LABORATORIO

Propiedades qumicas de los glcidos.

Los glcidos son las biomolculas orgnicas ms abundantes de los vegetales. stos tienen sus estructuras esquelticas de celulosa, sus reservas energticas de almidn, y sus lquidos internos, la savia elaborada, con un alto contenido en sacarosa. En el mundo animal, en cambio, lo que predomina son las protenas y los lpidos. Con una excepcin, los artrpodos, cuyo esqueleto externo es de quitina, un glcido muy difcil de destruir. Qu deben tener en comn la celulosa y la quitina?

44

Los glcidos

1. Concepto de glcido
Los glcidos son biomolculas formadas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H) y oxgeno (O), en una proporcin semejante a CnH2nOn, es decir (CH2O)n. Se les suele llamar hidratos de carbono o carbohidratos. Este nombre es en realidad poco apropiado, ya que no se trata de tomos de carbono hidratados, esto es, enlazados a molculas de agua, sino de tomos de carbono unidos a grupos alcohlicos (OH), llamados tambin radicales hidroxilo, y a radicales hidrgeno (H). El nombre glcido deriva de la palabra glucosa, del griego glykys, que significa dulce. En todos los glcidos siempre hay un grupo carbonilo, es decir, un carbono unido a un oxgeno mediante un doble enlace. Este grupo carbonilo puede ser un grupo aldehdo (CHO) o bien un grupo cetnico (CO). As pues, los glcidos pueden definirse como polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas.

Los glcidos pueden sufrir procesos de aminacin, incorporacin de grupos amino (NH2), y de esterificacin con cidos, como, por ejemplo, el cido sulfrico (H2SO4) o el cido fosfrico (H3PO4). Pueden, pues, contener tomos de nitrgeno (N), azufre (S) y fsforo (P), pero sin que stos sean esenciales en su constitucin.

2. Clasificacin de los glcidos

Los glcidos se clasifican segn el nmero de cadenas polihidroxialdehdicas o polihidroxicetnicas que contengan. Se distinguen tres tipos: Monosacridos. Son los glcidos constituidos por una sola cadena polihidroxialdehdica o polihidroxicetnica. Oligosacridos. Son los glcidos formados por la unin de dos a diez monosacridos. Los ms importantes son los disacridos (unin de dos monosacridos). Polisacridos. Son los glcidos formados por la unin de ms de diez monosacridos. Adems de estos tres grupos, estn los compuestos formados por la unin de glcidos y otras sustancias no glucdicas.

1 Grupos funcionales en los compuestos orgnicos.

Grupo alcohlico OH Grupo cetnico CO Grupo amino NH2 Grupo aldehdo O H Grupo cido O OH

Los monosacridos

Los monosacridos son glcidos constituidos por una sola cadena polihidroxialdehdica o polihidroxicetnica. No pueden por ello descomponerse mediante hidrlisis. Se nombran aadiendo la terminacin -osa al nmero de carbonos. Por ejemplo, triosa, tetrosa, pentosa, hexosa, etc. Propiedades fsicas. Son slidos cristalinos, de color blanco, hidrosolubles y de sabor dulce. Su solubilidad en agua se debe a que tanto los radicales hidroxilo (OH) como los radicales hidrgeno (H) presentan una elevada polaridad elctrica y establecen por ello fuerzas de atraccin elctrica con las molculas de agua, que tambin son polares, dispersndose as las molculas del glcido.

Propiedades qumicas. Los glcidos son capaces de oxidarse, es decir, de perder electrones, frente a otras sustancias que al aceptarlos se reducen. Muchos glcidos son capaces de reducir el reactivo de Fehling. ste bsicamente es una disolucin, de color azul, de sulfato de cobre en 2 agua (CuSO4 Cu2 SO2 4 ). Los iones Cu al ganar electrones (al reducirse) pasan a iones Cu, los cuales forman Cu2O que es insoluble y forma un precipitado de color rojizo. El cambio, muy evidente, de color azul a rojo, se aprovecha para detectar la presencia de estos glcidos (anlisis cualitativos) y para valorar su concentracin (anlisis cuantitativos). Otra propiedad qumica de los glcidos es su capacidad para asociarse con grupos amino NH2. (Para ms detalles, ver el apartado nmero 4 de este mismo tema Sustancias derivadas de los monosacridos.)
45

ocumento 1
En el grupo cetnico, el C tiene el nmero de oxidacin 2 (C2O2), y en el grupo cido el nmero de oxidacin es 3 (C3O2O2H1). Luego se oxida de C2 a C3. En el grupo aldehdo, el nmero de oxidacin del C es 1 y luego, al pasar a cido, se oxida de C1 a C3. En este ltimo caso, las semirreacciones de oxidacin-reduccin quedaran, para la glucosa, por ejemplo, as: Reduccin: H2O 2Cu2
2e
5

El proceso de reduccin del licor de Fehling

El licor de Fehling tiene en su composicin sulfato de cobre disuelto: CuSO4 Cu2 (SO4)2 Al aadir un monosacrido y calentar, se observa la aparicin de un precipitado rojo de xido cuproso (Cu2O). Es decir, el cobre se reduce de Cu2 a Cu (Cu2 1e Cu). Ello se debe a que todos los monosacridos tienen un grupo cetnico (CO) o aldehdo (CHO) susceptible de oxidarse y pasar a grupo cido (COOH).

Cu2O 2H1
5

Oxidacin: H2O C6H12O6

2e

1 C6H11O7 3H1

1. Triosas
Son glcidos formados por tres tomos de carbono. Hay dos triosas: una que tiene un grupo aldehdo y otra que tiene un grupo cetnico. La aldotriosa se llama gliceraldehdo, y la cetotriosa se llama dihidroxiacetona (fig. 2). La frmula emprica de ambas es C3H6O3. Son abundantes en el interior de la clula, ya que son metabolitos intermedios de la degradacin de la glucosa. El gliceraldehdo tiene un tomo de carbono, el segundo, asimtrico, es decir, un carbono que tiene sus cuatro valencias saturadas por radicales diferentes (fig. 2). Situando arriba el grupo aldehdo y fijndonos en ese carbono, se pueden distinguir dos ismeros espaciales o estereoismeros: el D-gliceraldehdo, cuando el OH est a la derecha, y el

L-gliceraldehdo, cuando el OH est a la izquierda. Cada uno de estos ismeros espaciales es imagen especular no superponible del otro y se les denomina estructuras enantiomorfas. Aunque se giren en el espacio, no pueden coincidir, pues son estructuras diferentes (fig. 2). La presencia de carbonos asimtricos da a estas molculas la propiedad de la actividad ptica. Al incidir sobre ellas un rayo de luz polarizada, se produce una desviacin en el plano de polarizacin y el rayo refractado surge con otro plano de polarizacin. Si lo desvan hacia la derecha, se llaman dextrgiras y se simbolizan con el signo (). As, por ejemplo, como el D-gliceraldehdo es dextrgiro, se denomina D-() gliceraldehdo. Si lo desvan hacia la izquierda, se denominan levgiras y se simbolizan con el signo ().

2 Frmulas y enantiomorfismo de las triosas.

=O C1 H H C2 OH H C3 OH H
Gliceraldehdo

H H H C1 OH H C2 = O H C3 OH H H
Dihidroxiacetona

FRMULA EMPRICA DE AMBOS:

C3H6O3

CHO

CHO

CHO H C OH OH C OH H
D - gliceraldehdo

CHO HO C H HO C H H
L - gliceraldehdo

C H CH2OH OH HO

C H CH2OH

Estereoismeros

Simetra de las formas enantiomorfas del gliceraldehdo

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No hay relacin entre tener estructura D y ser dextrgira, es decir, una molcula puede tener estructura D y ser levgira. La forma () y la forma () se denominan ismeros pticos o antpodas pticos. El ngulo de desviacin que producen es el mismo, aunque de sentido contrario. Las estructuras enantiomorfas son, pues, ismeros pticos. La dihidroxiacetona no tiene ningn carbono asimtrico y, por lo tanto, no presenta actividad ptica. Las estructuras enantiomorfas difieren entre s en la posicin de todos los radicales OH de los carbonos asimtricos; corresponden, pues, a la misma sustancia con las mismas propiedades, excepto la actividad ptica.

Dos glcidos que slo se diferencian en la posicin del grupo hidroxilo en un carbono asimtrico se denominan epmeros. As, por ejemplo, la L-eritrosa y la L-treosa son epmeros. Son sustancias diferentes y, por tanto, con propiedades distintas (fig. 3).

3. Pentosas
Son glcidos con cinco tomos de carbono (fig. 4). En las aldopentosas, como hay tres carbonos asimtricos (C2, C3, y C4), aparecen ocho posibles estructuras moleculares (23 8). En la naturaleza slo se encuentran cuatro: la D-ribosa, en el cido ribonucleico, la D-2-desoxirribosa, en el cido desoxirribonucleico; la D-xilosa, que forma el polisacrido xilana de la madera; y la L-arabinosa, formando el polisacrido arabana, que es uno de los componentes de la goma arbiga. Entre las cetopentosas cabe citar la D-ribulosa, que desempea un importante papel en la fotosntesis, debido a que se une a la molcula de dixido de carbono (CO2), que queda as incorporada al ciclo de la materia viva.
H C1HO H C2 OH H C3 OH H C4 OH H C5H2OH
D - ribosa

2. Tetrosas
Son glcidos formados por cuatro tomos de carbono. Existen dos aldotetrosas, la treosa y la eritrosa, y una cetotetrosa, la eritrulosa. La terminacin -ulosa es comn en las cetotetrosas y en las cetopentosas. En las aldotetrosas hay dos carbonos asimtricos. Al igual que para el resto de los monosacridos, la configuracin D o L se determina tomando como referencia el carbono asimtrico ms alejado del grupo carbonilo, que en las aldotetrosas es el carbono 3 (fig. 3).
H C1HO H C2 OH H C3 OH H C4H2OH
D - eritrosa

HO C1HO HO C2 H HO C3 H OH C4H2OH
L - eritrosa

H C1HO H C2 OH H C3 OH H C4 OH H C5H2OH
D - 2-desoxirribosa

Son estereoismeros enantiomorfos entre s.

HO C1HO HO C2 H OH C3 OH OH C4H2OH
D - treosa

HO C1HO OH C2 OH HO C3 H OH C4H2OH
L - treosa

OH C1HO OH C2 OH HO C3 H OH C4 OH OH C5H2OH
D - xilosa

OH C1HO OH C2 OH HO C3 H HO C4 H OH C5H2OH
L - arabinosa

H C1H2OH H C2O H C3 OH H C4 OH H C5H2OH

D - ribulosa

Son estereoismeros enantiomorfos entre s.

4 Pentosas.

H C1H2OH H C2O H C3 OH H C4H2OH

D - eritrulosa

HO C1H2OH HO C2O HO C3 H OH C4H2OH

L - eritrulosa

CUESTIONARIO 1
1. Es dextrgira la dihidroxiacetona? 2. Se puede deducir si la D-eritrosa es levgira o dextrgira? 3. Cuntas L-cetopentosas son posibles? Dibuja sus estructuras. 4. Escribe un ejemplo de dos monosacridos enantiomorfos y de dos monosacridos epmeros.

Son estereoismeros enantiomorfos entre s.

3 Tetrosas.

47

ocumento 2
Polarizador

La luz polarizada
Luz no polarizada

Luz polarizada

La luz, considerada como onda, vibra en todos los planos perpendiculares a su trayectoria de propagacin. Sin embargo, mediante un dispositivo llamado polarmetro, se puede conseguir que la luz vibre nicamente en uno de esos planos. Se dice entonces que la luz est polarizada. Pues bien, el plano de luz polarizada se desva al incidir sobre molculas que presentan carbonos asimtricos, siendo as pticamente activas, como los monosacridos.

Vibra en infinitos planos

Vibra en un solo plano

4. Hexosas
Son glcidos con seis tomos de carbono (fig. 5). Las aldohexosas tienen cuatro carbonos asimtricos y, por tanto, hay diecisis posibles estructuras moleculares diferentes (24 16). Entre ellas tienen inters en biologa la D-()-glucosa, la D-()-manosa y la D-()-galactosa. Entre las cetohexosas cabe citar la D-()-fructosa.
OH C1HO OH C2 OH HO C3 H OH C4 OH OH C5 OH OH C6H2OH
D - glucosa

parecido al de una molcula llamada pirano, o un pentgono, semejante al de una molcula llamada furano. Glucosa. Es el glcido ms abundante; es el llamado azcar de uva. En la sangre se halla en concentraciones de un gramo por litro. Polimerizada da lugar a polisacridos con funcin de reserva energtica, como el almidn en los vegetales o el glucgeno en los animales, o con funcin estructural, como la celulosa de las plantas. En la naturaleza se encuentra la D-()-glucosa, tambin llamada por ello dextrosa (glcido dextrgiro). La glucosa, al disolverse en agua, se hidrata, ya que el grupo carbonilo capta una molcula de agua (fig. 6). El hidrato as formado es inestable. El grupo carbonilo (CHO) queda prximo al quinto carbono, y entre ellos reaccionan sus radicales liberndose una molcula de agua y quedando ambos unidos por un tomo de oxgeno. La molcula adquiere as forma de ciclo hexagonal, como la del pirano, por lo que se denomina glucopiranosa. Se ha formado un hemiacetal (que es como se denomina la unin de un aldehdo con un alcohol) intramolecular. El grupo OH que ahora tiene el carbono 1 se denomina hidroxilo hemiacetlico. Este carbono es ahora asimtrico y se denomina carbono anomrico. Segn la posicin de su grupo OH a un lado u otro del plano, se distinguen dos nuevas estructuras denominadas anmeros: el anmero y el anmero . El anmero es cuando el grupo alcohlico (OH) del C1 est en posicin trans, es decir, al otro lado del plano donde est situado el CH2OH portado por el C5. El anmero es cuando estos dos radicales estn en posicin cis, es decir, en el mismo lado del plano. El estudio de la ciclacin fue realizado por W. N. Haworth y se conoce con el nombre de proyeccin de Haworth (fig. 6).

OH C1HO OH C2 OH HO C3 H HO C4 H OH C5 OH OH C6H2OH
D - galactosa

OH C1HO HO C2 H HO C3 H OH C4 OH OH C5 OH OH C6H2OH
D - manosa

OH C1H2OH OH C2O HO C3 H OH C4 OH OH C5 OH OH C6H2OH

D - fructosa

5 Hexosas.

Dado que la estructura abierta de las hexosas no es lineal, sino quebrada, debido a los ngulos que hay entre los enlaces de los carbonos, los primeros y ltimos carbonos quedan relativamente prximos. Por ello, en disolucin, la estructura lineal generalmente se cierra sobre s misma formando un hexgono,
48

H H HOH2C C H OH H C C C CHO H C HO C OH OH C H CH2OH H C OH C O H H C

CH2OH C OH H OH H C OH C O H

O H H

OH OH H OH

HO C H

Glucosa

CH2OH H C OH HO OH H C OH C H H C OH

CH2OH C

Hemiacetal

O H H

O H C OH

OH C H

C HO H HO C H

HO C H

-D-glucopiranosa

6 Proyeccin de Haworth. Ciclacin de la D-glucosa mediante la formacin de un hemiacetal al combinarse un grupo aldehdo con un grupo alcohlico.

En realidad, las estructuras cclicas de la glucosa no son planas, como indican los modelos estudiados, sino que pueden adoptar dos conformaciones en el espacio: la conformacin de nave y la conformacin de silla (fig. 7). Ello se debe a que los enlaces se orientan en el espacio y no en un plano.

HO

H CH2OH O H H HO H OH

La ciclacin puede adoptar tambin la estructura pentagonal del furano, como sucede, por ejemplo, en la ribosa y en la desoxirribosa, que se denominan por ello ribofuranosa y desoxirribofuranosa, respectivamente (fig. 8). Como slo son posibles los anillos de cinco o ms tomos de carbono, las triosas y las tetrosas siempre tienen estructuras abiertas. El resto de monosacridos, cuando se disuelven, presentan un equilibrio entre la forma cclica y la forma abierta. En el caso de la glucosa, la estructura lineal nunca llega al 5 % del total. Galactosa. Se puede hallar en la orina de los animales, en forma de -D-galactosa (fig. 5). Junto con la D-glucosa forma el disacrido lactosa, glcido propio de la leche. Se la encuentra tambin como elemento constitutivo de muchos polisacridos (gomas, pectina y muclagos). Manosa. Es tambin una aldohexosa. Se encuentra en forma de D-manosa (fig. 5) en ciertos tejidos vegetales y polimerizada formando las manosanas, en bacterias, levaduras y plantas superiores. Fructosa. Es una cetohexosa. Se halla en forma de -D-fructofuranosa (fig. 8). Es fuertemente levgira, por lo que tambin se la llama levulosa. Se encuentra libre en la fruta y, asociada con la glucosa, forma la sacarosa. En el hgado se transforma en glucosa, por lo que tiene el mismo poder alimenticio que sta. El anmero es cuando el OH del C2 est en posicin trans respecto al CH2OH del C5.
49

HO H

-D - glucopiranosa en estructura de silla. Los extremos de la molcula estn en diferentes lados respecto al plano.

H HO CH2OH O HO H H

OH H

H OH

-D - glucopiranosa en estructura de nave. Los extremos de la molcula estn en el mismo lado. Es una forma muy inestable.

7 Conformaciones de silla y de nave.

8 Pentosas y hexosas cicladas.

H HO

CH2OH O H OH H H OH H OH H HO

CH2OH O H OH H H OH OH H HO H

CH2OH O H OH H H OH OH H

-D - glucopiranosa (Aldohexosa)

-D - glucopiranosa (Aldohexosa)

-D - galactopiranosa (Aldohexosa)

HOH2C H H

O OH

OH CH2OH

HOH2C H

O H H OH OH

OH H

HOH2C H H

O H

OH H

OH H -D - fructofuranosa (Cetohexosa)

OH H -D - desoxirribofuranosa (Pentosa)

-D - ribofuranosa (Pentosa)

ocumentos 3 y 4

Cis y trans
Dos radicales de una molcula se hallan en posicin cis cuando estn en el mismo lado del plano de dicha molcula. Cuando estn en diferentes lados respecto a dicho plano, los radicales se encuentran en posicin trans.

La actividad ptica de la glucosa

La -D-()-glucopiranosa tiene un valor de rotacin del plano de polarizacin de 122,2 y la -D-()-glucopiranosa, de 18,7. Cuando se disuelve uno u otro de estos ismeros o una mezcla al azar de ambos, parte de uno se transforma en el otro ismero y se llega a un estado de equilibrio entre una forma y la otra, quedando una molcula del anmero por cada dos del anmero . El conjunto presenta una rotacin ya estabilizada de 52,7. Es decir, una disolucin de glucosa de 1 g/cm3 en un espesor de 10 cm produce un giro de 52,7 en el plano de vibracin. Este cambio gradual del poder rotatorio, al disolverse las molculas, se denomina mutarrotacin.

R1

R2

C C

H
Luz polarizada

En esta molcula, R1 y R2 estn en posicin cis.

R1

Solucin de -D-()-glucopiranosa ngulo de giro 122,2

C C

Luz polarizada

R2 Solucin de -D-()-glucopiranosa ngulo de giro 18,7

En esta molcula, R1 y R2 estn en posicin trans.

CUESTIONARIO 2
1. Dibuja todos los pasos de la ciclacin de una D-()-glucosa hasta llegar a una -D-()-glucopiranosa. 2. Dibuja todos los pasos de la ciclacin de una D-galactosa hasta llegar a una -D-galactopiranosa. 3. Seala qu carbono de la glucosa es simtrico en la forma lineal y asimtrico en la cclica. 4. Qu nombre recibe un glcido cuya frmula emprica es C6H12O6?

50

3 Los enlaces N-glucosdico y O-glucosdico

Hay dos tipos de enlace entre un monosacrido y otras molculas: el enlace N-glucosdico (fig. 9 a), que se forma entre un OH y un compuesto aminado, y el enlace O-glucosdico (fig. 9 b), que se realiza entre dos OH de dos monosacridos. Mediante el enlace N-glucosdico se forman aminoazcares.
a
H HO CH2OH O H OH H H OH H OH R -NH2
Compuesto
aminado

El enlace O-glucosdico es -glucosdico si el primer monosacrido es , y -glucosdico si el primer monosacrido es . Por ejemplo, entre el C1 de una -D-glucopiranosa y el C4 de otra D-glucopiranosa ( o ) se establece un enlace tipo (1 4) (fig. 9 b).
b
H HO CH2OH O H OH H H OH H H CH2OH O

+
OH HO

H OH H H OH

H OH

-D - glucopiranosa CH2OH O CH2OH O H HO H OH H H H OH HO R -OH H H OH H H OH H O H H OH H H OH CH2OH O H H2O OH

NH2

-D - glucosamina

9 a) Enlace N-glucosdico. b) Enlace O-glucosdico (1 4). Se establece un enlace covalente entre el OH del carbono 1 del primer monosacrido y el OH del carbono 4 del segundo, con prdida de una molcula de agua.

4 Sustancias derivadas de los monosacridos

Las principales sustancias derivadas de los monosacridos con inters biolgico son los aminoglcidos. stos provienen de la sustitucin de un grupo alcohlico por un grupo amino. Los ms importantes son la D-glucosamina (fig. 9 a), la N-acetil-glucosamina (fig. 10), que por polimerizacin forma la quitina del exoesqueleto de los artrpodos e interviene en la constitucin de la pared bacteriana, el cido N-acetil-murmico (fig. 10), tambin presente en la pared bacteriana, y los cidos silicos presentes en las glucoprotenas y los glucolpidos de la membrana citoplasmtica (ver el apartado 7.5 los glucolpidos). Otras sustancias derivadas de los monosacridos son los polialcoholes, como el sorbitol, que se obtiene por hidrogenacin cataltica, a presin, de la glucosa, y los glucocidos, como la vitamina C.
CH2OH O H HO H OH H N-acetil--D-glucosamina (NAG) H OH H NH C=O CH3 CH2OH O H HO O H OH H cido N-acetil-murmico (NAM)

H H CH CH3 NH C=O CH3

10 Derivados de los monosacridos.

COOH

51

Los disacridos

Los disacridos estn formados por la unin de dos monosacridos, que se realiza de dos formas: Mediante enlace monocarbonlico entre el carbono anomrico del primer monosacrido y un carbono cualquiera no anomrico del segundo. Al quedar un carbono anomrico con el hemiacetal libre, sigue teniendo la capacidad de reducir el reactivo de Fehling. Por ejemplo, la maltosa, la celobiosa y la lactosa. La terminacin del nombre del primer monosacrido es -osil y la del segundo monosacrido es -osa. Mediante enlace dicarbonlico, si se establece entre los dos carbonos anomricos de los dos monosacridos, con lo que se pierde la capacidad de reducir el licor de Fehling, por ejemplo, la sacarosa. La terminacin del nombre del primer monosacrido es -osil y la del segundo monosacrido es -sido. Principales disacridos con inters biolgico: Maltosa. Disacrido formado por dos molculas de D-glucopiranosa unidas mediante enlace (1 4). La maltosa se encuentra libre en el grano germinado de la cebada. La cebada germinada artificialmente se utiliza para fabricar cerveza, y tostada se emplea como sustitutivo del caf, es la llamada malta. En la industria se obtiene a partir de la hidrlisis del almidn y del glucgeno.
11 Disacridos.
CH2OH O H HO H OH H H OH Maltosa H O H H OH H H OH CH2OH O H OH

Celobiosa. Disacrido formado por dos molculas de D-glucopiranosa unidas mediante enlace (1 4). No se encuentra libre en la naturaleza. Se obtiene por hidrlisis de la celulosa. Lactosa. Disacrido formado por una molcula de D-galactopiranosa y otra de D-glucopiranosa unidas por medio de un enlace (1 4). Se encuentra libre en la leche de los mamferos. Dado que resulta muy difcil de fermentar, es estable incluso dentro de organismos de sangre caliente. Sacarosa. Disacrido formado por una molcula de -D-glucopiranosa y otra de -D-fructofuranosa unidas por medio de un enlace (1 2). Se encuentra en la caa de azcar (20 % en peso) y en la remolacha azucarera (15 % en peso). El enlace se realiza entre el OH del carbono anomrico del primer monosacrido y el OH del carbono anomrico del segundo monosacrido. Debido a ello es el nico disacrido de los citados que no tiene poder reductor sobre el licor de Fehling. La sacarosa es dextrgira (66,5), pero, si se hidroliza, la mezcla de D-glucosa (52,5) y de D-fructosa (92) que queda es levgira. Es lo que pasa en la miel debido a las enzimas (sacarasas) existentes en la saliva de las abejas. Isomaltosa. Disacrido formado por dos molculas de D-glucopiranosa mediante enlace (1 6). No se encuentra libre en la naturaleza. Se obtiene por hidrlisis de la amilopectina (un componente del almidn) y del glucgeno. Proviene de los puntos de ramificacin (1 6) de estos polisacridos.

CH2OH O HO H H OH H H OH Lactosa O H H

CH2OH O H OH H H OH H OH

-D-glucopiranosil-(1 4)--D-glucopiranosa

-D-galactopiranosil-(1 4)--D-glucopiranosa

CH2OH O H HO H OH H H OH Celobiosa H H O

CH2OH O H OH H H OH OH H H HO

CH2OH O H OH H H OH Sacarosa H HOH2C O H OH O H OH H CH2OH

-D-glucopiranosil-(1 4)--D-glucopiranosa
52

-D-glucopiranosil-(1 2)--D-fructofuransido

Los polisacridos

Los polisacridos estn formados por la unin de muchos monosacridos (puede variar de once a varios miles) mediante enlace O-glucosdico, con la consiguiente prdida de una molcula de agua por cada enlace. Tienen, pues, pesos moleculares muy elevados. No tienen sabor dulce. Pueden ser insolubles, como la celulosa, o formar dispersiones coloidales, como el almidn. No son capaces de reducir el reactivo de Fehling. Pueden desempear funciones estructurales o de reserva energtica. Los polisacridos que realizan una funcin estructural presentan enlace -glucosdico, y los que llevan a cabo una funcin de reserva energtica presentan enlace -glucosdico. En los polisacridos diferenciamos los homopolisacridos, o polmeros de un solo tipo de monosacrido, y los heteropolisacridos, cuando en el polmero interviene ms de un tipo de monosacrido. Los homopolisacridos se clasifican segn el tipo de monosacrido que se repite y segn el tipo de enlace (cuadro I).
Homopolisacridos Mediante enlace Mediante enlace Heteropolisacridos Presentan enlace

Amilosa. Est constituida por un polmero de maltosas unidas mediante enlaces (1 4). Su estructura es helicoidal con seis molculas de glucosa (tres maltosas) por vuelta. Su peso molecular vara desde varios cientos a 500.000. Es soluble en agua, dando dispersiones coloidales. Con el yodo se tie de color azul negruzco. Por hidrlisis con cidos o por la accin de la enzima -amilasa en los animales (saliva y jugo pancretico) o de la -amilasa, propia de las semillas, da lugar primero a un polisacrido menor denominado dextrina y luego a maltosa. La -amilasa acta sobre cualquier punto separando maltosas, mientras que la -amilasa slo separa maltosas, una a una, a partir del extremo no reductor. La maltosa, luego, mediante la accin de la enzima maltasa, pasa a D-glucosa (fig. 12). Amilopectina. Est constituida por un polmero de maltosas unidas mediante enlaces (1 4), con ramificaciones en posicin (1 6). Las ramas tienen alrededor de doce glucosas, unidas mediante (1 4), y aparecen, aproximadamente, cada doce glucosas. No es, pues, una estructura lineal sino ramificada. Su peso molecular puede llegar a 1.000.000, y es menos soluble en agua que la amilosa. Con el yodo se tie de rojo oscuro. Por hidrlisis con la -amilasa o con la -amilasa aparecen molculas de maltosa y los ncleos de ramificacin que, por poseer enlaces (1 6), son inatacables por estas enzimas. Estos ncleos reciben el nombre de dextrinas lmite. Sobre ellos slo acta la enzima R-desramificante (amilopectina-1,6-glucosidasa), especfica del enlace (1 6). Tras el concurso de la maltasa se obtiene finalmente la glucosa (fig. 12).

Almidn Glucgeno

Celulosa Quitina

Pectina Agar-agar Goma arbiga

CUADRO I. Polisacridos.

1. Almidn
El almidn es el polisacrido de reserva propio de los vegetales. Se acumula en forma de grnulos dentro de la clula vegetal, en el interior de los plastos. En el almidn se encuentran unidas miles de molculas de glucosa. As, al no estar disueltas en el citoplasma, no influyen en la presin osmtica interna y constituyen una gran reserva energtica que ocupa poco volumen. Los depsitos de almidn se encuentran en las semillas y en los tubrculos, como la patata y el boniato. A partir de ellos, las plantas pueden obtener energa sin necesidad de luz. El almidn est integrado por dos tipos de polmeros: la amilosa en un 30 % en peso, y la amilopectina en un 70 % (fig. 12).

2. Glucgeno
El glucgeno es el polisacrido propio de los animales. Se encuentra abundantemente en el hgado y en los msculos. Forma dispersiones coloidales en el interior de la clula. El glucgeno, al igual que la amilopectina, est constituido por un polmero de maltosas unidas mediante enlaces (1 4), con ramificaciones en posicin (1 6), pero con mayor abundancia de ramas. stas aparecen, aproximadamente, cada ocho o diez glucosas. Tiene hasta unas 15.000 molculas de maltosa. Su peso molecular oscila entre 1 y 5 millones. Con el yodo, la dispersin coloidal se tie de rojo oscuro. Las enzimas amilasas sobre el glucgeno dan maltosas y dextrina lmite. Luego, mediante las enzimas R-desramificantes y las maltasas, se obtiene glucosa.
53

Componentes del almidn

AMILOSA

AMILOPECTINA

H2O O O O O

H2O O O O

H2O O O O O

H2O O O O H2O O O O O Amilopectina O O CH2O O O

Amilosa -amilasa O O Maltosa O O Maltosa O Hidrlisis de la amilosa por accin de la enzima -amilasa. O O O O

-amilasa O O O O CH2 O

O O Maltosa

O Dextrina

12 Estructura de la amilosa y de la amilopectina, y accin sobre ellas de una amilasa cualquiera.

Hidrlisis de la amilopectina por accin de la enzima -amilasa, que empieza a nivel del extremo no reductor.

Capas de polmeros

CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH O (1 4) O (1 4) O (1 4) O H H H H O H H H H O O O OH H H OH H H OH H H OH H H H HN C CH3 H HN C CH3 H HN C CH3 H HN C CH3 O O O O

Quitobiosa

13 La pared celular de las clulas vegetales est formada por celulosa.

14 Las cadenas de quitina forman capas que, superpuestas, constituyen el exoesqueleto de los artrpodos.

54

3. Celulosa
La celulosa es un polisacrido con funcin esqueltica propio de los vegetales. Es el elemento principal de la pared celular. Esta pared constituye una especie de estuche en el que queda encerrada la clula, que persiste tras la muerte de sta (fig. 13). Las fibras vegetales (algodn, lino, camo, esparto, etc.) y el interior del tronco de los rboles (el leo o madera) estn bsicamente formados por paredes celulsicas de clulas muertas. El algodn es casi celulosa pura, mientras que la madera tiene un 50 % de otras sustancias que aumentan su dureza. La celulosa es un polmero de -D-glucopiranosas unidas mediante enlaces (1 4). Dos de ellas forman una celobiosa. Cada polmero tiene de 150 a 5.000 molculas de celobiosas, y un peso molecular medio de 800.000. Estos polmeros forman cadenas moleculares no ramificadas, que se pueden disponer paralelamente unindose mediante enlaces de puente de hidrgeno, en agregados cristalinos muy ordenados, que generalmente estn rodeados de otras cadenas no tan ordenadas. El conjunto se denomina micelas, y slo es visible al microscopio electrnico de alta resolucin. Las micelas se unen formando microfibrillas, que a su vez se agrupan dando macrofibrillas, ya observables al microscopio ptico. stas se unen formando fibras de algodn, que son observables a simple vista. Una fibra est constituida por unas 8 108 cadenas de celulosa (fig. 15). La peculiaridad del enlace hace a la celulosa inatacable por las enzimas digestivas humanas; por ello, este polisacrido no tiene inters alimentario para el hombre. Muchos microorganismos y ciertos invertebrados excepcionales (Lepisma saccharina o pececillo de plata, y el Teredo navalis o molusco taladrador de la madera) son capaces de segregar celulasas. Los insectos xilfagos, como los termes, y los herbvoros rumiantes (vaca, oveja, cabra, camello), aprovechan la celulosa gracias a los microorganismos simbiticos del tracto digestivo, que producen celulasas. Los rumiantes, como la vaca, tienen un voluminoso estmago que les sirve como tanque de fermentacin; por ello en sus heces no hay restos celulsicos. En los herbvoros no rumiantes, como el caballo, s hay.
H CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH O O O O H H H H H H H OH H H O OH H H O OH H H O OH H H O H OH H OH Celobiosa CADENA MOLECULAR DE CELULOSA H OH H OH

O 10,3 O

O O

8,3

O O O O O
9 7,

O O O O O O O O

Muchas cadenas se disponen ordenadamente formando estructuras cristalinas, gracias a puentes de hidrgeno entre ellas.

MICELA Abarca 60 o 70 cadenas moleculares.

MICROFIBRILLA Comprende 20 micelas. Slo visible con microscopio electrnico.

MACROFIBRILLA ( FIBRILLA) Comprende 250 microfibrillas. Visible con microscopio ptico.

4. Quitina
La quitina es un polmero de N-acetil-D-glucosamina unido mediante enlaces (1 4), de modo anlogo a la celulosa. Como ella, forma cadenas paralelas. Es el componente esencial del exoesqueleto de los artrpodos. En los crustceos se encuentra impregnada de carbonato clcico, lo que aumenta su dureza (fig. 14).

FIBRA DE ALGODN Comprende 1.500 fibrillas, es decir, 7,5 108 cadenas moleculares de celulosa. Es visible a simple vista.

15 Estructura de las fibras de celulosa.

55

5. Heteropolisacridos
Los heteropolisacridos son sustancias que por hidrlisis dan lugar a varios tipos distintos de monosacridos o de derivados de stos. Los principales son: pectina, agar-agar y goma arbiga. Pectina. Se encuentra en la pared celular de los tejidos vegetales. Abunda en la manzana, pera, ciruela y membrillo. Posee una gran capacidad gelificante que se aprovecha para preparar mermeladas. Agar-agar. Se extrae de las algas rojas o rodofceas. Es muy hidrfilo y se utiliza en microbiologa para preparar medios de cultivo (fig. 16). Goma arbiga. Es una sustancia segregada por las plantas para cerrar sus heridas.

16 El agar-agar se utiliza para preparar medios de cultivo.

CUESTIONARIO 3
1. Dibuja la estructura de un tetrasacrido constituido por tres glucosas unidas mediante enlace (1 4), y una unida mediante enlace (1 6) a la segunda glucosa del polmero anterior. 2. Elabora un esquema de la va metablica de la digestin del glucgeno (fases y enzimas necesarias).

3. Sobre qu sustrato acta la enzima -amilasa? Y la -amilasa? 4. Qu diferencia existe entre las enzimas amilasas y las enzimas R-desramificantes? 5. Qu tipo de enlace presentan la celulosa y la quitina? 6. Qu frmula emprica tendr un polisacrido formado por 100 glucosas?

7 Glcidos asociados a otro tipo de molculas

Los principales tipos de asociacin entre glcidos y otros tipos de molculas son los hetersidos, los peptidoglucanos, los proteoglucanos, las glucoprotenas y los glucolpidos.

1. Hetersidos
Los hetersidos resultan de la unin de un monosacrido, o de un pequeo oligosacrido, con una molcula o grupo de molculas no glucdicas, tambin de bajo peso molecular, denominadas aglucn. Los principales son: la digitalina, que se utiliza en el tratamiento de enfermedades vasculares; los antociansidos, responsables del color de las flores; los tansidos, que tienen propiedades astringentes y curtientes; algunos antibiticos, como la estreptomicina (fig. 17); los nucletidos, derivados de la ribosa y de la desoxirribosa, que forman los cidos nucleicos, etc.

diante pequeos oligopptidos de cinco aminocidos. Constituyen la pared bacteriana. El heteropolisacrido es el polmero de N-acetil-glucosamina (NAG) y de cido N-acetil-murmico (NAM) unidos entre s mediante enlaces (1 4). (Ver la pared bacteriana en el tema 21.)

H H2N NH H2N C NH OH H H OH

NH C NH2 H OH H H O H O O NHCH3 H H OH O H

NH NH

CHO CH 3 OH OH H

2. Peptidoglucanos
Los peptidoglucanos o murena (fig. 18) resultan de la unin de cadenas de heteropolisacridos me56

17 Hetersidos. Frmula de la estreptomicina.

NAM 1 2 NAG 3 1 NAG

NAM 1 2 3 1 NAG

NAM 1 2 3 1 NAG

NAM GLCIDOS 1 2 3 1 AMINOCIDOS Glicina NAG: N-acetil-glucosamina NAM: N-acetil-murmico

NAM 1 2 3 1

NAM 1 2 3 1

NAM 1 2 3 1

NAM 1 1 2 3 1 2 c. glutmico 3 Lisina Alanina

18 Peptidoglucanos.

3. Proteoglucanos
Los proteoglucanos son molculas formadas por una gran fraccin de polisacridos (aproximadamente el 80 % de la molcula), denominados glucosaminglucanos (antes mucopolisacridos, ya que dan lugar a disoluciones viscosas), y una pequea fraccin proteica (aproximadamente 20 %). Se distinguen los glucosaminglucanos estructurales y los de secrecin. Glucosaminglucanos estructurales. Los ms importantes son el cido hialurnico y los sulfatos de condroitina. Son heteropolisacridos que presentan alternancia de enlaces (1 4) y enlaces (1 3). Forman la matriz extracelular, muy abundante en los tejidos conjuntivos,

cartilaginosos y seos (ver la matriz extracelular en el tema 8). El cido hialurnico, adems, abunda en el lquido sinovial y en el humor vtreo (fig. 19). Glucosaminglucanos de secrecin. El ms conocido es la heparina. Es un heteropolisacrido que presenta alternancia de enlaces (1 4) y enlaces (1 3). Se encuentra en la sustancia intercelular, principalmente en el hgado y en el pulmn. Impide el paso de protrombina a trombina y con ello la coagulacin de la sangre. Est tambin presente en la saliva de animales hematfagos (sanguijuelas, mosquitos, vampiros, etc.). En medicina se utiliza para evitar las trombosis.

19 Asociaciones de glcidos y pptidos.

PEPTIDOGLUCANO Oligopptido Pm 500 a 1.000 GLUCOPROTENA Oligosacrido Pm 1.000 Protena Pm 20.000

Polisacrido Pm 15.000

Condroitn sulfato. Aproximadamente hay una cadena cada 12 aminocidos.

PROTEOGLUCANOS Conjunto de proteoglucanos que puede alcanzar el tamao de una bacteria.

cido hialurnico Protena

57

4. Glucoprotenas
Las glucoprotenas son molculas formadas por una pequea fraccin glucdica (generalmente un 5 % y como mximo un 40 %) y una gran fraccin proteica, que se unen mediante enlaces fuertes (covalentes). Se diferencian adems de los proteoglucanos en que la fraccin glucdica no contiene ni cido hialurnico ni sulfatos de condroitina. Las principales son: las mucinas de secrecin, como las salivales; las glucoprotenas de la sangre, como la protrombina y las inmunoglobulinas; las hormonas gonadotrpicas; algunas enzimas ribonucleasas y las denominadas glucoprotenas de las membranas celulares (fig. 20). stas presentan una gran heterogeneidad, debido a las variaciones en la secuencia de monosacridos, lo que explica muchas de sus propiedades, como son: estimular la sntesis de anticuerpos, permitir el reconocimiento entre clulas del mismo tejido, constituir receptores de membrana de muchas sustancias, etc. (Ver la membrana plasmtica en el tema 8.)

5. Glucolpidos
Los glucolpidos estn constituidos por monosacridos u oligosacridos unidos a lpidos. Generalmente se encuentran en la membrana celular (fig. 20). Los ms conocidos son los cerebrsidos y los ganglisidos. (Ver los glucolpidos en el tema 4.) Los cerebrsidos son glucolpidos en los que hay una cadena de uno a quince monosacridos. Los ganglisidos son glucolpidos en los que hay un oligosacrido en el que siempre aparece el cido silico.
EXTERIOR
Glucoprotenas Residuo de azcar

Glucoclix

Bicapa lipdica

20 Glucoprotenas y glucolpidos de la membrana.

CITOPLASMA

Glucolpido

8 Funciones generales de los glcidos

Los glcidos son uno de los cuatro principios inmediatos orgnicos propios de los seres vivos. Su proporcin en las plantas es mucho mayor que en los animales. En las plantas constituyen con mucho el principal componente orgnico. Se forman directamente en la fotosntesis. En los seres vivos realizan dos funciones principales: funcin energtica y funcin estructural. Por lo que respecta a la funcin energtica, el glcido ms importante es la glucosa, ya que es el monosacrido ms abundante en el medio interno, y puede atravesar la membrana plasmtica sin necesidad, para ello, de ser transformado en molculas ms pequeas. A partir de un mol de glucosa y mediante las sucesivas reacciones catablicas de la respiracin aerbica, se pueden obtener 266 kcal. El almidn, el glucgeno, etc., son formas de almacenar glucosas. El almidn, por ejemplo, permite acumular miles de glucosas sin que ello implique un incremento en la concentracin del medio interno celular.
58

En lo que concierne a la funcin estructural, se ha de destacar la importancia del enlace , que impide la degradacin de estas molculas y hace que algunos organismos puedan permanecer cientos de aos, en el caso de los rboles, manteniendo estructuras de hasta 100 metros de altura. Entre los glcidos con funcin estructural podemos citar: la celulosa en los vegetales; la quitina en los artrpodos; la ribosa y desoxirribosa en los cidos nucleicos de todos los seres vivos; los peptidoglucanos en las bacterias; la condroitina en huesos y cartlagos, etc. Otras funciones especficas de determinados glcidos son, por ejemplo, la de antibitico (estreptomicina), la de vitamina (vitamina C), la anticoagulante (heparina), la hormonal (hormonas gonadotropas), la enzimtica (junto con protenas forman las ribonucleasas) y la inmunolgica (las glucoprotenas de la membrana constituyen antgenos y, por otro lado, las inmunoglobulinas o anticuerpos estn formadas en parte por glcidos).

LABORATORIO

Propiedades qumicas de los glcidos

Material
Diez tubos de ensayo. Dos vasos de precipitados de 250 cm3. Pinzas. Trpode. Rejilla con amianto. Foco de calor. Rotulador para vidrio. Dos pipetas. Balanza de precisin. Esptula.

El carcter reductor se evidencia por la aparicin de un precipitado rojo de xido de cobre I. En un primer momento se aprecia un color verdoso, como resultado de la mezcla del color azul del reactivo y el color amarillo del primer producto, luego color amarillo del hidrxido de cobre I Cu(OH), y finalmente color rojo del xido de cobre I (Cu2O). Anotar los resultados. 7. A los tubos que contienen sustancias que no han reducido el reactivo de Fehling, aadir 1 cm3 de HCl al 10 %, para efectuar la hidrlisis de los enlaces glucosdicos. A continuacin calentar durante 15 minutos al bao Mara. Despus aadir hidrxido sdico al 20 %, hasta que el medio se vuelva bsico. Se puede comprobar mediante la introduccin de trocitos de papel indicador, aguantados con unas pinzas. A continuacin repetir la prueba de Fehling, es decir, aadir 2 cm3 de Fehling. Anotar los resultados. 8. Comprobar si forman un complejo azul oscuro con el yodo. Para ello poner en cuatro tubos de ensayo 2 cm3 de las cuatro sustancias a investigar. Aadir unas gotas de lugol (una disolucin de yodo y yoduro potsico) a cada uno de los tubos. Las molculas de yodo se concentran al quedar atrapadas en la hlice de glucosas y, al ser sta muy larga, quedan reveladas. Anotar los resultados.
Glucosa Maltosa Sacarosa Almidn

Productos qumicos
Glucosa, maltosa, sacarosa y almidn. Agua destilada. Reactivo de Fehling (A y B). Lugol. NaOH al 20 %. HCl al 10 %. Papel indicador de pH.

Reactivos
Reactivo de Fehling A: 34,64 g de CuSO4 en 500 cm3 de H2O. Reactivo de Fehling B: 176 g de tartrato sdico-potsico y 77 g de hidrxido potsico en 500 cm3 de H2O. Lugol: 6 g de yoduro potsico en 100 cm de agua ms 2 g de yodo.
3

Solubilidad Color Aspecto

Protocolo
1. Preparar disoluciones diluidas de glucosa, sacarosa, maltosa y almidn (de 3 a 5 g/100 cm3). 2. Observar la forma en que se disuelve cada una de estas sustancias. Anotar lo observado en la parrilla de resultados que aparece al final. 3. Con una esptula, que se lavar y secar cada vez que se utilice, poner un poco de cada producto en la mano, y apreciar si el sabor es dulce o no. Anotar los resultados. 4. Observar el color y el aspecto, es decir, si a simple vista tiene aspecto de cristalitos o de materia amorfa. Anotar los resultados. 5. Llenar hasta la mitad dos tubos de ensayo de cada una de estas disoluciones. Indicar, con un rotulador para vidrio o con una etiqueta, el contenido de cada uno de ellos. 6. Comprobar el carcter reductor de las cuatro sustancias frente al reactor de Fehling. Poner en cuatro tubos de ensayo 2 cm3 de las cuatro sustancias a investigar. Aadir 2 cm3 de mezcla a partes iguales de Fehling A y de Fehling B (debe prepararse momentos antes del anlisis, ya que dicha mezcla se estropea con el tiempo). Poner los cuatro tubos en un vaso de precipitados de 250 cm3, medio lleno de agua, y calentar al bao Mara.

Sabor Fehling Fehling tras hidrlisis Lugol

Preguntas
1. Por qu unos glcidos son muy solubles y otros lo son muy poco? 2. Qu tipo de dispersiones forman los polisacridos? 3. Por qu unos glcidos forman slidos cristalinos y otros no? 4. Por qu unos glcidos no reducen el reactivo de Fehling y s lo hacen despus de una hidrlisis? 5. Escribe las semiecuaciones de oxidacin-reduccin de la glucosa frente al reactivo de Fehling. 6. Escribe la reaccin de hidrlisis de la sacarosa. 7. Por qu unos glcidos se colorean con el yodo y otros no?

59

4
Bicapa lipdica

Los lpidos
MEDIO EXTERNO

Glucoprotenas

Cadena glucdica

N D I C E
INFORMACIN 1 Los lpidos.
Concepto de lpido. Clasificacin de los lpidos.

2 Los cidos grasos.

Caractersticas y clasificacin. Propiedades fsicas de los cidos grasos. Propiedades qumicas de los cidos grasos.

Fosfolpido

Colesterol

Protenas CITOSOL

3 Lpidos con cidos grasos o saponificables.

Lpidos simples. Lpidos complejos.

4 Lpidos sin cidos grasos o insaponificables.

Terpenos o isoprenoides. Esteroides. Prostaglandinas.

Membrana celular.

5 Funciones de los lpidos. ACTIVIDADES LABORATORIO

Con los lpidos en el laboratorio

Todas las membranas celulares poseen una estructura bsica comn: una bicapa lipdica en la cual aparecen incluidas molculas de protenas. Estas membranas son barreras que aslan el citoplasma del medio externo y a la vez actan como un filtro selectivo que regula la entrada de sustancias nutritivas y la salida de productos de secrecin y de sustancias de desecho. Tambin exploran su entorno reconociendo todo tipo de molculas, algunas de las cuales servirn de estmulo induciendo una respuesta celular.

60

Los lpidos

2. Clasificacin de los lpidos

Los lpidos se pueden clasificar en: cidos grasos, lpidos con cidos grasos o saponificables y lpidos sin cidos grasos o insaponificables.
cidos grasos Acilglicridos Simples Lpidos con cidos grasos o saponificables Lpidos Cridos Fosfolpidos Complejos Glucolpidos Terpenos o isoprenoides Lpidos sin cidos grasos o insaponificables Esteroides Prostaglandinas

1. Concepto de lpido
Los lpidos son el grupo de biomolculas orgnicas que cumplen las dos siguientes caractersticas: Son insolubles en agua y en otros disolventes polares. Son solubles en disolventes orgnicos, es decir, disolventes no polares, como el benceno (C6H6), el octano (C8H18), etc. Los lpidos son un grupo de sustancias muy heterogneo. Bsicamente estn compuestos por carbono e hidrgeno. La mayora adems presentan oxgeno, pero en proporciones muy bajas. Algunos lpidos pueden contener, adems, fsforo, nitrgeno y azufre.

CUADRO I. Clasificacin de los lpidos.

Los cidos grasos

lpidos mediante la ruptura, por hidrlisis, de sus molculas. Se conocen unos setenta cidos grasos, y se pueden clasificar en dos grupos: los cidos grasos saturados y los cidos grasos insaturados.

1. Caractersticas y clasificacin
Los cidos grasos son molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada de tipo aliftico (... CH2 CH2 CH2 ...), es decir, lineal, con un nmero par de tomos de carbono, y cuyo ltimo tomo de carbono constituye un grupo carboxilo ( COOH) , tambin llamado grupo cido (fig. 1). Los cidos grasos son muy poco abundantes en estado libre. Se obtienen a partir de muchos tipos de
110 110

1,5 4

120 120

120

cido graso, modelo de bolas y varillas.

1 Modelo molecular de un cido graso.

2 cidos esterico y oleico, modelo compacto y frmula esquemtica. Ejemplos de un cido graso saturado, el cido esterico, y un cido graso insaturado, el cido oleico.

cido oleico, modelo compacto.

30,1

cido esterico, modelo compacto.

11 0

123 123

O = C OH
110

O = C OH Frmula esquemtica del cido esterico. En los ngulos se encuentran los grupos CH2 y en el extremo, el grupo CH3.

Frmula esquemtica del cido oleico.

Carbono

Oxgeno

Hidrgeno

61

 Los cidos grasos saturados slo tienen enlaces simples entre los tomos de carbono, y sus cadenas hidrocarbonadas son lineales. Son ejemplos de cidos grasos saturados el mirstico, el palmtico y el esterico (fig. 2).
cidos grasos saturados Mirstico Palmtico Esterico Lignocrico CH3 (CH2)12 COOH CH3 (CH2)14 COOH CH3 (CH2)16 COOH CH3 (CH2)22 COOH Punto de fusin (oC) 53,9 63,1 69,6 86,0

un ster y liberndose una molcula de agua. Mediante hidrlisis (hirviendo con cidos o bases), el ster se rompe y da lugar de nuevo al cido graso y al alcohol (fig. 3 a). La saponificacin es una reaccin tpica de los cidos grasos, en la cual reaccionan con lcalis o bases (NaOH o KOH) y dan lugar a una sal de cido graso, que se denomina jabn (fig. 3 b). Las molculas de jabn presentan simultneamente una zona lipfila o hidrfoba, que rehye el contacto con el agua, y una zona hidrfila o polar, que tiende a contactar con ella. Esto se denomina comportamiento anfiptico. As, un jabn, por ejemplo, el palmitato sdico (CH3 (CH2)14 COONa), presenta una cadena hidrocarbonada que acta como zona lipfila y por ello capaz de establecer enlaces de Van der Waals con molculas lipfilas. La parte hidrfila de la molcula ( COONa) se ioniza, quedando el grupo carboxilo con carga elctrica negativa ( COO), lo que le permite establecer atracciones de tipo elctrico con las molculas del agua y otros grupos polares (fig. 6). Por ello sus molculas no quedan aisladas originando disoluciones verdaderas sino que forman grupos denominados micelas, constituyendo dispersiones coloidales. Las micelas pueden ser monocapas (fig. 7, pgina 64), o bicapas (fig. 8) si engloban agua en su interior. Tambin tienen un efecto espumante cuando una micela monocapa atrapa aire, y efecto emulsioGrupo hidrfilo Grupo lipfilo CH2 H3C CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 C OH O

Los cidos grasos insaturados tienen uno o varios enlaces dobles en su cadena hidrocarbonada y sus molculas presentan codos, con cambios de direccin, en los lugares donde aparece un doble enlace entre tomos de carbono. Son ejemplos de cidos grasos insaturados el oleico (fig. 2) y el linoleico.
cidos grasos insaturados CH3 (CH2)7 CH CH (CH2)7 COOH cido oleico. Punto de fusin 13,4 C CH3 (CH2)4 CH CH CH2 CH CH (CH2)7 COOH cido linoleico. Punto de fusin 5 C

2. Propiedades qumicas de los cidos grasos

Los cidos grasos se comportan como cidos moderadamente fuertes, lo que les permite realizar reacciones de esterificacin y saponificacin. Otra reaccin propia de ellos es la autooxidacin (documento 1). En la esterificacin un cido graso se une a un alcohol mediante un enlace covalente, formando
a
(CH3 (CH2)14 COOH)

CH2

CH2

4 cido palmtico, zonas lipfilas e hidrfilas.

ESTERIFICACIN O = C OH + HO CH2 CH2 CH3 Propanol (alcohol) O = C O CH2 CH2 CH3 + H2O
HIDRLISIS

cido palmtico (cido graso)

Palmitato de propilo (ster)

Agua

SAPONIFICACIN O = C OH + NaOH cido palmtico (cido graso) Hidrxido sdico (base) Palmitato sdico (jabn) O = C ONa + H2O
Agua

3 a) Esterificacin y b) saponificacin.

62

nante o detergente, cuando una micela monocapa contiene gotitas de lpidos (fig. 7).

Puentes de hidrgeno

Fuerzas de Van der Waals

3. Propiedades fsicas de los cidos grasos

Entre las propiedades fsicas de los cidos grasos se encuentran la solubilidad y el punto de fusin. La solubilidad. Los cidos de 4 o 6 carbonos son solubles en agua, pero a partir de 8 carbonos son prcticamente insolubles en ella. Esto se debe a que, a diferencia de los jabones, su grupo carboxilo ( COOH) se ioniza muy poco y por tanto su polo hidrfilo es muy dbil. Cuanto ms larga es la cadena hidrocarbonada, que es lipfila, ms insolubles son en agua y ms solubles son en disolventes apolares (fig. 4). El punto de fusin. Los cidos grasos tienden a agruparse debido a que entre los tramos lipfilos de las cadenas se establecen enlaces de Van der Waals. Si forman un slido, para fundirlo hay que romper esos enlaces y separar as sus molculas. En los cidos y grasos saturados, cuanto mayor es el nmero de carbonos, ms enlaces hay que romper, ms energa calorfica se ha de gastar y, por tanto, ms alto es su punto de fusin. En los cidos grasos insaturados, como la presencia de dobles y triples enlaces

HO C

C de las plantas 1. La polaridad OH O superiores

O C OH O C

HO C O HO C OH O C OH O O HO C

5 Formacin de puentes de hidrgeno y fuerzas de Van der Waals entre molculas de cidos grasos saturados.

hace que las cadenas lineales presenten codos, y esto dificulta su ordenacin espacial, se forman relativamente pocos enlaces de Van der Waals y, en consecuencia, sus puntos de fusin son mucho ms bajos que en los cidos grasos saturados de peso molecular parecido (fig. 5).

6 Dispersiones coloidales hidrfobas.

Los lpidos son insolubles en agua. Tras agitacin dan emulsiones inestables.

Tras la adicin de jabn se forma una membrana haptgena en la superficie de las gotitas de grasa.

Aparece una emulsin persistente.

+ + Na+ Na Na

Na
n

Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+

(CH3 (CH2)14 COO + Na+) Na+

Na Na+ Na+

(CH2)n

Gota de grasa

Molculas ionizadas de un tipo de jabn, el palmitato sdico

Na+ Na+ Na
+ + Na+ Na+ Na

Na

63

Aceite Agua Agua

Micela monocapa

Agua Efecto emulsionante Micela bicapa

8 Micela bicapa.

Aire

CUESTIONARIO 1
1. Explica cul es la causa de que los jabones sean capaces de quitar las manchas de grasa. 2. Por qu no se unen las micelas entre s? 3. Desarrolla la reaccin de obtencin del oleato de etilo.

Efecto espumante

4. Desarrolla la reaccin del cido oleico con el hidrxido potsico e indica a qu da lugar.

7 Micelas monocapas.

ocumento 1
El aceite de oliva denominado refinado es extrado mediante disolventes orgnicos, proceso que requiere un tratamiento posterior de eliminacin de impurezas en el que se pierde la vitamina E; por ello, este tipo de aceite se enrancia (autooxida) con facilidad. El aceite de oliva denominado virgen es extrado por simple presin en fro de las olivas. Este aceite contiene la suficiente vitamina E para evitar su autooxidacin. La mezcla de aceite refinado con aceite virgen se denomina aceite puro de oliva. Algunos cidos grasos no pueden ser sintetizados por el cuerpo humano pese a ser imprescindibles para su vida, deben pues ingerirse en la dieta. Son los llamados cidos grasos esenciales. Un ejemplo de ellos es el cido linoleico.

La autooxidacin de los cidos grasos

La autooxidacin o enranciamiento de los cidos grasos insaturados se debe a la reaccin de los dobles enlaces con molculas de oxgeno. Por esta reaccin, los dobles enlaces se rompen y la molcula de cido graso se escinde, dando lugar a aldehdos. Se ha comprobado que la presencia de la vitamina E, tambin llamada vitamina de la fertilidad o tocoferol, evita la autooxidacin de los lpidos como la vitamina A, lpidos de membrana, grasas, etc. La vitamina E se encuentra en las hojas verdes, semillas, aceites y en los huevos. Su actividad no ha sido comprobada en el hombre.

AUTOOXIDACIN O = + CH3 CH= CH CH2 CH= CH C OH cido graso insaturado 4 O2

Oxgeno

O O O O O = = = CH3 C + C CH2 C + C C H H H H OH
=

Aldehdos

CH3 HO H3C CH3 CH2 CH2 CH2 CH3 CH CH2 CH2 CH3 CH CH2 CH2 CH3 CH2 CH2 CH2 CH CH2 CH2 CH2 CH CH2 CH2 CH2 CH CH3 O CH3 Vitamina E ( - tocoferol)

64

3 Lpidos con cidos grasos o saponificables

Los lpidos saponificables son aquellos que contienen cidos grasos que pueden ser liberados mediante una hidrlisis. Todos los lpidos saponificables son steres de cidos grasos y un alcohol o un aminoalcohol. Pertenecen a este grupo los lpidos simples u hololpidos y los lpidos complejos o heterolpidos.

1. Lpidos simples
Son lpidos saponificables en cuya composicin slo intervienen un alcohol y uno o ms cidos grasos. Comprenden dos grupos de lpidos: los acilglicridos y los cridos. Acilglicridos. Son lpidos simples formados por la esterificacin de una, dos o tres molculas de cidos grasos con una molcula de glicerina (propanotriol) (fig. 9 a). Tambin reciben el nombre de glicridos o grasas simples. Segn el nmero de cidos grasos que forman la molcula de los acilglicridos, se distinguen tres tipos de estos lpidos: los monoacilglicridos, que contienen una molcula de cido graso; los diacilglicridos, con dos molculas de cidos grasos; y los triacilglicridos, con tres molculas de cidos grasos.

Si un acilglicrido presenta como mnimo un cido graso insaturado, dicho acilglicrido es lquido y recibe el nombre de aceite; por ejemplo, el aceite de oliva es un ster de tres cidos oleicos con una glicerina. Si todos los cidos grasos son saturados, el acilglicrido es slido y recibe el nombre de sebo, como la grasa de buey, de caballo o de cabra. Si el acilglicrido es semislido, recibe el nombre de manteca, como la grasa de cerdo. En los animales de sangre fra y en los vegetales hay aceites, y en los animales de sangre caliente hay sebos o mantecas. Los acilglicridos son molculas insolubles en agua, sobre la que flotan debido a su baja densidad. Los triacilglicridos carecen de polaridad, por lo que tambin se denominan grasas neutras. Slo los monoacilglicridos y los diacilglicridos poseen una dbil polaridad debida a los radicales hidroxilo que dejan libres en la glicerina. Los acilglicridos frente a bases dan lugar a reacciones de saponificacin en la que se producen molculas de jabn (fig. 9 b). Las grasas son sustancias de reserva alimenticia (energtica) en el organismo. En los animales se almacenan en los adipocitos (clulas adiposas) del tejido adiposo. Su combustin metablica produce 9,4 kilocaloras por gramo.

9 Reacciones de los acilglicridos: a) Esterificacin. b) Saponificacin. a

O C O C O C OH cido palmtico OH HO HO HO CH2
ESTERIFICACIN

O C O C O CH2 Triacilglicrido (propanotriol) O O CH2 HO

SAPONIFICACIN

CH2

OH

CH2 C O

CH 3 H2O

CH2

Glicerina (propanotriol)

b
C

O CH2 CH CH2 Palmitato sdico (jabn)

O C O C Tripalmitina O CH2 O CH 3 NaOH

Hidrxido sdico

HO HO

ONa O ONa O ONa

Glicerina

65

Cridos. Son lpidos que se obtienen por esterificacin de un cido graso con un alcohol monovalente de cadena larga (fig. 10). Tienen un fuerte carcter lipfilo, por lo cual la unin de molculas de cridos, tambin llamados ceras, origina lminas impermeables que protegen muchos tejidos y formaciones drmicas de animales (pelos, plumas, etc.) y vegetales (hojas, frutos, etc.). Tambin pueden aparecer mezclados con cidos grasos libres y esteroides, como en la cera de abeja, el espermaceti de las ballenas, la lanolina o cera protectora de la lana, el cerumen del conducto auditivo, etc.

C30 H61 OH HO
Alcohol miriclico

C cido palmtico

ESTERIFICACIN

O C30 H61 O C Palmitato de miricilo (cera de abeja) H2O

10 Formacin de un crido.

CUESTIONARIO 2
1. Reconoce, entre los siguientes compuestos, cridos y acilglicridos. a) CH3 (CH2)14 CO O CH2 | CH OH | CH2 OH b) CH2OH CHOH CH2OH c) C30H61 O CO (CH2)14 CH3 d) CH3 (CH2)4 COOH e) CH3 (CH2)14 CO O Na f) C30H61 OH 2. Construye un diacilglicrido mediante la esterificacin de las siguientes molculas: glicerina, cido esterico y cido oleico. 3. Escribe la frmula del triesteracilglicrido (triestearina). 4. La hidrlisis de un determinado lpido da lugar a glicerina y cido esterico en proporcin 1:2. Cul es la molcula inicial? Desarrolla su frmula. 5. La saponificacin de un determinado lpido dio lugar a glicerina y a estearato sdico en proporcin 1:3. Desarrolla la frmula de dicho lpido y la reaccin que ha tenido lugar. 6. Por qu la triolena es un aceite y la triestearina es un sebo?

2. Lpidos complejos
Son lpidos saponificables en cuya composicin adems de un alcohol y uno o ms cidos grasos hay un cido fosfrico o un glcido. Los lpidos complejos son las principales molculas constitutivas de la doble capa lipdica de las membranas citoplasmticas, por lo que tambin se los denomina lpidos de membrana. Al igual que los jabones, estos lpidos tienen un comportamiento anfiptico. En contacto con el agua, los lpidos complejos se disponen formando bicapas, en las que las zonas lipfilas quedan en la parte interior y las zonas hidrfilas en la exterior, enfrentadas a las molculas de agua. Los lpidos complejos se dividen en dos grupos: los fosfolpidos y los glucolpidos. Fosfolpidos. Son lpidos complejos caracterizados por presentar un cido ortofosfrico en su zona polar. Son las molculas ms abundantes de la membrana citoplasmtica. Se dividen en dos grupos: los fosfoglicridos y los fosfoesfingolpidos.
66

a) Los fosfoglicridos son steres formados por una glicerina, dos cidos grasos, un cido fosfrico y un alcohol. Uno de los dos cidos grasos es un cido insaturado y el alcohol puede ser un aminoalcohol, es decir un alcohol con uno o ms grupos amino (fig. 11). Los fosfoglicridos ms abundantes son: la fosfatidilserina, la lecitina o fosfatidilcolina (fig. 12 a) y la cefalina o fosfatidiletanolamina, molculas especialmente abundantes en las membranas de las clulas eucariotas. b) Los fosfoesfingolpidos son steres formados por un alcohol denominado esfingosina, un cido graso, un cido fosfrico y un alcohol o aminoalcohol. El fosfoesfingolpido ms abundante es la esfingomielina, molcula que aparece en las membranas citoplasmticas y que es muy abundante en las vainas de mielina que protegen a los axones de las neuronas (fig. 12 b). Los fosfolpidos poseen un comportamiento anfiptico, ya que presentan una zona polar, formada por el grupo fosfato unido a un alcohol o

un aminoalcohol, y una zona lipfila en la que aparecen dos cidos grasos. Este comportamiento anfiptico les permite formar las bicapas lipdicas, estructura bsica de las membranas celulares. Glucolpidos. Son lpidos complejos formados por la unin de una esfingosina, un cido graso y un glcido. Se diferencia de los fosfoesfingolpidos en que carecen de un grupo fosfato y porque en lugar de poseer un alcohol presenta un glcido. Se encuentran formando parte de las bicapas lipdicas de las membranas citoplasmticas de todas las clulas, especialmente las neuronas del cerebro.

Los glucolpidos pueden dividirse en dos grupos: cerebrsidos y ganglisidos. Los cerebrsidos (fig. 13 a) son molculas en las que a la ceramida se une una cadena glucdica que puede tener entre uno y quince monosacridos. Los ganglisidos, por su parte (fig. 13 b), son molculas en las que la ceramida se une a un oligosacrido complejo en el que siempre aparece el cido silico. Los glucolpidos se sitan en la cara externa de la membrana celular, en donde realizan una funcin de relacin celular, siendo receptores de molculas externas que darn lugar a respuestas celulares. Se ha comprobado que algunos ganglisidos actan como receptores de membrana de algunas toxinas y de ciertos virus, permitiendo su entrada en la clula.

cido graso insaturado O C O O C cido graso saturado CH2 O CH2 Grupo fosfato O O P OH OH CH2 Glicerina

a
CH3 (CH2 )12 CH= CH CH OH = CH3 (CH2 )22 C NH CH O CH2 O O Galactocerebrsido H OH H H HO H H
Galactosa

OH CH2 OH

11 cido fosfatdico.

O C O O O CH CH2

Ganglisido GM1 O
cido esterico

CH2 O O P O O CH2 CH2 N+ CH3 CH3 CH3

Esfingosina

CH3 (CH2 )12 CH= CH CH OH O = OH = O

CH3 (CH2 )22 C NH CH

cido lignocrico CERAMIDA

Colina

CH2 O P O CH2 CH2 N+

CH3 CH3 CH3

D-galactosa cido silico

CH3 (CH2 )16 C NH O

12 Fosfolpidos: a) fosfatidilcolina; b) esfingomielina.

13 Glucolpidos: a) cerebrsido; b) ganglisido.

Esfingosina HO CH3 (CH2 )12 CH= CH CH CH CH2

D-glucosa N-acetilneuraminato

67

4 Lpidos sin cidos grasos o insaponificables

El grupo de los lpidos insaponificables comprende los terpenos o isoprenoides, los esteroides y las prostaglandinas. terpenos: los monoterpenos (2 molculas de isopreno), los sesquiterpenos (3 molculas), los diterpenos (4), los triterpenos (6), los tetraterpenos (8) y los politerpenos (ms de 8 molculas de isopreno). Son de destacar los siguientes terpenos: Entre los monoterpenos, algunas esencias vegetales como el mentol de la menta, el limoneno del limn y el geraniol del geranio. Entre los diterpenos, el fitol, alcohol que forma parte de la clorofila, y las vitaminas A (fig. 15), E (ver documento 1) y K (fig. 16). Entre los tetraterpenos, los carotenoides, que son pigmentos fotosintticos. Se dividen en carotenos, de color rojo, y xantofilas, de color amarillo. Los carotenoides son precursores de la vitamina A. Entre los politerpenos, el caucho, que se obtiene del rbol Hevea brasiliensis. El caucho es un polmero formado por miles de molculas de isopreno, dispuestas de forma lineal.

1. Terpenos o isoprenoides
Los terpenos o isoprenoides son molculas lineales o cclicas formadas por la polimerizacin del isopreno o 2-metil-1,3-butadieno (fig. 14).
CH2 = C CH= CH2 CH3

14 Frmula del isopreno.

La clasificacin de los terpenos se basa en el nmero de molculas de isopreno que contienen. Segn dicho nmero, se distinguen los siguientes tipos de
isopreno
H3C C CH3 CH3 CH3

H3C CH3 CH3 C CH = CH C = CH CH = CH C = CH CH = CH CH = C CH = CH CH = C CH = CH CH3

CH3

-caroteno

H3C

H3C C

CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH = CH C = CH CH = CH C = CH CH2OH CH3 HOCH2CH = C CH = CH CH = C CH = CH

H3C C

CH3

Vitamina A1 (retinol)

Vitamina A1 (retinol)

H3C

15 La vitamina A o vitamina antixeroftlmica. Se encuentra en vegetales que contengan carotenoides (pigmentos de color rojo y amarillo), molculas que actan como provitaminas que originarn dos molculas de vitamina A en el intestino. Tambin se encuentra en la leche y en los huevos. Acta protegiendo tejidos epiteliales y en las reacciones que se producen en el ojo al percibir estmulos luminosos. Su carencia origina la xeroftalmia, engrosamiento y opacidad de la crnea, y debilitamiento de las mucosas, que dejan de ser una barrera infranqueable para los microbios.
O CH3 CH3 CH3 CH3 CH2 CH= C CH2 CH2 CH2 CH CH2 CH2 CH2 CH CH2 CH2 CH2 CH CH3 CH3 O
Vitamina K1

16 La vitamina K o filoquinona. En realidad es un grupo de vitaminas de orgenes diversos y que tiene como funcin la sntesis de protrombina, molcula precursora de la trombina, enzima necesaria para permitir la coagulacin de la sangre. Su carencia favorece la aparicin de hemorragias. La carencia de vitamina K es rara y se debe a alteraciones en la absorcin intestinal, generalmente causadas por dficit de cidos biliares, que son los encargados de favorecer la absorcin de los lpidos en el intestino. La vitamina K4 se ha obtenido sintticamente y es la ms activa del grupo.

O CH3
Vitamina K4

68

2. Esteroides
Los esteroides son lpidos que derivan del esterano o ciclopentano perhidrofenantreno (fig. 17).
18

Los esteroides comprenden dos grandes grupos de sustancias: los esteroles y las hormonas esteroideas. Esteroles. Son esteroides que poseen un grupo hidroxilo unido al carbono 3 y una cadena aliftica en el carbono 17. Los esteroles son el grupo ms numeroso de los esteroides (fig. 18). Los principales esteroles son el colesterol, los cidos biliares, las vitaminas D y el estradiol. Hormonas esteroideas. Se caracterizan por la presencia de un tomo de oxgeno unido al carbono 3 mediante un doble enlace. Hay dos grupos de hormonas derivadas del esterano: las hormonas suprarrenales y las hormonas sexuales (fig. 19).

CH3
19 11 9 10 5 12 13 14 17 16 15

CH3
1 2 3

C B
6 8 7

A
4

17 Frmula del esterano.

COLESTEROL

21

22 20 23 26 24 17 25

H3C CH3 CH3

CH3 CH3
27

HO

El colesterol forma parte estructural de las membranas de las clulas de los animales, a las que confiere estabilidad, ya que se sita entre los fosfolpidos y fija a estas molculas. El colesterol es muy abundante en el organismo, y es la molcula base que sirve para la sntesis de casi todos los esteroides. Se forma a partir de la ciclacin del triterpeno escualeno, por lo que los esteroides se consideran derivados de los triterpenos.

CIDO CLICO
HO

H3C CH3
17

C O OH

CH3

Los cidos biliares son un grupo de molculas producidas en el hgado a partir del colesterol, y de las que derivan las sales biliares, que se encargan de la emulsin de las grasas en el intestino, lo que favorece la accin de las lipasas y su posterior absorcin intestinal.

HO

OH

VITAMINA D2

H3C CH3 H3C CH3 CH3

H2C

HO

El grupo de las vitaminas D est formado por un conjunto de esteroles que regulan el metabolismo del calcio y su absorcin intestinal. Cada vitamina D proviene de un esterol diferente. As, la vitamina D2 o calciferol se forma a partir del ergosterol, provitamina de origen vegetal; la vitamina D3 o colecalciferol proviene del colesterol, etc. La sntesis de estas vitaminas es inducida en la piel por los rayos ultravioleta. Su carencia origina raquitismo en los nios y osteomalacia en los adultos.

-ESTRADIOL

OH CH3

El estradiol es la hormona encargada de regular la aparicin de los caracteres sexuales secundarios femeninos.

HO

18 Algunos esteroles.

69

HORMONAS SUPRARRENALES
HO
11

H O=C

CH2OH C= O
17

CH3
Aldosterona
3

Entre las hormonas suprarrenales se encuentran la aldosterona, que regula el funcionamiento del rin, y el cortisol, que acta en el metabolismo de los glcidos, regulando la sntesis del glucgeno. Todas estas hormonas se sintetizan en las cpsulas suprarrenales, situadas en el extremo apical de cada rin.

HORMONAS SEXUALES
CH3

OH CH3
17

Testosterona
3

Entre las hormonas sexuales se encuentran la progesterona, que prepara los rganos sexuales femeninos para la gestacin, y la testosterona, responsable de los caracteres sexuales masculinos.

19 Algunas hormonas esteroideas.

ocumento 2

El colesterol
El colesterol es una molcula muy abundante en la bicapa lipdica de la membrana y se sita ocupando los espacios vacos que hay entre los cidos grasos insaturados de los fosfolpidos. El colesterol se une mediante su grupo polar con las zonas hidrfilas de los fosfolpidos contiguos, mientras que el resto de su molcula interacciona con las zonas lipfilas de estas molculas. El colesterol es una molcula determinante en la estabilidad de la membrana, debido a que disminuye la fluidez o movilidad de las molculas de fosfolpidos entre las dos capas lipdicas de la membrana.
HO
Colesterol Lpidos de membrana

CH3

CH3

CH 3 CH2 H2C CH2 HC H3C CH3

Partes polares

Estructura del colesterol y su situacin en las membranas celulares.

3. Prostaglandinas
Las prostaglandinas son lpidos cuya molcula bsica es el prostanoato, constituido por 20 carbonos que forman un anillo ciclopentano y dos cadenas alifticas (fig. 20). Este grupo de sustancias se sintetizan a partir de los cidos grasos insaturados que forman parte de los fosfolpidos de las membranas celulares. Las prosta70

glandinas se sintetizan continuamente y actan de forma local. Las funciones de las prostaglandinas en el organismo son muy diversas. Entre ellas destacan: la produccin de las sustancias que regulan la coagulacin de la sangre y el cierre de las heridas; la sensibilizacin de los receptores del dolor y la iniciacin de la vasodilatacin de los capilares, lo que origina la inflamacin despus de los golpes, heridas o infecciones;

Partes apolares

la aparicin de fiebre como defensa en las infecciones; la disminucin de la presin sangunea al favorecer la eliminacin de sustancias en el rin; la reduccin de la secrecin de jugos gstricos, facilitando la curacin de las lceras de estmago; la regulacin del aparato reproductor femenino y la iniciacin del parto.

CUESTIONARIO 3
1. A qu tipo de lpido corresponde la siguiente molcula? CH2 O CO R1 | O CH O CO (CH2)6 CHCH R2 || | NH2 (CH2)2 O P O CH2 | OH 2. Qu funcin biolgica realiza este tipo de lpidos?

9 10

1 COO

3. Indica sus zonas hidrfilas o polares y sus zonas lipfilas. 4. Qu producto originar esta molcula si se hidroliza con NaOH?

11 12 13

14

15

16

17

18

19

5. Qu efecto tiene la presencia de colesterol en la membrana de la clula animal? 6. Clasifica la aldosterona dentro de los lpidos.

20 Prostanoato.

Funciones de los lpidos

Los lpidos desempean cuatro tipos de funciones: de reserva, estructural, biocatalizadora y de transporte. Funcin de reserva. Los lpidos son la principal reserva energtica del organismo. Un gramo de grasa produce 9,4 kilocaloras en las reacciones metablicas de oxidacin, mientras que los prtidos y glcidos slo producen 4,1 kilocaloras/gramo. La gran cantidad de energa que desprenden las grasas es debida en gran parte a la oxidacin de los cidos grasos en las mitocondrias. Funcin estructural. En la clula, los lpidos forman las bicapas lipdicas de las membranas citoplasmticas y de las membranas de los orgnulos celulares. Cumplen esta funcin los fosfolpidos, los glucolpidos, el colesterol, etc. En los rganos, recubren estructuras y les dan consistencia, como la cera del cabello. Otros tienen funcin de proteccin trmica, como los acilglicridos, que se almacenan en tejidos adiposos de animales que viven en climas fros. Finalmente, otra funcin estructural de los lpidos es la proteccin mecnica, como la de los tejidos adiposos que estn situados en la planta del pie y en la palma de la mano del hombre. Funcin biocatalizadora. Los biocatalizadores son sustancias que posibilitan o favorecen las reacciones qumicas que se producen en los seres vivos. Cumplen esta funcin las vitaminas lipdicas, las hormonas esteroideas y las prostaglandinas.

Funcin transportadora. El transporte de los lpidos desde el intestino hasta su lugar de utilizacin o hasta el tejido adiposo, donde se almacenan, se realiza mediante la emulsin de los lpidos gracias a los cidos biliares y los proteolpidos, asociaciones de protenas especficas con triacilglicridos, colesterol, fosfolpidos, etc., que permiten su transporte por la sangre y la linfa.
Funcin de reserva cidos grasos y grasas (acilglicridos) Glucolpidos Cridos Esteroles Acilglicridos Fosfolpidos Vitaminas lipdicas Hormonas esteroideas Prostaglandinas cidos biliares Proteolpidos

Funcin estructural

Funcin biocatalizadora Funcin transportadora

CUADRO II. Funciones de los lpidos.

CUESTIONARIO 4
1. Cul es la razn de que los animales utilicen lpidos como reserva energtica y los vegetales utilicen con ms frecuencia glcidos para el mismo fin? 2. Cmo nos afectara una hipervitaminosis de vitaminas lipdicas? 3. A qu se debe que los lpidos contenidos en el alimento no se separen del agua durante su paso por el intestino?

71

Actividades
Interpretacin de tablas
Observa la tabla que figura a continuacin y responde a las cuestiones que se plantean sobre los datos de dicha tabla.
PRINCIPALES CIDOS GRASOS (%) COMPONENTES DE LOS DEPSITOS DE GRASAS

Hombre Mirstico Palmtico Esterico Palmitoleico Oleico Linoleico 4,5 25,5 5, 8, 47,5 3

Vaca 3,6 29,3 33,6 4,4 21,5 1,2

Oveja 2,4 24,8 34,2 1,4 27,3 1,3

Oliva 0, 19,9 3,2 3, 53,5 19,4

Maz 1,3 14,1 1,6 1,8 35,5 43,9

Algodn 1,6 22,6 5,6 1,6 18,7 50,9

Girasol 0,1 7,6 3,3 3,5 33,6 51,5

GRFICO A
6

GRFICO B
60

% cido mirstico

5 4 3 2 1 Girasol Maz Algodn Vaca Oliva Oveja Hombre

% en el hombre

50 40 30 20 10 Esterico Palmtico Oleico Palmitoleico Linoleico Mirstico

1. Elabora dos grficos que, como el grfico B, muestren para la vaca y para el maz las diferentes concentraciones de cidos grasos que contienen. 2. Elabora grficos que, como el grfico A, muestren para los cidos grasos palmtico y oleico las diferentes concentraciones en las que aparecen en los seres vivos de la tabla. 3. Qu cido graso permitira diferenciar los animales de los vegetales? 4. Qu cidos grasos tienen una concentracin similar en animales y en vegetales? 5. Aparecen en igual proporcin los cidos grasos saturados que los cidos grasos insaturados?

Cuestiones
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Cules son la estructura y propiedades de los cidos grasos? Define la esterificacin y pon un ejemplo. Qu es un jabn? Explica cmo se forma. Cmo se realiza la hidrlisis de las grasas? Qu lpidos son denominados lpidos de membrana? Cules son sus principales caractersticas? Explica la funcin de los proteolpidos. En qu se diferencia un esterol de un esteroide? Cuntas molculas de isopreno son necesarias para formar una molcula de colesterol? Explica los mtodos de obtencin de la vitamina D que conozcas. Qu lpidos aparecen en las vainas de mielina de las neuronas?

72

LABORATORIO

Con los lpidos en el laboratorio

1. SOLUBILIDAD DE LOS LPIDOS
Los lpidos no son polares; por tanto, no pueden disolverse en agua; slo pueden disolverse en lquidos no polares, cuyos grupos lipfilos establecen enlaces de Van der Waals con los lpidos. 1. Colocar en cada uno de los tubos de ensayo 2 ml de aceite y aadir a cada tubo igual cantidad de un disolvente orgnico. En el ltimo, verter agua. 2. Agitar y anotar los resultados.

4. SAPONIFICACIN
1. Colocar 50 ml de aceite y 50 ml de NaOH al 20 %, calentar y agitar durante unos 20 minutos. 2. Dejar reposar 24 horas y observar la aparicin de tres capas: una intermedia semislida constituida por jabn, una superficial correspondiente al aceite que no ha reaccionado, y la capa inferior que contiene glicerina disuelta en agua.

Material 2. TINCIN CON SUDN III

El sudn III es un colorante especfico de grasas. Para prepararlo, disolver un poco de sudn III en polvo en alcohol de 70 hasta que la solucin quede saturada, y luego filtrarla. 1. Colocar 2 ml de aceite en un tubo de ensayo, verter otros 2 ml de agua y dejar reposar. Una vez formadas las dos fases, dejar caer 5 gotas de sudn III y agitar. Dejar reposar y anotar los resultados. 2. Colocar 2 ml de leche en un tubo de ensayo. Aadir 10 ml de agua y 5 gotas de sudn III y agitar. Observar cmo se tie todo de color rosa. Si a continuacin aadimos 1 ml de HCl al 50 % y calentamos ligeramente, se ver la aparicin de tres fases. La superior, de color rosa, formada por grasas; la intermedia, que contiene agua y lactosa disuelta; y la fase inferior, que contiene protenas desnaturalizadas, que son las que mantenan la suspensin de lpidos de la leche. Aceite de oliva o de girasol. Agua normal y agua destilada. Disolvente orgnico: ter o sulfuro de carbono. Leche. Disolucin concentrada de jabn. cido clorhdrico. Hidrxido sdico al 20 %. Sudn III. Tubos de ensayo. Pipetas. Cuentagotas. Vaso de precipitados de 250 ml. Mecheros Bunsen. Trpode y rejilla de amianto. Alcohol etlico al 70 %.

3. EMULSIN PERSISTENTE
A1 agitar una mezcla de aceite y agua, se forma una emulsin inestable. Si se espera unos instantes, se ve cmo las gotas de grasa, por su menor densidad, suben y se unen entre s, formndose dos capas. Si se repite la experiencia, pero aadiendo jabn, la emulsin que se forma es permanente. Esto se debe a que las gotas de aceite se recubren de una capa de molculas de jabn, quedando stas con su polo lipfilo unido al aceite y su ionizado polo hidrfilo hacia el exterior (en contacto con el agua). Al tener la misma carga (), estas partculas se repelen y el aceite queda emulsionado. 1. Poner 2 cm3 de aceite en un tubo de ensayo, aadir 10 cm3 de agua, agitar, esperar unos minutos y anotar lo observado. 2. Aadir 1 cm3 de solucin concentrada de jabn y volver a agitar. 3. Esperar unos minutos y anotar las diferencias observadas respecto a la primera emulsin.

73

5
N D I C E
INFORMACIN 1 Las protenas.
Concepto de protena. Clasificacin.

Las protenas
Modelo de tubo Modelo de cinta

O H H O

O H

O H H O

H
O O H H

H O O H
O

O H H O

H
H

NH2 COOH NH2 COOH

2 Los aminocidos.
Clasificacin de los aminocidos. Propiedades de los aminocidos.

3 El enlace peptdico. 4 Estructura de las protenas.

Estructura primaria. Estructura secundaria. Estructura terciaria. Estructura cuaternaria.
Modelo de bolas

5 Propiedades de las protenas. 6 Clasificacin de las holoprotenas.

Protenas filamentosas. Protenas globulares.

Tres formas de representar una protena; en este ejemplo la tripsina.

Las protenas son molculas que se forman por la unin de un nmero variable de aminocidos: intervienen unos veinte tipos de aminocidos. La combinacin de estas pequeas molculas origina una extraordinaria variacin de protenas, lo que explica el elevado nmero de funciones que realizan. Las protenas constituyen ms de la mitad del peso seco de las clulas. En la membrana celular aparecen protenas con una gran diversidad de funciones, entre las que destacan la de reconocer las sustancias existentes en el medio externo y la de regular el paso de sustancias a travs de la membrana. En el medio interno celular, las protenas forman un intrincado sistema reticular de filamentos y microtbulos que determinan su forma y que pueden prolongarse hacia el exterior construyendo cilios y flagelos que facilitan el desplazamiento de la clula. Esta red tambin permite el transporte interno de orgnulos y molculas actuando como vas de comunicacin. Adems, la clula produce miles de protenas con funcin enzimtica encargadas de regular cualquier tipo de reaccin qumica celular.

7 Heteroprotenas.
Cromoprotenas. Glucoprotenas. Otras heteroprotenas.

8 Funciones generales de las protenas. LABORATORIO Prcticas de

desnaturalizacin, pruebas de Biuret y xantoproteica.

74

Las protenas

polipptido se halla constituido por ms de cincuenta molculas de aminocidos o si el valor de su peso molecular excede de 5.000, se habla de protena.

1. Concepto de protena
Las protenas se pueden definir como polmeros de aminocidos. Un aminocido es una biomolcula orgnica de bajo peso molecular constituida por un carbono al que hay unidos un grupo amino (NH2), un grupo cido (COOH), un hidrgeno (H), y un grupo radical variable (R). En dos tipos de aminocidos en R hay un tomo de azufre. Por ello las protenas estn constituidas por carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y, generalmente, tambin azufre. Algunas, adems, contienen fsforo, hierro, cobre, yodo, etc. Los enlaces qumicos entre aminocidos se denominan enlaces peptdicos, y a las cadenas formadas, pptidos. Si el nmero de aminocidos que forma un pptido es dos, se denomina dipptido; si es tres, tripptido, etc. Si es inferior a 10 se habla de oligopptido, y si es superior a 10 se denomina polipptido. Slo cuando un

2. Clasificacin de las protenas

Si la protena est constituida exclusivamente por aminocidos, se denomina holoprotena. Cuando, adems de aminocidos, presenta algn otro tipo de molcula, recibe el nombre de heteroprotena (ver cuadro I).
Holoprotenas Protenas filamentosas Protenas globulares Cromoprotenas
PROTENAS

Glucoprotenas Heteroprotenas Lipoprotenas Nucleoprotenas Fosfoprotenas

CUADRO I. Clasificacin de las protenas.

Los aminocidos

a) Neutros. Si el radical R no posee grupos carboxilo ni amino. b) cidos. Si el radical R presenta grupos carboxilo, pero no amino. c) Bsicos. Si el radical R tiene grupos amino, pero no grupos carboxilo. Aminocidos aromticos. Son aquellos cuyo radical R es una cadena cerrada, generalmente relacionada con el benceno. Aminocidos heterocclicos. Aquellos cuyo radical R es una cadena cerrada, generalmente compleja y con algunos tomos distintos del carbono y del hidrgeno.

Los aminocidos son compuestos orgnicos que se caracterizan por poseer un grupo carboxilo (COOH) y un grupo amino (NH2). En los aminocidos naturales ambos grupos se unen al mismo carbono; se denominan por ello de tipo . Las otras dos valencias del carbono se saturan con un tomo de H y con un grupo variable denominado radical R. Segn ste se distinguen 20 tipos de aminocidos H H2NCCOOH R Los aminocidos son compuestos slidos, cristalinos, de elevado punto de fusin, solubles en agua, con actividad ptica y con comportamiento qumico anftero.

2. Propiedades de los aminocidos

I Actividad ptica
Todos los aminocidos, salvo la glicocola o glicina, presentan el carbono asimtrico, ya que est enlazado a cuatro radicales diferentes: un grupo amino, un grupo carboxilo, un radical R y un hidrgeno. Debido a esta caracterstica, los aminocidos presentan actividad ptica, es decir, son capaces de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolucin de aminocidos. Si un aminocido desva el plano de luz polarizada hacia la derecha, se denomina dextrgiro o (), y si lo hace hacia la izquierda, levgiro o ().
75

1. Clasificacin de los aminocidos

Segn el radical R, que se enlace al carbono , los aminocidos pueden clasificarse en alifticos, aromticos y heterocclicos (fig. 3). Aminocidos alifticos. Son los aminocidos en los que el radical R es una cadena hidrocarbonada abierta, que puede tener, adems, grupos COOH y NH2. Los aminocidos alifticos se clasifican en neutros, cidos y bsicos.

Un aminocido tendr una configuracin D si al disponerlo en el espacio, de forma que el grupo carboxilo quede arriba, el grupo NH2 queda situado a la derecha, mientras que, si se encuentra a la izquierda, poseer una configuracin L (fig. 1). La disposicin L o D es independiente de la actividad ptica. Por ello, un L-aminocido podr ser levgiro o dextrgiro, e igual ocurrir con la configuracin D. En la naturaleza, la forma L es la ms abundante.

OH C H N C H H R O=

OH C H H C N H R Configuracin D COOH

O=

Configuracin L COOH

I Comportamiento qumico
En disolucin acuosa, los aminocidos muestran un comportamiento anftero, es decir, pueden ionizarse, dependiendo del pH, como un cido (los grupos COOH liberan protones, quedando como COO), como una base (los grupos NH2 captan protones, quedando como NH3) o como un cido y una base a la vez. En el ltimo caso los aminocidos se ionizan doblemente, apareciendo una forma dipolar inica llamada zwitterion (fig. 2).
H2NCHCOOH R H2O
Doble ionizacin
5

C R H H NH2

C R

NH2

1 Configuracin L y D de los aminocidos.

OH H3NCHCOO H R
zwitterion o forma dipolar

La forma dipolar, en un medio cido, capta protones y se comporta como una base, y en un medio bsico libera protones y se comporta como un cido. El pH en el cual el aminocido tiende a adoptar una forma dipolar neutra, con tantas cargas positivas como negativas, se denomina punto isoelctrico.

H3NCHCOOH R

pH 7 H

H3NCHCOO R

pH 7 H2NCHCOO H R

Captacin de protones

Liberacin de protones

2 Reaccin de formacin de un zwitterion y su comportamiento anftero.

CUESTIONARIO 1
1. Cuntos carbonos asimtricos poseen los aminocidos? 2. Desarrolla la frmula del nico -aminocido que no tiene actividad ptica.

pH 14

12

H3NCHCOO CH3

3. Qu significa que un aminocido es anftero? 4. Un aminocido tiene un punto isoelctrico de 6,5. Qu carga presentar si el pH del medio es 6,5, si es 4 o si es 10? Explicar en qu pH de los indicados anteriormente el aminocido se desplazar hacia el nodo, cundo lo har hacia el ctodo y cundo permanecer inmvil. 5. Si el punto isoelctrico de la alanina es 6, indicar la carga y estructura qumica de este aminocido a pH 6. 6. Indicar la carga y estructura qumica que presentar la alanina a pH de valores 2 y 9. 7. Seala los enunciados verdaderos: Los aminocidos dextrgiros tienen configuracin L. Todos los aminocidos alifticos son neutros. La unin Ala-Glu puede considerarse un oligopptido. 8. Intenta interpretar la grfica de la derecha.
2 10

* H NCHCOO
2

pH 6,02

H3NCHCOOH CH3

0,5

76

CH3

H3NCHCOO

CH3

Punto isoelctrico

H3NCHCOOH

CH3 eq OH 2

1,5

CLAVE
Abreviatura del aminocido y cdigo de color

Nombre del aminocido

CDIGO DE COLOR Alifticos neutros Aromticos Heterocclicos

COOH H C NH2 R

Parte fija Alifticos cidos Parte variable (radical R) Alifticos bsicos

Gly
GLICINA

Ala
ALANINA

Val
VALINA

Leu
LEUCINA

lle
ISOLEUCINA

COOH H C NH2 H

COOH H C NH2 CH3

COOH H C NH2 CH H3C CH3

COOH H C NH2 CH2 CH H3C CH3

COOH H C NH2 CH CH3 CH2 CH3

Ser
SERINA

Thr
TREONINA

Cys
CISTENA

Met
METIONINA

Asp
CIDO ASPRTICO

COOH H C NH2 CH2 OH

COOH H C NH2 HO C H CH3

COOH H C NH2 CH2 SH

COOH H C NH2 CH2 CH2 S CH3 Asn

COOH H C NH2 CH2 COOH

Glu
CIDO GLUTMICO

Lys
LISINA

Arg
ARGININA

Gln
GLUTAMINA

ASPARAGINA

COOH H C NH2 CH2 CH2 COOH

COOH H C NH2 CH2 CH2 CH2 CH2 NH2 Tyr

TIROSINA

COOH H C NH2 CH2 CH2 CH2 NH + H2N C N H2 Pro

PROLINA

COOH H C NH2 CH2 C= O NH2

COOH H C NH2 CH2 CH2 C= O NH2

Phe
FENILALANINA

Trp
TRIPTFANO

His
HISTIDINA

COOH H C NH2 CH2

COOH H C NH2 CH2 OH

COOH C

H2C

NH

COOH H C NH2 CH2 N H

H2C CH2

HC = N + H

3 Frmulas de los veinte aminocidos proteicos.

COOH H C NH2 CH2 C HN CH

=

77

El enlace peptdico

CUESTIONARIO 2
1. Cules son los componentes de una cadena polipeptdica y qu enlace los une? 2. En qu direccin se unen dos aminocidos? Desarrolla la frmula del dipptido formado por la serina y la fenilalanina. 3. Un tripptido formado por tres aminocidos alifticos presenta en el extremo amino libre un aminocido con radical hidrfobo y en el extremo carboxlico libre un aminocido con un radical cido. El aminocido central posee un radical bsico. Construir este tripptido eligiendo los tres aminocidos de los siguientes: Ser, Phe, Glu, Lys, Ala, Pro y His. 4. La tripsina es una enzima que hidroliza los enlaces peptdicos en los que el grupo carboxilo lo aporta una lisina o una arginina. Cul ser el resultado de la hidrlisis por medio de la tripsina sobre estos pptidos? a) H2N - Lys - Met - Ala - Arg - Met - Val - COOH b) COOH - Lys - Arg - Met - Cys - Lys - Phe - NH2 5. Un polipptido est formado por cuatro restos (lo que resta de la estructura molecular de un aminocido despus de unirse a otro aminocido) de alanina, tres restos de valina y dos restos de glicina. Cul es su peso molecular?

Los pptidos estn formados por la unin de aminocidos mediante un enlace peptdico. Cuando el nmero de aminocidos que forman la molcula del pptido es inferior a diez, se denomina oligopptido, y si es superior a diez, el pptido recibe el nombre de polipptido. El enlace peptdico es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de una molcula de agua (fig. 4). La disposicin en el espacio de un enlace peptdico es tal que los tomos del grupo carboxilo y del grupo amino se sitan en un mismo plano, con distancias y ngulos fijos. El enlace peptdico tiene un comportamiento similar al de un enlace doble, es decir, presenta una cierta rigidez que inmoviliza en un plano los tomos que lo forman (fig. 5).
4 Enlace peptdico.

Enlace peptdico

H H H2N C COOH H2 N C COOH HN C COOH

Aminocido 1 Aminocido 2

H2O R

R H2N C CO
Dipptido

5 Estructura de un pptido.

O R H C
1, 53

H
1 120
114 1,32

R H
123 123 120
2 1,3 1,3 2 120

C
110
3 1,5

C
7 1,4

N
120
1,4 7

110

1, 53

114

C C
Enlace peptdico 1,23 Enlace peptdico

H R

H O

78

4 Estructura de las protenas

La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposicin de la anterior en el espacio.

2. Estructura secundaria
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos o estructura primaria en el espacio. Los aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de las protenas, y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura secundaria. Son conocidos tres tipos de estructura secundaria: la -hlice, la hlice de colgeno y la conformacin . La estructura secundaria de la cadena polipeptdica depende de los aminocidos que la forman.

1. Estructura primaria
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Por tanto, nos indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia de aminocidos y de la forma que sta adopte (fig. 6). Todas las protenas presentan un extremo N-terminal, en el que se encuentra el primer aminocido con su grupo amino libre, y un extremo C-terminal, en el que est situado el ltimo aminocido con su grupo carboxilo libre. La secuencia de una protena se escribe enumerando los aminocidos desde el extremo N-terminal hasta el C-terminal.

I -hlice
La estructura secundaria en -hlice se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria (fig. 7). Esto se debe a la formacin espontnea de enlaces de hidrgeno entre el CO de un aminocido y el NH del cuarto aminocido que le sigue. Por ello, en la -hlice, los oxgenos de todos los grupos CO quedan orientados en el mismo sentido, y los hidrgenos de todos los grupos NH quedan orientados justo en el sentido contrario. La -hlice presenta 3,6 aminocidos por vuelta.

6 Estructura primaria de las protenas.

SH CH2 C N H C O OH CH2 C H

H N H

H C H

N H C O

H C CH3

C O

N H

H C H

O C N H

C O

Glicina

Alanina

Cistena

Glicina

Serina

Hidrgeno Carbono Nitrgeno

Oxgeno Azufre

79

I Hlice de colgeno
El colgeno posee una disposicin en hlice especial, algo ms alargada que la -hlice, debido a la abundancia de prolina e hidroxiprolina. Estos aminocidos poseen una estructura que dificulta mucho la formacin de enlaces de hidrgeno, por lo que no se forma una -hlice sino una hlice ms extendida, que slo presenta tres aminocidos por vuelta. La estabilidad de la hlice de colgeno se debe a la asociacin de tres hlices, que originan una superhlice o molcula completa de colgeno. Las tres hlices se unen mediante enlaces covalentes y enlaces dbiles de tipo puente de hidrgeno (fig. 8).
R N
3,6 aminocidos por vuelta

N
H

O O
Puente de hidrgeno

I Conformacin-
La estructura primaria de una protena tambin puede adoptar una disposicin . En esta disposicin los aminocidos no forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag. Ello es debido a que no existen enlaces de hidrgeno entre los aminocidos prximos de la cadena polipeptdica. Si la cadena con conformacin se repliega sobre s misma, se pueden establecer enlaces de hidrgeno entre segmentos, antes distantes, que ahora han quedado prximos. Esto da lugar a una lmina en zigzag muy estable denominada -lmina plegada. Esta estructura tambin se puede formar entre dos o ms cadenas polipeptdicas diferentes (fig. 9). Presenta conformacin la -queratina de la seda o fibrona. Muchas protenas globulares presentan segmentos con conformacin alternados con segmentos de estructura en -hlice (fig. 12 b).
9 Estructura secundaria: conformacin-.
CC H O N =

N
H

N
H

O
H

7 Estructura secundaria: -hlice. 8 Estructura secundaria: hlice de colgeno.

Prolina

H H O H O C H O N C N C N C C C C N C C C N C C C N C C N C N H O H O H O H O = = = = = = = =

-lmina plegada

H H O H O H C N O C C C C N C C N C C N C N C C N C N N C C C H O O C H O H O H = = = = = =

80

O C H C H O N C N O

H C C H C C N O N O C Enlace de hidrgeno H C C H N C N O O C H C H -hlice C N O N C = = = =

Glicina

Hidroxiprolina
O

Hlice de colgeno

Superhlice

5,4 (paso de vuelta)

3. Estructura terciaria
La estructura terciaria de una protena informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular. En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y, por tanto, la terciaria. La conformacin globular en las protenas facilita su solubilidad en agua y en disoluciones salinas. Esto les permite realizar funciones de transporte, enzimticas, hormonales, etc. Las conformaciones globulares se mantienen estables por la existencia de enlaces entre los radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces: uno fuerte de tipo covalente, el puente disulfuro, y otros dbiles como los puentes de hidrgeno, las fuerzas de Van der Waals, las interacciones inicas y las interacciones hidrfobas (fig. 11). Generalmente, en los tramos rectos la cadena polipeptdica posee estructura secundaria de tipo -hlice o -lmina, y en los codos o giros presenta secuencias sin una estructura precisa (fig. 12 b). Se ha observado que existen combinaciones de -hlice y conformacin- que aparecen repetidamente en protenas distintas. Estas combinaciones suelen ser estables, compactas y de aspecto globular. Reciben el nombre de dominios estructurales (figura 12 a). Desde una perspectiva evolutiva, se considera que los dominios estructurales son clichs estructurales de elevada eficacia biolgica, por lo que han servido como unidades modulares para constituir diferentes tipos de protenas globulares. Los distintos dominios suelen estar unidos por zonas estrechas o cuellos, lo que posibilita un cierto movimiento rotacional. As, al separarse dos dominios, permiten la introduccin de la molcula de sustrato y, al acercarse, la fijan para actuar sobre ella (fig. 12 c).

10 La -queratina forma las plumas de las aves.

Las protenas que no llegan a formar estructuras terciarias mantienen su estructura secundaria alargada, dando lugar a las llamadas protenas filamentosas. Son protenas insolubles en agua y disoluciones salinas, siendo por ello idneas para realizar funciones esquelticas. Las ms conocidas son el colgeno de los huesos y del tejido conjuntivo, la -queratina del pelo, plumas, uas, cuernos, etc., la fibrona del hilo de seda y de las telaraas, y la elastina del tejido conjuntivo, que forma una red deformable por la tensin (fig. 12 c).

11 Enlaces fuertes y dbiles de la estructura terciaria de las protenas.

Cys S S Cys Puente disulfuro entre dos cistenas

N H O C Puente de hidrgeno

C O NH3

O H3C H3C

CH CH3 CH3 CH Fuerzas de Van der Waals Interaccin hidrofbica

Interaccin inica

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Codos sin estructura -hlice

Codo sin estructura -hlice ni disposicin

Sectores en disposicin

Sectores en -hlice

Sectores con estructura secundaria en -hlice

Esquema tridimensional de la mioglobina. El crculo rojo corresponde a un grupo hemo (la mioglobina es una heteroprotena).

Esquema de cintas de la triosa-fosfato isomerasa.

Sustrato libre

Cadena polipeptdica de elastina Cuello

Dominio A RELAJACIN

Dominio B

EXTENSIN Sustrato fijo Puente cruzado

Esquema de la estructura de la elastina, en estado relajado y extendido.

Esquema de una protena simple con dos dominios estructurales, abierta 1 y cerrada 2 para fijar el sustrato.

12 Estructura terciaria de las protenas.

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4. Estructura cuaternaria
Grupos hemo

La estructura cuaternaria informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes), de varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, idnticas o no, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero. Segn el nmero de protmeros que se asocian, las protenas que tienen estructura cuaternaria se denominan dmeros, como la hexoquinasa; tetrmeros, como la hemoglobina; pentmeros, como la ARNpolimerasa; y polmeros, cuando en su composicin intervienen gran nmero de protmeros. Son ejemplos de polmeros la cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60 subunidades proteicas, los filamentos de actina y miosina de las clulas musculares, etc. (figura 13).

Cadena

Cadena

Cadena

Cadena

Hemoglobina

13 Estructura cuaternaria de la hemoglobina.

CUESTIONARIO 3
1. Qu enlaces mantienen la forma de la estructura secundaria de las hlices estabilizada? 2. Qu enlaces mantienen la forma de las estructuras globulares? 3. Qu tipo de enlaces posibilitan la unin de las diferentes molculas que integran una estructura cuaternaria? 4. Considerando que el peso molecular medio de los aminocidos de una protena es 120 y que est constituida por 100 aminocidos, cul ser el peso molecular de esta protena? 5. Por qu la seda y el colgeno soportan altas tensiones sin estirarse mientras que la lana s es estirable?

5 Propiedades de las protenas

Las propiedades de las protenas dependen sobre todo de los radicales R libres y de que stos sobresalgan de la molcula y, por tanto, tengan la posibilidad de reaccionar con otras molculas. El conjunto de aminocidos de una protena cuyos radicales poseen la capacidad de unirse a otras molculas y de reaccionar con stas se denomina centro activo de la protena. Solubilidad. Las protenas globulares poseen un elevado tamao molecular, por lo que, al disolverse, dan lugar a dispersiones coloidales. La solubilidad de estas molculas se debe a los radicales R, que, al ionizarse, establecen puentes de hidrgeno con las molculas de agua. As, la protena queda recubierta de una capa de molculas de agua que impide que se pueda unir a otras protenas, lo que provocara su precipitacin. Desnaturalizacin. Si en una disolucin de protenas se producen cambios de pH, alteraciones en la concentracin, agitacin molecular o variaciones de temperatura, la solubilidad de las protenas puede disminuir llegando a producirse su precipitacin. Ello se debe a que los enlaces que mantienen la conformacin globular se rompen y la protena adopta la conformacin filamentosa. Entonces, la capa de molculas de agua no recubre totalmente las molculas proteicas, que tienden a unirse entre s dando lugar a grandes partculas que precipitan. Adems, sus propiedades biocatalizadoras desaparecen al alterarse el centro activo. Las protenas, en este estado, no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron diseadas, es decir, no son funcionales. Esta variacin de la conformacin se denomina desnaturalizacin. La desnaturalizacin no afecta a los enlaces peptdicos: al volver a las
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13 14 15 16 17 18 19 20 21 12 Cadena A 11 10 9 8 1 2 3 4 5 6 7 17 18 19 20 21 22 16 15 14 13 Cadena B 23 24 25 26 27 28 29 30

Protena en estado normal

2 3

8 9 10 11 12

DIFERENCIA ENTRE VARIAS MOLCULAS DE INSULINA

Desnaturalizacin

Renaturalizacin
Especies A8

Aminocidos A9 A 10 B 30

Cerdo Hombre Caballo

Thr Thr Thr Ala His Ala

Ser Ser Gly Gly Asn Ser

Ile Ile Ile Val Thr Val

Ala Thr Ala Ala Ala Ala

Protena desnaturalizada

Carnero Pollo Vaca

14 Desnaturalizacin y renaturalizacin de una protena.

15 Esquema de una molcula de insulina y tabla con diferencias entre insulinas de distintas especies animales.

condiciones normales, la protena puede, en algunas ocasiones, recuperar la conformacin primitiva, lo que se denomina renaturalizacin. Son ejemplos de desnaturalizacin la leche cortada debido a la desnaturalizacin de la casena, la precipitacin de la clara de huevo al desnaturalizarse la ovoalbmina por efecto del calor, la permanente o fijacin de un peinado del cabello por efecto del calor sobre las queratinas del pelo, etctera (fig. 14). Especificidad. En su secuencia de aminocidos, las protenas presentan sectores estables y sectores variables, en los que algunos aminocidos pueden ser sustituidos por otros distintos sin que se altere la funcionalidad de la molcula. Ello

ha dado lugar, durante el proceso evolutivo, a una gran variabilidad de molculas proteicas, lo que permite que cada especie tenga sus protenas especficas y que, incluso, aparezcan diferencias entre individuos de la misma especie. Las diferencias entre protenas homlogas, es decir, con la misma funcin, son grandes entre especies alejadas evolutivamente y escasas entre especies emparentadas (fig. 15). Capacidad amortiguadora. Las protenas, al estar constituidas por aminocidos, tienen un comportamiento anftero. Tienden a neutralizar las variaciones de pH del medio, ya que pueden comportarse como un cido o una base y, por tanto, liberar o retirar protones (H) del medio.

16 La especificidad de las protenas distingue ms ntimamente a las distintas especies.

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6 Clasificacin de las holoprotenas

Atendiendo a su estructura terciaria, las holoprotenas pueden clasificarse en dos grupos: filamentosas o escleroprotenas y globulares o esferoprotenas.
Protaminas Muy bsicas Pm = 5.000

Solubles en agua. Se encuentran asociadas al ADN en los espermatozoides de todos los animales.

1. Protenas filamentosas
Son insolubles en agua y aparecen principalmente en animales. Pertenecen a este grupo los colgenos, las queratinas, las elastinas y las fibronas (cuadro II).

Histonas Solubles en agua. Se encuentran asociadas Bsicas Pm de al ADN del ncleo (salvo en epermatoz.). 10.000 a 20.000 Prolaminas Pm = 40.000

Insolubles en agua. Aparecen en semillas vegetales, como la zena del maz, la gliadina del trigo y la hordena de la cebada. Insolubles en agua pero solubles en cidos y bases diluidas. Son ejemplos la orizanina del arroz y la glutenina del trigo. Solubles en agua. Pertenecen a este grupo la seroalbmina de la sangre, la ovoalbmina del huevo, la lactoalbmina de la leche y la globina que forma parte de la hemoglobina. Solubles en disoluciones salinas. Son ejemplos la ovoglobulina del huevo, la lactoglobulina de la leche y las seroglobulinas de la sangre; tambin la -globulina, que se asocia a la hemoglobina, y las -globulinas o inmunoglobulinas, que constituyen los anticuerpos.

2. Protenas globulares
Generalmente son solubles en agua o en disoluciones polares. Pertenecen a este grupo las protaminas, las histonas, las prolaminas, las gluteninas, las albminas y las globulinas (cuadro III).
Colgenos

Gluteninas Pm = 40.000

Aparecen en tejidos conjuntivos, cartilaginosos, tegumentarios y seos. Aparecen en formaciones epidrmicas: plumas, etc.

Albminas Pm de 30.000 a 100.000

-queratinas cabello, uas, lana, cuernos, pezuas, Elastinas

Aparecen en tendones y vasos sanguneos.

Globulinas Pm de 100.000 a 1.000.000

-queratinas Aparecen en los hilos de seda. o fibronas CUADRO II. Protenas filamentosas.

CUADRO III. Protenas globulares.

Heteroprotenas

Las heteroprotenas son molculas formadas por la unin de un grupo proteico con otro no proteico, denominado grupo prosttico (cuadro IV). Segn su grupo prosttico, las heteroprotenas se clasifican en: cromoprotenas, glucoprotenas, lipoprotenas, fosfoprotenas y nucleoprotenas.

1. Cromoprotenas
Las cromoprotenas poseen como grupo prosttico una sustancia coloreada, por lo que reciben tambin el nombre de pigmentos. Segn la naturaleza del grupo prosttico, se dividen en: Pigmentos porfirnicos. Son cromoprotenas cuyo grupo prosttico es un anillo tetrapirrlico

o porfirina. En el centro de este anillo aparece un catin metlico. Si se trata de un catin ferroso (Fe2), la porfirina se llama grupo hemo. Tienen el grupo hemo la hemoglobina, encargada de transportar el oxgeno en la sangre, y la mioglobina, que desempea la misma funcin en los msculos (fig. 17). Si se trata de un catin frrico (Fe3) la porfirina se llama grupo hemino, y aparece, por ejemplo, en las enzimas peroxidasas y catalasas. En algunas molculas, como los citocromos, el ion ferroso puede oxidarse a frrico y este ion, a su vez, puede reducirse. Pigmentos no porfirnicos. Son cromoprotenas no porfirnicas la hemocianina, pigmento respiratorio que contiene cobre y aparece en crustceos y moluscos, y la hemeritrina, pigmento respiratorio que tiene hierro y que se encuentra en los anlidos marinos y en los braquipodos.
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Cadenas polipeptdicas

CH3

CH = CH2
Puentes disulfuro

CH3 N CH2 CH2 COOH

N Fe2+ N N

CH3

CH CH2

Glcidos (oligosacridos)

CH2 CH3 CH2 COOH

17 Grupo hemo.

18 Esquema de una inmunoglobulina.

2. Glucoprotenas
Las glucoprotenas poseen un grupo prosttico que contiene molculas de glcidos como glucosa, galactosa, arabinosa, etc. La unin se realiza mediante un enlace covalente entre un radical hidroxilo del glcido y un radical amino del prtido. Pertenecen a este grupo: La hormona estimulante del folculo (FSH), la hormona estimulante del tiroides (TSH) y la hormona luteinizante (LH). Los proteoglucanos que aparecen en secreciones mucosas, en lquidos sinoviales y constituyendo tendones, huesos y cartlagos. Las glucoprotenas sanguneas como la protrombina. Las inmunoglobulinas (fig. 18). Las glucoprotenas constituyentes del glucoclix en las membranas celulares. Algunas enzimas como las ribonucleasas. Las glucoprotenas suelen presentar una conformacin estable en su parte proteica, mientras que la parte glucdica presenta una gran variabilidad, que se debe a cambios en la secuencia de las molculas que la componen. Los diversos grupos sanguneos son debidos a la variabilidad que presenta la cadena glucdica de las glucoprotenas de membrana de los eritrocitos.

Aparecen en la estructura de las membranas citoplasmticas. Un grupo especial lo constituyen las lipoprotenas sanguneas, pues son hidrosolubles y se encargan de transportar lpidos por el torrente circulatorio desde su lugar de absorcin, el intestino, hasta los tejidos de destino. Fosfoprotenas. Su grupo prosttico es el cido fosfrico (H3PO4). Pertenecen a este grupo la casena, que aparece en la leche, y la vitelina, que se encuentra en la yema de los huevos. Nucleoprotenas. Su grupo prosttico es un cido nucleico. Se consideran nucleoprotenas las asociaciones de histonas o protaminas con molculas filamentosas de cidos nucleicos.
Hemoglobina Mioglobina Catalasa Citocromos Hemocianina No porfirnicas Hemeritrina Glucoprotenas de membrana, hormona estimulante del folculo, hormona luteinizante, etc. Quilomicrones, lipoprotenas sanguneas. Casena, vitelina. Asociaciones ADN-histonas.

Porfirnicas
Cromoprotenas

Glucoprotenas

Lipoprotenas Fosfoprotenas Nucleoprotenas

3. Otras heteroprotenas
Lipoprotenas. Son molculas cuyo grupo prosttico est constituido por cidos grasos.
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CUADRO IV. Clasificacin de las heteroprotenas.

CUESTIONARIO 4
1. De qu depende la actividad biolgica y la especificidad de una protena? 2. Qu enlaces se rompen al someter una molcula proteica a una temperatura elevada? Cmo se denomina este proceso? Qu repercusin tiene en la funcionalidad de la protena? 3. Cul es la causa de que las molculas proteicas filamentosas sean insolubles en agua? 4. Desarrolla la frmula del pptido Lys - Glu - Ala indicando las cargas de los grupos polares. 5. Por qu son importantes las protenas en los problemas de rechazo de rganos trasplantados? 6. Qu es un grupo prosttico? Enumera los que conozcas. 7. Razona a qu grupo de heteroprotenas pertenecen las inmunoglobulinas. 8. Relaciona los trminos de la primera columna con los de la segunda. Alanina Aminocido aromtico Vitelina Protena filamentosa Histona Cromoprotena Hemoglobina Fosfoprotena Tirosina Protena globular Queratina Aminocido aliftico 9. Cuntas molculas forman la hemoglobina?

8 Funciones generales de las protenas

Las protenas son molculas con una extraordinaria diversidad de estructuras y funciones, lo que les permite llevar a cabo numerosas actividades. Funcin estructural. A nivel celular, realizan funciones estructurales las glucoprotenas de las membranas plasmticas, las protenas que forman parte de los microtbulos del citoesqueleto, de los cilios y los flagelos, y las histonas que se asocian al ADN para formar las fibras de cromatina. A nivel histolgico se pueden citar las queratinas de las formaciones drmicas, la elastina de los tejidos reticulares y el colgeno de los tejidos cartilaginoso, conjuntivo y seo (fig. 19). Funcin de transporte. Adems de las permeasas, que regulan el paso de molculas a travs de la membrana celular, existe un gran conjunto de protenas encargadas del transporte de sustancias por el organismo. As, los pigmentos respiratorios (hemoglobina, hemeritrina, hemocianina, etc.) se encargan del transporte de oxgeno por la sangre. Otras protenas tambin se encargan del transporte de sustancias por el torrente circulatorio, por ejemplo, la seroalbmina, que transporta un gran nmero de sustancias; la transferrina, que transporta hierro; las lipoprotenas, que permiten la movilidad de los lpidos por la sangre; la ceruloplasmina, que transporta cobre, etc.

Sustancia a introducir Medio extracelular

Bicapa lipdica

Protena transportadora

Citoplasma

19 El colgeno es una protena que cumple una misin estructural en el tejido seo.

20 Molculas transportadoras de la membrana celular.

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 Funcin enzimtica. Las enzimas son protenas que tienen una accin biocatalizadora, es decir, que favorecen las reacciones qumicas que tienen lugar en las clulas de los organismos, al reducir los requerimientos de energa de activacin que dichas reacciones necesitan para su desarrollo. La funcin enzimtica es, posiblemente, la ms importante de las que desempean las protenas. Existe un gran nmero de enzimas, aproximadamente un millar, y todas ellas tienen un elevado grado de especializacin. Entre ellas cabe citar la tripsina, la ribonucleasa, la catalasa, la peroxidasa, los citocromos, etc. Funcin hormonal. Son biocatalizadores que se diferencian de las enzimas en que no actan localmente, sino que son distribuidas por la sangre y actan por todo el organismo. Entre ellas se pueden citar la insulina del pncreas, la tiroxina del tiroides, muchas hormonas de la hipfisis, como la hormona del crecimiento, etc. Funcin de defensa. Las principales protenas que ejercen una accin de defensa del organismo son las -globulinas o inmunoglobulinas, que constituyen los anticuerpos. Su funcin es asociarse a las sustancias extraas que penetran en el organismo (antgenos) y neutralizarlas. Los anticuerpos son los elementos clave en la lucha que un organismo libra contra invasores patgenos. En la funcin de defensa tambin se deben incluir la trombina y el fibringeno, que participan en la coagulacin de la sangre al producirse una herida; las mucinas del tracto digestivo y respiratorio, que presentan funciones bactericidas; y muchos antibiticos, que tambin son pptidos, que, segregados por bacterias y hongos, evitan la competencia con otros microorganismos. Funcin contrctil. Desarrollan esta funcin la actina y la miosina, protenas que se asocian entre s formando miofibrillas, estructuras que permiten la contraccin y relajacin de las fibras musculares (fig. 21). Otras protenas, como la dinena, la tubulina, la flagelina (del flagelo bacteriano) (fig. 22 a), permiten la movilidad celular, o como la pilina, que forma el puente de conjugacin entre bacterias (fig. 22 b). Funcin de reserva. Desempean esta funcin la ovoalbmina de la clara de huevo, la casena de la leche, la zena del maz, la gliadina de la semilla del trigo, la hordena de la semilla de la cebada, etc. Funcin homeosttica. Algunas protenas sanguneas participan en la regulacin del pH gracias a su capacidad amortiguadora.
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21 La actina y miosina permiten la contraccin en las fibras musculares. a

22 La agregacin de unidades de flagelina forman el flagelo bacteriano (a). La protena pilina constituye los pelos sexuales que permiten la conjugacin bacteriana (b).

CUESTIONARIO 5
1. Con qu funcin asociaras la protena que forma parte del flagelo bacteriano. 2. Por qu la hemoglobina es de vital importancia para la respiracin de los organismos que la presentan? 3. Qu significa biocatalizador? 4. Por qu una alteracin hormonal puede acarrear graves consecuencias al organismo? 5. Seala si los siguientes enunciados son verdaderos o falsos: a) En la cromatina humana no hay protenas. b) La tripsina es una importante hormona. c) La penicilina tiene funcin de reserva. d) La especializacin es una de las caractersticas de las enzimas. e) Las lipoprotenas transportan hierro.

LABORATORIO

Prcticas de desnaturalizacin, pruebas de Biuret y xantoproteica

Material necesario
Disolucin de albmina. Leche. Disolucin de clara de huevo (una clara en 500 cm3 de agua con sal) previamente filtrada. cido clorhdrico. cido ntrico. Hidrxido sdico. Cloruro sdico. Sulfato de cobre. 12 tubos de ensayo. Un vaso de precipitados. Mechero Bunsen. Trpode y rejilla de amianto.
Tubos de ensayo Mechero Bunsen Trpode Vaso de precipitados Rejilla de amianto

DESNATURALIZACIN
Esta prctica se basa en la destruccin de los enlaces que mantienen estable la conformacin globular de las protenas, de manera que stas queden con una estructura filamentosa, con lo cual pierden su solubilidad y precipitan en forma de cogulos. La desnaturalizacin se efectuar sometiendo una disolucin de protenas a cambios de pH, a alteraciones de la concentracin del medio y a variaciones de la temperatura. 1. Hacer series de cuatro tubos con 2 ml de disolucin de albmina y numerar los tubos. Hacer lo mismo con la leche y la solucin de clara de huevo. 2. Aadir a los tubos nmero 1, dos ml de cido clorhdrico; a los nmero 2, dos ml de disolucin saturada de cloruro de sodio; a los nmero 3, dos ml de solucin de hidrxido sdico; y calentar suavemente los nmero 4, sin aadir nada. 3. Anotar los resultados para cada serie de tubos.

2. Aadir en cada tubo 2 ml de disolucin de hidrxido sdico. Agitar y dejar caer cuatro o cinco gotas de una solucin al 1 % de sulfato de cobre. 3. Anotar los resultados.

PRUEBA XANTOPROTEICA
1. Preparar dos tubos de ensayo y verter en cada uno 2 ml de las disoluciones proteicas. 2. Aadir 2 ml de cido ntrico en cada tubo. Anotar la coloracin. 3. Calentar al bao Mara los tubos en un vaso de precipitados y volver a anotar los resultados.

PRUEBA DE BIURET
La prueba de Biuret se basa en una reaccin tpica de los enlaces peptdicos, en la cual los tomos de cobre del reactivo se unen a los grupos amino, lo que provoca una coloracin rosa-violcea. 1. Preparar tres tubos de ensayo y colocar en cada uno 2 ml de las disoluciones proteicas.

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6
N D I C E
INFORMACIN 1 El control bioqumico. 2 Las reacciones qumicas y los biocatalizadores. 3 Las enzimas. 4 La actividad enzimtica. 5 El centro activo de las enzimas. 6 La especificidad de las enzimas. 7 La cintica de la actividad enzimtica. 8 Factores que afectan a la actividad enzimtica. 9 Enzimas alostricas. 10 Cooperativismo. 11 Regulacin de las vas metablicas. 12 Formas de aproximacin de las enzimas de una va. 13 Nomenclatura y clasificacin de las enzimas. 14 Los coenzimas. 15 Las vitaminas. 16 Las hormonas. ACTIVIDADES

La actividad enzimtica y la funcin hormonal

Imagen obtenida por ordenador del complejo enzima-sustrato que acta en la digestin de las protenas.

En la fotografa se observa la estructura tridimensional de una enzima y del sustrato sobre el cual acta. Su arquitectura molecular est diseada para que slo un determinado sustrato pueda acceder al lugar donde se encuentran los aminocidos del centro activo de la enzima. stos son capaces de establecer enlaces dbiles con el sustrato, y en ocasiones un enlace covalente inestable, que provocan la transformacin de la molcula sustrato en una molcula de producto. Por qu las enzimas son tan especficas respecto a un solo tipo de sustrato? Por qu no sera posible la vida si no hubiera enzimas?

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El control bioqumico

que permite al organismo regular qu reacciones se han de dar y en qu momento; es decir, el control bioqumico del metabolismo. En los organismos pluricelulares, dado que muchas clulas tienen que realizar funciones o producir sustancias que no son para el beneficio propio de la clula, sino para el beneficio del organismo, existe adems otro tipo de control bioqumico, el llamado sistema hormonal o sistema endocrino. El elemento fundamental de este sistema son las hormonas, unas molculas segregadas por ciertas glndulas que actan especficamente sobre determinadas clulas como mensajeros qumicos, regulando su metabolismo interno.

En las clulas se producen constantemente numerosos tipos de reacciones qumicas; unas, encaminadas a sintetizar nuevas molculas, y otras, a degradar las ya existentes. El conjunto de todas estas reacciones bioqumicas se denomina metabolismo celular. Dado que las sustancias que intervienen son muy estables a temperatura ambiente, si no se les ayudara a interactuar, no reaccionaran o lo haran tan lentamente que no sera posible la vida. Esta dependencia de ayuda es paradjicamente una gran ventaja, ya

2 Las reacciones qumicas y los biocatalizadores

Muchas sustancias qumicas, al reaccionar, desprenden energa calorfica; son las llamadas reacciones exergnicas. Esto puede comprobarse experimentalmente observando cmo aumenta la temperatura del medio en el que se produce la reaccin. Este desprendimiento se debe a que la energa interna total de las sustancias reaccionantes (reactivos), tambin llamada energa qumica dado que es la energa almacenada en los enlaces qumicos, es superior a la energa interna de las sustancias producidas (productos). El motivo de que estas reacciones no se den espontneamente es que para iniciar una reaccin, primero es necesario suministrar la energa suficiente para debilitar los enlaces de los reactivos y posibilitar as su rotura. Este paso intermedio, que requiere un aporte de energa, recibe el nombre de estado de transicin, y en l hay tantas posibilidades de que las molculas acaben formando el producto como de que retrocedan y queden como molculas de sustrato. La energa (expresada en caloras) necesaria para llevar 1 mol de molculas de una sustancia, a una determinada temperatura, hasta el estado de transicin se denomina energa de activacin (fig. 1). A modo de analoga, el inicio de una reaccin es comparable a la accin de tirar por la ventana un objeto que est sobre el suelo. Aunque no hay que realizar ninguna fuerza para que caiga (cae solo), si no se sube hasta el dintel de la ventana, no se iniciar la cada. Esto explica, por ejemplo, por qu el papel (celulosa) no arde espontneamente pese a la presencia de oxgeno en el aire, y s lo hace cuando se calienta hasta una determinada temperatura. n(C6H12O6) O2 CO2 H2O energa calorfica
celulosa

ESTADO DE TRANSICIN

Energa libre

Energa libre de activacin de la reaccin sin catalizador.

Energa libre de activacin de la reaccin catalizada.

ESTADO INICIAL

Variacin global de energa libre en la reaccin.

ESTADO FINAL

Tiempo

1 Energa de activacin.

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Continuando con el smil anterior, al igual que para poder lanzar muchos objetos en poco tiempo hay dos soluciones: poner muchas personas que trabajen con mucha rapidez (es decir, gastar mucha energa) o rebajar el dintel de la ventana para que sea ms fcil tirarlos, para acelerar una reaccin qumica tambin hay dos soluciones: calentar los reactivos, lo cual aumenta el estado de vibracin de las molculas y, por tanto, la posibilidad de que choquen dando lugar a los productos, o aadir un catalizador, es decir, una sustancia que atraiga hacia s las molculas de los reactivos con lo que se favorece que contacten entre s, reaccionen y den lugar a los productos sin necesidad de calentar. As pues el catalizador disminuye la energa de activacin necesaria para llegar al estado transitorio. En los seres vivos, un aumento de temperatura podra provocar la muerte, por lo que se sigue el segundo mecanismo, es decir, el concurso de catalizadores biolgicos o biocatalizadores. Las molculas que desempean esta funcin son las enzimas (fig. 2).
2 Se ha de realizar mucha menos fuerza para lanzar un saco por la ventana si el dintel est ms bajo. Igual que se ha de suministrar mucha menos energa para que se d una reaccin si hay un catalizador que disminuye el nivel energtico del estado de transicin.

Las enzimas

Las enzimas son los biocatalizadores; es decir, los catalizadores de las reacciones biolgicas. Actan rebajando la energa de activacin, y por tanto aumentando (acelerando) la velocidad de la reaccin, la cual se puede medir por la cantidad de producto que se forma por unidad de tiempo. Exceptuando las ribozimas, que se explican a continuacin, son protenas globulares, solubles en agua, que se difunden bien en los lquidos orgnicos, y que pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en el interior de la clula donde se han formado, o a nivel extracelular, en la zona donde se segregan, como sucede con las enzimas digestivas. Las ribozimas son unos ARN (como el ARN L19) capaces de catalizar a otros ARN, quitndoles o aadindoles nucletidos, sin consumirse ellos mismos. Son, pues, enzimas y, por tanto, son la excepcin a la idea de que todas las enzimas son protenas. Se considera que la primera materia viva era de ARN, que luego aparecieron las protenas, en las que se deleg la funcin enzimtica, y los ADN, en los que se deleg, por su mayor estabilidad, la funcin de almacenar la informacin. Las enzimas cumplen las dos caractersticas de todos los catalizadores:
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Son sustancias que, incluso en cantidades muy pequeas, aceleran la reaccin. Es decir, no es que se obtenga ms producto, sino que gracias a ellas se consigue la misma cantidad pero en menos tiempo. No se consumen durante la reaccin biolgica, por lo que al finalizar sta hay la misma cantidad de enzimas que al principio. Adems, a diferencia de los catalizadores no biolgicos, las enzimas presentan estas cuatro caractersticas: Son muy especficas. Esto les permite actuar en una reaccin determinada sin alterar otras. Actan siempre a temperatura ambiente, es decir, a la temperatura del ser vivo. Son muy activas. Algunas consiguen aumentar la velocidad de reaccin ms de un milln de veces, muy superior a los catalizadores no biolgicos. Presentan un peso molecular muy elevado. Segn su estructura, se pueden distinguir dos tipos de enzimas: las enzimas estrictamente proteicas, que pueden estar constituidas por una o ms cadenas polipeptdicas, y las holoenzimas, que son las enzimas constituidas por una fraccin polipeptdica, llamada apoenzima, y por una fraccin no polipeptdica, denominada cofactor.

Los cofactores pueden ser inorgnicos u orgnicos. Son cofactores inorgnicos los iones metlicos, que por lo general se encuentran en pequeas cantidades, menos de un 0,1 %, por lo que son oligoelementos. Por ejemplo, el Mg2 en las quinasas (como la que regula la reaccin: glucosa ATP glucosa-fosfato ADP); el Zn2 en las enzimas carboxipeptidasas, el K en la piruvato quinasa, etc. Los cofactores orgnicos se denominan coenzimas. Los principales coenzimas son el ATP, el NAD, el NADP, el FAD, el coenzima A (Co-A), las vitaminas, etc. Cuando los cofactores, en lugar de hallarse unidos dbilmente a la fraccin proteica o apoenzima,

se encuentran fuertemente unidos a ella, se denominan grupos prostticos, por ejemplo, el grupo hemo de las enzimas citocromos-oxidasas, el grupo hemino de las peroxidasas, etc. As pues, los oligoelementos y las vitaminas resultan imprescindibles para los organismos, ya que son cofactores de diversas enzimas.
Holoenzima Apoenzima Cofactor

Ion metlico Mg2, Zn2, K...

Coenzima ATP, NAD, NADP...

La actividad enzimtica

En ocasiones la enzima atrae primero a un sustrato, se queda una parte, atrae luego al segundo sustrato y le une dicha parte. Este mecanismo se denomina ping-pong (fig. 3 c). A E AE C + E // B + E BE D E
a Reaccin con un solo sustrato. Aminocido de fijacin Aminocido catalizador

La sustancia sobre la que acta una enzima se denomina sustrato. Las enzimas actan de dos formas diferentes segn se trate de reacciones en las que hay un solo sustrato, o de reacciones en las que hay dos o ms tipos de sustratos que se unen a la enzima para reaccionar.

I Un solo sustrato
Enzima (centro activo)

En las reacciones en las que hay un solo sustrato (S), la enzima (E) acta fijando al sustrato en su superficie (adsorcin) mediante enlaces dbiles, formndose el llamado complejo enzima-sustrato (ES). Se generan as tensiones que debilitan los enlaces del sustrato, por lo que para llegar al estado de transicin del complejo enzima-sustrato, el llamado complejo activado, se requiere mucha menos energa que para llegar al estado de transicin del sustrato solo. Finalizada la transformacin, queda el complejo enzima-producto (EP) que se escinde liberando la enzima intacta (E) y el producto (P). (figura 3 a). S E ES EP E P

Enlaces dbiles Sustrato

Enzima + sustrato Centro cataltico (enlaces fuertes)

Complejo enzimtico

I Dos sustratos
En las reacciones en las que hay dos sustratos (A y B) que reaccionan entre s, las enzimas (E) actan atrayendo a las molculas reaccionantes hacia su superficie (adsorcin) de forma que la posibilidad de que se encuentren aumenta y, en consecuencia, la reaccin se produce ms fcilmente. Las enzimas, una vez realizada la transformacin de los sustratos en los productos (C y D), se liberan rpidamente de ellos para volver a actuar (fig. 3 b). A B E ABE CDE C D E

Producto A

Enzima + productos Producto B

3 Actividad enzimtica.

93

b Reaccin con los dos sustratos.

c Primero interviene un sustrato, y despus, el otro. Sustrato B

Sustrato A

Sustrato B Enlaces dbiles Enzima + sustrato Enzima + sustrato Centro cataltico (enlaces fuertes) Complejo enzimtico

Enlaces dbiles

Centro cataltico (enlaces fuertes)

Complejo enzimtico

Complejo enzimtico

Sustrato A Complejo enzimtico Producto C Producto C

Producto D

Producto D

Enzima + productos

CUESTIONARIO 1

Energa de activacin

1. En un sustrato siempre hay unas molculas que presentan ms energa de activacin que otras, siendo las ms abundantes las que poseen una energa de activacin media. La adicin de un catalizador hace que el porcentaje de molculas que han llegado al estado de transicin sea mayor. Segn esto, indica en qu lugar se han de poner los siguientes textos:

a) Nmero de molculas. b) Energa interna. c) Energa de activacin sin enzima. d) Energa de activacin con enzima. e) Molculas que han llegado al estado de transicin.

94

Algunas enzimas no son activas hasta que sobre ellas actan otras enzimas o iones. Estas enzimas se denominan zimgenos o proenzimas. Un ejemplo es el pepsingeno, que el HCl transforma en pepsina. Algunas enzimas que bsicamente realizan la misma fun-

cin se presentan con formas moleculares distintas; son las llamadas isoenzimas. Presentan Vmx. y KM diferentes, siendo unas ms aptas para las clulas de unos rganos y otras para las de otros, o unas para las primeras etapas de la vida y las otras para las siguientes.

5 El centro activo de las enzimas

La actividad catalizadora de las enzimas se inicia con la formacin del complejo enzima-sustrato (ES). Esta unin se realiza gracias a los radicales de algunos pocos aminocidos que establecen enlaces con el sustrato (y con el grupo prosttico si lo hay), fijndolo y luego rompiendo alguno de sus enlaces. La regin de la enzima que se une al sustrato recibe el nombre de centro activo. Los centros activos tienen las siguientes caractersticas: 1.) Constituyen una parte muy pequea del volumen total de la enzima. 2.) Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco que facilita encajar al sustrato. 3.) Estn formados por aminocidos que, aunque distantes en la secuencia polipeptdica, debido a los repliegues de sta, quedan prximos. 4.) Los radicales de algunos de estos aminocidos presentan afinidad qumica por el sustrato, por lo que lo atraen y establecen enlaces dbiles con l. Esto facilita que, una vez roto alguno de sus enlaces, los productos resultantes se puedan separar con facilidad del centro activo. As pues, en la cadena polipeptdica de una enzima se pueden distinguir tres tipos de aminocidos: a) Aminocidos estructurales. Son los que no establecen enlaces qumicos con el sustrato. Son los ms abundantes y los responsables de la forma de la enzima. Por ejemplo, en la lisozima de 129 aminocidos, 124 son estructurales y slo 5 no lo son. b) Aminocidos de fijacin. Son los que establecen enlaces dbiles con el sustrato y lo fijan. c) Aminocidos catalizadores. Son los que al establecer enlaces, dbiles o fuertes (covalentes), con el sustrato, provocan la rotura de alguno de sus enlaces. Son, por tanto, los responsables de su transformacin. Los aminocidos de fijacin y los catalizadores se encuentran en el centro activo de la enzima (fig. 4).

Enlace que se ha de romper SUSTRATO

N H O CH2 C H O CH2 C O H H N O OC C

C C N C H O H O CH2 C O H N

Puentes de hidrgeno

d
Centro activo de la enzima

a b
a, b, c, d = aminocidos de fijacin

Aminocido catalizador que formar un enlace covalente inestable con el sustrato

4 Unin de un sustrato con el centro activo de una enzima.

95

6 La especificidad de las enzimas

Slo los sustratos que tienen la forma adecuada pueden acceder al centro activo; slo los que pueden establecer algn enlace con los radicales de los aminocidos fijadores pueden fijarse, y slo los que presentan un enlace susceptible de ser roto, prximo a los radicales de los aminocidos catalticos, pueden ser alterados. Todo ello origina una alta especificidad entre la enzima y el sustrato. E. Fischer en 1890 propuso el smil de la llave (sustrato) y la cerradura (enzima) para ilustrar esta complementariedad. En la actualidad se ha visto que algunas enzimas, al establecer los enlaces con el sustrato, modifican la forma de sus centros activos para adaptarse mejor al sustrato, es decir, solamente son complementarias despus de haberse unido a l; es el llamado ajuste inducido. En estos casos, en lugar del smil de la llave y la cerradura es ms adecuado el smil de como el guante (enzima) se adapta a la mano (sustrato), o el smil de el encaje de manos entre dos personas (figura 5). La especificidad puede darse en varios grados. As se habla de: a) Especificidad absoluta. Se da cuando la enzima slo acta sobre un sustrato; por ejemplo, la ureasa slo acta sobre la urea. b) Especificidad de grupo. Se da cuando la enzima reconoce un determinado grupo de molculas; por ejemplo, la -glucosidasa que acta sobre todos los -glucsidos. c) Especificidad de clase. Es la menos especfica, dado que la actuacin de la enzima no depende del tipo de molcula, sino del tipo de enlace. Por ejemplo, las fosfatasas separan los grupos fosfato de cualquier tipo de molcula.

Modelo de la llave (sustrato) y la cerradura (enzima).

Modelo del ajuste inducido.

Modelo de la tensin sobre el sustrato. Es una variante del modelo del ajuste inducido, que explica los casos en que los enlaces provocan no slo un cambio conformacional en la enzima, sino que tambin cambian (tensan) la forma del sustrato.

5 Especificidad entre la enzima y el sustrato.

96

7 La cintica de la actividad enzimtica

En una reaccin enzimtica con una concentracin de enzima constante, al incrementar la concentracin del sustrato se produce un aumento de la velocidad de reaccin, tendente a restablecer el equilibrio qumico entre las concentraciones de producto y de sustrato. Este incremento en la velocidad de reaccin se debe a que, al haber ms molculas de sustrato por unidad de volumen, se aumenta la probabilidad de encuentro entre sustrato y enzima. Si se va aumentando la concentracin del sustrato, llega un momento en que la velocidad de reaccin deja de crecer, es decir, se llega a una velocidad mxima (Vmx.). Esto se debe a que todas las molculas de la enzima ya estn ocupadas por molculas de sustrato, formando el complejo enzima-sustrato, lo que se denomina saturacin de la enzima. En la mayora de las enzimas la representacin grfica de estos valores da una hiprbola (fig. 6). A partir de este comportamiento enzimtico, Leonor Michaelis y Maud Menten definieron una constante, denominada constante de Michaelis-Menten (KM), que es la concentracin del sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. KM depende de la afinidad que hay entre la enzima y su sustrato. Basndose en ella propusieron la siguiente ecuacin para, a partir de la Vmx. y la KM, poder calcular la velocidad de la reaccin enzimtica segn las distintas concentraciones de sustrato. V = Vmx. [S] KM[S] Se denomina nmero de recambio (turnover) o constante cataltica al nmero de molculas de sustrato transformadas por unidad de tiempo, y unidad estndar de actividad enzimtica (U) a la cantidad de enzima que transforma 1 micromol de sustrato por minuto (mol/min).
Velocidad de la reaccin Vmx.

1V mx. 2

Concentracin del sustrato [S] KM

6 Variacin de la velocidad de reaccin segn la concentracin del sustrato.

CUESTIONARIO 2

Cintica enzimtica
a
Velocidad de la reaccin
2 Vmx. 2E

b
Producto formado en moles/litro

4S E Vmx. 1 V mx. 2 3S 2S 1S

Concentracin del sustrato [S]

Tiempo

97

CUESTIONARIO 2 (continuacin) c
Velocidad de la reaccin

d 100
E1

10

P
Concentracin de E y ES

E S ES

50

E2

ES
0
Tiempo

E
0

Concentracin de sustrato [S]

Tabla e [S] 1 2 5 10 20 (mM) (a) Velocidad 2,3 4,3 6,5 7,7 8,9 (b) Velocidad 1,2 2,1 3,9 5,8 7,1 (c) Velocidad 0,8 1,2 1,9 2,5 2,8

1. Observa la figura (a) e indica qu relacin hay entre la velocidad de reaccin y la concentracin de la enzima (en cada curva se duplica). La concentracin de sustrato es la misma en todos los casos. Razona la respuesta. 2. Observa la figura (b) e indica qu relacin hay entre la velocidad de reaccin y la concentracin del sustrato (en cada curva se duplica). La concentracin de enzima es la misma en todos los casos. Razona la respuesta. 3. Las dos grficas de la figura (c) corresponden a dos enzimas que actan sobre el mismo sustrato. Sabiendo que en la reaccin E + S ES, el valor de KM es KM = [E][S]/[ES] y, por tanto, a mayor afinidad entre la enzima y el sustrato, es decir, a mayor facilidad de formarse ES, menor KM corresponde, decir cul de las dos corresponde a la enzima que presenta mayor afinidad.

4. Observa la figura (d) y contesta a las siguientes preguntas: a) Por qu aumenta P y disminuye S? b) Por qu aumenta E mientras disminuye ES? c) Por qu hay una segunda escala para indicar las concentraciones de E y ES? 5. A partir de la tabla (e) realiza la representacin de las tres grficas e indica cul corresponde a presencia de inhibidor competitivo, cul a inhibidor no competitivo y cul a ausencia de inhibidor. 6. En una reaccin enzimtica en la que la concentracin de sustrato es de 4 milimoles (mM), se transforman 2,5 micromoles (M) por minuto, siendo la KM 4,5 M. Cuntos micromoles se formaran en un minuto si la concentracin del sustrato fuera de slo 0,5 mM?

8 Factores que afectan a la actividad enzimtica

La velocidad de reaccin conseguida por una enzima, adems de depender de la concentracin del sustrato, depende de otros factores: la temperatura, el pH y la presencia de inhibidores. a) Influencia de la temperatura. Si a una reaccin enzimtica se le suministra energa calorfica, las molculas aumentan su movilidad y el nmero de encuentros moleculares, por lo que
98

aumenta la velocidad en que se forma el producto. Existe una temperatura ptima para la cual la actividad enzimtica es mxima. Si la temperatura aumenta, se dificulta la unin enzima-sustrato y a partir de cierta temperatura la enzima se desnaturaliza, pierde su estructura terciaria y cuaternaria si la tiene y, por tanto, pierde su actividad enzimtica (figura 7 a).

a
Velocidad de la reaccicn Aumento de la mobilidad molecular

Excesiva mobilidad molecular

b
Velocidad de la reaccin

Disminucin de los radicales cidos ionizantes

Disminucin de los radicales bsicos ionizantes

Desnaturalizacin
10 C 20 C 30 C 50 C 60 C

Desnaturalizacin

Desnaturalizacin

Temperatura Temperatura C ptima

pH ptimo

pH

7 Regulacin de la actividad enzimtica. a) Variacin de la velocidad de la reaccin catalizada por una enzima con la temperatura. b) Variacin de la actividad de la enzima con el pH.

b) Influencia del pH. Las enzimas presentan dos valores lmite de pH entre los cuales son eficaces; traspasados estos valores, las enzimas se desnaturalizan y dejan de actuar. Entre los dos lmites existe un pH ptimo en el que la enzima presenta su mxima eficacia. El pH ptimo est condicionado por el tipo de enzima y de sustrato, debido a que el pH influye en el grado de ionizacin de los radicales del centro activo de la enzima y tambin de los radicales del sustrato (fig. 7 b). c) Inhibidores. Los inhibidores son sustancias que disminuyen la actividad de una enzima o bien impiden completamente la actuacin de la misma. Pueden ser perjudiciales o beneficiosos como, por ejemplo, la penicilina, que es un inhibidor de las enzimas que regulan la sntesis
a
Inhibidor (se une permanentemente a la enzima).

de la pared bacteriana, por lo que es til contra las infecciones bacterianas, y el AZT, que es un inhibidor de la transcriptasa inversa, por lo que retrasa el desarrollo del SIDA. La inhibicin puede ser de dos tipos: irreversible y reversible. La inhibicin irreversible, o envenenamiento de la enzima, tiene lugar cuando el inhibidor o veneno se fija permanentemente al centro activo de la enzima alterando su estructura y, por tanto, inutilizndolo (fig. 8 a). La inhibicin reversible tiene lugar cuando no se inutiliza el centro activo, sino que slo se impide temporalmente su normal funcionamiento. Existen dos modalidades: competitiva y no competitiva.
c
Inhibidor (no permite la liberacin de los productos).

sustrato

enzima Inhibicin irreversible

enzima

Inhibicin reversible no competitiva Inhibidor (no permite la fijacin del sustrato).

b
Inhibidor (se une temporalmente a la enzima).

enzima

enzima Inhibicin reversible no competitiva

Inhibicin reversible competitiva

8 Tipos de inhibicin.

99

 La inhibicin reversible competitiva se debe a la presencia de un inhibidor cuya molcula es similar al sustrato, por lo que compite con ste en la fijacin al centro activo de la enzima. Si se fija el inhibidor, la enzima queda bloqueada. Por tanto el sustrato no puede fijarse hasta que el inhibidor se vaya. La velocidad de la

reaccin disminuye en funcin de la concentracin del inhibidor (fig. 8 b). La inhibicin reversible no competitiva es debida a un inhibidor que o se fija al complejo enzima-sustrato impidiendo su separacin, o se une a la enzima impidiendo el acceso del sustrato al centro activo (fig. 8 c).

CUESTIONARIO 3

Especificidad enzimtica, pH y temperatura

a
Velocidad de la reaccin Amilasa salival 3 Pepsina gstrica Tripsina pancretica

10

11 pH

Especificidad enzimtica.

b
Velocidad de la reaccin 1. Por qu una enzima que acta sobre la glucosa puede no ser eficaz sobre la galactosa? 2. Qu efectos produce en los radicales de la enzima el pH del medio para que sea ms o menos eficaz? 3. Observa la figura (a) e indica por qu unas enzimas actan mejor a un pH cido, otras a un pH neutro, y otras a un pH bsico. 4. Observa la figura (b) e indica por qu pasar de 0 a 40 C aumenta la velocidad de reaccin, acercarse a los 50 C la disminuye, y por qu este paso es irreversible mientras que disminuir de 40 a 0 C s es un paso reversible. 0 10 20 30 40 50 Temperatura en C 5. El almidn es hidrolizado por la amilasa salival. Escribe los pasos que seguiras (protocolo) en un experimento para demostrar dicha reaccin. 6. Escribe el protocolo que seguiras en dos experiencias diseadas para demostrar la influencia de la temperatura y del pH en la reaccin enzimtica anterior. 7. Cmo sera la velocidad de reaccin si los enlaces entre enzimas y sustrato fueran covalentes?

Efecto de la temperatura sobre la enzima amilasa cuando acta sobre el almidn.

100

Enzimas alostricas

de distinto tipo, provocando cada uno una disminucin de afinidad de la enzima por el otro (fig. 9). El alosterismo permite la autorregulacin de la actividad enzimtica. Hay dos casos: 1. Regulacin por retroinhibicin o inhibicin feed-back. Se da en enzimas cuya conformacin inicial es la activa. Se produce cuando el producto final es el que al fijarse al centro regulador acta como inhibidor, provocando la transicin alostrica a la forma inactiva de la enzima. 2. Regulacin por induccin enzimtica. Se da en enzimas cuya conformacin inicial es la inactiva. Se produce cuando alguna sustancia inicial es la que al fijarse sobre el centro regulador provoca la transicin alostrica a la forma activa de la enzima, por lo que sta empieza a actuar sobre el sustrato (fig. 10).

Las enzimas alostricas son aquellas que pueden adoptar dos formas estables diferentes. Una es la conformacin activa de la enzima y la otra la conformacin inactiva. Estas enzimas, adems del centro activo, tienen al menos otro lugar, denominado centro regulador, al que se puede unir una determinada sustancia, denominada ligando. Con frecuencia, una sola de las conformaciones presenta afinidad por el ligando; en esos casos es la presencia del ligando la que determina el cambio de conformacin en la enzima, la llamada transicin alostrica. Se conocen dos tipos de ligandos segn la conformacin inducida que favorecen: los activadores o efectores y los inhibidores. En algunas enzimas hay dos centros reguladores a los que se unen ligandos

Centro activo

Centro regulador

Ligando

Conformacin-

Conformacin- inestable que presenta afinidad por el ligando

Conformacin- estabilizada

9 Transicin alostrica. La presencia de ligando hace que la concentracin de enzima con conformacin- sin ligando disminuya. Para restablecer el equilibrio, una parte de las enzimas con conformacin- pasan a conformacin-; es decir, la presencia de ligando produce la transicin alostrica.
Inhibidor

Sustrato

E1 A

E2 B

E3 C

Inhibicin de la enzima E1 gracias al producto final (retroinhibicin). Activador (= efector)

Sustrato

E1

E2

E3

Activacin de la enzima E1 gracias al sustrato inicial (induccin enzimtica).

10 Enzimas alostricas.

101

10

Cooperativismo

Las enzimas alostricas suelen estar formadas por varias subunidades moleculares denominadas protmeros. Cada protmero posee un centro activo y al menos un centro regulador. En muchas enzimas, cuando al centro regulador se une una molcula denominada activador o ligando, la conformacin del protmero vara, haciendo funcional al centro activo. La variacin en la conformacin de este protmero se transmite instantneamente a los otros protmeros asociados hacindolos a su vez activos, efecto que se denomina transmisin alostrica. De esta forma la enzima pasa de estado inhibido (T) a un estado activo o cataltico (R) (fig. 11 b).
a Velocidad de reaccin Vmx. Enzima alostrica actuando en cooperativismo enzima b

Como para que una enzima alostrica acte es precisa la unin de uno o ms ligandos y luego la del sustrato, la velocidad de reaccin en funcin de la concentracin de sustrato no aumenta tan rpidamente como en las enzimas no alostricas. En cambio, si esta enzima es una subunidad y su transformacin al estado activo se transmite alostricamente a todas las dems subunidades, son muchas las que sbitamente empiezan a actuar, lo que se denomina cooperativismo, y se produce un cambio de velocidad de reaccin muy grande, la llamada ley del todo o nada. La representacin grfica de la relacin entre la velocidad de reaccin y la concentracin del sustrato no es una hiprbola, sino una curva sigmoidal o curva en S (fig. 11 a).

Centro regulador Centro activo

Transmisin alostrica (instantnea)

+ Activador

Enzima normal Estado inhibido (T) Estado cataltico (R)

Concentracin de sustrato [S] 11 Enzimas alostricas.

11

Regulacin de las vas metablicas

reaccin es una enzima alostrica (una enzima que adems del centro activo presenta un centro regulador), que queda inhibida cuando sobre su centro regulador se fija una molcula del producto final. As acta como enzima reguladora, ya que toda la va queda detenida. Un ejemplo de ello lo presenta la sntesis de la treonina (fig. 12). En ocasiones la enzima que frena la va es una enzima intermedia que, debido a que produce muy poco producto es la enzima limitante de velocidad de la va, resulta idnea para actuar como reguladora.

Se denomina va metablica a la sucesin de reacciones qumicas que conduce desde una sustancia inicial (sustrato), a travs de distintos compuestos intermedios (metabolitos), hasta una sustancia final (producto). Se conocen diferentes formas de regular una va metablica. Las principales son: La regulacin por retroinhibicin o inhibicin feed-back de la actividad enzimtica. El conjunto de enzimas que intervienen en una va metablica se denomina sistema multienzimtico. Generalmente la enzima que cataliza la primera
102

Inhibidor E1 cido asprtico E2 E3 E4 E5 Treonina

12 Regulacin por retroinhibicin (feed-back) en la sntesis del aminocido treonina.

La regulacin por modulacin de la sntesis enzimtica. Dado que muchas enzimas reguladoras de velocidad tienen una vida media relativamente corta, de unas pocas horas, una forma de controlar una va es aumentando o disminuyendo la sntesis de dicha enzima a partir del gen que la codifica. Esta sntesis se puede controlar a nivel celular mediante procesos de re-

troinhibicin o de induccin, similares a los ya explicados. En organismos pluricelulares, los principales inductores de la sntesis enzimtica son las hormonas. Todo ello se estudia con detalle al final de la unidad 18. Cuando la actividad de una enzima est influida por diferentes tipos de ligandos, se habla de multimodulacin.

12 Formas de aproximacin de las enzimas de una va

En las vas metablicas el producto generado por una enzima es el sustrato de la siguiente enzima; por ello, para aumentar la eficiencia del sistema se da la compartimentacin, los complejos multienzimticos y la inclusin de enzimas en las membranas. La compartimentacin. Consiste en separar mediante membranas los lugares donde se realizan aquellas vas metablicas que no se desea que se relacionen. Por ejemplo, mientras la sntesis de los cidos grasos se realiza en el citosol, su degradacin tiene lugar en las mitocondrias. Igualmente, mientras la degradacin de glucosa a cido pirvico se realiza en el citosol, en la va inversa algunas etapas se desarrollan en el interior de las mitocondrias. De esta forma es ms fcil regular cada una de las vas. Complejo multienzimtico. Es la asociacin de varias enzimas que actan sucesivamente en una va. El complejo supramolecular resultante es ms eficaz que si las enzimas estuvieran dispersas en el medio. Ejemplos de complejos multienzimticos son la piruvato-deshidrogenasa, que convierte el cido pirvico en acetil-CoA, el complejo de citocromos b-c1, el complejo de la citocromo-oxidasa (a-a3), etc. (fig. 13).

13 Complejo multienzimtico de la piruvato-deshidrogenasa.

103

 Inclusin en membranas. Algunas enzimas y algunos complejos multienzimticos se encuentran englobados de forma ordenada en las membranas, de forma que esto facilita la unin entre los sucesivos productos y las sucesivas enzimas.

Por ejemplo, los complejos multienzimticos mencionados anteriormente: el de los citocromooxidasa, etc., se encuentran seguidos en la membrana de las crestas mitocondriales realizando las dos ltimas etapas de la cadena respiratoria.

CUESTIONARIO 4

La actividad enzimtica
A Velocidad de reaccin B Velocidad de reaccin

a b

c d

1. De cuntas formas se puede impedir la accin de una enzima? 2. Puede una catlisis enzimtica reversible convertirse en irreversible si se aumenta la concentracin de enzimas? 3. Por qu a los inhibidores irreversibles se les denomina venenos? 4. Qu sucedera si las enzimas se gastaran en las reacciones que aceleran? 5. Las reacciones que desprenden energa se denominan exergnicas, y las que absorben energa, endergnicas. De qu tipo son las reacciones de sntesis de materia orgnica (anablicas) y las de degradacin de materia orgnica (catablicas) que forman el metabolismo? 6. Qu sucedera si la energa liberada en una reaccin bioqumica se desprendiera en forma de calor? De qu forma se almacena? Existe algn caso en que se libere en forma de luz?

7. Observa las grficas de A y B, e indica en cada una de ellas qu curva corresponde a la reaccin con inhibidor y cul a la sin inhibidor. 8. Qu frases pertenecen a A o a B? 1. Debido al inhibidor, aunque se aumente la concentracin de sustrato no se alcanza la velocidad mxima. 2. Pese al inhibidor, si se aumenta la concentracin de sustrato se alcanza la velocidad mxima. 3. Es un caso de inhibicin competitiva. 4. Es un caso de inhibicin no competitiva. 9. Qu ventaja puede tener que una va metablica est controlada por una enzima alostrica en vez de serlo por una enzima no alostrica? 10. Qu ventaja puede tener que una reaccin est controlada por una enzima que presenta cooperatividad en vez de serlo por una enzima que no la presenta?

13 Nomenclatura y clasificacin de las enzimas

Para denominar una enzima se cita primero el nombre del sustrato, a continuacin el nombre de la coenzima, si la hay, y finalmente la funcin que realiza. Por ejemplo, la malonato coenzima-A transferasa, la succinato flavn deshidrogenasa, etc. Generalmente slo se utiliza el nombre del sustrato acabado en -asa. Por ejemplo, sacarasa, maltasa, amilasa, etc. Sin embargo, algunas enzimas conservan su antigua denominacin. Por ejemplo, la tripsina, la pepsina, etc.
104

Para evitar errores, dado que se conocen ms de 2.000 enzimas, hay una nomenclatura numrica con cuatro cifras para cada enzima: la primera indica la clase, la segunda la subclase, la tercera la divisin y la cuarta la enzima concreta. Por ejemplo, la malonato coenzima-A transferasa es la enzima 2.8.3.3. Segn la funcin que realizan, las enzimas se clasifican en seis clases: oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas o sintetasas (ver Documento 1).

CUESTIONARIO 5

La clasificacin de las enzimas

1. A partir del Documento 1 razona a qu clase pertenece cada una de las enzimas que intervienen en las siguientes reacciones qumicas.

a
O R C O HO HO CH2
LIPASA

O R C OH +

HO HO HO

CH2 CH CH2 NH2

O
UREASA

CH CH2 H2O

NH2 H2O

CO2 + 2 NH3

Acilglicrido

cido graso

Glicerina

Urea

Amoniaco

c
ASPARTASA

HOOC

CH2

CH NH2

COOH

HOOC

CH

CH

COOH + NH3

cido asprtico

cido fumrico

Amoniaco

COOH CH2OH CH2O PO3H2

FOSFOGLICEROMUTASA

COOH CH2O CH2OH

cido 2-fosfoglicrico

e
PO3H2

COOH NH3 CH2 CH2 CH NH2

GLUTAMINA SINTETASA

CO CH2 CH2 CH

NH2

ATP

ADP + P

+ NH2

cido 3-fosfoglicrico

NH2

COOH

COOH

cido glutmico

Glutamina

ocumento 1

La clasificacin de las enzimas

a
2+ 3+ H2 ee3+ 2+ + NAD Oxidasa + NADH + H

1. Oxidorreductasas. Catalizan reacciones de oxidacin o reduccin del sustrato. Los principales tipos son las deshidrogenasas y las oxidasas. Deshidrogenasas. Separan tomos de hidrgeno del sustrato. Utilizan coenzimas el NAD, NADP o FAD. Por ejemplo, la NAD-reductasa de la cadena respiratoria. Oxidasas. Oxidan el sustrato al aceptar sus electrones. Por ejemplo, las citocromos oxidasas de la cadena respiratoria.

Deshidrogenasa

H2

105

ocumento 1 (continuacin)
2. Transferasas. Transfieren radicales de un sustrato a otro sin que en ningn momento queden libres dichos radicales. Por ejemplo, la glucoquinasa que transfiere un grupo fosfato desde el ATP a la glucosa.

Transferasa

c
H2O H + Hidrolasa OH

3. Hidrolasas. Rompen enlaces mediante la adicin de una molcula de agua que se escinde y aporta un OH a una parte y un H a la otra parte. A este grupo pertenecen las enzimas digestivas como son las peptidasas (rompen enlaces peptdicos), esterasas (rompen enlaces estricos), amidasas (rompen enlaces CN), etc.

d
4. Liasas. Separan grupos sin intervencin de agua (sin hidrlisis) generalmente originando dobles enlaces en la molcula, o bien aaden grupos (CO2, H2O, NH2) a molculas con dobles enlaces (CO, CC) que generalmente los pierden. Por ejemplo, las desaminasas retiran grupos amino originando dobles enlaces.

Liasas

Liasas

e
5. Isomerasas. Catalizan reacciones de isomerizacin, es decir, de cambio de posicin de algn grupo de una parte a otra de la misma molcula.

Isomerasa

f
6. Ligasas o sintetasas. Catalizan la unin de molculas o grupos mediante la energa proporcionada por la defosforilacin de ATP. A este grupo pertenecen la mayor parte de las polimerasas.

ATP

ADP + P

Ligasas o sintetasas

106

14

Los coenzimas

I Los coenzimas de oxidacin y reduccin

Son los que transportan protones (H) y electrones (e). Su nombre proviene de que oxidacin es la prdida de electrones y reduccin es la ganancia. Los principales son el nicotn-adenn-dinucletido (NAD), el fosfato de nicotn-adenn-dinucletido (NADP), el flavn-adenn-dinucletido (FAD), y el grupo hemo de la citocromo oxidasa (fig. 14). La reaccin, por ejemplo, del NAD es: NAD 2 H + 2 e NADH H

Un coenzima es un cofactor orgnico que se une a una apoenzima (parte proteica de una enzima) mediante enlaces dbiles, durante el proceso cataltico. Los coenzimas actan como dadores o receptores de grupos qumicos, es decir, son transportadores de grupos qumicos. En consecuencia, a diferencia de la apoenzima, el coenzima s se modifica durante la reaccin. La unin coenzima-apoenzima es temporal y similar a la unin sustrato-enzima, por lo que el coenzima puede ser considerado como un segundo sustrato. Si la unin fuera fuerte y permanente, no se denominara coenzima, sino grupo prosttico. Muchos coenzimas son vitaminas o presentan vitaminas como constituyentes de su estructura. Los coenzimas no suelen ser especficos de un solo tipo de apoenzima, sino que en algunos casos pueden unirse a muchos (a veces a ms de 100) tipos diferentes de apoenzimas, cada una con una funcin diferente. Se pueden distinguir dos tipos de coenzimas, los de oxidacin y reduccin y los de transferencia.

I Los coenzimas de transferencia

Son los que transportan radicales moleculares. Los ms importantes son el adenosn trifosfato (ATP) que transporta grupos fosfato (H2PO4), y el acetil coenzima A (CoA-SH), que transporta grupos acetilo (COCH3). En su composicin interviene el cido pantotnico o vitamina B5 (fig. 15). La estructura del ATP aparece en el primer captulo dedicado al metabolismo, dado que su funcin principal es la de transportar energa.

14 Vitaminas del complejo B y sus derivados. El FAD contiene riboflavina, que es la vitamina B2. El NAD+ de las mitocondrias y el NADP+ de los cloroplastos contienen nicotinamida, un derivado de la niacina, que, ante la dificultad de los animales por sintetizarla, se considera como una vitamina (la vitamina PP). La nicotinamida presenta un nitrgeno ionizante con carga positiva; de ah procede la carga positiva que presentan el NAD+ y el NADP+.
O a N H3C H3C N CH2 Vitamina B2 HCOH HCOH HCOH CH2OH OH OH N N N O FAD (flavn-adenn-dinucletido) O N C NH O N NH2 N O O H3C N CH2 O P O P O CH2 CH CH CH CH2 OH OH OH OH OH N O H3C C NH

b O COOH C NH2 N Vitamina B3 o niacina c N NH2 CH2 N+ CH3 CH2 CH2OH N S Vitamina B1 o tiamina O OH OH OH OH
NADP (fosfato de nicotn-adenn-dinucletido)

NH2 N N O N N O O N+ O O C NH2

N Nicotinamida

CH2 O P O P O CH2 OH OH

H 3C

HOP=O

107

a
N

NH2 N O N N O O CH3OH O

CH2 O P O P O CH2 C CH C NH (CH2)2 C NH (CH2)2 SH OH OH CH3 O

Adenina

cido pantotnico
OH OH

Coenzima-A

b Sustrato C

O Sustrato CH3 CoA SH aciltransferasa CoA S C CH3 c O + aciltransferasa H

Fructosa a Estructura del coenzima A (CoA) b Transferencia de grupos acil (COCH3) por el coenzima A. c Transferencia de grupos fosfato por el ATP.

Fructosa

1,6

Difosfat

ATP fosfofructoquinasa ADP + fosfofructoquinasa

15 Los coenzimas.

15

Las vitaminas

Las vitaminas son glcidos o lpidos sencillos que actan como coenzimas y que en general los animales no pueden sintetizar o lo hacen en cantidad insuficiente, por lo que precisan ingerirlas en la dieta. Su nombre proviene de que son imprescindibles para el mantenimiento de la vida (vita), pese a que slo se precisan en pequesimas cantidades, y a que la primera vitamina que fue aislada posea radicales amino (amina). Son sustancias lbiles, que se alteran con facilidad con los cambios de temperatura, la luz, o los almacenamientos prolongados. Por ejemplo, la coccin de los alimentos reduce a la mitad la cantidad de vitaminas, de ah la necesidad de ingerir alimentos frescos (frutas y ensaladas). Las vitaminas son sintetizadas por las plantas y por las bacterias. En ocasiones los animales no las encuentran del todo formadas en los alimentos, sino
108

en forma de provitaminas, que precisan de posteriores transformaciones para dar lugar a las vitaminas. Por ejemplo, las vitaminas A y D. En otros casos la vitamina es aportada por la flora bacteriana, como sucede con la vitamina K. Se habla de avitaminosis si hay una carencia total de una determinada vitamina, hipovitaminosis si la carencia es parcial, e hipervitaminosis si existe un exceso de vitamina. Atendiendo a su solubilidad, las vitaminas se clasifican en: Vitaminas liposolubles. Son de naturaleza lipdica y por tanto solubles en disolventes orgnicos. Pertenecen a este grupo las vitaminas A, D, E y K. Vitaminas hidrosolubles. Son solubles en agua, y por tanto se difunden muy bien por la sangre. Su exceso no provoca trastornos, ya que son filtradas en el rin, y eliminadas por la orina. Pertenecen a este grupo las vitaminas del complejo B (vitaminas B1, B2, B3, B5, B6, B8, B9 y B12) y la vitamina C.

ocumento 2

Las vitaminas hidrosolubles

Nombre
Vitamina B1 o tiamina, o vitamina antiberibrica.

Fuentes naturales

Funcin

Trastornos
Su dficit produce el beriberi. Una degeneracin de las neuronas que provoca debilidad muscular, insuficiencia cardiaca, lentitud de reflejos, bajo rendimiento intelectual e inapetencia. Su dficit produce dermatitis, lesiones en labios, lengua, y ojos. Puede aparecer despus de tratamientos con antibiticos que hayan destruido la flora intestinal que la produce. Su dficit produce la pelagra, o enfermedad de las tres d: dermatitis (piel spera y oscura), diarrea y demencia. Puede llegar a ocasionar la muerte.

Envolturas de las semillas Su forma activa de cereales y legumbres. es el coenzima pirofosfato de tiamina (TPP). Interviene en el metabolismo de glcidos y lpidos. Hgado, riones, huevos, Forma parte de los coenzimas FAD y FMN, leche, y en los frutos que actan en el ciclo secos. de Krebs y en la cadena respiratoria celular. Bonito, atn, hgado, pollo, cacahuete, guisantes y judas. Los animales la sintetizan insuficientemente a partir de triptfano. Forma parte del coenzima NAD, que acta en la oxidacin de glcidos y prtidos, y en el coenzima NADP, que acta en la fotosntesis.

Vitamina B2 o riboflavina, o lactoflavina.

Vitamina B3 o vitamina PP, o cido nicotnico, o niacina.

Vitamina B5 o cido pantotnico.

Pescado, carne, huevos, Forma parte del coenzima A cereales, legumbres, etc. que acta en el metabolismo de cidos grasos y del cido pirvico. Hgado, riones, salmn, El fosfato de piridoxina nueces y avena. es un coenzima del metabolismo de aminocidos como el triptfano.

No se conocen enfermedades carenciales en los humanos. En ratas produce pelo gris y en los pollitos, dermatitis y acmulo de grasas en el hgado. Su dficit provoca dermatitis seborreica con cada del pelo, anemia y trastornos nerviosos, como alteraciones del sueo, irritabilidad, y vrtigo. En exceso produce convulsiones.

Vitamina B6 o piridoxina.

Vitamina B8 o biotina.

Hgado, riones, huevos, Forma parte como coenzima Su dficit provoca dermatitis, anemia soja, almendras y nueces. de enzimas que transfieren y trastornos musculares. Puede sintetizarla grupos CO2. la flora bacteriana. Esprragos, espinacas, lentejas, avellanas, hgado, rin. Interviene como Su dficit provoca anemia megaloblstica transportador de grupos y trombocitopenia. monocarbonados en la sntesis de purinas y pirimidinas. Interviene como coenzima transportando diferentes grupos en el metabolismo de cidos nucleicos y en la formacin de glbulos rojos (eritropoyesis). Interviene en la sntesis de colgeno. Su dficit provoca la anemia perniciosa y trastornos neurolgicos. Dado que la mayora de los vegetales no pueden sintetizarla, los vegetarianos estrictos deben obtenerla de su flora intestinal o de yogures.

Vitamina B9 o cido flico, o folacina.

Hgado, riones, sardina, Vitamina B12 o cianocobalamina. caballa, arenque, y leche. Tambin a partir de la flora bacteriana.

Vitamina C Abunda en ctricos, o cido ascrbico. hortalizas y en la leche de vaca.

Su dficit provoca el escorbuto, cuyos sntomas son: hemorragias, encas sangrantes, cada de los dientes y trastornos digestivos. Por ello aparecen infecciones graves y consecuentemente la muerte.

109

ocumento 2 (continuacin)

Las vitaminas liposolubles

Nombre
Vitamina A o antixeroftlmica. Incluye la A1 (retinol), A2 (retinal) y A3 (un derivado de A1).

Fuentes naturales
Vegetales como la zanahoria ricos en caroteno (provitamina que en el intestino libera dos molculas de vitamina A). En los aceites del hgado de bacalao, la mantequilla y los huevos.

Funcin
Acta protegiendo los tejidos epiteliales. Adems es necesaria para la percepcin visual, ya que al actuar como grupo prosttico regenera la rodopsina, molcula cuya rotura estimula al nervio ptico.

Trastornos
Su dficit favorece la rotura y las infecciones de los tejidos epiteliales. Tambin causa la xeroftalmia, que es el engrosamiento y opacidad de la crnea, prdida de agudeza visual, y ceguera nocturna. El exceso provoca cada del pelo, debilidad, cefaleas y vmitos. Su dficit origina raquitismo en nios y osteomalacia en adultos. Enfermedades en las que los huesos se ablandan y deforman por falta de calcio. Su exceso provoca trastornos digestivos y calcificaciones de rganos, como el rin, el hgado, el corazn, etc.

Vitamina D. Engloba varias vitaminas, como la vitamina D2 o calciferol y la D3 o colecalciferol.

A partir de la insolacin, ya que los rayos ultravioleta transforman en la piel el 7-deshidrocolesterol humano en vitamina D3, o el ergosterol de la dieta vegetal en vitamina D2. Tambin ingeriendo pescados grasos (salmn, arenque y anguila), huevos, queso, mantequilla e hgado. Se encuentra en aceites vegetales, almendras, avellanas, en germen de trigo, yema de huevo, carne, hgado y pescado.

Regula la absorcin del calcio a travs de la pared intestinal, favoreciendo la formacin y robustez de los huesos.

Vitamina E o tocoferol.

Acta como antioxidante impidiendo que el oxgeno destruya los enlaces dobles de los cidos grasos insaturados.

En humanos su dficit puede producir trastornos intestinales y debilidad muscular. En roedores la hipovitaminosis produce esterilidad, la muerte de los fetos y distrofia muscular. La hipovitaminosis favorece la aparicin de hemorragias. No es txica cuando no se consume en exceso.

Vitamina K. Agrupa a varias vitaminas; las principales son la K1 (filoquinona) y la K2 (menaquinona).

La vitamina K1 se obtiene de los vegetales de hoja verde; la K2, del pescado; la K3, de la flora intestinal, y la K4, sintticamente.

Acta en la sntesis de la protrombina, molcula precursora de la trombina, enzima necesaria en la coagulacin de la sangre.

CUESTIONARIO 6

Las vitaminas
1. Por qu si los animales no producen vitaminas pueden servir como fuente vitamnica? 2. En qu tejidos animales se encuentran las vitaminas liposolubles? Por qu? 3. Cules son los alimentos que contienen mayor nmero de vitaminas? 4. Qu vitaminas son producidas por el ser humano? 5. Por qu los antibiticos pueden producir avitaminosis? 6. De qu vitaminas se conoce su mecanismo como coenzima? 7. Qu caractersticas tienen en comn las vitaminas cuya carencia produce anemia? 8. Qu vitaminas pueden producir perjuicios por hipervitaminosis? 9. Qu vitaminas estn relacionadas con la insolacin? 10. Por qu los esquimales no tienen dficit de vitamina D pese a la escasa insolacin?

110

16

Las hormonas

Los seres vivos pluricelulares necesitan sistemas que regulen y coordinen la actividad conjunta de sus clulas. En los animales este control es realizado por el sistema nervioso y por las hormonas, y en los vegetales slo por las hormonas. stas son sustancias qumicas producidas por glndulas endocrinas o de secrecin interna, ya que vierten sus productos (hormonas) al medio interno (sangre, hemolinfa, savia). Las hormonas actan as como mensajeros qumicos. nicamente actan sobre su rgano blanco u rgano diana, pues slo sus clulas poseen en la membrana plasmtica receptores especficos (receptores hormonales) para aquellas hormonas que pueden influir en la actividad del citado rgano. Las hormonas son principalmente protenas o esteroides, aunque tambin las hay derivadas de aminocidos e incluso de cidos grasos. Las hormonas proteicas no penetran en el medio interno de las clulas del rgano blanco, debido a su elevado peso molecular. Las hormonas proteicas al unirse a su receptor de membrana inducen la activacin de una enzima, la adenilatociclasa asociada al receptor y situada en la cara interna de la membrana.
a Membrana plasmtica AMP cclico Hormona proteica

La adenilatociclasa cataliza la transformacin del ATP en AMP cclico (AMPc) que acta como segundo mensajero, el cual activa a su vez a una protena enzimtica, la quinasa, que inducir la respuesta de la clula del rgano blanco. Las hormonas esteroideas, debido a su bajo peso molecular y su liposolubilidad, atraviesan la membrana plasmtica y se difunden en el citoplasma, donde se unen a sus receptores especficos, que las introducirn en el ncleo; una vez en el nucleoplasma pueden desinhibir genes que, al poder ser transcritos, originan molculas de ARNm que inducirn la sntesis de protenas al ser traducidos en el citoplasma. Las hormonas realizan tres funciones: 1) Estimular la sntesis de determinadas sustancias. 2) Regular el metabolismo celular. 3) Estimular el crecimiento y la diferenciacin celular. En los animales existe una estrecha relacin entre el sistema nervioso y el sistema hormonal. Existe una secrecin endocrina realizada por glndulas endocrinas que vierten las hormonas propiamente dichas a la sangre, y que afecta al sistema nervioso; y una neurosecrecin realizada por las neuronas del hipotlamo que producen neurohormonas que van a parar a la sangre y que mediante la hipfisis estimulan la produccin de hormonas en las dems glndulas endocrinas.
Citoplasma

Quinasa inactiva Quinasa activa Efectos celulares: aumento de la permeabilidad de la membrana

Receptor

ATP Adenilciclasa Ncleo

incremento de la sntesis proteica sntesis de otras hormonas activacin de enzimas

b Membrana plasmtica Ncleo

Activacin de genes Hormona esteroidea ADN Receptor ARNm Ribosoma Sntesis proteica Efectos celulares: activacin de reacciones bioqumicas produccin de energa alteracin del transporte a travs de la membrana

16 a) Recepcin de una hormona proteica. b) Recepcin de una hormona esteroidea.

111

ocumento 3

Glndulas endocrinas y hormonas

Hipotlamo
Factores liberadores. Activan o inhiben la secrecin de hormonas adenohipofisarias. Oxitocina (pptido). Controla la contraccin del tero durante el parto. Vasopresina (pptido). Favorece la absorcin de agua en el rin.

Glndulas suprarrenales
Glucocorticoides (esteroide). Controla el metabolismo de los glcidos. Mineralocorticoides (esteroide). Controla el metabolismo de las sales minerales. Adrenalina y noradrenalina (derivados de aminocidos). Preparan el organismo ante estados de miedo, ansiedad o emocin.

Hipfisis (adenohipfisis)
Hormona estimulante del tiroides (TSH) (glucoprotena). Activa la secrecin de hormonas tiroideas. Hormona estimulante del folculo (FSH) (glucoprotena). Activa la maduracin de los folculos ovricos y la produccin de espermatozoides. Hormona luteinizante (LH) (glucoprotena). Estimula la formacin del cuerpo lteo y la secrecin de testosterona. Hormona adenocorticotrpica (ACTH) (polipptido). Activa la secrecin de hormonas suprarrenales. Hormona del crecimiento (STH) (glucoprotena). Estimula el crecimiento. Prolactina (polipptido). Estimula la secrecin lctea.

Pncreas
Insulina (polipptido). Reduce el nivel de glucosa en sangre. Glucagn (polipptido). Aumenta el nivel de glucosa en sangre.

Ovario
Estrgenos (esteroides). Determinan los caracteres sexuales femeninos. Progesterona (esteroide). Prepara al organismo para el embarazo. Relaxina. Relaja la snfisis pubiana durante el parto.

Hipfisis intermedia

Testculo

Hormona estimulante de los melanocitos (MSH) (polipptido). Andrgenos (esteroide). Determinan los caracteres Favorece la sntesis de melanina. sexuales masculinos.

Tiroides

Mucosa gstrica

Tiroxina (T4) y triyodotironina (T3) (derivados de aminocidos). Gastrina. Activa la secrecin gstrica. Activan el metabolismo celular. Calcitonina (polipptido). Impide la prdida de calcio de los huesos.

Mucosa intestinal
Enterogastrona. Reduce la secrecin gstrica. Pancreocinina. Activa la secrecin pancretica. Secretina. Activa la secrecin pancretica. Colecistoquinina. Favorece la liberacin de bilis al intestino. Enterocrinina. Activa la secrecin intestinal.

Paratiroides
Paratohormona (polipptido). Favorece la prdida de calcio de los huesos.

Placenta
Gonadotropina corinica. Mantiene el embarazo. Lactgeno placentario. Estimula la secrecin lctea.

CUESTIONARIO 7

Coenzimas, vitaminas y hormonas

1. 2. 3. 4. 5. Por qu son necesarios muchos tipos de enzimas y son suficientes unos pocos tipos de coenzimas? Por qu los tratamientos largos con antibiticos pueden producir ciertas hipovitaminosis? Cules seran stas? Qu vitaminas puede producir el cuerpo humano aunque sea en cantidades insuficientes? Qu vitamina sera ms eficaz para tratar una faringitis? Relaciona los conceptos de las tres columnas: 1. Protenas o ARN a. Vitaminas X. Actan donde se producen 2. Sustancias diversas b. Hormonas Y. Actan lejos de donde se producen 3. Todos lpidos c. Enzimas Z. Se obtienen de la dieta 6. Qu hormonas estn relacionadas con el metabolismo de los glcidos? 7. Qu glndulas endocrinas segregan adems enzimas?

112

LABORATORIO

Reconocimiento de la catalasa
La catalasa es una enzima presente en las clulas de los tejidos animales y vegetales. El objetivo de esta prctica es demostrar su existencia y estudiar su actividad. En la ltima etapa de la cadena respiratoria la enzima citocromo oxidasa cede cuatro electrones (4 e) a una molcula de oxgeno (O2), que se une a cuatro protones (4 H) formndose dos molculas de agua (4 e O2 + 4 H 2 H2O), y desprendiendo energa que se invierte en formar ATP. Sin embargo, inevitablemente siempre hay alguna molcula de oxgeno que slo recibe un electrn y se forma un radical superxido (e O2 O 2 ) que es muy txico. Por ello la enzima superxido dismutasa lo transforma en H2O2 (2 O 2 2 H H2O2 O2). Dado que el perxido de hidrgeno (H2O2) tambin es muy txico, otra enzima denominada catalasa lo descompone en agua y oxgeno. H2O2 + H2O2 2H2O + O2
catalasa

3. Por qu aumenta la temperatura con el tiempo? 4. Por qu deja de aumentar a partir de un cierto tiempo? 5. Por qu ha sido recomendable repetir la ltima experiencia? 6. Qu conclusiones se pueden deducir de la grfica? 7. Por qu el agua oxigenada es un buen desinfectante?

Reconocimiento de la vitamina C
La vitamina C se caracteriza por su capacidad de oxidarse, pasando a cido deshidroascrbico, mediante la prdida de dos hidrgenos que son captados por sustancias oxidantes, como el diclorofenol-indofenol. Este colorante posee color rojo en medio cido y azul en medio bsico.

Material necesario:
Zumo natural de limn y de naranja. Disolucin de 0,2 g de 2,6 diclorofenol-indofenol en 100 ml de agua (debe prepararse con 24 horas de antelacin). Tubos de ensayo. Gradilla. Cuentagotas. Mechero.

La presencia de catalasa se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante al echarla sobre la herida, dado que muchas de las bacterias patgenas son anaerbicas, y mueren en ambientes ricos en oxgeno.

Material necesario:
Tejidos animales y vegetales (hgado, carne, patata, tomate, etc.). Perxido de hidrgeno al 3 % (agua oxigenada comercial). Bistur o cuchilla. Dos tubos de ensayo por cada tejido. Gradilla. Mechero. Un tapn de corcho agujereado. Termmetro (0 a 100 oC).

Procedimiento:
1. Colocar 2 ml de los zumos naturales de limn o naranja en los tubos de ensayo y aadir una gota de diclorofenol-indofenol. 2. Observar el proceso de cambio de color rojo (medio cido) a transparente al captar los hidrgenos del cido ascrbico el diclorofenol-indofenol, y transformarse en cido deshidroascrbico. 3. Repetir los dos pasos anteriores, pero, previamente, hervir el zumo durante 10 minutos. 4. Comprobar la presencia o no de vitamina C en refrescos y zumos de frutas comerciales.

Procedimiento:
1. Colocar en un tubo de ensayo aproximadamente el mismo peso de cada uno de los tejidos, previamente troceados. Aadir 5 ml de perxido de hidrgeno y anotar lo que sucede. 2. Repetir el mismo proceso utilizando tejidos previamente hervidos en agua durante 10 minutos. Explicar los resultados obtenidos. 3. Poner en un tubo de ensayo 10 ml de perxido de hidrgeno y anotar la temperatura inicial. Aadir un poco de hgado triturado. Poner el tapn que lleva en su agujero el termmetro. Dejarlo medio abierto para que puedan escapar los gases. Anotar las variaciones de temperatura cada 30 segundos, durante unos 5 minutos. 4. Repetir el punto anterior tres veces y sacar la media de las tres temperaturas obtenidas para cada tiempo. Hacer una grfica y explicar los resultados.

Cuestiones:
1. Puede excluirse la presencia de vitamina C en los zumos naturales? 2. Puede excluirse la presencia de vitamina C en alguno de los refrescos comerciales analizados? 3. La vitamina C es un cido o una base? Cmo lo comprobaras? 4. La vitamina C se ha comportado como un oxidante o como un reductor? Por qu? 5. Pueden ser una buena fuente de vitamina C los alimentos cocidos? 6. Por qu el escorbuto era una enfermedad frecuente en los marineros?

Cuestiones:
1. Contienen catalasa todos los tejidos frescos? Por qu? 2. Qu ha pasado en los tejidos cocidos? Por qu?

113

ESTRUCTURA Y

114

FISIOLOGA CELULAR
N D I C E

Tema 7.
La clula: unidad de estructura y funcin

Tema 8.
Las envolturas celulares, el citoplasma y el centrosoma

Tema 9.
Los orgnulos celulares

Tema 10.
El ncleo y los cromosomas

Tema 11.
La reproduccin celular

Tema 12.
El metabolismo celular. El catabolismo

Tema 13.
Anabolismo auttrofo

Tema 14.
Anabolismo hetertrofo

Clula de una glndula paratiroidea humana. Imagen de microscopa electrnica (a 9.200 aumentos).

115

7
N D I C E
INFORMACIN 1 El descubrimiento de la clula y la teora celular. 2 Concepto de clula. 3 La forma de las clulas. 4 Unidades de medida en citologa. 5 El tamao de las clulas. 6 Relacin entre tamao, forma y estado de la clula. 7 Longevidad celular. 8 Estructura de las clulas. 9 Clulas animales y clulas vegetales. 10 Mtodos de estudio de las clulas.
La microscopa ptica. La microscopa electrnica.

La clula: unidad de estructura y funcin

Desde los microscopios ms sencillos hasta la enorme resolucin del microscopio electrnico, la evolucin de la tecnologa microscpica ha contribuido muy decisivamente al avance de la Biologa.

11 La resolucin de los microscopios. LABORATORIO

Realizacin de preparaciones microscpicas.

Dado que la mayora de las clulas son demasiado pequeas para ser observadas a simple vista, su descubrimiento estuvo ligado al invento del microscopio, nombre que deriva de las palabras griegas mikros (pequeo) y skopein (ver, examinar). No se sabe bien quin fue su inventor, aunque muchos autores consideran que fue Galileo, alrededor de 1610, despus de haber inventado el telescopio, tambin mediante la combinacin de dos lentes.

116

1 El descubrimiento de la clula y la teora celular

Los primeros conocimientos sobre la clula datan del ao 1665, fecha en que Robert Hooke public los resultados de sus observaciones sobre los tejidos vegetales, realizadas con un microscopio construido por l mismo que llegaba a unos 50 aumentos. En su obra Micrographia describi con detalle que el tejido suberificado (corcho) y los otros tejidos observados estaban constituidos por una serie de celdillas, similares a las de un panal de abejas, y estableci para ellas el trmino de clulas (del latn cellulae celdillas, cuartitos). Las celdillas del corcho slo estn constituidas por las paredes de celulosa, de las clulas vegetales muertas, y por un interior lleno de aire; sin embargo, en los dems tejidos s pudo observar clulas vivas. Pese a ello, ni l ni los microscopistas del siglo siguiente dieron importancia a la sustancia encerrada en su interior (fig. 1). Un contemporneo de R. Hooke, el holands Van Leeuwenhoek, un rico comerciante tratante de hilos y naturalista aficionado, se dedic a perfeccionar las lentes de aumento y construy microscopios simples, que llegaban a tener hasta 200 aumentos, con los que, al observar el agua de las charcas y los fluidos internos de los animales, realiz interesantes descubrimientos. As, pudo ver por vez primera protozoos y rotferos, a los que denomin animlculos, levaduras, espermatozoides, glbulos rojos de la sangre e, incluso, bacterias. Con ello, obtuvo una gran popularidad entre los cientficos de su poca (fig. 2).
Bacilo Bacilo Bacilo Cocos formando una colonia Bacilos Cocos

2 Bacterias observadas por Leeuwenhoek en 1684.

Durante el siglo XVIII apenas hubo avances en citologa; ello se debi a que las aberraciones cromticas y esfricas de las lentes no permitan mejorar la calidad de observacin de los primeros microscopios. Debido a ello y a que las clulas de los tejidos animales generalmente carecen de paredes celulares gruesas, no se pudo descubrir que tambin stos estn constituidos por clulas. Durante el siglo XIX, gracias a la correccin de las aberraciones pticas y a la mejora de las tcnicas de preparacin microscpica (fijacin, inclusin y tincin), se pudo estudiar las clulas con ms detalle y observar diversas estructuras de su interior. As, en 1831, Brown descubri en las clulas vegetales un corpsculo al que denomin ncleo y al que atribuy importantes funciones, aunque desconoca cules podran ser stas. En 1839, el zologo alemn Schwann estableci el paralelismo entre los tejidos animales y los vegetales al observar que el tejido cartilaginoso estaba constituido por clulas separadas claramente entre s por una abundante materia extracelular y en cuyo interior tambin haba un ncleo. Schwann se dio cuenta de que en la clula no slo es importante la estructura sino tambin su funcionamiento, al que denomin metabolismo. A partir de los postulados del botnico alemn Schleiden (1838) y del zologo Schwann (1839) antes citado, se inici el desarrollo de la llamada teora celular, al enunciar de forma clara sus dos primeros principios:

1 Clulas del corcho vistas al microscopio. Debajo, hojas de la planta sensitiva (sensible al contacto). De Robert Hooke, Micrographia, 1665.

1. Todos los seres vivos estn constituidos por una o ms clulas, o dicho de otro modo: la clula es la unidad morfolgica de todos los seres vivos.
117

2. La clula es capaz de realizar todos los procesos metablicos necesarios para permanecer con vida, es decir, la clula es la unidad fisiolgica de los organismos. En 1855, el mdico alemn Virchow contribuy a mejorar la teora celular, aportando una idea correcta sobre el origen de las clulas, punto en el que Schwann y Schleiden estaban equivocados, al enunciar un tercer principio: 3. Las clulas slo pueden aparecer a partir de otras ya existentes, idea que en latn se expres con la famosa frase: Omnis cellula ex cellula (toda clula proviene de otra clula). En 1839, el fisilogo alemn Purkinje describi el medio interno de la clula vegetal, al que denomin protoplasma, como una sustancia mucilaginosa en la que se podan observar algunos movimientos. Desde ese momento ya se empez a dar menos importancia a la membrana celular y ms a su interior. Autores como Dujardin, Schultze y Von Mohl tambin se centraron en el estudio del protoplasma, y el concepto de clula evolucion a una estructura constituida por un acmulo de protoplasma, limitado por una membrana, en cuyo interior se encuentra un ncleo. Pronto se distinguieron en el protoplasma dos partes, el citoplasma o parte que rodea al ncleo, y el carioplasma o parte contenida en el ncleo. Remak descubri la divisin directa o amitosis, en la que el ncleo se divide por estrangulacin. En 1879, Strasburger descubri en las clulas vegetales la divisin indirecta, a la que denomin cariocinesis, en la que el ncleo experimenta varias transformaciones sucesivas. En 1880, Flemming, al descubrir dicha divisin en las clulas animales, la denomin mitosis. En 1890, Waldeyer observ que durante este tipo de divisin se forman unos filamentos nucleares, a los que denomin cromosomas, que se reparten equitativamente entre las dos clulas hijas resultantes de la divisin. En 1899, Ramn y Cajal, autor de la teora de la neurona, ampli la teora celular al tejido nervioso al descubrir que ste tambin est constituido por clulas individuales y no por simples fibras soldadas. En 1902, Sutton y Boveri, autores de la teora cromosmica de la herencia, propusieron que la informacin biolgica hereditaria reside en los cromosomas de la clula. A partir de ello y de los actuales conocimientos sobre gentica se puede aadir un cuarto principio a la teora celular: 4. La clula contiene toda la informacin sobre la sntesis de su estructura y el control de su funcionamiento, y es capaz de transmitirla a sus descendientes, es decir, la clula es la unidad gentica autnoma de los seres vivos. Posteriormente se rectific uno de los aspectos equivocados de la primitiva teora celular, concreta118

mente la idea propuesta por Schleiden, que defenda que la vida de los organismos pluricelulares no era ms que la suma de las funciones de sus clulas. En realidad, los organismos pluricelulares no slo tienen varios tipos diferentes de clulas que realizan funciones distintas, sino tambin mantienen una coordinacin de las mismas para que se den de forma integrada y se asegure as la supervivencia del individuo. El cncer, que es una divisin incesante de ciertas clulas, es un buen ejemplo de la necesidad de esa coordinacin. En resumen, en un nivel, en nuestro caso el pluricelular, hay propiedades que no se dan en el nivel anterior, tal y como propuso J. Needham en la teora sobre los niveles de organizacin de la materia. En resumen, la teora celular enuncia que la clula es la unidad morfolgica, fisiolgica y gentica de todos los seres vivos. La microscopa ptica permiti descubrir, adems, el ster, las mitocondrias, los cloroplastos, el aparato de Golgi, el retculo endoplasmtico y las vacuolas. A partir de 1892, en que se public la primera obra en que se recopilaban todos los conceptos conocidos sobre la clula, y en la que se relacionaba cada estructura con su funcin, es decir, la primera obra de sntesis, se puede considerar que nace la citologa (del griego kytos clula y logos estudio) como ciencia.

3 Glbulos rojos observados al microscopio ptico y al electrnico.

Posteriormente se invent el microscopio de luz ultravioleta, que precisa costosas lentes de cuarzo, con el que se logran detalles ms precisos, dada su menor longitud de onda. En 1930 se invent el microscopio de contraste de fases, que mejora al microscopio ptico no en cuanto a nmero de aumentos sino en que no precisa la tincin de las preparaciones microscpicas para observar los pequeos detalles. En 1932, el alemn Ruska invent el microscopio electrnico, aunque no qued perfeccionado para su uso en microbiologa hasta 1952, que supuso una autntica revolucin en citologa. Desde esa poca no se ha vuelto a producir un nuevo invento comparable.

La microscopa electrnica ha permitido descubrir los ribosomas y los lisosomas (aunque ya se haba intuido su existencia mediante el microscopio ptico), los peroxisomas, las vesculas sinpticas, la pinocitosis, y los microtbulos, tonofilamentos y microfila-

mentos que constituyen el citoesqueleto, as como la estructura de todos los orgnulos celulares ya descubiertos con la microscopa ptica, por ejemplo, la estructura de la membrana plasmtica, constituida por una doble capa lipdica.

Concepto de clula

Se dice que, dada su estrecha dependencia de las clulas, ms que seres vivos deberan ser considerados como materia viva. Es decir, los virus estn en la frontera entre los seres vivos y la materia inerte. Los virus no son clulas, ya que no tienen estructura celular, es decir, no tienen una membrana plasmtica que rodea a un citoplasma en cuyo seno hay un material gentico. Su estructura es mucho ms sencilla. No pertenecen al llamado nivel celular, uno de los niveles de organizacin de la materia, sino al nivel macromolecular. Se dice que son una forma de vida acelular.

La clula es una estructura constituida por tres elementos bsicos: membrana plasmtica, citoplasma y material gentico (ADN), que tiene la capacidad de realizar las tres funciones vitales: nutricin, relacin y reproduccin. La clula es la estructura ms simple conocida con capacidad para realizar las tres funciones vitales por s misma, es decir, sin necesidad de otros seres vivos. De las tres funciones vitales que realiza un ser vivo, la ms importante es la reproduccin. Ella es la que caracteriza lo que es un ser vivo. As ste podra definirse como un ser capaz de engendrar a otros seres con esa misma capacidad. Gracias a ello, la vida, pese a la aparente delicadeza de los organismos si se comparan con las rocas, no slo ha perdurado a lo largo de millones de aos, sino que cada vez hay ms seres vivos, de ms especies, y en ms lugares, es decir, se ha extendido en el espacio. Los virus, tambin considerados por muchos autores como seres vivos ya que son capaces de reproducirse, precisan invadir una clula viva para conseguirlo. Solos no podran sobrevivir mucho tiempo, y por tanto no son la forma ms simple de vida autnoma.

CUESTIONARIO 1
1. Qu se saba de la clula a finales del siglo XVII? 2. Pon un ejemplo que evidencie que las propiedades del nivel pluricelular no son la simple suma de las propiedades de sus clulas. 3. Qu estructuras celulares eran desconocidas hasta que se invent el microscopio electrnico? 4. Qu quiere decir que la clula es la unidad gentica autnoma de los seres vivos? 5. Por qu, si los virus son materia viva, no son ni la forma de vida ms pequea posible ni la unidad morfolgica de los seres vivos?

La forma de las clulas

Las clulas presentan una gran variabilidad de formas e, incluso, algunas no presentan una forma fija. Las clulas con forma definida pueden ser redondeadas, elpticas, fusiformes, estrelladas, prismticas, aplanadas, etc., es decir, no hay un prototipo de forma celular. El hecho de que normalmente se representen como una circunferencia, o una elipse, con un punto que representa el ncleo, es una mera simplificacin de la realidad. Muchas clulas libres, como, por ejemplo, las amebas y los leucocitos, que carecen de una membrana de secrecin rgida y que presentan una membrana

plasmtica fcilmente deformable, estn cambiando constantemente de forma al emitir prolongaciones citoplasmticas (pseudpodos), para desplazarse y para fagocitar partculas. Otras clulas libres similares, pero sin la capacidad de emitir pseudpodos, como muchos ciliados, eritrocitos y linfocitos, presentan una forma globosa. Ello se debe a la cohesin entre las molculas de agua. La misma causa que explica que las gotas de lquidos sean esfricas y que, si la cohesin es muy elevada, como sucede en el mercurio, conserven esta forma incluso sobre un slido. Las clulas que se encuentran unidas a otras formando tejidos, si carecen de una pared celular rgida, tienen una forma que depende, en gran parte, de las tensiones que en ella generan las uniones con las clulas contiguas. Por ejemplo, en el tejido epitelial
119

animal, que sirve para revestir tanto la superficie externa como los conductos y cavidades internas, puede observarse que las clulas profundas tienen forma prismtica, mientras que las superficiales, que no experimentan tensiones por otras superiores, son aplanadas. Adems, si se separan las clulas de un tejido, mediante la rotura de las conexiones que las unen, y se colocan en un medio de cultivo, las clulas tienden a adquirir la forma esfrica. En todas las clulas carentes de membrana rgida, su forma tambin viene muy influida por los fenmenos de smosis. Las clulas provistas de pared de secrecin rgida, como, por ejemplo, las bacterias que poseen una pared de murena, la mayora de las clulas vegetales que poseen una pared celular de celulosa y los osteocitos del tejido seo, presentan lgicamente una forma muy estable. Aunque tambin estn sometidas a fenmenos osmticos, su forma no vara.
Clulas musculares lisas

Finalmente, queda resaltar que la forma de las clulas est estrechamente relacionada con la funcin que desempean. As, las clulas musculares suelen ser alargadas y fusiformes, adaptadas, pues, para poderse contraer y relajar; las clulas del tejido nervioso son irregulares y poseen numerosas prolongaciones, lo que est relacionado con la capacidad de captar estmulos y de transmitirlos; las clulas del epitelio intestinal presentan la membrana plasmtica libre con innumerables pliegues para aumentar su superficie de absorcin; etc. (fig. 4). En resumen, las formas de las clulas estn determinadas bsicamente por su funcin y pueden variar ms o menos en relacin con la ausencia de pared celular rgida, tensiones de uniones a clulas contiguas, viscosidad del citosol, fenmenos osmticos y tipo de citoesqueleto interno.
4 Algunos tipos de clulas animales y vegetales.
Cambios en una clula del mesnquima que pasa primero a fibroblasto y luego a fibrocito

Axn

Axn Clula muscular estriada Neurona

Clula de Schwann

Fibroblastos Lpido

Eritrocitos

Adipocito

Fibrocitos Cilios

vulo y espermatozoide dibujados a escala

Clulas pigmentarias

Ncleo vulo Clulas ciliadas y clulas secretoras de mucosidades del epitelio traqueal Espermatozoide Bastn de la retina Microvilli Contacto Lmina basal Ameba Osteoblastos Clulas absorbentes del epitelio intestinal Matriz extracelular Sales de calcio

Bacterias Dinoflagelados Algas diatomeas

120

4 Unidades de medida en citologa

Aunque algunas clulas, como las yemas de los huevos de las aves, pueden ser observadas a simple vista, en general son tan pequeas que no se ven si no es con la ayuda de un microscopio. Dado su nfimo tamao, la unidad de medida utilizada para indicar sus dimensiones no es el milmetro, ya que se tendran que utilizar cifras con muchos decimales y, por tanto, incmodas de manejar, sino la micra (), que es la milsima parte del milmetro, tambin denominada micrmetro (m).
Ondas de radio 1 mm 1-2 mm

1 mm 1.000 1 mm 1.000 m Tambin se utilizan unidades menores para hacer referencia a detalles de los orgnulos celulares, como es el nanmetro (nm) que equivale a 1m/109, es decir, es la milmillonsima parte de un metro, o sea, la milsima parte de una micra, por lo que tambin se suele denominar milimicra o milimicrn (m). 1 1.000 nm 1 1.000 m Para expresar las distancias entre las molculas que forman las macromolculas de los orgnulos celulares se utiliza una unidad todava ms pequea, el ngstrom (), que es diez veces menor que un nanmetro, es decir, es la diezmilsima parte de una micra (fig. 5). 1 nm 10 1 10.000 En citologa, adems de las unidades de longitud, se utilizan unidades de masa; las ms utilizadas para los orgnulos son el picogramo (1 pg 1012 gramos), y para las macromolculas el dalton (1 dalton 1,66 1024 gramos). Ello se debe a que para expresar la masa de una macromolcula se indica su peso molecular, es decir, el nmero de veces que la molcula tiene ms masa que el tomo de hidrgeno. Como en 1 gramo hay 6,023 1023 tomos de hidrgeno y, por definicin, la masa de un tomo de hidrgeno se denomina dalton, resulta que 1 gramo son 6,023 1023 daltons. Por ejemplo, el peso molecular del agua es 18 daltons, el de la glucosa 180 daltons y el de la hemoglobina 64.500 daltons. Para macromolculas y pequeas estructuras, tambin se utiliza como medida de tamao el svedberg (S), que es la unidad de la velocidad de sedimentacin en centrfuga. Por ejemplo, el ARN nucleolar alcanza los 45 S, los ribosomas de las clulas procariotas 70 S, etc.
5 Las medidas y los instrumentos de observacin de estructuras biolgicas microscpicas.

Lmite del ojo humano

100 m

100-150

Clula eucariota de tamao medio Infrarrojo

20-30

10 m Hemates (clulas eucariotas pequeas)

Bacterias Mitocondrias 1 m Visible

0,5-1

Lmite del Ultravioleta microscopio ptico

PPLO 100 nm (1.000 )

Virus NH CO CH R

Rayos y X

10 nm (100 ) Protenas

R HC HN

Lmite del microscopio electrnico

1 nm (10 )

Aminocidos

0,1 nm (1 )

tomos

H H3CC COOH C NH2

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5 El tamao de las clulas

El tamao de las clulas es extremadamente variable. As, las bacterias suelen medir entre 1 y 2 de longitud y la mayora de las clulas humanas entre 5 y 20 ; por ejemplo, los eritrocitos miden unas 7 de dimetro, las clulas del hgado o hepatocitos 20 de dimetro, etc. Clulas por encima de estos valores son tambin frecuentes, en particular aquellas que poseen funciones especiales que precisan un tamao elevado, como los espermatozoides (por ejemplo, los espermatozoides humanos miden 53 de longitud), los oocitos (por ejemplo, el oocito humano mide unas 150 micras), los granos de polen de algunas plantas que alcanzan tamaos de 200 a 300 micras, algunas especies de paramecios que pueden llegar a medir ms de 500 micras (por lo que ya son visibles a simple vista), los oocitos de las aves (por ejemplo, la yema del huevo de la codorniz, que es una sola clula cuyo ncleo es un pequeo punto blanco que hay en su superficie, mide 1 cm, la de la gallina 2,5 cm y la del avestruz 7 cm de dimetro) y, por ltimo, las clulas de mayor longitud son las neuronas que, aunque su cuerpo slo mide varias decenas de micras, sus prolongaciones axonales pueden alcanzar, en los grandes cetceos, varios metros de longitud (fig. 6).
Huevo humano; ameba

Huevo de avestruz: 170 135 mm

Huevo de gallina: 60 45 mm

Huevo de colibr: 13 8 mm Huevo humano: 0,1 mm 100 100 micras ()

Huevo de erizo de mar Clula heptica Eritrocito

70 micras () 20 micras ()

7 micras () 2,4 0,5 micras () Bacilo tifoideo 0,5 0,2 micras () Bacilo de la influenza 1000 500 200 milimicras (m) Bacilo de la influenza Neumococo Bacterifago Molcula de hemoglobina 100 200 milimicras (m) 80 milimicras (m) 7 milimicras (m)

6 Tamao comparativo de algunas clulas.

6 Relacin entre tamao, forma y estado de la clula

Los factores que limitan el tamao de las clulas son, en primer lugar, la capacidad de captacin de nutrientes del medio que las rodea y, en segundo lugar, la capacidad funcional del ncleo. Cuando una clula tridimensional, por ejemplo, esfrica, aumenta de tamao, su volumen aumenta proporcionalmente al cubo del radio (V 4/3r3), mientras que su superficie slo aumenta en funcin del cuadrado del radio (S 4r2), es decir, aumenta mucho ms su volumen que su superficie. Esto implica que la relacin superficie/volumen disminuye, lo cual supone un gran inconveniente para la supervivencia de la clula, ya que la entrada de todos los nutrientes, como agua, sales minerales, molculas orgnicas, oxgeno, etc., est en funcin de su superficie y, si sta resulta insuficiente para aportarlos a todos los orgnulos que contiene, la clula morir. Por este motivo, pocas clulas maduras son esfricas. La mayora son aplanadas, prismticas o irregulares, para mantener la relacin superficie/volumen aproximadamente constante.
122

Otro aspecto interesante es que el aumento de volumen de las clulas no va acompaado de un aumento del volumen del ncleo, ni del aumento de su dotacin cromosmica, por lo que, de darse, el ncleo acabara siendo incapaz de controlar las innumerables reacciones metablicas, todas ellas necesitadas de una enzima derivada de un gen, que se daran en su enorme citoplasma. As pues, dentro de una misma estirpe celular, una forma globosa y una relacin superficie/volumen grande, generalmente es caracterstica de clulas jvenes. Por ejemplo, en los oocitos, que son clulas globosas, cuanto ms grandes son, menor es la relacin superficie/volumen, por lo que ms prximos estarn a su madurez, fecundacin e inicio de su divisin, o a su degradacin. As mismo, dentro de una misma estirpe celular, cuanto menor sea la relacin volumen nuclear/volumen citoplasmtico, ms prxima estar la clula a su madurez, es decir, ms prxima estar a dividirse, si tiene capacidad para ello, o a morir, si no la tiene. Para esta apreciacin ayuda tambin observar el grado de empa-

quetamiento de la cromatina. Una cromatina extendida, que facilita la transcripcin del ADN, se relaciona con una clula en plena actividad metablica, mientras que una cromatina muy empaquetada, muchas veces es indicio de una pronta divisin celular o de
CUESTIONARIO 2
1. Cuntas veces es ms grande el volumen de una clula eucariota globosa de 20 de dimetro que una bacteria tipo coco de 2 de dimetro? 2. Cul es la relacin nucleoplasmtica (N/P Vn/(Vc Vn) en la clula anterior si el ncleo tiene 2 de dimetro? 3. Qu porcentaje en volumen ocupan los lisosomas de una clula del hgado si hay unos 200, su dimetro es 200 nm y el radio de la clula es 4 ?

muerte celular. Para evaluar la relacin volumen del ncleo/volumen del citoplasma y el grado de compactacin de la cromatina, son de gran ayuda los mtodos de tinciones dobles (con dos colorantes) o triples, que permiten diferenciarlos.

4. Cul es la relacin nucleoplasmtica si el ncleo ocupa el 8 % del volumen total y ste es de 4.000 m3? 5. Qu masa en picogramos tiene una macromolcula de peso molecular 500.000? 6. Cul es la longitud en ngstroms, en m y en nm de una estructura de 0,25 de largo?

Longevidad celular

La duracin de la vida de las clulas es muy variable. En muchos casos se carece de informacin. Las longevidades mejor conocidas son las de algunos tipos celulares del cuerpo humano. En l hay clulas que slo duran unas ocho horas y luego se dividen, como sucede con algunas clulas del epitelio intestinal y pulmonar, y clulas que duran toda la vida del individuo, como sucede con las neuronas, que han perdido su capacidad de reproduccin.

Los eritrocitos humanos perduran unos 100 das. Luego, dado que carecen de ncleo, mueren. La mdula sea roja de los huesos se encarga de irlos sustituyendo constantemente. Los hepatocitos viven unos 150 das. Durante la vida de una clula sus orgnulos se van renovando constantemente. A partir de las membranas del retculo endomembranoso se forman nuevas estructuras del mismo, mientras que las mitocondrias y los cloroplastos se dividen varias veces. Por ejemplo, las mitocondrias de los hepatocitos lo suelen hacer cada 10 das.

Estructura de las clulas

La estructura comn a todas las clulas es, como ya se ha comentado, la membrana plasmtica, el citoplasma y el material gentico o ADN. La membrana plasmtica est constituida bsicamente por una doble capa lipdica en la que hay, englobadas o adheridas a su superficie, ciertas protenas. Los lpidos hacen que la membrana se comporte como una barrera aislante entre el medio acuoso interno y el medio acuoso externo. Ello hace que las clulas aisladas se comporten como gotas de aceite suspendidas en agua. Las protenas, en cambio, son las que permiten la entrada y salida de sustancias. El citoplasma abarca el medio interno lquido o citosol y una serie de estructuras con forma propia denominadas orgnulos celulares, el llamado morfoplasma.

El material gentico est constituido por una o varias molculas filamentosas de ADN. stas pueden encontrarse dentro de una vescula formada por una doble membrana, denominada envoltura nuclear, formando el ncleo, o sin dicha envoltura, encontrndose entonces una sola fibra de ADN, ms o menos condensada, en una regin del citoplasma denominada nucleoide. Las clulas con ncleo se denominan clulas eucariotas y las clulas sin ncleo, es decir, con nucleoide, se denominan clulas procariotas. Las clulas procariotas son las bacterias y las cianobacterias, y las clulas eucariotas son el resto. As pues, tanto los animales como las plantas, hongos, algas y protozoos estn constituidos por clulas eucariotas. a) Las clulas eucariotas. Estas clulas presentan una membrana plasmtica muy parecida en todas ellas. Bsicamente, slo difieren entre s en el tipo de protenas asociadas a su cara externa, los denominados receptores de membrana, diferenciacin que est en relacin con
123

la funcin propia de cada tipo de clula. Interiormente, las clulas eucariotas son muy complejas. Utilizando mtodos de tincin y microscopa ptica, y sobre todo gracias a la microscopa electrnica, se han podido observar, en la matriz citoplasmtica, tres tipos de estructuras: el sistema endomembranoso, los orgnulos transductores de energa y las estructuras carentes de membrana (fig. 7 a). El sistema endomembranoso es el conjunto de estructuras membranosas intercomunicadas y de las vesculas aisladas derivadas de ellas, que pueden ocupar la casi totalidad del citoplasma. Cada tipo de estructuras membranosas desempea una funcin distinta. Se distingue el retculo endoplasmtico, que es la continuacin de las membranas de la envoltura nuclear, el aparato de Golgi, a su vez tambin relacionado con las membranas del retculo endoplasmtico, las vacuolas y los lisosomas. Los orgnulos transductores de energa son las mitocondrias y los cloroplastos. Son orgnulos que poseen una doble membrana. Su funcin es la produccin de energa, ya sea a partir de la oxidacin de la materia orgnica, como sucede en las mitocondrias, o a partir de la energa luminosa, como sucede en los cloroplastos. Las estructuras carentes de membrana que se encuentran en el citoplasma son los ribo-

somas, los centrolos, y los microtbulos y microfilamentos que forman el llamado endoesqueleto celular o citoesqueleto. El ncleo de las clulas eucariotas consta de una doble cubierta membranosa, la llamada envoltura nuclear, que presenta abundantes poros, por lo que slo separa parcialmente su medio interno, el nucleoplasma, del citoplasma. En el nucleoplasma se encuentra el material hereditario en forma de cromatina dispersa, y, en medio de ella, uno, dos o tres condensaciones materiales denominadas nuclolos. b) Las clulas procariotas. Estas clulas, al igual que las eucariotas, presentan membrana plasmtica, citoplasma y material gentico. La membrana plasmtica tiene una estructura similar a la de las eucariotas. Adems, disponen de una cubierta gruesa y rgida por fuera de la membrana plasmtica, que se denomina pared celular. Interiormente, las clulas procariotas son mucho ms sencillas: en general en su interior slo hay ribosomas y unas invaginaciones o pliegues interiores de la membrana plasmtica denominados mesosomas. En las clulas procariotas el material gentico est ms o menos condensado en una regin denominada nucleoide, en el que no se pueden distinguir nuclolos (fig. 7 b). En el cuadro I pueden verse las diferencias entre las clulas procariotas y las eucariotas.

7 a) Clula eucariota: epitelial secretora. b) Clula procariota: bacteria Gram positiva. a

Membrana plasmtica Ribosomas Vesculas pinocticas Microvellosidades Membrana basal Retculo endoplasmtico rugoso Vesculas Nuclolo Aparato de Golgi Poros nucleares Clorosoma Membrana plasmtica Pared bacteriana Inclusiones citoplasmticas Carboxisoma Grnulo de reserva Vacuola gaseosa Mesosoma Centrolos Desmosoma Ribosoma Citoplasma Plsmido Flagelos Uniones estrechas Ncleo Secrecin Grnulo de secrecin Microtbulos del ster Mitocondria Lisosoma Vacuolas

Nucleoide

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CLULAS PROCARIOTAS

CLULAS EUCARIOTAS

Miden entre 1 y 5 micras. Tienen pocas formas: esfricas (cocos), de bastn (bacilos), de coma ortogrfica (vibriones), o de espiral (espirilos). Siempre son unicelulares, aunque pueden formar colonias. Membrana de secrecin gruesa y constituida de murena. Algunas poseen adems una cpsula mucosa que favorece que las clulas hijas se mantengan unidas formando colonias. Los orgnulos membranosos son los mesosomas. Las cianobacterias presentan, adems, los tilacoides. Las membranas no poseen colesterol. Las estructuras no membranosas son los ribosomas, de 70 S. Algunas presentan vesculas de paredes proteicas (vesculas de gas, carboxisomas y clorosomas). No tienen ncleo. El ADN est condensado en una regin del citoplasma denominada nucleoide. No se distinguen nuclolos. El ADN es una sola molcula circular de doble hlice que aunque puede estar asociada a protenas, no forma nucleosomas. Este ADN equivale a un nico cromosoma. Adems presentan plsmidos, pequeos ADN circulares de doble hebra. El ARNm no presenta maduracin. La transcripcin y la traduccin se realizan en el mismo lugar. No hay mitosis. El citoplasma se divide por biparticin. La reproduccin es de tipo asexual. Puede haber fenmenos de parasexualidad (intercambio de material gentico). El catabolismo puede ser por fermentacin, por respiracin aerbica o por respiracin anaerbica. Se realiza en los mesosomas. La fotosntesis se da en algunas bacterias, es anoxignica y se realiza en los mesosomas. En las cianobacterias es oxignica y se da en los tilacoides. No realizan fagocitosis, ni pinocitosis, ni digestin intracelular, ni presentan corrientes citoplasmticas. Algunas bacterias obtienen la energa a partir de la oxidacin de compuestos inorgnicos (quimiosntesis).

Son ms grandes. Muchas miden entre 20 y 50 , la yema del huevo de gallina 2 cm, algunas neuronas ms de 1 metro, etc. Tienen formas muy variadas. Pueden constituir organismos unicelulares o pluricelulares. En stos hay clulas muy especializadas y, por ello, con formas muy diferentes. Las clulas vegetales tienen una pared gruesa de celulosa. Las clulas animales pueden presentar una membrana de secrecin, denominada matriz extracelular, o carecer de ella. Los orgnulos membranosos son: el retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, vacuolas, lisosomas, mitocondrias, cloroplastos (slo en algunas clulas) y peroxisomas. Las estructuras no membranosas son los ribosomas de 80 S, citoesqueleto y, en las animales, adems centrolos. S tienen ncleo y dentro de l uno o ms nuclolos. El ADN es lineal y de doble hlice y est asociado a histonas formando nucleosomas. Cada fibra de ADN al condensarse forma un cromosoma. Adems hay ADN circular de doble hebra en los cloroplastos y en las mitocondrias. El preARNm experimenta maduracin. La transcripcin se realiza en el ncleo y la traduccin en el citoplasma. El ncleo se divide por mitosis o por meiosis. El citoplasma se divide por biparticin, esporulacin, gemacin o pluriparticin. La meiosis, que genera gametos o meiosporas, permite la reproduccin sexual. El catabolismo siempre es por respiracin aerbica. Se realiza en las mitocondrias. Slo ocasionalmente puede haber fermentacin. La fotosntesis slo se da en algunas clulas vegetales, siempre es oxignica, y se realiza en los cloroplastos de las clulas vegetales. Presentan corrientes citoplasmticas y digestin intracelular de sustancias externas o internas. Muchos tipos de clulas animales presentan adems fagocitosis y pinocitosis. No realizan quimiosntesis.

CUADRO I. Diferencias entre clulas procariotas y clulas eucariotas.

9 Clulas animales y clulas vegetales

Las clulas eucariotas, pese a tener unas estructuras comunes a todas ellas, presentan dos tipos de organizacin general segn se encuentren constituyendo organismos animales o vegetales. Se puede, pues, hablar de clulas vegetales y de clulas animales. Ambos tipos poseen membrana plasmtica, citoplasma con sistema endomembranoso, mitocondrias, lisosomas, peroxisomas, vacuolas, citoesqueleto y ncleo con envoltura nuclear. Sin embargo, las diferencias acumuladas a lo largo de millones de aos de evolucin independiente han causado que las clulas de los vegetales posean estructuras que faltan en las animales, y viceversa. A continuacin se citan algunas de estas diferencias: a) En las clulas de los vegetales destaca la presencia de una pared de secrecin gruesa de celulosa, la existencia en general de una vacuola grande que desplaza el ncleo desde el centro a un lado, la presencia de plastos que almacenan el polisacrido almidn y que, si son estimulados por la luz, se enriquecen en clorofila y se convierten en cloroplastos fotosintticos (fig. 8 b).
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b) En las clulas de los animales, si hay membrana de secrecin, es de mucopolisacridos, la denominada matriz extracelular, las vacuolas son pequeas, el ncleo suele estar en el centro, hay un diplosoma formado por dos centrolos, puede presentar cilios, o flagelos o emitir pseudpodos, y el polisacrido con funcin de reserva energtica no es el almidn sino el glucgeno (fig. 8 a).
a
Cilio

En el cuadro II se indican las principales diferencias entre la clula animal tipo y la vegetal.

8 a) Clula animal imaginaria. b) Clula vegetal imaginaria. b

Microvellosidades

Vesculas de secrecin

Membrana plasmtica Retculo endoplasmtico rugoso

Raz del cilio Vescula pinoctica Centrolo Mitocondria

Desmosoma Complejo de Golgi Aparato de Golgi Retculo endoplasmtico liso Cloroplasto Ncleo

Cromatina Mitocondria

Membrana plasmtica

Retculo endoplasmtico rugoso Ncleo

Plasmodesmo Nuclolo Retculo endoplasmtico liso

Ribosomas

Nuclolo

Cloroplastos

Vacuola Membrana basal Cromatina Poro nuclear Pared celular

Microtbulos

10

Mtodos de estudio de las clulas

aire, inciden sobre la preparacin, constituida por el vidrio portaobjetos, la muestra, el medio englobante y el vidrio cubreobjetos, y luego atraviesa el aire hasta llegar a la lente frontal del objetivo del microscopio. ste recoge los rayos luminosos, que han sufrido mltiples refracciones, y al proyectarlos hacia el ocular, aumenta la imagen del objeto recibida y luego el ocular la vuelve a aumentar (fig. 10 a y c). Las muestras observadas deben ser muy finas, de slo unas pocas micras de grosor, para que los rayos luminosos puedan atravesarlas. Las muestras biolgi-

Las clulas se estudian mediante los microscopios y, bsicamente, se conocen dos tipos de microscopa, la microscopa ptica y la microscopa electrnica.

1. La microscopa ptica
El microscopio ptico es un sistema constituido por dos lentes de aumento denominadas ocular y objetivo, y que utiliza los fotones de la luz visible para hacer sus observaciones. Los rayos luminosos, que proceden de una fuente de iluminacin, atraviesan el
126

ESTRUCTURA DE LA CLULA EUCARIOTA

Animal

Vegetal

Membrana plasmtica Membranas Membrana de secrecin Pared celular celulsica Matriz extracelular Citosol ( Hialoplasma) Retculo endoplasmtico Orgnulos con membrana sencilla (sistema endomembranoso) Aparato de Golgi Vacuolas Lisosomas Peroxisomas/Glioxisomas Orgnulos con doble membrana (transductores de energa) Citoplasma Estructuras granulares Cloroplastos Mitocondrias Ribosomas Centrolos Estructuras microtubulares Estructuras carentes de membrana o no delimitadas totalmente por una membrana Cilios Flagelos Microtbulos Microfilamentos (actina-miosina) (Filamentos intermedios cl. nerv. y epid.) Grnulos de reserva de almidn Reservas de glucgeno Liso Rugoso

S No S/No S S S Grande Varias pequeas Muchos S/No No S S S En algunas En algunas S S Citoesqueleto S No S S central S S S

S S No S S S Pequeo Una grande Pocos S/S S/No S S No No Excepcionalmente S No

Estructuras delimitadas por una o dos membranas

Estructuras microfibrilares

No S No S lateral S S S

Inclusiones citoplasmticas Envoltura nuclear/Posicin del ncleo Ncleo Nucleoplasma Cromatina Nuclolo

CUADRO II. Diferencias entre clulas de los animales y de los vegetales.

cas vivas suelen ser incoloras y transparentes a la luz, por lo que la observacin de detalles es difcil. Para conseguirlo, muchas veces se requiere teir las muestras. Existen algunos tipos de microscopios, como los microscopios de contraste de fase o los de fondo oscuro, que permiten la observacin sin necesidad de tincin. Las clulas vivas se han de observar sin teir o teidas con algunos pocos colorantes que no las matan, los llamados colorantes vitales, por ejemplo, el azul de metileno. Estas preparaciones obviamente no son duraderas. Para obtener preparaciones permanentes

se ha de proceder a tcnicas de preparaciones microscpicas. Estas tcnicas son la fijacin, la inclusin, el corte y la coloracin.

I Fijacin
Consiste en tratar la muestra biolgica con unos lquidos llamados conservantes o fijadores que preservan la morfologa de las clulas, su organizacin interna y su composicin qumica, alterndolas lo menos posible despus de su muerte. Los fijadores ms utilizados son el alcohol etlico al 70 %, el formaldehdo, el glutaraldehdo, el lquido de Bouin y el Carnoy.
127

I Inclusin
Si los tejidos son rgidos, como sucede con las races, tallos y hojas bien desarrollados, los cortes se pueden efectuar directamente, pero para estructuras tiernas como meristemos, yemas y pequeas hojas, y para casi todos los tejidos animales, las muestras previamente deben ser incluidas en una sustancia que les proporcione una consistencia adecuada para evitar su deformacin durante el corte. A esto se le denomina tcnica de inclusin. El medio de inclusin ms utilizado en histologa es la parafina, una sustancia que se vierte fundida, a unos 60 C, sobre la muestra, penetra en ella y luego solidifica al enfriarse. Como la parafina es hidrfoba, antes de la inclusin se ha de proceder a la deshidratacin de la muestra, que consiste en pasar la muestra por una serie de disoluciones de alcohol cada vez ms ricas en alcohol, hasta llegar a lquidos apolares como el xilol, que es un buen disolvente de la parafina.

utilizados para cortar las muestras se denominan micrtomos. stos pueden efectuar cortes extremadamente finos, generalmente de entre 6 y 12 de grosor.

I Tincin
Despus de cortar la muestra, se depositan y fijan los cortes sobre portaobjetos y luego se procede a su tincin. Segn las estructuras que se quieran destacar, se utilizan unos colorantes u otros. Por ejemplo, si se quiere observar la cromatina del ncleo, constituida por el ADN y, por tanto, cida, se puede utilizar un colorante como la hematoxilina, que por ser de naturaleza bsica se unir fuertemente a la cromatina. Los colorantes ms conocidos son: el azul de metileno, el carmn, la eosina, la hematoxilina, la orcena, la safranina, el sudn y el verde de metilo. En ocasiones se utilizan varios colorantes sucesivos en el proceso de tincin, con lo que se aprovechan las ventajas de cada uno. Los mtodos de tinciones dobles o triples ms conocidos son: Hematoxilina-eosina en histologa animal. Van-Giesson (hematoxilina-picrofucsina) en histologa vegetal. Tincin Diff-Quick para frotis de sangre.

I Corte
Antes de su observacin con el microscopio, si las muestras biolgicas son de un grosor tal que no resultan transparentes al paso de la luz, deben ser cortadas en capas muy finas hasta conseguirlo. Los aparatos

9 Esquema del proceso a seguir para elaborar una preparacin microscpica de un tejido vegetal. a
Tallo

b
F

Micrtomo de mano

Mdula de saco o trozo de patata o de ponexpan, etc. Los cortes depositados sobre agua se pescan con una aguja

Sujecin del corte y decantacin del agua

Tincin

Escurrido del agua sobrante aadida para lavar el colorante

Secado de los bordes con papel de filtro

Colocacin del cubreobjetos

Centrado del cubreobjetos

128

 Giemsa (azur de metileno, azul de metileno y eosina) para frotis de sangre. May-Grnwald (azul de metileno-eosina) para frotis de sangre. Pappenheim (combinacin de Giemsa y MayGrnwald) para sangre. Papanicolau para reconocimiento de clulas cancerosas en frotis vaginal.

I Montaje
Despus de la tincin se debe efectuar el montaje definitivo de la muestra antes de pasar a su observacin. El montaje consiste en cubrir la muestra teida, colocada sobre el portaobjetos, con un medio de montaje viscoso y muy transparente, y luego colocar encima un cubreobjetos de vidrio que proteja la muestra. Preferentemente, los medios de montaje deben posteriormente consolidar y formar as una estructura compacta con el cubreobjetos. De esta manera se consiguen preparaciones microscpicas definitivas, es decir, que pueden ser observadas con el microscopio durante muchos aos. Los medios de montaje ms utilizados son, entre los no hidrosolubles y que, por tanto, precisan de deshidratacin previa, el blsamo de Canad, DePeX y Euparal, y entre los hidrosolubles la goma arbiga, la glicerina y la gelatina glicerinada (fig. 9).

penetracin de los electrones, se ha de hacer el vaco en el tubo del microscopio. Las lentes no son de vidrio sino bobinas electromagnticas, es decir, unas bobinas cilndricas que generan un campo magntico que condensan el haz de electrones que pasa por su eje central. Los electrones, al chocar con los tomos de la muestra biolgica, se dispersan. Luego, las bobinas electromagnticas condensan algunos de los haces y posteriormente al proyectarlos amplan su campo de dispersin, con lo que la imagen se agranda. Finalmente, la imagen se puede observar en una pantalla fluorescente. La capacidad de aumento del microscopio electrnico es de hasta un milln de aumentos, mil veces ms que la del microscopio ptico, con un poder de resolucin de 4 (fig. 10 b y c). La preparacin de las muestras para el microscopio electrnico es muy diferente de la utilizada para el ptico. En primer lugar, debido al escaso poder de penetracin de los electrones, que deben atravesar la muestra, los cortes deben ser extremadamente finos (150 a 500 ), lo que se consigue con los ultramicrtomos, cuya cuchilla es de vidrio o de diamante. El proceso de fijacin es diferente: hay una prefijacin con glutaraldehdo y luego una fijacin con sustancias como el tetrxido de osmio. La inclusin es en una resina plstica. No hay tincin de la muestra, puesto que la imagen que resulta de la difraccin de los electrones es siempre en positivo y negativo (blanco y negro). Los cortes se colocan sobre una rejilla de 3 mm de dimetro y se fijan a ella con una sustancia permeable a los electrones como el colodin. Finalmente se procede al contrastado mediante soluciones de sales de metales pesados para resaltar las estructuras. La introduccin de la rejilla se realiza a travs de una compuerta que evita la entrada de aire. Las estructuras celulares, que pueden ser visibles con el microscopio electrnico, pero no con el ptico, reciben el nombre de ultraestructuras.

2. La microscopa electrnica
El microscopio electrnico tiene unas bases fsicas muy diferentes del microscopio ptico. En lugar de luz visible utiliza un haz de electrones que salen de un filamento (ctodo), con una diferencia de potencial de unos 65.000 voltios. Dado el bajo poder de

10 a) Microscopio ptico. b) Microscopio electrnico. c) Comparacin del recorrido de la luz y de los electrones en los microscopios ptico y electrnico. a
Tubos pticos Ocular

b
Can de electrones (ctodo)

nodo Haz de electrones

c
Haz de luz

Lmpara

Tambor o portaobjetivos

Can de electrones (ctodo) Muestra

Haz de electrones Lente condensadora magntica Lente objetivo magntica

Brazo Tornillo macromtrico

Muestra

Lente condensadora

Objetivo Platina Diafragma Columna

Lente intermedia

Lente condensadora magntica Muestra

Lente objetivo

Lente intermedia

Imagen intermedia Imagen intermedia Ocular (lente de proyeccin)

Lente de proyeccin magntica Tornillo micromtrico Pie o base

Ocular

Lente de proyeccin magntica Imagen final sobre pantalla fluorescente o placa fotogrfica

Foco de luz

Imagen sobre pantalla fluorescente

Imagen final vista con el ojo o enfocada sobre una placa fotogrfica

129

11 La resolucin de los microscopios

El poder de resolucin de un instrumento ptico es la capacidad de distinguir dos puntos que se encuentran muy prximos. El ojo humano slo puede distinguir en ptica se dice resolver dos puntos separados por ms de 0,1 milmetro, es decir, separados por ms de 100 . Esto impide que podamos ver la mayora de las clulas (por ejemplo, una bacteria que slo suele medir unas 2 , un hemate que mide unas 7 , una clula epitelial que mide unas 12 , etc). Con el microscopio ptico se puede llegar a discriminar dos puntos distantes slo unas 0,2 , es decir, el microscopio ptico tiene un poder de resolucin de 0,2 . Esto es suficiente para ver clulas y muchos de sus orgnulos si previamente se colorean de forma que destaquen del resto, pero no para observar estructuras subcelulares como los ribosomas, que suelen medir entre 150 y 200 , o detalles de su estructura, por ejemplo, la doble capa lipdica que forma la membrana plasmtica, que presenta un grosor de slo 85 a 80 (fig. 11). El microscopio electrnico puede llegar a tener un poder de resolucin de unos 4 . Esto permite ver los detalles antes citados; sin embargo, resulta insuficiente para observar la disposicin en el espacio de las molculas que forman las macromolculas, como por ejemplo, los pares de nucletidos complementarios, cuya sucesin forma la doble hlice del ADN, que slo distan entre s 3,4 , o distinguir una vuelta en una estructura proteica en -hlice, que slo mide unos 5,4 . Para ello se utiliza la denominada difraccin de rayos X. Si se compara el poder de resolucin del ojo humano (100 ) con el del microscopio ptico (0,2 ) y con el del microscopio electrnico (4 ), se deduce que el microscopio ptico puede aumentar la resolucin del ojo unas 500 veces (100 /0,2 500), y que el microscopio electrnico puede aumentar la resolucin del microscopio ptico tambin unas 500 veces (2.000 /4 500). El nmero de aumentos es la relacin entre el tamao de la imagen y el tamao real del objeto. El nmero de aumentos de un microscopio ptico resulta del producto entre el nmero de aumentos del objetivo y el nmero de aumentos del ocular, dos nmeros que aparecen inscritos en dichas pticas. Un elevado nmero de aumentos no es suficiente si el poder de resolucin es bajo. Si se quiere ver lo que hay entre dos puntos, lo importante es que, al aumentar la imagen, los dos puntos se vean ms separados, no que se vean dos puntos ms grandes que se interceptan.
130

El poder de resolucin est directamente relacionado con la apertura numrica, que es proporcional al nmero de rayos de luz que concurren para formar la imagen. Cuantos ms rayos incidan, ms clara ser la imagen y mayor ser el poder de resolucin. El valor de la apertura numrica tambin est inscrito en los objetivos microscpicos. Debido a la longitud de onda de la luz visible, el microscopio ptico slo puede llegar, con un poder de resolucin aceptable, a unos 1.200 aumentos. Haciendo un smil se puede decir que es por la misma razn que con un palillo no se puede detectar la existencia de agujeros mucho ms pequeos que el dimetro de su punta. Si se quisiera conseguir se debera sustituir el palillo por una aguja ms fina. El microscopio electrnico, debido a que la longitud de onda del flujo de electrones es mucho ms pequea que el flujo de fotones de la luz visible, puede llegar al milln de aumentos. Se conocen como estructuras celulares las formas que son visibles al microscopio ptico, y como ultraestructuras, aquellas formas slo visibles mediante instrumentos con mayor poder de resolucin, el ms importante de los cuales es el microscopio electrnico, que corresponden a la arquitectura macromolecular, es decir, la ordenacin de las macromolculas en el espacio (cuadro III).
MICROSCOPA PTICA (inmersin)

Poder resolutivo: 2.000

5.000

MICROSCOPA ELECTRNICA

Poder resolutivo mximo: 3-4

0,04 (Zeiss)

11 Diferentes grados de detalle al observar las clulas con un microscopio ptico y con un microscopio electrnico.

Estructura

Mtodo de observacin

Tamaos para los que el mtodo es apropiado

Rama de la Biologa que lo estudia

CUESTIONARIO 3
1. Poseen cloroplastos todas las clulas vegetales? Razona la respuesta. 2. Qu diferencias hay entre bacterias no fotosintticas y los protozoos? 3. Se pueden dividir las clulas vegetales con gruesas paredes de secrecin? Qu clulas de los vegetales tendrn una pared celulsica muy fina o carecern de ella? 4. Qu instrumento utilizaras para hacer un corte de 200 , de 500 y de 7.000 m? 5. Qu colorantes utilizaras para observar protozoos vivos? 6. Qu pasara si no se deshidratara la muestra antes de su inclusin en parafina?

rganos Tejidos Clula eucariota Ultraestructuras Estructuras moleculares

Simple vista Microscopa ptica Microscopa ptica Microscopa electrnica Difraccin de rayos X

0,1 mm 100 Anatoma 100 a 10 10 a 0,2 0,2 a 10 10 Histologa Citologa Citologa Biologa molecular

CUADRO III. Resolucin de diferentes mtodos de observacin.

LABORATORIO

Realizacin de preparaciones microscpicas

PROTOCOLO PARA HISTOLOGA ANIMAL
A. Fijacin. Cortar un trozo cbico de un rgano (por ejemplo, de hgado, corazn, msculo, piel, etc.) de algn animal de mercado, de 1 cm o menos de lado e introducirlo en 100 cm3 del lquido fijador (Bouin, formol al 10 % u otro similar) durante 24 horas. B. Deshidratacin de la muestra. Despus de lavar bien la muestra para quitar restos del fijador, antes de incluirla en parafina se ha de deshidratar, ya que la parafina es hidrfoba. Para ello proceder como se indica: a) 6 horas en alcohol de 70o b) 6 horas en alcohol de 90o c) 6 horas en alcohol absoluto d) 4 horas en xilol e) 4 horas en una mezcla de xilol y parafina f) 4 horas en parafina en una estufa a 60 oC C. Inclusin en parafina. Se fabrica con papel una pequea cajita, se introduce la muestra y se aade parafina fundida a unos 60 oC de temperatura, para que vaya penetrando en los tejidos. Se deja as 4 horas en una estufa a esa misma temperatura. Posteriormente se deja enfriar la parafina para que consolide y se forme un bloque. D. Corte. Con la ayuda de un micrtomo de mesa (los de mano no van bien para bloques de parafina) se realizan varias series de cortes. stos se recogen sobre agua corriente templada a unos 30 oC, para conseguir que se extiendan (planchado). Luego se depositan sobre un portaobjetos untado ligeramente con glicerina de Mayer (glicerina y clara de huevo a partes iguales), y se dejan un par de horas en una estufa a 35 oC para conseguir su adhesin.

E. Hidratacin y tincin. Como los colorantes son generalmente acuosos, antes de la tincin se debe proceder a la hidratacin de los cortes parafinados. Luego se procede a la tincin. Para ello, mediante un cuentagotas, se cubren los cortes con los siguientes lquidos: a) 15 con xilol b) 15 con alcohol absoluto c) 15 con alcohol de 90o d) 15 con alcohol de 70o e) 15 con agua destilada f) 5 tincin con hematoxilina g) 30 con agua corriente del grifo para conseguir el virado del color h) 2 con agua destilada i) 5 con eosina acuosa al 1 % F. Deshidratacin y montaje. Si el medio de montaje definitivo es hidrfobo como es el DePeX o el blsamo de Canad, se ha de deshidratar previamente. Se procede como sigue: a) 2 con alcohol de 70o b) 5 con alcohol de 90o c) 5 con alcohol absoluto d) 15 con esencia (creosota, eucalipto, etc.) e) 2 con xilol f) Blsamo de Canad y un cubreobjetos encima G. Resultados. El ncleo queda azul marino, el citoplasma rosado, las fibras musculares de color rosa y las fibras conjuntivas azules.

PROTOCOLO PARA HISTOLOGA VEGETAL

Si las estructuras son suficientemente rgidas, por ejemplo tallos, peciolos, raicillas, hojas de pino, etc., no es precisa la inclusin; por lo tanto, la marcha se debe iniciar en el paso f de la fase E. El ncleo y los cloroplastos quedan azulados, la lignina rosa y la celulosa azul fuerte.

131

Las envolturas celulares, el citoplasma y el centrosoma

Microvellosidades Filamentos de actina (crtex) Membrana

Vescula

N D I C E
INFORMACIN 1 La membrana plasmtica.
La membrana plasmtica. Transporte a travs de la membrana. Endocitosis.
Retculo liso Mitocondria Microtbulos

Filamentos intermedios

Modelo hipottico de la arquitectura general del citoesqueleto y membranas celulares en el cual se reflejan las relaciones entre sus componentes.

2 Las membranas de secrecin.

La matriz extracelular. La pared celular.

Las clulas presentan una membrana fina y deformable que separa el medio externo de su contenido o citoplasma. Esta membrana est formada por una doble capa lipdica con un elevado nmero de molculas de protena asociadas. Su funcin es reconocer su entorno y regular el paso de sustancias. En el interior celular aparece el citoplasma, en el que se pueden diferenciar un medio interno o citosol y una red de protenas filamentosas o citoesqueleto. En el citoesqueleto destacan los microfilamentos de actina que bajo la membrana celular edifican un crtex que mantiene la forma celular. Tambin aparecen los filamentos intermedios y los microtbulos, que organizan y distribuyen los orgnulos citoplasmticos.

3 El citoplasma.
El citosol. El citoesqueleto.

4 El centrosoma. ACTIVIDADES

132

La membrana plasmtica

Las envolturas celulares, capas que separan el medio interno del exterior, son: la membrana plasmtica, que poseen todas las clulas, tanto eucariotas como procariotas, y las membranas de secrecin, que pueden faltar. Son membranas de secrecin la pared celular de las clulas vegetales, la matriz extracelular en clulas animales y la pared bacteriana.

1. La membrana plasmtica
La membrana plasmtica es una delgada lmina de 75 , que envuelve a la clula y la separa del medio externo. Esta lmina puede variar su forma permitiendo movimientos y deformaciones de la clula.

I Estructura de la membrana plasmtica

Su estructura es prcticamente la misma en todas las clulas y en todos los orgnulos citoplasmticos (mitocondrias, retculos endoplasmticos, vacuolas, etctera), por lo que tambin recibe los nombres de membrana unitaria o membrana celular. Segn el modelo propuesto por Singer y Nicholson en 1972, est constituida por una doble capa de lpidos a la que se asocian molculas proteicas, que pueden situarse en ambas caras de la superficie de dicha doble capa o englobadas en la misma, formando una estructura denominada mosaico fluido (fig. 1), dada la facilidad de todas las molculas para moverse lateralmente. La composicin en la mayora de las membranas plasmticas presenta un 52 % de protenas, un 40 % de lpidos y un 8 % de glcidos.
MEDIO EXTERNO
Glucoprotenas

La bicapa lipdica se halla compuesta bsicamente por fosfolpidos, colesterol y glucolpidos, siendo los fosfolpidos los componentes ms abundantes. Estas molculas, debido a su carcter anfiptico, al situarse en un medio polar, como el agua, se orientan disponiendo sus radicales polares hacia el medio acuoso, y sus radicales lipfilos hacia los radicales lipfilos de la otra capa, lo que origina la bicapa lipdica (autoensamblaje). Los fosfolpidos y glucolpidos de la bicapa tienen tendencia a girar sobre s mismos y a desplazarse lateralmente por su monocapa. Slo ocasionalmente pueden cambiar de capa lipdica. Esta movilidad de las molculas origina una fluidez de la membrana, tal que le permite adaptarse a las condiciones variables del medio (fig. 2). El colesterol se fija al resto de componentes lipdicos disminuyendo la fluidez de la monocapa y manteniendo la estabilidad de la bicapa. Tambin impide que los lpidos de la membrana se unan entre s, lo que producira la ruptura de la bicapa por cristalizacin. Las protenas se disponen de tal modo que sus radicales polares quedan fuera de la membrana y sus radicales lipfilos establecen contacto con los lpidos de la membrana. Atendiendo a su disposicin en la bicapa, las protenas pueden clasificarse en: Protenas integrales o intrnsecas. Se encuentran total o parcialmente englobadas en la bicapa. Estas protenas poseen un sector lipfilo que se introduce en la bicapa. Si atraviesan la bicapa, presentando sectores polares hacia el medio externo y hacia el medio interno, se denominan protenas transmembranosas. Protenas perifricas o extrnsecas. Se sitan adosadas a la bicapa. Son protenas solubles que slo poseen sectores polares con los que se unen a los radicales polares de los lpidos de membrana y de las protenas integrales.

Protena perifrica Difusin lateral por la monocapa Glucolpido

Glucoclix
Fosfolpidos Colesterol Cambio de capa

Bicapa lipdica
Rotacin o giro sobre s mismo

Citoplasma
Protena integral Protena transmembranosa Protena perifrica

1 Estructura de mosaico fluido.

2 Movimientos de los fosfolpidos en la bicapa lipdica.

133

La membrana acta como una estructura dinmica, en la que las molculas que la componen se desplazan lateralmente, lo que le permite autorrepararse (autosellado) en caso de sufrir una rotura, fusionarse con cualquier otra membrana e incluso, mediante procesos de endocitosis, perder un sector de la membrana que rpidamente forma una vescula esfrica. La membrana plasmtica es una estructura asimtrica en la que los glucolpidos y glucoprotenas slo aparecen en la cara externa de la membrana. Asimismo, las protenas de la membrana se distribuyen de forma heterognea, ya que algunas nicamente se disponen en la superficie externa, mientras que otras son especficas de la cara interna. El glucoclix es el conjunto de cadenas de oligosacridos pertenecientes a los glucolpidos y glucoprotenas de la membrana celular. Aparece en la cara externa de la membrana plasmtica de muchas clulas animales, dando el aspecto al microscopio de un fino y corto terciopelo (fig. 3).

Los receptores de membrana actan como antgenos especficos para cada clula. Por ello, cuando se producen trasplantes, estos receptores son reconocidos por el sistema inmunitario de la persona que recibe el rgano como molculas extraas y, debido a ello, se produce el rechazo.

I Funcin de la membrana plasmtica

El principal cometido de la membrana plasmtica es mantener estable el medio intracelular, regulando el paso de agua, molculas y elementos. La bicapa lipdica acta como una barrera impermeable a todo tipo de sustancias polares. Son las protenas de membrana las que desarrollan la mayora de las actividades de la membrana. stas son: Regular el paso de sustancias, controlando el transporte a travs de la membrana de un gran nmero de iones y de molculas. Mantener la diferencia de potencial inico, haciendo que el medio interno est cargado negativamente. Realizar procesos de endocitosis y exocitosis. El glucoclix realiza varias funciones, entre las que destaca el reconocimiento celular. Las cadenas de oligosacridos que aparecen en la cara externa de las membranas celulares actan como seales que deben ser reconocidas para poder interrelacionarse con la clula que las posee. As, molculas, virus, bacterias y otras clulas slo pueden penetrar o relacionarse con la clula si pueden reconocer a estos receptores de membrana. Son ejemplos: En la fecundacin, los espermatocitos reconocen a los gametos femeninos de su especie mediante sus receptores de membrana. Muchos virus y bacterias reconocen a las clulas a las que van a infectar unindose previamente a sus receptores. Las clulas similares se reconocen mediante receptores de membrana, adhirindose entre ellas para formar tejidos.
134
3 Glucoclix en la clula del epitelio intestinal.

ocumento 1

Microvellosidades
Las clulas de los tejidos animales tienden a presentar especializaciones en su membrana. Estas clulas muestran una polarizacin, presentando sectores en los que aparecen prolongaciones o deformaciones de la superficie membranosa, como microvellosidades, estereocilios, etc. Estas estructuras se forman a partir de filamentos procedentes del citoesqueleto. Las microvellosidades son prolongaciones de la membrana plasmtica; su misin es aumentar la superficie de absorcin de sustancias del medio externo. Se encuentran en las clulas que constituyen la cara interna del intestino delgado.

ocumento 2
estructuras proteicas de forma discoidal denominadas placas, de donde parten protenas transmembranosas que se unen fuertemente a las protenas procedentes de una placa de la clula contigua. El desmosoma se halla unido al citoesqueleto por una red de filamentos de queratina. Las uniones estrechas son uniones que no dejan espacio intercelular. Estn formadas por molculas proteicas transmembranosas que se disponen formando hileras que sueldan (cosen) a las membranas plasmticas entre s. Estas uniones se hallan reforzadas por protenas filamentosas intracelulares. No permiten el paso de sustancias a travs del espacio intercelular, ya que ste no existe; por ello tambin se denominan uniones hermticas o impermeables. Aparecen en los tejidos epiteliales. Las uniones de hendidura o de tipo gap son uniones que dejan un pequeo espacio intercelular. Estn constituidas por dos conexones. Un conexn es un fino tubo constituido por seis protenas transmembranosas que atraviesan la membrana plasmtica y se unen a otro conexn de la clula contigua. Son uniones de comunicacin, ya que, adems de anclar clulas, ponen en comunicacin sus citoplasmas permitiendo el intercambio de molculas, por lo que tambin se las llama uniones comunicantes. Se encuentran uniendo clulas del tejido muscular cardaco.

Uniones intercelulares
Las uniones de contacto celular son necesarias para constituir tejidos. Muchas veces se deben a sustancias intercelulares segregadas por las propias clulas, las denominadas membranas de secrecin, otras son debidas a especializaciones de la membrana plasmtica. En estas ltimas se distinguen tres tipos: las uniones adherentes o desmosomas, las uniones estrechas u ocluyentes y las uniones de hendidura o gap. Los desmosomas son uniones puntuales que dejan un gran espacio intercelular, unos 200 . Anclan clulas, pero sin impedir el paso de sustancias por el espacio intercelular. Estas uniones presentan unas

Unin estrecha Unin hermtica

Protena transmembranosa Espacio intercelular Protena transmembranosa

Desmosoma Desmosoma Filamentos de queratina Estructura discoidal o placa Unin gap Unin gap Membrana

Conexn

CUESTIONARIO 1
1. Qu molculas tienen como funcin ser receptores de membrana? Qu les permite actuar como receptores? 2. Observa este esquema de una membrana plasmtica. a) Razona cul es su cara externa. b) Qu tipo de molculas aparecen sealadas?
5

2
5

135

2. Transporte a travs de la membrana

La bicapa lipdica de la membrana acta como una barrera que separa dos medios acuosos, el medio externo del citosol. Mantiene el medio interno con una elevada concentracin molecular, adems de una carga elctrica interna de signo negativo. Las clulas requieren nutrientes del exterior y tambin necesitan eliminar sustancias de desecho procedentes del metabolismo. Adems, han de mantener su medio interno estable, regulando la concentracin interna para lo que transportan, a travs de su membrana, agua y solutos. La membrana presenta una permeabilidad selectiva, ya que permite el paso de pequeas molculas, siempre que sean lipfilas, pero regula el paso de molculas no lipfilas. El paso a travs de la membrana posee dos modalidades: una pasiva, sin gasto de energa, y otra activa, con consumo de energa.

el tamao de la molcula, cuanto mayor sea el gradiente de concentracin o diferencia de concentracin entre ambos lados de la membrana, y cuanto ms lipfila o apolar sea la sustancia que ha de atravesar la bicapa lipdica. La difusin simple puede realizarse a travs de la bicapa lipdica o a travs de canales proteicos. a) Difusin simple a travs de la bicapa. As entran molculas lipdicas como las hormonas esteroideas, anestsicos como el ter y el cloroformo, frmacos liposolubles, etc. Y sustancias apolares como el oxgeno y el nitrgeno atmosfrico. Algunas molculas polares con poca o ninguna carga elctrica y de muy pequeo tamao, como el agua, el CO2, la urea, el etanol y el glicerol, tambin atraviesan la membrana por difusin simple. La difusin del agua recibe el nombre de smosis. b) Difusin simple a travs de canales (fig. 5). Se realiza mediante las denominadas protenas de canal. As entran iones como el Na, K, Ca2, Cl, etc. De ah el trmino de canales inicos. Las protenas de canal son protenas transmembranosas con un orificio o canal interno que suele hallarse cerrado y cuya apertura puede regularse por voltaje, cuando se producen variaciones en el potencial elctrico de la membrana, o por ligando, cuando ciertas sustancias, como neurotransmisores u hormonas, se unen a una determinada regin (el receptor) de la protena de canal, la cual sufre una transformacin estructural que induce la apertura del canal. Difusin facilitada (fig. 6). Permite el transporte de pequeas molculas polares, como los aminocidos, la glucosa, la sacarosa, etc., que al no poder atravesar la bicapa lipdica, requieren que protenas transmembranosas especficas para cada sustrato faciliten su paso. Estas protenas reciben el nombre de protenas transportadoras o permeasas que, al unirse a la molcula a transportar, sufren un cambio en su estructura que arrastra a dicha molcula hacia el interior de la clula.

I El transporte pasivo
Es un proceso espontneo de difusin de sustancias a travs de la membrana. Se produce siempre a favor del gradiente, es decir, del medio en donde hay ms hacia el medio en donde hay menos. Gradiente de concentracin. Las molculas, por simple difusin, pasan desde el medio en donde se hallan ms concentradas hacia el medio en donde su concentracin es menor. Gradiente elctrico. Generalmente, el medio externo es positivo, y negativo el medio interno celular. Por simple difusin, los iones con carga positiva entran en la clula, mientras que los iones negativos salen de ella. La conjuncin de ambos gradientes origina al gradiente electroqumico, que facilita o reduce la difusin de las molculas a travs de la membrana. Este transporte puede darse por difusin simple o por difusin facilitada. Difusin simple. Es el paso de pequeas molculas a favor del gradiente electroqumico. Este transporte es tanto ms rpido cuanto menor sea
Molculas transportadas Protenas

Protenas transportadoras

Difusin simple

Difusin a travs de canales

Difusin facilitada a travs de permeasas

Transporte activo (bomba de Na-K) Energa (ATP)

4 Formas de transporte a travs de la membrana.

136

I El transporte activo
En este proceso tambin actan protenas de membrana, pero stas requieren energa, en forma de ATP, para transportar las molculas al otro lado de la membrana. Se produce cuando el transporte se realiza en contra del gradiente electroqumico. Son ejemplos de transporte activo la bomba de Na K y la bomba de Ca2. La bomba de Na+K+ (fig. 7) requiere una protena transmembranosa que bombee Na hacia el exterior de la membrana y K hacia el interior. Esta protena acta contra el gradiente gracias a su actividad como ATP-asa, ya que rompe el ATP para obtener la energa necesaria para el transporte. Mediante el gasto de una molcula de ATP, bombea tres Na hacia el exterior y dos K hacia el interior. Gracias a esta actividad, el exterior de la membrana es positivo respecto al lado interno. La diferencia de potencial obtenida es denominada potencial de membrana. Este potencial de membrana (potencial de reposo) permite la entrada de iones positivos mediante el transporte pasivo, y adems capacita a la clula para captar estmulos externos. stos actan abriendo canales por

los que entran espontneamente iones de Na, con lo que se despolariza la membrana, quedando tantos iones de Na fuera como dentro y haciendo que se rebaje el potencial de membrana (potencial de accin). Estas zonas se convierten en sumideros de Na de las zonas prximas, con lo que se inicia una despolarizacin de la membrana que se transmite por la superficie celular.
Ligando

Molcula transportada

Canal regulado por ligando

+ + + + +

Molcula transportada + + + + + +

Membrana polarizada Membrana despolarizada Canal regulado por voltaje

5 Formas de transporte mediante difusin simple por ligando y voltaje.

6 Transporte por difusin facilitada.

Soluto

Traslocacin

Permeasa

7 Bomba de NaK.

Espacio extracelular

137

3. Endocitosis
La clula no puede introducir en su interior sustancias de gran tamao (macromolculas, virus, bacterias, etc.) sin daar a la membrana plasmtica; por ello presentan mecanismos basados en la formacin de vesculas membranosas en cuyo interior se sitan las macromolculas. Los procesos de introduccin de macromolculas en el interior de vesculas reciben el nombre de endocitosis (fig. 8). Por el contrario, la expulsin de macromolculas transportadas por vesculas al medio externo recibe el nombre de exocitosis. La endocitosis se inicia cuando un mecanismo de control en la membrana, que induce un sistema reticular de clatrina (protena filamentosa), arrastra dicho sector membranoso hacia el interior del citoplasma formando una vescula (fig. 9). Posteriormente, las

molculas de clatrina abandonan la vescula y vuelven a la membrana celular. Algunas molculas externas, al unirse con receptores especficos de la membrana plasmtica, inducen la formacin de vesculas que las engloban. La endocitosis puede ser de dos tipos: Pinocitosis, cuando la clula ingiere lquidos y sustancias disueltas que almacena en pequeas vesculas. Fagocitosis, cuando la clula ingiere partculas grandes de alimento, o incluso microorganismos, en el interior de grandes vesculas o endosomas. La fagocitosis es realizada por las clulas para obtener alimento del exterior. El endosoma acaba unindose a los lisosomas, que contienen enzimas digestivas, originando una vacuola digestiva en cuyo interior las enzimas digieren el alimento.

Membrana

Sistema reticular de clatrina Endocitosis

Adherencia

Unin

8 Endocitosis.

9 Formacin de vesculas a partir de la membrana al aparecer el sistema reticular de clatrina.

CUESTIONARIO 2
1. Explica razonadamente qu tipo de transporte, a travs de la membrana, tendrn las siguientes molculas: Molculas apolares como el O2, N2, steres, isoprenoides, etc. Molculas pequeas polares pero sin carga, como el H2O, CO2, glicerol, etc. Cationes como K, Na, etc. Aniones como Cl, CO2 3 , etc. Grandes molculas. 2. Explica qu tipo de transporte representa el siguiente dibujo. Medio externo 3. Qu representa esta fotografa hecha mediante el microscopio ptico?

Medio interno

138

2 Las membranas de secrecin

Son capas constituidas por sustancias producidas por la clula que, al ser segregadas, se depositan sobre la superficie externa de la membrana plasmtica. Muchas clulas animales, que constituyen tejidos, presentan un glucoclix inmerso en una membrana de secrecin denominada matriz extracelular, que une a las clulas. Las clulas vegetales presentan una pared celular rgida constituida por celulosa. depsitos de sales (fosfato clcico), originando el tejido seo, o quitina, dando lugar al exoesqueleto de artrpodos, o slice, como sucede en las esponjas silceas.

I Funcin de la matriz celular

Mantiene unidas a las clulas formando tejidos, y a los tejidos formando rganos, y, asimismo, da consistencia, elasticidad y resistencia a la compresin y a la traccin a dichos tejidos. Adems, permite la difusin de sustancias, la migracin de clulas e influye en la disposicin en el espacio de las clulas englobadas.

1. La matriz extracelular
La matriz extracelular es un producto de secrecin celular que acumula molculas sintetizadas por stas. Aparece entre las clulas de los tejidos animales y acta como nexo de unin, rellena espacios intercelulares, da consistencia a tejidos y rganos y, adems, condiciona la forma, el desarrollo y la proliferacin de las clulas englobadas por la matriz.

2. La pared celular
La pared celular es una envoltura gruesa y rgida que rodea a las clulas vegetales. El componente ms abundante y caracterstico es la celulosa, que, segregada por la clula, se dispone formando sucesivas capas. Constituye un exoesqueleto que perdura despus de la muerte de la clula, lo que sirve a muchas plantas como tejido de sostn, permitindoles alcanzar gran altura (fig. 10).

I Estructura de la matriz extracelular

La matriz se halla compuesta por una fina red de fibras proteicas (colgeno, elastina y fibronectina) inmersas en una estructura gelatinosa de glucoprotenas hidratadas, la sustancia fundamental amorfa. El colgeno es una protena fibrosa formada por tres cadenas espiralizadas sobre s mismas. Proporciona estructura, resistencia a la rotura y consistencia a la matriz. La elastina es una protena fibrosa que se comporta como una goma frente a la traccin. Proporciona elasticidad a la matriz. La fibronectina es una glucoprotena que forma una trama fibrosa con funcin adherente. Proporciona adhesin entre clulas, y entre clulas y fibras de colgeno. Las glucoprotenas estn formadas por proteoglucanos, molculas que presentan una protena filamentosa central a la que se unen numerosos filamentos de glucosaminglucanos, originando estructuras plumosas que a su vez se fijan en una larga molcula de cido hialurnico, lo que da lugar a complejas estructuras moleculares. Son muy hidrfilas y retienen mucha agua, lo que proporciona a la matriz una gran resistencia frente a la compresin, permiten la migracin celular a travs suyo, la difusin de molculas hidrosolubles e incluso, dado que forman geles con un determinado tamao de malla, la filtracin selectiva de estas molculas. La matriz extracelular es especialmente abundante en los tejidos de tipo conectivo, como el conjuntivo y el cartilaginoso. Puede acumular

I Estructura de la pared celular

La pared celular se halla formada por dos elementos: una red de fibras de celulosa y una matriz, en la que hay agua, sales minerales, hemicelulosa y pectina (sustancia con una gran capacidad para retener el agua). La matriz puede impregnarse de lignina, suberina, cutina, taninos y sustancias minerales, como el carbonato clcico y la slice. La lignina confiere rigidez a la pared celular. Es muy abundante en tejidos esquelticos como el tejido conductor leoso que dar lugar al tronco de los rboles. La suberina y la cutina impermeabilizan las paredes de las clulas que forman los tejidos protectores. As, la suberina aparece en la corteza (sber) de los rboles y la cutina, en la epidermis de las hojas y tallos. El carbonato clcico y la slice (mineralizacin) dan rigidez a la epidermis de muchas hojas.

I Funcin de la pared celular

La pared celular da forma y rigidez a la clula e impide su ruptura. La clula vegetal contiene en su citoplasma una elevada concentracin de molculas que, debido a la presin osmtica, origina una corriente de agua hacia el interior celular que acabara por hincharla y romperla si no fuera por la pared celular.
139

Disposicin de las fibras

Denominacin Pared secundaria capa interna

Composicin qumica

Celulosa

Pared secundaria capa media

Celulosa

Citosol

Citosol

Pared secundaria capa externa

Celulosa

Pared primaria

Pectina Celulosa Hemicelulosa Protena Pectatos Celulosa Protena

Lmina media Membrana plasmtica Pared celular Membrana plasmtica

10 Composicin de la pared celular vegetal.

CUESTIONARIO 3
1. Qu tipo de unin intercelular representa este dibujo? Explica cmo es y qu funcin tiene. 2. Por qu las clulas vegetales precisan una elevada presin osmtica? 3. Qu es la madera? 4. Todas las clulas de los vegetales presentan pared celular? 5. Investiga: Por qu la celulosa es un nutriente aprovechable para unos organismos y no para otros? Por qu es necesaria la celulosa en la dieta del ser humano?

El citoplasma

la envoltura nuclear y las membranas de los diferentes orgnulos. En l estn inmersos el citoesqueleto y los ribosomas.

El citoplasma es el espacio celular comprendido entre la membrana plasmtica y la envoltura nuclear. Est constituido por el citosol, el citoesqueleto y los orgnulos celulares.

I Estructura del citosol

Es un medio acuoso, con un 85 % de agua, en el cual aparecen disueltas gran cantidad de molculas formando una dispersin coloidal que puede pasar de sol a gel y viceversa. Estas molculas son: prtidos (aminocidos, enzimas, protenas estructurales, etc.), lpidos, glcidos (polisacridos, monosacridos, etctera), cidos nucleicos (ARNt y ARNm), nucletidos (como el ATP), nuclesidos, productos del metabolismo y sales minerales disueltas.

1. El citosol
El citosol, tambin denominado hialoplasma, es el medio interno del citoplasma. Se encuentra delimitado por el sistema membranoso celular, es decir, ocupa el espacio situado entre la membrana plasmtica,
140

I Funcin del citosol

En el citosol los ribosomas realizan la sntesis de protenas, a partir de la informacin del ARNm procedente del ncleo y de los aminocidos disueltos en el citosol. La mayor parte de estas protenas permanecen en el citosol. Son enzimas, protenas de reserva energtica o pequeas molculas que formarn los filamentos del citoesqueleto. Dado su alto contenido enzimtico, se produce un elevado nmero de reacciones metablicas, como la gluclisis, la gluconeognesis, la hidrlisis de las grasas, la fermentacin lctica, etc. Adems, en el citosol se estructura una elaborada red de filamentos y tbulos proteicos que constituyen el citoesqueleto fibroso.

1. Mantienen la forma de la clula. Constituyen una estructura reticular densa, el crtex, que se sita bajo la membrana plasmtica dando forma a la clula, permitiendo cierto grado de elasticidad (ver pgina 132). 2. Facilitan la emisin de los pseudpodos, que posibilitan el desplazamiento celular y la fagocitosis. Estas deformaciones citoplasmticas se inician al deshacerse el crtex y producirse el crecimiento de fibras de actina a favor del avance del pseudpodo. 3. Permiten la estabilidad de prolongaciones citoplasmticas. Por ejemplo, en las clulas del epitelio intestinal aparecen las microvellosidades, prolongaciones del citoplasma que estn sostenidas por un armazn constituido por haces de filamentos de actina asociados a molculas de otras protenas (ver pgina 132). 4. Posibilitan el movimiento contrctil de las clulas musculares. Para ello, los filamentos de miosina, con gasto de energa (ATP), provocan la aproximacin de los microfilamentos de actina, con lo que se acortan las miofibrillas y tambin la clula muscular que las contiene.

2. El citoesqueleto
El citoesqueleto aparece en todas las clulas eucariotas. Lo forma una red de filamentos proteicos, entre los que destacan los microfilamentos o filamentos de actina, los filamentos intermedios y los microtbulos (fig. 11). Adems, interviene un elevado nmero de pequeas protenas asociadas que unen a los filamentos del citoesqueleto entre s y, tambin, con el sistema membranoso celular. Entre las funciones del citoesqueleto estn: Mantener la forma de la clula y, cuando es necesario, la posibilidad de cambiar dicha forma. Posibilitar el desplazamiento de la clula (pseudpodos). La contraccin de las clulas musculares. El transporte y organizacin de los orgnulos en el citoplasma.

I Filamentos intermedios
Los filamentos intermedios presentan un grosor intermedio entre el de los microtbulos y el de los microfilamentos. Estructura de los filamentos intermedios Estn constituidos por protenas filamentosas. Los principales tipos son: 1. Los neurofilamentos, que aparecen en los axones de las neuronas. 2. Los tonofilamentos o filamentos de queratina, que aparecen en las clulas epiteliales, especialmente en los desmosomas. Son ricas en filamentos de queratina la piel, las uas, el pelo, etc. Las clulas superficiales de la piel, antes de morir, sufren un fuerte proceso de queratinizacin. 3. Los filamentos de vimentina, muy abundantes en el tejido conjuntivo, y los filamentos de desmina, que aparecen en las clulas musculares. Funcin de los filamentos intermedios Los filamentos intermedios desempean funciones estructurales. Aparecen en clulas que se hallan sometidas a esfuerzos mecnicos, como las clulas epiteliales, clulas musculares de tipo liso, axones de neuronas, etc.
141

I Microfilamentos
Los microfilamentos son bsicamente filamentos de actina. Son los principales componentes del citoesqueleto. En las clulas musculares los filamentos de actina aparecen asociados a otros microfilamentos, los de miosina, con los que forman estructuras contrctiles. Estructura de los microfilamentos Los microfilamentos de actina se hallan constituidos por dos cadenas de molculas de actina, que aparecen enrolladas entre s en forma de hlice. Los microfilamentos de miosina estn formados por dos cadenas polipeptdicas asociadas entre s. stos se unen formando haces, denominados filamentos densos (ver pgina 143). Funcin de los microfilamentos Los filamentos de actina presentan varias funciones, que dependen del tipo de clula y del tipo de molcula proteico que se le asocia:

I Los microtbulos
Los microtbulos son filamentos tubulares constituidos por molculas de naturaleza proteica, la tubulina. Los microtbulos se originan a partir de la centrosfera del centrosoma en las clulas animales, y de un centro organizador de microtbulos, en las clulas vegetales (fig. 12). A partir de los microtbulos se originan el citoesqueleto, el huso acromtico y los centrolos y sus estructuras derivadas: los cilios y los flagelos. Estructura de los microtbulos Los microtbulos son estructuras cilndricas y huecas constituidas por tubulina, en la que aparecen unidas dos protenas globulares: la -tubulina y la -tubulina. Estos dmeros de tubulina se unen constituyendo protofilamentos. Cada microtbulo est formado por trece protofilamentos de tubulina, dispuestos cilndricamente. Los microtbulos pueden formar estructuras estables como los centrolos y sus derivados, los cilios y flagelos, y estructuras de corta duracin como el huso acromtico, los pseudpodos y el citoesqueleto. Funcin de los microtbulos Los microtbulos intervienen en las siguientes funciones: 1. El movimiento de la clula. Junto a los microfilamentos de actina, participan en la emisin

de prolongaciones citoplasmticas o pseudpodos; asimismo, son los principales elementos estructurales de los cilios y los flagelos. 2. La organizacin del citoesqueleto. Los microtbulos son los principales componentes del citoesqueleto en las clulas eucariotas, actuando como organizadores y distribuidores del resto de filamentos. 3. La forma celular. Los microtbulos y el resto de filamentos del citoesqueleto constituyen una red de cuya estabilidad depende que la clula mantenga una forma fija o pueda modificarla. Es de destacar la formacin de formas celulares alargadas, como, por ejemplo, los axones de las neuronas, gracias a un eje de microtbulos. 4. La organizacin y distribucin de los orgnulos. Se ha observado el transporte de algunos orgnulos, como vesculas, vacuolas, mitocondrias y cloroplastos a lo largo de los microtbulos del citoesqueleto. Tambin se ha comprobado la inmovilizacin del retculo endoplasmtico y del aparato de Golgi, debido a la accin de microtbulos. 5. Separacin de cromosomas. Al iniciarse los procesos de divisin celular aparece el huso acromtico o mittico, formado por microtbulos y encargado de separar el ADN destinado a las dos clulas hijas.

Monmero de actina

Tubulina

70 Microfilamento

150 Filamento intermedio Microtbulo 250

11 Principales filamentos que forman el citoesqueleto.

12 Microtbulos en una clula en divisin, observados al microscopio electrnico. El orgnulo oscuro de la parte superior es el centrolo.

142

ocumento 3
El sector de la miofibrilla situado entre dos lneas Z recibe el nombre de sarcmero. En un sarcmero aparecen dos tipos de molculas filamentosas: la actina y la miosina. De la lnea Z parten filamentos finos de actina unida a molculas de tropomiosina y troponina. Entre estos filamentos finos se sitan filamentos densos, compuestos por haces de cientos de molculas de miosina. Al llegar el impulso nervioso, el retculo endoplasmtico libera Ca2. Estos iones de calcio inician entonces una reaccin en la que las cabezas de las molculas de miosina giran haciendo avanzar a los filamentos y produciendo un acortamiento de la longitud del sarcmero.

El movimiento contrctil
Las fibras musculares estriadas son clulas alargadas que pueden llegar a alcanzar hasta varios centmetros de longitud. Estas grandes clulas presentan varios ncleos en su periferia, un retculo endoplasmtico muy desarrollado y un sistema de miofibrillas que se disponen longitudinalmente a lo largo de la clula y que presentan una sucesin de bandas transversales claras y oscuras. La franja ms oscura recibe el nombre de banda A; esta banda posee una zona media ms clara o banda H. La franja ms clara recibe el nombre de banda I, y presenta en su mitad una lnea oscura o lnea Z.

Molcula de actina

Troponina Tropomiosina Molcula de miosina

Miofibrilla Lnea Z Filamentos densos de miosina

Banda clara Banda oscura Banda I

Banda H

Banda A

Banda I

Miofibrilla
Lnea Z

Clula muscular estriada

Sarcmeros
Filamentos finos de actina

143

El centrosoma

Estructura de los undulipodios (fig. 14) En los undulipodios se distinguen cuatro zonas: tallo, zona de transicin, corpsculo basal y raz. 1. El corte de un undulipodio a la altura del tallo nos muestra las siguientes partes: una membrana plasmtica, una matriz o medio interno y el axonema formado por un sistema de nueve pares de microtbulos perifricos y un par de microtbulos centrales. 2. La zona de transicin no se halla rodeada de membrana, ya que se sita en el citoplasma; carece del doblete central. 3. En la base del undulipodio se encuentra el corpsculo basal o cinetosoma, estructura derivada del centrolo, y lugar donde se organizan los microtbulos que constituyen el axonema. Presenta tripletes y en l se aprecian dos zonas: una distal que es similar a un centrolo, y una proximal en la que aparece un eje central proteico del que parten radialmente protenas hacia los tripletes de la periferia; esta estructura se denomina rueda de carro. 4. La raz es un conjunto de microfilamentos de funcin contrctil. Los microtbulos aparecen unidos a molculas proteicas, como la dinena, que gracias a su funcin ATP-asa permite el movimiento entre los diferentes grupos de microtbulos y origina el movimiento del undulipodio; la nexina, que mantiene la disposicin cilndrica del axonema uniendo los dobletes perifricos entre s, y las fibras radiales, que une los dobletes perifricos con la vaina que rodea al doblete central.
Triplete Microtbulos

El centrosoma, citocentro o centro celular est slo en clulas animales, prximo al ncleo y es considerado como un centro organizador de microtbulos.

I Estructura del centrosoma

En el interior del centrosoma aparece el diplosoma (fig. 13), formado por dos centrolos dispuestos perpendicularmente entre s. El diplosoma se encuentra inmerso en un material denso pticamente, el material pericentriolar, que es el centro organizador de microtbulos. En l se organiza una serie de microtbulos que parten radialmente y que reciben el nombre de ster (ver fig. 3 de la pg. 176). Cada centrolo consta de nueve grupos de tres microtbulos o tripletes que se disponen formando un cilindro, estructura que se mantiene gracias a protenas que unen a los tripletes entre s formando los llamados puentes.

I Funcin del centrosoma

Los centrolos, a travs del material pericentriolar, son centros organizadores de microtbulos. Por tanto, del centrosoma derivan todas las estructuras constituidas por microtbulos, como los undulipodios (cilios y flagelos), encargados del desplazamiento celular; el huso acromtico, encargado de la separacin de los cromosomas durante la divisin celular, y la estructura del citoesqueleto, cuyos filamentos se organizan alrededor de los microtbulos. Las clulas vegetales sin centrosoma construyen sus microtbulos a partir de un centro organizador similar al centrosoma de las clulas animales.

I Cilios y flagelos
Los cilios y los flagelos son prolongaciones citoplasmticas mviles situadas en la superficie celular. Funcin de los undulipodios Su funcin es la de permitir el desplazamiento de la clula, y tambin, en los cilios, crear turbulencias alrededor de ella para atraer el alimento. Los cilios presentan un dimetro de 0,2 y su longitud oscila entre las 5 y 10 . Suelen aparecer en gran nmero recubriendo la superficie celular. Los flagelos tienen un dimetro de 0,2 y una longitud de 100 . El nmero de flagelos es escaso, generalmente 1 o 2.
144
Puente proteico

B C

13 Diplosoma.

Dobletes externos

CUESTIONARIO 4
Hialoplasma Puente Doblete externo
5 6 7 8 3 2 9 1

Membrana plasmtica Par central Microtbulo A

1. Delimita un sarcmero en la fotografa de un sector de una clula muscular y seala las diferentes bandas que aparecen.

Cilio

( (

Zona de transicin

Microtbulo B

Fibras radiales

Brazos Vaina

Placa basal Fibra de transicin

Triplete

Puente

Cinetosoma

Microtbulo A Microtbulo B Microtbulo C Lmina radial Eje tubular

Triplete

Tripletes

Microtbulo A Microtbulo B Microtbulo C

Corte longitudinal

Cortes transversales

14 Estructura de un undulipodio.

Actividades
Prctica
OBSERVACIN DE ORGANISMOS UNICELULARES Para el estudio de las clulas, sus orgnulos, sus movimientos intracelulares, la emisin de pseudpodos y el movimiento de los cilios y los flagelos, es conveniente utilizar algas unicelulares o protozoos vivos, que pueden obtenerse de cultivos (un buen caldo de cultivo de clulas son los filtros exteriores de los acuarios de agua caliente) o directamente de charcas, lagos, ros o del mar. Para conseguir algas unicelulares, se requiere una manga para el filtrado del agua. Para obtener protozoos ameboideos, se suele tomar limo del fondo de charcas de agua estancada. Los ciliados se pueden conseguir colocando restos de animales o de vegetales en agua durante unos das, a una temperatura de 20-25 C. Los flagelados pueden obtenerse del plancton o mediante un cultivo, ya que es un grupo de infusorios. Tambin pueden extraerse flagelados parsitos del intestino de las ranas, lagartijas y ratas. Los esporozoos (gregarinas) pueden conseguirse de la parte final del intestino de las cucarachas. 1. Colocar una gota de agua con clulas sobre un portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos, o bien colocar una gota pendiente del cubreobjetos y utilizar un portaobjetos excavado. 2. Si el movimiento de los organismos unicelulares es demasiado rpido, se puede ralentizar espesando el medio con una gotita de gelatina al 3 % o de goma arbiga. Tambin se pueden narcotizar las clulas situando cerca de la gota que contiene a las clulas un papel de filtro con ter, xilol o cloroformo. 3. Para obtener mayor precisin en la observacin microscpica sin matar a los organismos, es necesario utilizar colorantes vitales, como rojo neutro o azul de metileno, muy diluidos (de 1/1.000 a 1/10.000).

(
2. Explica razonadamente a qu sector de un flagelo corresponde la fotografa siguiente:

145

9
Ribosoma Lisosoma Vacuola

Los orgnulos celulares

Mitocondria Citosol Membrana plasmtica Ncleo

Nuclolo

N D I C E
INFORMACIN 1 Los ribosomas. 2 El retculo endoplasmtico. 3 El aparato de Golgi. 4 Los lisosomas. 5 Las vacuolas y las inclusiones. 6 Los peroxisomas y los glioxisomas.
Los peroxisomas. Los glioxisomas.
Retculo endoplasmtico rugoso (con ribosomas) Retculo endoplasmtico liso

Aparato de Golgi

Centrosoma

Envoltura nuclear

Corte tridimensional de una clula eucariota tipo.

7 Las mitocondrias. 8 Los cloroplastos. LABORATORIO

Observacin de plastos y vacuolas.

Las clulas eucariotas presentan un complejo sistema de membranas interno que llega a ocupar la mitad de la clula, el llamado sistema endomembranoso, que divide el contenido celular en compartimentos. En cada uno de ellos se realiza un tipo de reacciones bioqumicas, evitndose as que unas interfieran con otras. Estos compartimentos son: el retculo endoplasmtico, el aparato de Golgi, las vacuolas, los lisosomas y los peroxisomas. Adems, hay dos tipos de compartimentos, no relacionados estructuralmente con el sistema endomembranoso, que poseen una doble membrana y que son orgnulos productores de energa. Son los cloroplastos y las mitocondrias.

146

Los ribosomas

Los ribosomas son unas estructuras globulares, carentes de membrana, que estn constituidas por varios tipos de protenas asociadas a cidos ribonucleicos ribosmicos (ARNr) procedentes del nuclolo. Pueden encontrarse dispersos en el citosol o estar adheridos a la membrana del retculo endoplasmtico rugoso, gracias a unas protenas, las riboforinas, que posibilitan su anclaje.

velocidad de sedimentacin 65 S. Las dos subunidades se encuentran separadas en el citoplasma, unindose nicamente cuando tienen que desarrollar su funcin de sntesis de protenas. Cada ribosoma contiene un 80 % de agua, un 10 % de ARNr y un 10 % de protenas, es decir, en peso seco poseen un 50 % de ARNr y un 50 % de protenas (fig. 1).

I Funcin del ribosoma

Los ribosomas realizan la biosntesis de protenas. Inicialmente, el ARNm se une a la subunidad menor del ribosoma y, posteriormente, a la subunidad mayor, inicindose la traduccin del mensaje del ARNm. Una vez acabada la sntesis de la protena, las dos subunidades se separan. Las molculas de ARNm son ledas, generalmente, por una serie de 5 a 40 ribosomas, distanciados entre s unos 100 . Esta especie de collares reciben el nombre de polirribosomas o polisomas (fig. 2).

I Estructura de los ribosomas

Los ribosomas son corpsculos esfricos de unos 200 de dimetro, de textura porosa, con una velocidad de sedimentacin de 80 S y que estn constituidos por dos subunidades: una subunidad menor, que sedimenta a valores de 40 S, y una subunidad mayor, de
Ribosoma de clula eucariota (80 S) 240

ocumento 1

200

La separacin de componentes celulares mediante centrifugacin

La separacin de los distintos elementos celulares se lleva a cabo mediante la separacin previa de las clulas que forman los tejidos y la posterior rotura de las estructuras celulares. Esto se realiza generalmente gracias a un triturador parecido al que se utiliza en las cocinas, pero que alcanza velocidades superiores, ayudado por la adicin de agua destilada para producir un choque osmtico, que hincha a la clula rompindola y liberando su contenido. La dispersin resultante contiene elementos celulares de todo tipo que pueden ser separados mediante centrifugacin. Al centrifugarse a velocidades que generan aceleraciones equivalentes a 10.000 g, sedimentan elementos de gran tamao: ncleos, mitocondrias, peroxisomas, sistemas membranosos, etc., y quedan en el sobrenadante los elementos ms pequeos. Si se vuelve a centrifugar a velocidades que provocan aceleraciones de 100.000 g (ultracentrifugacin), sedimentan los elementos ms pequeos como los ribosomas. Al colocar los ribosomas en una concentracin dbil de Mg2, se produce la disociacin de las dos subunidades, y se pueden separar unas de otras variando la velocidad de centrifugacin o la duracin de la misma. El tiempo de sedimentacin depende de la velocidad de centrifugacin, del peso de la partcula, de su forma y tamao, y de la densidad del medio. Caractersticas que dan lugar al coeficiente de sedimentacin expresado en unidades svedberg. As, en los ribosomas, las partculas de 40 S sedimentan despus de las de 65 S.
5

Subunidad mayor (65 S) ARNr (28 S) ARNr (5 S) ARNr (5,8 S) 45 protenas globulares

Subunidad menor (40 S) ARNr (18 S) 33 protenas globulares

1 Estructura y composicin del ribosoma de una clula eucariota.

ARN mensajero Codn iniciador Cadenas polipeptdicas en crecimiento Cadena polipeptdica terminada 65 S 65 S
UA G
G AU

3' Sentido de la traduccin del ARNm 40 S

5' 40 S

Codn de paro

Disociacin del ribosoma

2 Formacin de un polisoma en el que una molcula de ARNm es traducida simultneamente por varios ribosomas.

147

2 El retculo endoplasmtico
El retculo endoplasmtico es un sistema membranoso compuesto por una red de sculos aplastados o cisternas, sculos globosos o vesculas, y tbulos sinuosos, que se extienden por todo el citoplasma y que se halla en comunicacin con la membrana nuclear externa. Este sistema constituye un nico compartimento con un espacio interno que recibe el nombre de lumen. Se distinguen dos clases de retculo endoplasmtico: el retculo endoplasmtico rugoso o granular (RER), antes denominado ergastoplasma, que posee ribosomas en su cara externa, y el retculo endoplasmtico liso o agranular (REL), que carece de ribosomas. Este transporte se realiza en el interior de vesculas que se producen en la membrana del retculo endoplasmtico rugoso (fig. 4).

2. Retculo endoplasmtico liso (REL)

Es un tipo de retculo endoplasmtico que carece de ribosomas.

I Estructura del retculo endoplasmtico liso

El retculo endoplasmtico liso est constituido por una red de tbulos unidos al retculo endoplasmtico rugoso y que se expande por todo el citoplasma (fig. 3). La membrana del retculo endoplasmtico liso posee gran cantidad de enzimas cuya principal actividad es la sntesis de lpidos.

I Funcin del retculo endoplasmtico

En l se sintetizan y transportan las protenas y los lpidos constituyentes de las membranas plasmticas, o destinados a ser transportados al exterior de la clula (secreciones), gracias al concurso del aparato de Golgi.

I Funcin del retculo endoplasmtico liso

En el REL se sintetizan casi todos los lpidos constituyentes de las membranas: colesterol, fosfolpidos, glucolpidos, etc. Slo los cidos grasos se sintetizan en el citosol. Estos lpidos se construyen en el lado citoplasmtico de la membrana, desde donde se difunden hacia el interior del retculo liso. Estos lpidos se transportan a otros orgnulos, mediante protenas de transferencia o por vesculas producidas por medio de las redes de clatrina por gemacin. Es decir, intervienen en la sntesis, almacenamiento y transporte de lpidos. El REL est muy desarrollado en las clulas intersticiales del ovario debido a la gran cantidad de esteroides que sintetizan. Participa tambin en procesos de detoxificacin, siendo capaz de metabolizar sustancias txicas y convertirlas en productos eliminables por las clulas. Por ltimo, interviene en la conduccin de impulsos nerviosos para la contraccin del msculo estriado.
CUESTIONARIO 1
1. Qu tipo de protenas permiten el anclaje de los ribosomas al retculo endoplasmtico? 2. Qu es un polisoma? 3. Las clulas pancreticas muy activas en la sntesis de enzimas digestivas tienen un nmero muy elevado de ribosomas. Por qu? 4. Explicar en qu forma se encuentran los ribosomas en el citosol. 5. Qu diferencias existen entre el retculo endoplasmtico rugoso y el liso?

1. Retculo endoplasmtico rugoso (RER)

Es un tipo de retculo endoplasmtico que se caracteriza por presentar ribosomas en la cara externa, la llamada cara citoplasmtica.

I Estructura del retculo endoplasmtico rugoso

El retculo endoplasmtico rugoso est formado por sculos aplastados comunicados entre s. Adems, puede presentar vesculas. Se encuentra comunicado con el retculo endoplasmtico liso y con la membrana externa de la envoltura nuclear (figs. 3 y 5). De hecho, puede considerarse que la envoltura nuclear es la parte del RER que separa el ncleo del citoplasma. Sus membranas son algo ms delgadas que las plasmticas (50 a 60 ), y presentan protenas encargadas de fijar los ribosomas, las riboforinas, y otras que actan como canales de penetracin de las protenas sintetizadas por estos ribosomas.

I Funcin del retculo endoplasmtico rugoso

La funcin bsica del retculo endoplasmtico rugoso es la sntesis de protenas mediante los ribosomas de su membrana, su introduccin en el lumen, la glucosilacin de las protenas (que se completar en el aparato de Golgi), y su transporte hacia los orgnulos, donde son utilizadas para constituir membranas.
148

3 Retculo endoplasmtico rugoso y su relacin con la envoltura nuclear y el retculo endoplasmtico liso.

Ncleo
5

Envoltura nuclear Poros nucleares

Retculo endoplasmtico liso Ribosoma

5

Retculo endoplasmtico rugoso

Ribosoma

CITOSOL

5'

3'

Retculo endoplasmtico rugoso 5' 3'

Protena receptora de membrana

Pptido de sealizacin de la cadena polipeptdica 3' en crecimiento 5' 3'

5'

3'

COOH

LUMEN

NH2 NH2 NH2

Pptido de sealizacin eliminado

Cadena polipeptdica terminada sin el pptico de sealizacin

4 Sntesis de protenas en la membrana del retculo endoplasmtico rugoso. El inicio de la sntesis de la protena se produce en el citosol. Una vez se ha ensamblado el ribosoma, despus de capturar al ARNm, comienza la formacin de la protena que presenta en su extremo un pptido de sealizacin. Este pptido es reconocido por la membrana del retculo endoplasmtico rugoso que permite al ribosoma unirse fuertemente a receptores de la membrana. La protena en formacin es introducida, a travs de protenas intermembranosas, en el lumen, en donde pierde el pptido de sealizacin. En el lumen se une un oligosacrido a la protena (glucosilacin).

Retculo endoplasmtico rugoso

Mitocondria

Poro nuclear

Envoltura nuclear

5 Retculo endoplasmtico rugoso de una clula eucariota.

149

El aparato de Golgi

El aparato de Golgi (AG) forma parte del sistema membranoso celular. Fue descubierto por C. Golgi en 1898 gracias a una nueva tcnica de tincin con sales de plata (impregnacin argntica). Est formado por uno o varios dictiosomas (agrupacin en paralelo de cuatro a ocho sculos discoidales denominados cisternas), acompaados de vesculas de secrecin. Suele situarse prximo al ncleo, y, en las clulas animales, rodeando a los centrolos.

anteriores (vesculas de secrecin). stas pueden actuar como lisosomas si contienen enzimas digestivas, o pueden dirigirse hacia la membrana plasmtica en donde pueden verter su contenido al medio externo (exocitosis) y adems soldarse a ella y, as, hacerla crecer o regenerarse (fig. 6).

I Funcin del aparato de Golgi

Las membranas del AG son ricas en protenas de tipo enzimtico, por lo que pueden realizar mltiples funciones. Desempea el papel de organizador de la circulacin molecular de la clula. Por l pasan gran nmero de molculas procedentes del retculo endoplasmtico que sufren una maduracin en su recorrido por los sculos del dictiosoma. Entre las funciones del aparato de Golgi destacan: Transporte, maduracin, acumulacin y secrecin de protenas procedentes del retculo endoplasmtico. As, muchas protenas varan su estructura o alteran las secuencias de aminocidos hacindose activas. Posteriormente son concentradas y pasan al interior de vesculas de secrecin. Glucosilacin de lpidos y protenas, mediante la unin a stos de cadenas de oligosacridos, dando lugar a glucolpidos o glucoprotenas de membrana, o de secrecin. Sntesis de proteoglucanos (mucopolisacridos), que son parte esencial de la matriz extracelular, y de los glcidos constitutivos de la pared celular vegetal (pectina, hemicelulosa y celulosa).

I Estructura del aparato de Golgi

El AG est estructural y fisiolgicamente polarizado, ya que el dictiosoma presenta una cara cis, prxima al RER, generalmente convexa, constituida por sculos de menor dimetro y de membrana ms fina, y una cara trans, prxima a la membrana citoplasmtica, generalmente cncava, y caracterizada por presentar cisternas de gran tamao, de membrana ms gruesa y de aspecto reticular. La cara cis o de formacin recibe vesculas (vesculas de transicin) procedentes de la envoltura nuclear y del retculo endoplasmtico, que alimentan al aparato de Golgi. El contenido molecular del dictiosoma va avanzando hacia la cara trans o de maduracin. Esta progresin se realiza de cisterna a cisterna, mediante pequeas vesculas (vesculas intercisternas) y, una vez que llega a la cara trans, es concentrado y acumulado en el interior de unas vesculas mucho mayores que las

6 Origen del aparato de Golgi y los lisosomas.

Vesculas intermedias Ribosoma

Revestimiento de clatrina

Lisosoma Vesculas de transicin Ncleo Cara cis Vesculas formadas mediante un revestimiento de clatrina

Vescula que pierde el revestimiento de clatrina

Vescula

Vescula de secrecin

Fusin de vesculas

Retculo endoplasmtico Cara trans Dictiosoma Membrana celular

150

CUESTIONARIO 2
1. Razona cul es la cara cis y cul es la cara trans en el corte del aparato de Golgi. Dibuja un aparato de Golgi. 2. Explica qu funciones diferencian a ambos sectores del aparato de Golgi. 3. Define: dictiosoma y cisterna. 4. Qu relacin funcional une al retculo endoplasmtico y al aparato de Golgi?

Retculo endoplasmtico

Vescula de secrecin

Sculos de Golgi

Los lisosomas

Los lisosomas son vesculas procedentes del aparato de Golgi que contienen enzimas digestivas (fig. 6). stas son hidrolasas cidas (fosfatasa cida, glucosidasas, lipasas, proteasa, ADNasa, etc.) que se forman en el retculo endoplasmtico rugoso, pasan al aparato de Golgi, en donde se activan y se concentran, y que se acumulan en el interior de los lisosomas.

I Estructura de los lisosomas

Los lisosomas poseen una membrana plasmtica con las protenas de su cara interna muy glucosiladas. Estas glucoprotenas impiden que las enzimas hidrolasas ataquen a la propia membrana del lisosoma.

Lisosomas especiales son el acrosoma de los espermatozoides y los granos de aleurona de las semillas. El acrosoma es un lisosoma primario en el que se almacenan enzimas capaces de digerir las membranas foliculares del vulo, para permitir el paso del espermatozoide y la fecundacin. Los granos de aleurona son lisosomas secundarios en donde se almacenan protenas que, debido a la prdida de agua, se encuentran en estado cristalino, hasta que al plantarse y absorberse agua se activan las enzimas y se inicia la digestin de las mismas, con lo que empieza la germinacin de la semilla.
Autofagosoma Lisosoma secundario (vacuola autofgica) Cuerpo residual Retculo liso Exocitosis

I Funcin de los lisosomas

Los lisosomas realizan la digestin de materia orgnica. La principal enzima digestiva es la fosfatasa cida, capaz de romper los enlaces fosfoestricos y liberar grupos fosfato. Para el buen funcionamiento de estas enzimas, los lisosomas necesitan mantener un pH entre 3 y 6; por tanto, introducen protones (H) en su interior mediante gasto de ATP. La digestin puede ser extracelular, cuando los lisosomas vierten sus enzimas al exterior, o intracelular, cuando se unen a una vacuola que contiene la materia a digerir. Se utiliza el trmino de lisosoma primario para referirse a los que slo poseen en su interior enzimas digestivas y el trmino lisosoma secundario para aquellos que, por haberse unido a una vacuola con materia orgnica, contienen sustratos en va de digestin. Los lisosomas secundarios reciben el nombre de vacuolas digestivas o heterofgicas, cuando el sustrato procede del exterior por fagocitosis o pinocitosis, o de vacuolas autofgicas, cuando procede del interior, por ejemplo, con molculas u orgnulos propios, que previamente han sido envueltos por cisternas del retculo endoplasmtico (fig. 7).

AUTOFAGIA

Mitocondria

Lisosomas primarios
HETEROFAGIA

Ncleo Exocitosis

Fagosoma Retculo rugoso Aparato de Golgi Bacteria Pseudpodo Lisosoma secundario (vacuola heterofgica)

7 Esquema de la accin de los lisosomas en heterofagia y en autofagia.

151

5 Las vacuolas y las inclusiones

Las vacuolas son vesculas constituidas por una membrana plasmtica, y cuyo interior es predominantemente acuoso. Cuando en el contenido hay otro tipo de sustancias predominantes se habla de inclusiones.

I Estructura de las vacuolas

Las vacuolas se forman a partir del retculo endoplasmtico, del aparato de Golgi o de invaginaciones de la membrana citoplasmtica. Las vacuolas de las clulas animales, que ya se han descrito al estudiar el RE y el AG, suelen ser pequeas, y actualmente se denominan vesculas. Las vacuolas de las clulas vegetales suelen ser muy grandes, y s reciben el nombre de vacuolas. Suele haber una o dos en cada clula. La membrana recibe el nombre de tonoplasto. Se forman mediante la unin de vesculas derivadas del RE y del AG, que suelen ocupar un 5 % del volumen celular. A medida que la clula vegetal joven madura, las vacuolas crecen, llegando a ocupar un 50 %, y en ocasiones hasta un 90 %, de la clula vegetal madura. El conjunto de vacuolas de una clula vegetal recibe el nombre de vacuoma.
a
Vacuola pulstil Macroncleo Microncleos Citofaringe

Sirven de almacn de muchas sustancias. Unas son reservas energticas elaboradas por la propia clula, como protenas, otras son productos de desecho que resultaran perjudiciales si estuvieran en el citosol, otras son sustancias con funciones especficas, por ejemplo, los antociansidos responsables de los colores de los ptalos, o los alcaloides venenosos para repeler los animales herbvoros, y otras son sustancias con funcin esqueltica, como los cristales de carbonato clcico y oxalato clcico. Son medio de transporte entre orgnulos del sistema endomembranoso y entre stos y el medio externo. Lo realizan las llamadas vesculas del RE y del AG. Se ha detectado que para que se produzca una vescula a partir de la membrana, primero se forma una red de una protena filamentosa, la clatrina, que induce la aparicin de relieves membranosos revestidos por la misma y, ms tarde, la formacin de una vescula revestida. Posteriormente, la vescula independiente pierde el revestimiento de clatrina (fig. 6). Por ltimo, en las clulas animales se conocen dos tipos especiales de vacuolas: unas con funcin nutritiva, como las vacuolas fagocticas y las pinocticas, y otras con funcin reguladora de la presin osmtica; stas son las vacuolas pulstiles de los protozoos ciliados, que expulsan agua al exterior de una forma rpida, si la diferencia de presin es grande, o de una forma lenta, si los medios son isotnicos. Entre las inclusiones, las ms frecuentes son las inclusiones lipdicas, de aspecto muy refringente, que pueden contener lpidos de reserva o gotas de aceite, que por oxidacin dan origen a las resinas y a los depsitos de ltex, sustancia de la cual deriva el caucho natural.

Vacuola pulstil Vacuola digestiva Vacuolas de reserva

8 a) Paramecio con vacuolas pulstiles y digestivas. b) Clula vegetal con vacuolas de reserva de sustancias oleosas.

CUESTIONARIO 3
1. Qu es la clatrina? Cmo acta?

I Funciones de las vacuolas

Las vacuolas poseen tres funciones principales: Acumular en su interior gran cantidad de agua. Con ello se consigue el aumento de volumen de la clula vegetal turgencia celular sin variar la cantidad de citosol o hialoplasma ni su salinidad. El agua, que realiza una funcin estructural, entra por smosis debido a la elevada concentracin de sustancias que hay en las vesculas iniciales.
152

2. Explica el proceso de formacin de las glucoprotenas de la membrana plasmtica. De qu forma llegan hasta la membrana? 3. Qu diferencia un lisosoma primario de un lisosoma secundario? 4. Explica qu impide que las enzimas hidrolasas destruyan a la propia membrana del lisosoma. 5. Qu diferencias hay entre una vacuola heterofgica y una vacuola autofgica?

6 Los peroxisomas y los glioxisomas

1. Los peroxisomas
Los peroxisomas son orgnulos parecidos a los lisosomas, pero que en vez de contener enzimas hidrolasas contienen enzimas oxidasas, entre las que destacan la peroxidasa y la catalasa. Otra importante funcin de los peroxisomas es la detoxificacin, proceso que elimina sustancias txicas oxidndolas. As se degradan, en las clulas hepticas, el etanol de las bebidas alcohlicas y otras sustancias txicas como el metanol, el cido frmico, etc.

I Estructura de los peroxisomas

Los peroxisomas son vesculas, de dimetro entre 0,1 y 0,5 . Su membrana procede del RE y contienen 26 tipos de enzimas oxidasas. Las principales son la peroxidasa y la catalasa.

2. Los glioxisomas
Los glioxisomas son una clase de peroxisomas que slo se encuentran en las clulas de los vegetales. Su nombre deriva de que poseen las enzimas responsables del ciclo del cido glioxlico, una variante del ciclo de Krebs, que permite sintetizar glcidos a partir de lpidos. Esto resulta esencial para las semillas en germinacin, ya que les permite, a partir de sus reservas lipdicas, sintetizar glucosa, nica molcula que admite el embrin, hasta que el nuevo vegetal pueda extender sus hojas y realizar la fotosntesis.
Sustrato H2 Sustrato

I Funcin de los peroxisomas

En ellos se realizan algunas reacciones de oxidacin similares a las que se producen en las mitocondrias, pero en las que la energa producida se disipa en forma de calor, en vez de aprovecharse para sintetizar ATP. En primer lugar, acta la enzima peroxidasa utilizando el O2 para oxidar diversos tipos de sustratos (acil-CoA, aminocidos, purinas, etc.) y desprendiendo perxido de hidrgeno (H2O2), sustancia muy oxidante que resulta txica para la clula. Luego, acta la enzima catalasa descomponiendo el H2O2, ya sea utilizando otros sustratos orgnicos o el propio H2O2. Se considera que los peroxisomas aparecieron antes que las mitocondrias y que su funcin era permitir la vida en una atmsfera cada vez ms rica en oxgeno, elemento txico para los organismos anaerbicos, hacindolo reaccionar de forma controlada. En la actualidad, sirven para eliminar el exceso de cidos grasos, aminocidos, NADPH, etc. (fig. 9). 1. Sustrato-H2 O2
peroxidasa catalasa
5

Oxidasa

Catalasa

H2O + O2

O2

H2 O2

H2 O

Catalasa Peroxisoma

Sustrato H2O2 Sustrato 2 H2O

2. Sustrato-H2 H2O2 3. 2 H2O2

catalasa
5

CITOSOL

Sustrato H2

Sustrato

O2 2 H2O

9 Actividad oxidativa de los peroxisomas.

Las mitocondrias

Las mitocondrias son los orgnulos de las clulas eucariotas que se encargan de la obtencin de energa mediante la respiracin celular, un proceso de oxidacin en el que intervienen unas enzimas denominadas ATP-sintetasas. La energa obtenida se guarda en forma de ATP. Aparecen en grandes cantidades en el cito-

plasma de todas las clulas eucariotas, tanto de animales como de vegetales, siendo especialmente abundantes en aquellas que por su actividad poseen una elevada demanda de energa bioqumica (ATP). El conjunto de mitocondrias de una clula se denomina condrioma.

I Estructura de las mitocondrias

Las mitocondrias son orgnulos polimorfos, pudiendo variar desde formas esfricas hasta alargadas a modo de bastoncillo. Sus dimensiones oscilan entre
153

1 y 4 de longitud y 0,3 y 0,8 de anchura. Presentan una doble membrana: una membrana mitocondrial externa lisa y una membrana mitocondrial interna con numerosos repliegues internos, denominados crestas mitocondriales. Estas membranas originan dos compartimentos: el espacio intermembranoso, entre las dos membranas, y la matriz, espacio delimitado por la membrana interna (fig. 11). La membrana mitocondrial externa posee un gran nmero de protenas transmembranosas que actan como canales de penetracin. A continuacin, se encuentra el espacio intermembranoso, de contenido similar al del citosol. La membrana mitocondrial interna presenta repliegues o crestas que incrementan su superficie y, por tanto, su capacidad metabolizadora. Es bastante impermeable, y presenta un gran nmero de protenas de membrana que desarrollan una amplia gama de funciones, destacando las permeasas, los componentes de las cadenas moleculares transportadoras de electrones, entre los que destacan los citocromos, y los complejos enzimticos formadores de ATP, denominados ATP-sintetasas. Entre sus lpidos de membrana no aparece el colesterol, al igual que en la membrana plasmtica bacteriana. Las ATP-sintetasas estn constituidas por tres partes: una base hidrfoba, que se ancla en la membrana, un pednculo o regin F0, y una esfera de unos 90 de dimetro, o regin F1 , que es donde se catalizan las reacciones de sntesis de ATP (fig. 10). En la matriz mitocondrial existe un medio interno rico en enzimas y en el que se lleva a cabo un gran
MATRIZ MITOCONDRIAL

nmero de reacciones bioqumicas. Esta cmara interna presenta ribosomas mitocondriales o mitorribosomas, similares a los bacterianos, y varias molculas de ADN mitocondrial, circular y de doble hebra, como los bacterianos (fig. 11).

I Funcin de las mitocondrias

Su actividad principal es la respiracin mitocondrial, cuya ltima etapa es la cadena respiratoria que se realiza en la membrana interna. En esta se oxidan los NADH y los FADH2 procedentes de otras vas metablicas, obtenindose energa que se almacena en molculas de ATP. La sntesis de ATP por la ATP-sintetasa se explica mediante quimiosmosis: El NADH y el FADH2 liberan protones (H) y electrones (e). stos, al pasar por la cadena de protenas transportadora de electrones que hay en las crestas mitocondriales, ceden energa, que es utilizada para bombear protones H+ fuera de la matriz. stos regresan a la matriz a travs de las ATP-sintetasas, donde la energa del gradiente es utilizada para formar ATP. En el tema 12 se trata este proceso con ms detalle. En la matriz mitocondrial se realizan otras vas metablicas importantes; las principales son: El ciclo de Krebs. La -oxidacin de los cidos grasos. La biosntesis de protenas en los ribosomas. La duplicacin del ADN mitocondrial.
Cresta mitocondrial

Membrana externa

Matriz

ATP Regin F1 Pi ADP Pednculo F0

Espacio intermembranoso

Base hidrfoba

Bicapa lipdica

ESPACIO INTERMEMBRANAL

Membrana externa

Membrana interna

ATPsintetasa

10 ATP-sintetasa.

11 Estructura de una mitocondria.

154

12 Sector de la membrana interna mitocondrial mostrando la secuencia de protenas de la cadena respiratoria y la ATP-sintetasa que realizan la fosforilacin oxidativa que conduce a la formacin de molculas de ATP.

H+ Ubiquinona

H+ Citocromo c

H+ ATP-sintetasa

Espacio intermembranoso Membrana mitocondrial interna

e Complejo NADH deshidrogenasa Complejo citocromo b c1

e Complejo citocromo oxidasa

ADP + Pi ATP H+ Matriz

Los cloroplastos

abundante es la de disco lenticular, aunque tambin los hay ovoides y esfricos. Miden entre 3 y 19 de dimetro mayor y de 1 y 2 de dimetro menor, y suele haber entre 20 y 40 por clula (fig. 13). Presentan una envoltura constituida por una doble membrana: una membrana plastidial externa y una membrana plastidial interna. La externa es muy permeable, mientras que la interna es casi impermeable, por lo que posee una gran cantidad de permeasas, denominadas protenas translocadoras. Ambas membranas carecen de clorofila y entre sus lpidos, al igual que en las mitocondrias, no est el colesterol. En el interior, delimitada por la membrana plastidial interna, hay una cmara que contiene un medio interno, denominado estroma, que posee un elevado nmero de componentes. stos son: ADN plastidial, circular y de doble hlice, como el de las bacterias; plastorribosomas, distintos de los de los ribosomas
Membrana externa Tilacoides de grana

Los cloroplastos son unos orgnulos tpicos de las clulas vegetales que poseen clorofila, por lo que pueden realizar la fotosntesis, proceso en el que se transforma la energa luminosa en energa qumica contenida en la molcula de ATP. Por ello, al igual que las mitocondrias, los cloroplastos son orgnulos productores de energa.

I Estructura de los cloroplastos

Los cloroplastos son polimorfos y de color verde debido a la presencia del pigmento clorofila. En las algas, las formas son muy diversas; por ejemplo, en el alga Spirogyra slo hay dos y tienen forma de cinta en espiral. En las plantas superiores, la forma ms

Membrana interna

Membrana de los tilacoides

Grana

Tilacoides del estroma ADN cloroplstico Ribosomas Estroma Espacio intratilacoide Espacio intermembrana

13 Cloroplasto.

14 Estructura del cloroplasto.

155

del citoplasma y de los de los mitorribosomas de las mitocondrias; enzimas, entre las que destacan las quetransforman el CO2 en materia orgnica, y aquellas que permiten la transcripcin, traduccin y replicacin del ADN; y finalmente, las inclusiones de granos de almidn y las inclusiones lipdicas. Inmerso en el estroma hay numerosos sculos aplastados, que reciben el nombre de tilacoides o lamelas, caracterizados por contener pigmentos fotosintticos en su membrana, la denominada membrana tilacoidal, cuya cavidad interior recibe el nombre de lumen o espacio tilacoidal. Los tilacoides pueden extenderse por todo el estroma, por lo que reciben el nombre de tilacoides de estroma, o pueden ser pequeos, tener forma de disco y presentarse apilados como montones de monedas, los denominados tilacoides de grana, ya que cada montn recibe el nombre de grana. En las membranas de los grana se ubican los sistemas enzimticos encargados de captar la energa luminosa, efectuar el transporte de electrones y formar ATP (fig. 14).

I Funciones de los cloroplastos

La principal actividad de los cloroplastos es la realizacin de la fotosntesis, en la que la materia inorgnica es transformada en materia orgnica (fase oscura de la fotosntesis) utilizando la energa bioqumica (ATP) obtenida a partir de la energa solar, mediante los pigmentos fotosintticos y la cadena transportadora de electrones de los tilacoides (fase luminosa de la fotosntesis). Al igual que en las mitocondrias, la sntesis de ATP se realiza mediante la quimiosmosis. Los electrones excitados por la luz, es decir, ricos en energa, al recorrer la cadena de protenas situadas en la membrana de los tilacoides (cadena transportadora de electrones), van cediendo su energa, que es utilizada para bombear H+ hacia el interior de los tilacoides. Esto origina un gradiente qumico de H+, cuya energa es utilizada por las ATPsintetasas para la formacin de ATP (fig. 15) (ver informacin complementaria en el tema 13). Otras vas metablicas, que se realizan en el estroma, son la biosntesis de protenas y la replicacin del ADN.
H+ ATP-sintetasa Fotn Plastocianina Ferredoxina e e
-

15 Sector de la membrana de un tilacoide, mostrando las protenas que realizan el transporte de electrones y a la ATP-sintetasa.

Estroma

Fotn Ubiquinona

ADP + Pi ATP

Membrana del tilacoide e Espacio interno del tilacoide H2O Fotosistema II H+ Complejo citocromo H+ b6-f Fotosistema I

NADP reductasa

ocumento 2

CUESTIONARIO 4
1. Relaciona las siguientes actividades con los orgnulos que las realizan: Fosforilacin oxidativa. Regulacin de la presin. Glucosilacin. Sntesis de las protenas. Formacin de colesterol. Degradacin de los cidos grasos. Sntesis de cidos grasos. Formacin de proteoglucanos. Realizacin de la fotosntesis. Formacin de glucolpidos. 2. Qu es la ATP-sintetasa? Dnde se encuentra? Explica cmo acta. 3. Explica qu es la detoxificacin. Qu orgnulos realizan la detoxificacin? 4. Construye un cuadro en el que aparezcan las diferencias existentes entre la mitocondria y el cloroplasto. 5. Explica qu enuncia la hiptesis quimioosmtica.

Los plastos
Los cloroplastos son un tipo de plastos (tambin llamados plastidios). Los plastos son unos orgnulos caractersticos de las clulas de los vegetales, con capacidad de sintetizar y almacenar sustancias. Se distinguen dos tipos principales. Uno son los cromoplastos, que contienen pigmentos. Por ejemplo, los cromoplastos ricos en carotenos de la zanahoria, los cromoplastos ricos en licopeno de los tomates, y los cromoplastos ricos en clorofila. Otro tipo son los leucoplastos, que son incoloros y que se encuentran en las clulas meristemticas jvenes. De ellos derivan los cloroplastos, si la luz estimula la sntesis de clorofila; los amiloplastos, si se convierten en almacenes de almidn, y los proteoplastos, si almacenan protenas.

156

Actividades
Observacin de plastos y vacuolas
Material necesario
Microscopio. Cubreobjetos. Portaobjetos. Cubeta de tinciones. Lugol. Bistur. Pinzas.

1. OBSERVACIN DE CLOROPLASTOS DE ELODEA O DE SPIROGYRA

Extender una hoja de Elodea o filamentos de Spirogyra sobre un portaobjetos, aadir una gota de agua para evitar que se sequen y colocar el cubreobjetos. Para realizar la observacin se aconseja utilizar los sectores ms verdes y, por tanto, ms ricos en cloroplastos. Observar al microscopio las preparaciones microscpicas. Describir y dibujar la clula, y la forma y tamao de los cloroplastos que aparecen.

Cloroplastos en el alga Spirogyra.

2. OBSERVACIN DE CROMOPLASTOS DE TOMATE

Hacer un corte fino de la pulpa de un tomate, aproximadamente un centmetro, y colocar esta lmina sobre el portaobjetos. Poner el cubreobjetos y aplastar suavemente. Observar al microscopio ptico y describir y dibujar tanto la clula como la forma, tamao y distribucin de los cromoplastos de color rojizo que aparecen.
Cromoplastos de la pulpa del tomate.

3. OBSERVACIN DE AMILOPLASTOS DE LA PATATA

Cortar en dos una patata y rascar suavemente con el bistur la superficie cortada. Depositar en un portaobjetos el material del raspado y extenderlo con cuidado. Aadir una gota de agua y a continuacin otra de lugol. Colocar el cubreobjetos. Observar al microscopio ptico, describir y dibujar la forma, tamao y aspecto de los amiloplastos que aparecen.

Amiloplastos de patata.

4. OBSERVACIN DE VACUOLAS CON ANTOCIANSIDOS DE LA COL LOMBARDA

Cortar con el bistur un sector pequeo de la epidermis de la col lombarda, separar este fragmento de epidermis con unas pinzas y depositarlo sobre un portaobjetos. Colocar una gota de agua y tapar con el cubreobjetos. Observar al microscopio ptico y describir y dibujar tanto la clula como la forma, tamao y distribucin de las vacuolas con antociansidos que aparecen.

Vacuolas de la epidermis de col lombarda.

157

10

El ncleo y los cromosomas

N D I C E
INFORMACIN 1 El ncleo celular.
La envoltura nuclear. El nucleoplasma. El nuclolo. La cromatina.

Fotografa de un ncleo y nuclolo de una clula pancretica al microscopio electrnico.

2 Los cromosomas. LABORATORIO

Los cromosomas humanos.

En 1781 Fontana realiz una serie de descripciones que probablemente correspondan al ncleo y al nuclolo de la clula. Tuvieron que pasar cincuenta aos de observaciones para que finalmente Brown, en 1831, determinara que todas las clulas que forman los organismos pluricelulares, y muchos organismos unicelulares, como son los protozoos, las algas unicelulares y los hongos unicelulares, tienen ncleo. A estas clulas con ncleo se las denomin clulas eucariotas, en contraposicin a las clulas que carecen de l, que son las bacterias y las cianobacterias, a las que se denomin clulas procariotas.

158

El ncleo celular

del protozoo Opalina ranarum, parsito del tubo digestivo de las ranas, con varias decenas de ncleos (fig. 3). Forma. En las clulas vegetales el ncleo en interfase, es decir, en el perodo comprendido entre una divisin y otra, suele ser discoidal y, generalmente, se encuentra en posicin lateral, debido a la presin ejercida por el vacuoma (conjunto de vacuolas tpico de la clula vegetal). En las clulas animales el ncleo interfsico suele ser esfrico y, generalmente, se encuentra en posicin central. Con frecuencia hay una relacin entre la forma de la clula y la del ncleo. As, en clulas alargadas, el ncleo suele ser elipsoidal. Hay casos de ncleo con otras formas, por ejemplo, en herradura, arrosariado, polilobulado, con prolongaciones o ramificado (fig. 4). Tamao. El tamao del ncleo es muy variable. Por trmino medio oscila entre las 5 y 25 . Suele ser de mayor tamao en clulas muy activas, como en las clulas pertenecientes a tejidos secretores o reproductores. Para cada tipo de clulas existe una relacin nucleoplasmtica (RNP) entre el volumen nuclear y el volumen citoplasmtico, que se mantiene constante. Por debajo de un cierto valor de esta relacin, se induce la iniciacin de la divisin celular, ya que si el volumen citoplasmtico ha crecido mucho, el ncleo puede llegar a ser incapaz de controlar todo el citoplasma. La relacin nucleoplasmtica se expresa mediante la siguiente frmula: Vn RNP Vc Vn Donde RNP es la relacin nucleoplasmtica, Vn es el volumen nuclear y Vc es el volumen celular total.

El ncleo es una estructura constituida por una doble membrana, denominada envoltura nuclear, que rodea el material gentico (ADN) de la clula, separndolo as del citoplasma. El medio interno nuclear recibe el nombre de nucleoplasma. En l se encuentran, ms o menos condensadas, las fibras de ADN, que reciben el nombre de cromatina, y uno o ms corpsculos, muy ricos en ARN, denominados nuclolos (fig. 1).

I Cambios del ncleo durante el ciclo celular

El ncleo es una estructura que vara de forma segn el estado en que se encuentra la clula. A lo largo del ciclo celular se distinguen dos formas denominadas ncleo en interfase y ncleo en divisin. El ncleo en interfase tiene su envoltura intacta y las fibras de cromatina desenrolladas, formando masas ms o menos diferenciadas. Aunque al ncleo interfsico tambin se le llama ncleo en reposo, es en este momento en que su actividad es ms elevada, ya que las fibras de ADN estn extendidas para permitir su transcripcin a ARN, y para, momentos antes de iniciarse la divisin celular, permitir su duplicacin. Cuando empieza la divisin, se producen importantes cambios en el ncleo: las fibras de cromatina se condensan sobre s mismas y dan lugar a bastoncillos, ms o menos alargados, llamados cromosomas. Posteriormente, desaparece la envoltura nuclear y los cromosomas quedan inmersos en el citoplasma. El proceso de divisin del ncleo puede ser de dos formas: si el nmero de cromosomas de cada clula hija es el mismo que el de la clula madre, se denomina mitosis, y si es la mitad, porque da lugar a clulas reproductoras, se llama meiosis (fig. 2).

I Caractersticas del ncleo

Nmero. Generalmente slo hay un ncleo en cada clula. De forma excepcional hay ms de uno. Esto puede deberse a la unin de varias clulas uninucleadas, mediante la desaparicin de las membranas plasmticas que las separan. La clula plurinucleada se denomina sincitio. Esto sucede, por ejemplo, en las clulas musculares. Tambin puede ser el resultado de varias divisiones nucleares sin que se d la divisin del citoplasma. La clula plurinucleada resultante se denomina plasmodio. Un ejemplo es el caso

CUESTIONARIO 1
1. En qu lugar del ncleo se encuentra el ARN? Y el ADN? 2. Por qu muere la clula cuando se le extirpa el ncleo? 3. Cmo pueden aparecer clulas que poseen varios ncleos? 4. La interfase es la fase inicial de la mitosis? Justifica la respuesta. 5. Calcula la relacin nucleoplasmtica de un hepatocito cuyo volumen es de 4.000 3 y cuyo ncleo ocupa el 6 % de dicho volumen.

159

Retculo endoplasmtico rugoso

Heterocromatina Eucromatina Poros nucleares Ribosomas Nuclolo Ncleo polilobulado de leucocito neutrfilo Ncleo esfrico central de una clula animal epitelial

Lmina nuclear Membrana nuclear interna Espacio perinuclear

Envoltura nuclear

Nucleoplasma

Membrana nuclear externa

1 Ultraestructura del ncleo.

Ncleo interfsico Ncleo interfsico

Ncleo en interfase

Ncleo discoidal lateral de una clula vegetal

Ncleo ramificado de una clula glandular

Ncleo arrosariado de Stentor 4 3 Ncleo en divisin

Cromosoma anafsico

Cromosoma metafsico

2 El ciclo celular. En este esquema slo se ha representado una fibra de ADN, es decir, un cromosoma. En 1 la fibra de ADN est extendida, en 2 la fibra de ADN se ha duplicado, en 3 se condensan las dos fibras todava no separadas (cromosoma metafsico), y en 4 se separan (cada una constituye un cromosoma anafsico).

Ncleo con prolongaciones del vulo de la araa

Clula muscular Ncleos Ncleo en herradura de Vorticella

Opalina ranarum

3 Clulas con ms de un ncleo.

4 Formas del ncleo celular.

160

1. La envoltura nuclear
La envoltura nuclear es una doble membrana que separa el citoplasma del nucleoplasma, cuya funcin es mantener separados los procesos metablicos de ambos medios, y que presenta una serie de poros que regulan la comunicacin entre estos sistemas.

I Estructura de la envoltura nuclear

La envoltura nuclear est constituida por una membrana externa, de unos 70 a 90 de grosor, similar a la membrana plasmtica, un espacio intermembranal denominado espacio perinuclear, de unos 200 a 300 de grosor, una membrana interna, tambin de unos 70 a 90 , y bajo sta, una capa densa de protenas fibrilares, denominada lmina nuclear, o tambin lmina fibrosa. Las dos membranas proceden del retculo endoplasmtico. La membrana externa presenta en su cara exterior un gran nmero de ribosomas adosados, est en comunicacin con el retculo endoplasmtico rugoso, y puede realizar las mismas funciones que l. La membrana interna presenta un tipo de protenas de membrana que sirven de anclaje para las protenas que constituyen la lmina nuclear. stas son protenas fibrilares que se unen a la membrana interna, fijan las fibras de cromatina, y estn relacionadas con la formacin de los poros (fig. 5). La envoltura nuclear est perforada por un elevado nmero de poros, los denominados poros nucleares, cuya cantidad aumenta al incrementarse la actividad celular. Los poros nucleares son orificios cuyo dimetro es de unos 800 . Cada poro posee una serie de protenas que lo circundan, denominada complejo del poro nuclear. Se trata de una estructura

discoidal que presenta en su periferia, tanto arriba como abajo, ocho grnulos o masas de ribonucleoprotenas que forman un anillo. Su dimetro exterior (1.000 ) es algo mayor que el del poro, y su dimetro interior (700 ) es algo menor que ste. La luz del canal est tapada por ocho partculas proteicas cnicas que dejan un canal de slo unos 100 de dimetro. Adems, ste puede estar obturado por una protena central. Debido a ello, los poros pueden regular el paso no slo de subunidades ribosmicas, sino incluso de protenas de pequeo tamao (fig. 6).

I Funcin de la envoltura nuclear

Se pueden distinguir tres funciones: La primera es separar el nucleoplasma del citosol, evitando as que muchas de las enzimas sintetizadas en el citoplasma puedan intervenir dentro del ncleo. La segunda consiste en regular el intercambio de sustancias a travs de los poros. Es necesaria la entrada de nucletidos, de las enzimas ADNpolimerasas y ARN-polimerasas, y la entrada continua de histonas, as como la salida de ARNm y de las subunidades ribosmicas. La tercera se debe a la lmina nuclear que, gracias a los puntos de unin con las fibras de ADN, resulta fundamental para la constitucin de los cromosomas a partir de las masas de cromatina, al inicio de la divisin celular; y tambin, gracias a su unin con la membrana interna, para la formacin de la nueva envoltura nuclear despus de acabar la divisin celular, as como para la distribucin interna de las masas de cromatina, en el nuevo ncleo.
Ribosomas

Citoplasma

Membrana nuclear externa

1.000 ARNm 700

Espacio perinuclear

Protenas integrales de la membrana

Membrana nuclear interna

800 Membrana externa

Espacio perinuclear 100 Protenas del complejo del poro Membrana interna

Ncleo

Fibra cromatnica

Protenas de la lmina nuclear

Lmina

5 Envoltura nuclear.

6 Complejo del poro nuclear.

161

CUESTIONARIO 2
1. Qu sucedera si no existieran los poros nucleares? Da una respuesta detallada. 2. Por qu es necesario que los poros nucleares estn bordeados por un anillo proteico? 3. Qu pasara si, como sucede en las clulas procariotas, no hubiera envoltura nuclear? 4. Por qu la lmina nuclear puede reconstituir los cromosomas? 5. Por qu la lmina nuclear puede reconstituir la envoltura nuclear?

7 Envoltura nuclear con poros nucleares.

2. El nucleoplasma
El nucleoplasma es el medio interno del ncleo. Tambin se conoce como jugo nuclear, matriz nuclear, cariolinfa o carioplasma (del griego carion, que significa centro o ncleo). Es una dispersin coloidal en estado de gel, compuesta por protenas relacionadas con la sntesis y empaquetamientos de los cidos nucleicos (enzimas polimerasas, ribonucleoprotenas e histonas), por nucletidos de ARN y ADN, y lgicamente agua e iones.

I Estructura del nuclolo

El nuclolo est constituido bsicamente por ARN y por protenas. En l se distinguen dos zonas: La zona fibrilar, generalmente interna, constituida por ARN nucleolar (ARNn) de 45 S asociado a protenas (fig. 9). La zona granular, normalmente perifrica, constituida por ARN ribosmicos (ARNr) de 28 S, 18 S, 5,8 S y 5 S, asociados tambin a protenas, formando las subunidades ribosmicas de 60 S y 40 S, que luego saldrn por los poros nucleares al citosol. Estas subunidades se unen en el momento de la sntesis de protenas.

I Estructura del nucleoplasma

Se ha observado en l la existencia de una red de protenas fibrilares con una estructura y funcionalidad similares a las del citoesqueleto presente en el citosol.

I Funcin del nuclolo

La zona fibrilar se origina a partir de los sectores de las fibras de ADN y generalmente forma bucles (asas), que contienen los genes con informacin para la sntesis del ARN nucleolar. Son los denominados organizadores nucleolares. Al haber varios genes iguales, uno a continuacin del otro, y al transcribirse continuamente por diferentes ARN-polimerasas (hasta unas cien a la vez), se observa una serie de ARNn de diferentes longitudes, lo que se denomina estructuras plumosas (fig. 9). La zona granular se origina al desprenderse las fibras de ARNn y condensarse junto a las protenas ribosmicas que han llegado hasta el nuclolo, procedentes del citosol, a travs de los poros nucleares. El tamao del nuclolo, al estar relacionado con el grado de actividad, es mayor en clulas con gran sntesis proteica, que requieren un nmero elevado de ribosomas. Se ha comprobado que si se destruye el nuclolo, al cabo de un cierto tiempo empiezan a escasear los ribosomas en el citosol (fig. 10). El nuclolo es, pues, una fbrica de ARNr, imprescindible para la formacin de los ribosomas, protagonistas relevantes en la sntesis proteica.

I Funcin del nucleoplasma

El nucleoplasma es el medio en cuyo seno se realiza la sntesis de los cidos ribonucleicos (ARNm, ARNt y ARNn) y la sntesis (replicacin) del ADN nuclear. Por otro lado, la red proteica fibrilar constituye una estructura tridimensional que mantiene fijos el nuclolo y los distintos sectores de las fibras de cromatina, evitando de este modo la formacin de nudos.

3. El nuclolo
El nuclolo es un corpsculo esfrico, carente de membrana, cuyo dimetro oscila entre 1 y 3 , y que se encuentra en el interior del ncleo interfsico. En ocasiones hay dos o, excepcionalmente, como sucede en los ovocitos de los anfibios, puede haber centenares de ellos. Durante la divisin del ncleo o cariocinesis (mitosis o meiosis) el nuclolo desaparece, y cuando los cromosomas se desespiralizan para constituir un nuevo ncleo, se vuelve a formar a partir de ellos (fig. 8).
162

8 Nuclolo en el ncleo de una clula pancretica.

9 Estructuras plumosas en la zona fibrilar del nuclolo.

Organizador nucleolar

Unidad de transcripcin nucleolar en actividad

Sentido de la transcripcin

ADN del cromosoma nucleolar Zona fibrilar Zona granular

45 S 32 S 5 S

Gen 5 S
5S

20 S

Prerribosomas
18 S

28 S 5,8 S 5S

ADN de un cromosoma que lleva los genes 5S

NUCLEOPLASMA

HIALOPLASMA Subunidad ribosmica pequea 40 S

Subunidad ribosmica mayor 60 S

Envoltura nuclear

Protenas ribosmicas 5S POLISOMA ARNm

Protenas nucleosmicas y nucleolares

10 Esquema del funcionamiento del nuclolo.

CUESTIONARIO 3
1. Cules son las molculas ms abundantes del nucleoplasma y por qu? 2. De qu forma ayuda el nucleoplasma para evitar una movilidad excesiva del nuclolo y de la cromatina? 3. A qu se debe la existencia de una zona granular en el nuclolo? 4. Por qu hay una cierta cantidad de ADN en los nuclolos? Por qu hay ms nuclolos en las clulas secretoras? 5. Por qu las estructuras plumosas suelen encontrarse en parejas, de forma que una es simtrica de la otra?

163

4. La cromatina
La cromatina es la sustancia fundamental del ncleo celular. Su nombre deriva de la fuerte coloracin (chroma significa color en griego) que adquiere cuando la clula se tie con colorantes bsicos (hematoxilina, fucsina, safranina, etc.). En esto radic, desde antiguo, su distincin respecto al nucleoplasma. Se halla constituida por filamentos de ADN en diferentes grados de condensacin. Existen tantos filamentos como cromosomas presentar la clula durante la divisin del ncleo. Estos filamentos forman ovillos que se sitan adosados a la lmina nuclear o en contacto con el nuclolo. Estos ovillos observados al microscopio electrnico se presentan como masas amorfas, dado que su elevada compactacin no permite observar su estructura. La cromatina se forma a partir de los cromosomas que se descondensan al finalizar la divisin del ncleo. Ya desde antiguo, gracias a los colorantes bsicos y al microscopio ptico, se distinguen dos tipos de cromatina, una cromatina que no se descondensa durante la interfase, la denominada heterocromatina o cromatina condensada, y otra que s lo hace, la eucromatina o cromatina difusa. Asimismo, se diferencian dos tipos de heterocromatina: la heterocromatina constitutiva del organismo, aquella que est condensada en todas las clulas del organismo, y la heterocromatina facultativa, aquella que est condensada en unas clulas pero no en otras del mismo organismo.

doble hlice, asociada a unas protenas llamadas histonas, que son protenas bsicas, de bajo peso molecular, y muy abundantes, tanto en el ncleo como en los cromosomas (hay la misma cantidad en peso de histonas que de ADN). El collar de perlas se encuentra en el ncleo en reposo de las clulas somticas. Puede presentarse, en parte, enrollado sobre s mismo, formando una fibra de 300 de dimetro, e incluso, en una pequea proporcin, presentando grados superiores de empaquetamiento. Ello depende del tipo de clula y del estado en que se encuentre el ncleo interfsico. En el ncleo de los espermatozoides, la cromatina se encuentra en un estado diferente denominado estructura cristalina. La fibra de cromatina de 100 est constituida por una sucesin de partculas de 100 de dimetro denominadas nucleosomas. Cada nucleosoma est formado por un octmero de histonas (ocho molculas de cuatro tipos diferentes de histonas) y por una fibra de ADN de 200 pares de bases de longitud, entre la parte que se arrolla sobre el octmero y los dos extremos con los que se une al nucleosoma anterior y al nucleosoma posterior. El ADN que hay entre un octmero y otro recibe el nombre de ADN espaciador. La fibra de 100 as formada recibe el nombre de forma laxa. Cuando cada nucleosoma se asocia a una molcula de un quinto tipo de histona (la denominada H1), la fibra de 100 se acorta. Esta fibra de 100 recibe el nombre de forma condensada (fig. 11). La fibra de cromatina de 100 tambin recibe los nombres de filamento nucleosmico o nucleofilamento. Corresponde al antiguo concepto de cromonema, propuesto por los citlogos para referirse al filamento cromosmico fundamental, que deba permanecer a lo largo de todo el ciclo celular, alcanzando su mxima extensin en el ncleo interfsico y su mxima condensacin en el cromosoma.

I Estructura de la cromatina
La cromatina est constituida bsicamente por la denominada fibra de cromatina de 100 , tambin llamada collar de perlas, la cual, a su vez, est conformada por la fibra de ADN de 20 , la denominada
Partcula nuclear

Fibra de cromatina de 100 (forma laxa)

100

ADN espaciador (54 pares de bases)

NUCLEOSOMA (200 pares de bases)

100

Fibra de cromatina de 100 (forma condensada)

11 Estructura de la cromatina en collar de perlas.

CROMATOSOMA

600 (166 pares de bases)

164

ocumento 1

La estructura del nucleosoma

En un nucleosoma se pueden distinguir una partcula y dos colas de ADN (ADN espaciador) que lo unen con el nucleosoma anterior y posterior. Las partculas reciben el nombre de ncleo o partcula nuclear. Estn constituidas por un grupo de ocho histonas, denominado octmero, y por un segmento de ADN de 146 pares de bases que describe 1,75 vueltas sobre el octmero. Las ocho histonas que intervienen en la partcula son dos molculas de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Estas histonas son prcticamente las mismas en todos los organismos, tanto animales como vegetales. El ADN espaciador o ADN linker tiene una longitud aproximada, segn la especie, de 54 pares de bases, por lo que el ADN total del nucleosoma es de (54 146 200) 200 pares de bases. Cada nucleosoma se puede asociar a una molcula de una nueva histona, la H1. sta queda fijada por los diez primeros pares de nucletidos de cada uno de los dos extremos del ADN que salen de la partcula nuclear. El conjunto formado por el octmero, la histona H1 y el ADN se llama cromatosoma. El ADN del cromatosoma tiene 166 pares de nucletidos (146 10 10 166) y describe dos vueltas completas. La histona H1 no es imprescindible para la formacin del nucleosoma. Esta histona presenta cierta variabilidad segn las diferentes especies e incluso puede ser sustituida por otra, por ejemplo, por la H5 en las aves. Su presencia implica condensaciones de ocho o ms cromatosomas. As pues, la fibra de cromatina de 100 se puede presentar en una forma condensada o laxa, segn contenga o no histonas H1. La forma condensada consigue empaquetar los doscientos pares de bases, unos 680 de ADN, en una partcula de slo 100 de dimetro, lo que equivale a una reduccin de su longitud de orden prximo a 7. La histona H1 resulta imprescindible para la sntesis de la fibra de 300 , que constituye el segundo nivel de empaquetamiento del ADN.

Histonas que forman el nucleosoma.

Histonas de la partcula nuclear 100 120 H2B H2A 45 53 10 H4 H3 H4 H3 H2B H2A 100 30 20 10 90 80 70 130 140 146

Octmero de histonas

ADN de la partcula nuclear

1,75 vueltas

2 vueltas 166 nucletidos 600 27 140 H1 150 166

Partcula nuclear o ncleo

110

Cromatosoma

165

ocumento 2
Los agregados ADN-protaminas se disponen ordenadamente ocupando el mnimo espacio y formando una estructura cristalina. Las protaminas, a diferencia de las histonas, son diferentes para cada especie. Ejemplos de protaminas son la clupena, del arenque, y la salmina, del salmn.
Espermatozoide y estructura cristalina.

La estructura cristalina
La estructura cristalina resulta de la asociacin del ADN con protaminas, y aparece en el ncleo de los espermatozoides. Las protaminas son protenas ms pequeas y bsicas que las histonas. Ello implica una mayor fuerza de atraccin entre el ADN y las protenas y, en consecuencia, un mayor grado de empaquetamiento del ADN que favorece la movilidad del espermatozoide.

Acrosoma Ncleo Centrolo Mitocondrias Cabeza Zona intermedia ADN Citoplasma Protamina

Filamento axial

Espermatozoide Cola

Estructura cristalina

I Funcin de la cromatina
La cromatina tiene dos funciones: La primera es proporcionar la informacin gentica necesaria para, mediante la transcripcin, efectuar la sntesis de los diferentes ARN. La segunda es la de conservar y transmitir la informacin gentica contenida en el ADN. Para ello, durante la reproduccin celular, se produce la duplicacin del ADN, originndose dos molculas de ADN iguales, que quedan unidas por un punto y que se enrollan sobre s mismas formando las dos cromtidas de un cromosoma. La posterior reparticin del material gentico entre las dos clulas hijas, mediante la separacin de las dos cromtidas del cromosoma, es ya una funcin de los cromosomas. No toda la cromatina realiza estas funciones, ya que depende de su grado de empaquetamiento. As, en las regiones de eucromatina en que las fibras de ADN aparecen poco plegadas (100 ), la ARN-polimerasa s puede realizar la transcripcin. En cambio,
166

en las regiones de heterocromatina, en que las fibras de ADN estn fuertemente condensadas (300 o ms), nunca se puede realizar la transcripcin. Esta cromatina sirve nicamente como soporte estructural de los cromosomas, durante su reparticin mittica. La transcripcin, a diferencia de lo que sucede en las estructuras plumosas del nuclolo, resulta difcil de observar. Uno de los casos en que se puede ver es en los denominados cromosomas plumosos, que aparecen durante la ovognesis de los anfibios. En ellos, las fibras de ADN estn muy laxas y se pueden observar las tpicas formas de pluma o de fronde del ADN junto a los ARN transcritos.
CUESTIONARIO 4
1. Razona la siguiente frase: La heterocromatina facultativa representa el conjunto de genes que de manera especfica se inactivan a lo largo de la diferenciacin celular. 2. Cul es la funcin principal de la histona H1? 3. A qu nos referimos al hablar de collar de perlas?

Los cromosomas
Brazo largo Cinetocoro

Telmero Constriccin secundaria Constriccin primaria Organizador nucleolar Brazo corto Cromosoma anafsico

Los cromosomas son estructuras con forma de bastoncillo que aparecen durante la divisin del ncleo (cariocinesis), cuando se rompe la envoltura nuclear, y que se colorean fuertemente con colorantes bsicos. De ah su nombre (de chromos y de soma, que en griego significan color y cuerpo, respectivamente). Bsicamente estn constituidos por ADN e histonas. Cada uno se forma por la condensacin de una fibra de cromatina durante la meiosis o la mitosis. Su nmero es constante en todas las clulas de los individuos de una especie, pero vara segn la especie. Por ejemplo, en las clulas humanas hay 46 cromosomas, en las del pollo 78, en las del pino 24 y en las de los escorpiones 6.

Telmero Constriccin secundaria Cinetocoro Centrmero Organizador nucleolar

Cromtidas

Telmero

Brazos Organizador nucleolar Satlites Cromosoma metafsico

I Forma de los cromosomas

Dado que al iniciarse la divisin celular se produce una duplicacin del ADN, aparecen dos fibras de ADN idnticas, fuertemente replegadas sobre s mismas, denominadas cromtidas, que permanecen unidas por un punto denominado centrmero. Se pueden distinguir, pues, dos tipos de cromosomas: el metafsico, que presenta dos cromtidas unidas, y el anafsico, que presenta una sola cromtida. El cromosoma anafsico procede de una de las dos cromtidas de un cromosoma metafsico, cuando stas se separan durante la anafase (fig. 12). El cromosoma presenta una constriccin primaria o centrmero del que parten dos brazos cromosmicos, cuya parte distal recibe el nombre de telmero. En ocasiones aparecen en los brazos constricciones secundarias que, si se sitan cerca del telmero, dan lugar a un corto segmento que recibe el nombre de satlite. En el centrmero aparece una estructura proteica de forma discoidal, denominada cinetocoro, que acta como centro organizador de microtbulos. En ella se implantan los microtbulos del huso acromtico cuando se ha de mover el cromosoma. Existe una constriccin secundaria, denominada organizador nucleolar, en la que se encuentran los genes que codifican el ARN nucleolar (fig. 12). Segn la posicin del centrmero, se distinguen cuatro tipos de cromosomas (fig. 13): Cromosomas metacntricos, si el centrmero est en la parte media del cromosoma. Cromosomas submetacntricos, si los brazos cromosmicos son ligeramente desiguales. Cromosomas acrocntricos, si los brazos son muy desiguales. Cromosomas telocntricos, cuando el centrmero se sita en la regin del telmero.

12 Morfologa de los cromosomas anafsico y metafsico.

Metacntrico

Submetacntrico

Acrocntrico

Telocntrico

13 Tipos de cromosomas segn la posicin del centrmero.

Cuando los cromosomas se tien con colorantes bsicos, como por ejemplo con fucsina (el llamado mtodo de Feulgen), aparecen regiones fuertemente teidas (regiones heterocromticas), y regiones dbilmente teidas (regiones eucromticas). Esto se relaciona con diferentes grados de condensacin del ADN. En los cromosomas humanos, la heterocromatina constitutiva se halla localizada junto al centrmero, mientras que en otros mamferos se encuentra adems en los telmeros y en bandas a lo largo de todo el cromosoma. Los cromosomas tambin pueden teirse mediante las tcnicas de bandeo cromosmico, que son diversos mtodos de tincin que dan lugar a una serie de bandas de distinta intensidad. Estas tcnicas permiten detectar alteraciones en la estructura del cromosoma. El significado de estas
167

Octmero de histonas 1 6 5 4 3 4 5 H1 H1 1 2 6 2

300

Solenoide
(6 nucleosomas por vuelta).

Fibra en zigzag

Fibra laxa

de 100 (aparece por desempaquetamiento (aparece cuando del solenoide cuando en el medio hay en el medio hay una concentracin salina poca concentracin salina). an ms baja)

Nucleosomas del solenoide organizados en grupos de 6 por cada vuelta.

14 Modelo de solenoide. Para la formacin del solenoide es imprescindible la histona H1, que forma el eje central de la fibra de 300 .

bandas no est claro en muchas especies. S se conoce en los llamados cromosomas gigantes, como los de las glndulas salivales de Drosophila; en ellos, cada banda clara corresponde a un gen (ver documento 3).

de empaquetamiento en el ncleo es del orden de 100 a 1.000, y en los cromosomas es casi de 10.000. Por ejemplo, un cromosoma humano que mide slo 5,5 m de longitud, posee 4 cm de fibra de ADN, lo que supone una reduccin del orden de 7.000. Se ha observado que la fibra de 300 forma una serie de bucles, de entre 20.000 y 70.000 pares de bases de longitud, que posiblemente estabilizan ciertas protenas del eje del cromosoma. Muchos autores consideran que en el cromosoma existe un eje de protenas no histnico, el llamado armazn central, o andamio, sobre el que se anclan los bucles (fig. 15). Los dominios estructurales en forma de bucles constituyen el tercer nivel de empaquetamiento. Se encuentran arrollados sobre s mismos, formando prominencias de unos 600 de dimetro. An no se conoce bien cules son los siguientes niveles de empaquetamiento. En 1990 se propuso un modelo de estructura del cromosoma, segn el cual seis bucles forman una estructura retorcida, llamada roseta, y treinta rosetas seguidas, dispuestas en espiral, forman un rodillo, que constituye el cuarto nivel de empaquetamiento. El quinto y ltimo nivel, el cromosoma, estara formado por la sucesin de rodillos. Segn este modelo, las bandas de diferente coloracin que se aprecian en algunos cromosomas se deben al grado de compactacin de los rodillos entre s.

I Estructura de los cromosomas

Los cromosomas estn constituidos por una fibra de ADN de unos 300 de dimetro, que se encuentra fuertemente replegada. Esto permite concentrar una gran cantidad de ADN en un pequeo volumen, lo que facilita su movilidad durante la divisin del ncleo. Actualmente se acepta el modelo del solenoide para explicar la estructura de la fibra de 300 , mientras que a los siguientes niveles de condensacin, todava desconocidos, se los denomina niveles superiores de empaquetamiento. a) La fibra de cromatina de 300 La fibra de cromatina de 300 es el segundo nivel de empaquetamiento. Se forma por el arrollamiento sobre s misma de la fibra condensada de cromatina de 100 , es decir, fibras que contienen histonas H1. Segn el modelo del solenoide, que es el ms aceptado, se invierten unos seis nucleosomas por vuelta y las histonas H1 se agrupan entre s, formando el eje central de la fibra de 300 (fig. 14). Esto implica un acortamiento de, aproximadamente, cinco veces la longitud del collar de perlas. En el ncleo interfsico, la mayor parte de la cromatina (eucromatina) est en forma de fibras de 100 . En los cromosomas el nivel ms bajo de empaquetamiento es la fibra de 300 . b) Niveles superiores de empaquetamiento Con el empaquetamiento que supone la fibra de 300 slo se consigue reducir entre 35 y 40 veces la longitud de la fibra de ADN. Sin embargo, el grado
168

I Funcin de los cromosomas

La funcin bsica de los cromosomas es facilitar el reparto de la informacin gentica contenida en el ADN de la clula madre entre sus dos clulas hijas. Para ello previamente se ha de duplicar esta informacin. El ADN de los cromosomas se halla inactivo, ya que est tan fuertemente empaquetado que no puede transcribirse. Slo en algunos casos, como en los

Cuarto nivel

Rodillo

Segundo nivel

Solenoide Roseta

Collar de perlas
Primer nivel

Tercer nivel

ADN desnudo Bucle

Tercer nivel

Segundo nivel (solenoide)

300
4

Primer nivel (cromatina con H1)

100
3

Primer nivel (cromatina sin histona H1)

2

100

600
5

300

Bucles formando prominencias

Eliminadas todas las histonas (ADN desnudo)

1

Protenas andamio

15 a) Esquema hipottico de la estructura del cromosoma. b) Diferentes niveles de empaquetamiento, desde el ADN desnudo hasta los bucles o tercer nivel de empaquetamiento.

169

ocumento 3

Los cromosomas gigantes

En el ncleo en interfase de las glndulas salivales de las larvas de Drosophila melanogaster existen unos cromosomas gigantes que han sido muy tiles en los estudios de citogentica. Las zonas heterocromticas de todos estos cromosomas se juntan en una zona denominada cromocentro. Se trata de cromosomas politnicos, es decir, cromosomas surgidos mediante duplicaciones sucesivas de la fibra de ADN sin que se produzca la posterior separacin de las copias. Se forman por endomitosis, es decir, sin que se rompa la envoltura nuclear. Estn formados por unas 1.024 fibras de ADN juntas (210 1.024). Mediante colorantes bsicos aparece una serie de bandas. Las bandas corresponden a zonas donde la fibra nucleosmica (cromonema) forma unos glomrulos denominados crommeros. stos sirven de puntos de unin entre las fibras. Cuando todos los crommeros de una banda se despliegan, los nucleofilamentos forman dominios en forma de bucles, lo que permite su transcripcin. Cada banda corresponde a un gen. Las zonas ms claras se denominan interbandas.

cromosomas gigantes, pueden producirse transcripciones de genes. Este tipo de cromosomas se obtiene a partir de sucesivas replicaciones de las cromtidas, sin que se produzca una separacin posterior.

pues, las mujeres presentan 23 tipos de cromosomas y los hombres 24 tipos. El cromosoma Y en general es muy pequeo. Muchas especies carecen de l, por lo que un sexo viene determinado por poseer dos cromosomas X y el otro por poseer slo uno. El trmino de heterocromosomas proviene de que estos cromosomas permanecen condensados, total o parcialmente, en forma de heterocromatina, en el ncleo interfsico. En las hembras de mamferos, uno de los dos cromosomas X se encuentra totalmente condensado durante la interfase, dado que la manifestacin de los genes de ambos cromosomas X podra resultar letal para el individuo. Se trata de un ejemplo de heterocromatina constitutiva. En las mujeres, uno de los cromosomas X se encuentra formando una estructura compacta en la periferia del ncleo interfsico denominada corpsculo de Barr, lo que permite conocer la informacin gentica sexual del individuo mediante la simple observacin al microscopio de una de sus clulas. Las mujeres presentan un corpsculo y los hombres ninguno (fig. 16).

I Diploida y cromosomas sexuales

Cada especie tiene un nmero concreto de cromosomas en sus clulas, y todos los individuos de una especie tienen el mismo nmero de cromosomas. La mayora de las especies de animales, plantas y hongos son diploides, es decir, sus clulas somticas (clulas no especializadas en la reproduccin sexual) poseen dos ejemplares de cada tipo de cromosoma. Los distintos tipos de cromosomas pueden distinguirse entre s por su longitud, por la posicin del centrmero, y, si es preciso, por la posicin de las bandas. Las clulas de los seres diploides se simbolizan como clulas 2n, siendo n el nmero de tipos diferentes de cromosomas. Estas clulas poseen dos juegos de cromosomas, uno heredado del padre y otro heredado de la madre. Se denominan cromosomas homlogos aquellos que tienen informacin (igual o diferente) sobre los mismos caracteres; son, pues, del mismo tipo. Slo las clulas reproductoras sexuales, como los gametos (vulos y espermatozoides) y las meiosporas de los hongos, musgos y helechos, son clulas haploides, es decir, con un solo ejemplar de cada tipo, lo que se simboliza como clulas n. El conjunto de todos los cromosomas metafsicos de una clula, bien separados entre s, se llama cariotipo. La representacin grfica o fotogrfica de las parejas de cromosomas homlogos, ordenados de mayor a menor, recibe el nombre de idiograma. Los cromosomas que determinan el sexo se denominan heterocromosomas o cromosomas sexuales, y se simbolizan con las letras X e Y. El resto de los cromosomas reciben el nombre de autosomas. Por ejemplo, en las clulas humanas, en las que hay 46 cromosomas, se distinguen dos heterocromosomas (dos cromosomas X en las mujeres y un cromosoma X y otro Y en los hombres) y 44 autosomas (dos ejemplares de cada uno de los 22 tipos de autosomas). As
170

(XY)

+ (XX)

+ (XXX) mutante triple X

16 Ncleos de las clulas epiteliales de la mucosa bucal humana en los que se aprecia el corpsculo de Barr.

CUESTIONARIO 5
1. Por qu la clula invierte tanta energa en sintetizar histonas y sobre ellas enrollar la fibra de ADN de 20 que hay en el ncleo interfsico? 2. Las clulas procariotas no presentan fibras de ADN de 100, 300 o ms angstroms. Por qu no precisan empaquetar tanto su ADN? 3. La heterocromatina puede presentar una coloracin ms oscura o ms clara que la eucromatina. A qu se debe la coloracin ms oscura? Propn una hiptesis sobre a qu puede deberse la coloracin ms clara. 4. Cuntas veces se hace ms corta la fibra de 20 al enrollarse sobre las histonas y formar un nucleosoma? 5. Rellena los siguientes espacios: De la (a) , salen los dos extremos del ADN (b) , que coinciden en el mismo lugar, y all se unen a una molcula de (c) , mediante (d) pares de nucletidos cada uno, describiendo (e) vueltas completas. Se invierten por tanto (f) pares de nucletidos. La agrupacin de (a) y (c) se denomina (g) . 6. Puede haber clulas somticas con un nmero impar de cromosomas? Y gametos? 7. Cuntos corpsculos de Barr presentar en cada clula un hombre afectado de sndrome de Klinefelter (individuo XXY)?

LABORATORIO

Los cromosomas humanos

Esta fotografa muestra el conjunto ordenado de cromosomas de una clula humana, es decir el cariotipo del individuo. Para obtenerla se ha procedido a realizar un cultivo de monocitos y se ha aadido al medio colchicina, una sustancia que interrumpe la mitosis debido a que impide la formacin del huso acromtico. Posteriormente se ha aadido agua destilada al medio para conseguir que, por smosis, la clula se hinche y consecuentemente que se dispersen los cromosomas. Finalmente se han teido los cromosomas con orcena actica y han realizado fotografas a travs del microscopio.
1

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X X Y

1. Cuntos cromosomas hay en la fotografa? 2. Se trata de una clula diploide o haploide? Cunto vale 2n? 3. Se trata de un hombre o de una mujer? Por qu? 4. Cuntos tipos de cromosomas hay? Cunto vale n? Cunto valdra n si fuera del otro sexo? 5. Cuntas cromtidas tiene cada cromosoma? A qu fase mittica pertenecen? 6. Cmo se denomina el conjunto de cromosomas del recuadro pequeo? Y el resto?

7. Qu dos criterios se han seguido para hacer los siete grupos de los cromosomas no recuadrados? 8. Los 7 grupos se denominan, de izquierda a derecha, con las letras A, B, C, D, E, F y G. Define las caractersticas de cada grupo. 9. Atendiendo al tamao y a la forma, en qu grupos se han de incluir el cromosoma X y el cromosoma Y? 10. Qu dos criterios se han seguido para hacer los siete grupos de los cromosomas no recuadrados?

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11
N D I C E
INFORMACIN 1 Tipos de reproduccin celular. 2 La divisin generadora de clulas con igual nmero de cromosomas.
La vida de la clula. El ritmo de reproduccin celular. El ciclo celular. La interfase. La divisin celular o fase M.

La reproduccin celular

3 Diferencias en la divisin generadora de clulas somticas entre las clulas animales y las vegetales. 4 La divisin generadora de clulas con la mitad de cromosomas.
Concepto de reproduccin sexual. Los ciclos biolgicos. Ventajas de la reproduccin sexual. Etapas en el proceso generador de clulas con la mitad de cromosomas.

Reproduccin de una clula vegetal. En qu fase de la mitosis se encuentra la clula de cada fotografa?

El rasgo ms caracterstico de los seres vivos no es ni el metabolismo ni la sensibilidad (en los virus y las semillas, por ejemplo, son mnimos), sino su capacidad reproductora. Gracias a ella, pese a la debilidad estructural de los seres vivos, la vida se perpeta y se prolonga en el tiempo. Existe un postulado clsico en Biologa que concentra en s todo el significado del proceso reproductor: Omne vivum ex vivo (Todo ser vivo viene de otro ser vivo). Algo parecido, pero refirindose a la clula, dijo el mdico alemn Virchow: Omnis cellula e cellula (Toda clula procede de otra clula). Estas fotos muestran las cuatro fases de la mitosis. Sabras decir cules son?

ACTIVIDADES LABORATORIO
Mitosis en la raz

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1 Tipos de reproduccin celular

En las especies eucariotas pluricelulares se pueden distinguir dos tipos de clulas: las clulas diploides, que son las que tienen dos ejemplares de cada tipo de cromosoma, y que se simbolizan como clulas 2 n (siendo n el nmero de tipos diferentes de cromosomas presentes en cada clula), y las clulas haploides, que son las que tienen un solo ejemplar de cada tipo de cromosoma, y que se simbolizan como clulas n. Por ejemplo, en la especie humana, en la que n es 23, las clulas diploides, que son las que constituyen la estructura del cuerpo y que se denominan clulas somticas, tienen 46 cromosomas, mientras que las clulas haploides, que son las que sirven para generar nuevos individuos y que se denominan clulas reproductoras, tienen 23 cromosomas. Basndose en esta dualidad se distinguen dos tipos de reproduccin celular: la divisin generadora de clulas con igual nmero de cromosomas, en las que hay un proceso de divisin nuclear denominado mitosis, y la divisin generadora de clulas con la mitad de cromosomas, proceso que recibe el nombre de meiosis (ver cuadro I).
Perodo G1 Perodo S (Sntesis de ADN) Perodo G2 Divisin duplicacin del ncleo o cariocinesis, tambin llamada MITOSIS Divisin del citoplasma o citocinesis, tambin llamada citodiresis

Interfase Clulas que cuando se dividen dan lugar a clulas con igual nmero de cromosomas que ellas. Siguen, pues, el llamado CICLO CELULAR. ETAPAS EN LA VIDA DE UNA CLULA Clulas que cuando se dividen dan lugar a clulas con la mitad de cromosomas que ellas. Proceso denominado MEIOSIS. No siguen, pues, el ciclo celular. Interfase

Divisin o perodo M

Perodo G1 Perodo S (Sntesis de ADN) Perodo G2 Primera divisin meitica Intercinesis (no hay sntesis de ADN) Segunda divisin meitica

Divisin

CUADRO I.

divisin generadora de clulas con igual nmero 2 La de cromosomas

1. La vida de la clula
Todas las clulas, pasado un tiempo ms o menos largo, se reproducen, es decir, dan lugar a nuevas clulas, o mueren. En ambos casos la clula inicial deja de existir. En la vida celular se pueden distinguir cuatro etapas: nacimiento, crecimiento, diferenciacin y reproduccin o muerte. La duracin de la vida celular es muy variable. Por ejemplo, en el cuerpo humano hay clulas que se reproducen rpidamente, como las del epitelio intestinal, las del epitelio pulmonar y las de la piel. Algunas de stas slo tardan ocho horas en dividirse. En el otro extremo estn las clulas que han perdido su capacidad de reproduccin y cuyo final es siempre la muerte celular; por ejemplo, los eritrocitos, las clulas musculares estriadas y las neuronas. En general, la duracin de la vida de la mayora de las clulas animales oscila entre unas ocho horas y poco ms de cien das. La muerte celular suele darse por autolisis a partir de la rotura de sus lisosomas.
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2. El ritmo de reproduccin celular

La existencia en los organismos pluricelulares de clulas que viven menos tiempo que el individuo implica la necesidad de un ritmo de reproduccin celular que al menos iguale el ritmo de clulas que mueren. En el cuerpo humano, por ejemplo, que est constituido por unas 1013 clulas, existe una tasa de generacin de millones de clulas por segundo, simplemente para poder mantener el equilibrio con las que mueren. El ritmo de reproduccin celular depende fundamentalmente del tipo de clula, como ya se ha comentado. Adems, se ha observado que, muchas veces, la divisin celular se da cuando: 1. Hay un aumento tal del tamao del citoplasma que la relacin entre el volumen del ncleo y del citoplasma, la llamada relacin nucleoplasmtica (RNP), se hace inferior a un cierto valor, y el ncleo resulta insuficiente para controlar un citoplasma tan grande. 2. Hay un aumento tal del tamao total de la clula que la relacin entre la superficie y el volumen es demasiado pequea. Es decir, cuando la superficie de la membrana plasmtica, a travs de la cual entra el alimento, es insuficiente para nutrir el citoplasma que contiene. Esto se debe a que mientras la superficie crece segn el radio al cuadrado, el citoplasma lo hace segn el radio al cubo. Es la misma razn que explica, por ejemplo, que la piel de una patata grande sea menor que la suma de las pieles de muchas patatas pequeas que juntas pesen lo mismo. 3. Hay la llamada disponibilidad de espacio, como sucede con las clulas de los bordes de una herida, en las que no hay el llamado efecto inhibidor de la divisin celular por contacto. 4. En el medio hay determinadas sustancias qumicas que pueden ser hormonas, como las necrohormonas producidas por las clulas lesionadas, las auxinas en los vegetales o las hormonas hipofisarias en los animales; u otro tipo de sustancias, como el nitrato de manganeso que favorece la divisin de algunos ciliados, el oxgeno, ciertos nutrientes, o incluso un simple aumento de temperatura. Las dos primeras causas son internas, mientras que las dos ltimas son externas. Cuando las clulas se dividen incesantemente sin control se produce el cncer. Adems de existir un control del ritmo de divisin celular, hay un control sobre el tipo de clulas que se han de formar, es decir, sobre el llamado proceso de diferenciacin celular, que da lugar a los distintos tipos de clulas especializadas.
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3. El ciclo celular
El ciclo celular o ciclo vital de una clula comprende el perodo de tiempo que va desde que se forma la clula, es decir, desde que nace, hasta que se divide, dando lugar a nuevas clulas (fig. 1). En un ciclo celular se diferencian dos etapas, fcilmente distinguibles si se observa la clula con un microscopio: una etapa inicial de larga duracin, en que la clula presenta ncleo, denominada interfase, y una etapa final corta, en que la clula presenta cromosomas, denominada divisin, ya que la clula acaba dando lugar a dos clulas hijas. Al final de la interfase es cuando se realiza la duplicacin del ADN. Esto permite que luego, durante la divisin, cada clula hija pueda recibir la misma cantidad de ADN (el mismo nmero de cromosomas) que tena la clula madre. La interfase, o etapa de no divisin, consta de tres fases denominadas G1, S y G2. En ellas el ncleo celular no cambia de forma y se denomina ncleo interfsico. La etapa de divisin consta de una sola fase denominada fase M (M de mitosis). En ella el ncleo se desintegra y en su lugar aparecen los cromosomas. Comprende la divisin del ncleo o mitosis, tambin denominada cariocinesis, y la divisin del citoplasma o citocinesis (ver pgina 178). Las fases G1, S y G2 son perodos bioqumicamente muy activos, ya que en ellos se produce la sntesis de todas las sustancias propias de la clula, incluido el ADN, pero en los que no hay reparticin de ADN. Al contrario, en la fase M, la sntesis bioqumica es mnima, y la actividad celular est casi exclusivamente centrada en el reparto del ADN entre las dos clulas hijas. La fase M slo dura una dcima parte, o incluso menos, del total del ciclo celular. Si ste, por ejemplo, fuera de 24 horas, la fase M durara slo una o dos horas.

G0

G1 (11 h) M (1 h) G2 (4 h)

S (8 h)

Profase Metafase Anafase Telofase

1 Ciclo celular.

Nuclolo

Ojos de duplicacin del ADN

ARNm

ARNm Nuclolo Complejo de transcripcin S Centrmero G1 M G2 Heterocromatina Eucromatina Nuclolo difuso

Heterocromatina Nuclolo en formacin Cromtidas hermanas

TELOFASE ANAFASE METAFASE

Cromtidas en condensacin PROFASE

2 Transformaciones de un cromosoma durante el ciclo celular.

4. La interfase
La interfase abarca las fases G1, S y G2. La fase S (S del ingls synthesis) es el perodo en el que se produce la duplicacin del ADN, lo cual es imprescindible para que luego se pueda realizar la mitosis, es decir, su reparto. La fase G1 (G del ingls gap intervalo) va desde que nace la clula hasta que llega la fase S, y la fase G2 va desde que acaba S hasta que se inicia la divisin celular o fase M. Fase G1. En ella se produce sntesis de ARNm y consecuentemente de protenas. La clula presenta un solo diplosoma (dos centrolos). Su duracin, al revs que en las otras fases, vara mucho segn el tipo de clula. De ella depende la distinta duracin total del ciclo celular. En un ciclo vital de 24 horas esta fase durara 11 horas, pero en otros ciclos puede durar das o aos. Al final de G1 se distingue un momento de no retorno, denominado punto de restriccin o punto R, a partir del cual ya es imposible detener que se sucedan las fases S, G2 y M. En algunas clulas, antes de llegar al punto R, se empiezan a manifestar algunos genes concretos, por lo que acaban transformndose en las clulas especializadas del tejido que stos determinan, proceso que se denomina diferenciacin celular. As pueden permanecer das o meses sin alcanzar el punto R. En estos casos se dice que las clulas han entrado en la fase G0. Posteriormente, bajo

el efecto de activadores mitticos, como son ciertas hormonas, pueden volver a la fase G1 y alcanzar el punto R. En los casos de clulas muy especializadas, como las neuronas o las clulas musculares esquelticas, quedan detenidas en el perodo G0, por lo que nunca llegan a alcanzar la fase S y en consecuencia no pueden dividirse. Fase S. En ella se produce la duplicacin del ADN. Por ello, cuando posteriormente, durante la mitosis, el ADN se condense para formar los cromosomas, stos en lugar de constar de una sola molcula de ADN, es decir, de una cromtida, constarn de dos cromtidas unidas por el centrmero. En la fase S contina la sntesis del ARNm y de protenas, sobre todo de histonas. Junto a cada centrolo se forma un esbozo de centrolo denominado procentrolo. En un ciclo celular de 24 horas, esta fase suele durar unas ocho horas. Fase G2. Se inicia cuando acaba la sntesis de ADN y termina en el momento en que ya empiezan a distinguirse los cromosomas. En esta fase la clula contiene el doble de ADN que en la fase G1. Contina la sntesis de ARNm y de protenas, sobre todo de la histona H1 que permite la formacin de la fibra de 300 , y de las protenas que formarn los microtbulos del huso mittico. Al final de esta fase la clula ya contiene dos diplosomas inmaduros. En un ciclo celular de 24 horas, esta fase durara unas cuatro horas.
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5. La divisin celular o fase M

La divisin celular o fase M del ciclo celular es el proceso mediante el cual, a partir de una clula madre, aparecen dos clulas hijas con idntica dotacin cromosmica que la progenitora. La divisin celular comprende la divisin del ncleo o mitosis, tambin denominada cariocinesis, y la divisin del citoplasma o citocinesis. En un ciclo celular de 24 horas esta fase durara de una a dos horas.

centriolar. A partir del material pericentriolar se forman microtbulos que se disponen radialmente formando las llamadas fibras del ster. El conjunto de complejo centriolar y fibras se denomina ster o centrosfera. Obsrvese que el centro organizador de microtbulos (COM) no son los centrolos del ster, sino el material pericentriolar (fig. 3).

I La mitosis
La mitosis es el tipo de divisin nuclear que se da cuando se han de generar clulas con igual nmero de cromosomas que la clula madre. La palabra mitosis deriva de mitos, que significa filamento, en referencia al aspecto de los cromosomas en que se transforma el ncleo durante esta etapa. En los seres diploides se puede definir como el proceso mediante el cual de una clula con 2 n cromosomas se obtienen dos clulas con tambin 2 n cromosomas, siendo n el nmero de tipos distintos de cromosomas. Es decir: 1 (2 n)
Mitosis

Centrolo centrolo Diplosoma Material pericentriolar Complejo centriolar

Fibra del ster

ster

2 (2 n)

3 Estructura de un ster.

Debido a la mitosis, en los seres pluricelulares, todas las clulas somticas tienen la misma dotacin cromosmica que el cigoto, es decir, que la primera clula del organismo. La existencia en estos seres de clulas especializadas, muy distintas entre s, no se debe a diferencias en el ADN que contienen, sino a que durante el desarrollo embrionario, en unas se han expresado unos genes y en otras otros, esto es, la llamada diferenciacin celular. Aunque la mitosis es un proceso continuo, para facilitar su estudio tradicionalmente se ha dividido en cuatro fases denominadas profase, metafase, anafase y telofase (fig. 5). Profase. La profase se inicia cuando empiezan a visualizarse los cromosomas, es decir, cuando las dos fibras de ADN, fibras de cromatina de 100 , se enrollan sobre s mismas para constituir primero dos fibras de 300 , y despus las dos cromtidas que permanecen unidas a nivel del centrmero, constituyendo el cromosoma profsico. Debido a esta condensacin desaparece el nuclolo, o los nuclolos, ya que el ADN que regula su maquinaria de transcripcin queda empaquetado en los cromosomas. En las clulas animales, los dos diplosomas inmaduros, cada uno constituido por un centrolo y un procentrolo perpendicular a l, estn rodeados por un material proteico denominado material pericentriolar (en microscopa ptica se denomina centrosoma), que progresivamente se va haciendo ms abundante. Cada diplosoma y su material pericentriolar forman un complejo
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Los dos steres continan su actividad organizadora de microtbulos y constituyen unas fibras entre ellos denominadas fibras polares o continuas (aunque generalmente no llegan al otro ster), cuyo alargamiento produce la separacin de los dos steres, que quedan en una posicin diametralmente opuesta, constituyendo los dos polos de la clula en divisin. Las fibras polares quedan formando el llamado huso mittico. Durante este proceso, cada procentrolo se alarga y acaba formando un centrolo. Finalmente, en la llamada profase tarda o premetafase, el ncleo se hincha, debido a la entrada de agua, hasta que se fragmenta la envoltura nuclear y se separa la lmina fibrosa, por lo que el nucleoplasma se dispersa en el citoplasma. En los cromosomas, en cada una de las dos cromtidas, se empieza a formar, a nivel del centrmero, el cinetocoro o placa cinetocrica, que se comporta como centro organizador de microtbulos (COM) (fig. 4). A partir de los dos cinetocoros situados a ambos lados del centrmero se forman los microtbulos cinetocricos, que forman las llamadas fibras cromosmicas, visibles con el microscopio ptico, que se disponen perpendicularmente a ambos lados del cromosoma. Al alargarse, van separando los cromosomas y, como ya est formado el huso mittico, se ven inducidas a imbricarse en el huso, lo que conlleva una orientacin de las cromtidas, quedando, cada una, orientada hacia uno de los dos polos. La profase dura unos quince minutos.

Cromtidas hermanas

Constriccin secundaria

Placa cinetocrica o cinetocoro

Constriccin primaria o centrmero

Microtbulo cinetocrico

Cromosoma metafsico

4 Posicin de los cinetocoros.

Metafase. Es la fase en que, debido al alargamiento de los microtbulos cinetocricos, los cromosomas quedan equidistantes a ambos complejos centriolares, disponindose en la mitad del huso mittico y constituyendo as, entre todos, la llamada placa ecuatorial. Muchos cromosomas metafsicos, los que tienen su centrmero en la mitad o cerca de ella, presentan forma de X. Ello es debido a que el grado de empaquetamiento de sus dos cromtidas es mayor que en los profsicos, quedando los extremos ms separados. Anafase. La anafase se inicia con la separacin de las dos cromtidas hermanas que constituyen cada uno de los cromosomas metafsicos. A partir de este momento, una sola cromtida forma un cromosoma, el denominado cromosoma anafsico. Para evitar errores al contar los cromosomas de una clula, debe prescindirse del nmero de cromtidas y seguir la regla de que hay tantos cromosomas como centrmeros pueden contarse. La anafase acaba cuando un juego de cromosomas anafsicos ha llegado a un polo del huso mittico, el otro juego, el de los cromosomas anafsicos hermanos, al polo opuesto, y ambos lotes se han condensado formando dos masas en las que es difcil distinguir los cromosomas individualizados. Al final de la anafase desaparecen los cinetocoros. La anafase slo dura unos pocos minutos.

Telofase. La telofase empieza cuando las dos dotaciones cromosmicas se han agrupado en dos masas, situadas en los polos del huso mittico, y acaba cuando stas quedan rodeadas de una envoltura nuclear, es decir, cuando se forman los dos ncleos hijos. Durante la telofase, a los cromosomas se les adhiere la lamina fibrosa y esto facilita la construccin de la nueva envoltura nuclear. sta se forma a partir de los sculos del retculo endoplasmtico y, probablemente, tambin de los restos de la envoltura nuclear de la clula madre. Los cromosomas se van despiralizando, lo que posibilita su transcripcin y la formacin de los nuclolos a partir de las llamadas regiones organizadoras de nuclolos del ADN. El ncleo telofsico, progresivamente, se va haciendo cada vez ms parecido al interfsico. Los microtbulos polares se sueltan del material pericentriolar y se aproximan entre s, formando haces a nivel de la interzona (zona intermedia entre los dos grupos de cromosomas). En la regin de imbricacin de estos microtbulos interzonales se acumulan muchas protenas, formando los llamados cilindros de sustancia densa, que juegan un papel importante en la citocinesis. sta generalmente se produce simultneamente durante la telofase.

ocumento 1

El movimiento de los cromosomas durante la anafase

La anafase es la etapa en que los cromosomas viajan desde la placa ecuatorial hasta los dos polos del huso mittico. Este desplazamiento se inicia gracias al acortamiento de los microtbulos cinetocricos, por despolimerizacin de los polmeros de tubulina que los constituyen. Esto comporta que los cromosomas sean arrastrados hacia los polos. Muchos cromosomas, al poseer el cinetocoro en su punto medio o prximo a l y quedar los extremos de los brazos libres, adoptan forma de V durante el arrastre. Cuando han recorrido aproximadamente la mitad del trayecto, se produce el alargamiento del huso mittico gracias, primero, al deslizamiento de los microtbulos polares de un polo respecto a los del otro, y, segundo, al crecimiento de los microtbulos polares por polimerizacin a partir de molculas sueltas de la protena tubulina. Los semihusos se separan y se hacen cada vez ms pequeos, y aparece entre ellos una zona intermedia, cada vez ms grande, denominada interzona. A los microtbulos polares que hay entre ellos se aaden unos nuevos, de extremos libres, y en conjunto forman los denominados microtbulos interzonales.

177

Nuevo centrolo en formacin

Fibras (microtbulos) del ster

Las dos cromtidas del cromosoma profsico Fibras polares o continuas

Envoltura nuclear fragmentada PRINCIPIO DE LA PROFASE Fibras cromosmicas constituidas por microtbulos cinetocricos Cromosomas dispuestos en la placa ecuatorial PROFASE Semihuso PROFASE

Interzona

Cromosomas orientados por las fibras del huso FINAL DE LA PROFASE Semihuso acortado Fibras (microtbulos) interzonales METAFASE

Semihuso PRINCIPIO DE LA ANAFASE Complejo centriolar

Inicio de la nueva envoltura nuclear Interzona alargada Cilindros de sustancia densa Surco de divisin

Cilindros de sustancia densa

Anillo contrctil

Semihuso acortado FINAL DE LA ANAFASE

INICIO DE LA TELOFASE

FINAL DE LA TELOFASE

5 Mitosis y citocinesis por estrangulacin de una clula 2 n en que n 2.

I La citocinesis
La citocinesis o citodiresis es la divisin del citoplasma. En las clulas animales se realiza por estrangulacin del citoplasma, y en las clulas vegetales se realiza por tabicacin intracelular (fig. 7). A continuacin se trata slo el caso de las clulas animales. La citocinesis se inicia ya a finales de la anafase. Empieza con una invaginacin de la membrana plasmtica a nivel del plano ecuatorial del huso. Aparece as el llamado surco de divisin que rodea todo el citoplasma. ste es el resultado externo de la formacin de
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un anillo contrctil interno que se va haciendo cada vez ms pequeo, estrangulando as la clula (fig. 6). El anillo contrctil est constituido por polmeros de actina unidos por un extremo a la cara interna de la membrana plasmtica. Los extremos libres se van uniendo entre s mediante molculas de miosina. As, paulatinamente, se va estrangulando el citoplasma, hasta que la membrana del surco de divisin contacta con el haz de microtbulos interzonales, a nivel de la sustancia densa. De esta forma se divide el citoplasma y se forman dos clulas hijas.

ocumento 2
un cromosoma politnico, tambin llamado cromosoma gigante, cuya estructura es fcil de observar al microscopio ptico. Estos cromosomas presentan bandas claras, correspondientes a segmentos de cromtidas estiradas, alternadas con bandas oscuras, correpondientes a la coincidencia de enrollamientos (crommeros) en cada una de las cromtidas. Este tipo de endomitosis se da, por ejemplo, en las clulas de las glndulas salivales de las larvas de dpteros, que constantemente estn produciendo enzimas salivales y que, por tanto, precisan tener disponibles muchas copias del gen codificador de las mismas. c) Amitosis. La amitosis es una divisin del ncleo por estrangulamiento del mismo en el que, a diferencia de la pleuromitosis, no ha habido una separacin previa de los cromosomas en dos grupos, por lo que no hay seguridad de un reparto equitativo de los mismos. No presenta ninguna de las fases de la mitosis y, por tanto, no debe ser considerada como un tipo de mitosis intranuclear. Muchos de los casos citados en la bibliografa no se aceptan en la actualidad, porque, en realidad, no correspondan a ncleos en divisin, sino a ncleos polimrficos estables que tenan ese aspecto. En otros casos s fue correcto considerarlos amitosis, pero correspondan a estados patolgicos de las clulas. En la actualidad se acepta, como ejemplo de amitosis, la divisin del macroncleo de los protozoos ciliados. La explicacin de cmo se produce en ellos una reparticin no excesivamente desigual de los cromosomas viene dada por el hecho de que, previamente, se produce endomitosis, por lo que hay varios ejemplares de cada tipo de cromosoma, y, en consecuencia, la probabilidad de que cada ncleo hijo reciba ejemplares de cada tipo de cromosoma es muy alta, como puede deducirse del hecho de que los descendientes pueden realizar todas sus funciones vitales. Algunos autores tambin utilizan el trmino amitosis para referirse a la duplicacin del ADN bacteriano. Es apropiado en cuanto no es una mitosis, ya que ni hay ncleo, ni huso mittico, ni los ADN bacterianos hijos (genforos) se hallan espiralizados formando cromosomas, pero no es demasiado apropiado, en cuanto la reparticin es exacta, un genforo para cada clula hija, y en cuanto que no se realiza por estrangulamiento de un ncleo, sino por crecimiento de la membrana plasmtica mesosmica entre los dos genforos.

Procesos relacionados con la mitosis

En las clulas somticas se han observado otros procesos relacionados con la duplicacin del ADN, que son distintos de la mitosis abierta, o extranuclear, explicada; stos son la pleuromitosis, la endomitosis y la amitosis. a) La pleuromitosis. Es una mitosis intranuclear, es decir, una mitosis que se realiza dentro del ncleo sin que haya rotura de la envoltura nuclear. Los cromosomas se separan en dos grupos iguales y, posteriormente, durante la telofase, se produce la divisin del ncleo mediante una constriccin. Se ha citado, por ejemplo, en los protozoos flagelados (ver figura inferior).
Cromosoma unido por su cinetocoro a la parte interna de la envoltura nuclear

Envoltura nuclear intacta Mitosis intranuclear.

b) La endomitosis. Es la duplicacin del ADN nuclear sin posterior reparticin del material cromosmico entre dos ncleos hijos. Todo el ADN permanece en el mismo ncleo, por lo que la endomitosis no es un tipo de divisin nuclear. Segn haya separacin o no de las cromtidas hermanas, se distinguen dos modalidades: la endomitosis conducente a poliploida y la endomitosis conducente a politenia. Endomitosis generadora de poliploida. Es una endomitosis en la que se produce la separacin de las cromtidas hermanas, las cuales quedan dentro del mismo ncleo. Aparecen as, primero, ncleos tetraploides (4 n), luego octaploides (8 n), etc. En general, durante estos procesos no se rompe la envoltura nuclear, pero aunque se rompiera, dado que no hay migracin anafsica, el nuevo ncleo reconstituido contendra todos los cromosomas formados. Este tipo de endomitosis es relativamente frecuente. Se ha observado en el hgado de los mamferos, en el intestino de los mosquitos, en diferentes tejidos del insecto palo (sus clulas musculares son 4 n, las intestinales 16 n, las de los tubos de Malpighi entre 16 n y 128 n, etc.) y en el macroncleo de los protozoos ciliados. Endomitosis generadora de politenia. Es una endomitosis en la que no hay separacin de las cromtidas hermanas. Es como una mitosis que quedara detenida en la profase. Las cromtidas hermanas no llegan a espiralizarse y permanecen extendidas y unidas entre s. Al cabo de una duplicacin hay 2, luego 4, luego 8, 16, 32, 64, 128, 256 , 512 y generalmente se detiene cuando hay 1.024 cromtidas juntas formando

Divisin con amitosis del macroncleo en el ciliado Chilodon uncinatus. a) Macroncleo. b) Microncleo.

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Actina

Anillo contrctil

Miosina

Cilindro de sustancia densa

Microtbulos interzonales

6 Citocinesis por estrangulacin.

en la divisin generadora de clulas 3 Diferencias somticas entre las clulas animales y las vegetales
En el proceso de divisin celular se pueden distinguir dos diferencias bsicas entre las clulas somticas de los vegetales y las de los animales: una es la falta de centrolos en las clulas de los vegetales superiores, y la otra es que la citocinesis en los vegetales se realiza por tabicacin. En las clulas de los vegetales, y de algunos protozoos, al principio de la profase, cerca del ncleo, aparece una zona exenta de orgnulos denominada zona clara, que es un centro organizador de microtbulos (COM), por lo que, pasado un tiempo, queda rodeada de microtbulos. Posteriormente se alarga y acaba dando lugar a dos centros organizadores denominados casquetes polares, entre los que aparecen microtbulos polares, constituyendo al final de la profase los dos polos del huso mittico, es decir, actan como los steres de las clulas animales. Este tipo de huso mittico sin steres se denomina huso anastral, mientras que el huso mittico con steres se denomina huso astral. La citocinesis por tabicacin de las clulas vegetales se inicia con la agrupacin ordenada, en el plano ecuatorial de la clula binucleada telofsica, de muchas vesculas procedentes del aparato de Golgi. Esta agrupacin ordenada es posible gracias a la orientacin y aproximacin de los microtbulos interzonales. La estructura formada por estas vesculas y microtbulos se denomina fragmoplasto. Posteriormente, se produce la fusin de las vesculas, formndose la llamada placa celular temprana, que por la
180

adicin de ms vesculas va creciendo, desde el centro, hasta llegar a dividir la clula. A partir de sus membranas se forman las membranas plasmticas enfrentadas de las dos clulas hijas. Entre stas, dado que la placa celular presentaba algunos poros, quedan puentes de comunicacin citoplasmtica denominados plasmodesmos. A partir del contenido de las vesculas, rico en hemicelulosa y pectina, se forma la lmina media, que posteriormente, tras la adicin de celulosa, constituir la pared celular celulsica (fig. 7).
Ncleo telofsico Restos de microtbulos polares

Plasmodesmo Placa celular temprana Lmina media

Fragmoplasto (vesculas de Golgi y microtbulos)

7 Citocinesis por tabicacin.

ocumento 3
b) La pluriparticin o divisin mltiple o esquizogonia. Es la divisin del citoplasma de la clula madre, que ya se ha convertido en plurinucleada, en tantos citoplasmas hijos iguales como ncleos posee. Generalmente queda un resto de citoplasma residual sin ncleo. La separacin puede llevarse a cabo mediante fisuracin o mediante tabicacin. Un ejemplo de esta forma de divisin es la esporulacin propia de los protozoos esporozoos. El nombre esporulacin deriva de su similitud con la formacin de las esporas en los hongos ascomicetes, que tambin se produce por pluriparticin interna, aunque en ellos las clulas hijas (esporas), que se forman por meiosis, poseen, incluso cuando todava estn contenidas en la clula madre, una pared celular, adems de la membrana plasmtica.

Formas de divisin del citoplasma

Atendiendo al nmero de clulas hijas y a la forma que stas tienen, se distinguen varios tipos de divisin del citoplasma. stos son: biparticin, pluriparticin, gemacin y esporulacin. a) La biparticin o divisin binaria. Es la divisin del citoplasma de la clula madre, ya binucleada, en dos citoplasmas hijos iguales, cada uno conteniendo un ncleo. La biparticin puede realizarse mediante tres mecanismos diferentes, que son: Estrangulacin. Es la formacin de un surco ancho en la mitad de la clula madre binucleada, de manera que sta adopta una forma similar a un reloj de arena. Es propia de los organismos unicelulares. Fisuracin. Es la formacin de un surco muy estrecho, la llamada fisura, en la clula madre binucleada. Debido a su estrechez, ms bien parece como si se hubiera cortado en dos la clula madre. Es propia de las clulas de los metazoos. Tabicacin. Es la formacin de un tabique, a partir de la unin de vesculas de Golgi cargadas de pectina, que divide la clula madre en dos clulas hijas. Es propia de las metafitas y de algunas talofitas.

Plasmodium

Eritrocito Esquizogonia en Plasmodium.

c) La gemacin. Es la divisin del citoplasma de la clula madre, cuando todava es uninucleada, en dos partes desiguales, de forma que la menor sin ncleo, la denominada yema, queda comunicada con la mayor. Posteriormente el ncleo experimenta una endomitosis, se alarga y su proyeccin se introduce en la yema. Despus del reparto de cromosomas el ncleo se divide en dos, y se acaba de dividir el citoplasma por estrangulacin, aunque las dos clulas hijas, desiguales, permanecen adheridas entre s durante mucho tiempo. Este proceso se da en las levaduras.

En los protozoos flagelados, como los tripanosomas, la biparticin es longitudinal y empiezan a rasgarse por el flagelo. Su ritmo de divisin es tan alto que antes de que acabe de separarse cada uno de ellos se est dividiendo de nuevo, dando lugar a una especie de estrella o roseta de individuos intentando separarse cada uno de ellos de los dems.

Gemacin en clulas de levadura.

CUESTIONARIO 1
1. Qu tejidos animales y qu tejidos vegetales resultan ms apropiados para observar mitosis? Razona la respuesta. 2. Tienen todas las clulas somticas de un individuo el mismo nmero y tipos de cromosomas? 3. Diferencia entre cromosoma, cromtida, centrosoma, centrmero y crommero. 4. Cuntos cromosomas hay en una clula humana en profase y en anafase mitticas?

5. Cuntas parejas de cromosomas se pueden observar en la metafase mittica, en la anafase mittica y en la interfase, en una clula diploide en la que 2 n 6? 6. Dibuja una clula 2 n 4 en anafase mittica. 7. En qu fase de la mitosis est una clula que presenta ocho cromosomas dispersos, constituido cada uno por dos cromtidas? Cunto vale n? 8. Si en un tejido la vida media de las clulas es 24 horas y un 75 % de ellas est en fase G1, un 5 % en fase S, y un 15 % en fase G2, en qu situacin est el resto y cunto tiempo est en ella?

181

divisin generadora de clulas 4 La con la mitad de cromosomas

1. Concepto de reproduccin sexual
La reproduccin se puede definir como la generacin de nuevos individuos. Se distinguen dos tipos de reproduccin: Reproduccin asexual. Es aquella en que, salvo mutacin, los descendientes son genticamente idnticos a sus progenitores. Por ejemplo, la reproduccin de un rosal por esquejes (trozos de tallo que se plantan). Las clulas del nuevo individuo se originan por mitosis, a partir de una o ms clulas del progenitor. Reproduccin sexual. Es aquella en que los descendientes son genticamente muy diferentes de su progenitor o progenitores. Por ejemplo, la reproduccin de un champin mediante meiosporas, o la reproduccin de los humanos mediante la unin de dos gametos. Las diferencias genticas de los nuevos individuos se deben a que se han formado a partir de unas clulas especiales haploides, las denominadas clulas reproductoras sexuales (meiosporas y gametos). stas, o sus antecesoras, se originan mediante una divisin denominada meiosis en la cual se produce una combinacin al azar de genes entre cada dos cromosomas homlogos, por lo que el cromosoma de cada pareja es diferente en cada clula sexual. Los gametos se diferencian de las meiosporas en que, mientras los gametos precisan unirse dos de ellos, de diferente sexo, para dar lugar a una clula con capacidad de dividirse, las meiosporas no. Los organismos haploides generan sus gametos mediante mitosis. Hay algunos casos en que, a partir de un gameto femenino sin fecundar, surge un nuevo individuo, que obviamente es haploide. Es la denominada reproduccin por partenognesis sexual (existe otra partenognesis que es asexual); por ejemplo, as nacen los znganos de las abejas. Las meiosporas slo se dan en los hongos y en las plantas, mientras que los gametos se dan tanto en las plantas como en los animales.

2. Los ciclos biolgicos

Segn el momento en que se produce la meiosis, se diferencian tres tipos de ciclos biolgicos: Ciclo haplonte. Es el propio de las especies cuyos individuos adultos siempre son haploides. En ellas slo el cigoto es diploide. ste experimenta la meiosis (meiosis cigtica), dando lugar a clulas haploides de las que se forman adultos haploides. stos, mediante mitosis, generan gametos haploides. Se da en algunas algas y hongos (fig. 8).

8 Ciclo haplonte en el alga Chlamydomonas. Las fases diploides estn en verde y las fases haploides, en amarillo.

Gameto

Gameto

Fecundacin Cigoto Adulto Adulto Mitosporas Meiosporas

Meiosis

182

 Ciclo diplonte. Es el propio de las especies cuyos individuos adultos siempre son diploides. En ellas la meiosis tiene lugar durante la gametognesis (meiosis gametognica), formndose gametos haploides que, tras la fecundacin, originan un cigoto diploide que da lugar al adulto. Se da en casi todos los animales, en muchos protozoos y en algunas algas y hongos (fig. 9). Ciclo diplohaplonte. Es el propio de las especies que presentan alternancia de generaciones, es decir, dos tipos de individuos adultos, unos diploides de los que surgen otros haploides, y viceversa. En ellas la meiosis tiene lugar durante la esporognesis (meiosis esporognica). La meiosporas haploides (n) dan lugar al adulto haploide o gametfito. ste produce los gametos que, mediante la fecundacin, forman el cigoto (2 n). Al desarrollarse el cigoto se forma el esporfito (2 n) que, mediante meiosis, produce esporas. Este ciclo se da en las metafitas, en muchas algas, y en algunos hongos. En las metafitas con flores el gametfito (n) es microscpico y es parsito del esporfito (2 n) (fig. 10).
Esporfito (2 n)

Desarrollo embrionario 2n Larva (macho)

2n Meiosis desencadenada por la penetracin Macho del espermatozoide adulto Espermatozoide (n) Meiosis

Pupa

Fecundacin

Huevo Folculo

Testculos Espermatogonias

Ovogonia

Hembra adulta

9 Ciclo diplonte de Drosophila melanogaster. Las formas diploides estn en verde y las formas haploides, en amarillo.

Cpsula Fecundacin

Helecho Meiosis n Espora (n) Esporfito (2 n)

Esporfito (2 n) Esporangios

Meiosis Maz planta adulta (2 n) (= Esporfito) Fecundacin Cigoto Protalo (n) Esporas (n)

Musgo Gametfito (n) vulo Protonema (n)

Inflorescencia Flor aislada Gametfito (n)

Flor (corte) Inflorescencia Clula madre de las macrosporas (2 n)

sis eio M Grano de maz o cariopsis

Estambres que contienen polen Clula madre de los granos de polen o microsporas (2 n) Albumen (3 n) 2 n Embrin (2 n) Tegumentos maternos (2 n) Meiosis

Ttrada (4 n)

3 degeneran macrospora (n) (= Clula madre del saco embrionario)

Nucela (2 n) Saco embrionario

Fecundacin

10 Ciclos diplohaplontes. En verde se han sealado las estructuras diploides o triploides, y en amarillo las haploides.

n Saco embrionario (= Gametfito ) n

Ttrada (4 n) Futuro albumen (3 n) Grano de polen (n) Huevo (2 n) (= microspora) (futuro embrin) Grano de polen germinado n (el tubo entra por el estigma) (= Gametfito )

183

ocumento 4
quegonios. Los anteridios y los arquegonios se encuentran en unos individuos haploides denominados gametfitos (productores de gametos), los cuales se originan a partir de meiosporas formadas en otros individuos diploides denominados esporfitos (productores de esporas). En las metafitas con flores (gimnospermas y angiospermas) hay dos tipos de meiosporas que son la microspora y la macrospora. La microspora es el grano de polen, que luego da lugar al tubo polnico o gametfito masculino, por el que descienden los dos ncleos germinativos o gametos masculinos. La macrospora es el saco embrionario uninucleado, el gametfito femenino es el saco embrionario plurinucleado, y la oosfera es el gameto femenino. La mayora de las plantas presentan flores con anteras y carpelos, o flores con anteras y flores con carpelos, en el mismo individuo, por lo que son especies hermafroditas. En los hongos, las meiosporas se forman en las ascas (ascomicetes), o en los basidios que hay en el borde de las lminas del sombrero de las setas (basidiomicetes).

Organismos productores de gametos y meiosporas

En los metazoos (animales) los gametos se producen en unos rganos especiales denominados gnadas. Las especies con reproduccin sexual generalmente presentan dos tipos de individuos: los machos, que son los que producen gametos masculinos o espermatozoides en las gnadas masculinas o testculos, y las hembras, que son las que producen los gametos femeninos u vulos en las gnadas femeninas u ovarios. Algunas especies, como los caracoles de campo, presentan individuos con testculos y ovarios a la vez; se denominan hermafroditas. Generalmente no presentan autofecundacin, sino fecundacin cruzada entre dos individuos. En las metafitas sin flores (brifitos y pteridfitos) los gametos masculinos o anterozoides se forman en unos rganos especiales denominados anteridios, y los gametos femeninos u oosferas en unos rganos denominados ar-

3. Ventajas de la reproduccin sexual

En la reproduccin asexual slo hay divisiones celulares por mitosis, mientras que en la reproduccin sexual, en alguna etapa, hay una divisin celular por meiosis. La reproduccin asexual genera individuos genticamente iguales a sus progenitores, mientras que la sexual genera individuos genticamente diferentes. La variabilidad de los descendientes, pese a implicar la aparicin de individuos con menor capacidad de supervivencia, es una ventaja para la especie, ya que permite que, ante un cambio impredecible en las condiciones ambientales, existan algunos individuos con probabilidades de sobrevivir. Por ello son escasas las especies pluricelulares que no presenten, alguna vez, reproduccin sexual, aunque slo sea al cabo de muchas reproducciones asexuales. La variabilidad de la descendencia en la reproduccin sexual se debe a varias causas, que de mayor a menor importancia son: a) Durante la meiosis se produce una recombinacin al azar de genes, entre una de las dos cromtidas de un cromosoma y otra del cromosoma homlogo. Las cromtidas recombinadas resultantes son, pues, diferentes entre s. Los cromosomas homlogos son aquellos que tienen genes con informacin sobre los mismos caracteres. En los seres diploides, de los dos cromosomas homlogos, uno es heredado del padre y el otro de la madre. b) Durante la formacin de los gametos, o de las esporas, se producen combinaciones al azar de cromosomas, ya que cada una de estas clulas slo recibe un ejemplar, al azar, de cada tipo de
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cromosomas, el paterno o el materno. Por este motivo, los gametos tambin son diferentes entre s. c) En el caso de que el nuevo individuo se forme a partir de la unin de dos clulas sexuales (gametos), tambin existe la influencia del azar en la fecundacin. Por ejemplo, en los animales, de los millones de espermatozoides emitidos, slo uno fecunda al vulo. Los seres diploides tienen dos genes (dos informaciones) para cada carcter, los denominados genes alelos. Esto es una ventaja sobre los haploides, ya que permite la supervivencia del individuo aunque uno de los dos genes sea defectuoso. La diploida se ha mantenido gracias a la reproduccin sexual, ya que, cuando se heredan dos alelos defectuosos, el individuo muere y estos genes desaparecen de la poblacin. Si slo hubiera reproduccin asexual, debido a la mutacin, de cada par de alelos uno sera defectuoso y estara tapado por el otro, que sera correcto; es decir, la especie, en cuanto a su supervivencia, se comportara como una especie haploide, no tendra la posibilidad de tener una segunda informacin correcta. La reproduccin sexual presenta dos desventajas respecto a la reproduccin asexual. Una es que si el ambiente permanece invariable, lo mejor es generar individuos idnticos a los progenitores, ya que estn perfectamente adaptados. La otra es que si se realiza mediante gametos, esto comporta las dificultades del encuentro, del emparejamiento, de la fecundacin y del desarrollo embrionario. En un principio, las especies debieron ser unicelulares, haploides y con reproduccin asexual por mitosis. Para superar las pocas desfavorables, iniciaron

la esporulacin, es decir, la emisin de esporas (mitosporas). Posteriormente habra procesos de intercambio de material gentico (sexualidad) que acabaran en la formacin de individuos diploides, mediante fusin. Para recuperar la dotacin haploide se debi iniciar la meiosis. En un principio deba producirse inmediatamente despus de la formacin del cigoto diploide (ciclo haploide), posteriormente se debi alargar el estado diploide, dadas sus ventajas, apareciendo el ciclo diplohaplonte y, finalmente, el ciclo diploide.

Profase I. En esta fase se constituyen los cromosomas al enrollarse y condensarse las molculas de ADN. A diferencia de la mitosis, los dos cromosomas homlogos se juntan, formando un par denominado bivalente, y entre ellos se produce un intercambio de fragmentos de ADN. Otra diferencia es que esta profase puede durar hasta meses o aos segn la especie. 1. Leptoteno. Los filamentos de ADN se condensan y forman los cromosomas. Como estos filamentos ya estn duplicados pero no separados, los cromosomas presentan dos cromtidas. Por ello, en los cromosomas metacntricos, del nico centrmero surgen cuatro brazos. 2. Zigoteno. Cada cromosoma reconoce a su homlogo y se junta ntimamente a l; este proceso se denomina sinapsis. El apareamiento es total, gen a gen homlogo. Es posible gracias al denominado complejo sinaptinmico. ste est constituido por un filamento proteico que se forma al lado de una cromtida, el denominado eje lateral, un filamento proteico intermedio, el llamado eje central, y el eje lateral del cromosoma homlogo con el cual se aparea. Posiblemente, la cromatina induce en los ejes una estructura en dientes de llave, que posibilita su coincidencia ordenada (fig. 12). 3. Paquiteno. Empieza una vez acabada la sinapsis y termina cuando empieza la separacin o desinapsis. En ella los dos cromosomas homlogos permanecen juntos, formando un bivalente, y dos de las cuatro cromtidas, las que estn juntas, se entrecruzan al menos en un punto, y generalmente en dos o tres. El entrecruzamiento consiste en la rotura de las dos dobles hlices y su posterior unin alternada, producindose una recombinacin gentica, al unirse en una sola fibra parte de los genes de una cromtida; por ejemplo, la materna con parte de los de la otra, la paterna. En esta fase, al estar tan juntos los dos cromosomas, no se pueden observar los entrecruzamientos, pero s unas estructuras proteicas sinaptinmicas, los ndulos de recombinacin, posiblemente responsables de los entrecruzamientos. 4. Diploteno. Los dos cromosomas homlogos tienden a separarse (desinapsis) evidencindose los puntos de unin, llamados quiasmas. 5. Diacinesis. Los cromosomas aumentan su condensacin, por lo que en cada bivalente no slo se distinguen los dos cromosomas homlogos, sino que en cada uno se diferencian las dos cromtidas hermanas. Adems, se aprecian los quiasmas existentes entre dos cromtidas homlogas.
185

4. Etapas en el proceso generador de clulas con la mitad de cromosomas

El proceso generador de clulas con la mitad de cromosomas se denomina meiosis, trmino que deriva de meios que significa menos. La meiosis comprende dos divisiones sucesivas denominadas primera divisin meitica (meiosis I) y segunda divisin meitica (meiosis II). La primera es una divisin reduccional, ya que las clulas hijas tienen la mitad de cromosomas que la clula madre, mientras que la segunda es una divisin ecuacional, pues las clulas hijas tienen el mismo nmero de cromosomas que la clula madre; es parecida a una divisin mittica. As, por ejemplo, en el caso de una clula diploide (2 n), en la primera divisin se obtienen dos clulas haploides (n), y en la segunda cuatro clulas haploides. En este caso la meiosis se puede definir como el paso de una clula diploide (2 n) a cuatro clulas haploides (n), mediante dos divisiones consecutivas.
Meiosis

1 (2 n)

meiosis I

2 (n)

meiosis II

4 (n)

Si no se produjera la meiosis, los gametos tendran el mismo nmero de cromosomas que las clulas somticas, y, despus de cada fecundacin, la clula resultante (cigoto) tendra el doble de cromosomas. La repeticin, generacin tras generacin, de esta duplicacin, aumentara indefinidamente el nmero de cromosomas. Antes de iniciarse la primera divisin meitica, al igual que en la divisin con mitosis, hay un perodo de interfase, en el que se duplica el ADN, siendo la fase S bastante ms larga. En cambio, en la interfase previa a la segunda divisin meitica no hay duplicacin del ADN. As pues, tras una sola duplicacin sigue la meiosis, que son dos divisiones. Cada una de ellas presenta una divisin del ncleo o cariocinesis y una divisin del citoplasma o citocinesis.

I Primera divisin meitica

Comprende cuatro fases: profase I, metafase I, anafase I y telofase I. La ms larga y compleja es la profase I que, para su mejor comprensin, se subdivide en cinco subfases, denominadas leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis (fig. 11).

Cromosomas homlogos

Inicio de la sinapsis Centrmero

Ndulo de recombinacin produciendo un entrecruzamiento Bivalente

PROFASE I

Bivalente ( ttrada) Leptoteno Zigoteno Paquiteno Diploteno

Quiasma: unin temporal resultante de un entrecruzamiento. Aparece en la desinapsis.

Diacinesis Las dos cromtidas hermanas de un solo cromosoma

METAFASE I

ANAFASE I

TELOFASE I

Bivalente: las cuatro cromtidas de los dos cromosomas homlogos unidos Citocinesis e intercinesis PROFASE II

METAFASE II

ANAFASE II

n TELOFASE II

11 Meiosis de una clula 2 n en que n 2.

186

Interfase

Cromtidas hermanas Cromosomas homlogos Cromtidas hermanas

Leptoteno

Metafase I. La envoltura nuclear y los nuclolos han desaparecido y los bivalentes se disponen en el plano ecuatorial de la clula. A diferencia de la metafase mittica, las fibras que salen de los cinetocoros de las dos cromtidas hermanas no se dirigen a polos opuestos sino al mismo polo, por lo que no se separarn, no darn lugar a dos cromosomas de una sola cromtida, sino a uno solo de dos cromtidas. Anafase I. Los dos cromosomas homlogos que forman los bivalentes se separan y migran, cada uno constituido por dos cromtidas, hacia polos opuestos.

Zigoteno

Telofase I. En unas especies los cromosomas se desespiralizan algo y se forma un envoltura nuclear, que dura muy poco. En otras no sucede ninguna de las dos cosas y los cromosomas inician directamente la meiosis II.
Complejo sinaptinmico eje lateral proteico eje central proteico eje lateral proteico Ndulo de recombinacin

Paquiteno

I Segunda divisin meitica

Est precedida de una breve interfase, denominada intercinesis, en la que nunca hay duplicacin del ADN. Es parecida a una divisin mittica, salvo en que slo hay un cromosoma homlogo de cada tipo en vez de dos. Se distinguen las siguientes fases: Profase II. Se rompe la envoltura nuclear y se duplican los diplosomas.

Diploteno

Diacinesis

Metafase II. Los cromosomas se disponen en la regin ecuatorial. Anafase II. Las dos cromtidas de cada cromosoma se separan y los nuevos cromosomas hijos migran hacia polos opuestos. Telofase II. Los cromosomas se desespiralizan y se rodean de una envoltura nuclear apareciendo dos ncleos; posteriormente se produce la citocinesis o divisin del citoplasma.

12 Complejo sinaptinmico. Formacin (sinapsis) y desintegracin (desinapsis) del complejo sinaptinmico, y recombinacin gentica asociada a este proceso. CUADRO II. Comparacin entre la mitosis y la meiosis. MITOSIS MEIOSIS

1. La mitosis es una cariocinesis. 2. La mitosis da lugar a dos clulas con el mismo nmero de cromosomas que la clula madre. 3. Durante la profase no hay ni sinapsis, ni entrecruzamiento, ni, por lo tanto, despus hay quiasmas. 4. Durante la anafase se separan las cromtidas hermanas.

5. Los cromosomas de las clulas hijas son idnticos (salvo mutacin) a los de la clula madre. 6. La mitosis se da generalmente en las clulas madres de las clulas somticas.

1. La meiosis abarca dos cariocinesis y dos citocinesis. 2. La meiosis da lugar a cuatro clulas con la mitad de cromosomas que la clula madre. 3. Durante la profase hay sinapsis y entrecruzamiento, y, por lo tanto, despus hay quiasmas. 4. Durante la anafase I no se separan las cromtidas hermanas sino que emigran juntas hacia uno de los dos polos. 5. Aproximadamente la mitad de los cromosomas de las clulas hijas son el producto de la recombinacin gentica entre cromtidas de cromosomas homlogos. 6. La meiosis slo se da en las clulas madres de los gametos y de las meiosporas.

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ocumento 5
En los organismos unicelulares, la evolucin ha favorecido el crecimiento y la reproduccin rpidos, es decir, la vida celular corta. Esto favorece la gnesis rpida de variabilidad en la poblacin de organismos unicelulares y, por tanto, una mayor capacidad de supervivencia de la especie.

La duracin de la vida de las clulas

Durante la vida de la clula sus orgnulos no se mantienen fijos, sino que estn en renovacin constante. As, las membranas citoplasmticas y las membranas del sistema endomembranoso (retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, vesculas, etc.) continuamente se estn reciclando, y los cloroplastos y las mitocondrias continuamente se estn dividiendo para dar lugar a nuevos cloroplastos y nuevas mitocondrias. Por ejemplo, en los hepatocitos humanos (clulas del hgado), que suelen vivir unos 150 das, sus mitocondrias no duran ms de 10 das, por lo que deben dividirse al menos unas 15 veces. En realidad, muchas son destruidas por los lisosomas y no llegan a dividirse. Los eritrocitos provienen de clulas que han perdido el ncleo y, por tanto, no pueden reproducirse. Viven unos 110 das circulando por la sangre. Las clulas de las fibras musculares esquelticas y las neuronas, que son clulas muy especializadas, tambin carecen de capacidad de reproduccin. Suelen mantenerse vivas durante aos, la gran mayora durante toda la vida del individuo.

Paramecio en divisin. Los organismos unicelulares se reproducen y crecen de forma muy rpida.

Actividades
1. Relaciona los conceptos de ambas columnas: Clula somtica Fase M Fase S Cromosoma anafsico Gameto Fase Go Cromosoma metafsico Microtbulos Clula haploide Diferenciacin celular Clula diploide Divisin celular Duplicacin del ADN Una cromtida Material pericentriolar Dos cromtidas g) Cuntos gametos diferentes se podran formar, aunque no se produjera ningn entrecruzamiento, si la clula inicial tuviera 6 cromosomas? h) Indica si las siguientes frases son verdaderas o no, y el por qu: En los humanos las nicas clulas que experimentan meiosis son las sexuales. Las nicas clulas que experimentan meiosis son las clulas madres de los gametos. En los vegetales los gametos siempre aparecen por meiosis. Las esporas son clulas propias de la reproduccin asexual. Una cromtida es portadora del mismo mensaje gentico que el cromosoma del que procede. i) Cuntos cromosomas hay en una clula humana en anafase II y en metafase I? j) Cuntas clulas se forman despus de 5, de 10 y de 15 divisiones? Qu frmula se podra aplicar para averiguarlo? k) Canto ADN presentaba una clula en la fase G1, en la metafase y en la anafase, si en el ncleo en reposo tiene 0,8 pg (picogramos)? l) Diferencia entre endomitosis, mitosis, pleuromitosis y amitosis. ll) Infrmate sobre el ciclo reproductor de las medusas y representa esquemticamente el proceso.

2. Responde a las siguientes cuestiones: a) Cules son las principales diferencias entre la mitosis y la meiosis? b) Qu diferencias hay entre cromtidas hermanas y cromtidas homlogas? c) Por qu crees que en el reino vegetal la reproduccin asexual est ms extendida que en el reino animal? d) Puede haber clulas humanas con un nmero impar de cromosomas? Y con 24 tipos de cromosomas? Y con 22 tipos de cromosomas? e) Una clula presenta 5 cromosomas, constituidos por una sola cromtida, en cada uno de los polos. En qu fase mittica o meitica se encuentra? f) Dibuja una clula en que 2 n 6 en estado de profase y anafase mitticas y en profase I y anafase I meiticas.

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LABORATORIO

Mitosis en la raz de cebolla

Material necesario
Papel de filtro. Portaobjetos y cubreobjetos. Cuentagotas. Agujas enmangadas. Tijeras finas. Vidrio de reloj. Vaso de precipitados. Pinzas finas. Lanceta. Mechero. Bulbo de cebolla. Orcena A y B. Microscopio.
Tijeras finas Mechero Pinzas finas Cuentagotas Vidrio de reloj Vaso de precipitados Lanceta Cubreobjetos

Portaobjetos

Agujas enmangadas

Protocolo
1. Mantener varios das un bulbo de cebolla sobre un vaso lleno de agua, de forma que la parte inferior del bulbo, de donde surgen las races, est en contacto con el agua. Para sostener la cebolla pueden utilizarse tres palillos higinicos clavados en dicho bulbo. 2. Cuando las races hayan crecido unos tres centmetros, cortar con las tijeras los cuatro milmetros finales y colocarlos en un vidrio de reloj con dos milmetros de orcena A. Despus calentar a la llama del mechero hasta que aparezcan unos vapores tenues. Se debe procurar que durante este proceso la temperatura no supere en ningn momento los 60 C. Para comprobarlo, constantemente se ha de retirar el vidrio de reloj de encima de la llama, y apoyarlo sobre el dorso de la mano, que en ningn caso ha de notar sensacin de quemadura. 3. Utilizando unas pinzas finas, colocar uno de los trozos de raz sobre un portaobjetos agregando varias gotas de orcena B con el cuentagotas. 4. Mediante una lanceta, cortar los dos milmetros finales del trozo de raz y retirar el resto. Colocar encima un cubreobjetos y tres o cuatro tiras de papel de filtro. A continuacin hacer una ligera presin con el dedo pulgar, empezando suavemente y luego algo ms fuerte, procurando no romper el cubreobjetos, con el fin de extender las clulas.

5. Observar al microscopio a 600 o preferiblemente ms aumentos. Segn la suerte, se pueden ver clulas en las distintas fases de la divisin mittica. 6. Anotar todas las incidencias y realizar dibujos grandes de las diferentes fases que se han podido reconocer al microscopio.

Mitosis en el meristemo de la raz de una cebolla.

189

12

El metabolismo celular. El catabolismo

N D I C E
INFORMACIN 1 El metabolismo celular.
Concepto de metabolismo. Tipos de metabolismo. El ATP.

Planta de fermentacin de la cerveza. En la elaboracin de la cerveza interviene un importante proceso catablico: la fermentacin alcohlica, llevada a cabo por unas enzimas especiales contenidas en levaduras anaerbicas facultativas del gnero Saccharomyces.

2 El catabolismo.
Concepto de catabolismo. Tipos de catabolismo. El catabolismo de los glcidos. El catabolismo de los lpidos. El catabolismo de las protenas. El catabolismo de los cidos nucleicos. Las fermentaciones.

ACTIVIDADES

En el interior de las clulas existe un intrincado y complejo sistema de reacciones qumicas necesarias para la supervivencia de la clula y del organismo entero. Unas molculas se deshacen para obtener energa y otras se construyen gracias a molculas ms simples. Todo se est transformando constantemente en las clulas y la energa que se desprende al romperse las biomolculas se almacena en forma de ATP. Se necesitan tambin enzimas que catalizan reacciones especficas, coenzimas (NAD , FAD) que se oxidan o reducen segn la conveniencia, y molculas transportadoras de electrones. Como resultado de ello tambin se producen molculas que no tienen utilidad y deben ser eliminadas. Todo esto es lo que se conoce como metabolismo.

190

El metabolismo celular

1. Concepto de metabolismo
El metabolismo es el conjunto de reacciones qumicas que se producen en el interior de las clulas y que conducen a la transformacin de unas biomolculas en otras. Las distintas reacciones qumicas del metabolismo se denominan vas metablicas y las molculas que en ellas intervienen se llaman metabolitos. Todas las reacciones del metabolismo estn reguladas por enzimas, que son especficas para cada metabolito inicial o sustrato y para cada tipo de transformacin. Las sustancias finales de una va metablica se denominan productos. Las conexiones existentes entre diferentes vas metablicas reciben el nombre de metabolismo intermediario. Se pueden considerar dos fases en el metabolismo: una de degradacin de materia orgnica o catabolismo y otra de construccin de materia orgnica o anabolismo (cuadro I). El catabolismo es la transformacin de molculas orgnicas complejas en otras ms sencillas, proceso en el que se libera energa que se almacena en los enlaces fosfato del ATP. El anabolismo es la sntesis de molculas orgnicas complejas a partir de otras biomolculas ms sencillas, para lo cual se necesita suministrar energa, proporcionada por los enlaces fosfato del ATP. Las molculas del ATP pueden proceder de las reacciones catablicas, de la fotosntesis (en las plantas y algunos microorganismos) o de la quimiosntesis (en otros microorganismos).

En cuanto a las fuentes de energa para las reacciones metablicas, si la fuente de energa es la luz, se habla de fotosntesis, mientras que si se trata de energa desprendida en reacciones qumicas, se habla de quimiosntesis (cuadro II).

3. El ATP
El adenosn-trifosfato o ATP (fig. 1) es un nucletido de enorme importancia en el metabolismo, ya que puede actuar como molcula energtica, al ser capaz de almacenar o ceder energa gracias a sus dos enlaces ster-fosfricos que son capaces de almacenar, cada uno de ellos, 7,3 kcal/mol. Al hidrolizarse, se rompe el ltimo enlace ster-fosfrico (desfosforilacin) producindose ADP (adenosn-difosfato) y una molcula de cido fosfrico (H3PO4) que se suele simbolizar como Pi, liberndose adems la energa citada anteriormente: ATP H2O ADP Pi energa (7,3 kcal/mol) El ADP es capaz de ser hidrolizado tambin, rompindose el otro enlace ster-fosfrico con lo que se liberan otras 7,3 kcal/mol y se producen AMP (adenosn-monofosfato) y una molcula de cido fosfrico: ADP H2O AMP Pi energa (7,3 kcal/mol) La sntesis de ATP puede realizarse por dos vas: Fosforilacin en el nivel de sustrato. Es la sntesis de ATP gracias a la energa que se libera de una biomolcula (sustrato) al romperse alguno de sus enlaces ricos en energa, como ocurre en algunas reacciones de la gluclisis y del ciclo de Krebs. Las enzimas que regulan estos procesos se denominan quinasas. Mediante enzimas del grupo de las ATP-sintetasas. Es la sntesis de ATP mediante las enzimas ATPasas existentes en las crestas de las mitocondrias o en los tilacoides de los cloroplastos, cuando dichas enzimas son atravesadas por un flujo de protones (H). Se dice que el ATP es la moneda energtica de la clula, pues representa la manera de tener almacenado un tipo de energa de pronto uso. En todas las reacciones metablicas en las que se necesita energa para la biosntesis de molculas se utiliza el ATP, como tambin en la contraccin muscular, en el movimiento celular, ciliar y flagelar, en el transporte activo a travs de las membranas, etc. (fig. 2). En ocasiones son utilizados para el mismo fin otros nucletidos como el GTP (guanidn-trifosfato), el UTP (uridn-trifosfato) o el CTP (citidn-trifosfato).
191

2. Tipos de metabolismo
Para crecer y desarrollarse, todos los seres vivos necesitan incorporar materia, requiriendo todo tipo de tomos. De stos, los ms importantes son los tomos de carbono que, gracias a sus enlaces covalentes, forman el esqueleto de todas las biomolculas orgnicas. Si la fuente de carbono es el dixido de carbono (CO2) atmosfrico (o sea, la forma oxidada del carbono o carbono inorgnico), se habla de metabolismo auttrofo y si la fuente es la propia materia orgnica (formas ms o menos reducidas del carbono como metano, glucosa, grasas, etc., es decir, el llamado carbono orgnico), se habla de metabolismo hetertrofo.

REACCIONES CATABLICAS

REACCIONES ANABLICAS

Son reacciones de degradacin. Son reacciones de oxidacin. Desprenden energa. A partir de muchos sustratos diferentes se forman casi siempre los mismos productos (CO2, cido pirvico, etanol y pocos ms). Hay, pues, convergencia en los productos.

Son reacciones de sntesis. Son reacciones de reduccin. Precisan energa. A partir de unos pocos sustratos se pueden formar muchos productos diferentes. Hay divergencia en los productos.

CUADRO I. Caractersticas de las dos fases del metabolismo.

Tipos de organismos segn su metabolismo Fotolittrofos (o fotoauttrofos) Fotoorgantrofos (o fotohetertrofos) Quimiolittrofos (o quimioauttrofos) Quimioorgantrofos (o quimiohetertrofos)

Origen de la energa Luz Luz Reacciones qumicas Reacciones qumicas

Origen del carbono CO2 Orgnico CO2 Orgnico

Ejemplos Plantas superiores, algas, cianobacterias, bacterias purpreas del azufre y bacterias verdes del azufre Bacterias purpreas no sulfreas Bacterias nitrificantes, bacterias incoloras del azufre Animales, hongos, protozoos y muchas bacterias

CUADRO II. Modalidades del metabolismo.

NH2 N N N N O CH2 O O P OH O OP OH O OP OH H2O Adenosn - trifosfato (ATP) H2O H2O OH N

NH2 N N N O CH2 O O P OH O OP OH O OH HO P OH OH

Adenosn - difosfato (ADP) + cido fosfrico ADP Pi Energa (7,3 kcal/mol)

Esquema de la reaccin: ATP H2O

Enlace rico en energa

1 Estructura del ATP y reaccin de su desfosforilacin.

Energa liberada Energa producida en reacciones qumicas ATP Biosntesis Energa liberada Transporte activo a travs de membranas ADP Pi Movimiento celular Energa liberada

ocumento 1

Consumo y regeneracin del ATP

Como dato significativo, se puede indicar que una sola bacteria requiere, para mantener su metabolismo a pleno ritmo, alrededor de dos millones y medio de molculas de ATP por segundo. Las molculas de ADP formadas no llegan a encontrarse nunca en altas concentraciones en el medio celular, ya que inmediatamente son fosforiladas, formndose de nuevo ATP. Se calcula que el 95 % de ATP formado en las clulas eucariotas hetertrofas se genera en el interior de las mitocondrias.

Energa solar

2 Formacin del ATP y utilidades de la energa que contienen sus enlaces ster-fosfricos.

192

CUESTIONARIO 1
1. Qu crees que ocurrira si la energa que encierran los enlaces de los compuestos orgnicos no se liberara gradualmente almacenndose en millones de molculas de ATP, sino que se liberara de forma sbita? 2. Cul es la principal diferencia que hay entre la fotosntesis y la quimiosntesis? 3. En general, qu le suministran a las clulas los procesos catablicos? 4. Qu tipo de metabolismo pueden tener las bacterias que viven en las galeras de una mina de cobre? Explica el porqu. 5. Qu diferencia a los organismos littrofos de los organtrofos? Cita ejemplos de ellos. 6. Dnde reside la importancia de la molcula de ATP en el metabolismo? 7. Qu tipo de metabolismo pueden tener las bacterias que viven en los fondos pantanosos donde hay mucha acumulacin de materia orgnica en descomposicin y adonde llega la luz solar? Explica tus motivos. 8. Podramos establecer un cierto paralelismo funcional entre el flash de una cmara fotogrfica y el ATP? Razona tu respuesta.

El catabolismo

Por ejemplo, en la molcula anterior podra ser as: CH3 CH2 CH2 ... BO CH3 CH2 CHOH ... B Un tomo slo puede perder electrones (oxidacin) si hay otro tomo que los acepta (reduccin). Por ello estos procesos se denominan reacciones de oxidacin-reduccin (reacciones redox). Las reacciones catablicas son reacciones redox. En ellas unos compuestos se oxidan y otros se reducen. Una molcula se oxida cuando pierde electrones y otra se reduce cuando los gana; cuando una molcula pierde hidrgenos (deshidrogenacin), tambin se oxida, ya que un tomo de hidrgeno se compone de un protn y de un electrn. De manera equivalente, una molcula se reduce cuando gana tomos de hidrgeno. En la materia orgnica, para que una molcula pueda deshidrogenarse, ha de haber otra que acepte esos hidrgenos (molcula aceptora de hidrgeno). Los tomos de hidrgeno desprendidos en las reacciones de oxidacin son captados por unas molculas llamadas transportadoras de hidrgeno, como son el NAD (nicotinamida-adenn-dinucletido), el NADP (nicoti-namida-adenn-dinucletido fosfato) y el FAD (flavn-adenn-dinucletido), hasta que finalmente son traspasados a la molcula aceptora final de hidrgeno, que se reduce. En las reacciones de oxidacin y reduccin, frecuentemente los protones (H) y los electrones (e) van separados; estos ltimos, antes de llegar a la molcula aceptora final de electrones, son captados por los llamados transportadores de electrones, que son los citocromos. El paso de los electrones de un citocromo a otro conlleva una disminucin del nivel energtico del electrn y la liberacin de una energa que es utilizada para fosforilar el ADP y formar molculas de ATP (fig. 3). Si se trata de una oxidacin por oxigenacin, ha de haber una sustancia donadora de tomos de oxgeno.
193

1. Concepto de catabolismo
El catabolismo es la fase degradativa del metabolismo y su finalidad es la obtencin de energa. En l las molculas orgnicas son transformadas en otras ms sencillas que intervendrn en otras reacciones metablicas hasta transformarse en los productos finales del catabolismo, que generalmente son expulsados de la clula, los llamados productos de excrecin (CO2, NH3, urea, cido rico, etc.). La energa liberada en el catabolismo es almacenada en los enlaces ricos en energa del ATP y posteriormente podr ser utilizada para reacciones de sntesis orgnicas o para realizar actividades celulares. El catabolismo es semejante en los organismos auttrofos y en los hetertrofos. Las reacciones del catabolismo son reacciones de oxidacin, es decir, de prdida de electrones. Dado que la materia que experimenta el catabolismo es materia orgnica, constituida bsicamente por carbono e hidrgeno, la forma de oxidarse es mediante la prdida de tomos de hidrgeno que se encuentran unidos al carbono (deshidrogenacin) o por ganancia de tomos de oxgeno (oxigenacin). Deshidrogenacin. Una molcula orgnica se oxida al perder tomos de hidrgeno. Veamos un ejemplo de cmo se puede producir esta deshidrogenacin en una molcula orgnica de esqueleto carbonado, establecindose un doble enlace entre dos carbonos. CH3 CH2 CH2 ... B CH3 CH CH ... BH2 Oxigenacin. Una molcula orgnica se oxida al incorporar tomos de oxgeno.

Oxidacin

Prdida de electrones

Molcula que se va a oxidar

Electrones en diferentes niveles energticos

Molcula oxidada

Molculas aceptoras de electrones Liberacin de energa

Aceptor final de electrones. En el catabolismo aerbico es el oxgeno: 1/2 O2 2 e 2 H H2O

ADP P

ATP H2O

3 Transporte de electrones. Los electrones liberados por la molcula que se oxida ocuparn en los tomos de la molcula aceptora niveles de menor energa. Esta prdida energtica es la que se utiliza para realizar los enlaces fosfato enlaces ricos en energa entre el ADP y el Pi (cido fosfrico) y sintetizar la molcula de ATP.

ocumento 2
1,33:1), mientras que el nmero de oxgenos por tomo de carbono ha permanecido igual (6/6 a 3/3, esto es, un tomo de oxgeno por cada tomo de carbono). Por otro lado, como el oxgeno es ms electronegativo que el carbono, es decir, atrae con ms fuerza que el carbono a los electrones compartidos, cuantos ms oxgenos acompaantes tenga el carbono, menos electrones poseer en propiedad. Un ejemplo de oxidacin por deshidrogenacin y oxigenacin es el paso de cido pirvico (CH3COCOOH) a dixido de carbono (CO2). Se observa que ya no queda ningn tomo de hidrgeno enlazado al carbono y que el nmero de oxgenos por tomo de carbono ha aumentado de 3/3 (relacin 1:1) a 2 (relacin 2:1).

Las bases electroqumicas de las oxidaciones orgnicas

El motivo de que la oxidacin de una molcula orgnica se produzca tanto por la prdida de hidrgenos (deshidrogenacin) como por la ganancia de oxgenos (oxigenacin) se debe a lo siguiente: Por un lado, a que los tomos de carbono, al perder hidrgenos, pierden protones (H) y electrones (e), ya que H H e. Un ejemplo de oxidacin por deshidrogenacin es el paso de glucosa (C6H12O6) a cido pirvico (CH3COCOOH). Se puede observar que el nmero de hidrgenos por tomo de carbono ha disminuido de 12/6 (relacin 2:1) a 4/3 (relacin

2. Tipos de catabolismo
Segn sea la naturaleza de la sustancia que se reduce, es decir, que acepta los hidrgenos, se distinguen dos tipos de catabolismo: la fermentacin y la respiracin. En la fermentacin la molcula que se reduce es siempre orgnica. En la respiracin la molcula que se reduce es un compuesto inorgnico, por ejemplo O2, 2 NO 3 , SO4 , etc. Si es el oxgeno (O2) se denomina respiracin aerbica, y si es una sustancia distinta del oxgeno, por ejemplo, el NO3, SO42, etc., se denomina respiracin anaerbica. En la respiracin aerbica al reducirse el O2, mediante la aceptacin de los hidrgenos, se forma agua, mientras que en la respiracin anaerbica, al reducirse el ion nitrato NO3 se forma ion nitrito NO2, y al reducirse el ion sulfato SO42 se forma ion sulfito SO 32, etc.
194

3. El catabolismo por respiracin

Las reacciones catablicas por respiracin son diferentes segn los sustratos orgnicos a degradar (glcidos, lpidos, protenas, cidos nucleicos).

3.1. El catabolismo de los glcidos

En el tubo digestivo de los animales y mediante los procesos digestivos, los polisacridos o disacridos de la ingesta del animal son hidrolizados y convertidos en sus unidades monosacridas como la glucosa, la fructosa y la galactosa. Las reservas de glucgeno del tejido muscular de los animales tambin pueden ser hidrolizadas, cuando se requiere energa para el ejercicio muscular, en unidades de glucosa. Anlogamente, en las clulas vegetales, las reservas de almidn son hidrolizadas a molculas de glucosa. La glucosa es el ms abundante de los monosacridos, por lo que su proceso degradativo puede servir de ejemplo del catabolismo respiratorio de los glcidos.

1. Gluclisis Por respiracin Catabolismo de la glucosa Por fermentacin 2. Respiracin 1. Gluclisis 2. Fermentacin
4 Tipos de catabolismo de la glucosa.

1. Ciclo de Krebs 2. Cadena respiratoria

CH2OH H H OH HO H Glucosa ATP ADP Glucosa-6-fosfato 1 2 Fructosa-6-fosfato ATP 3 ADP Fructosa-1,6-difosfato OH H OH O H

COOH CO CH3 cido pirvico ATP 9 ADP cido-2-fosfoenolpirvico H2O CH2OPO3H2 CO CH2OH Dihidroxiacetona-fosfato 4 Gliceraldehdo-3-fosfato CHO HCOH CH2OPO3H2 NAD

cido-2-fosfoglicrico 7 cido-3-fosfoglicrico ATP ADP 6

H3PO4

5 NADH H

cido-1,3-difosfoglicrico COOPO3H2 HCOH CH2OPO3H2

5 Esquema de la gluclisis.

En la degradacin total por respiracin de la glucosa y hasta el aprovechamiento completo de toda la energa liberada, se distinguen dos fases: la gluclisis y la respiracin. En la respiracin se distinguen dos procesos, el ciclo de Krebs y el transporte de electrones en la cadena respiratoria (fig. 4).

2. La glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa6-fosfato. 3. La fructosa-6-fosfato se fosforila a fructosa1,6-difosfato gracias a otra molcula de ATP. 4. La fructosa-1,6-difosfato se rompe en dos molculas: la gliceraldehdo-3-fosfato y la dihidroxiacetona-fosfato, ambas de tres carbonos cada una. 5. La gliceraldehdo-3-fosfato se fosforila gracias a un grupo fosfrico inorgnico y se oxida, formndose cido 1,3-difosfoglicrico; los hidrgenos perdidos van a parar a la coenzima NAD, que se reduce. La dihidroxiacetonafosfato puede isomerizarse a gliceraldehdo3-fosfato, de modo que a partir del paso 5, los productos de la gluclisis deben multiplicarse por dos.
195

I La gluclisis
Se llama tambin ruta metablica de EmbdenMeyerhoff y, en ella, la glucosa se escinde en dos molculas de cido pirvico. Esta primera fase del catabolismo glucdico es totalmente anaerobia, pues no se necesita la presencia de oxgeno, y se lleva a cabo en el citoplasma celular. Los diferentes pasos de la gluclisis son los siguientes (fig. 5): 1. La glucosa se fosforila a glucosa-6-fosfato gracias a la hidrlisis de una molcula de ATP.

6. El cido 1,3-difosfoglicrico se desfosforila, transformndose en cido 3-fosfoglicrico y formndose una molcula de ATP. 7. Se traspasa el grupo fosfrico del cido 3-fosfoglicrico al carbono 2, obtenindose cido 2-fosfoglicrico. 8. Formacin de un doble enlace en el cido 2fosfoglicrico, obtenindose cido fosfoenolpirvico (PEP) y una molcula de agua.

9. Desfosforilacin del PEP, obtenindose como producto final cido pirvico y una molcula de ATP. El balance final de la gluclisis ser:
2 NAD 2 NADH 2 H

C6H12O6
glucosa 2 ADP 2 Pi 2 ATP

2 (CH3COCOOH)
cido pirvico

Membrana externa

CH3COCOOH cido pirvico

(3 C)

CITOPLASMA Membranas mitocondriales

SISTEMA PIRUVATO DESHIDROGENASA

NAD

CoASH

NADH H Membrana interna

CO2

CH3COSCoA Acetil-S-CoA (2 C)

MATRIZ MITOCONDRIAL CoASH

H2O 1

cido oxalactico

(4 C)

(6 C)

cido ctrico

NADH H 8 NAD cido mlico (4 C) (6 C) cido isoctrico NAD CICLO DE KREBS CO2 3 NADH H 2

H2O

cido fumrico

(4 C)

(5 C)

cido -cetoglutrico 4 CoASH NAD

FADH2 6 FAD (4 C) cido succnico GTP GDP Pi CoA SH 5 Succinil CoA CO2

NADH H (4 C)

6 Esquema del ciclo de Krebs.

196

I La respiracin: el ciclo de Krebs

El cido pirvico producido en la gluclisis, para poder ser oxidado por respiracin debe entrar en el interior de las mitocondrias atravesando la doble membrana de stas. Para ello sufre un complicado proceso de oxidacin y descarboxilacin (prdida de un tomo de carbono) en el que intervienen varias enzimas y coenzimas (el denominado sistema piruvato-deshidrogenasa), transformndose en acetil-S-CoA. Esta molcula se puede ya incorporar al ciclo de Krebs, cuyos pasos son los siguientes (fig. 6): 1. Unin del acetil-S-CoA (2 C) con el cido oxalactico (4 C) para formar el cido ctrico (6 C). 2. El cido ctrico se isomeriza a cido isoctrico. 3. El cido isoctrico se descarboxila y se oxida perdiendo hidrgenos, con lo que se forma el cido -cetoglutrico (5 C). 4. El cido -cetoglutrico se descarboxila y deshidrogena, formndose succinil-CoA (4 C) y necesitndose para la reaccin la ayuda del CoA. 5. El succinil-CoA pierde el CoA y se transforma en cido succnico, liberndose una energa que es suficiente para fosforilar una molcula de GDP y formar una de GTP. 6. El cido succnico se oxida a cido fumrico. 7. El cido fumrico se hidrata y se transforma en cido mlico. 8. El cido mlico se oxida y se transforma en cido oxalactico, con lo que se cierra el ciclo. La reaccin global del sistema piruvato-deshidrogenasa y del ciclo de Krebs es (sin poner el CoA): CH3COCOOH 2 H2O 4 NAD FAD GDP Pi 3 CO2 4 NADH 4 H FADH2 GTP Como en el ciclo de Krebs penetra un compuesto de dos C (el acetil-S-CoA) y se producen dos descarboxilaciones (pasos 3 y 4), la molcula queda totalmente degradada. Adems, como en la gluclisis se pueden formar dos molculas de cido pirvico, para la degradacin total de una molcula de glucosa son necesarias dos vueltas del ciclo de Krebs. Aparentemente, en los reactivos faltan dos tomos de H y uno de O; ello se debe a que estn contenidos en el GDP y en el Pi, que al unirse para formar GTP los liberan y quedan formando productos.

energticas formadas (2 ATP 2 GTP), pero sin embargo en estas dos fases del catabolismo se han reducido varias molculas de coenzimas como el NAD y el FAD que se han convertido en NADH H y FADH2. El denominado transporte de electrones en la cadena respiratoria es la segunda y ltima etapa de la respiracin. Su finalidad es la oxidacin de las coenzimas reducidas (NADH H y FADH2) y consiste en una cadena de molculas orgnicas, que se reducen y se oxidan, a medida que se van traspasando unas a otras los protones y los electrones procedentes del NADH y del FADH2. Esta serie de molculas que se reducen y se oxidan se llama cadena transportadora de electrones o cadena respiratoria (fig. 7). En ella se distinguen unas molculas que se ocupan de transportar simultneamente electrones y protones (H), como el complejo NADH deshidrogenasa (que contiene flavn mononucletido o FMN) y el complejo coenzima Q reductasa o ubiquinona, y otras molculas que slo transportan electrones, como los citocromos, en los que se distingue el complejo de citocromos b - c1, y el complejo citocromo-oxidasa (o complejo de citocromos a - a3). En las clulas eucariotas, las molculas que integran la cadena respiratoria se encuentran en las crestas de la membrana interna mitocondrial en el mismo orden en que se han citado.

E (voltios)
0,3 0,2 0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 Transporte de H y e Transporte de e

NADH H NAD FADH2 FAD NADH deshid. CoQ cit b cit c1 cit c cit a a3 2 e Salida de n H Salida de n H Salida de n H

Cada de energa de los e

1 O2 2

O2

I La respiracin: el transporte de electrones en la cadena respiratoria

El balance energtico de la gluclisis y del ciclo de Krebs es bastante reducido en cuanto a molculas

7 Esquema de la cadena respiratoria. El transporte de electrones es posible porque cada transportador tiene un potencial de reduccin (tendencia a dar electrones) inferior al anterior y superior al siguiente. El potencial de reduccin o potencial redox se expresa en voltios y en valores tanto ms negativos cuanto mayores sean.

197

Los transportadores de la cadena respiratoria se encuentran, pues, en el mismo orgnulo donde se lleva a cabo el ciclo de Krebs, existiendo una dependencia mutua de sustratos entre ste y la cadena respiratoria, puesto que esta ltima no puede iniciarse sin las coenzimas reducidas (NADH H y FADH2) que se producen en el ciclo de Krebs y ste no puede desarrollarse sin las coenzimas oxidadas (NAD y FAD) que se producen en la cadena respiratoria. As, por ejemplo, el NADH H cede sus protones y electrones al complejo NADH deshidrogenasa (con FMN), ste los cede a la coenzima Q, sta cede slo los electrones al citocromo b y, posteriormente, los electrones van pasando a los citocromos c1, a y a3. Finalmente, en la respiracin aerobia, los electrones son cedidos del citocromo a3 al oxgeno molecular, que es el aceptor final de electrones. En las bacterias, la cadena respiratoria est ubicada en los mesosomas. Cada transportador de electrones de la cadena se oxida al ceder electrones y el siguiente se reduce al aceptarlos. Como la energa liberada durante la oxidacin es mayor que la consumida para la reduccin, en cada paso hay un sobrante de energa que se invierte en la sntesis de ATP. El modelo ms aceptado para explicar este proceso es la hiptesis quimiosmtica de Mitchell (fig. 8). Segn esta teora, la energa liberada se invierte en provocar un bombeo de protones (H) desde la matriz mitocondrial al espacio intermembranal. Esto induce al establecimiento de un gradiente electroqumico, es decir, origina una diferencia de carga elctrica a ambos lados de la membrana interna. Cuando los protones (H) en exceso en el espacio intermembranoso

vuelven a la matriz mitocondrial, lo hacen atravesando las partculas F o complejos enzimticos ATP sintetasa, suministrndoles la energa necesaria para la sntesis de ATP. Este proceso se denomina fosforilacin oxidativa. Se ha calculado que, como los H bombeados en cada uno de los complejos NAD deshidrogenasa, citocromos b - c1 y citocromo-oxidasa, son suficientes para sintetizar un ATP, a partir de un NADH H que ingresa en la cadena respiratoria se obtienen 3ATP, mientras que a partir de un FADH2 slo se obtienen 2ATP, ya que el FADH2 se incorpora a la cadena respiratoria en el complejo coenzima Q reductasa. Al final de la cadena respiratoria aerbica los hidrgenos se unen al oxgeno y forman agua.

I Rendimiento energtico del catabolismo por respiracin de la glucosa

En la gluclisis, por cada molcula de glucosa que es degradada se forman dos molculas de cido pirvico, 2 NADH y 2 ATP. En el sistema piruvato deshidrogenasa y en el ciclo de Krebs se producen 1 GTP (equivalente a 1 ATP), 4 NADH y 1 FADH2. Si las dos molculas de cido pirvico obtenidas en la gluclisis inician el ciclo de Krebs, todos los productos de ste hay que multiplicarlos por dos: 2 GTP (equivalente a 2 ATP), 8 NADH y 2 FADH2. Las coenzimas reducidas pueden ingresar en la cadena respiratoria e inducir la fosforilacin oxidativa y la formacin de ATP. El resultado final (cuadro III) es la formacin de 38 molculas de ATP, dos de las cuales se han formado en el citoplasma (gluclisis) y las 36 restantes en la mitocondria. Adems, de las 38 molculas de ATP, 34 se han formado en las

ocumento 3
Este valor es muy alto si se compara con el de cualquier aparato dedicado a la conversin de energa no biolgica, como pueden ser los motores elctricos o de gasolina, que poseen un intervalo de eficiencia del 10 al 20 %. Las clulas, por lo tanto, tienen unos procesos muy eficaces de conversin energtica. Si las clulas tuvieran una eficacia de conversin del 10 al 20 %, como la de los motores, los animales tendran que comer vorazmente para poder sobrevivir.

La eficiencia de la respiracin celular

En todas las reacciones qumicas existe una variacin de energa libre (G), es decir, de energa contenida en las molculas, por el simple hecho de la rotura de enlaces entre los tomos y el establecimiento de otros nuevos. Las reacciones que producen una disminucin de la energa libre (G negativo) se llevan a cabo con facilidad y son las que liberan energa (exotrmicas); un buen ejemplo de ellas es la hidrlisis del ATP (G 7,3 kcal/mol). Segn la segunda ley de la Termodinmica estas reacciones contribuyen tambin a aumentar el desorden del universo. En el metabolismo celular, las reacciones catablicas tienen un G negativo, mientras que las anablicas lo tienen positivo. Se ha calculado que la cada de energa libre que ocurre durante todas las reacciones de la gluclisis, del ciclo de Krebs y de la cadena respiratoria es de G 686 kcal/mol. Como se conservan 266 kcal en los enlaces ricos en energa del ATP, resulta que la eficacia de la respiracin aerobia de la glucosa es de aproximadamente el 40 %.

Compuesto rico en energa

Podemos definir un compuesto rico en energa como aquel intermediario metablico cuyo potencial de transferencia de grupos es 7 kcal/mol. Siendo el potencial de transferencia de grupos la energa libre que el compuesto es capaz de transferir junto con el grupo transferido. ATP H2O ADP Pi ATP H2O AMP PPi G 7,3 kcal/mol G 8,2 kcal/mol

198

Espacio intermembranoso Complejo NADH-deshidrogenasa 2 H Complejo succinato coenzima Q reductasa Complejo cit. b - c1 2 H 2 e QH2 2 e 2 e
2 H 2e

Cit. c

Complejo cit. a - a3

ATP-sintetasa

2 H

2 H

2 H

Q
2 H 2 e

NADH H NAD

FADH2 FAD La coenzima Q o ubiquinona es lipdica y por ello se puede mover y transportar H y e Q 2 H 2 e QH2

ADP Pi

ATP 1 O2 2 e O2 2 H H2O 2 Matriz mitocondrial

Bombeo de protones (H) provocado por un flujo de electrones. Transporte de protones asociado a la coenzima Q. Transporte de electrones (e).

8 Transporte de electrones en la cadena respiratoria.

ATP-sintetasas gracias al transporte electrnico inducido por las coenzimas reducidas en la cadena respiratoria y 4 por fosforilacin en el sustrato (2 en la gluclisis y 2 en el ciclo de Krebs) (cuadro III). Como el ATP es capaz de almacenar una energa de aproximadamente 7 kcal/mol, resulta que la degradacin total de un mol de glucosa (180 g) rinde 266 kcal. 38 moles de ATP 7 kcal/mol ATP 266 kcal

CUESTIONARIO 2
1. Cul es el papel biolgico del NAD en el metabolismo celular? 2. De dnde proceden las dos molculas de CO2 desprendidas en el ciclo de Krebs? 3. Qu se entiende por fosforilacin oxidativa? Dnde se lleva a cabo? 4. Por qu el ciclo de Krebs se considera una va catablica aerbica si no se precisa oxgeno para llevarse a cabo? 5. Para qu es necesario el complejo enzimtico de la ATP-sintetasa en el catabolismo aerbico? Cmo funciona este complejo y dnde est situado a nivel celular? 6. En qu compartimentos celulares se realiza cada una de las fases de la degradacin aerbica de la glucosa? Qu molculas o iones atraviesan las membranas mitocondriales durante este proceso? 7. Qu relacin tienen los transportadores de electrones de la cadena respiratoria con la fosforilacin oxidativa? Por qu se libera energa en cada uno de los pasos de la cadena respiratoria?

CITOPLASMA Gluclisis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 ATP MITOCONDRIA (matriz)

(membr. inter.)

NADH H procedente de gluclisis . 2 (NADH H) . 6 ATP cido pirvico Acetil CoA. . . . . . . 2 (NADH H) . 6 ATP Ciclo de Krebs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 (NADH H) . 18 ATP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 (FADH2). . . 4 ATP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 GTP. . . . . . . 2 ATP

TOTAL

38 ATP

CUADRO III. Rendimiento energtico de la oxidacin completa de una molcula de glucosa.

199

3.2. El catabolismo de los lpidos

En los seres vivos las grasas tienen una gran importancia como combustibles orgnicos, dado su alto valor calrico: la degradacin de 1 g de grasa puede proporcionar hasta 9,5 kcal, por 4,2 kcal la de los glcidos y 4,3 kcal la de las protenas. El principal mecanismo de obtencin de energa de los lpidos lo constituye la oxidacin de los cidos grasos, que proceden de la hidrlisis de los lpidos saponificables, entre los que destacan los triglicridos y los fosfolpidos. Estas hidrlisis son catalizadas por lipasas especficas, que rompen las uniones tipo ster y liberan los cidos grasos de la glicerina: Triglicrido Glicerina 3 cidos grasos Fosfolpido Glicerina 2 cidos grasos 1 compuesto alcohlico H3PO4 La glicerina obtenida puede transformarse en dihidroxiacetona e integrarse en la segunda fase de la gluclisis, degradndose completamente en el ciclo de Krebs y obteniendo el rendimiento energtico correspondiente en la cadena respiratoria.

1. El cido graso queda activado al unirse con el CoA y se forma acil-CoA (de n carbonos), en una reaccin que requiere energa suministrada por el ATP y se realiza en el citoplasma. 2. El acil-CoA penetra en la mitocondria gracias a un transportador orgnico especial, la carnitina. 3. El acil-CoA sufre la primera oxidacin del carbono , formndose un acil-CoA insaturado (con un doble enlace) y 1 FADH2. 4. El acil-CoA se hidrata con lo que se forma un -hidroxiacil-CoA, sin doble enlace y con un grupo alcohol (OH) en el carbono . 5. El -hidroxiacil-CoA sufre la oxidacin del carbono , formndose un -cetoacil-CoA (con un grupo cetnico CO en el carbono ) y 1 NADH H. 6. El -cetoacil-CoA interacciona con una molcula de CoA, con lo que se rompe en dos molculas, un acetil-CoA de dos carbonos y un acil-CoA que posee dos carbonos menos (n-2) que el que inici el ciclo de la -oxidacin. La molcula de acil-CoA de dos carbonos menos (n-2) puede iniciar otro ciclo de -oxidacin y originar otro acetil-CoA y un acil-CoA de dos carbonos menos (n-4) y as sucesivamente hasta que se obtenga un acil-CoA de slo dos carbonos, es decir, un acetil-CoA. Las molculas de acetil-CoA formadas en los ciclos de -oxidacin pueden seguir la ruta catablica del ciclo de Krebs y degradarse totalmente por respiracin segn se ha explicado con anterioridad.

I La oxidacin de los cidos grasos

Los cidos grasos obtenidos en el citoplasma deben entrar en la mitocondria, donde sufren el proceso denominado -oxidacin o hlice de Lynen, que consiste en la oxidacin del carbono mediante las siguientes reacciones (fig. 9):

9 Esquema de la -oxidacin de los cidos grasos. En cada vuelta del ciclo se pierden dos carbonos, con lo que la molcula de cido graso se hace ms pequea. El proceso de -oxidacin se detiene cuando los productos finales son dos molculas de acetil-CoA, de slo dos carbonos cada una.
CITOPLASMA RCH2CH2COOH cido graso (n carbonos) CoA SH ATP AMP PP 1 2 Acil-CoA (n carbonos) RCOSCoA Acil-CoA (n 2 carbonos) 6 CH3COSCoA Acetil-CoA CoA SH Acetil-CoA Acetil-CoA Acetil-CoA Acetil-CoA Acetil-CoA Acetil-CoA 5 Oxidacin FADH2 FAD 3 RCHOHCH2COSCoA -Hidroxiacil-CoA Oxidacin NAD NADH H RCOCH2COSCoA -Cetoacil-CoA MATRIZ MITOCONDRIAL RCHCHCOSCoA Acil-CoA--insaturado H2O 4 Hidratacin

RCH2CH2COSCoA Acil-CoA

200

ocumento 4

8 Acetil-CoA 12 ATP/c. Krebs-c.resp 7 FADH2 2 7 (NADH H) 3 TOTAL

96 ATP 14 ATP 21 ATP 131 ATP

El consumo de alcohol y el catabolismo

Es conocido que los grandes consumidores de bebidas alcohlicas sufren frecuentemente graves afecciones en el hgado que les pueden llevar a la muerte. Cmo se producen estas cirrosis hepticas?, qu relacin tiene el metabolismo con el alcohol ingerido? Desde hace bastante tiempo, se sabe que el etanol (CH3CH2OH) de las bebidas alcohlicas es oxidado en las clulas hepticas a acetaldehdo (CH3CHO) en un proceso en el que se forma una molcula de NADH H. Con posterioridad, el acetaldehdo es oxidado a cido actico y finalmente ste a dixido de carbono (que es eliminado al exterior) y agua. El consumo excesivo y continuado de alcohol produce tal abundancia de NADH de origen etlico en las clulas, que disminuyen los procesos de la gluclisis y del ciclo de Krebs, que son los principales productores de esta coenzima reducida. La consecuencia de ello es que los monosacridos, los aminocidos y los cidos grasos no son catabolizados sino que son convertidos en grasas que se acumulan en las clulas hepticas. Al cabo de unos aos, que dependen de la persona y de la cantidad de alcohol consumido, las clulas hepticas, repletas de grasas, tienden a ir muriendo, produciendo una inflamacin del hgado, la denominada hepatitis alcohlica, y una disminucin importante de la actividad de este rgano. Conforme van muriendo ms clulas hepticas se van produciendo acmulos de tejido cicatrizal que interfieren en la llegada de sangre al hgado y en el metabolismo de las clulas que an quedan sanas. ste es el estado de la cirrosis heptica, situacin final en la que el hgado ya no puede desempear sus funciones, como la de degradar las molculas nitrogenadas que le llegan va sangunea. La cirrosis heptica suele conducir a la muerte del paciente.

Restando a los 131 ATP obtenidos la molcula de ATP que se necesita para activar al cido graso y para que pueda penetrar en la mitocondria, resulta que un mol de cido palmtico (256 g) puede proporcionar 130 moles de ATP, lo cual expresado en calor son: 130 moles de ATP 7 kcal/mol 910 kcal

3.3. El catabolismo de las protenas

Las protenas tienen fundamentalmente misiones diferentes de las energticas. Sin embargo, en casos de necesidad, los aminocidos son oxidados y los derivados de estas oxidaciones pueden entrar en el ciclo de Krebs y en la cadena respiratoria. Se distinguen tres mecanismos de oxidacin de los aminocidos: la transaminacin, la desaminacin oxidativa y la descarboxilacin. La transaminacin (fig. 10) consiste en el traspaso del grupo amino de un aminocido a una molcula llamada -cetocido, que lo acepta y se transforma en otro aminocido, de manera que un aminocido se degrada para permitir que otro se sintetice. Las transaminaciones son catalizadas por las transaminasas, que se encuentran tanto en el citoplasma como en la matriz mitocondrial. Aminocido1 -cetocido1 -cetocido2 Aminocido2 La desaminacin oxidativa (fig. 10) es la liberacin directa de los grupos amino de los aminocidos en forma de NH4, formndose cetocidos. Las desaminaciones de los aminocidos son catalizadas por enzimas del grupo de las deshidrogenasas localizadas en el citoplasma y en las mitocondrias de las clulas hepticas. En las desaminaciones se producen coenzimas reducidas (NADH) que pueden entrar en la cadena respiratoria. Aminocido H2O NAD -cetocido NH 4 NADH H La descarboxilacin es la prdida del grupo carboxilo (COOH) en forma de CO2 gracias al consumo del CoA. Previamente el aminocido debe haber perdido el grupo amino. El producto puede incorporarse al ciclo de Krebs. -cetocido CoA SH R CoA CO2
201

I Rendimiento energtico del catabolismo de los cidos grasos

A modo de ejemplo se puede escoger el cido palmtico. Este cido graso tiene 16 carbonos (CH3[CH2]14COOH), por lo que para que se oxide completamente sern necesarias siete vueltas del ciclo de -oxidacin, producindose en total ocho molculas de acetil-CoA segn la siguiente reaccin global: CH3(CH2)14COOH 8 CoASH ATP 7 FAD 7 NAD+ 7 H2O 8 (CH3COSCoA) 7 FADH2 7 (NADH H+) AMP PPi Recordando que cada una de las molculas de acetil-CoA puede ingresar en el ciclo de Krebs, con el rendimiento energtico que esto conlleva (12 ATP/ciclo de Krebs-c. respiratoria), y que los FADH2 y NADH pueden penetrar en la cadena respiratoria, se obtiene lo indicado en este cuadro:

ocumento 5
En cuanto a rentabilidad, los lpidos del tipo triglicridos son capaces de producir cinco veces ms molculas de ATP al ser degradados que la misma cantidad de glucgeno hidratado. Adems, en cuanto a valor calrico, las grasas duplican (9 kcal/g) a los azcares (4 kcal/g). Por qu entonces no son las grasas los combustibles ms generalizados en el metabolismo? Por un lado, porque la movilizacin de las reservas de las grasas es un proceso ms lento que la de los carbohidratos y, por otro lado, porque se necesitan molculas especiales que transporten los cidos grasos desde el tejido adiposo hasta los tejidos que los van a utilizar. Si se ayuna, despus de las primeras 24 horas, la energa para mantener el metabolismo del organismo proviene en casi su totalidad de las reservas de grasas y en pequea proporcin del catabolismo de las protenas. Durante el ejercicio fsico, el msculo se vale de sus reservas de glucgeno que son de aproximadamente 95 milimoles de glucgeno/kg de msculo, cantidad que, sin embargo, puede llegar a duplicarse con entrenamiento y dietas adecuadas. En esfuerzos fsicos prolongados de ms de dos horas, como durante una maratn de 42 km, las reservas de glucgeno muscular pueden llegar casi a agotarse y entonces el organismo comienza a utilizar las grasas como combustible orgnico. En el momento que ocurre este relevo de combustibles, el deportista puede sufrir un desfallecimiento temporal; en la maratn esto suele ocurrir entre el km 30 y el 35 de la carrera y muchos corredores se refieren a l como un muro que a veces suele conducir al abandono.

Los combustibles orgnicos

Los hidratos de carbono son las molculas energticas ms rpidamente utilizables por el cuerpo. Los monosacridos de la dieta alimenticia son transformados en glucgeno en el hgado y en el msculo y almacenados en las clulas de estas estructuras en forma de grnulos de glucgeno. Al ser el glucgeno un polmero fuertemente polarizado, atrae a numerosas molculas de agua; se calcula que alrededor del 65 % del grnulo de glucgeno est constituido por agua. Debido a esto, la capacidad de nuestro cuerpo de almacenar glucgeno es muy limitada y alcanza slo a cantidades que permiten vivir de estas reservas slo 24 horas, de modo que hay que tomar diariamente carbohidratos en la dieta para reponerlas. Por cada gramo de glucgeno que se almacena se necesitan 2,7 ml de agua. La rpida liberacin de energa al degradar el glucgeno y la fcil reposicin de ste con los hidratos de carbono de los alimentos hacen de este polisacrido el combustible orgnico ms generalizado. Algunos rganos como el cerebro no pueden llevar a cabo la oxidacin de los cidos grasos, por lo que dependen exclusivamente del glucgeno (y de la glucosa) como reserva de energa. Los lpidos con misin energtica se almacenan en forma de gotas de grasa en el citoplasma de los adipocitos del tejido adiposo. Al no tener los lpidos grupos polares, las gotas de grasa son prcticamente anhidras, por lo que puede almacenarse mucha mayor cantidad de grasas que hidratos de carbono (el glucgeno representa aproximadamente el 2 % de las reservas energticas de las grasas).

3.4 El catabolismo de los cidos nucleicos

CUESTIONARIO 3

Las molculas de cidos nucleicos son degradadas en sus unidades mononucletidas en el tubo digestivo de los animales gracias a las nucleasas, segregadas en los vertebrados por la mucosa duodenal. Posteriormente, otras enzimas rompen los nucletidos en molculas de pentosa (ribosa o desoxirribosa), bases nitrogenadas y cido fosfrico. Las pentosas siguen en su degradacin la va de los glcidos; el cido fosf3 ) y en rico en parte se excreta como ion fosfato (PO4 parte se utiliza para la sntesis de ATP y de nuevos nucletidos. Las bases nitrogenadas se utilizan para nuevas biosntesis o experimentan un proceso degradativo hasta cido rico, urea o amoniaco, que son sustancias destinadas a ser excretadas (fig. 11). El catabolismo de las bases pricas conduce a la formacin de cido rico. En algunos animales como los reptiles y las aves este cido es excretado directamente en forma de cristales, pero en otros es transformado en diferentes sustancias como alantona, cido alantoico, amoniaco o urea. Las araas pueden eliminar directamente guanina sin catabolizar. Las bases pirimidnicas son catabolizadas mediante un proceso algo diferente pero que en definitiva lleva a la formacin de urea o amoniaco, que son excretados.
202

1. Escribe las frmulas globales de la -oxidacin de los cidos grasos esterico (18 carbonos) y lignocrico (24 carbonos) y calcula su rendimiento energtico. 2. Por qu los lpidos tienen tanta importancia como combustibles orgnicos y cul es la causa metablica de ello? 3. Cul es el requerimiento previo para que los cidos grasos puedan ser degradados en el interior de las mitocondrias? 4. Qu relacin tiene la -oxidacin de los cidos grasos con la respiracin aerobia de la glucosa? 5. Seala las diferencias entre transaminacin y desaminacin oxidativa. 6. Completa: En los mamferos la degradacin de los prtidos produce , que es transformado en el hgado en y excretado por la orina. 7. Qu fase de la degradacin de los cidos nucleicos puede conducir a la liberacin de energa? Qu otros productos se forman en las fases no energticas de esta degradacin y cul es su destino final? 8. Podras explicar qu relacin tienen los grandes consumos de alcohol con la cirrosis heptica?

10 Reacciones de la transaminacin y de la desaminacin del aminocido alanina.

NH2 NH2 TRANSAMINACIN 5 CH3COCOOH CH2CHCOOH CH3CCOOH CH2COCOOH CH2COOH H CH2COOH Alanina cido pirvico cido glutmico cido -cetoglutrico (aminocido) (-cetocido) (aminocido) (-cetocido) DESAMINACIN NH2 CH3CCOOH H Alanina (aminocido) H2O NAD NADH H CH3COCOOH NH3 cido pirvico (-cetocido)

11 Catabolismo de los cidos nucleicos y vas metablicas hacia donde se dirigen las molculas que se forman en su degradacin.

CIDOS NUCLEICOS Nucletidos Pentosas cido fosfrico Excrecin Biosntesis de ATP o de nucletidos Catabolismo Biosntesis de nucletidos Bases nitrogenadas

Catabolismo de los glcidos

Biosntesis de nucletidos

Bases pricas
Productos del catabolismo de las bases nitrogenadas

Bases pirimidnicas Urea, amoniaco

cido rico

4. El catabolismo por fermentacin

La fermentacin es un proceso catablico en el que, a diferencia de la respiracin, no interviene la cadena respiratoria. Adems, el aceptor final de protones y de electrones no es una molcula inorgnica sino que es un compuesto orgnico, por lo que la fermentacin siempre da entre sus productos finales algn compuesto orgnico. En la fermentacin, al no intervenir la cadena respiratoria, no se puede utilizar el oxgeno del aire como aceptor de electrones y, por tanto, es siempre un proceso anaerbico. No hay sntesis de ATP en las ATP-sintetasas; slo hay sntesis de ATP en sustrato. Ello explica la baja rentabilidad energtica de las fermentaciones. Por ejemplo, una glucosa al degradarse produce 38 ATP mediante respiracin y slo 2 ATP mediante fermentacin. Las coenzimas reducidas (NADH H) que se forman al iniciarse la oxidacin del sustrato en las fermentaciones, al no poderse oxidar en la cadena respiratoria, deben ser consumidas al final de ellas para evitar el bloqueo del proceso por falta de coenzimas oxidadas (NAD).

Las fermentaciones son propias de los microorganismos (ciertas levaduras y bacterias), aunque alguna, como la fermentacin lctica, puede realizarse en el tejido muscular de los animales cuando no llega suficiente oxgeno a las clulas. En ocasiones se denomina errneamente fermentacin a procesos en los que interviene el oxgeno, por ejemplo, la mal llamada fermentacin actica, mediante la que se obtiene cido actico (vinagre) a partir del vino y del aire (CH3CH2OH O2 CH3COOH H2O), cuando en realidad es una respiracin aerbica de oxidacin incompleta. Ello se debe a la costumbre en la industria de denominar fermentacin a todo proceso que se realiza en un aparato denominado fermentador, y que da como producto final un compuesto orgnico, tanto si se realiza en ausencia de oxgeno (fermentacin o respiracin anaerbica) como si hay que insuflar aire para que se produzca (respiracin aerbica). Segn sea la naturaleza del producto final, se distinguen varios tipos de fermentaciones. Las principales son la fermentacin alcohlica, la fermentacin lctica, la fermentacin butrica y la putrefaccin.
203

I La fermentacin alcohlica
Es la transformacin de cido pirvico en etanol y dixido de carbono. Se produce cuando determinados hongos unicelulares (levaduras) que estn catabolizando, mediante respiracin, un lquido rico en azcares, agotan el oxgeno disponible y continan el catabolismo mediante fermentacin. En una primera etapa se realiza la gluclisis y se transforma la glucosa en cido pirvico, y en la etapa siguiente se realiza la fermentacin alcohlica, transformndose el cido pirvico en etanol y dixido de carbono (fig. 12). Como productos secundarios se pueden producir tambin otras molculas orgnicas como glicerina, cido succnico y cido actico. La reaccin global de la gluclisis y la fermentacin alcohlica es: Glucosa (C6H12O6) 2 Pi 2 ADP 2 etanol (CH3CH2OH) 2 CO2 2 ATP La fermentacin alcohlica se realiza gracias a enzimas contenidas en levaduras del gnero Saccharomyces, que son anaerobias facultativas. Dependiendo de la especie de levadura se puede llegar a obtener cerveza, gisqui, ron (S. cerevisiae), vino (S. ellypsoideus), sidra (S. apiculatus) y pan (variedad purificada de S. cerevisiae).

ganismos inician la fermentacin de la lactosa de la leche, lo que produce el agriamiento de sta y la coagulacin de la protena casena. Tambin se produce en las clulas musculares de los animales cuando no hay suficiente oxgeno para efectuar un sobreesfuerzo fsico y el cido pirvico procedente de la gluclisis no puede oxidarse de manera aerobia y se transforma en cido lctico. La acumulacin de cido lctico da lugar a la formacin de unos pequeos cristales que pinchan el msculo y producen los dolores conocidos como agujetas. Primero se realiza la gluclisis, en la que se obtienen 2 ATP y se producen dos (NADH H), y luego la fermentacin lctica para regenerar coenzimas oxidadas (NAD+) y evitar que el proceso se detenga por su falta (fig. 12). La reaccin global de la gluclisis y la fermentacin lctica es: Glucosa (C6H12O6) 2 (ADP Pi) 2 cido lctico (CH3CHOHCOOH) 2 ATP Si el sustrato es la lactosa, primero se hidroliza en una molcula de glucosa y otra de galactosa, la cual posteriormente se transforma en glucosa. Luego, las dos glucosas continan el proceso antes descrito para las clulas musculares. Los microorganismos que realizan esta fermentacin son las bacterias Lactobacillus casei, L. bulgaricus, Streptococcus lactis y Leuconostoc citrovorum, obtenindose de ello productos derivados de la leche como el queso, el yogur y el kfir.

I La fermentacin lctica
En esta fermentacin se forma cido lctico a partir de la degradacin de la glucosa. Generalmente, esta fermentacin se da cuando determinados microor-

12 Reacciones principales de la fermentacin alcohlica y de la lctica.

2 NAD 2 NAD H C6H12O6 Glucosa

GLUCLISIS

FERMENTACIN ALCOHLICA 2 NADH H 2 NAD

Alcohol deshidrogenasa

2 cido pirvico CH3 CO COOH

2(ADP P) 2 ATP

Piruvato descarboxilasa

2 acetaldehdo 2 CO2 (CH3 CHO )

2 alcohol etlico 2 CO2 (CH3 CH2OH

FERMENTACIN LCTICA 1 lactosa C12H22O11

lactasa

1 glucosa 1 galactosa C6H12O6 C6H12O6

isomerasa

2 glucosas 2(C6H12O6)
Balance global:

H2O

2 NAD glucosa C6H12O6

2 NADH H

2 NADH H

2 NAD

1 Lactosa H2O 4 ADP 4Pi 5 4 cido lctico 4 ATP

GLUCLISIS

2(ADP P) 2 ATP

2 cido pirvico CH3 CO COOH

lactato deshidrogenasa

2 cido lctico CH3 CHOH COOH

204

I La fermentacin butrica
Consiste en la descomposicin de sustancias glucdicas de origen vegetal, como el almidn y la celulosa, en determinados productos como el cido butrico, el hidrgeno, el dixido de carbono y otras sustancias malolientes. La realizan bacterias anaerobias como Bacillus amilobacter y Clostridium butiricum. La fermentacin butrica tiene gran importancia, ya que contribuye a la descomposicin de los restos vegetales en el suelo.

obstante, dan productos poco desagradables, por lo que son utilizadas para producir los sabores tpicos de algunos quesos y vinos.
CUESTIONARIO 4
1. Qu ventaja metablica tienen los microorganismos anaerobios facultativos con respecto a los anaerobios estrictos? 2. Define el concepto de fermentacin. Qu diferencias esenciales tiene con la respiracin? 3. Por qu son poco rentables energticamente las fermentaciones? 4. El hbitat ms generalizado de muchas especies de bacterias del gnero Clostridium es el suelo de los campos. Sabes qu importancia pueden tener aqu estas bacterias? 5. Siendo la fermentacin lctica un proceso anaerbico que efectan bacterias, cmo es posible y bajo qu condiciones puede llevarse a cabo en el tejido muscular de los animales? A qu conduce esta fermentacin lctica muscular?

I La fermentacin ptrida
Se llama tambin putrefaccin y se diferencia de las dems fermentaciones en que los sustratos que se degradan son de naturaleza proteica o aminoacdica. Los productos obtenidos en esta fermentacin son orgnicos y malolientes como el indol, la cadaverina y el escatol, a los que deben el olor los cadveres animales y restos vegetales. Algunas putrefacciones, no

COMPARACIN DE LOS DIFERENTES TIPOS DE CATABOLISMO Conceptos considerados Necesitan oxgeno? Sustrato que pueden oxidar. Primer aceptor de los H y de los electrones.
Respiracin

Aerobia S. Cualquier principio inmediato. NAD.

Anaerobia No. Cualquier principio inmediato. NAD. Se trata de molculas inorgnicas como el SO2 4 , NO3 , CO2, 2 CO3 .

Fermentacin No. Preferentemente glcidos y prtidos. NAD. El aceptor final de hidrgenos es una molcula orgnica que generalmente procede del propio sustrato. ste se divide en una parte que cede hidrgenos (se oxida) a la otra parte, que al aceptarlos se reduce. Algn compuesto orgnico, como, por ejemplo, el etanol, el cido lctico, etc.

Aceptor final de los hidrgenos (H y e).

O2.

Productos en los que se transforman los aceptores finales de H y e.

H2O.

SH2, NO2 , N2, CH4.

Productos en los que se transforma el carbono del sustrato.

Generalmente da CO2. En ocasiones, la oxidacin puede ser incompleta. Por ejemplo, de etanol a cido actico.

Generalmente da CO2. En ocasiones, la oxidacin del carbono puede ser incompleta.

Siempre produce algn compuesto orgnico, como el etanol, el cido lctico, etc. Adems puede aparecer CO2. No. Carecen de cadena respiratoria. Slo hay fosforilacin a nivel de sustrato. El NADH H cede sus hidrgenos al aceptor final sin producirse la sntesis de ATP. Variable. Suele ser de unos 2 ATP.

Son capaces de obtener ATP al oxidar el NADH H? Energa que se obtiene de una glucosa.

S.

S.

Hasta 38 ATP.

Hasta 38 ATP.

205

Catabolismo de los glcidos. Catabolismo de las protenas. Catabolismo de los lpidos.

Glucosa Glicridos Fermentaciones Triptfano Glicerina cido pirvico cidos grasos OXIDACIN Serina Cistena Alanina Glicocola Leucina Isoleucina Fenilalanina Ptrida Alcohlica Actica Lctica

cido-3-fosfoglicrico

Acetil-S-CoA
cido asprtico

cido oxalactico CICLO DE KREBS cido fumrico Succinil-CoA Fenilalanina tirosina Propionil-CoA -cetoglutrico

Histidina Prolina cido glutmico Lisina

Valina isoleucina

b
Glicridos Glcidos Protenas

cidos grasos

Glicerina

cido pirvico

Aminocidos

ADP Pi O2

H2O ATP

NAD

Acetil - CoA -oxidacin NADH H

CICLO DE KREBS
CO2

NADH H

NAD

CO2

13 Resumen del catabolismo. a) Interrelacin de las vas catablicas ms importantes de glcidos, lpidos y protenas. b) Esquema de la respiracin aerobia mitocondrial de los principios inmediatos.

206

Actividades
Conceptos
1. Utilizando la informacin incluida en el texto de este tema y en los dedicados a las biomolculas, intenta calcular el rendimiento energtico del catabolismo completo de: a) Una molcula de estearina (triglicrido). b) Una molcula de maltosa (disacrido). c) Un oligopptido que tenga cuatro aminocidos del tipo de la alanina (imagina que se degrada por desaminacin y que los dems aminocidos del pptido no liberan energa). 2. Indicar el nombre del proceso general que se esquematiza en las siguientes reacciones y el compartimento celular donde se realiza: Nombre a) b) c) d) e) f) g) h) glucosa cido pirvico cido graso acil-CoA -hidroxiacil-CoA b-cetoacil-CoA cido pirvico acetil-CoA cido -cetoglutrico succinil-CoA acetil-CoA CO2 NAD NADH H alanina cido pirvico H4

Compartimiento

3. Copiar el siguiente esquema y completarlo con los nombres que faltan dentro de los recuadros:

CIDO PIRVICO

NADH H

CO2

H2O

CIDO CTRICO

NADH H

NADH H

H2O

NADH H SUCCINIL-SCoA FADH2 GTP

CO2

CIDO SUCCNICO

207

13

Anabolismo auttrofo

N D I C E
INFORMACIN 1 El anabolismo auttrofo. 2 Concepto de fotosntesis.
Los fotosistemas. Tipos de fotosntesis.

3 La fotosntesis oxignica o vegetal.

Fases de la fotosntesis.

4 Factores que influyen en la fotosntesis. 5 Quimiosntesis.

Fases de la quimiosntesis. Tipos de bacterias quimiosintticas.

Santa Luca. Montaas Gros Piton y Petit Piton.

6 Organismos fijadores de nitrgeno. LABORATORIO

Pigmentos fotosintticos.

La vida en nuestro planeta se mantiene principalmente gracias a la fotosntesis que realizan las algas, en el medio acutico, y las plantas, en el medio terrestre. Estos organismos son capaces de sintetizar materia orgnica, indispensable para constituir los seres vivos, a partir de materia inorgnica y luz. Por otra parte, est la quimiosntesis autotrfica, que realizan determinadas bacterias. Estos organismos son capaces de sintetizar materia orgnica a partir de materia inorgnica y la energa qumica desprendida en reacciones de oxidacin de compuestos inorgnicos. La vida, pues, podra darse sin necesidad de los animales.

208

El anabolismo auttrofo

El anabolismo es la va constructiva del metabolismo, es decir, la ruta de sntesis de molculas complejas a partir de molculas sencillas. Si las molculas iniciales son inorgnicas, por ejemplo H2O, CO2, NO 3 , etc., se denomina anabolismo auttrofo, mientras que si son orgnicas, por ejemplo glucosa, aminocidos, nucletidos, etc., se denomina anabolismo hetertrofo. El anabolismo auttrofo se puede realizar mediante la fotosntesis, que es el anabolismo auttrofo que se produce gracias a la energa luminosa, o mediante la quimiosntesis, que es el anabolismo auttrofo que se produce gracias al aprovechamiento de la energa desprendida en

reacciones de oxidacin. La fotosntesis la realizan las plantas, las algas, las cianobacterias y las bacterias fotosintticas. La quimiosntesis a partir de sustancias inorgnicas slo la pueden realizar algunas bacterias, las quimioauttrofas. Todos estos organismos no dependen de otros para vivir, ya que pueden colonizar lugares sin vida (auto significa por s mismo y trofo alimentacin). Ellos son los que posibilitan la vida de los dems organismos (animales, hongos, protozoos y bacterias hetertrofas). El anabolismo hetertrofo se da en todos los organismos, y se realiza de forma muy similar en todos ellos. Su objeto es la sntesis de reservas energticas y crear estructuras para que el organismo pueda crecer o, simplemente, para que pueda renovar sus estructuras deterioradas. Se estudiar en el captulo siguiente.

Concepto de fotosntesis

La fotosntesis, en sentido estricto, es la conversin de energa luminosa en energa qumica estable. La primera molcula en la que queda almacenada esa energa qumica es el ATP. Posteriormente, el ATP se utiliza para sintetizar otras molculas orgnicas ms estables. La fotosntesis es posible gracias a la existencia de unas molculas especiales, denominadas pigmentos fotosintticos, capaces de captar la energa luminosa. Cuando un fotn (h) es absorbido por un electrn de un pigmento fotosinttico, este electrn capta la energa del fotn y asciende a posiciones ms alejadas del ncleo atmico, pudiendo salirse del tomo y dejarlo ionizado. El pigmento que contiene dicho tomo queda con un defecto de electrones (oxidado). La molcula que se los repondr se denomina primer dador de electrones (fig. 1).
Dador 1.o reducido Pigmento diana oxidado 2 e

Los electrones perdidos, cargados con la energa del fotn, pasan a una molcula denominada primer aceptor de electrones y luego a una serie de aceptores que se reducen y oxidan sucesivamente, al captar y luego liberar dichos electrones, formndose la denominada cadena transportadora de electrones. Durante este proceso se libera la energa captada que, gracias a las enzimas ATP-sintetasas, se aprovecha para la sntesis de ATP, en cuyos enlaces queda almacenada. De esta manera se consigue energa qumica aprovechable a partir de energa luminosa. Hay dos tipos de pigmentos fotosintticos: los pigmentos de antena, que slo pueden captar energa luminosa y transmitir la energa captada a otro tipo de pigmentos, y los pigmentos diana, a los cuales va a parar toda la energa captada por los anteriores, que son los pigmentos capaces de transferir el electrn excitado al primer aceptor de electrones, y de reponerlo a partir del primer dador de electrones. Es decir, son capaces de iniciar una reaccin qumica (fig. 2 d).
Aceptor 1.o reducido Aceptor 2.o oxidado

2 e

2 e 2 e

2e 2 e Dador 1.o oxidado

2e

2e

Pigmento diana reducido Energa de excitacin

Aceptor 1.o oxidado

Aceptor 2.o reducido

1 Esquema del transporte de electrones en un pigmento fotosinttico diana.

209

1. Los fotosistemas
Los pigmentos fotosintticos se encuentran englobados en unas protenas transmembranales que forman unos conjuntos denominados fotosistemas. En ellos se pueden distinguir dos subunidades: la antena y el centro de reaccin (cuadro I). En la antena, tambin denominada LHC (Light Harvesting Complex), predominan los pigmentos fotosintticos sobre las protenas. Carece de pigmento diana. En el centro de reaccin, tambin denominado CC (Core Complex), predominan las protenas sobre los pigmentos. En el centro de reaccin es donde est el pigmento diana, el primer aceptor de electrones y el primer dador de electrones (fig. 2 d).

2. Tipos de fotosntesis
Se distinguen dos tipos de procesos fotosintticos: la fotosntesis oxignica y la fotosntesis anoxignica. La fotosntesis oxignica es propia de las plantas superiores, las algas y las cianobacterias, en las que el dador de electrones es el agua y, consecuentemente, se desprende oxgeno (H2O 2 H 2 e 1/2 O2). La fotosntesis anoxignica o bacteriana es propia de las bacterias purpreas y verdes del azufre, en las que el dador de electrones no es agua, sino, generalmente, el sulfuro de hidrgeno, por lo que no se desprende oxgeno, sino azufre, que puede acumularse en el interior de la bacteria o ser expulsado al agua (H2S 2 H 2 e S).

CUADRO I. Subunidades de un fotosistema.

FOTOSISTEMA Antena (LHC) Centro de reaccin (CC)

De 200 a 400 molculas de pigmentos de antena de varios tipos. Dos protenas intermembranales.

Una molcula de pigmento diana, unas pocas de pigmentos no diana, una de primer dador de electrones y una de primer aceptor. De dos a cuatro protenas de membrana.

3 La fotosntesis oxignica o vegetal

En los organismos que realizan la fotosntesis oxignica, el aparato fotosintetizador se encuentra en los cloroplastos, concretamente en las membranas de los tilacoides (fig. 2). Dicho aparato est constituido por cuatro tipos de estructuras denominadas: fotosistema I (PSI), fotosistema II (PSII), cadena transportadora de electrones y enzimas ATP-sintetasas (fig. 2 c). El proceso se inicia en los fotosistemas en donde el electrn excitado del pigmento diana (fig. 2 d) salta al primer aceptor de electrones, y luego a una serie de aceptores, que se reducen y oxidan sucesivamente: la denominada cadena transportadora de electrones. Durante este proceso, la energa captada se invierte en introducir protones (H) a travs de la membrana, que luego, al salir a travs del complejo ATP-sintetasa, da lugar a la sntesis de ATP, en cuyos enlaces queda almacenada (fig. 2 c).
210

El fotosistema I (PSI) capta la luz cuya longitud de onda es menor o igual a 700 nm. En las plantas superiores, la antena (LHCI) contiene una gran proporcin de clorofila , y una pequea proporcin de clorofila . En el centro de reaccin (CCI), la molcula diana es la clorofila I que absorbe a 700 nm, denominada por ello clorofila P700 (fig. 3). El aceptor primario de electrones se denomina aceptor A0 y el dador primario es la plastocianina (PC). Abundan ms en los tilacoides de estroma, es decir, los no apilados (figs. 2 b y 2 c). El fotosistema II (PSII) capta la luz cuya longitud de onda es menor o igual a 680 nm. En las plantas superiores, la antena (LHCII) contiene clorofila , clorofila (en mayor proporcin que en el PSI) y xantofilas. En el centro de reaccin (CCII) la molcula diana es la clorofila II,

que absorbe a 680 nm, denominada por ello clorofila P680 (fig. 3). El aceptor primario es la feofitina (Pheo), y el dador primario se denomina dador Z. Abundan ms en los tilacoides apilados que forman los grana (figs. 2 b y 2 c). La cadena transportadora de electrones. Bsicamente est constituida por un complejo de dos protenas, cuyos grupos prostticos son citocromos, el denominado complejo citocromo b6 -citocromo f, que slo transportan electrones. Adems, entre los fotosistemas y este complejo hay otros transportadores que llevan conjuntamente protones y electrones. Entre el PSII y el complejo citocromo b-f est la plastoquino-

na (PQ), que, como es un lpido, puede moverse por la membrana. Entre el complejo citocromo b-f y el PSI est la protena plastocianina (PC). Finalmente, el PSI se contina con las protenas ferredoxina (Fd) y NADP-reductasa. Estas tres ltimas sustancias son protenas extrnsecas, por lo que tienen una cierta movilidad (fig. 3). Las ATP-sintetasas. Son semejantes a las mitocondriales. Constan de una parte basal (CF0), inmersa en la membrana, y una parte globosa (CF1), que sobresale hacia el estroma. Se encuentran slo en las membranas tilacoidales que contactan con el estroma.

2 El aparato fotosinttico de los cloroplastos. a Cloroplasto

Membrana plastidial interna Membrana plastidial externa

c Sntesis de ATP

Estroma ADP P H H ATP

b Localizacin de los fotosistemas en los tilacoides

Tilacoide de grana Tilacoide de estroma Grana
 ATP-sintetasa
Membrana en la que predomina el fotosistema I (PSI) Membrana en la que predomina el fotosistema II (PSII) Transportadores de electrones PSI PSII ATP-sintetasa

PSI PSII

ATP-sintetasa Cadena transportadora de electrones

d Ultraestructura del fotosistema I (PSI)

h Pigmento diana del centro de reaccin (CCI) Antena (LHCI)

P700

211

ocumento 1

Los fotosistemas de los cloroplastos

FOTOSISTEMA I (PSI) Antena Pigmentos. Protenas. C. reaccin Molcula diana. Otros pigmentos. Aceptor primario. Antena I (LHCI) 4 molculas de clorofila por cada molcula de clorofila . Protenas. Centro de reaccin I (CCI) Clorofila 1 ( molcula P700) Por cada molcula P700 hay 40 de clorofila y unas pocas de -carotenos. No est bien identificado, se denomina aceptor A0, luego sigue el A1 y luego el llamado aceptor de FeS (los dos ltimos no aparecen en la figura 4 para simplificarla). Plastocianina. 2 protenas. FOTOSISTEMA II (PSII) Antena II (LHCII) 4 molculas de clorofila por cada 3 de clorofila , y por cada 1 o 2 de xantofilas. Dos o tres protenas. Centro de reaccin II (CCII) Clorofila n ( molcula P680) Por cada molcula de P680 hay ms de 40 molculas clorofila . En la feofitina (Pheo), luego sigue la quinona A, y luego la quinona B (las dos quinonas no aparecen en la figura 4 para simplificarla). No est bien identificado. Contiene manganeso. Se denomina dador Z. 4 protenas, una de ellas es el complejo productor de oxgeno (OEC).

Dador primario. Protenas.

1. Fases de la fotosntesis
La fotosntesis comprende dos fases: una fase inicial, denominada fase luminosa o fase fotoqumica, en la cual tiene lugar la captacin de la energa luminosa; y una fase posterior, denominada fase oscura o biosinttica, en la cual se sintetiza materia orgnica. La fase luminosa o fotoqumica puede presentarse en dos modalidades: con transporte acclico de electrones o con transporte cclico de electrones. En la modalidad acclica intervienen los dos fotosistemas y en la cclica, solamente el fotosistema I.

electrones al complejo citocromo b-f, introduce los dos protones en el tilacoide. stos, sumados a los protones procedentes de la fotlisis, crean una diferencia de potencial electroqumico a ambos lados de la membrana. El interior del tilacoide llega a estar a pH 5 y el estroma a pH 8. Esta situacin se resuelve, segn la hiptesis quimioosmtica de Mitchell, ya comentada en el captulo anterior, con la salida de protones a travs de las enzimas ATP-sintetasas, con la consiguiente sntesis de ATP, que se acumula en el estroma. Es lo que se denomina fotofosforilacin del ADP: ADP Pi ATP H2O La hiptesis quimioosmtica tambin explica la sntesis de ATP en la cadena respiratoria en las mitocondrias, como se vio en el tema anterior, aunque con una diferencia: en las mitocondrias los protones se acumulan en el espacio intermembranal, mientras que en los cloroplastos lo hacen en el interior de los tilacoides. Al incidir dos fotones en el fotosistema I, la clorofila P700 pierde dos electrones que son captados por la ferredoxina (Fd) a travs del aceptor A0, y otros aceptores posteriores. Los electrones perdidos por la clorofila P700 son repuestos por la plastocianina (PC), que los recibe del complejo citocromo b-f antes mencionado. La ferredoxina pasa los dos electrones a la enzima NADP-reductasa, que se activa, capta dos protones del estroma y se los transfiere, junto a los dos electrones, a un ion NADP del estroma, que se reduce a NADPH H; es lo que se denomina fotorreduccin del NADP: NADP 2 H 2 e NADPH H

I Fase luminosa acclica

El proceso se inicia con la llegada de fotones al fotosistema II. Esto provoca la excitacin de su pigmento diana, la clorofila P680, que pierde tantos electrones como fotones se han absorbido. Los electrones son captados por la feofitina (Pheo), luego pasan a otros aceptores y finalmente a la plastoquinona (PQ). Para reponer estos electrones de la clorofila P680, se produce la hidrlisis de molculas de agua, lo que se denomina fotlisis del agua (fig. 3): H2O 1/2 O2 2 H 2 e Este proceso se realiza en la cara interna de la membrana de los tilacoides. Los dos electrones liberados por cada molcula de agua son transferidos a la molcula diana por el dador Z, y los dos protones H se acumulan en el interior del tilacoide. La plastoquinona (PQ), al recibir los dos electrones, se activa y capta dos protones del estroma. Luego, al transferir sus
212

a
ATP-SINTETASA

ESTROMA
2 h

2H

NADP + 2 H

NADPH+ H

4 H+ 1,3 (ADP + Pi) 1,3 (ATP + H2O)

PSII

CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES

PSI

Reductasa 2 e

2 h

Fd
2 e CF1

2 e

PQ

LHCII

LHCII

LHCI

Pheo 2 e P680 Z 2 e

PQH2 PQH2 2 e 2 H+

2 e

A0

LHCI

CCII

CCI

PQ

2 e

Complejo Citocromo b 6 -f

P700

CF0

OEC
1 O+ 2 2

PC

PC

4 H+

2 H+

4 H+

H2O

Por cada 3 H se forma 1 ATP

INTERIOR DEL TILACOIDE

Voltios 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 0,1

P700*

2 e Ao

P680* 2 e
Pheo

Fd Reductasa PQ Cit bf PC 2 e 2 h
2 H++ NADP+ NADP++ H+

2 e

H2 O

2 H+

P700
2 h

2 e Z

P680

3 Fotosntesis acclica. a) La membrana de los tilacoides. Z dador primario del PSII. Pheo = feofitina. PQ plastoquinona. PC plastocianina. A0 aceptor primario del PSI. Fd ferredoxina. Reductasa NADP-reductasa. b) Esquema en Z que aparece cuando los componentes se disponen segn su potencial de oxidorreduccin. (* forma excitada de un pigmento).

213

ocumento 2

Balance de la fase luminosa acclica

Para que se realice la fotorreduccin de un NADP son precisos dos protones (2 H), por lo que se necesita la fotlisis de una molcula de agua, la cual da lugar adems a dos electrones (2 e). Como cada uno precisa el impacto de dos fotones, uno en el fotosistema I y uno en el fotosistema II, son precisos cuatro fotones. Finalmente, como el nmero de protones introducidos en el tilacoide es cuatro, dos de la fotlisis del agua y dos introducidos por la
4 h H2O
5

plastoquinona reducida PQH2, y se conoce que por cada tres protones (3 H) que salen por la ATP-sintetasa se genera un ATP, el nmero de ATPs sintetizadas es 1,33 (4/3 1,33) por cada molcula de agua hidrolizada. Esta cantidad es insuficiente para realizar la fase oscura, ya que, como se ver ms adelante, en ella se precisan 1,5 ATP por NADPH (3 ATP por cada 2 NADPH). Este dficit es compensado por la fase luminosa cclica.
1,3 ATP
5

1,3 (ADP P) 1/2 O2 2 H 2 e

NADP 2 H 2 e
5

NADPH H

a Representacin de la fase luminosa cclica

en la ultraestructura de la membrana.

2 H+

2 h

PSI
ADP + P

2 H+ ATP + H2

Fd
2 e CF1 2 e

LHCI

PQH2 Voltios 0,8

Complejo Citocromo b6 f 2 e

A0 2 e P700 2 e

CCI

PQ

LHCI

CF0

PC 2e

PC

2 H+

P700*
2 H+

0,6 0,4 0,2 2 H+ 0 0,2 0,4 2 H+

A0

Por cada 3 H se forma 1 ATP

2 e PQH2 PQ 2 e

2 e Cit b6 f

F 2 h PC 2 e

b Diagrama de la fase luminosa cclica

segn el potencial redox.

P700

4 Fase luminosa cclica.

I Fase luminosa cclica

En la fase luminosa o fotoqumica cclica interviene nicamente el fotosistema I, crendose un flujo o ciclo de electrones que en cada vuelta da lugar a sntesis de ATP. Como no interviene el fotosistema II, no hay fotlisis del agua y, consecuentemente, no hay reduccin del NADP, ni se desprende oxgeno. Slo se obtiene ATP. La finalidad de esta fase cclica es subsanar el dficit de ATP obtenido en la fase acclica para poder realizar la fase oscura posterior.
214

Cuando se ilumina con luz de longitud de onda superior a 680 nm, lo que se denomina rojo lejano, slo se produce el proceso cclico. Al incidir los fotones sobre el fotosistema I, la clorofila P700 libera los electrones que llegan a la ferredoxina (Fd), la cual los pasa a un citocromo b6 y ste a la plastoquinona (PQ), que capta dos protones y pasa a (PQH2). La plastoquinona reducida cede los dos electrones al citocromo f e introduce los dos protones en el interior del tilacoide. stos, al salir a travs de las ATP-sintetasas, provocan la sntesis de ATP. La plastocianina retorna los electrones a la clorofila P700 (fig. 4).

ocumento 3

Los pigmentos fotosintticos y la absorcin de luz

Los pigmentos fotosintticos son lpidos que estn unidos a protenas presentes en algunas membranas plasmticas. Todos ellos presentan alternancia de enlaces sencillos con enlaces dobles. Esto est en relacin con su capacidad de aprovechar la luz para iniciar reacciones qumicas, y con tener color propio. En las plantas estn las clorofilas y los carotenoides; en las cianobacterias y en las algas rojas adems hay ficocianina y ficoeritrina; y en las bacterias fotosintticas est la bacterioclorofila. La clorofila est constituida por un anillo porfirnico con un tomo de Mg en el centro, asociado a un metanol y a un fitol, que es un monoalcohol de 20 carbonos. Es, pues, una molcula anfiptica, donde la porfirina es el polo hidrfilo y el fitol el polo lipfilo. Hay dos tipos de clorofila: la clorofila , que tiene un grupo metilo en el tercer carbono porfirnico y que absorbe luz de longitud de onda () prxima a 683 nm, y la clorofila , que tiene un grupo formilo y que absorbe a 660 nm. Los carotenoides son isoprenoides y absorben luz de 440 nm. Pueden ser de dos tipos: los carotenos que son rojos, y las xantofilas, derivados oxigenados de los anteriores, que son amarillentas. Las ficocianinas son pigmentos azulados y las ficoeritrinas son pigmentos rojos. Ambas son lpidos que se encuentran asociados a protenas formando las denominadas ficobiliprotenas. Los pigmentos fotosintticos presentan enlaces covalentes sencillos alternados con enlaces covalentes dobles. Esto induce la existencia de electrones libres que no pueden atribuirse a un tomo concreto. En los porfirnicos pueden moverse por todo el anillo variando los enlaces. En realidad, lo que existe es una estructura intermedia, hbrida, entre las posibles, lo que se denomina resonancia. Estos electrones precisan muy poca energa para ascender a niveles superiores, lo que les permite aprovechar la luz para excitarse, y, por otra parte, desprenderse de nfimas cantidades de energa al relajarse. sta es la base del aprovechamiento de la luz para iniciar reacciones qumicas. Tambin explica que sean sustancias con color, ya que fcilmente slo absorben unas determinadas longitudes de onda, y no otras, de la luz blanca (fig. 8). Segn la longitud de onda de la luz, se excita un pigmento fotosinttico u otro. Cuando un fotn (h) incide sobre un electrn de un pigmento fotosinttico de antena, este electrn capta la energa del fotn y sube a posiciones ms alejadas del ncleo atmico. Si el pigmento estuviera aislado, al descender al nivel inicial, la energa captada se liberara en forma de calor o de radiacin de mayor longitud de onda (fluorescencia). Sin embargo, al haber varios tipos de pigmentos muy prximos, la energa de excitacin captada por un pigmento puede ser transferida a otro, de forma no radiactiva, por induccin en el otro del estado de excitacin. Esto es posible gracias a un estado de resonancia entre la molcula dadora relajada y la aceptora. Para ello es necesario que el espectro de emisin del primero coincida, al menos en parte, con el de absorcin del segundo. Los pequeos paquetes de energa (excitones) se transfieren siempre hacia los pigmentos que absorben a mayor longitud de onda. Este proceso contina as, hasta llegar al pigmento fotosinttico diana (fig. 2 d).

Pigmentos fotosintticos. H3C

Anillo pirrlico Fitol

HC= CH2 I

H3C CH2 CH CH3 CH2 CH2 C CH3 CH CH2 O C O C CH3 O O CH2 CH2 V IV N

N Mg N III CH3 N II

CH3

H3C CH

CH2

CH2 CH

CH2 CH2

CH2 CH

CH2

CH2

CH2

CH2

CH2 CH3 Clorofila a

CH3

CH3

CH3

CH3 CH3 CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 -caroteno

CH3

CH3

CH3

215

CUESTIONARIO 1
1. Puede considerarse la digestin una parte del metabolismo? Justifica la respuesta. 2. Todos los organismos auttrofos son fotosintticos? 3. Qu diferencia hay entre un pigmento diana y un pigmento de antena? 4. Por qu es indispensable un primer dador de electrones? 5. Tanto en la respiracin mitocondrial como en la fase luminosa acclica hay enzimas que trabajan con NADH o NADPH, una cadena transportadora de electrones y ATP-sintetasas, pero hay ciertas diferencias. Responde a las cuestiones del siguiente cuadro: Respiracin Fotosntesis a) La cadena transportadora de electrones est en: b) El transportador de hidrgeno es (NADH o NADPH):

............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................

............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................ ............................

c) Se produce oxidacin del NADH o reduccin del NADP ? ............................ d) Qu enzima interacta con el NADH o el NADP? e) Acta dicha enzima al principio o al final del proceso? f) Los protones (H) son aportados por: g) Los protones (H) son introducidos en: h) Los protones (H ) se unen a ........ para producir: i) La parte globosa de la ATP- sintetasa est dirigida hacia: j) La sntesis de ATP se denomina:

6. El transporte de electrones en la cadena respiratoria es un proceso a favor de la corriente, ya que va desde una molcula (NADH), que los atrae con poca fuerza, hasta una en que estn fuertemente atrados (H2O). Esto explica que la energa sobrante d lugar a ATP. En cambio, en la fase luminosa acclica el proceso es a contracorriente: los electrones van desde el H2O al NADP, y a pesar de ello tambin se sintetiza ATP. Cul es la explicacin?

CUESTIONARIO 2
1. A cuntos electrones da lugar la fotlisis de 6 molculas de agua? 2. Por qu se produce la fotlisis del agua? 3. Qu caracterstica hace a los pigmentos fotosintticos aptos para la fotosntesis? 4. Podra haber fotosntesis con slo el PSII? 5. Para qu sirve el PSII?

I Fase oscura o biosinttica

En la fase biosinttica se utiliza la energa (ATP) y el NADPH obtenidos en la fase fotoqumica para sintetizar materia orgnica a partir de sustancias inorgnicas. Como fuente de carbono se utiliza el dixido de carbono; como fuente de nitrgeno se utilizan los nitratos y nitritos; y como fuente de azufre se utilizan los sulfatos. a) Sntesis de compuestos de carbono. Se realiza mediante un proceso cclico. Fue descubierto por el bioqumico norteamericano Melvin Calvin (nacido en 1911), por lo que recibe el nombre de ciclo de Calvin. En l se pueden distinguir varios pasos: (fig. 5) Fijacin del CO2. En el estroma del cloroplasto, el dixido de carbono (CO2) atmosf216

rico se une a la pentosa ribulosa-1,5-difosfato, gracias a la enzima ribulosa difosfato carboxilasa oxidasa, y da lugar a un compuesto inestable de seis carbonos, que se disocia en dos molculas de cido 3-fosfoglicrico. Se trata de molculas con tres tomos de carbono, por lo que las plantas que siguen esta va metablica se suelen denominar plantas C3. Reduccin del CO2 fijado. Mediante el consumo del ATP y del NADPH obtenidos en la fase luminosa, el cido 3-fosfoglicrico es reducido a gliceraldehdo 3-fosfato. ste puede seguir dos vas: la mayor parte se invierte en regenerar la ribulosa 1-5-difosfato, y el resto en otras biosntesis: a). El que se queda en el estroma del cloroplasto inicia la

 sntesis de almidn, cidos grasos y aminocidos. b) El que sale al citosol, por un proceso similar a la gluclisis en sentido inverso, da lugar a glucosa y fructosa. Juntas forman sacarosa, que es el azcar propio de la savia, al igual que la glucosa lo es de la sangre. Regeneracin de la ribulosa-1,5-difosfato. Se realiza a partir del gliceraldehdo 3-fosfato, mediante un proceso complejo, en el que

se suceden compuestos de 4, 5 y 7 carbonos, similar al ciclo de las pentosas fosfato en sentido inverso. En el ciclo de Calvin, por cada CO2 incorporado, se precisan 2 NADPH y 3 ATP. La fase oscura es, pues, un proceso puramente bioqumico: no requiere la presencia de luz, ni siquiera de clorofila.

Tilacoide

Estroma

Citosol

2 Pi 2 ATP 2 ADP 2 (NADPH + H +)

cido 1,3-difosfoglicrico (2 molculas de 3C)

2 NADP+
Almidn cidos grasos Aminocidos Glucosa + Fructosa Sacarosa

2 Pi
cido 3-fosfoglicrico (2 molculas de 3 C) Gliceraldehdo 3-fosfato (2 molculas de 3 C)

H2O
Compuesto inestable de 6 C

Ciclo de Calvin
Series sucesivas de compuestos de 3, 4, 5 y 7 carbonos, en las que a partir de 5 gliceraldehdos 3-fosfato se obtienen 3 ribulosas 5-fosfato

CO2

Ribulosa 1,5-difosfato carboxilasa oxidasa Ribulosa 1,5-difosfato (1 molcula de 5 C) Ribulosa 5-fosfato ADP ATP (1 molcula de 5 C)

Cloroplasto

5 Ciclo de Calvin.

Balance de la fotosntesis oxignica del carbono. En la fase luminosa se produce el ATP y el NADPH necesarios para, en la fase oscura, reducir el CO2 a materia orgnica. Si, por ejemplo, se considera la sntesis de una molcula de glucosa (C6H12O6), se observa que son necesarios 6 CO2 y 12 H2O. Esta agua libera sus 6 O2 a la atmsfera, durante la fase luminosa, y aporta los 12 hidrgenos de la glucosa y los 12 hidrgenos necesarios para pasar los 6 O2 sobrantes del CO2 a H2O. Como intervienen 24 hidrgenos, aparecen

24 H y 24 e, y como cada electrn precisa el impacto de dos fotones, uno en el PSI y otro en el PSII, se necesitan 48 fotones (h). En el ciclo de Calvin se precisan, por cada CO2 incorporado, 2 NADPH y 3 ATP; as pues, para una glucosa son necesarios 12 NADPH y 18 ATP. Como en la fase luminosa acclica slo se obtienen 1,33 ATP por cada H2O hidrolizada y se gastan 12 H2O, se producen 15,96 ATP; el resto hasta 18 se supone que proceden de la fase luminosa cclica.
217

El balance global de la fotosntesis diferenciando las dos fases se ilustra en la figura 6. La ecuacin qumica de la fotosntesis de una molcula de glucosa es pues: 6 CO2 12 H2O
48 hv
5

clorofila

C6H12O6 6 O2 6 H2O

Experimentalmente se precisan cuatro veces ms, por lo que el rendimiento de la fotosntesis suele ser de un 25 % respecto al modelo explicado. b) Sntesis de compuestos orgnicos nitrogenados. La reduccin de los iones nitrato que se encuentran disueltos en el suelo se realiza, gracias al ATP y al NADPH obtenidos en la fase luminosa, en tres etapas (fig. 7): 1. Los iones nitrato (NO 3 ) son reducidos a io) por la enzima nitrato renes nitrito (NO 2 ductasa, gastando un NADPH. 2. Los nitritos son reducidos a amoniaco (NH3) por la enzima nitrito reductasa, gastando un NADPH.

3. A continuacin, el amoniaco obtenido, que resulta txico para la planta, es rpidamente captado por el cido -cetoglutrico, dando lugar al cido glutmico. De este modo pasa a formar parte de la materia orgnica de la clula. Esta reaccin es catalizada por la enzima glutamato sintetasa y precisa el gasto de un ATP. A partir del cido glutmico, los tomos de nitrgeno pueden pasar, en forma de grupo amino, a otros cetocidos y dar lugar a otros aminocidos (ver pgina 234). Algunas bacterias y cianobacterias pueden fijar el nitrgeno atmosfrico, N2, como se ver ms adelante. c) Sntesis de compuestos orgnicos con azufre. A partir del NADPH y del ATP de la fase luminosa, se reduce el ion sulfato (SO 2 4 ) a ion 2 sulfito (SO3 ) y luego a sulfuro de hidrgeno (H2S). ste, al combinarse con la acetilserina, da lugar al aminocido cistena, con lo que pasa a formar parte de la materia orgnica celular (fig. 8).

12 NADP + 12 H2O 18 (ADP + Pi)

12 (NADPH + H +) 6 O2 18 ATP

12 (NADPH + H +) 6 CO2 18 ATP

12 NADP + C6H12O6 + 6 H 2 O 18 (ADP + Pi)

6 Balance de la fotosntesis.

NADPH H
NO3

NADP
NH2

NADPH H

NADP
NH4

cido -cetoglutrico cido glutmico ATP ADP Pi

Nitrato reductasa

Nitrito reductasa

7 Sntesis de compuestos orgnicos nitrogenados.

NADPH + H+ SO4
2

NADP+

3 ( NADPH + H +) SO3
2

3 NADP +

Acetilserina H2S

Acetat Cistena

3 ATP

3 (ADP + P)

8 Sntesis de compuestos orgnicos con azufre.

218

ocumento 4
bonos (de ah que se hable de plantas C4). El cido oxalactico pasa a cido mlico y ste, a travs de los plasmodesmos, pasa a los cloroplastos de las clulas internas. En estos cloroplastos se libera el CO2, que sigue el ciclo de Calvin. En estas plantas no se producen, pues, perjuicios por la existencia de fotorrespiracin.
Epidermis

La fotorrespiracin y la ruta de Hatch-Slack

La fotorrespiracin La fotorrespiracin tiene lugar cuando el ambiente es clido y seco, y los estomas de las hojas se cierran para evitar la prdida de agua. Entonces, el oxgeno producido en la fotosntesis alcanza grandes concentraciones. En estas condiciones, la enzima ribulosa difosfato carboxilasa oxidasa acta con funcin oxidasa y oxida la ribulosa-1,5difosfato (5 C) dando cido 3-fosfoglicrico (3 C) y cido glicoclico (2 C). ste pasa a los peroxisomas, donde por cada dos molculas de cido glicoclico se obtiene una de cido fosfoglicrico y una de CO2. Todos estos procesos, similares a los de la respiracin, pero provocados por la fotosntesis, reciben el nombre de fotorrespiracin. La fotorrespiracin resulta, pues, muy perjudicial, pues reduce en un 50 % la capacidad fotosinttica de la planta. La ruta de Hatch-Slack o de las plantas C4 En las plantas de clima tropical, donde la fotorrespiracin podra constituir un grave problema, se presenta un proceso diferente para captar el CO2. En estas plantas se distinguen dos tipos de cloroplastos: unos que se encuentran en las clulas internas, lindantes con los vasos conductores de las hojas, y otros que se encuentran en las clulas del parnquima cloroflico perifrico, el denominado mesfilo. En estos ltimos se realiza la fijacin del CO2. La molcula aceptora del CO2 es el cido fosfoenolpirvico (PEPA), y la enzima que acta es la fosfoenolpiruvato carboxilasa. La fosfoenolpiruvato carboxilasa no es perjudicada por una concentracin alta de O2. A partir del PEPA y del CO2 se forma cido oxalactico, un compuesto de cuatro carCLULA DE MESFILO Cloroplasto
CO2

Cloroplasto

Hoja de planta C3

Epidermis Mesfilo Cloroplasto

Hoja de planta C4 Plantas C3 y C4. Las diferencias a nivel histolgico entre las plantas C3 y C4 se pueden observar en cortes de sus hojas. CLULA PERIVASCULAR
Vaso de floema

Plasmodesmos

Cloroplasto

cido oxalactico (4 C)

cido mlico (4 C)

cido mlico (4 C) CO2 Ribulosa 1,5-difosfato Ciclo de Calvin Almidn Glucosa Sacarosa

cido fosfoenol cido pirvico pirvico (3 C) (3 C) ADP ATP

cido pirvico (3 C)

Pared de celulosa

Va de Hatch-Slack.

CUESTIONARIO 3
1. Sera posible la vida si el dador de hidrgenos fuera el HS2 en vez del H2O? 2. Ni en la fotosntesis bacteriana ni en la fase cclica, que se da en los cloroplastos, se desprende oxgeno. Es por la misma causa? Razona la respuesta. 3. Por qu disminuye el rendimiento de la fotosntesis en las plantas C3 cuando en ellas hay escasez de agua? 4. Por qu no sucede esto en las plantas C4? 5. Qu molculas se pueden sintetizar a partir del ciclo de Calvin, y en qu lugar sucede?

219

ocumento 5
generativa, en que la ribulosa-5-fosfato se transforma en glucosa-6-fosfato mediante una serie de pasos en los que aparecen glcidos de 3, 4 y 7 carbonos. Esta fase se da cuando la clula no precisa pentosas sino solamente NADPH. La fase regenerativa es reversible. El sentido inverso se sigue cuando la clula precisa pentosa y no NADPH. En parte coincide con la regeneracin, en el ciclo de Calvin, de la ribulosa-1,5-difosfato a partir del cido 3-fosfoglicrico.
Va de las pentosas fosfato. 2 ( NADPH + H +) CO2
Fase oxidativa

El ciclo de las pentosas fosfato

La glucosa puede catabolizarse mediante gluclisis con el fin de obtener ATP y NADH, o mediante el ciclo de la pentosa fosfato para obtener pentosas como la ribosa, necesaria para la sntesis de nucletidos, y coenzima NADPH, necesaria para muchas biosntesis, como, por ejemplo, la de cidos grasos. En este ciclo puede distinguirse una fase oxidativa en que la glucosa-6-fosfato pasa a ribulosa-5fosfato y CO2, obtenindose 2 NADPH; y una fase re2 NADP +

Glucosa 6-fosfato

VA DE LAS PENTOSAS FOSFATO Fructosa 6-fosfato 6C Eritrosa 4-fosfato 4C

Fase regenerativa Fase no oxidativa

Ribulosa 5-fosfato

Gliceraldehdo 3C Seudoheptulosa 5C

Xilulosa 5-fosfato 5C Ribosa 5-fosfato 5C

4 Factores que influyen en la fotosntesis

Se ha podido comprobar experimentalmente que en el rendimiento de la fotosntesis influyen los siguientes factores: La temperatura. Cada especie est adaptada a vivir en un intervalo de temperaturas. Dentro de l, la eficacia del proceso aumenta con la temperatura, debido a la mayor movilidad de las molculas, en la fase oscura, hasta llegar a una temperatura en que se inicia la desnaturalizacin de las enzimas, y el rendimiento lgicamente disminuye (fig. 9 a). La concentracin de CO2. Si la intensidad luminosa es elevada y constante, el rendimiento del proceso fotosinttico aumenta en relacin directa con la concentracin de CO2 en el aire, hasta llegar a un cierto valor, a partir del cual el rendimiento se estabiliza (fig. 9 b). La concentracin de O2. Cuanto mayor es la concentracin de oxgeno en el aire, menor es el rendimiento fotosinttico, debido a los procesos de fotorrespiracin (fig. 9 c).
220

La intensidad luminosa. Cada especie est adaptada a vivir dentro de un intervalo de intensidad de luz. Hay especies de penumbra y especies fotfilas. Dentro de cada intervalo, a mayor intensidad luminosa, mayor rendimiento, hasta superar ciertos lmites, en los que se produce la fotooxidacin irreversible de los pigmentos fotosintticos. Para la misma intensidad luminosa, las plantas C4 (adaptadas a climas secos y clidos), como son las gramneas, presentan mayor rendimiento que las plantas C3, y nunca llegan a la saturacin lumnica (fig. 9 d). La escasez de agua. La escasez de agua en el suelo y de vapor de agua en el aire disminuye el rendimiento fotosinttico. Ello es debido a que, ante la falta agua, se cierran los estomas para evitar la desecacin de la planta, y entonces la entrada de CO2 se ve dificultada. Adems, el aumento de la concentracin de oxgeno interno provoca la fotorrespiracin. Ello explica que, en estas condiciones, las plantas C4 sean ms eficaces que las C3.

 El tiempo de iluminacin. Hay especies en las que, a ms horas de luz, ms produccin fotosinttica tienen. Otras, en cambio, precisan alternarlas con horas de oscuridad. El color de la luz. La clorofila y la clorofila absorben energa lumnica en la regin azul y roja del espectro; los carotenos y xantofilas, en la azul; las ficocianinas, en la regin naranja; y las ficoeritrinas, en la verde. Todos estos pigmentos pasan la energa a las molculas diana. La luz monocromtica menos aprovechable en los organismos que carecen de ficocianinas y ficoeritrinas es la luz verde. En las cianofceas, que s las poseen, la luz roja estimula la sntesis de ficocianina, y la luz verde, la de ficoeritrina (fig. 9 e). Si la longitud de onda es superior a 680 nm (rojo lejano), no acta el PSII, y, en consecuencia, slo hay fase luminosa cclica, y el rendimiento fotosinttico disminuye sensiblemente.

CUESTIONARIO 4
Completa un cuadro como el siguiente, indicando qu pigmentos pueden prestar un mximo de absorcin para las diferentes longitudes de onda que aparecen y el color de la luz de esas longitudes de onda. (nm) 300-400 400-450 450-500 500-550 550-600 600-650 650-700 700-800 Color de la luz Pigmentos

Rendimiento fotosinttico

100 % Gramneas C4 tropicales La mayora de las plantas C3 Lquenes rticos y alpinos 20 0 20 40 60 T (C)

9 Factores que influyen en el rendimiento fotosinttico. a) Influencia de la temperatura. b) Influencia de la concentracin de CO2 en el aire. c) Influencia de la concentracin de oxgeno en el aire. d) Influencia de la intensidad luminosa en diferentes plantas. e) Absorcin de luz por parte de varios pigmentos fotosintticos segn la longitud de onda () de la radiacin luminosa. c
0,5 % O2 Rendimiento fotosinttico medido en cantidad de CO2 absorbido 80 20 % O2 60

Rendimiento fotosinttico medido segn la cantidad de CO2 absorbido por minuto

40

20

10 Concentracin de CO2 en el aire Clorofila Clorofila Bacterioclorofila Grado de absorcin

20

30

40 Clorofila

Intensidad de la luz ( 104 en erg/cm2/s)

e d
Rendimiento fotosinttico medido en cantidad de CO2 absorbido 50 40 Trigo 30 Hierbas helifilas 20 10 Haya Hierbas escifilas Musgos escifilos 10 20 30 40 50 60 70 80 Intensidad de la luz (en klux) Sorgo Maz

-carotina Ficoeritrina R

Ficocianina

Clorofila Bacterioclorofila

400

500

600

700

800

(nm)

Ultravioleta

Infrarrojo

221

Quimiosntesis

2. Tipos de bacterias quimiosintticas

Segn el sustrato utilizado, las bacterias se clasifican en los siguientes grupos: Bacterias incoloras del azufre. Estas bacterias oxidan azufre o compuestos de azufre. Son bacterias aerobias obligadas, ya que necesitan oxgeno para la oxidacin. Son las responsables de la transformacin del H2S, procedente de la descomposicin de la materia orgnica, que abunda en las aguas residuales. No deben ser confundidas con las bacterias rojas o verdes del azufre, que son fotosintticas: H2S 1/2 O2 S H2O Energa (50 kcal/mol) 2 S 3 O2 2 H2O 2 4 H Energa (119 kcal/mol) 2 SO4 Bacterias del nitrgeno. Este grupo oxida compuestos reducidos de nitrgeno. Son las responsables de oxidar el amoniaco, generalmente procedente de la descomposicin de cadveres animales, de defecaciones y de restos vegetales, y transformarlo en nitratos que pueden ser asimilados por las plantas. Existen dos grupos de bacterias del nitrgeno: a) Bacterias nitrosificantes. Transforman amoniaco en nitritos. Por ejemplo, Nitrosomonas: 2 NH3 3 O2 2 NO 2 2 H 2 H2O Energa (65 kcal/mol) b) Bacterias nitrificantes. Transforman nitritos en nitratos. Por ejemplo, Nitrobacter: NO 2 1/2 O2 NO 3 Energa (18 kcal/mol) Bacterias del hierro. Oxidan compuestos ferrosos (Fe2) a frricos ( Fe3). Transforman los depsitos minerales de carbonatos de hierro en yacimientos de xidos de hierro: 2 FeCO3 3 H2O 1/2 O2 2 Fe(OH)3 2 CO2 Energa (40 kcal/mol) Bacterias del hidrgeno. Estas bacterias son quimioauttrofos facultativos, que pueden utilizar el hidrgeno molecular: H2 1/2 O2 H2O Energa (57 kcal/mol)

La quimiosntesis consiste en la sntesis de ATP a partir de la energa que se desprende en las reacciones de oxidacin de determinadas sustancias inorgnicas. Los organismos que realizan estos procesos se denominan quimioauttrofos o quimiolittrofos. Todos ellos son bacterias. Muchos de los compuestos reducidos que utilizan, como el NH3 o el H2S, son sustancias procedentes de la descomposicin de la materia orgnica. Al oxidarlas, las transforman en 2 respectivamente, sustancias minerales, NO 3 y SO4 que pueden ser absorbidas por las plantas. Cierran, pues, los ciclos biogeoqumicos, posibilitando la vida en el planeta.

1. Fases de la quimiosntesis
En la quimiosntesis, al igual que en la fotosntesis, tambin se pueden distinguir dos fases: una primera fase en la que se obtiene ATP y coenzima reducida, que en las bacterias es NADH en lugar de NADPH; y una segunda fase en la que se emplea el ATP y el NADH para sintetizar compuestos orgnicos a partir de sustancias inorgnicas (CO2, NO 3, 2 , etc.). SO4 En la primera fase, la reaccin de oxidacin de las sustancias inorgnicas constituye la fuente de energa para la fosforilacin del ADP, en la cadena respiratoria, proceso denominado fosforilacin oxidativa. Parte de este ATP se emplea para provocar un transporte inverso de electrones en la propia cadena respiratoria para la obtencin de NADH. En la segunda fase, las vas metablicas seguidas coinciden con las de la fase oscura de la fotosntesis. Por ejemplo, el carbono se incorpora a partir del CO2, mediante el ciclo de Calvin; el nitrgeno se incorpora a partir de los nitratos, etctera. Algunas especies de bacterias pueden incorporar nitrgeno a partir del nitrgeno atmosfrico (N2).

Primera fase (oxidacin) 1 O2 2

NO2

NAD

NADH H

ATP ADP Pi ATP

ADP Pi ATP

222

QUIMIOSNTESIS

Segunda fase (Ciclo de Calvin)

NADH H
NO3

NAD C6H12O6 6 H2O ADP Pi

6 CO2

6 Organismos fijadores de nitrgeno

Los organismos auttrofos (fotosintticos y quimiosintticos) captan el nitrgeno a partir de los nitratos disueltos, mientras que los hetertrofos lo hacen a partir de los alimentos orgnicos. Excepcionalmente, existe un grupo de bacterias y cianobacterias que son capaces de fijar el nitrgeno atmosfrico. Esto es posible gracias a que poseen un complejo enzimtico denominado nitrogenasa, formado por una enzima que posee un grupo prosttico con tomos de hierro (Fep) y otra cuyo grupo prosttico tiene tomos de hierro y molibdeno (MoFep). La fuente de electrones para la reduccin del nitrgeno atmosfrico puede ser el NADH. Los electrones son transferidos, inicialmente, a la ferredoxina, que los transfiere a su vez a la nitrogenasa. Los seis electrones necesarios se van cediendo de dos en dos. El ltimo paso precisa ATP (fig. 10). n ATP n (ADP Pi) N2 (6 e 6 H)
5

3 (NADH + H+)

3 NAD+ 6 e

Ferredoxina
6 H+

Ferredoxina
6 e

Ferredoxina

Fep

2 H+

MoFep

HN NH

2 e

(2 NH3)

2 H+

Ejemplos de organismos fijadores de N2 son algunas bacterias hetertrofas de vida libre como Azotobacter y Clostridium, bacterias simbiontes de plantas, como Rhizobium, que se encuentra en los ndulos radiculares de las leguminosas (fig. 11), algunas bacterias fotosintticas como Rhodospirillum y muchas especies de cianobacterias.

H2N NH2
2 H+

2 e

NH3 + NH3

2 e

10 La fijacin del nitrgeno atmosfrico.

11 Se dice que las leguminosas son los nicos vegetales que pueden asimilar nitrgeno libre. Ello se debe a la relacin simbitica que a travs de sus races establecen con bacterias del gnero Rhizobium formando los caractersticos ndulos.

CUESTIONARIO 5
1. Qu diferentes fuentes de nitrgeno utilizan los distintos tipos metablicos de clulas? 2. Qu clulas pueden realizar el ciclo de Calvin? 3. La enzima nitrito sintetasa regula una reaccin de oxidacin o de reduccin? 4. De dnde obtienen las bacterias fijadoras de nitrgeno los glcidos para realizar su proceso respiratorio? 5. Investiga qu relacin tienen unos genes llamados nif en la fijacin del nitrgeno.

Nitrogenasa

N=N

223

ocumento 6

La fotosntesis anoxignica o bacteriana

Las bacterias slo poseen fotosistemas I (PSI). Al carecer de fotosistemas II (PSII), no pueden utilizar el agua como dador de electrones, y, en consecuencia, no generan oxgeno al realizar la fotosntesis. Segn la molcula que utilizan como dador de electrones y el lugar en que acumulan sus productos, se pueden distinguir tres tipos de bacterias fotosintticas: a) Sulfobacterias purpreas. Utilizan H2S como dador de electrones y acumulan azufre en su interior: NAD NADH H H2S
5

clorofilas a, b, c, d y e, y los carotenos. La molcula diana generalmente es la denominada P890. En lugar de NADP utilizan el NAD, en lugar de plastoquinona existe ubiquinona y en vez de los citocromos b y f utilizan el citocromo c. Los aceptores de electrones pueden ser inorgnicos (CO2, NO 3 , N2...) u orgnicos, como el cido actico. NADH H n(CO2) ATP NADH H n(CH3 COOH)
cido actico

NAD
5

(CH2O)n

S 2 H 2 e

ADP Pi NAD
5

b) Sulfobacterias verdes. Utilizan H2S, pero no acumulan azufre en su interior. c) Bacterias verdes carentes de azufre. Utilizan materia orgnica como donadora de electrones. Por ejemplo, las que utilizan cido lctico : NAD NADH H CH3 CHOH COOH
cido lctico
5

(CH2O)n

ATP

ADP Pi

CH3 CO COOH
cido pirvico

En las bacterias, los fotosistemas I (PSI) se encuentran en la membrana plasmtica, en el caso de las bacterias purpreas, y en la membrana de orgnulos especiales, en las bacterias verdes. Los pigmentos fotosintticos son las bacterio-

Igual que en la fotosntesis oxignica, existen una fase luminosa y una fase oscura, y dentro de la fase luminosa se pueden distinguir un transporte de electrones acclico y otro cclico. En el cclico slo se obtiene ATP, mientras que en el acclico se reduce el NAD a NADH, que luego se uti liza para reducir el CO2, el NO3 , etc. El NADH tambin puede obtenerse en ausencia de luz, gracias al ATP obtenido en el proceso cclico.

CUESTIONARIO 6
1. Se podra dar la fase oscura sin la fase luminosa acclica? Por qu? 2. Se podra dar indefinidamente la fase luminosa acclica sin la fase oscura o se detendra por la falta de un sustrato? Qu es estar relacionados por dependencia de sustrato? 3. Sera posible la vida si slo se diera la fase luminosa cclica? 4. El oxgeno que se desprende durante la fotosntesis procede del CO2 o del H2O? 5. A qu molcula orgnica se une el CO2 para convertirse en carbono orgnico? 6. Dnde se producen las diferentes reacciones de la fotosntesis en los cloroplastos? 7. Cuntas molculas de ATP y NADPH se utilizan en la reduccin del CO2 para su incorporacin a la materia orgnica? 8. Por el da las plantas verdes realizan la fotosntesis. Qu ocurre con la energa y el poder reductor formados por la noche?

CUESTIONARIO 7
1. En qu consiste la quimiosntesis? 2. En qu emplean las bacterias quimiosintticas la energa producida en sus reacciones? 3. Qu queremos decir con la palabra quimiolittrofo?

4. Cul es la fuente de energa del hidrgeno, del carbono y del nitrgeno en las bacterias nitrosificantes? 5. Todos los hetertrofos son quimioorgantrofos? Razona la respuesta. 6. Cuando algn material de hierro se oxida por la humedad, intervienen en el proceso bacterias del hierro?

224

LABORATORIO

Pigmentos fotosintticos
Material necesario
Hojas verdes de un vegetal (se recomienda espinaca). Mortero. Vaso de precipitados. NaOH 20 %. Papel para cromatografa (Whatmann). CaCO3 y alcohol etlico de 96. ter de petrleo. Cpsula de Petri. Papel de filtro. Agua destilada.

2. Triturar estos fragmentos en el mortero aadiendo unos 50 cm3 de etanol de 96 y una pequesima cantidad de CaCO3 (la que pueda caber en la punta de una esptula), para evitar la degradacin de los pigmentos. Seguir triturando hasta que el disolvente tenga el mismo color verde de la hoja. 3. Filtrar con un papel de filtro sin excesivos pliegues. 4. Colocar parte del filtrado en una cpsula de Petri, hasta que alcance unos 3 o 4 milmetros de altura. Situar sobre l una tira de papel para cromatografa, doblado en uve, de forma que se mantenga vertical. Debe evitarse tocar el papel con los dedos en su parte central, y que el papel toque las paredes de la cpsula (ver figura). 5. Esperar unos veinte minutos, para que los diferentes pigmentos se vayan separando al avanzar por la tira de papel cromatogrfico. Los pigmentos diferenciados son: clorofila (verde limn), clorofila (verde azulado), -caroteno (rojo) y xantofila (amarillo).

SEPARACIN POR CROMATOGRAFA

Esta prctica est basada en la diferente solubilidad de los pigmentos fotosintticos en un disolvente orgnico como el etanol, que es miscible con el agua. Al hacer avanzar el alcohol con los pigmentos disueltos por un papel cromatogrfico cuyas fibras de celulosa estn ms o menos hmedas a causa de la humedad del aire, los distintos tipos de pigmentos se separan debido a que el medio es cada vez ms pobre en etanol y ms rico en agua. 1. Lavar hojas recin cogidas, cortarlas en trocitos pequeos, procurando que no haya nerviaciones, y secarlas, lo mejor posible, entre dos hojas de papel de filtro. Responde a las siguientes cuestiones: 1. Qu colores han aparecido y en qu orden? 2. A qu pigmento corresponde cada color? 3. Observa la estructura qumica de los pigmentos y razona la distinta movilidad de cada uno de ellos.

LA FLUORESCENCIA DE LA CLOROFILA
Poner una cierta cantidad de la disolucin alcohlica de pigmentos fotosintticos en un tubo de ensayo. Mirarla al trasluz, es decir, mediante refraccin de la luz. Se ve de color verde transparente. Mirarla tambin bajo una potente luz, es decir, por reflexin. Se ve de color rojo opaco. Puede utilizarse la luz natural o la luz de una bombilla potente. A qu se deben estas diferencias?

SEPARACIN DE PIGMENTOS FOTOSINTTICOS

Poner 4 cm3 de la disolucin alcohlica de pigmentos fotosintticos en un tubo de ensayo. Aadir 2 cm3 de ter del petrleo y agitar suavemente durante 30 segundos. A continuacin aadir 2 cm3 de agua destilada, observando cul es el medio ms denso, volver a agitar y, luego, dejar reposar el tubo en la gradilla durante unos 10 minutos. Qu se observa? Comenta qu pigmentos hay posiblemente en cada fase y por qu se han distribuido as. En otro tubo se realiza lo mismo y adems se aade 1 cm3 de NaOH al 20 %, se agita y se deja reposar durante 10 minutos. El NaOH saponifica el fitol y produce la precipitacin de las clorofilas. Cmo se distribuyen ahora los pigmentos? Justifica la respuesta.

Cromatografa.

225

14
N D I C E
INFORMACIN 1 El anabolismo hetertrofo. 2 Anabolismo de los glcidos.
Gluconeognesis. Glucogenognesis y amilognesis.

Anabolismo hetertrofo

3 Anabolismo de los lpidos.

Obtencin de los cidos grasos. Obtencin de la glicerina. Formacin de triacilglicridos.

4 Anabolismo de los constituyentes de las protenas. 5 Anabolismo de los componentes de los cidos nucleicos. 6 La evolucin de los procesos metablicos.
Organismos fermentadores estrictos. Organismos fotosintticos anoxignicos. Organismos quimiohetertrofos de respiracin anaerbica. Organismos fotoauttrofos oxignicos. Organismos quimiohetertrofos de respiracin aerbica. Organismos quimioauttrofos. Organismos eucariotas fotoauttrofos y quimiohetertrofos.

Clulas de raz de patata. Microfotografa realizada con microscopio electrnico de barrido, en la que podemos observar muchos amiloplastos.

El anabolismo hetertrofo parte de sustancias orgnicas sencillas, elaborando con ellas otras progresivamente ms complejas. Los vegetales, como consecuencia de la sntesis auttrofa, disponen de sustancias orgnicas sencillas a partir de las cuales pueden elaborar compuestos orgnicos ms complejos mediante un mecanismo similar al llevado a cabo en los seres hetertrofos (animales y hongos), los cuales inician su anabolismo con productos orgnicos sencillos, ya que son incapaces de formarlos partiendo de materia inorgnica.

LABORATORIO
Reconocimiento de la presencia de almidn.

226

1 El anabolismo hetertrofo
El anabolismo hetertrofo es el proceso metablico de formacin de molculas orgnicas complejas a partir de molculas orgnicas sencillas. stas se denominan molculas precursoras. Se realiza tanto en las clulas auttrofas como en las hetertrofas. En el anabolismo hetertrofo se pueden distinguir dos fases: una primera de biosntesis de monmeros mediante sus precursores (por ejemplo, la sntesis de glucosa a partir de cido pirvico) y una segunda de biosntesis de polmeros mediante los monmeros (por ejemplo, la sntesis de glucgeno a partir de glucosa). Las molculas orgnicas sencillas precursoras pueden proceder: a) del catabolismo de las sustancias de reserva (tanto en clulas auttrofas como hetertrofas); b) de la digestin de los alimentos orgnicos (slo en clulas hetertrofas); y c) de la fotosntesis o de la quimiosntesis (slo en clulas auttrofas). En muchas ocasiones, las vas anablicas hetertrofas son parecidas a las vas catablicas en sentido inverso, pero no iguales. Ello se debe a que no todas las enzimas pueden catalizar en los dos sentidos. Cuando una enzima slo cataliza en un sentido una reaccin, se necesita otra enzima, u otras enzimas, para realizar el paso inverso, con lo que pueden aparecer metabolitos diferentes y, por tanto, vas metablicas distintas. De esta forma la clula puede determinar el sentido y evitar un caos metablico. Por ejemplo, el paso de cido pirvico a glucosa no es simplemente una gluclisis (paso de glucosa a cido pirvico) al revs, sino que presenta varios pasos intermedios ms. El anabolismo hetertrofo se puede dividir en: anabolismo de glcidos, de lpidos, de protenas y de cidos nucleicos (fig. 1). Estas distintas vas estn interrelacionadas. Gracias a ello, a partir de un tipo de biomolculas se puede sintetizar otro. Por ejemplo, los animales herbvoros a partir de hierba (glcido) producen carne y leche (protenas y lpidos). No siempre todas las interrelaciones son posibles; por ejemplo, los animales no pueden obtener glcidos, indispensables para la vida, a partir de una dieta exclusiva de lpidos y protenas. De ah el peligro de los regmenes de adelgazamiento que consisten en suprimir totalmente los glcidos.

1 Esquema general del metabolismo de la clula eucariota. Las flechas hacia abajo son el catabolismo y las flechas hacia arriba, el anabolismo.
POLISACRIDOS
Glucogenlisis Fotosntesis Quimiosntesis Glucogenognesis

TRIGLICRIDOS

PROTENAS

CIDOS NUCLEICOS Nucletidos

Glicerina Glucosa Glicerol-3-fosfato Glucosa-6-fosfato

cido graso

Neoglucognesis Gluclisis

Pentosa-6fosfato

Bases nitrogenadas

Dihidroxiacetona cido-3-fosfoglicrico cido-2-fosfoenolpirvico

Transaminacin

Aminocidos

cido cido glutmico -cetoglutrico

cido pirvico
Ferm e ci nta n

A. oxalactico A.mlico H2O O2

Cadena respiratoria

Biosntesis de los cidos grasos

NH3

A. lctico

Acil-CoA

Acetil-CoA A. ctrico

Molcula propia del metabolismo de los glcidos Molcula propia del metabolismo de los lpidos Molcula propia del metabolismo de las protenas Molcula propia del metabolismo de los cidos nucleicos

Acetil-CoA

Acil-CoA
b- oxidacin

A. ctrico A. oxalactico NAD + Ciclo + CO2 de Krebs NADH H A.succnico A.a-cetoglutrico ATP ADP P CO2

227

A diferencia del catabolismo, que es un proceso de oxidacin, el anabolismo hetertrofo es un proceso de reduccin. A partir de molculas orgnicas pequeas se obtienen molculas orgnicas grandes, mucho ms reducidas. Por ejemplo, a partir de cido pirvico (C3H4O3), con poco ms de un hidrgeno por carbono, se obtiene glucosa (C6H12O6), con dos hidrgenos por carbono. La energa necesaria para todos los procesos del anabolismo hetertrofo se obtiene de la desfosforilacin de molculas de ATP (ATP ADP Pi Energa). Este ATP procede del catabolismo y, en los organismos auttrofos, adems, de la fotosntesis o de la quimiosntesis. Las reacciones anablicas son endergnicas, es decir, almacenan energa en los enlaces de las molculas formadas. Un enlace peptdico retiene 4 kcal/mol, un enlace glucosdico 4 kcal/mol, y un enlace esterfosfrico 6,5 kcal/mol. En los vegetales, la mayor parte de la energa conseguida por las clulas es utilizada para la produccin

de glcidos (celulosa, almidn, etc.). En los animales vertebrados, en cambio, la mayor parte es utilizada para la produccin de prtidos, mientras que la energa consumida para obtener el resto de los principios inmediatos es mucho ms reducida. Ello se debe a que tanto los msculos como los huesos, que conforman la estructura del organismo, tienen un elevado porcentaje de protenas que constantemente hay que renovar; mientras que los glcidos y lpidos, preferentemente, slo desempean funcin energtica. La mayora de las vas anablicas hetertrofas se dan en el citosol. Las excepciones ms importantes son: 1.) La sntesis de cidos nucleicos que se da en el ncleo, cloroplastos y mitocondrias. 2.) La sntesis de protenas que se da en los ribosomas. 3.) La sntesis de fosfolpidos y colesterol que se da en el retculo endoplasmtico. 4.) La glucosilacin de lpidos y protenas que se da en el retculo endoplasmtico y contina en el aparato de Golgi.

2 Anabolismo de los glcidos

En el anabolismo hetertrofo de los glcidos se pueden distinguir dos fases: a) Obtencin de glucosa. La glucosa se puede obtener, tanto en las clulas animales como en las vegetales, a partir de ciertas molculas no glucdicas, resultantes del catabolismo, mediante un proceso denominado gluconeognesis o neoglucognesis. En las clulas auttrofas, adems, se puede obtener a partir de un proceso que se origina en el ciclo de Calvin, y que coincide con el tramo final de la gluconeognesis excepto que utiliza NADPH en lugar de NADH. En las clulas animales se puede obtener a partir de la digestin. b) Obtencin de polmeros de glucosa o de otras hexosas. Los ms importantes son los polmeros de glucosa mediante enlace . Difieren segn el tipo de clula: en las clulas vegetales se sintetiza almidn, proceso denominado amilognesis, mientras que en las animales se sintetiza glucgeno, proceso denominado glucogenognesis (fig. 2).
Glucgeno
Glucogenognesis Glucogenlisis

Glucosa

Gluconeognesis o Neoglucognesis

Gluclisis

cido pirvico

1. Gluconeognesis
La gluconeognesis es el proceso de obtencin de glucosa a partir de sustancias orgnicas no glucdicas. stas pueden ser en las clulas animales el
228

2 Vas metablicas de los glcidos a partir del cido pirvico. Las clulas de los animales obtienen la glucosa a partir de la digestin de glcidos, o la sintetizan a partir del cido pirvico, que tiene diversas procedencias. Las clulas auttrofas pueden obtener la glucosa a partir del ciclo de Calvin, o tambin a partir del cido pirvico. En lugar de glucgeno, estos seres fabrican almidn.

cido pirvico o los aminocidos; y, en las clulas vegetales y en los microorganismos, adems, los cidos grasos. Esta diferencia se debe a que las clulas animales carecen de las enzimas que transforman el acetil-CoA, que es el producto ltimo del catabolismo de los cidos grasos, en cido oxalactico, que es la molcula comn a todas las vas de la gluconeognesis. Estas enzimas, denominadas enzimas del ciclo del cido glioxlico, se encuentran slo en las clulas vegetales, en unos orgnulos denominados glioxisomas. Esto explica por qu los animales no pueden sintetizar glcidos a partir de los lpidos de la dieta, mientras que las semillas vegetales s pueden aprovechar sus aceites para fabricar la celulosa y el almidn de sus primeras hojas y races. El cido pirvico puede proceder de la gluclisis, del catabolismo de varios aminocidos y de la transformacin del cido lctico producido durante la fermentacin lctica en los msculos. En los animales, la gluconeognesis se da preferentemente en el hgado y en el rin. El cido lctico producido en los msculos llega al hgado a travs de la sangre. La gluconeognesis a partir del cido pirvico no es exactamente el proceso inverso de la gluclisis. Coinciden en seis pasos que son reversibles, y difieren en tres que son irreversibles. stos son (fig. 3): 1. Conversin de cido pirvico en cido fosfoenolpirvico. Como la enzima que hace el paso inverso en la gluclisis slo trabaja en un sentido, y como no existe ninguna enzima capaz de hacer este paso directamente, se precisa dar el siguiente rodeo: el cido pirvico entra en la mitocondria, ya que es en este orgnulo donde est la enzima piruvatocarboxilasa, capaz de transformarlo en cido oxalactico. Esta molcula no puede atravesar la membrana interna de la mitocondria, por lo que debe transformarse en cido mlico, el cual sale al citosol, en donde se transforma en cido oxalactico, y ste finalmente se transforma en el cido fosfoenolpirvico. 2. Transformacin de fructosa-1,6-difosfato en fructosa-6-fosfato. Este paso, inverso al de la gluclisis, no lo puede catalizar la misma enzima, ya que slo trabaja en un sentido. Lo realiza la enzima fructosa-1,6-difosfatasa, que acta provocando la hidrlisis de un grupo fosfato sin que haya acoplado sntesis de ATP. 3. Paso de glucosa-6-fosfato a glucosa. Dado que la enzima que cataliza el paso inverso en la gluclisis slo trabaja en un sentido, se precisa otra enzima, la glucosa-6-fosfatasa, que separa el grupo fosfato sin que tampoco haya acoplado sntesis de ATP (fig. 3).

3 ATP ADP

Glucosa
Pi

Glucosa -6- fosfato

2 ATP ADP

Fructosa -6- fosfato Pi

Fructosa -1, 6- difosfato

Gliceraldehdo -3- fosfato

Dihidroxiacetona fosfato

G L U C L I S I S

cido -3- fosfoglicrico

cido -2- fosfoglicrico

cido -2- fosfoenolpirvico GDP GTP CO2

G L U C O N E O G N E S I S

A. oxalactico NADH + H + NAD + A. mlico

ADP ATP

NAD + NADH + H+ ATP ADP + Pi

A. mlico A. oxalactico CO2 A. pirvico cidos grasos

Slo en plantas y organismos con el ciclo del cido glioxlico

cido pirvico

cido lctico

Aminocidos

3 Gluconeognesis. Las flechas hacia arriba sealan la gluconeognesis (anabolismo); las que van hacia abajo, la gluclisis (catabolismo). Los pasos , y son aquellos en que difiere de la gluclisis en sentido inverso, ya que sus enzimas glucolticas slo trabajan en un sentido. En fondo verde se han indicado sustratos que convergen en esta va anablica.

229

2. Glucogenognesis y amilognesis
La glucogenognesis es la sntesis de glucgeno a partir de glucosa-6-fosfato. sta puede proceder de la gluconeognesis o de glucosa libre, que al entrar en la clula es fosforilada. Primero se transforma en glucosa-1-fosfato, luego reacciona con el uridn-trifosfato (UTP), que acta como activador, y forma uridndifosfato-glucosa, que ya posee la suficiente energa para unirse al extremo de una cadena de glucgeno, que acta como cebador, mediante un enlace O-glucosdico (1 4). Posteriormente interviene la enzima ramificante que corta pequeos fragmentos de la cadena y los inserta en otro lugar mediante enlaces (1 6). De forma similar se sintetiza la fraccin glucdica de las glucoprotenas, glucolpidos, mucopolisacridos, etc. (fig. 4) La amilognesis es la sntesis de almidn. Se da en las clulas vegetales, en los plastos. Es un proceso similar a la glucogenognesis, cuya nica diferencia es que la molcula activadora es el ATP.

ocumento 1

El equilibrio entre glucgeno y glucosa

La glucogenognesis se da especialmente en el hgado y en los msculos. La glucosa que procede de la digestin se acumula en el hgado en forma de glucgeno. Cuando el nivel de glucosa en sangre disminuye por debajo de 1 g/l, el glucgeno heptico se hidroliza y libera glucosa a la sangre. Esta doble funcin del hgado, sintetizar glucgeno y liberar glucosa, est regulada por tres hormonas: la adrenalina y el glucagn, que aumentan la salida de glucosa a la sangre, y la insulina que incrementa la entrada de glucosa en la clula. El glucgeno muscular, en cambio, es una reserva particular de glucosa para las clulas musculares. Si el msculo trabaja en anaerobiosis, produce cido lctico que, al cristalizar, origina las agujetas. ste, a travs de la sangre, llega al hgado, donde entra como precursor en la gluconeognesis, y acaba dando glucosa, con lo que finalizan las molestias.

CUESTIONARIO 1
1. Qu fuente de energa tienen las clulas animales para su anabolismo? 2. A partir de qu molcula del ciclo de Calvin se inicia la obtencin de la glucosa? 3. Por qu el cido pirvico entra en la mitocondria para iniciar la gluconeognesis? 4. Por qu la gluconeognesis tiene procesos en los que el cido oxalactico pasa a mlico y de nuevo a oxalactico? 5. Qu molcula activa a la glucosa para formar glucgeno? Es la misma que acta como activadora de la glucosa en la formacin de almidn?

4 Sntesis de glucgeno a partir de glucosa-6-fosfato.

Glucosa -6- fosfato

Gluc - Gluc - Gluc - Gluc - Gluc Glucgeno de n glucosas

Fosfoglucomutasa

UDP - Gluc

Glucosa -1- fosfato

UTP Uridiltransferasa PPi

UDP

UDP - glucosa

Gluc - Gluc - Gluc - Gluc - Gluc - Gluc Glucgeno de n 1 glucosas

230

ocumento 2
Dicho de otro modo, por qu el glucgeno es una molcula ramificada con slo un comienzo (el extremo reductor) y muchas ramas que terminan con unidades glucosilo no reductoras? La respuesta es que proporciona numerosos puntos de ataque a la glucgeno-fosforilasa en una molcula de glucgeno madura y el mismo nmero de puntos para que la glucgeno-sintetasa aada una unidad glucosilo. Si las clulas sintetizasen amilosa, slo habra un extremo no reductor por molcula. El resultado sera que tanto la degradacin como la sntesis del glucgeno seran, seguramente, procesos mucho ms lentos. De hecho, la glucgeno-fosforilasa y la glucgeno-sintetasa se encuentran normalmente en estrecha asociacin con grnulos de glucgeno en una clula, como si estuviesen en las ramas del rbol del glucgeno con fcil acceso a una multitud de azcares no reductores en los extremos de las ramas. T. M. DEVLIN Bioqumica

Aspectos especiales de la degradacin y sntesis del glucgeno

Dado que el glucgeno es una reserva tan buena de combustible, es obvio por qu sintetizamos y almacenamos glucgeno en el hgado y en el msculo. Pero, por qu almacenamos glucosa en forma de glucgeno? Por qu no almacenamos nuestro exceso de caloras de glucosa enteramente como grasa en lugar de glucgeno? La respuesta es, como mnimo, triple: (1) almacenamos grasa, algunos de nosotros en grandes cantidades, pero la grasa no se puede movilizar en el msculo tan rpidamente como el glucgeno; (2) la grasa no se puede utilizar como fuente de energa en ausencia de oxgeno; y (3) la grasa no se puede convertir en glucosa por ninguna va del cuerpo humano con el fin de mantener los niveles sanguneos de glucosa para su uso por tejidos tales como el cerebro. Por qu no bombear simplemente glucosa dentro de las clulas y almacenarla como glucosa libre hasta que se necesite? Por qu derrochar tanto ATP haciendo un polmero? El problema es que la glucosa es osmticamente activa. Costara ATP bombear glucosa dentro de la clula [...] y la glucosa tendra que alcanzar concentraciones de 400 mM en las clulas hepticas para igualar la reserva de glucosa proporcionada por los niveles usuales de glucgeno heptico. A menos que se equilibrase con el movimiento hacia el exterior de algn otro compuesto osmticamente activo, la acumulacin de tales concentraciones de glucosa producira la captacin de una cantidad considerable de agua y la lisis osmtica de la clula. [...] Otro aspecto interesante del glucgeno es que se necesita un cebador para su sntesis. [...] El propio glucgeno es el cebador habitual, es decir, la sntesis de glucgeno tiene lugar normalmente mediante adicin de unidades glucosilo a las molculas ncleo del glucgeno. El exterior de la molcula de hecho se elimina y resintetiza mucho ms rpidamente que el ncleo interno. El glucgeno dentro de una clula es frecuentemente podado por la accin combinada de la glucgeno-fosforilasa y la enzima desramificante, pero raramente es completamente eliminado antes de que la glucgeno-sintetasa y la enzima ramificante reconstruyan la molcula. ste es un buen momento para sealar por qu la Naturaleza ha desarrollado un mecanismo tan elaborado para crear y eliminar la estructura ramificada del glucgeno.

Extremo reductor

Punto de ramificacin (1 6)

Extremos no reductores

1. Qu pasara si las reservas fueran de glucosa en lugar de glucgeno? 2. Por qu en las clulas vegetales hay amilosa y en las animales glucgeno?

Los lpidos con funcin de reserva ms importantes son las grasas o triglicridos. Su biosntesis requiere tres procesos: obtencin de cidos grasos, obtencin de glicerina y sntesis de triacilglicridos.

1. Obtencin de los cidos grasos

La principal fuente de cidos grasos en los animales es la grasa de los alimentos. Sus cidos grasos son ms o menos modificados antes de iniciar la sntesis

de las grasas propias. La segunda fuente es la biosntesis de los cidos grasos, que se produce en el citosol, a partir del acetil-CoA de origen mitocondrial. Esta molcula se puede formar a partir del catabolismo de glcidos, cidos grasos (-oxidacin) y aminocidos. El proceso es: 1. Salida del acetil-CoA desde la mitocondria al citosol. 2. El primer acetil-CoA sirve de cebador. Los dems acetil-CoA no pueden aadirse directa231

mente sino que precisan de una activacin previa, que consiste en su transformacin en una molcula de tres carbonos, denominada malonilCoA. 3. La sntesis de malonil-CoA la realiza la enzima acetil-CoA-carboxilasa que aade un grupo carboxilo al acetil-CoA, con gasto de un ATP. Esta enzima utiliza la biotina como coenzima y utiliza el ion bicarbonato como fuente de CO2 (fig. 5). 4. La unin de un malonil-CoA (3 C) a un acetilCoA (2 C) origina una molcula de cuatro carbonos, y sale una de CO2. Despus se producen dos hidrogenaciones mediante gasto de NADPH. Se obtiene as un cido graso activado (acilo) de cuatro carbonos. Todo este proceso est catalizado por un conjunto de enzimas unidas, denominado complejo cido graso sintetasa (SAG). La subunidad proteica a la que se une el acilo se denomina ACP. La unin repetida de molculas de malonil-CoA permite que se aadan dos carbonos en cada ocasin, formndose una larga cadena, con un nmero par de carbonos (fig. 5).

5. Las uniones de malonil-CoA se suceden hasta completar la cadena del cido graso, generalmente cido palmtico, que queda en forma activada (acilo). El cido palmtico, una vez separado de la enzima, puede servir para sintetizar cido esterico u oleico, mediante diferentes grupos de enzimas que se hallan en el retculo endoplasmtico y en las mitocondrias. La biosntesis de los cidos grasos no es simplemente el proceso inverso de su catabolismo, la llamada -oxidacin de los cidos grasos o hlice de Lynnen. Se diferencia de sta en los siguientes puntos: Se realiza en el citosol, en vez de en las mitocondrias. El cido graso en formacin permanece unido a la enzima ACP del grupo SAG y no al CoA. Los dos carbonos en que vara la cadena por vuelta estn en forma de malonil-CoA y no de acetil-CoA. El transportador de hidrgenos es el NADPH y no el NADH o el FADH2.

5 Biosntesis del cido palmtico. SAG sintetasa de cidos grasos. Acetil-CoA 7(malonilCoA) 14(NADPH H) cido palmtico 7 CO2 14(NADP+) 8(CoASH) 6 H2O.
ATP ADP + Pi H3C CO S CoA Acetil - CoA HOOC H2C CO S CoA CO2 H2O HS SAG Acetil - CoA CH3 CO S CoA HS CoA H++ HCO3

Malonil - CoA

Malonil - CoA

CI

DO

( CIDO PALMTICO)

6 GRASO DE 1

CH3 CO S SAG Malonil - CoA CONDENSACIN HOOC CH2 CO S CoA CO2 HS CoA CH3 CO CH2 CO S SAG NADPH+H + NADP + PRIMERA REDUCCIN

Malonil - CoA

CI

DO

4 GRASO DE 1

Malonil - CoA

CI

DO

2 GRASO DE 1

CH3 CHOH CH2 CO S SAG H2O DESHIDRATACIN

CI
DO

Malonil - CoA

0 GRASO DE 1

C
Malonil - CoA

CH3 CH = CH CO S SAG NADPH+H NADP +

+

SEGUNDA REDUCCIN

CID

C O GRASO DE 8
Malonil - CoA

CH3 CH2 CH2 CO S SAG A. GRASO DE 4 C

CID

C O GRASO DE 6

232

CO CH2O P NADH + H+ NAD+

HO C H CH2O P ADP ATP

HO C H CH2OH

Dihidroxiacetona 3 - fosfato

Glicerol 3 - fosfato

6 Sntesis del glicerol-3-fosfato.

2. Obtencin de la glicerina
Para que la glicerina pueda unirse a los cidos grasos ha de estar en forma de glicerol-3-fosfato. ste se obtiene a partir de la dihidroxiacetona-3-fosfato que se forma durante la gluclisis, o a partir de la glicerina que se forma en la clula tras la hidrlisis de las grasas (fig. 6).
Activacin R CO S CoA de un cido graso Acil-CoA-sintetasa Glicerol-3-fosfato ATP AMP + PPi

R COOH + HS CoA CH2OH CHOH

3. Formacin de triacilglicridos
La sntesis de estas molculas lipdicas requiere las formas activadas de sus componentes: glicerol-3-fosfato y el acil-CoA graso (RCOSCoA). Este ltimo se obtiene a partir del cido graso sintetizado y la coenzima A. RCOOH HSCoA RCOSCoA ATP AMP PPi Las molculas de cido graso van unindose mediante enlace tipo ster formando primero un monoacilglicrido, luego un diacilglicrido y finalmente, con la salida de un grupo fosfato, de un triacilglicrido (fig. 7). Esto tiene lugar en las clulas hepticas y en las clulas del tejido adiposo. La hidrlisis de los triglicridos rinde glicerina que puede seguir la gluclisis, y cidos grasos, que pueden oxidarse en las mitocondrias, o bien entrar en el retculo endoplasmtico para dar lugar a fosfolpidos.
CUESTIONARIO 2
1. Qu molcula acta como cebador (iniciador de la reaccin) en la sntesis de cidos grasos? 2. Cuntas molculas de malonil-CoA (3 carbonos) se necesitan para obtener cido lignocrico (24 carbonos)? 3. Cal sera el balance neto de la sntesis de un cido graso de 14 carbonos? 4. Qu glcido se forma en la clula a partir de los carbonos aportados por los cidos grasos? 5. Qu reaccin es: cido graso 8 (CoA SH) 7 FAD 7 NAD 8-acetil-CoA 7 FADH2 7 NADH H ? 6. En qu parte de la clula se realiza la biosntesis de los cidos grasos?

CH2 O P R CO S CoA HS CoA CH2O CO R CHOH

Monoacilglicrido-3-fosfato

CH2 O P R CO S CoA HS CoA CH2O CO R CHO CO R

Diacilglicrido-3-fosfato

CH2 O P H2O Pi CH2O CO R CHO CO R

Diacilglicrido

CH2OH R CO S CoA HS CoA

CH2O CO R CHO CO R Triacilglicrido CH2O CO R

7 Biosntesis de triglicridos.

CH2 OH

CH2 OH

CH2 OH

Glicerina (glicerol)

233

ocumento 3

La absorcin y el transporte de los lpidos de la dieta

En la luz del tubo digestivo, las grasas de los alimentos son hidrolizadas, por la lipasa pancretica, en cidos grasos libres y monoacilglicridos, luego son emulsionadas por las sales biliares, y as son transportadas al interior de las clulas de la pared intestinal. En ellas los cidos grasos de cadena media (12 C) pasan sin modificaciones a la sangre y llegan as hasta el hgado, donde pueden ser modificados y reutilizados para la sntesis de triglicridos propios. Los de cadena larga (12 C) y los monoacilglicridos son transportados hasta el retculo endoplasmtico donde resintetizan triacilglicridos (grasas). stas forman glbulos lipdicos a los que se asocian fosfolpidos y protenas, y a travs del aparato de Golgi migran hacia el exterior, a los conductos linfticos, en forma de grandes glbulos lipdicos denominados quilomicrones. Los conductos linfticos drenan hacia los grandes vasos sanguneos, en el conducto torcico. De all pasan a los grandes vasos sanguneos, y de stos al tejido adiposo y al muscular, donde son almacenados o catabolizados. Este sistema evita un aporte excesivo de grasas al hgado despus de las comidas.

4 Anabolismo de los constituyentes de las protenas

En este apartado se estudia nicamente la formacin de aminocidos, ya que los procesos de unin de los aminocidos para formar polipptidos (protenas) se tratarn en el tema 18 El ARN y la expresin del mensaje gentico. Cada aminocido posee su propia va de obtencin, va que adems puede variar segn el tipo de clula que lo sintetiza. Esta caracterstica hace que el estudio de la sntesis de los aminocidos sea extremadamente complejo. Por ello slo se comentarn las ideas bsicas, se expondrn algunos ejemplos y se indicar, en un cuadro sinptico, la molcula que sirve de partida para cada uno de ellos. No todos los seres vivos son capaces de sintetizar los 20 aminocidos proteicos, es decir, los que forman protenas (los seres vivos contienen adems aminocidos no proteicos). Existen 10 aminocidos proteicos que los humanos y muchos animales no son capaces de sintetizar por s mismos y que, por tanto, deben ingerirlos en la dieta. Reciben el nombre de aminocidos esenciales. Los otros 10 aminocidos que s pueden sintetizar se denominan aminocidos no esenciales (cuadro I). Las plantas, en cambio, son capaces de sintetizarlos todos. Los microorganismos presentan cierta diversidad: unos pueden sintetizarlos todos, y otros no. Se deduce que, en el transcurso de la evolucin, algunos organismos han perdido la capacidad de sntesis de algunas sustancias, dado que, al ingerirlas en la dieta, esto no comportaba una deficiencia. En los pases desarrollados la dieta contiene una cantidad de aminocidos esenciales y no esenciales muy superior a la necesaria. Bsicamente la sntesis de los aminocidos se realiza a partir de un cido orgnico (3 a 5 carbonos), al que se le aade un grupo amino. ste puede recibirse
234
Aminocidos esenciales Aminocidos no esenciales

Leucina, isoleucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptfano, valina, arginina e histidina cido glutmico, glutamina, prolina, cido asprtico, asparagina, alanina, glicina, serina, tirosina y cistena

CUADRO I. Tipos de aminocidos en los seres humanos.

directamente de otro aminocido, proceso denominado transaminacin, o puede proceder de un ion amonio libre (NH 4 ), procedente de otro aminocido que ha perdido un grupo amino, proceso llamado desaminacin. La transaminacin y la desaminacin son dos procesos catablicos. Las plantas, adems, pueden obtener el ion amonio NH 4 a partir del amoniaco inorgnico (NH3) y del ion nitrato (NO 3 ), libres en el suelo, y que as entran en la clula. El ion nitrato es transformado por la planta en amoniaco (ver captulo anterior). NH3 H2O HONH4 HO NH 4 Algunas bacterias y cianobacterias tambin pueden aprovechar el nitrgeno atmosfrico (N2), pasndolo a amoniaco, como fuente de grupos amino, para sus aminocidos. Para la sntesis de los aminocidos es imprescindible el cido -cetoglutrico, un compuesto del ciclo de Krebs, ya que es la molcula que se combina con el ion amonio (NH 4 ), gracias a una enzima de la matriz mitocondrial, y queda aminado constituyendo el aminocido cido glutmico. ste, adems de dar lugar directamente a los aminocidos glutamina y prolina, es fundamental, ya que es el responsable de dar

grupos amino a otras molculas (transaminacin), para la biosntesis de los otros aminocidos no esenciales. Las principales molculas aceptoras de grupos amino son: el cido pirvico, el cido-3-fosfoglicrico (ambos procedentes del catabolismo de glcidos y lpidos) y el cido oxalactico (un participante del ciclo de Krebs, al igual que el cido -cetoglutrico).

Las principales molculas que se utilizan, como portadoras de carbonos y oxgenos, para la biosntesis de aminocidos aparecen en el cuadro II. Generalmente la molcula suministradora de grupos amino es el cido glutmico, y la de grupos sulfhidrilo (SH) el aminocido esencial metionina. Las plantas obtienen los grupos sulfhidrilo a partir de los iones sulfato (SO2 4 ) del suelo.

8 Biosntesis de los aminocidos no esenciales.

COOH CO CH2 CH2 COOH NH3 cido -cetoglutrico Transaminacin cido pirvico Alanina

NADPH + H+

COOH CH NH2 CH2 CH2 COOH

NH3

cido oxalactico

cido asprtico

Asparagina

NADP+

Glicina cido 3fosfoglicrico Serina Cistena

H2O

cido glutmico

Glutamina

Prolina

CUADRO II. Vas biosintticas de los diferentes aminocidos proteicos.

cido -cetoglutrico

cido glutmico

Glutamina Ornitina Histidina Prolina Asparagina Treonina Metionina Lisina Leucina Glicina Cistena

Arginina

5 5

cido oxalactico

cido asprtico Alanina Valina Serina Triptfano Fenilalanina Tirosina Histidina

Isoleucina Cistena

cido pirvico cido-3-fosfoglicrico

cido fosfoenolpirvico Fosforribosil-fosfato

235

5 Anabolismo de los componentes de los cidos nucleicos

En este apartado slo se tratar de la biosntesis de las bases nitrogenadas, ya que la sntesis de nuclesidos, nucletidos y cidos nucleicos ya fue tratada en el captulo 7 El ADN portador del mensaje gentico y 8 La duplicacin del ADN. Las clulas pueden resintetizar los nucletidos a partir de los productos de su hidrlisis: pentosas, cido fosfrico y bases nitrogenadas. Adems, estas molculas pueden tambin sintetizarse de novo. La sntesis de los nucletidos es diferente segn sean portadores de bases pricas o de bases pirimidnicas. a) Sntesis de nucletidos con bases pricas. Esta sntesis se inicia con una 5-fosfato-ribosa, sobre cuyo primer carbono se va construyendo el doble anillo prico mediante una compleja secuencia de reacciones enzimticas, en las que intervienen, entre otras molculas, los aminocidos glutamina, cido asprtico y glicina.
CUESTIONARIO 3
1. Qu molcula es la que, por transaminacin, proporciona NH2 en gran nmero de vas sintetizadoras de aminocidos? 2. Qu es un aminocido esencial? Qu aminocidos son esenciales para los humanos? 3. Qu es la reaccin: alanina glicina c. actico CO2 NH3? 4. Qu es la reaccin: alanina H2O NAD+ c. pi NADH H? rvico NH4 5. A partir de qu molculas se puede obtener el adenosn-monofosfato?

Al final de la secuencia se obtiene el cido inosnico, a partir del cual, mediante distintas aminaciones, se forman el adenosn-monofosfato o el guanosn-monofosfato (fig 9).

9 Biosntesis de los nucletidos purnicos y procedencia de sus tomos.

CO2 HN cido asprtico O
-

O C

Glicina C N CH

HC N O

Glutamina

O H H HO H OH H

H2 O P O CH

NH2

O P O CH2 O H H HO H OH H

Ribosilamina monofosfato

C HN HC N O O
-

C C

N CH N O
-

NH2 HN H2N C

O H H HO H OH H

H2 O P O CH

Adenosn-monofosfato (AMP)

236

cido inosnico

O C

C N O C

N CH N

O P O CH2 O H H HO H OH H

Guanosn-monofosfato (GMP)

b) Sntesis de nucletidos con bases pirimidnicas. La obtencin de estos nucletidos, a diferencia del caso anterior, presenta dos fases: una inicial, en la que a partir de cido asprtico se forma el anillo pirimidnico del cido ortico, y una fase final, en la que ste se

une a una ribosa monofosfato y se forma el nucletido uridn-monofosfato (UMP). A partir del uridn-trifosfato (UTP) se obtiene por aminacin el citidn-trifosfato (CTP) y, a partir del desoxiuridn-monofosfato (dUMP), el timidn monofosfato (fig. 10).
O C

cido asprtico O O

N C N

CH C COO

C N H

C COO

Orotato

C N C N
-

C CH CH O O O
-

HN C N

CH CH O
-

O O

O
-

O H H HO H H OH

O
ADP + P

O
ATP

H HO

H H OH
2 ADP 2 ATP

O P O P O P O CH2

O P O P O P O CH2

O P O CH2 O H H HO H H OH

Glutamato

Glutamina

Citidn-trifosfato

Uridn-trifosfato

10 Biosntesis de los nucletidos de pirimidina.

6 La evolucin de los procesos metablicos

A principios de los aos cincuenta, S. Miller y H. Urey sometieron una mezcla de gases (metano, amoniaco, hidrgeno y vapor de agua), similar a la que probablemente constitua la atmsfera primitiva, a descargas elctricas semejantes a los aportes energticos que posiblemente reciba la atmsfera primitiva. Al cabo de unas horas encontraron molculas orgnicas sencillas (aminocidos, aldehdos, cidos carboxlicos, etc.). Con estos experimentos se demostr que era posible la sntesis abitica de molculas orgnicas sencillas. De acuerdo con los resultados de estos experimentos, se piensa que en la atmsfera primitiva, durante millones de aos, se fueron formando los primeros monmeros de los compuestos orgnicos, que se fueron depositando sobre la superficie terrestre y que fueron arrastrados hacia el mar, formndose la sopa o caldo primitivo. En ella se considera que vivieron los primeros organismos.
237

Glutamina Aspartato CO2

HN

CH

H HO

O P O CH2

NH2

OH H H OH

O P O CH2 O H H HO H H OH

Ribosa monofosfato

O O

Orotidina monofosfato

CO2 O C HN C N O O

CH CH

Uridina monofosfato

1. Organismos fermentadores estrictos

La estructura de los primeros organismos deba de ser muy sencilla. stos debieron de ser unicelulares y procariotas. Basndonos en la existencia de un caldo primitivo, se puede postular que estos organismos debieron de ser hetertrofos fermentadores. Es decir, deban de obtener la energa y las biomolculas necesarias para su crecimiento mediante procesos de fermentacin de la materia orgnica contenida en el caldo primitivo. Como el proceso fermentativo no necesita oxgeno, la vida de estos organismos era compatible con una atmsfera reductora, como la que entonces exista. Por otra parte, la fermentacin es un proceso que, a diferencia de la respiracin mitocondrial y de la fase luminosa de la fotosntesis, no precisa una cadena transportadora de electrones, lo cual est en consonancia con la lgica sencillez de los primeros organismos. stos realizaban primero la gluclisis y luego algn tipo de fermentacin. La actividad fermentadora de bacterias, levaduras, e incluso de las clulas musculares en anaerobiosis, son ejemplos de la permanencia de esta va metablica (fig. 12).

11 Descubrimiento de una bacteria de ms de 30 millones de aos.

EUCARIOTAS 1.500 106 aos PROCARIOTAS ATMSFERA OXIDANTE

Cloroplastos

Mitocondrias

Bacterias quimiohetertrofas Bacterias deslizantes (quimioauttrofas) Prdida de la fotosntesis Cianobacterias Bacterias purpreas no sulfreas (fotohetertrofas) Prdida de la fotosntesis

Bacterias quimioauttrofas del hidrgeno

Bacterias verdes no sulfreas (fotohetertrofas)

2.500 106 aos

Respiracin de O2 Fotosntesis oxignica Bacterias sulfatoreductoras. Respuesta anaerbica

Respiracin de O2

Respiracin de O2

Prdida de la fotosntesis

Bacterias rojas del azufre (fotoauttrofas)

ATMSFERA REDUCTORA

Ciclo de Calvin

Bacterias verdes del azufre (fotoauttrofas)

Fotosntesis anoxignica con H2S

12 Esquema hipottico sobre la evolucin de los diferentes tipos de metabolismo.

Bacterias fermentadoras primigenias

238

2. Organismos fotosintticos anoxignicos

Los organismos fermentadores tenan limitada su existencia a los lugares con materia orgnica, quedando grandes zonas inhabitadas. Esto fue aprovechado por unos nuevos organismos capaces de utilizar la luz para sintetizar ATP. Posean pigmentos porfirnicos como la bacterioclorofila, capaces de iniciar reacciones qumicas a partir de la luz absorbida. El tipo de fotosntesis que realizaban slo empleaba el fotosistema I; no tenan, pues, energa suficiente para romper la molcula de H2O y utilizarla como dadora de electrones y, por tanto, no desprendan oxgeno. Utilizaban en su lugar H2S. Con los ATP y NADH obtenidos de esta forma podan reducir el CO2, el NO 3 , etc., y sintetizar materia orgnica. Por primera vez apareci materia orgnica sobre la Tierra producida por organismos, a partir de materia inorgnica. Hay rocas con filones de carbn, de hace unos 3.400 millones de aos, que prueban su existencia. Las bacterias verdes del azufre y las bacterias rojas del azufre, que utilizan el H2S como dador de electrones, son los dos grupos de estos organismos primitivos que han subsistido hasta la actualidad. Las ms primitivas son las bacterias verdes del azufre, ya que no reducen el CO2 siguiendo el ciclo de Calvin, sino segn el ciclo de Evans, que es similar al ciclo de Krebs, pero en sentido inverso (entra CO2 y sale acetil-CoA). Posiblemente fue el precursor del ciclo de Krebs. Las bacterias rojas del azufre, mediante el ciclo de Calvin, sintetizan glucosa, que luego se almacena en forma de glucgeno. La obtencin de energa por catabolismo bsicamente consiste en la glucogenlisis y luego la gluclisis, utilizando S como aceptor de hidrgenos. Las bacterias formaban comunidades bacterianas laminares (tapetes) sobre el fondo y, con el tiempo, daban lugar a apilamientos de tapetes ms o menos altos denominados estromatolitos.

teria orgnica y obtener una enorme cantidad de energa: era la denominada respiracin anaerbica. Las actuales bacterias sulfatorreductoras como Desulfovibrio, que viven en pantanos cuyos sedimentos tienen un fuerte olor a sulfhdrico, son un ejemplo de estos organismos. Adems el H2S desprendido poda ser utilizado por las bacterias fotosintticas anoxignicas superficiales, establecindose un ciclo de azufre en el pantano. El establecimiento de ecosistemas fue, y es, imprescindible para la continuidad de la vida, ya que sta se habra extinguido en 200 o 300 millones de aos por agotamiento de algunos bioelementos (fig. 13).

Bacterias fermentadoras y bacterias fotosintticas Atmsfera reductora 3,5

Bacterias de respiracin anaerbica Cianobacterias (O2)

2,5 Bacterias de respiracin aerbica 2

Atmsfera oxidante

1,5

Eucariontes

0,5

13 Cronologa aproximada de la aparicin de las primeras clulas. Las cifras representan miles de millones de aos. Las bacterias fotosintticas no producen oxgeno. Las cianobacterias, que ya realizaban la fotosntesis con desprendimiento de oxgeno, posibilitaron que muchas bacterias iniciaran la respiracin aerbica.

3. Organismos quimiohetertrofos de respiracin anaerbica

La existencia de ciertos depsitos de sulfuros, atribuibles al metabolismo bacteriano, de hace unos 3.000 millones de aos, ha hecho pensar que algunos grupos de bacterias fotosintetizadoras del azufre volvieron al sedimento, y que los pigmentos fotosintticos, intiles en la oscuridad, evolucionaron para dar lugar a los citocromos, que tambin tienen un grupo porfirnico, apareciendo una primitiva cadena transportadora de electrones, que utilizaba el ion sulfato (SO2 4 ) como aceptor final de los mismos, transformndolo en H2S. Esto permita oxidar la ma-

4. Organismos fotoauttrofos oxignicos

Hace unos 2.500 millones de aos aparecieron las cianobacterias, que posean un segundo fotosistema, el fotosistema II, acoplado al fotosistema I, lo que les proporcionaba una gran cantidad de energa y les permita romper la molcula de agua (fotlisis del agua) y obtener el hidrgeno necesario para reducir despus el CO2 hasta materia orgnica. En consecuencia, se liberaron grandes cantidades de oxgeno a la atmsfera, que en un principio sirvi para oxidar los compuestos reducidos de azufre, hierro y carbono que haba en los sedimentos. stos actuaron como un sumidero de oxgeno. Hace unos 2.000 millones de aos,
239

el oxgeno ya lleg a transformar la atmsfera reductora en oxidante. Se inici la capa de ozono que absorba los rayos ultravioleta. Esto facilit la vida cerca de la superficie, pero acab con la sntesis orgnica abitica. La concentracin de oxgeno y el espesor de la capa de ozono eran la mitad que en la actualidad (estos valores se alcanzaron hace 1.000 millones de aos). Se considera que hasta esta poca las colonias microbianas formaban una especie de grandes tapetes microbianos cuyo grosor aumentaba a razn de un milmetro por ao. Su capacidad de calcificacin les permiti vivir en zonas de oleaje. Restos de ellos son los fsiles denominados estromatolitos. Esta estructura permiti la supervivencia, ya que la accin mutgena, primero, de los rayos ultravioleta y la accin txica del oxgeno, despus, deban afectar slo a la capa superficial, que poda ser renovada constantemente por los organismos de las capas inferiores. Debajo de las cianobacterias vivan posiblemente las bacterias fotosintticas del azufre y ms abajo las sulfatorreductoras, antes explicadas. Muchas cianobacterias poseen la enzima nitrogenasa, capaz de aprovechar el nitrgeno atmosfrico (N2) para producir grupos amino de la materia orgnica. Pese a que esta enzima es inhibida por el oxgeno, muchas cianobacterias lo han solucionado, ya que la fijacin de N2 se realiza en unas estructuras denominadas heterocistos, en los que no hay el PSII y, por tanto, no hay desprendimiento de O2. La combinacin de fotosntesis oxignica y fijacin del N2 atmosfrico explica su xito biolgico. Se encuentran en el mar, agua dulce y tierra, incluso en los desiertos aprovechando la humedad que hay entre las grietas, en lagos muy salados, simbiontes en lquenes, corales, en aguas termales, etc. Las cianobacterias asimilan el CO2 mediante el ciclo de Calvin; su polisacrido de reserva es el glucgeno y no pueden realizar el ciclo de Krebs, ya que les falta una de las enzimas. La forma de aprovechar el glucgeno es mediante el ciclo de las pentosas fosfato, que aporta NADH pero no ATP. Tal vez esto explica que carezcan de permeasas en sus membranas para la entrada de materia orgnica. Son fotoauttrofas estrictas.

desarrollaron enzimas, como la catalasa y peroxidasa, que destruan los primeros compuestos formados por el oxgeno (H2O2). Otro de los inconvenientes que comport fue la prdida de la enzima nitrogenasa, debido a que es fuertemente inhibida por el oxgeno, excepto en algunas pocas bacterias y cianobacterias. Hoy el resto de organismos auttrofos slo disponen de los nitratos disueltos, como fuente de nitrgeno, pese a vivir en una atmsfera con un 79 % de nitrgeno. El gran avance fue el uso del oxgeno como aceptor final de los electrones procedentes de la materia orgnica, es decir, la denominada respiracin aerbica. La cadena de citocromos, ya presente en bacterias con respiracin anaerbica, como Desulfovibrio, se perfeccion, y los aceptores finales de electrones propios de la respiracin anaerbica (los iones sulfato, nitrato, etc.) fueron sustituidos por el oxgeno presente en la atmsfera. Esto supuso un paso importante hacia la colonizacin del medio terrestre, ya que se dej de depender de la presencia de estos iones en el medio acuoso para poder realizar la respiracin. La eficiencia de esta cadena respiratoria implicaba una alta tasa de oxidacin de NADH (NADH H O2 NAD H2O). Para regenerar el NADH y evitar que se detuviera el proceso por su falta, se aprovech el ciclo de captacin de CO2 de las algas verdes sulfreas, el denominado ciclo de Evans, pero en sentido inverso, es decir, en sentido catablico. As surgi el ciclo de Krebs. En l entra el acetil-CoA procedente de los nutrientes (glucosa a. pirvico acetil-CoA) y salen sus carbonos y oxgenos en forma de CO2, y sus hidrgenos como NADPH H.

6. Organismos quimioauttrofos
Paralelamente a los organismos anteriores, la presencia de oxgeno permiti la aparicin de otros organismos que obtenan la energa mediante la oxidacin de compuestos inorgnicos reducidos como NH3, H2S, CH4 y H2, o susceptibles de ser ms oxida2 dos, como NO 2 , S2O3 , S, etc. Estos organismos pueden vivir en ausencia de materia orgnica y de luz; les basta aire, agua, sales minerales y un compuesto inorgnico reducido; por ello tambin son denominados quimiolittrofos. Estos organismos tienen tres puntos en comn con las cianobacterias: poseen membranas internas especiales, captan el CO2 mediante el ciclo de Calvin y no realizan el ciclo de Krebs porque les falta la misma enzima. Esto ltimo se relaciona con su incapacidad, en general, para asimilar materia orgnica, excepto glucosa que es oxidada por la va de la pentosa fosfato.

5. Organismos quimiohetertrofos de respiracin aerbica

El oxgeno era un compuesto txico para los primeros organismos, incluidas las cianobacterias, ya que capta electrones formando radicales libres que destruyen las molculas orgnicas. Esto comport que muchos organismos murieran, otros se refugiaran en zonas profundas donde haba poco oxgeno y otros
240

A partir de esto se ha propuesto que su cadena respiratoria proceda de una cadena fotosinttica precianobacteriana. La utilizan para oxidar compuestos inorgnicos y obtener ATP. Exceptuando las bacterias del H2, los dems sustratos inorgnicos a oxidar se acoplan a la parte final de la cadena. Ello explica por qu no sirve para oxidar NADH, y en consecuencia que no puedan alimentarse de materia orgnica, que genera mucho NADH en el ciclo de Krebs. Para obtener el NADH con el que reducir el CO2 en el ciclo de Calvin y as sintetizar materia orgnica, lo que hacen es utilizar la cadena respiratoria en sentido inverso, gracias al consumo de ATP. Estos organismos representan el mximo avance metablico en procariotas (no existen eucariotas con este tipo de metabolismo). Su papel es muy importante, ya que convierten gases y sales, sin utilidad para las plantas y animales, en compuestos estables que pueden ser asimilados por ellos y posibilitan la continuidad de la vida al cerrar los ciclos biogeoqumicos del carbono, azufre y nitrgeno.
Hospedador procarionte Bacterias aerobias

7. Organismos eucariotas fotoauttrofos y quimiohetertrofos

Hace 1.500 millones de aos aparecieron las primeras clulas eucariotas, que eran similares a algunas algas unicelulares actuales. Hace 1.000 millones de aos aparecieron las primeras algas pluricelulares, hace 600 millones los primeros animales, y hace 470 millones las primeras plantas y hongos. La clula eucariota se origin a partir de una gran clula procariota, semejante a las afragmabacterias (bacterias que carecen de pared bacteriana), que fue infectada por bacterias aerbicas, las cuales en vez de ser destruidas constituyeron una simbiosis y acabaron dando lugar a las mitocondrias. Lo mismo sucedi con las espiroquetas, cuyos microtbulos internos acabaron dando lugar a los undulipodios (cilios y flagelos). La clula husped asumi la funcin nuclear. Mediante invaginaciones de la membrana plasmtica se inici la compartimentacin de la clula y surgi todo el sistema endomembranoso, incluida la envoltura nuclear. As apareci la clula eucariota quimiohetertrofa animal. A partir de cianobacterias fagocitadas pero no digeridas, surgieron por simbiosis los cloroplastos, de ah la existencia de la doble membrana. Un solo organismo dispuso, pues, de dos metabolismos en parte complementarios (fig. 14). Con la pluricelularidad, estos organismos se especializaron en la fotosntesis y se perdi la capacidad de ingerir materia orgnica: sus mitocondrias slo catabolizaban materia orgnica fotosintetizada propia, apareciendo la clula eucariota fotoauttrofa de los vegetales (fig. 15).

MNERAS

Espiroquetas

Ameboide con mitocondrias Metafitas Algas Eubacterias Hongos

PROTOCTISTAS

Algas cianofceas

Metazoos Protozoos

Antiguos flagelados ameboides (protozoos, hongos)

Cianobacterias Cloroplastos Eucarionte ancestral

ANIMALES Y PLANTAS

Mitocondrias

Procarionte ancestral Plantas con cloroplastos (eucariontes) Animales (eucariontes)

14 Evolucin segn la teora endosimbitica.

15 Evolucin segn la hiptesis de la endosimbiosis.

241

CUESTIONARIO 4
1. Por qu, en un ambiente sin oxgeno ni compuestos inorgnicos oxidados, la gluclisis no puede darse si no viene seguida de fermentacin? 2. Qu tipos de metabolismo siguen las bacterias de las zonas profundas de un mar en las que hay una cierta cantidad de oxgeno y no hay materia orgnica muerta? 3. Qu tipos de metabolismo siguen las bacterias que hay en la superficie del suelo de un bosque? 4. Qu tipos de metabolismo siguen las bacterias de las zonas profundas de un pequeo pantano cenagoso en las que hay una gran cantidad de materia orgnica muerta? 5. Qu tipos de metabolismo siguen las bacterias que hay en las galeras de una mina de cobre? 6. Qu tipos de metabolismo siguen las bacterias que hay a un metro de profundidad en un lago cuyas aguas son ricas en S2H?

Actividades
Lectura
COLESTEROL S, PERO
Tras la moda de los alimentos light, nos invaden las dietas bajas en colesterol: huevos, pan, mantequilla, dulces, mahonesas, quesos La razn es bien sencilla; el exceso de colesterol en sangre o hipercolesterolemia est ntimamente ligado con el infarto de miocardio y otros trastornos cardiovasculares. Sin embargo, no hay que llamarse a equvocos; sin colesterol no hay vida. Esta molcula orgnica otorga fluidez a las membranas celulares, interviene en la elaboracin de hormonas como las sexuales y es la precursora de los cidos biliares. Pero de dnde procede? El origen del colesterol es doble; puede ser arrancado, durante la digestin, de los alimentos ingeridos, o ser sintetizado por las clulas, en especial en el hgado. El colesterol nunca viaja libre en la sangre, y para llegar a todas las clulas del organismo tiene que unirse a unas molculas transportadoras que los
+

bioqumicos conocen como lipoprotenas: las de baja densidad, o LDL, y las de alta densidad, o HDL. Las primeras, cuando se encuentran en exceso, dejan caer el colesterol en las paredes de las arterias. Es el llamado colesterol malo. Por el contrario, las HDL recogen el colesterol acumulado en los vasos y lo transportan al hgado. Es el bueno. As, cuando los niveles sanguneos de colesterol-LDL son altos, se forma en las paredes de las arterias una placa de aterosclerosis, una especie de tapn que puede llegar a frenar y obturar el riego sanguneo. Cuando esto ocurre en las arterias coronarias, se produce una insuficiencia coronaria, con riesgo de desencadenar un infarto de miocardio. Entonces, es conveniente recomendar a la poblacin que siga dietas bajas en colesterol, como las que sustituyen las grasas de origen animal por las de origen vegetal (aceite de oliva, de soja, de girasol, de maz), para as disminuir el colesterol-LDL? Menos colesterol implica siempre mejor salud? No est muy claro. Segn los expertos, una campaa generalizada e indiscriminada contra el colesterol no es muy recomendable, ya que afectara tambin a personas cuyos niveles de esta sustancia son normales, es decir, inferiores a 250 miligramos por litro de sangre. Y esto puede ser tambin peligroso. Aunque se desconocen las razones, parece que el dficit de colesterol en personas sanas est muy relacionado con ciertos tipos de cncer. Adems, afectara de forma ms notoria a las mujeres, que, debido a su constitucin hormonal, estn ms protegidas contra el infarto, y a los ancianos, que necesitan ms colesterol para mantener en vigor las membranas celulares.

P P

+ +

P OH P

OH

P OH
+

cido graso Triglicrido P

+ +

P
+

P P

Fosfolpido Protena Colesterol ster de colesterol

OH

OH

+ P

OH OH

+ P

P
+ P

OH

Estructura de una lipoprotena.

242

LABORATORIO

Reconocimiento de la presencia de almidn

Las clulas que poseen cloroplastos realizan la fotosntesis y, como fruto de la misma, almacenan almidn. Esta prctica tiene como finalidad el reconocimiento de la presencia de almidn en las partes verdes de un vegetal.

Procedimiento 2
1. Se trata de relacionar la fotosntesis con la presencia de almidn. Para ello, escoger una planta cualquiera de jardn y, en una de sus hojas, poner una tira de papel estao, que impide el paso de la luz. Esta operacin se debe realizar por la tarde. 2. Al cabo de 24 horas, cortar la hoja y proceder como el caso anterior. 3. El resultado es que slo la zona expuesta a la luz se colorea por efecto del lugol. Qu sustancia hay en un sitio y falta en el otro? A qu se debe esa ausencia?

Material necesario
Hojas verdes (se aconseja la utilizacin de hojas de hiedra blanquiverde). Lugol. Alcohol (metanol o etanol). Vaso de precipitados. Tubos de ensayo. Placa de Petri. Papel de estao.

Procedimiento 1
1. Durante un minuto, hervir la hoja escogida en el vaso de precipitados lleno de agua. 2. Sacar la hoja e introducirla en un tubo de ensayo lleno de alcohol. Introducir el tubo en el vaso de precipitados y mantenerlo al bao Mara el tiempo preciso para que la hoja pierda sus pigmentos y quede decolorada. 3. Extraer la hoja, lavarla con agua para quitarle el alcohol y situarla en una placa de Petri. 4. Cubrir la hoja con lugol, mantenerla as unos cinco minutos y volver a lavar. 5. Anotar la coloracin que tiene la hoja. A qu se debe?

Cuestiones 1. Explica la funcin glucognico-glucmica que tiene lugar en el hgado. Cmo intervienen la insulina y la adrenalina en ella? 2. Por qu crees que a muchas especies ganaderas, especialmente a la porcina, se las ceba a base de glcidos y no de grasas? 3. Para la formacin de grasas, el organismo requiere por una parte glicerina y por otra cidos grasos. Cmo obtienen los animales estos dos compuestos? 4. Comenta los resultados obtenidos en un anlisis de sangre a un hombre de 35 aos:
Resultado Glucosa Colesterol Triglicridos 78.000 mg/dl 200.000 mg/dl 169.000 mg/dl Valores de referencia 60.000-110.000 125.000-250.000 30.000-170.000

5. Son los vegetales capaces de absorber grasas en su nutricin? Y de producirlas? 6. Tiene alguna relacin el proceso anablico lipdico humano con la gluconeognesis? 7. Es recomendable en cualquier caso seguir dietas bajas en colesterol, dada la relacin que ste tiene con la arteriosclerosis? 8. Copia el esquema general del metabolismo (pg. 277) e indica qu paso falta para poder sintetizar glcidos a partir de los lpidos. Aade los NAD y NADH en los lugares correctos e indica qu vas se detendran si faltan uno o el otro, y qu vas podran causar estas faltas si se dieran en exceso.

243

GENTICA

244

Tema 15.
La gentica mendeliana

Tema 16.
El ADN, portador del mensaje gentico

Tema 17.
La duplicacin del ADN

Tema 18.
El ARN y la expresin del mensaje gentico

Tema 19.
Mutacin y evolucin

Tema 20.
Los genes y la ingeniera gentica

Cromosomas humanos. Imagen obtenida con un microscopio electrnico de barrido, a 2.280 aumentos.

245

15
N D I C E
INFORMACIN 1 Experimentos y las leyes de Mendel
La poca anterior a Mendel: teora gentica de la mezcla Gregor J. Mendel: el nacimiento de la Gentica La herencia de un solo carcter. La herencia de dos caracteres

La gentica mendeliana

2 La teora cromosmica de la herencia

El redescubrimiento de las leyes de Mendel en 1900 Los genes y los cromosomas, factor hereditario La confirmacin de la teora cromosmica de la herencia

3 El ligamiento y los mapas cromosmicos 4 La herencia del sexo

El concepto de sexo Sexo debido a los cromosomas sexuales

5 La herencia ligada al sexo

La herencia ligada al sexo en los humanos Los caracteres influidos por el sexo

Tigre albino.

6 La expresin del mensaje gentico 7 Los trminos utilizados en la gentica mendeliana ACTIVIDADES

La gentica mendeliana es la parte de la gentica que sigue la metodologa que ide Mendel. Se basa en el estudio de las proporciones en las que se heredan las caractersticas de los individuos. Gracias a la gentica se han establecido las leyes de la herencia, y esto ha facilitado la generacin de nuevas razas de animales y de nuevas variedades de plantas, mejor adaptadas a los diferentes climas y con mayor rendimiento alimentario. En el campo de la medicina, la gentica permite predecir la posibilidad de anomalas genticas graves en los futuros hijos, y si esta posibilidad es alta, se suele aconsejar a los padres que no tengan ms descendencia. En lo que respecta a la medicina legal, el conocimiento de la herencia de los grupos sanguneos, por ejemplo, ha permitido descartar algunas acusaciones. Qu procedimiento habra que seguir para obtener una raza albina de caballos a partir de una manada que tan slo presenta unos cuantos descendientes albinos?

246

1 Experimentos y leyes de Mendel

1. La poca anterior a Mendel: teora gentica de la mezcla
Desde la Antigedad, se haba considerado que los descendientes presentaban las caractersticas intermedias de sus progenitores, al igual que el color de una pintura dependa de los colores de las pinturas iniciales que se mezclaban para obtenerla. Esta concepcin de la herencia biolgica fue llamada teora gentica de la mezcla. Durante miles de aos, a partir de las formas naturales, y mediante cruces sucesivos, se haba intentado conseguir individuos que tuvieran las ventajas de ambos progenitores. Entre sus descendientes se elegan aquellos que manifestaban los caracteres deseados en mayor grado y que carecan de caracteres no deseables. Este proceso, denominado seleccin artificial, se repeta numerosas veces hasta conseguir variedades o razas puras, es decir, individuos con las caractersticas deseadas y que al cruzarlos entre s daban una progenie igual a ellos (fig. 1). Lo que se buscaba era, pues, obtener individuos de inters econmico, es decir, que dieran muchos frutos, mucha leche, mucha carne, etc., y no el averiguar cul era el mecanismo profundo de este proceso.

2 Gregor Johann Mendel (1822-1884).

1856, sus experimentos con la planta del guisante en los jardines del convento de Brnn (hoy Brno, Repblica Checa), llegando a realizar miles de cruces. Escogi dos razas puras, es decir, dos variedades en las que los descendientes siempre eran idnticos a los progenitores (figs. 3 y 4).

3 Planta del guisante en flor.

1 Ovejas de raza merina. Una raza se considera pura cuando sus individuos, al cruzarse entre s, producen descendientes con las mismas caractersticas de carne, lana, etc.

2. Gregor J. Mendel: el nacimiento de la Gentica

Gregor Johann Mendel (1822-1884, fig. 2) naci en Austria y en 1843 ingres en la orden de los agustinos. Interesado por descubrir cmo se transmitan los caracteres entre una generacin y otra, inici, en

4 Frutos y semillas del guisante.

247

3. La herencia de un solo carcter

Mendel cruz la raza pura de semillas lisas con la de semillas rugosas, dos manifestaciones diferentes de un mismo carcter (la forma de la semilla), que actualmente denominamos fenotipos antagnicos (o son lisas o son rugosas). Se obtuvo una generacin llamada filial primera (F1), toda ella igual, uniforme, de semillas de aspecto liso. As se confirm la ley de la uniformidad, que se puede expresar as: cuando se cruzan dos razas puras, todos los descendientes son iguales entre s. Cuando entrecruz las plantas F1 entre s, obtuvo una generacin llamada filial segunda (F2), que presentaba tres individuos de semillas lisas por cada individuo de semillas rugosas (fig. 5). De este experimento dedujo que la informacin biolgica de cmo es un ser deba estar en los organismos por duplicado, ya que los individuos de la F1, por un lado tenan la informacin para producir la forma lisa, ya que ellos la presentaban, y por otro lado tambin tenan la informacin para producir la forma rugosa, ya que algunos de sus descendientes la presentaban, y lgicamente la haban recibido de sus progenitores. Mendel utiliz el trmino factor hereditario (actualmente sustituido por el trmino gen) para referirse a cada una de esas informaciones. As pues,

cada organismo posea dos factores hereditarios para cada uno de sus caracteres, uno heredado de un progenitor y otro del otro. En la actualidad, al conjunto de genes de un organismo se le denomina genotipo, y al conjunto de sus caractersticas, fenotipo. El fenotipo depende del genotipo y de la influencia del ambiente. Por ejemplo, en los humanos, el color de la piel depende de la informacin biolgica recibida (genes) y del grado de insolacin recibido (Fenotipo Genotipo Influencia ambiental). Como los individuos de la F1, pese a tener los dos tipos de factores hereditarios, el factor que informa sobre la forma lisa y el factor que informa sobre la forma rugosa, siempre presentaban semillas de forma lisa, dedujo que haba dos categoras de factores (genes), los dominantes, que siempre se manifestaban, y los recesivos, que slo se manifestaban cuando no estaban acompaados de un factor dominante. Cada factor hereditario se puede simbolizar con una letra, mayscula si es dominante y minscula si es recesivo. Por ejemplo, para el caso estudiado podra ser: L para la informacin lisa, y l para la informacin rugosa. As pues, los individuos de raza pura (tambin denominados individuos homocigticos) lisa seran LL, los de raza pura rugosa seran ll, y los hbridos (tambin denominados individuos heterocigticos) de

5 Primero y segundo experimento de Mendel.

FENOTIPOS
Raza pura lisa Semilla lisa que procede de semillas lisas y que da lugar siempre a plantas de semilla lisa. Deduccin

GENOTIPOS

Raza pura rugosa Semilla rugosa que procede de semillas rugosas y que da lugar siempre a plantas de semilla rugosa. Cruce

Ll
Meiosis

ll
Meiosis

L
Gametos

l
Gametos

P
Polinizacin artificial

Ll F1
Hbrido de aspecto liso Uno de sus progenitores se desarroll a partir de una semilla lisa y otro a partir de una rugosa Autofecundacin

Ll

Ll

Ll

Ll L l

Ll l

F2
Semillas lisas 75 % del total (3/4 partes) Semillas rugosas 25 % del total (1/4 parte)

LL

Ll 3 lisos

Ll

ll 1 rugoso

248

la F1 seran Ll. Tomando como base esta simbologa, en el primer cruce, si por ejemplo la variedad lisa LL es la que proporciona el polen, los gametos masculinos sern todos L, y como la variedad rugosa ll proporcionara los gametos femeninos, todos ellos sern l, y por lo tanto los individuos de la F1 sern todos Ll (fig. 5). En el cruce entre individuos de la F1 entre s, un progenitor producir gametos masculinos L y gametos masculinos l, e igualmente el otro producir gametos femeninos L y gametos femeninos l. Como la unin entre los gametos (fecundacin) es al azar, el resultado sern todas las combinaciones posibles entre estos gametos. Como el resultado obtenido al combinar al azar los factores hereditarios, tanto en el primero como en el segundo cruce, dio unas proporciones que coincidan exactamente con las obtenidas experimentalmente en el jardn del convento, Mendel acept como bueno el modelo. Es decir, lleg a la conclusin de que existan dos factores hereditarios por carcter (aunque no saba ni su naturaleza qumica ni en qu parte de la clula se encontraban) que durante la reproduccin se separaban (segregaban) y se combinaban al azar, para constituir una nueva generacin. Estas consideraciones se conocen como la ley de la segregacin, la cual fue expresada por Mendel de la siguiente forma: Los dos factores hereditarios que informan sobre un mismo carcter no se fusionan o mezclan, sino que permanecen diferenciados durante toda la vida del individuo y se segregan, es decir, se separan y se reparten, en el momento de la formacin de los gametos.

verde. La primera dara lugar a gametos LA exclusivamente y la segunda a gametos la exclusivamente, luego los individuos de la F1 seran todos LlAa. stos al reproducirse entre s daran gametos de cuatro tipos: LA, La, lA y la, por lo que las combinaciones posibles seran 16 (4 4 16) como se ve en la figura 6. De ella se deduce que las proporciones fenotpicas seran las mismas que las obtenidas en los experimentos en el jardn (9 : 3 : 3 : 1). De este experimento, Mendel dedujo que los factores para un carcter se heredan independientemente de los factores para otro, es decir, que por ejemplo, el factor hereditario que informa sobre la forma lisa no implica nada sobre si adems ha de ser amarilla o verde. Estas conclusiones se conocen como la ley de la independencia, la cual puede expresarse de la siguiente forma: Los factores hereditarios no antagnicos mantienen su independencia a travs de las generaciones, agrupndose al azar en los descendientes.
P
Amarillo liso verde rugoso Cruce
5

F1
Autofecundacin

Amarillo liso
5

F2

9 amarillos lisos 3 amarillos rugosos 3 verdes lisos 1 verde rugoso

4. La herencia de dos caracteres

Una vez estudiado cmo se heredaban las distintas manifestaciones (fenotipos) de un carcter, Mendel tambin se plante estudiar cmo se heredaban las manifestaciones de dos caracteres distintos, por ejemplo, el carcter forma de la semilla y el carcter color de la semilla. Escogi dos razas puras, una que era de semillas de superficie lisa y de color amarillo, y otra que era de semillas rugosas y de color verde. Obtuvo una generacin filial primera (F1), toda ella igual, uniforme, de semillas de forma lisa y de color amarillento, y dedujo que el factor amarillo era dominante sobre el factor verde. Al cruzar estas plantas entre s, obtuvo una generacin filial segunda (F2), constituida por 566 semillas, de las cuales 315 eran lisas y amarillas, 108 lisas y verdes, 101 rugosas y amarillas y 32 rugosas y verdes. Dividiendo todos los resultados por el menor obtuvo las siguientes proporciones: 315/32 9 108/32 3 101/32 3 32/32 1 La proporcin entre ellas era, pues, 9 : 3 : 3 : 1. Siguiendo el modelo anterior, los genotipos de la generacin paterna deban ser LLAA para la raza pura lisa y amarilla, y llaa para la raza pura rugosa y
la LlAa Llaa llAa llaa LLAA llaa

LlAA

LA LA

La La

lA lA

la la

LA LLAA LLAa LlAA LlAa

La LLAa LLaa LlAa Llaa

lA LlAA LlAa llAA llAa

6 Tercer experimento de Mendel.

249

2 La teora cromosmica de la herencia

1. El redescubrimiento en 1900 de las leyes de Mendel
Mendel public sus descubrimientos en 1866, en una revista de poca difusin y en un momento en que el inters cientfico estaba polarizado hacia otros temas como la identificacin de las especies procedentes del Nuevo Mundo, los experimentos de Pasteur sobre la no existencia de la generacin espontnea, o la controversia, de gran impacto social, entre las teoras evolucionistas del francs Jean-Baptiste de Lamarck (1744-1829) y las del ingls Charles Darwin (1809-1882). El mundo cientfico de su poca no estaba preparado para admitir la existencia de ciertas estructuras celulares invisibles, basndose, simplemente, en las proporciones matemticas encontradas entre los descendientes de las plantas del guisante, ni menos a comprender que stas eran las responsables de los caracteres biolgicos de los organismos. Darwin haba basado su teora de la evolucin en la seleccin natural y en la variabilidad de la descendencia. Al no conocer los trabajos de Mendel, pese a que en su poca ya estaban publicados, nunca supo cul era el origen de dicha variabilidad. Sus primeros seguidores, dada la fijeza de los factores hereditarios, y al desconocerse en aquella poca el concepto de mutacin, tampoco valoraron el mendelismo suficientemente. Lo que en realidad constitua la explicacin cientfica de la variabilidad de la descendencia, paradjicamente fue ignorado. En 1900, pasados treinta y cuatro aos, en una de las coincidencias ms sorprendentes de la investigacin cientfica, tres autores, el holands De Vries, el alemn Correns y el austriaco Tschermak, por separado y sin conocer los trabajos de Mendel, llegaron a las mismas conclusiones que l. Los tres autores, al revisar la bibliografa, con el fin de preparar una publicacin conjunta, descubrieron los trabajos de ste, al que reconocieron su prioridad, por lo que publicaron sus conclusiones como meras confirmaciones de las leyes de Mendel. Desde entonces, Mendel obtuvo el reconocimiento de la comunidad cientfica. En 1902, dos investigadores, W. C. Sutton en Estados Unidos y T. Boveri en Alemania, tambin trabajando por separado, al observar el paralelismo que haba entre la herencia de los factores hereditarios mendelianos y el comportamiento de los cromosomas durante la meiosis y la fecundacin, propusieron que dichos factores hereditarios (genes) se deban encontrar en los cromosomas. Esto es lo que se conoce como la teora cromosmica de la herencia de Sutton-Boveri. Los dos investigadores citados se basaron en que al igual que para cada carcter hay un gen heredado de un progenitor y un gen heredado del otro progenitor, el nmero de cromosomas tambin es doble, es decir, de cada tipo de cromosomas hay dos ejemplares, un cromosoma heredado de un progenitor y un cromosoma heredado del otro progenitor (se les denomina cromosomas homlogos). Adems, durante la meiosis estos dos cromosomas del mismo tipo se separan, yendo uno a un gameto y el otro al otro, igual a lo propuesto por Mendel para los factores hereditarios (fig. 7). En 1909, W. Bateson introdujo el trmino Gentica para designar la ciencia que estudia los caracteres biolgicos. As mismo, W. Johannsen propuso el trmino gene como sustitutivo del factor hereditario de Mendel. As, un gene o gen es un factor que determina una caracterstica biolgica. A los genes que tienen informaciones distintas pero sobre un mismo carcter se les denomina genes alelos. Por ejemplo, el gen L y el gen l del guisante son alelos entre s. La teora cromosmica de la herencia fue un autntico terremoto en su poca, ya que enlazaba el mundo de la citologa, que desarrollaban los microscopistas, con el de la gentica, clsicamente relacionado con los cultivos de plantas y con los cruces de animales. En la bsqueda de pruebas cabe citar los trabajos de McClung (1900), E. Wilson (1905) y de N. Stevens (1905), que investigaron sobre el nmero de cromosomas en las clulas de los insectos himenpteros. Se confirm que los machos tenan, adems de varias parejas de cromosomas iguales, una pareja en que los cromosomas eran distintos (se les denomin heterocromosomas): a uno lo denominaron cromosoma X y al otro cromosoma Y. Las hembras en cambio tenan dos cromosomas X. En conclusin, se haba observado la correlacin entre caracteres (sexo masculino o sexo femenino) y cromosomas (cromosomas XY o cromosomas XX). A los heterocromosomas se les denomina tambin cromosomas sexuales, y al resto de cromosomas, autosomas o cromosomas au-

2. Los genes y los cromosomas, factor hereditario

En 1900, el mundo cientfico ya estaba preparado para entender estos aspectos de la biologa y rpidamente se sucedieron una serie de importantes descubrimientos.
250

Semillas verdes a Generacin P a Gametos a

Semillas amarillas A

CUESTIONARIO 1 Cuando una clula tiene un solo ejemplar de cada tipo de cromosomas se dice que es una clula haploide, y se seala con el smbolo (n); cuando tiene dos ejemplares de cada tipo se dice que es una clula diploide y se seala con el smbolo (2n). Las clulas diploides humanas tienen 46 cromosomas, mientras que los gametos humanos slo tienen 23 cromosomas. Segn este criterio, contesta a las siguientes preguntas:
1. Qu quiere decir tipos de cromosomas? 2. Define qu es n. Cunto es 2n en los humanos? 3. Cuntos tipos de cromosomas tienen las clulas de las mujeres? Y las clulas de los hombres?

Generacin F1 MEIOSIS Metafase I a

a A

Metafase II

Gametos

vulos a A Generacin F2
Amarillo

Granos de polen A Aa a aa x y x x

Amarillo

AA Aa

Verde

Amarillo

7 Ejemplo de cmo funciona la teora cromosmica de la herencia en el cruce entre una planta de semillas verdes con otra de semillas amarillas. Se trata de una especie irreal con slo dos tipos de cromosomas (n 2), en uno de los cuales est el gen responsable del color de la semilla.

8 Fotografa de la mosca del vinagre, y dotaciones cromosmicas del macho y de la hembra. Drosophila melanogaster es un insecto muy apropiado para la investigacin gentica, ya que es muy prolfico (una generacin quincenal de casi un centenar de descendientes) y fcil de mantener (puede vivir en un frasco con alimento).

3. La confirmacin de la teora cromosmica de la herencia

En 1910, T. H. Morgan inici sus trabajos con la mosca del vinagre (Drosophila melanogaster). Este insecto slo tiene 4 pares de cromosomas, siendo uno de ellos muy pequeo (fig. 8). En 1911, Morgan encontr que haba cuatro grupos de caracteres (por ejemplo, el color de los ojos, el color del cuerpo, la forma de las quetas, el tamao de las alas, etc.) que tendan a heredarse juntos, siendo tres de los grupos de unos 150 caracteres, y el cuarto de slo 12 caracteres, lo cual estaba en correspondencia con el cromosoma diminuto. Por ello supuso que los genes estaban en los cromosomas y que, por lo tanto, los genes que estn en el mismo cromosoma tienden a heredarse juntos, proponiendo para ellos el trmino de genes ligados. La prueba definitiva de la teora cromosmica de la herencia la aport en 1916 C. B. Bridges, alumno y colega de Morgan, trabajando tambin con Drosophila melanogaster.

CUESTIONARIO 2 Dando por cierto que los genes estn en los cromosomas, los seres diploides tendran dos informaciones sobre cada carcter; por ello, aunque una de las informaciones tuviera un error, el organismo sera normal si esa informacin errnea no fuera dominante. En funcin de ello, contesta a las siguientes preguntas:
1. Qu son los cromosomas homlogos? 2. Cuntas parejas de cromosomas homlogos tienen las clulas de las mujeres? Y las de los hombres? 3. Cuntos autosomas y cuntos heterocromosomas hay en las clulas diploides humanas? 4. Cules son los heterocromosomas de las clulas diploides del hombre y de la mujer? 5. Qu proporcin sexual aparecer entre los descendientes de los humanos? 6. En qu sexo aparecern con ms facilidad las enfermedades relacionadas con los genes que hay en el cromosoma X?

251

a
P

w+ m+ w+ m+ Ojos normales Alas normales

b
wm Ojos blancos Alas reducidas w+ m
+

X w m

w+

F1

w+ m+ wm Ojos normales Alas normales (1.190 machos)

w+ m+

w m

w m

w m Ojos blancos Alas normales

m+

F2
w+ m
+

w+ m
1 2

w m+
3

w m
4

w+ m+ Ojos normales Alas normales

wm Ojos blancos Alas reducidas

w+ m Ojos normales Alas reducidas

w m+ Ojos blancos Alas normales

743 individuos tipos paternos (62,4 %)

447 individuos tipos recombinantes (37,8 %)

w +: w: m+: m:

ojos normales ojos blancos alas normales miniature, alas reducidas

9 Recombinacin de genes ligados. a: Los genes W y m estn en el cromosoma X y no en el Y. Son genes ligados al sexo, segn demostr Morgan en 1911. b: Esquema de la recombinacin en la formacin de gametos de una hembra W m /wm.

Al aparecer descendientes excepcionales que no parecan seguir las leyes genticas, propuso que eran individuos que deban poseer tres cromosomas sexuales, en vez de dos, debido a un error en la ovognesis materna, que produca vulos con dos cromosomas X. Esta imaginativa hiptesis fue totalmente confirmada mediante la observacin microscpica. Se encontraron individuos que eran XXY y otros que eran XO. De esta manera qued confirmada la hiptesis de que los factores responsables de los caracteres, los genes, se encontraban en los cromosomas. Se plante entonces el dilema de por qu unas veces los genes se heredaban independientemente, como haba demostrado Mendel, y otras juntos, como haba encontrado Morgan. A partir de numerosos experimentos, Morgan demostr que los genes ligados no siempre se heredaban juntos. Aos antes, en 1909, el citlogo Janssens haba observado durante la meiosis, concretamente durante el diploteno, ciertos puntos de unin, a los que denomin quiasmas, entre las cromtidas de los dos cromosomas homlogos. Morgan interpret los quiasmas como la evidencia de que anteriormente se haban producido entrecruzamientos (crossing-over) entre dichas cromtidas, es decir, intercambios de fragmentos y, por consiguiente, se haba producido una recombinacin de genes (fig. 9). As pues, en los gametos no habra uno de los dos cromosomas homlogos, sino un cromosoma nuevo, constituido por fragmentos al azar de uno y de otro. En resumen, segn Morgan, los genes estn en
252

los cromosomas, su disposicin es lineal, uno detrs de otro, y mediante el entrecruzamiento de las cromtidas homlogas se produce la recombinacin gentica. El lugar que ocupa un gen en el cromosoma se denomina locus, en plural loci. Los genes alelos ocupan un mismo locus. En un locus cualquiera de un ser haploide hay un solo gen, y en el de un diploide hay dos. Los cromosomas homlogos son pues aquellos que tienen los mismos loci.
CUESTIONARIO 3 Segn descubrieron en 1913, T. H. Morgan y su alumno, y luego colaborador, A. H. Sturtevant, cuanto ms prximos estn dos genes, menos probable ser que la fractura se produzca justo entre ellos y que uno quede en un cromosoma y el otro en el otro, heredndose no juntos sino separados (independientemente). Segn la frecuencia en que se heredan por separado se puede deducir su proximidad relativa en el cromosoma y as llegar a hacer un mapa de cmo se disponen los genes en el cromosoma.
1. Qu resultados habra obtenido Mendel en la F2 si los genes sobre la forma y el color de las semillas se hallaran en el mismo cromosoma y muy prximos? 2. Si el gen A y el gen B se heredan un 10% de las veces por separado, y el gen B y el gen C slo un 7%, cul de estas dos parejas presenta ms proximidad entre sus genes?

3 El ligamento y los mapas cromosmicos

El ligamiento es la tendencia que tienen los genes situados en un mismo cromosoma a heredarse juntos. Cuanto ms prximos estn mayor ser esa tendencia. Los casos de ligamiento se detectan cuando, al estudiar las proporciones fenotpicas de la descendencia, se observa que ciertos caracteres se presentan juntos con una frecuencia mayor que la esperable por azar si siguieran una herencia independiente. Por ello, el ligamiento se suele definir como la desviacin respecto a la segregacin independiente, observada en las proporciones de un cruzamiento prueba. Cuando dos genes que generalmente se heredan juntos, los llamados genes ligados, se heredan por separado, se deduce que ha habido un entrecruzamiento durante la meiosis, justo en el segmento de ADN que separaba dichos genes, por lo que ha habido una recombinacin gentica, y un gen ha permanecido en su cromtida y el otro ha pasado a una de las dos cromtidas del cromosoma homlogo. Cuanto mayor sea la frecuencia de estos casos, es decir, la frecuencia de individuos recombinados o frecuencia de recombinacin, mayor distancia hay que sospechar entre los genes. Esto ha permitido ir deduciendo, en muchos organismos, a travs de numerosos cruces, el orden de los genes en los cromosomas, y las distancias relativas entre ellos, es decir, el mapa de los cromosomas. Los mapas genticos as obtenidos no coinciden en realidad con los mapas fsicos, ya que la frecuencia de recombinacin en un segmento no es la misma que en otro. As, aunque el orden de los genes coincide, la distancia relativa entre ellos no.

ocumento 1

La elaboracin de mapas cromosmicos

a O 6 10 M 4 N

M 4 6

N 2

c R T

d T Q T

a y b A B Entre M y O, y entre M y N, hay en los dos casos la misma distancia. Esto indica que para conocer el orden de los genes hay que saber los porcentajes de entrecruzamientos de las tres parejas de genes posibles. c yD d Si entre dos genes se producen dos entrecruzamientos parece que no ha habido ninguno: para C detectarlos, hay que considerar un gen intermedio.

253

ocumento 1 (continuacin)
(ver figura 10-A). Si por el contrario entre N y O slo hubiera un 2% de recombinantes, el orden sera distinto (ver figura 10-B). Los resultados obtenidos a partir de estos clculos no son fiables para todos los genes, ya que puede haber entrecruzamientos dobles que disvirten los mismos. En la prctica, el mtodo de las frecuencias de recombinacin slo se emplea para genes que estn a menos de 10 , dado que en distancias tan cortas difcilmente se producen entrecruzamientos dobles. stos pueden detectarse genticamente si se consideran tres genes ligados en lugar de slo dos. Por ejemplo, en la figura 10-C se observa que al considerar slo dos genes, no se puede detectar que han habido dos entrecruzamientos, mientras que en la figura 10-D, al considerar tres genes si se pueden detectar.

La elaboracin de mapas cromosmicos

Considrense tres caracteres que generalmente se heredan juntos. Debido a ello se ha supuesto que son informados por tres genes ligados, los genes M, N y O. Si se observa, por ejemplo, que hay un 10 % de individuos que no presentan juntos el carcter N y el carcter O, un 6 % que no presentan juntos el M y el O, y un 4% que no presentan juntos el M y el N, se puede deducir que ha habido un 10 %, un 6 % y un 4 % de recombinaciones respectivamente entre los dos genes que los informan. Se considera que cada 1 por 100 de recombinaciones entre genes ligados equivale a una unidad de distancia en el mapa del cromosoma. Esta unidad se denomina centimorgan (). Es decir, la distancia relativa entre los genes N y O es 10 , entre M y O es 6 , y entre M y N es 4

La herencia del sexo

1. Concepto de sexo
Se habla de seres con sexo cuando los individuos son capaces de originar clulas sexuales (gametos), es decir, clulas con la mitad de cromosomas capaces de originar, al unirse dos de distinto tipo, un nuevo individuo. Los individuos que generan gametos mviles (espermatozoides y anterozoides) se denominan machos, y los que generan gametos ssiles (vulos y oosferas) se denominan hembras. Los individuos que producen gametos de los dos tipos se denominan hermafroditas. En el Documento 2 se explica la diferencia entre sexualidad y reproduccin. En los individuos sexuados se pueden distinguir dos tipos de caracteres sexuales, los caracteres sexuales primarios, como, por ejemplo, la presencia de gnadas masculinas o femeninas o la presencia de rganos copuladores, y unos caracteres sexuales secundarios, que son todos aquellos aspectos que diferencian a los machos de las hembras, y que no son necesarios para la reproduccin. El sexo de los individuos puede venir definido de formas muy diferentes segn el tipo de organismo. El mecanismo ms usual, en los organismos diploides, es mediante una pareja de cromosomas, denominados por ello cromosomas sexuales o heterocromosomas.

2. Sexo debido a cromosomas sexuales

En muchas especies diploides existen dos tipos de cromosomas: los autosomas, que son las mismas pa254

rejas en hembras y machos, y los heterocromosomas o cromosomas sexuales, denominados as porque segn se trate de hembra o de macho son de distinto tipo o si son del mismo tipo se encuentran en nmero diferente. Dicho de otro modo, ellos son los que definen el sexo del individuo. Ello no quiere decir que toda la informacin sobre el sexo radique en los heterocromosomas, sino que puede haber informacin en los autosomas, siendo algunos genes de los heterocromosomas los que determinan que se expresen en el sentido de un sexo o del otro. Se distinguen dos tipos de heterocromosomas: el llamado cromosoma X y el llamado cromosoma Y. La pareja XX determina el llamado sexo homogamtico (todos los gametos que producen los individuos de este sexo son iguales; todos llevan un cromosoma X), y la pareja XY determina el llamado sexo heterogamtico (estos individuos dan lugar a dos tipos de gametos, unos con el cromosoma X y otros con el cromosoma Y). Segn que el sexo heterogamtico corresponda al macho o a la hembra, se distinguen dos mecanismos de herencia de sexo: Segn si el sexo heterogamtico corresponde al macho o a la hembra, se distinguen dos mecanismos de herencia del sexo: Machos heterogamticos. Hay especies, como la especie humana, en las que el macho es XY, y la hembra es XX, y otras especies, como los ortpteros (saltamontes), en las que el macho slo tiene un heterocromosoma, es decir, es XO, y la hembra tiene dos, es decir, es XX. Machos homogamticos. Hay especies, como las aves, en las que el macho es XX y la hembra es XY. Para no confundir esta situacin con la anterior, se simbolizan con ZZ el macho y con ZW la

hembra. Tambin puede darse el caso, como ocurre en algunos lepidpteros (mariposas), que la hembra slo tenga un heterocromosoma, es decir, sea ZO, y el macho dos, es decir, que sea ZZ.

Estos dos mecanismos explican que haya un cincuenta por ciento de individuos de cada sexo (figura. 10).

MACHOS HETEROGAMTICOS

MACHOS HOMOGAMTICOS

MECANISMO XY
Ser humano

MECANISMO XO
Langosta

MECANISMO ZW
Gallo

Mariposa de la seda

MECANISMO ZO ZZ= ;ZO=

XY= ;XX= 44 + XY 44 + XX 16 + XO

XO= ;XX= 16 + XX 76 + ZZ

ZZ= ;ZW= 76 + ZW 54 + ZZ

54 + ZO

Gametos

22 + Y

22 + X

22 + X

8 + O

8 + X

8 + X

38 + Z

38 + Z

38 + W

27 + Z

27 + Z

27 + O

F1

44 + XY
50% 50%

44 + XX

16 + XO
50% 50%

16 + XX

76 + ZZ
50% 50%

76 + ZW

54 + ZZ
50% 50%

54 + ZO

10 Sexo debido a los cromosomas sexuales. Mecanismos de herencia del sexo debida a los cromosomas sexuales. Los nmeros que hay en el interior de los crculos indican la cantidad de autosomas de cada especie.

ocumento 2

Sexualidad, reproduccin y reproduccin sexual

La sexualidad se puede definir como la capacidad que presentan ciertos organismos de recombinar material gentico. Esta recombinacin de material gentico puede realizarse entre dos individuos, por ejemplo, la conjugacin bacteriana, en que la bacteria + transfiere un segmento de ADN a la bacteria , y la conjugacin en ciliados, en que dos individuos se intercambian microncleos; y tambin entre las cromtidas de dos cromosomas homlogos durante la meiosis, la llamada recombinacin gentica. La reproduccin es sencillamente la generacin de nuevos individuos. Hay dos tipos de reproduccin: la reproduccin asexual, que es la reproduccin en la que, como no hay procesos de sexualidad, los descendientes son genticamente idnticos al progenitor, por ejemplo, la reproduccin por esquejes en el geranio; y la reproduccin sexual, que es la reproduccin en la que si hay procesos de sexualidad, los descendientes son genticamente diferentes del progenitor o progenitores. La forma ms conocida de reproduccin sexual es la reproduccin por unin (fecundacin) de gametos. Otras formas de reproduccin sexual son: a) La partenognesis sexual, en que de un vulo sin fecundar surge un nuevo individuo haploide, como sucede en los znganos, en los que sin unin de gametos hay un claro ejemplo de reproduccin sexual (el intercambio de material gentico se produce durante la ovognesis). b) La reproduccin por meiosporas, como pasa en los musgos, los helechos y los hongos basidiomicetos, en que la fases diploide o esporfito genera por meiosis esporas con la mitad de cromosomas, las cuales dan lugar a descendientes haploides. No hay pues gametos ni fecundacin. c) La reproduccin sexual sin meiosis previa, como pasa con los gametos de musgos o helechos, o con las hifas de los hongos, en que las clulas haploides surgidas por mitosis de individuos haploides se unen y generan descendientes diploides. En conclusin, puede haber reproduccin sin sexualidad, la denominada reproduccin asexual; y sexualidad sin reproduccin; como sucede, por ejemplo, en la gametognesis de gametos que mueren sin dar lugar a un nuevo individuo. En su formacin hay recombinacin gentica pero luego no hay reproduccin.

255

ocumento 3

Determinacin del sexo no debida a la pareja de heterocromosomas

El sexo del individuo puede ser definido por mecanismos diferentes de la combinacin de cromosomas sexuales. Estos mecanismos son los siguientes. a) Sexo debido a la haplodiploida. Este mecanismo se encuentra en las abejas. La reina hace un vuelo nupcial en el cual el zngano (macho) la fecunda, y ella almacena el esperma en un receptculo seminal. Puede poner dos tipos de huevos: unos que proceden de vulos fecundados y, por tanto, son diploides, y otros que proceden de vulos sin fecundar, que son haploides. De los huevos diploides salen unas larvas que dan lugar a hembras estriles (las obreras), o a reinas, segn se alimenten de miel o de jalea real. De los huevos haploides surgen, por partenognesis, los machos. As, en estos animales el sexo masculino tiene la mitad de cromosomas que el sexo femenino. Los espermatozoides no se forman por meiosis, sino por mitosis (figura adjunta). b) Sexo debido a una sola pareja de genes. Por ejemplo, en la avispa Bracon hebetor, el sexo masculino est determinado por haploida, al igual que en otras avispas, en las que los machos son los individuos haploides. En otros casos tambin son machos los individuos diploides que son homocigticos para un determinado locus del cromosoma X, que puede ser ocupado por diversos alelos (a, b, c, d, e, f, g, h, i). Por ejemplo, los individuos XbXb son machos, que son anormales y estriles. c) Sexo debido al equilibrio gentico. En Drosophila melanogaster, el macho normal es XY, pero el cromosoma Y, si bien es indispensable para la fertilidad del macho porque contiene la informacin sobre la movilidad de los espermatozoides, no incluye ninguna informacin sobre la masculinidad. Puede haber individuos con cromosoma Y que no sean machos, sino hembras. La informacin sobre la masculinidad radica en los autosomas. Se ha descubierto que el sexo depende del resultado o el equilibrio entre la carga de feminidad y la de masculinidad. Cada cromosoma X tiene una carga de feminidad (& = 1), y cada juego de autosomas (A), una carga de masculinidad (( = 1). Si el cociente X/A es menor que 0,5, el individuo ser un supermacho; si el valor es de 0,5, el individuo ser macho; si se encuentra entre 0,5 y 1, ser intersexo; si es 1, hembra; y si es superior a 1, ser superhembra. Por ejemplo, un individuo que sea XXYAA presenta una relacin feminidad/masculinidad (X/A) de (1+1)/(1+1) = 1 y, por tanto, ser una hembra. d) Sexo debido a influencias del ambiente. En los gusanos marinos de la especie Bonellia viridis se ha observado que las larvas, durante las primeras fases de su desarrollo, nadan libremente. Despus se fijan sobre las rocas y dan lugar a las hembras. stas tienen una trompa larga, y todas las larvas que van a parar a ella, se convierten en machos. Los machos son diminutos, carecen de aparato digestivo y llevan una vida parsita, ya que siempre viven en los conductos genitales de la hembra. En resumen, las condiciones bioqumicas que hay en el interior de la hembra son las que provocan la masculinizacin de las larvas. e) Inversin sexual. Se llama inversin sexual el proceso por el que algunos organismos, durante una poca de su vida, son de un sexo y, despus, del sexo contrario. Por ejemplo, las gallinas (ZW) que han sufrido la destrucccin de los ovarios por una enfermedad, desarrollan testculos y adquieren espolones, cola con largas plumas, etc. Estos nuevos machos continan siendo, cromosmicamente, ZW. f) Sexualidad en las plantas. En el caso de las plantas con flores hermafroditas (flores con estambres y carpelos a la vez) y de las plantas con flores masculinas (tan slo presentan estambres) y flores femeninas (que slo tienen carpelos) en el mismo pie (denominadas plantas monoicas), que son la mayor parte de las plantas con flores, no hay determinacin gentica del sexo de los individuos ni de sus clulas reproductoras: anterozoides y oosferas. Las dos proceden por meiosis de idnticas clulas diploides. En muchos casos, hay una autofecundacin y la descendencia es frtil. En plantas como el trigo, la cebada, el tomate y el tabaco, se produce siempre la autofecundacin, ya que sta sucede antes de la apertura de la flor. En otras plantas, se combina la autofecundacin con la fecundacin cruzada. Por ejemplo, en el algodn hay un 10% de fecundacin cruzada. A falta de cromosomas sexuales, han aparecido mecanismos que favorecen la fecundacin cruzada, como la maduracin del polen en diferente perodo que la de los carpelos de la misma planta, o la creacin de un ambiente que imposibilita el desarrollo de los cigotos creados por autofecundacin. En las plantas dioicas (con dos tipos de individuos, los masculinos y los femeninos), como las palmeras, la determinacin del sexo depende generalmente de una sola pareja de genes. Hay casos excepcionales, como el de Melandrium, en los que el sexo est determinado por heterocromosomas. As, las plantas cuyas flores tienen slo estambres son XY, mientras que las que tienen flores slo con carpelos son XX. Es decir, el mismo sistema que en el ser humano.

16

32

Mitosis

Meiosis

Determinacin del sexo por haplodiploida en la abeja. Los machos no tienen padre (proceden de vulos no fecundados) y hay un nmero mucho menor que de hembras

16
Gametos

16

16

No fecundado

F1

32

16

256

5 Herencia ligada al sexo

Hay caracteres que, sin ser caracteres sexuales primarios (como la presencia de ovarios o testculos), ni caracteres sexuales secundarios (como la barba en el hombre), slo aparecen en uno de los dos sexos o, si aparecen en los dos, en uno de ellos son mucho ms frecuentes. A estos caracteres se los denomina caracteres ligados al sexo. En los organismos cuyo sexo est determinado por los cromosomas sexuales, la explicacin de esta circunstancia estriba en que el cromosoma X y el cromosoma Y son muy diferentes. En ellos se distingue un segmento homlogo, es decir, con genes para unos mismos caracteres, y un segmento diferencial. Los caracteres que vienen definidos por el segmento diferencial del cromosoma X se llaman caracteres ginndricos, y los que dependen del segmento diferencial del cromosoma Y se llaman caracteres holndricos. El segmento homlogo es el que permite el apareamiento (sinapsis) y posterior segregacin de los cromosomas X e Y durante la meiosis. Los genes del segmento homlogo tienen una herencia parcialmente ligada al sexo. En los hombres, como hay un cromosoma X y un cromosoma Y, es decir, hay hemicigosis, tanto los genes de los caracteres ginndricos como los de los holndricos se manifestarn siempre, aunque sean recesivos. En las mujeres, como son XX, los alelos recesivos slo se pueden manifestar si se encuentran en los dos cromosomas X, es decir, si hay homocigosis. se conoce un gen. En su segmento ginndrico se han localizado ms de 120 genes. Entre ellos cabe destacar los genes responsables del daltonismo y de la hemofilia. a) El daltonismo es la incapacidad de distinguir el color verde del rojo. Viene regido por tres genes ginndricos recesivos, que provocan diferentes alteraciones en la percepcin de los colores. Un gen da lugar a la ceguera para el color rojo (protanopa), otro provoca la ceguera para el color verde (deuteranopa) y el tercero da lugar a ceguera para los dos colores (tritanopa). En la poblacin actual hay un 8 por 100 de hombres daltnicos (6 por 100 de deuteranpicos y 2 por 100 de protanpicos) y slo un 0,4 por 100 de mujeres daltnicas (protanpicas y deuteranpicas). La tritanopa es muy rara. El gen del daltonismo tambin puede aparecer como consecuencia de una mutacin de un gen normal. En la figura 13 se pueden observar dos ejemplos de cmo se hereda este carcter. b) La hemofilia es una enfermedad hereditaria que se caracteriza por la no coagulacin de la sangre. En el 98% de los casos se debe a genes ginndricos, es decir, situados en el segmento diferencial del cromosoma X, al igual que el daltonismo, por lo que sigue el mismo tipo de herencia (fig. 13). Hasta hace pocos aos era muy frecuente que los nios hemoflicos no llegaran a adultos y que, por tanto, no tuvieran descendencia. Como para que nazcan nias hemoflicas es necesario que el padre sea hemoflico y que la madre al menos sea portadora, es lgico que prcticamente no se conozcan casos de mujeres hemoflicas. Por ello se ha llegado a decir que estadsticamente la hemofilia prcticamente slo la padecen los hombres, y slo la transmiten las mujeres. Desde hace pocos aos, la administracin a los hemoflicos de los factores de coagulacin, por va intravenosa, permite que estos enfermos tengan una vida prcticamente normal.

1. Herencia ligada al sexo en los humanos

En la especie humana, el cromosoma Y es mucho ms pequeo que el X, pues slo mide 1,5 (fig. 12). La mayor parte del cromosoma Y es heterocromatina, es decir, ADN que no se descondensa durante la interfase y, por tanto, es genticamente inactivo. En su segmento homlogo con el X slo se ha localizado el gen de un antgeno de superficie de la membrana plasmtica. En su segmento holndrico slo se han localizado cuatro genes, uno de los cuales es el responsable de la formacin de los testculos (TDF), y otro es el gen de histoincompatibilidad (H-Y), propio de las clulas de los varones. Se ha apuntado que la hipertricosis auricular (pelos en las orejas) podra ser un carcter holndrico. Este carcter es exclusivo de los varones y es bastante frecuente, entre un 10 por 100 y un 20 por 100, en algunas poblaciones italianas y de la India. Otros autores consideran que es un carcter dominante autosmico con herencia limitada a un sexo. El cromosoma X es un cromosoma de tamao mediano que mide unas 4,5 . En su segmento homlogo slo

2. Caracteres influidos por el sexo

Son aquellos caracteres que, para manifestarse, dependen del sexo del individuo. Estn determinados por genes autosmicos o bien por genes de los segmentos homlogos de los heterocromosomas. As, en los humanos la calvicie hereditaria depende de un gen (C) que, si se encuentra en heterocigosis con el gen normal (C), y debido a las hormonas sexuales propias de cada sexo, se comporta como dominante en los hombres (hombres calvos) y como recesivo en las mu257

jeres. Es decir, el genotipo CC da lugar a hombres y mujeres normales, el genotipo CC provoca la calvicie en el hombre, pero no en la mujer, y el genotipo CC la provoca en el hombre y en la mujer. Existen genes en los que esta influencia es total, de modo que slo se manifiestan en uno de los dos

sexos, se denominan caracteres limitados a un sexo. Por ejemplo, en Bos taurus (toro) existen varios genes para la produccin de leche, pero stos, debido a la anatoma del animal y al ambiente hormonal (caracteres que dependen del sexo), se manifiestan slo en las vacas.
zona homloga con Y

zona con genes ligados al cromosoma X

centrmero X Enfermedad de Fabry, gota zona inerte (heterocromatina) Anemia hemoltica zona con genes ligados al cromosoma Y zona homloga con X Distrofia Ictiosis, albinismo muscular de Duchenne

Hemofilia A

Sndrome de Lesch-Nyhan Hemofilia B

11 Los cromosomas sexuales humanos. Esquema de los cromosomas X e Y humanos, teidos con la tcnica de bandas. Se indican las regiones y la situacin de algunos genes.
no daltnica

centrmero

b
d

daltnica

d Mujer daltnica

XY

X+X+

XdX+
X X

X dX+
portadoras no daltnico

X+Y

X+Y
no daltnicas daltnica

d Hombre daltnico

XY

XdXd

X +X d
X Y

X+Xd
portadoras

YXd

YXd
daltnicos

a Situacin del gen del daltonismo (d) en los cromosomas se12 Herencia del daltonismo. a) b Ejemplos de transmisin de esta enfermedad xuales de un hombre y una mujer daltnicos. b) a la descendencia.

ocumento 5
nada por un gen autosmico, no es un carcter ligado al sexo. Actualmente hay un hemoflico por cada 100.000 individuos, y tan slo una hemoflica por cada 100 millones. A veces, aunque los progenitores no sean hemoflicos, puede aparecer el gen de la hemofilia a causa de la mutacin de un gen normal. Un caso bien conocido de este ltimo fenmeno es el de la reina Victoria de Inglaterra, que no era hemoflica pero s portadora, y que introdujo la hemofilia en la casa real britnica. Posteriormente, el gen de la hemofilia ha ido pasando a las casas reales de otras naciones.

Tipos de hemofilia
La hemofilia est regida por tres genes, que determinan tres variaciones de esta enfermedad. La hemoflia A, causada por la escasez del factor de coagulacin VIII, depende de un gen ginndrico, y constituye el 83 % de todos los casos de hemofilia. La hemoflia B, causada por la escasez del factor IX, tambin depende de un gen ginndrico y constituye el 15 % de las hemofilias. La hemoflia C (2 %), causada por la poca produccin del factor XI, que es determi-

258

6 La expresin del mensaje gentico

En la informacin biolgica puede ocurrir que un solo par de genes homlogos sea responsable de varios rasgos, lo que se denomina pleiotropa; o el caso contrario, que varios pares de genes interaccionen para definir un solo carcter, lo que se denomina interaccin gentica. Un ejemplo de pleiotropa es el gen responsable de la fenilcetonuria, enfermedad en la que se observa un exceso de fenilalanina en la sangre, coeficiente de inteligencia bajo, cabeza pequea y pelo de color claro. Un ejemplo de interaccin gentica es la herencia de un carcter cuantitativo, como es el color de la piel en los humanos. Otros conceptos importantes son la expresividad o grado en que se manifiesta una informacin y la penetracin o proporcin de individuos que teniendo esa informacin la manifiestan. Si bien hay genes, como los del color de la semilla del guisante, que tienen un 100 por 100 de expresividad y de penetracin, hay otros en los que, debido al ambiente o a la interaccin con otros genes, el porcentaje es menor. Por ejemplo, la corea de Huntington (espasmos involuntarios de cabeza y extremidades) puede darse en mayor o menor grado, empezar a diferentes edades o incluso no manifestarse.

7 Los trminos utilizados en la gentica mendeliana

Gen. Es la unidad del material hereditario. Es un fragmento de cido nucleico, generalmente ADN (salvo en algunos virus, en los que es ARN), que lleva la informacin para un carcter. Corresponde a lo que Mendel denomin factor hereditario. Carcter. Cada una de las particularidades morfolgicas o fisiolgicas que se pueden establecer en una especie, por ejemplo, el color de los ojos, la forma del pelo, el nmero de dedos, etc. Las diferentes tipos que hay dentro de un carcter se denominan manifestaciones, por ejemplo, ojos azules, pelo rizado, cuatro dedos, etc. Carcter cualitativo. Es aquel carcter que se posee o no se posee. Por ejemplo, la semilla del guisante, o es lisa o no lo es. Carcter cuantitativo. Es el carcter que presenta una variacin continua en la poblacin. Por ejemplo, la altura, el peso, el coeficiente de inteligencia humano, etc. El carcter cuantitativo depende de varios genes que contribuyen en determinada proporcin. A estos genes se los denomina poligenes. Los poligenes pueden tener efectos acumulativos (genes aditivos), o puede suceder que exista una jerarqua entre ellos. En los caracteres cuantitativos el ambiente suele ayudar a que se d una serie continua de fenotipos. Por ejemplo, el carcter color de la piel humana, que depende de tres o cuatro pares de genes y del grado de insolacin que aumenta los tipos de tonalidades intermedias. Haploide. Ser que para cada carcter slo posee un gen o informacin. Diploide. Ser que posee dos genes o informaciones para cada carcter. Estos genes pueden ser iguales o distintos. Puede suceder que se manifiesten ambos genes o que uno impida la expresin del otro. Locus. Lugar que ocupa un gen en el cromosoma. En un locus cualquiera de un ser haploide hay un solo gen, en el de un diploide hay dos, en el de un triploide hay tres, etc. El plural de locus es loci. Cromosomas homlogos. Son aquellos que tienen los mismos loci. En un ser diploide hay una pareja de cromosomas homlogos, en un tetraploide hay cuatro, etc. Alelo. Es cada uno de los diferentes genes o informaciones que pueden estar en un mismo locus. Estos genes son alelos entre s. Si hay muchos, se dice que forman una serie allica. A los diferentes alelos se los denomina tambin factores antagnicos. En el guisante, por ejemplo, para el carcter color de la semilla hay dos tipos de alelos, el alelo A (amarillo) y el alelo a (verde). Genes homlogos. Son los genes que ocupan el mismo locus en diferentes cromosomas homlogos. Son, pues, alelos entre s. Como la mayora de las especies son diploides, se suele hablar de par de genes homlogos o simplemente de par de genes. Genotipo. Conjunto de genes presentes en un organismo. Fenotipo. Conjunto de manifestaciones de caracteres de un organismo. Depende del genotipo y de la accin ambiental: Fenotipo = Genotipo + Accin ambiental Por ejemplo, el grado de color de la piel viene determinado por el genotipo, pero tambin depende del grado de insolacin. Homocigoto o raza pura. Individuo que para un carcter posee los alelos iguales. Por ejemplo, para el color de la semilla del guisante son homocigotos el GG y el gg.
259

Heterocigoto o hbrido. Individuo que posee los alelos diferentes. Por ejemplo, para el caso anterior son heterocigotos los individuos Gg. Herencia dominante. Es aquella en la que hay un alelo, el llamado dominante, que no deja manifestarse al otro, el llamado alelo recesivo. Por ejemplo, en la herencia del color de las semillas del guisante (Pisum sativum), los individuos Gg son amarillos, ya que el alelo G es dominante sobre el alelo g. Herencia intermedia. Es aquella en la que uno de los alelos muestra una dominancia incompleta sobre el otro. As pues, los hbridos tienen un fenotipo intermedio entre las dos razas puras. Por ejemplo, en la herencia del color de las flores del dondiego de noche (Mirabilis jalapa), los individuos RR tienen flores rojas (R es el alelo que informa color rojo), los BB tienen flores blancas (B informa color blanco), y los RB tienen flores rosas. Herencia codominante. Es aquella en la que los dos alelos son equipotentes, y por tanto no hay dominancia. Los hbridos presentan las caractersticas de las dos razas puras a la vez. Un ejemplo de esta situacin es la herencia de los grupos sanguneos humanos M-N. Los grupos se establecen en funcin de la presencia o ausencia en la superficie de los glbulos rojos de los antgenos M o N. Se pueden distinguir tres tipos de individuos: los M, que presentan el antgeno M y cuyo genotipo es MM, los N, que presentan el antgeno N y cuyo genotipo es NN, que presentan el antgeno M y el antgeno N, a la vez, y cuyo genotipo es MN. Dihbridos. Son los individuos con heterocigosis en dos pares de genes; por ejemplo, las plantas de guisantes GgLl, siendo G el alelo que indica color amarillo, g el alelo que indica color verde, L el alelo que indica semillas lisas, y l el alelo que indica semillas rugosas. Polihbridos. Son los seres con heterocigosis para muchos pares de genes; por ejemplo, Aa, Bb, Cc, Dd, Ee, etc. Alelos letales. Son aquellos alelos que poseen una informacin deficiente para un carcter tan importante que, sin l, el ser muere. Los alelos letales pueden producir la muerte a nivel del gameto o a nivel del cigoto, pudiendo suceder entonces que el individuo no llegue a nacer, o bien que muera antes de alcanzar la capacidad reproductora. Los alelos letales suelen ser recesivos, por lo que necesitan darse en homocigosis para manifestarse. Retrocruzamiento o cruzamiento prueba. Es el cruce del individuo problema con un individuo homocigtico recesivo. Se utiliza en los casos de herencia dominante para averiguar si un individuo es hbrido o de raza pura. Si aparecen homocigticos recesivos, el individuo problema es hbrido. Por ejemplo, en el caso de una planta de guisante nacida de una semilla lisa, si al cruzarla con la raza pura rugosa, toda la descendencia es lisa, se deduce que la primera planta es de raza pura lisa (LL ll 100% Ll), pero si la mitad de la descendencia es li260

sa y la otra mitad rugosa, se deduce que la planta es lisa heterocigota (Ll ll 50% Ll y 50% ll). Simbologa. Los genes se simbolizan con letras cursivas. Si es herencia dominante y slo hay dos alelos, el dominante se representa con mayscula y el recesivo con minscula. La letra escogida puede ser la inicial del nombre del carcter dominante o la del carcter recesivo. Por ejemplo, en el carcter color de la semilla del guisante, que puede ser amarillenta (dominante) o verde (recesiva), los tres genotipos posibles se pueden expresar como GG, Gg y gg, o como VV, Vv, vv. En el caso de que una sola letra sea insuficiente porque hay otros caracteres cuyo nombre empieza igual, se toman dos letras. Si es herencia intermedia y slo hay dos alelos, ambos se representan en maysculas para resaltar que no hay alelos recesivos. Por ejemplo, el genotipo de los dondiegos de flores rosa es RB. Otro tipo de notacin, que permite adems simbolizar ms de dos alelos, es el uso de exponentes (superndices). Un caso en el que se utiliza esta anotacin es en la herencia de los grupos sanguneos humanos ABO. Como para este carcter hay ms de dos alelos (lo que se denomina alelismo mltiple), concretamente hay tres; y como con dos letras no se pueden representar tres alelos, es por lo que se simbolizan mediante exponentes. Los grupos sanguneos ABO se establecen en funcin de la presencia o ausencia en la superficie de los glbulos rojos, de los antgenos A o B. El gen IA informa sobre el antgeno A, el gen IB sobre el antgeno B, y el gen i no lleva informacin sobre los antgenos A o B. Se pueden distinguir cuatro tipos de individuos: los A, que poseen el antgeno A y cuyo genotipo es IAIA o IAi; los B, que poseen el antgeno B y cuyo genotipo es IBIB o IBi; los AB, que poseen el antgeno A y el antgeno B y cuyo genotipo es IAIB; y los O, que carecen de antgeno A y de antgeno B y cuyo genotipo es ii. Obsrvese que el caso IAIB es un ejemplo de codominancia, mientras que los casos IAi o IBi son ejemplos de dominancia. En la mosca del vinagre Drosophila melanogaster est establecido la anotacin mediante exponentes. En genes en que el alelo normal (tambin llamado salvaje o silvestre) es dominante respecto a los genes surgidos de l por mutacin, como sucede para el carcter color de los ojos, que es un caso de alelismo mltiple, para simbolizar los alelos recesivos se toma la primera letra del nombre del alelo ms recesivo, en este caso la letra w dado que el alelo que informa para el color blanco (white) es el ms recesivo. Los dems alelos se simbolizan con esa letra y un exponente. En nuestro caso, por ejemplo wbl indica color sangre (blood) y ww indica color vino (wine). El alelo normal o salvaje se simboliza con w+ o simplemente con +. Adems, como el alelo w est en el cromosoma X, se ha de escribir Xw. En genes en que el alelo mutante es dominante respecto al gen normal, para simbolizar los alelos mu-

tantes, se toma la primera letra del nombre de la mutacin, o dos letras si hay problemas de confusin con otros mutantes, y se escribe en mayscula cursiva. Por ejemplo, el alelo dominante alas rizadas (curly) se simboliza como Cy y el alelo salvaje como Cy+; el alelo dominante quetas en rastrojo (stubble) se simboliza como Sb, y el alelo salvaje como Sb+, etc. Concepto de probabilidad. La probabilidad de que pase un determinado suceso es la relacin entre los casos favorables y todos los casos posibles. Por ejemplo, la probabilidad de que al tirar un dado salga un tres es 1/6. Igualmente, la probabilidad de que por ejemplo nazca un nio albino (aa) en una familia en que tanto el padre como la madre son de aspecto normal pero portadores del gen recesivo del albinismo, son por tanto Aa, es, como se observa en la primera parte de la figura adjunta, 1/4.

Probabilidad de sucesos no excluyentes. La probabilidad conjunta de dos sucesos que no son excluyentes, se obtiene multiplicando la probabilidad del primer suceso por la probabilidad del segundo suceso. Por ejemplo, si en el caso anterior piden la probabilidad de que el primer hijo sea albino, y el segundo normal homocigoto, es decir AA (las caractersticas del primer hijo no excluyen ninguna de las posibles caractersticas del segundo hijo), la probabilidad se obtiene multiplicando la probabilidad de que el primer hijo sea albino por la probabilidad de que el segundo hijo sea AA.
1/4 (Prob. de que el 1.er hijo sea albino) 1/4 (Prob. de que el 2. hijo sea AA) 1/16

Aa

Aa

AA

Aa
Probabilidad P(aa) 1 4

Aa
Casos favorables Casos totales

a a

Estos casos se reconocen fcilmente porque en el enunciado entre los dos sucesos que se solicitan hay la letra y. Probabilidad de sucesos excluyentes. La probabilidad conjunta de sucesos que son excluyentes se obtiene sumando la probabilidad de cada suceso. Por ejemplo, si en el caso anterior piden la probabilidad de que de los dos hijos que tiene la pareja, uno sea albino y el otro normal homocigoto, al no pedir que el albino sea el mayor, tambin es correcto que el albino sea el menor, y estos dos casos favorables son excluyentes, o se da uno o se da el otro. La probabilidad se obtiene sumando la probabilidad del primer caso y la del segundo caso.
1/4 (Prob. de que el 1.er hijo sea albino) 1/4 (Prob. de que el 2. hijo sea AA) 1/16 1/4 (Prob. de que el 1.er hijo sea AA) 1/4 (Prob. de que el 2. hijo sea albino) 1/16

Aa

aa

Aa

Aa
Probabilidad P(aa)

aa
Casos favorables Casos totales

a a

Por lo tanto la probabilidad de que si se tienen dos hijos, uno sea albino y el otro sea AA, es 1/16 1/16 1/8 Estos casos se reconocen fcilmente porque al resolver el problema entre los dos sucesos favorables hay la letra o. En resumen si hay y, se multiplican, y si hay o, se suman.

2 1 4 2

13 Probabilidad. Arriba, cruce entre dos individuos heterocigotos portadores del gen del albinismo (Aa). La probabilidad de que nazca un hijo albino se calcula dividiendo el nmero de casos favorables (slo uno, aa) entre el nmero de casos posibles (cuatro: AA, 2Aa y aa), y es igual a 1/4. Abajo, cruce entre un individuo albino (aa) y otro heterocigoto (Aa). En este caso, la probabilidad de que nazca un hijo albino es de 1/2.

261

Actividades
Problemas resueltos de gentica mendeliana
PROBLEMAS DE UN SOLO PAR DE GENES
1. Qu probabilidad hay de que un hombre y una mujer de aspecto normal pero portadores ambos del gen recesivo del albinismo, si tienen dos hijos, uno sea albino y el otro no? Solucin: La probabilidad de que un hijo sea albino es 1/4, y de que sea normal 3/4. Como no importa el orden, son casos favorables tanto que el primero sea el albino y el segundo el normal, como el caso contrario. Por tanto, la probabilidad es: 1/4 (Prob. de que el 1.er hijo sea albino) 3/4 (Prob. de que el 2. hijo sea normal) 3/16 3/4 (Prob. de que el 1.er hijo sea normal) 1/4 (Prob. de que el 2. hijo sea albino) 3/16 Por tanto, la probabilidad de que un hijo sea albino y el otro normal es 3/16 + 3/16 = 6/16 Comentario: Como la suma de todas las probabilidades siempre ha de valer 1, la forma de confirmar que el problema est bien resuelto es comprobndolo. As, si al caso anterior sumamos la probabilidad de que los dos hijos sean albinos [(1/4) (1/4) 1/16] y la probabilidad de que los dos sean normales [(3/4)(3/4) 9/16], que son los otros dos casos posibles, se comprueba que s da 1 [(6/16) (1/16) (9/16) 1]. 2. En los conejos, el albinismo sigue el mismo tipo de herencia que en los humanos. Cul es la probabilidad de que una pareja de conejos de aspecto normal y portadores ambos del gen del albinismo, tengan descendientes albinos en la F2, si todos los descendientes de la F1 se cruzan al azar entre s? Solucin: Como se observa en el esquema del primer problema, las proporciones genotpicas de la F1 son: 1/4 (AA), 1/2 (Aa) y 1/4 (aa). Para saber la probabilidad de que aparezcan individuos albinos en la F2, hay que multiplicar la probabilidad de los diferentes cruces posibles entre los individuos de la F1, por la probabilidad de que en ellos aparezcan individuos albinos. La probabilidad de cada cruce se obtiene multiplicando las proporciones en la poblacin que tiene cada tipo de progenitor. En la siguiente tabla, en cada casilla, el primer nmero es la proporcin en que se encuentra el primer progenitor, el segundo la proporcin del segundo progenitor, y el tercero la probabilidad de que generen individuos albinos.
AA (1/4)
1 1 1 AA 0 0 4 4 4 1 1 1 Aa 0 0 2 2 4 1 1 1 aa 0 0 4 4 4

3. En la planta dondiego de noche (Mirabilis jalapa) el color de los ptalos sigue una herencia intermedia, siendo una de las razas puras de flores rojas y la otra de flores blancas. Qu proporciones fenotpicas cabe esperar en el cruce entre dos plantas de flores rosa? Solucin: El cruce es RB RB y por tanto el resultado es 1/4RR, 1/2RB y 1/4 RR, o sea, las proporciones fenotpicas que esperar son: 1/4 de flores rojas, 1/2 de flores rosas, y 1/4 de flores blancas. 4. Una mujer de grupo sanguneo M acusa a un hombre de no querer reconocer que es el padre de su hijo, que es de grupo M. El hombre alega en su defensa que es de grupo N. Segn esto, puede descartarse su posible paternidad? Solucin: El hombre no puede ser el padre, ya que el nio no posee el antgeno N. 5. Qu grupos sanguneos pueden presentar los hijos de una mujer de grupo AB y un hombre de grupo 0? Solucin: Como la mujer es IAIB y el hombre es ii, la mitad de los hijos sern de grupo A (IAi) y la otra mitad sern de grupo B (IBi). 6. En las cobayas, el color negro del pelo se debe al gen dominante B, y el color blanco a su alelo recesivo b. Cul es la probabilidad de que aparezca un individuo blanco en el cruce entre III-1 y III-2 (salvo que haya evidencia de lo contrario, los individuos II-1 y II-4 deben considerarse homocigotos). En los esquemas de pedigr o de rboles genealgicos, los crculos representan a las hembras y los cuadrados a los machos. Solucin: Para que salga blanco III1 y III2 han de ser

I : 1 2

II 1 III 1 2 2 3 4

Aa (1/2)
1 1 00 4 2 1 1 1 1 2 2 4 16 1 1 1 1 4 2 2 16

aa (1/4)
1 1 00 4 4 1 1 1 1 2 4 2 16 1 1 1 1 4 4 16

La probabilidad de que haya albinos en la F2 es: 1 1 1 1 4 1 16 16 16 16 16 4

Nn, y slo 1/4 parte de sus descendientes sern blancos (nn). Como II2 es blanco seguro que III1 es Nn. Por otro lado, como II2 es blanco (nn), I1 y I2 deben ser Nn, y por tanto la probabilidad de que uno de sus descendiente, negros (II3) sea Nn es de 2/3. Considerando que lo sea, la posibilidad de que al cruzarlo con un NN origine un III2 que sea Nn es 1/2. Por tanto, la probabilidad de obtener un individuo blanco del cruce entre III1 y III2 es 2/3 1/2 1/4 1/12.

262

Actividades
PROBLEMAS DE DOS PARES DE GENES
7. En los conejos, el carcter pelaje con manchas (S) es dominante sobre el carcter color uniforme (s), y el color negro (B) es dominante sobre el color pardo (b). Un conejo manchado pardo se cruza con un ejemplar negro uniforme; todos los descendientes son negros manchados. a) Cules son los genotipos de los padres? b) Cul ser el aspecto de la F2 si dos de estos animales se cruzan entre s? Solucin: Un progenitor es S-bb y el otro es ssB-, pero como los descendientes no pueden ser ms que SsBb, el genotipo de los padres es: SSbb y ssBB. b) El aspecto de la F2 ser pues: 9/16 negros manchados, 3/16 negros uniformes, 3/16 pardos manchados y 1/16 pardos uniformes. 8. En Drosophila melanogaster se hace un cruce de una variedad raza pura de alas curvadas hacia arriba (Cy) y quetas en forma de rastrojo (Sb), con moscas normales homocigticas para ambos caracteres (los caracteres normales son recesivos). Los descendientes se vuelven a cruzar con moscas normales. Qu probabilidad hay de que entre sus descendientes, las moscas con quetas en forma de rastrojo adems tengan las alas curvadas? Solucin: Los progenitores sern CyCySbSb y Cy+Cy+Sb+Sb+, por tanto todos los descendientes sern CyCy+SbSb+. Si stos se cruzan con individuos Cy+Cy+Sb+Sb+, las proporciones genotpicas sern: 1/4(CyCy+SbSb+), 1/4(CyCy+Sb+Sb+), 1/4(Cy+Cy+SbSb+), y 1/4(Cy+Cy+Sb+Sb+), y consecuentemente las proporciones fenotpicas sern: 1/4 alas curvadas y quetas en maza, 1/4 alas curvadas y quetas normales, 1/4 alas normales y quetas en maza, y 1/4 alas y quetas normales. Por tanto, la probabilidad de que entre las moscas con quetas en forma de maza, adems posean las alas curvadas es 1/2. 1/4 1 = 1/4 + 1/4 2 Solucin: a) A partir del esquema se deduce que si es un carcter recesivo ligado al sexo, debe ser un gen recesivo ginndrico, es decir situado en el cromosoma X. Los genotipos sern:
X+ Xc Xc Y

X+ Xc

Xc Y

Xc Xc

Xc Y

b) S podra ser un individuo de genotipo X+ Y. c) S podra explicarse mediante una herencia de un gen autosmico. Los genotipos seran:
AaXX aaXY

AaXX

aaXY

aaXX

aaXY

PROBLEMAS DE HERENCIA DEL SEXO Y HERENCIA LIGADA AL SEXO

9. Un determinado carcter recesivo y ligado al sexo se presenta en la familia cuyo pedigr se muestra en la figura adjunta, donde los individuos afectados aparecen en negro. a) Qu genotipos tiene cada uno de los individuos? b) Podra aparecer un hijo varn no afectado? c) Podra explicarse este pedigr por un carcter recesivo autosmico? Cules seran los genotipos? Teora: Para simbolizar los genes que son exclusivos del cromosoma X o del cromosoma Y, se ha de escribir una X o una Y, y como exponente la primera letra en cursiva del nombre del carcter (en mayscula si es dominante y en minscula si es recesivo), o un + para indicar que es el carcter normal, o nada para indicar que ese cromosoma carece de ese gen.
I 1 2

10. El albinismo es un carcter autosmico recesivo y la hemofilia es un carcter recesivo ligado al cromosoma X. Un hombre albino y no hemoflico se casa con una mujer morena cuyo padre era hemoflico y moreno homocigtico, y cuya madre era albina. Determinar los genotipos de los cnyuges, y las frecuencias genotpicas y fenotpicas de los hijos. Teora: En los problemas de herencia ligada al sexo es preferible dar las proporciones genotpicas y fenotpicas de las hijas y de los hijos por separado. Solucin: Representando el alelo albino con a, el alelo moreno normal con A, el alelo hemofilia con Xh, y el alelo no hemofilia con X+, los resultados son: los genotipos de los padres son aaX+Y y AaX+Xh. Las proporciones genotpicas de las hijas sern: 1/4 AaX+X+, 1/4 AaXhX+, 1/4 aaX+X+ y 1/4 aaX+Xh; por tanto, sus proporciones fenotpicas sern: 1/2 de aspecto normal y no hemoflicas y 1/2 de albinas y no hemoflicas. Las proporciones genotpicas de los hijos varones sern: 1/4 AaX+Y, 1/4 AaXhY, 1/4 aaX+Y y 1/4 aaXhY; por tanto, sus proporciones fenotpicas sern: 1/4 de aspecto normal y no hemoflicos, 1/4 de aspecto normal y hemoflicos, 1/4 albinos y no hemoflicos, y 1/4 albinos y hemoflicos. 11. En Drosophila melanogaster el carcter alas vestigiales est determinado por un gen mutante recesivo autosmico (vg). El alelo salvaje (vg+) determina alas normales. El gen que determina ojos de color blanco (w) es recesivo y ligado al sexo. El alelo salvaje (w+) determina ojos rojos. Si se cruza una hembra homocigtica de ojos blancos y alas normales con un macho de ojos rojos y alas vestigiales: a) Cul es el fenotipo de los individuos de la F1? Cules sern las proporciones fenotpicas de los machos de la F2? Solucin: a) Como los progenitores son XwXwvg+vg+ y Xw+Yvgvg, el 100 % de las hembras tendrn los ojos rojos y las alas normales y el 100 % de los machos tendrn los ojos blancos y las alas normales. b) Los 3/8 de los machos tendrn los ojos blancos y las alas normales, 3/8 tendrn los ojos rojos y las alas normales, 1/8 tendrn los ojos blancos y las alas vestigiales, y 1/8 tendrn los ojos rojos y las alas vestigiales.

II 1 2 3 4

263

Actividades
Problemas de herencia autosmica
1. Una determinada enfermedad gentica est determinada por un gen autosmico recesivo. Decir cul de las afirmaciones siguientes es cierta: a) Dos individuos afectados nunca podrn tener hijos normales (no afectados). b) Dos individuos afectados tienen hijos machos afectados e hijas no afectadas. c) Todos los descendientes de un hombre afectado y una mujer normal homocigtica son normales. d) Si un descendiente de una pareja determinada presenta la enfermedad, al menos uno de sus abuelos la presentaba. 2. La acondroplasia es una enfermedad determinada por un gen autosmico que da lugar a un tipo de enanismo en la especie humana. Dos enanos acondroplsicos tienen dos hijos, uno es acondroplsico y el otro es normal. a) La acondroplasis es un carcter dominante o un carcter recesivo? b) Cul es el genotipo de cada uno de los progenitores? c) Cul es la probabilidad de que el prximo descendiente de la pareja sea normal? Y de que sea acondroplsico? Realiza el esquema del cruce. 3. En el ganado vacuno el carcter presencia de cuernos est determinado por un gen autosmico recesivo (p), el alelo dominante (P) determina la ausencia de cuernos. Un toro sin cuernos se cruza con tres vacas. Del cruce con la vaca A, la cual tiene cuernos, se obtiene una ternera con cuernos; del cruce con la vaca B, la cual no tiene cuernos, se obtiene una ternera con cuernos del cruce con la vaca C, la cual tiene cuerno se obtiene una ternera sin cuernos. a) Cules son los genotipos del toro y de las tres vacas? b) Qu proporciones fenotpicas cabe esperar en el cruce con la vaca A? c) Qu proporciones fenotpicas cabe esperar en el cruce con la vaca B? 4. Una mujer del grupo sanguneo A y un hombre del grupo sanguneo B tienen un hijo del grupo sanguneo 0. a) Cules son los genotipos de los tres individuos? b) Cul es la probabilidad de que el siguiente hijo sea del grupo 0? c) Qu probabilidad hay de que dos hijos de la pareja sean machos y del grupo sanguneo AB? 5. En el guisante, el carcter color de la semilla es determinado por un gen autosmico con dos alelos: el alelo A determina color amarillo y es dominante respecto al alelo a, que determina color verde. El carcter forma de la semilla es determinado por un gen autosmico con dos alelos: el alelo B determina semilla lisa y es dominante respecto al alelo b, que determina semilla rugosa. a) Se cruzan dos variedades puras, una de semilla amarilla y otra de semilla verde. En la F2 se obtienen 556 semillas. Cuntas se espera que sean amarillas? b) Se cruzan dos variedades puras, una de semillas amarillas y lisas y la otra de semillas verdes y rugosas. En la F2 se obtienen 3.584 semillas. Cuntas se esperan obtener del fenotipo verdes y rugosas? Cuntas del fenotipo verdes y lisas? c) Las plantas de la F1 anterior se cruzan con la variedad pura de semillas verdes y rugosas. De esta forma se obtienen 852 semillas. Cuntas se esperan obtener del fenotipo amarillas y lisas?

Problemas de herencia del sexo, herencia ligada al sexo y pedigr

6. En las clulas somticas de determinados ortpteros, las hembras poseen dos cromosomas X y los machos un solo cromosoma sexual X. a) De qu sexo ser un individuo que posee en sus clulas somticas 23 cromosomas? b) Cuntos autosomas tendr en sus clulas somticas? c) Y cuntos en las clulas sexuales? d) Existirn individuos con clulas sexuales sin ningn cromosoma sexual? 7. Contestar las siguientes preguntas: a) Es posible que el Sr. Ramon Perez haya heredado el cromosoma X de su abuela materna? Por qu? b) Es posible que el Sr. Ramon Prez haya heredado el cromosoma Y de su abuelo paterno? Por qu? c) Es posible que el Sr. Ramon Prez haya heredado el cromosoma Y de su abuelo materno? Por qu? 8. La aniridia es un tipo de ceguera que es determinada por un alelo dominante autosmico (A) y la hemofilia es determinada por un alelo recesivo ligado al sexo (h). Una mujer normal por lo que respecta a los dos caracteres tiene hijos con un hombre ciego que no padece hemofilia. a) Si tienen un hijo varn hemoflico que no padece aniridia, cul es el genotipo de los padres? b) Si la pareja tiene dos hijas ms, cul es la probabilidad de que las dos sean normales respecto a estos dos caracteres? c) Si la pareja tiene un nuevo hijo varn, cul es la probabilidad de que padezca las dos enfermedades? 9. En Drosophila melanogaster, el carcter ojos blancos est determinado por un gen ligado al sexo. El alelo mutante que determina ojos de color blanco (w) es recesivo respecto al alelo normal (w+), que determina ojos de color rojo. a) Una hembra de ojos blancos se cruza con un macho de ojos rojos. Despus de haberse obtenido la descendencia, se cruza una hembra de la F1 con un macho de

264

Actividades
ojos rojos. Cul ser el color de los ojos de la descendencia de este ltimo cruce? b) Y si se cruzan un macho de la F1 con una hembra de ojos blancos? c) Cul ser el color de los ojos de los individuos de la F2? 10. Un gen recesivo ligado al sexo determina la hemofilia en la especie humana. Una mujer normal, el padre de la cual era hemoflico, tiene hijos con un hombre normal. a) Cul es la probabilidad de que tengan un hijo varn hemoflico? b) Cul es la probabilidad de que tengan una hija hemoflica? c) El daltonismo (ceguera para los colores) tambin es un carcter determinado por un gen recesivo ligado al sexo en la especie humana. En las poblaciones humanas, la frecuencia de daltnicos es mucho ms alta que la de hemoflicos. Por qu? Por qu no acaba desapareciendo el gen de la hemofilia? 11. La fenilcetonuria es una enfermedad hereditaria que produce retraso mental. La enfermedad est producida por un alelo autosmico reducido. La mujer II3 del pedigr adjunto tiene la enfermedad. a) Qu probabilidad hay de que el hombre II2 sea heterocigoto? b) Suponiendo que el individuo II1 es homocigtico, qu probabilidad hay de que el individuo III1 sea heterocigtico? I
1 2

RESULTADOS
1. a) Cierta, b) Falsa, c) Cierta, d) Falsa. 2. a) Dominante, b) Aa Aa, c) 0,25 normal y 0,75 acondroplasia. 3. a) Macho Pp, A pp, B Pp, C pp, b) 1/2 con y 1/2 sin, c) 3/4 sin y 1/4 con. 4. a) IAi, IBi, ii, b) 0,25, c) 1/64 5. a) 3/4 556 b) 3.584 1/16 verdes rugosas, 3.584 3/16 verdes lisas, c) 852 1/4 amarillas lisas. 6. a) ((, b) 22, c) 11, y d) S. 7. a) S, debido a que el varn recibe el cromosoma X de la madre, y ste puede no haber experimentado la recombinacin. b) S, dado que el cromosoma Y pasa del padre al hijo varn. c) No, ya que las mujeres no tienen cromosoma Y. 8. a) aaXhX AaXY, b) 0,25. c) 0,25. 9. a) Las hembras sern 100% de ojos rojos, y los machos sern 50% de ojos blancos y 50% de ojos rojos. b) Ser 100% de ojos blancos dado que ninguno de los progenitores tiene el gen ojos rojos. c) Las hembras sern la mitad de ojos blancos y la mitad de ojos rojos, los machos sern tambin la mitad de ojos blancos y la otra mitad de ojos rojos. 10. a) 0,25, b) 0, c) Porque a diferencia del daltonismo, la hemofilia sin tratamiento adecuado puede comportar fcilmente la muerte del individuo, con lo que disminuye la frecuencia del gen para la hemofilia en la poblacin. Su no desaparicin total se debe a que vuelve a aparecer debido a la mutacin recurrente del gen normal a gen hemoflico, ya que como es un gen recesivo se transmite de heterocigoto a heterocigoto sin que la seleccin lo elimine rpidamente. 11. a) 2/3 b) (2/3) (1/2) 1/3 12. a) Todos amarillos. b) Tanto los machos como las hembras sern la mitatd amarillos y la mitad de color comn. c) Todos los machos amarillos y todas las hembras de color comn. d) Todos de color comn. e) La mitad de los machos amarillos, la otra mitad de color comn y todas las hembras normales. 13. En la F1 todos los machos presentarn ojos comunes y todas las hembras presentarn ojos de ranura. En la F2 tanto los machos como las hembras presentarn la mitad de los individuos con los ojos comunes y la otra mitad con los ojos en ranura.

II
1 2 3 4 5

III
1 2

12. En la mosca Drosophila, el color amarillo del cuerpo est informado por un gen recesivo y ligado al sexo. Qu proporciones fenotpicas se pueden esperar en los siguientes cruzamientos: a) macho amarillo y hembra amarilla; b) hembra de color comn y portadora, y macho amarillo; c) macho comn y hembra amarilla; d) hembra comn homocigtica y macho amarillo; y e) hembra comn portadora y macho comn? 13. En la mosca Drosophila, una forma del ojo denominada ojos en ranura (ojos alargados y estrechos) est informada por un gen dominante y ligado al sexo. Qu proporciones fenotpicas se pueden esperar en la F1 y en la F2 del cruce entre un macho de ojos en ranura y una hembra de ojos comunes?

265

16
N D I C E
INFORMACIN 1 El ADN, portador del mensaje gentico 2 La composicin qumica de los cidos nucleicos 3 El cido desoxirribonucleico
Conceptos generales. Niveles estructurales y de empaquetamiento La estructura primaria del ADN. La estructura secundaria del ADN El ADN superenrrollado El empaquetamiento del ADN circular Tipos de ADN segn la estructura, la forma y el empaquetamiento

El ADN, portador del mensaje gentico

4 La duplicacin del ADN. Necesidad y explicacin

La necesidad de la duplicacin del ADN Las primeras hiptesis sobre la duplicacin del ADN El experimento de Meselson y Stahl

5 El sentido de crecimiento de los nuevos filamentos

La sntesis de ADN in vitro. El problema de la direccin en la duplicacin del ADN in vivo

Esquema infogrfico de la doble hlice del ADN

6 El mecanismo de la duplicacin del ADN ACTIVIDADES LABORATORIO

Extraccin de ADN y observacin con el microscopio

Durante muchos aos se dud de si la informacin gentica radicaba en las protenas (polmeros de 20 tipos de aminocidos) o en los cidos nucleicos (polmeros de 4 tipos de nucletidos). Ambos estaban constituidos por una cadena de pequeas molculas, cuya secuencia poda contener dicha informacin, al igual que la secuencia de letras de este texto lleva esta informacin. Razona por qu ambos tipos de biomolculas son adecuados para esta funcin, y por qu otras molculas, como el almidn o la celulosa, ambos polmeros de glucosas, no podran cumplir la funcin de almacenar informacin.

266

1 El ADN, portador del mensaje gentico

Una vez aceptado que los genes se encontraban en los cromosomas, se inici la bsqueda de la naturaleza qumica de los mismos. El anlisis qumico de los cromosomas dio dos tipos de componentes, las protenas y el cido desoxirribonucleico (ADN). Tuvieron que pasar 36 aos hasta que se acept que los genes no estaban constituidos por protenas sino por cidos nucleicos. Los experimentos de Avery, MacLeod y McCarthy con Streptococcus pneumoniae en 1944 y los de Hershey y Chase con el virus bacterifago T2 en 1952, aportaron las evidencias necesarias. El hecho de que estas demostraciones se consiguieran gracias al uso de bacterias y virus, en vez de organismos superiores, se debe a que en ellos el ADN no se encuentra fuertemente asociado a protenas, como sucede en los cromosomas de las clulas eucariotas. No exista, pues, la duda de si la sustancia qumica que haba provocado un carcter era el ADN o la protena a l asociada. La primera prueba la aportaron Avery, MacLeod y McCarthy al investigar las transformaciones bacterianas que haban sido observadas por Griffith en 1928. Este microbilogo haba trabajado con la bacteria que provoca la neumona en los humanos, el pneumococo Streptococcus pneumoniae, y que generalmente resulta letal para los ratones. Haba observado que existan dos cepas distintas, unas virulentas, que provocan la muerte, provistas de una cpsula de polisacridos que da a sus colonias un aspecto liso (fig. 10), por lo que las denomino cepas S (smooth es liso en ingls), y otras aparecidas por mutaciones de las anteriores, que son inofensivas, y que carecen de esa cpsula de polisacridos, motivo por el cual sus colonias no tienen aspecto liso sino rugoso, a las que denomin cepa R (rough es rugoso en ingls). La cpsula de polisacridos forma una capa mucosa que protege a las bacterias de los fagocitos.

10 Colonias de Streptococcus pneumoniae. Las colonias grandes y lisas son de la cepa S y las pequeas y rugosas son de la cepa R.

11 Experimentos de Griffith sobre la transformacin de bacterias R en S. a b

R

El ratn muere El ratn sobrevive

d c
Muerta por calor S Muerta por calor El ratn sobrevive S

El ratn muere

267

Al parecer, las mutantes de la cepa R carecen de alguna enzima necesaria para sintetizar dicha cpsula, por lo que son fagocitadas. Griffith inocul a los ratones bacterias S muertas por ebullicin y observ que stos sobrevivan, con lo que demostr que las cpsulas no eran las que provocaban la enfermedad. Al infectar un ratn con una mezcla de bacterias S (virulentas) muertas y de bacterias R (no virulentas) vivas, el ratn inexplicablemente enfermaba y mora. Adems, en su organismo podan aislarse bacterias S vivas. Algo haba en los cadveres de las bacterias S que haba provocado la transformacin de las R en S (fig. 11). Avery, MacLeod y McCarthy demostraron experimentalmente que slo los extractos de bacterias S muertas que contenan ADN eran capaces de producir dicha transformacin; luego el ADN era la molcula portadora de la informacin biolgica, la que suministraba la informacin de cmo se sintetizaba la cpsula de polisacridos, que hace a estas bacterias resistentes a los fagocitos. A pesar de la evidencia de este experimento, el mundo cientfico se resisti a aceptar que el ADN era el portador de la informacin biolgica. Muchos consideraron que se trataba de una peculiaridad de las bacterias. No se entenda cmo una molcula constituida por slo cuatro tipos de nucletidos poda ser la que contena la informacin biolgica, en vez de las molculas proteicas que estn constituidas por 20 tipos de aminocidos. Fue necesario el experimento de A. Hershey y de M. Chase en 1952, ocho aos despus, para confirmar estas conclusiones. Estos autores trabajaron con un virus de ADN que infectaba a las bacterias, el bacterifago T2. A partir de un cultivo con el istopo radiactivo S35 como fuente de azufre, consiguieron virus que tenan este istopo en los aminocidos (cistena y metionina) de su cpsida proteica, y a partir de otro cultivo con el istopo radiactivo P32 consiguieron obtener virus que tenan este istopo en su ADN. Posteriormente infectaron con estos virus un cultivo de la bacteria Escherichia coli. Tras dejar tiempo suficiente para que los virus infectaran a las bacterias, agitaron el cultivo, mediante una batidora domstica, para separar las cpsidas vacas de los virus infectantes (llamadas fantasmas), y finalmente las retiraron mediante centrifugacin. A partir del primer cultivo observaron que la radiactividad debida al S35 quedaba en las cpsidas vacas, mientras que con el segundo cultivo constataron que el ADN radiactivo apareca en el interior de las bacterias y, al cabo de un tiempo, en el interior de los nuevos virus descendientes. As pues se demostr que era el ADN, y no las protenas, la molcula que pasa de una generacin a otra y, por lo tanto, la que debe contener la informacin de cmo han de ser los organismos (fig. 12).
268

Cpsulas radiactivas

S35

S35

batidora

S35

Fago T2

Virus infectando la bacteria

Bacterias infectadas con ADN vrico sin radiactividad

P32

P32

batidora

P32

Fago T2

Virus infectando la bacteria

Bacterias infectadas con ADN vrico radiactivo

12 El experimento de Hershey y Chase.

CUESTIONARIO 1 Aceptado que el ADN es la molcula que lleva la informacin sobre los caracteres biolgicos, comenta el siguiente esquema sobre la transformacin de las bacterias de la cepa R en bacterias de la cepa S.
Pared celular

Cromosoma bacteriano

CUESTIONARIO 2
1. De qu tipo de molculas est constituido el virus T2? 2. Por qu se eligieron istopos radiactivos de S y de P, y no de C, N, O, o H, para hacer esta experiencia? 3. Qu funcin realiza la cpsida y cul el ADN en el bacterifago T2? 4. Por qu este experimento demuestra que las protenas no aportan informacin gentica a los descendientes?

2 La composicin qumica de los cidos nucleicos

1. Los componentes de los cidos nucleicos
En 1869 se descubri que en el ncleo de las clulas, adems de las protenas, haba una sustancia diferente rica en fsforo a la que se denomin nuclena. Veinte aos despus se observ que tena carcter cido, por lo que pas a denominarse cido nucleico. Posteriormente, mediante hidrlisis, se encontr que contena cuatro tipos de molculas, de carcter bsico y ricas en nitrgeno, las llamadas, por ello, bases nitrogenadas. stas recibieron el nombre de adenina, guanina, citosina y timina. La adenina y la guanina tienen una estructura formada por dos ciclos similar a la purina: son las llamadas bases pricas. La citosina y la timina tienen una estructura formada por un solo ciclo similar a la pirimidina: son las llamadas bases pirimidnicas. En 1911 se descubri que entre los componentes de los cidos nucleicos haba un glcido de cinco tomos de carbono. Esto result sorprendente, ya que los glcidos ms abundantes en los organismos eran los de seis tomos de carbono, o sus derivados. Se observ que haba dos tipos diferentes de estas pentosas, y que nunca se encontraban juntos, es decir, o haba uno o haba el otro. Basndose en esto se distinguieron dos tipos de cidos nucleicos. Uno de los glcidos recibi el nombre de ribosa, en relacin al Rockefeller Institut Biochemistry y a la terminacin -osa propia de los glcidos. El otro, que careca de un grupo hidroxilo (-OH) en el segundo carbono, se denomin desoxirribosa. Los dos cidos nucleicos se denominaron respectivamente cido ribonucleico (ARN) y cido desoxirribonucleico (ADN). Otra diferencia entre ambos era que el ARN nunca presentaba timina sino que, en su lugar, haba otra base pirimidnica a la que se denomin uracilo (fig. 13). En 1934 se demostr que los cidos nucleicos se podan escindir en unas unidades constituidas, cada una de ellas, por un cido fosfrico (H3PO4) unido a una ribosa o a una desoxirribosa, y sta a una base nitrogenada. Cada una de estas unidades se denomin nucletido. Si faltaba el grupo fosfato reciban el nombre de nuclesido. As pues, al igual que las protenas son polmeros de aminocidos, los cidos nucleicos se podan definir como polmeros de nucletidos. A mediados de los aos cincuenta se acabaron de conocer, con detalle, los enlaces qumicos internos de los nucletidos, y el tipo de enlace que unan stos entre s, para constituir los cidos nucleicos.

PENTOSAS Y BASES NITROGENADAS

HOCH2 O H H OH OH H H OH Ribosa (ARN) H OH H HOCH2 H O H H OH Desoxirribosa (ADN)

Pentosas

NH2 C

Bases nitrogenadas pricas

N HC N

C C

N CH N H

O C HN H2N C N C C

N CH N H

Adenina (ADN y ARN) O C HN CH CH N H Uracilo (ARN) O N C N H Citosina (ADN y ARN) NH2 C

Guanina (ADN y ARN) O C CH CH O HN C N H Timina (ADN) C CH CH3

Bases nitrogenadas pirimidnicas

13 Pentosas y bases nitrogenadas.

269

NUCLESIDO NH2
Citosina

NH2 N O HOCH2 H H OH H O H H Desoxicitidina (1 - - desoxirribofuranosil - citosina) N

N3
2

4 1

5 6

H2O

O
5'

+
H
2'

N H OH
1'

HOCH2
4'

O H
3'

H
Desoxirribosa

OH

H NUCLETIDO NH2 N N O H2O OH H O P O

5'

NH2 N
7 5 6 1N 2

OH HO P OH
cido fosfrico

O O H
3'

8 9

4 3

+
HO CH2 H H

N O H H OH OH

N
Adenina

CH2

4'

H
2'

1'

OH

OH

Adenosina (nuclesido)

Adenosn - 5' - monofosfato (AMP)

14 Reacciones de formacin de nuclesidos y nucletidos. En estas molculas los carbonos de las pentosas se numeran como 1', 2', 3', 4' y 5', para diferenciarlos de los carbonos de las bases.

I Los nuclesidos
Los nuclesidos se forman mediante la unin de una ribosa o de una desoxirribosa, con una base nitrogenada, mediante un enlace N-glucosdico entre el carbono 1' de la pentosa y el nitrgeno 1' de la base nitrogenada, si sta es pirimidnica, o el nitrgeno 9 si es una base prica (fig. 14). Los nuclesidos se nombran aadiendo la terminacin -osina al nombre de la base prica, o la terminacin -idina para el caso de las bases pirimidnicas. Por ello los nombres de los nuclesidos con ribosa son: adenosina, guanosina, citidina, y uridina. Si la pentosa es la desoxirribosa se antepone el prefijo desoxi-. As los nombres de estos nuclesidos son: desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxicitidina y desoxitimidina.

no 5') de la pentosa. Se trata, pues, de un ster fosfrico del nuclesido. Los nucletidos tienen, por tanto, un fuerte carcter cido debido al grupo fosfato, que se ioniza (fig. 14). Los nucletidos se nombran quitando la a final del nombre del nuclesido y aadiendo el trmino 5' -monofosfato. As pues los nucletidos de ARN son el adenosn -5' -monofosfato (AMP), el guanosn -5' -monofosfato (GMP), el citidn -5' -monofosfato (CMP) y el uridn -5' -monofosfato (UMP), y los nucletidos de ADN son el desoxiadenosn -5' -monofosfato (dAMP), el desoxiguanosn -5' -monofosfato (dGMP), el desoxicitidn -5' -monofosfato (dCMP) y el desoxitimidn -5' -monofosfato (dTMP). En la prctica se suele emplear simplemente la inicial de cada base nitrogenada (A, G, C, T y U) para referirse a cada tipo de nucletido.

I Los nucletidos
Los nucletidos se forman mediante la unin de una molcula de cido fosfrico y un nuclesido, a travs del grupo hidroxilo del quinto carbono (carbo270

I Los cidos nucleicos

Los cidos nucleicos son polinucletidos. Los nucletidos se unen entre s a travs del radical fosfato situado en el carbono 5' de un nucletido, y del radical

NH2 OH HO P O
5'

NH2 OH N H O P O CH2 H O H H O OH O O N N N N

ESQUEMA

N O N O H H H OH N
Adenosn - 5' - fosfato

P
O

CH2
3'

H H2O N H O O
Uridn - 5' - fosfato

OH OH HO P O
5'

+
O

OH P O O O H H O OH NH2 OH N N O O

CH2 H
3'

O H

CH2 H H

H OH

OH OH HO P O
5'

+
O

NH2 N N O

H2O

H O
Enlace fosfodister 5' 5 3'

P
P O CH2 H H O H H OH OH OH O N N O O

CH2 H
3'

O H

Citidn - 5' - fosfato

H OH

OH

Fragmento de cido nucleico

15 Formacin de un fragmento de ARN constituido por tres nucletidos unidos en la secuencia A-U-C. ( A adenina, U uracilo, C citosina.)

hidroxilo (-OH) del carbono 3' del otro nucletido. La unin se realiza, pues, mediante enlaces fosfodister (fig. 15).

Segn el tipo de pentosa que poseen, se distinguen dos tipos de cidos nucleicos: el cido desoxirribonucleico y el cido ribonucleico.

CUESTIONARIO 3
1 H C N1 HC
2 3 6 5 4

2 N C C
7 8 9

3 OH O HCH 5' 4' C H H 3' 2' H C C OH H OH C 1' H

CH

OH HO P O OH

N H

1. En la figura aparece la frmula de la purina. A partir de ella dibuja la frmula de la adenina que es la 6 aminopurina.

2. En la figura aparece la pentosa. A partir de ella dibuja el nuclesido e indica cul es su nombre y el tipo de enlace que une la pentosa con la adenina anterior.

3. En la figura aparece la estructura del cido fosfrico. A partir de ella dibuja el nucletido e indica cul es su nombre y el tipo de enlace que une este cido con la pentosa.

271

3 El cido desoxirribonucleico
1. Conceptos generales. Niveles estructurales y de empaquetamiento
El cido desoxirribonucleico o ADN est formado por una cadena de nucletidos de adenina, guanina, citosina y timina, unidos entre s mediante enlaces fosfodister formados en sentido 5' 3', es decir, formados entre el carbono 3' del ltimo nucletido de la cadena y el carbono 5' del nuevo nucletido que se aade a ella. El peso molecular de estos polmeros es muy elevado: en el caso del hombre, es de 3,6 1012, que equivale a 5,6 109 pares de nucletidos. En las clulas eucariotas, el ADN se encuentra principalmente en el ncleo, pero tambin en las mitocondrias y en los cloroplastos. El ADN nuclear est asociado a protenas, las llamadas nucleoprotenas. stas, bsicamente, son histonas. Tambin hay una pequea cantidad de un grupo heterogneo de protenas, llamadas protenas no histnicas. El ADN de las mitocondrias y de los cloroplastos es similar al de las clulas procariotas. Durante mucho tiempo se crey que el ADN procariota no estaba asociado a protenas (ADN desnudo) y que estaba disperso en el citoplasma. En la actualidad, se ha observado que est asociado a protenas semejantes a las histonas, a ARN y a protenas no histnicas, formando una condensacin llamada nucleoide, que, a diferencia del ncleo, carece de envoltura. Tambin en los virus se han observado protenas bsicas asociadas al ADN. En el ADN se distinguen tres niveles estructurales: la estructura primaria o secuencia de nucletidos, la estructura secundaria o doble hlice y la estructura terciaria o ADN superenrollado: torsin de la doble hlice sobre s misma (fig. 20). Adems, para conseguir que el ADN quepa dentro del ncleo, se encuentra muy empaquetado, y an ms cuando se condensa para formar un cromosoma. Se distinguen varios niveles de empaquetamiento, que se estudiarn en el captulo 14, dedicado al ncleo celular. El nmero de hebras diferentes de ADN que se puede formar combinando las cuatro bases nitrogenadas -adenina, guanina, citosina y timina-, incluso fijando su nmero, es muy elevado. Por ejemplo, si el ADN humano tiene 5,6 109 pares de nucletidos, pueden existir 45.600.000.000 ADN diferentes. Si se consideran estas innumerables combinaciones posibles, se puede comprender cmo a travs de la secuencia de bases nitrogenadas es posible estructurar una determinada informacin, el llamado mensaje biolgico o informacin gentica. De la misma manera como con veintisis letras, tomadas unas veces individualmente y otras en grupos de dos, tres, cuatro, etc. (las palabras), y combinndolas convenientemente, se estructura la informacin intelectual o lenguaje. Los anlisis qumicos han demostrado que el porcentaje de guanina, citosina, adenina y timina es el mismo para todos los individuos de una misma especie. Este hecho se debe a que las caractersticas son muy similares dentro de la especie.
Extremo 5'

A P
O
Adenina

G
Guanina

P
O

P
O

T
Timina

2. Estructura primaria del ADN (secuencia de nucletidos)

La estructura primaria del ADN es la secuencia de nucletidos de una sola cadena o hebra, que puede presentarse como un simple filamento extendido o bien algo doblada en s misma. Se pueden distinguir en ella un esqueleto de fosfopolidesoxirribosas y una secuencia de bases nitrogenadas (fig. 16).
272

P
O

C
Citosina

H Extremo 3'

16 Esquema de la estructura primaria del ADN.

3. Estructura secundaria del ADN (doble hlice)

La estructura secundaria del ADN es la disposicin en el espacio de dos hebras o cadenas de polinucletidos en doble hlice, con las bases nitrogenadas enfrentadas y unidas mediante puentes de hidrgeno. Esta estructura se dedujo a partir de los siguientes datos experimentales: La densidad y viscosidad de las dispersiones acuosas del ADN eran superiores a las esperadas, es decir, de las que se haban calculado a partir de su composicin qumica y su peso molecular. Se supuso que deban agruparse entre ellas a travs de puentes de hidrgeno entre los grupos NH2, CO , y NH. Al realizar anlisis qumicos de la frecuencia de aparicin de nucletidos, Chargaff observ en 1950 que todos los ADN tenan tantas molculas de adenina (A) como de timina (T), y tantas de citosina (C) como de guanina (G). Es decir, que se cumplan las igualdades siguientes:

n molculas de adenina 1 n molculas de timina n molculas de citosina 1 n molculas de guanina Esto implicaba que los puentes de hidrgeno se establecan entre A y T y, por otro lado, entre C y G. Dadas las caractersticas de estas molculas, entre A y su base complementaria T deben establecerse dos puentes de hidrgeno, y entre C y su base complementaria G, tres puentes de hidrgeno (fig. 17). Por ltimo, los estudios mediante difraccin de rayos X aportaron nuevos datos sobre la estructura del ADN. La tcnica de difraccin de rayos X se basa en la desviacin que sufren stos cuando inciden sobre los tomos de una molcula. Los rayos X impresionan una placa fotogrfica, dando lugar a un dibujo de puntos en el que se puede medir la desviacin de los rayos y deducir las distancias entre los tomos de la molcula que se estudia.

17 Disposicin de los puentes de hidrgeno entre bases complementarias en una doble cadena de ADN.
Extremo 5'
Puentes de hidrgeno

Extremo 3'

HO

P O CH2

H N O H O HN HN N H H H3C O H H H O H O
11,90

H N N H H O

O H H CH2 O O H P OH O H H O O H H CH
2

C
H H N

N O
2,90

H H O HO P O CH2 O

H H

T
N

N O

HO

P O CH2

O H

O H H H N O H N

O N

H H O H3C H

N N H H

Extremo 3'

Extremo 5'

CH2

G
N N N H N

O OH

O OH

273

A partir de los estudios del ADN mediante la difraccin de los rayos X, Franklin y Wilkins observaron entre 1950 y 1953 que el cido desoxirribonucleico tena una estructura fibrilar de 20 de dimetro, en la que se repetan ciertas unidades cada 3,4 , y que haba otra repeticin mayor cada 34 (figura 19). Basndose en los datos anteriores, J. Watson y F. Crick elaboraron, en 1953, el modelo de la doble hlice. El ADN, segn dicho modelo, estara formado por dos cadenas de polinucletidos que seran

antiparalelas, es decir, tendran los enlaces 5' 3' orientados en diferente sentido, complementarias y enrolladas una sobre la otra en forma plectonmica o de doble hlice (fig. 20). Que las cadenas que componen la doble hlice del ADN sean complementarias no quiere decir que sean iguales, sino que, si en una hay timina, en la otra, al mismo nivel, hay adenina. Por lo tanto, la secuencia de cada cadena es diferente. El enrollamiento plectonmico de las cadenas implica que, para separar las dos hebras, hay que girar una respecto a la otra.

ocumento 1

Modelos de doble hlice del ADN

En la actualidad se conocen tres tipos de estructura en doble hlice del ADN: las formas B, A y Z (fig. 18). La forma B fue la descrita por Watson y Crick. Es una hlice dextrgira con las bases complementarias situadas en planos horizontales, de manera que el eje de la molcula atraviesa dichos planos por su centro. La forma B es la forma ms corriente en el ADN en dispersin. La forma A tambin es dextrgira, pero las bases complementarias se encuentran en planos inclinados y une el eje de la molcula que atraviesa dichos planos por puntos desplazados del centro. Esta forma aparece cuando se deseca la forma A. No se ha encontrado en condiciones fisiolgicas. La forma Z es levgira, y tiene un enrollamiento irregular que provoca una configuracin en zigzag, a la que hace referencia su nombre. Esta estructura aparece en regiones del ADN donde se alternan muchas citosinas y guaninas. Se piensa que la forma Z constituye seales para las protenas reguladoras de la expresin del mensaje gentico.

Enrollamiento Enrollamiento dextrgiro levgiro (al girar a la derecha, (al girar a la izquierda, se avanza) se retrocede) ADN. Forma A

ADN. Forma B

ADN. Forma Z

18 Enrollamiento dextrgiro y levgiro, y formas B, A y Z del ADN.

274

Dimetro del ADN (20 )

5 7

Carbono 5'

Longitud de una vuelta de hlice (34,0 )

Distancia entre un par de bases (3,4 )

7 8

19 Difraccin de rayos X de ADN extrado del timo de ternera.

En la estructura secundaria del ADN, al igual que en las protenas, los grupos hidrfobos CH3 y CH de las bases se disponen hacia el interior de la molcula, establecindose interacciones hidrofbicas entre grupos lipfilos, que colaboran con los puentes de hidrgeno en dar estabilidad a la macromolcula. Las pentosas y los grupos fosfato quedan en el exterior. Debido a la ionizacin de estos ltimos, los cidos nucleicos tienen carcter cido y se definen como polianiones.

CUESTIONARIO 4
1. Dibuja el trinucletido dAMP-dTMP-dCMP y seala todos los enlaces de tipo ster que hay. Para facilitar el dibujo simboliza las bases nitrogenadas con las letras A, T y C. 2. Dibuja de la misma forma la hebra complementaria. Recuerda que son antiparalelas. Seala en el dibujo anterior si hay dos o tres enlaces entre las bases nitrogenadas y de qu tipo son. 3. En un ADN bicatenario se ha hallado que en el total de bases nitrogenadas hay un 23 % de A. Cules son los porcentajes de las dems bases? 4. Cul es la secuencia de ADN complementaria de 5' ... T A C C T C A C T ... 3?' 5. En un cido nucleico se ha encontrado el siguiente porcentaje de bases nitrogenadas: A (22 %), G (19 %), C (26 %) y U (33 %). Se trata de ADN o de ARN? Es de una sola hebra o de doble hebra? 6. Cuntas molculas de ADN hay en una clula somtIca humana? Y en un espermatozoide? 7. Qu es la desnaturalizacin del ADN? A qu temperatura aproximada se produce este fenmeno? 8. Qu es la renaturalizacin del ADN? A qu temperatura aproximada se produce?

Carbono 5' Carbono 3'

Carbono 3'

Azcar Fosfato

3,4

3,4
8

Bases

10

20 Estructura secundaria del ADN: la doble hlice o fibra de ADN de 20 .

La doble hlice de ADN en estado natural es muy estable; pero, si se calienta una dispersin de fibras de ADN, cuando la temperatura llega aproximadamente a 100 C, las dos hebras de la doble hlice se separan, es decir, se produce la desnaturalizacin del ADN. Si posteriormente se mantiene el ADN desnaturalizado a 65 C, las dos hebras vuelven a unirse. Esta restauracin de la doble hlice es lo que se llama renaturalizacin y es lo que permite la hibridacin si se parte de hebras de distintos ADN.

275

4. El ADN superenrollado. El empaquetamiento del ADN circular

Las molculas de ADN circular, como el ADN bacteriano o el ADN mitocondrial, presentan una estructura terciaria, que consiste en que la fibra de 20 se halla retorcida sobre s misma formando una especie de superhlice. Esta disposicin se denomina ADN superenrollado (fig. 21). En gran parte se debe a la accin de unas enzimas denominadas ADN-topoisomerasas II. Los superenrollamientos de ADN proporcionan dos ventajas: por un lado consiguen reducir la longitud del ADN, y, por lo tanto, dan estabilidad a la molcula, y, por otro, facilitan el proceso de la duplicacin del ADN. Ello se debe a que el sentido de las vueltas en la superhlice del ADN superenrollado natural son hacia la derecha, justo el sentido contrario al que provocan las enzimas que desespiralizan el ADN para iniciar su duplicacin. Por ello durante este proceso, en lugar de ir aumentando el nmero de vueltas hacia la izquierda, que creara tensiones capaces de detener la duplicacin, lo que sucede es que se van anulando vueltas hacia la derecha, relajndose as la molcula.

Segn su estructura, el ADN puede ser de una sola hebra o monocatenario, y de dos hebras o bicatenario. El ADN monocatenario es muy raro. Se ha encontrado de forma lineal en los parvovirus y de forma circular en el virus X174 (fig. 21). El ADN bicatenario puede ser circular, como sucede en las bacterias, en las mitocondrias, en los cloroplastos y en algunos virus como el SV40 y el virus del polioma. Tambin puede ser lineal, como el ADN del ncleo de las clulas eucariotas y de algunos virus como el bacterifago T4 y el virus del herpes. Adems el ADN bicatenario puede presentar superenrollamiento (fig. 21). Segn el tipo de molculas que sirven de soporte para empaquetar el ADN y as reducir su longitud, se distingue el ADN del ncleo eucariota, asociado a histonas o a protaminas (en el caso exclusivo de los espermatozoides). En los procariotas, el ADN se encuentra asociado a protenas semejantes a las histonas, a ARN y a protenas no histnicas. En los virus tambin se han observado asociaciones con protenas bsicas propias o con histonas de la clula parasitada. En cuanto a su longitud, el ADN mide 1,7 en el virus del polioma; 1,36 mm en Escherichia coli; 11,2 cm en cada clula de Drosophila; 0,57 m en el erizo de mar; 0,93 m en el gallo; 1,89 m en el perro, 2,36 m en el hombre (sumando el ADN de los 46 cromosomas), etc. Curiosamente, la longitud del ADN no siempre guarda relacin con la complejidad del organismo. Al parecer, muchas especies tienen mucho ms ADN que el necesario para codificar su estructura y fisiologa. Esto ha dado lugar a numerosas hiptesis sobre las funciones de ese ADN supernumerario.

5. Tipos de ADN segn su estructura, su forma y su empaquetamiento

Las molculas de ADN se pueden clasificar segn su estructura (monocatenario o bicatenario), segn su forma (lineal o circular) y segn la forma de empaquetarse (asociado a histonas o no asociado a histonas).

ADN monocatenario lineal (parvovirus)

ADN monocatenario circular (virus X174)

ADN bicatenario lineal virus T2

Bacterias

E. coli levadura Hongos Plantas Drosophila Insectos Moluscos tiburn Peces cartilaginosos Peces seos Anfibios sapo tritn juda lino

ADN bicatenario circular (bacterias)

ADN bicatenario circular superenrollado (bacterias)

Reptiles Aves Mamferos hombre

Dmeros concatenados (mitocondrias)

105

106

107

108

109

1010

1011

21 Tipos de ADN desnudo.

22 Nmero de pares de nucletidos por dotacin haploide en diversos grupos de seres vivos.

276

Actividades
Modelos de nucletidos en papel
1. Fotocopia esta pgina y recorta las ilustraciones. 2. Construye cuatro nucletidos. Procura que la base nitrogenada quede perpendicular a la desoxirribosa. Utiliza lpiz adhesivo para hacer los enlaces. 3. Une el nucletido de C con el de T en direccin 5'3'. Haz lo mismo con el de A y el de G. 4. Une ambas hebras teniendo en cuenta la complementariedad de las bases. 5. Une varias estructuras como la anterior y alarga as las hebras, para formar un segmento de ADN. Intenta que la doble hebra presente una vuelta cada 10 pares de bases.

O O

O O

O O

P O

P O

P O

P O

NH2

H3C

C
Doblar

N
Doblar

T
N

NH O

N O

...H2N

N CH

.........O ......HN

N CH

.........N

A
N

Doblar

G
N

Doblar

...H2N

3'

3'

CH2 O

CH2 O

O CH2

O CH2
3' 3'

277

Actividades
Construccin de un modelo de ADN (forma B)
Material necesario Fotocopia en papel acetato de esta pgina. Alfileres entomolgicos. Cinta adhesiva. 1. Realiza una fotocopia sobre acetato de esta hoja. Recorta la figura en la fotocopia. Pega la pestaa con cinta adhesiva, formando un cilindro. 2. Atraviesa con un alfiler entomolgico las bases nitrogenadas que tengan el mismo nmero, procurando que los alfileres queden en planos paralelos. Se obtiene as un modelo sencillo de la doble hlice de ADN.
1 2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 10 11 12 13 11 12 6 4 5 3 1

7 8 9

Dimetro 20

13 14 15

14 15 16 16 17 18 17

3,4

34
18 19 19 20 21 22 23 20 21 22

23 24

24 25 26 27 28 29 30 30 31 29

25 26 27 28

278

LABORATORIO

Extraccin de ADN y observacin al microscopio

Material
20 g de gnada de mejillones o de timo o, en su defecto, de hgado de ternera o de pollo. Un cuchillo o una tijera. 1 homogeneizador (batidora de cocina o, en su defecto, un mortero de laboratorio con arena lavada). 1 embudo. Varias gasas cuadrangulares (10 10 cm). 1 probeta de 200 cm3. 1 vaso de precipitados de 250 cm3. 1 varilla de vidrio. 1 microscopio. Portaobjetos y cubreobjetos. SDS (dodecil sulfato sdico) o, en su defecto, detergente lquido comercial. NaCl 2M. Metanol o alcohol etlico de 96. Orcena actica (1%) o hematoxilina.

Protocolo
1. Durante los meses de enero y febrero el material ms recomendable es el mejilln. Durante esos meses, la gnada es muy voluminosa e invade el manto, por lo que separando las masas que quedan adheridas a las conchas al abrirlo, se pueden obtener fcilmente unos 10 g de gnadas. Se deben utilizar los individuos de color rosado, que son las hembras, y no los de color blanquecino, que son los machos, ya que el ADN del ncleo de los espermatozoides est muy fuertemente unido a las protaminas, por lo que es ms difcil de separar. En su defecto pueden utilizarse unos 20 g de timo de ternera, el cual puede conseguirse en los mataderos, o en muchas carniceras si se pide con antelacin. Las clulas del timo son muy apropiadas porque el ncleo ocupa ms de la mitad de la clula. 2. Cortar el material elegido, mediante una tijera, en trocitos pequeos, introducirlos en la batidora o, en su defecto, en un mortero de laboratorio que contenga arena lavada, aadir 100 cm3 de agua y triturar el material hasta que quede una masa homognea y semilquida. 3. Esperar unos minutos a que sedimenten las partculas ms grandes y luego filtrar el sobrenadante a travs de una o dos gasas juntas. Recogerlo en el vaso de precipitados. Repetir el filtrado hasta que el sobrenadante no contenga partculas slidas (fibras conjuntivas, clulas musculares, vasos sanguneos, etc.) 4. Aadir a la probeta un volumen igual de NaCl 2M con el fin de producir un medio hipertnico que provoque la ruptura de las envolturas nucleares. Su contenido quedar liberado en el medio.

5. Aadir SDS, dodecil sulfato sdico (CH3 (CH2)11 OSO3Na), al 10 %, hasta que el conjunto alcance un 2 % en SDS. Se debe hacer un tanteo para deducir cul es la proporcin ms adecuada. Agitar la mezcla suavemente con una varilla de vidrio, y dejar reposar cinco minutos. El detergente provoca la separacin entre el ADN y las protenas. Anotar lo que sucede. 6. Aadir lentamente resbalando por las paredes del vaso, mediante una pipeta, 60 cm3 de metanol o de alcohol etlico de 96 fro, de manera que se formen dos capas. Introducir con cuidado una varilla de vidrio, y hacerla rotar suavemente y en la misma direccin. Se podr observar la formacin de unos filamentos blancos de ADN en la interfase, que se van enganchando y enrollando a la varilla. 7. Con la misma varilla depositar algunos de estos filamentos sobre un portaobjetos, aadir unas gotas de orcena actica o de hematoxilina, y dejar que se tian durante unos cinco a diez minutos. A continuacin, lavar la preparacin con agua destilada, cuidando de no arrastrar las fibras de ADN, secar los bordes, aadir una gota de glicerina, poner un cubre y observar al microscopio. 8. Las fibras de ADN presentan una coloracin morada, mientras que el resto del material es de color marrn.

279

17

La duplicacin del ADN

AT CG CG

GC CG TA TA

CG

TA

AT TA AT CG C TA G C A T GC GC AT TA C T A C G G

A G G

Vieja
TA GC

AT

Nueva
GC TA TA TA TA GC

N D I C E
INFORMACIN 1 La duplicacin del ADN.
La necesidad de la duplicacin del ADN. Primeras hiptesis sobre la duplicacin del ADN. Experimento de Meselson y Stahl.

GC AT GC GC GC TA TA AT GC TA TA AT CG TA CG GC GC TA

2 El sentido de crecimiento de las nuevas hebras.

La sntesis de ADN in vitro. El problema de la direccin en la duplicacin del ADN in vivo.

Duplicacin de la molcula de ADN.

3 Mecanismo de la duplicacin del ADN. ACTIVIDADES

En esta imagen se observa el modelo propuesto por Watson y Crick sobre la forma de replicarse el ADN. Ellos supusieron que las dos hebras de la doble hlice se deban separar a partir de un extremo, como si fuera una cremallera, y cada una de ellas servir como molde, para que, a partir de los nucletidos libres de la clula, y segn la complementariedad de las bases, se for-maran las nuevas hebras. Aos ms tarde se han introducido varias modificaciones a este modelo. Se propone que, una vez acabado el estudio del captulo, se indique cules son stas.

280

1 La duplicacin del ADN. Necesidad y explicacin

1. La necesidad de la duplicacin del ADN
La duracin de la vida de los organismos es muy variable: puede ser de unos minutos, como en las bacterias; varios aos, como en los humanos; varios siglos, como en las tortugas marinas; o incluso ms de un milenio como en los olivos; pero siempre hay un momento en que los organismos mueren. Es decir, todos los seres vivos son temporales. Por ello, para que la especie no se extinga, ha de haber un momento en que los individuos se reproduzcan, es decir, den lugar a nuevos individuos que continen viviendo. Para originar estos nuevos individuos es preciso la formacin de copias del ADN de su progenitor o de sus progenitores (si se engendran mediante la unin de dos gametos), que pasarn a cada nuevo individuo. Excepcionalmente, en el caso de algunos virus, la informacin biolgica de cmo es el organismo se encuentra contenida en una molcula de ARN en lugar de ADN. Los procesos vitales se prolongan a travs del tiempo gracias, en ltima instancia, a la capacidad de duplicacin del ADN. cadenas complementarias entrelazadas, lo que le da una gran estabilidad, y por otro, bastara con que una enzima especfica las separara para que cada una de ellas pudiera servir como molde para sintetizar, a partir de nucletidos sueltos y bajo la accin de otra enzima, la hebra complementaria. Para explicar este proceso se propusieron tres hiptesis: la hiptesis semiconservativa, la hiptesis conservativa y la hiptesis dispersiva (fig. 1). La hiptesis semiconservativa sobre la duplicacin del ADN se debe a Watson y Crick. En ella se sostiene que en las dos nuevas molculas de ADN de doble hlice producidas, una de las hebras sera la antigua, que actuara como molde, y la otra la moderna, constituida por la polimerizacin de nucletidos libres sobre ese molde, por complementariedad de las bases nitrogenadas. En la hiptesis conservativa se propone que tras la duplicacin quedan, por un lado, las dos hebras antiguas juntas y, por otro, las dos hebras nuevas tambin espiralizadas. En la hiptesis dispersiva se propone que las hebras, al final, estn constituidas por fragmentos distintos de ADN antiguo y de ADN recin sintetizado. El experimento ms definitivo para dilucidar cul de estas tres hiptesis era la correcta fue el de Meselson y Stahl en 1957. La hiptesis confirmada fue la semiconservativa.

2. Primeras hiptesis sobre la duplicacin del ADN

La estructura del ADN en doble hlice permite comprender cmo dicha molcula es idnea para dar lugar a copias. Por un lado su estructura presenta dos

Hiptesis semiconservativa

Hiptesis conservativa

Hiptesis dispersiva

cadena antigua cadena de nueva creacin

1 Hiptesis sobre la duplicacin del ADN.

281

ADN N14 ADN N1415 ADN N15 ADN N15 ADN N1415

ADN N14 ADN N1415

ADN N14 ADN N1415

Posicin del ADN inicial formado en un medio con N15 Interpretacin

Resultado tras la primera duplicacin en un medio con N14 Interpretacin

Resultado tras la segunda duplicacin en un medio con N14 Interpretacin

Resultado tras la tercera duplicacin en un medio con N14 Interpretacin

2 Experimento de Meselson y Stahl.

3. Experimento de Meselson y Stahl

Meselson y Stahl cultivaron bacterias (Escherichia coli) en un medio con nitrgeno pesado (N15). El N15 es un istopo del nitrgeno normal o N14. Tiene el mismo nmero de electrones (7 e) y de protones (7 p) que el tomo del N14, y as tiene el mismo comportamiento qumico, pero posee un neutrn ms (8 n), por lo que pesa ms que el N14. Su peso atmico es 15 (7 8 15) y no 14. Esto conlleva a que las molculas de ADN sintetizadas con N15 pesen ms que las construidas con N14, lo que permite separarlas mediante centrifugacin utilizando un medio que presente un gradiente de densidades. Las molculas de ADN ligero quedan ms arriba y las de ADN pesado ms abajo en el tubo de la centrfuga. Para realizar el experimento pasaron las bacterias cultivadas con N15 a un medio con nitrgeno normal (N14) durante una media hora, que es el tiempo necesario para que se duplique el ADN bacteriano, lo extrajeron y lo centrifugaron. Luego, mediante rayos ultravioleta, que son muy absorbidos cuando atraviesan una disolucin que contiene ADN, se pudo deducir que el ADN recin sintetizado ocupaba, en el tubo de centrifugacin, una posicin que era intermedia entre la que ocupaba el ADN con N15 y el ADN con N14. Se trataba, pues, de un ADN hbrido y haba que descartar la hiptesis conservativa (fig. 2). Si en lugar de dejar las bacterias en N durante una divisin las dejaban durante dos, aparecan dos ADN, uno hbrido y otro ligero. Si se dejaban durante tres, el
282
14

ADN hbrido era, en proporcin, mucho menos importante. Esto descartaba la hiptesis dispersiva y demostraba la hiptesis semiconservativa (fig. 2). Meselson y Stahl completaron el experimento con otro ensayo. Despus de aislar el ADN hbrido y someterlo a una temperatura de 80 a 100 C durante 30 minutos, consiguieron separar las dos hebras y, mediante un enfriamiento sbito, el que no se volvieran a asociar de nuevo. Posteriormente, mediante centrifugacin del preparado, comprobaron que una hebra era ligera y la otra densa, lo que confirm definitivamente la hiptesis semiconservativa. Estos experimentos se han realizado en muchos otros organismos, y en todos se ha cumplido la hiptesis semiconservativa.
CUESTIONARIO 1
1. Observa la figura 1 y comenta por qu una de las hiptesis se denomina conservativa y otra se denomina semiconservativa. 2. En la figura 2 se observa la posicin que ocupa un ADN sintetizado con N14, un ADN sintetizado con N15 y el ADN obtenido en la primera experiencia de Meselson y Stahl. Explica qu posicin habra ocupado el nuevo ADN si la hiptesis conservativa fuera la correcta y por qu se descart dicha hiptesis. 3. En la figura 2 tambin se observan los resultados tras la segunda y tercera replicacin. Explica qu resultados se habran obtenido si la hiptesis correcta fuera la dispersiva y por qu se rechaz dicha hiptesis.

2 El sentido de crecimiento de las nuevas hebras

1. La sntesis de ADN in vitro
El mecanismo de cmo a partir de una hebra se iba sintetizando sobre ella la nueva hebra complementaria y qu enzima regulaba este proceso, fue estudiado por Kornberg, un discpulo del bioqumico espaol Severo Ochoa. En 1956, Kornberg aisl a partir de la bacteria Escherichia coli la enzima ADN-polimerasa. Esta enzima es capaz de sintetizar ADN in vitro. Para su actuacin, la ADN-polimerasa necesita la presencia de desoxirribonucletidos-5-trifosfatos de adenina, timina, guanina y citosina, iones magnesio Mg2, y un ADN en el que una de la hebras acta como hebra patrn, y un extremo de la otra, que se ha retirado en parte, como cebador. La ADN-polimerasa es una enzima constituida por unos 1.000 aminocidos. Se encuentra en el ncleo y en las mitocondrias. Posee varios loci o lugares donde se fijan los sustratos. stos son ocupados por el ADN patrn, el ADN cebador, y el siguiente nucletido que se aadir. Puede unir unos 1.000 nucletidos por minuto y permite la sntesis in vitro (en el laboratorio, no en una clula viva) de ADN a partir de un ADN natural. Esto es lo ms parecido hasta ahora a una posible sntesis de materia viva. La ADN-polimerasa es incapaz de iniciar una cadena de novo. Su papel se limita a aadir nucletidos al extremo de una cadena preexistente, el llamado ADN cebador. Concretamente, acta aadiendo nucletidos al extremo que presenta libre el carbono 3 del nucletido, siendo incapaz de aadirlos en el otro extremo, que es el que presenta libre el carbono 5 del nucletido. As pues, la cadena del ADN cebador slo puede crecer en el sentido 5 3. Por ello, en una cadena de ADN, el nucletido que tiene su carbono 5 libre es el primer nucletido de la cadena y el que tiene libre el carbono 3 es el ltimo nucletido aadido y al que se puede aadir otro. La ADN-polimerasa, adems, acta de forma que la nueva hebra sintetizada es antiparalela y complementaria (fig. 3).

3 Estructura y actuacin de la ADN-polimerasa.

P
5 3

A T A C C G A

ADN patrn
+n(P-P-P 5 3 +n(P-P-P 5 3 +n(P-P-P 5 3 +n(P-P-P 5 3

5 P

P
5 3

Mg2 A) T)
3 5 P 3 5 3 5 P 5 P 3

5 P 3

A A

P
5 3

T A

5 3

C) G) Locus del patrn ADN-polimerasa

5 3 5 3

5 3

P5 3

PP
G
5 3

P P
5 3

P
P
5 3

C C

5 3

P A T A C G

P
5 3

P
5 3 5 3 5 3 5 3 5 3

ADN cebador
5 3

P
5

5 3

5 3

5 3

5 3

5 3

5 3

2(PP)

Locus del nucletido trifosfato que se incorpora

Locus del cebador

283

2. El problema de la direccin en la duplicacin del ADN in vivo

Entre los primeros experimentos encaminados a observar la duplicacin del ADN en los seres vivos, cabe destacar el realizado por Cairns en 1963. La tcnica seguida consisti en mantener bacterias de la especie Escherichia coli en un medio con timina marcada con tritio (H3), es decir, una timina que en vez de hidrgeno tena tritio. Este istopo radiactivo emite partculas beta () capaces de impresionar una placa fotogrfica, lo que permite localizar las nuevas molculas de ADN sintetizado. Cada dos o tres minutos se depositaba el ADN bacteriano sobre una placa sensible para obtener el autorradiografiado del mismo. As se obtuvo la secuencia completa de una replicacin del ADN que dura unos treinta minutos. Las imgenes iniciales tenan forma de V, las posteriores de medias lunas, y las finales parecan crculos ms o menos aplastados (fig. 4). Las formas en V corresponden a las llamadas horquillas de replicacin, formadas por las dos nuevas hebras de ADN tritiado sintetizadas sobre la doble cadena antigua que se haba escindido en dos para poder servir de moldes. Las formas en media luna corresponden a las llamadas burbujas de replicacin y las formas circulares permitieron descubrir que el ADN de Escherichia coli era circular. El experimento de Cairns volvi a confirmar la hiptesis semiconservativa y, adems, descubri la existencia de un punto concreto como origen de la replicacin del ADN bacteriano. Errneamente, se dedujo que la replicacin era unidireccional, cuando posteriormente se ha comprobado que es bidireccional, es decir, hay una horquilla a la izquierda del punto de inicio y otra horquilla a la derecha, que van progresando en direcciones opuestas (fig. 5). Ahora bien, este hecho plante dos dilemas: El primero era cmo la ADN-polimerasa poda sintetizar sin necesidad de cebador; y el segundo, cmo las dos nuevas hebras de la horquilla crecan en paralelo: si una de ellas lo estaba haciendo en direccin 5 3, la otra lo deba hacer en direccin 3 5, lo cual era imposible de explicar, ya que ninguna ADN-polimerasa trabaja en esa direccin (fig. 6). La solucin al dilema la dio el descubrimiento, en 1968, por Okazaki, de unos fragmentos constituidos por unos 50 nucletidos de ARN y unos 1.000 o 2.000 nucletidos de ADN. Estos fragmentos, denominados fragmentos de Okazaki, son sintetizados por la ARN-polimerasa, que no precisa cebador para empezar, y luego por la ADN-polimerasa,
284

en direccin 5 3 sobre diferentes regiones de la hebra patrn. Luego, sin moverse, tras perder su porcin de ARN, pueden ser fusionados entre s, pudiendo dar la sensacin de que la nueva hebra de ADN crece en direccin 3 5. Es algo similar a lo que sucede en la cola de entrada de un espectculo: la acumulacin de personas caminando hacia adelante en fila india forman una cola que crece hacia atrs (fig. 7).

a) 5 minutos b) 12 minutos

c) 28 minutos

100

d) 48 minutos

4 Formas observadas en el experimento de Cairns.

Origen de la duplicacin

5 Interpretacin de los resultados obtenidos por Cairns.

5' 3'

3'

5'

Interpretacin de las horquillas observadas

Punto de iniciacin de la replicacin 5'

5' 3'

Ninguna polimerasa puede aadir nucletidos aqu

?
3' 5'

3'

3' Ninguna polimerasa puede aadir nucletidos aqu

5'

6 Dificultades surgidas en la interpretacin de los resultados obtenidos por Cairns.

Origen de replicacin Crecimiento continuo 5'

5' 3' 5'
3' 5'
3' 5'

Crecimiento discontinuo 3'

3'

3' Crecimiento discontinuo Crecimiento continuo

5'

Explicacin del proceso gracias a los fragmentos de Okazaki

7 El ADN siempre se sintetiza en direccin 5 3.

CUESTIONARIO 2 Observa la figura 3 y contesta a las siguientes preguntas:

1. La ADN-polimerasa precisa nucletidos trifosfato a pesar de que, una vez incorporados, quedan nucletidos monofosfato. Sabiendo que los enlaces entre dos grupos fosfato son muy ricos en energa, qu explicacin puedes dar a este hecho? 2. La nueva hebra siempre crece en direccin 5' 3'. Quiere decir esto que el enlace entre el ltimo nucletido y el nuevo nucletido que se incorpora es un enlace en direccin 5' 3' o que es en direccin 3' 5'? 3. Cul es la secuencia de ADN complementario de: 5' ... A C T C A G G T A ... 3'? 4. Si en un ADN de una clula eucariota hay un 18 % de timina, qu porcentaje hay de las otras bases nitrogenadas? 5. Qu son los fragmentos de Okazaki? 6. El dibujo de la derecha sobre la replicacin contiene varios errores y est incompleto. Corrgelos y compltalo.
C
A
G

A A G C C
A
A
C
A
T
G
C

T T C G G
T

T
G

T
U
G
C

G
T
A
G

A
T
C

C
T

G
G
C

285

3 Mecanismo de la duplicacin del ADN

En primer lugar hay que sealar que la duplicacin del ADN presenta ciertas diferencias en bacterias y en eucariontes: En bacterias (fig. 8) 1. Existe una secuencia de nucletidos en el ADN llamada origen de la replicacin, que acta como seal de iniciacin. 2. El proceso se inicia con una enzima denominada helicasa que rompe los puentes de hidrgeno entre las dos hebras complementarias y las separa para que sirvan de patrones o moldes. Como el desenrollamiento de la doble hlice da lugar a superenrollamientos en el resto de la molcula, capaces de detener el proceso, se hace preciso el concurso de topoisomerasas que eliminen las tensiones en la fibra. Estas protenas actan cortando una (las topoisomerasas I) o las dos fibras (las topoisomerasas II) y, una vez eliminadas las tensiones, empalmndolas nuevamente. La topoisomerasa II de Escherichia coli se denomina girasa. 3. A continuacin intervienen unas protenas que se enlazan sobre el ADN de hebra nica. Son las protenas estabilizadoras (SSB), que tienen como funcin mantener la separacin de las dos hebras complementarias. Se inicia as la formacin de la horquilla de replicacin. 4. El proceso es bidireccional, es decir, hay una helicasa trabajando en un sentido y otra trabajando en sentido opuesto. Las dos horquillas de replicacin forman las llamadas burbujas u ojos de replicacin. 5. Como ninguna ADN-polimerasa puede actuar sin cebador, interviene primero una ARN-polimerasa que s lo puede hacer. Esta encima se denomina primasa y sintetiza un corto fragmento de ARN de unos diez nucletidos, denominado primer, que acta como cebador. 6. Interviene despus la ADN-polimerasa III, que, partiendo del primer, comienza a sintetizar en direccin 5 3, como todas las polimerasas, una hebra de ADN a partir de

8 Mecanismos de duplicacin del ADN en bacterias.

Origen de replicacin

3' 5'

Burbuja de replicacin

ADNp III Protena SSB

3' Hebra retardada Hebra conductora Primer ADNp (primasa) 5' Hebra conductora Hebra retardada ADNp I ADN-ligasa ADNp III 3' 5' 3'

Girasa 5'

3' Helicasa

5'

Fragmento de Okazaki

286

nucletidos trifosfato. La energa necesaria para el proceso es aportada por los propios nucletidos, que pierden dos de sus grupos fosfato. Esta nueva hebra es de crecimiento continuo, ya que la helicasa no se detiene, y se denomina hebra conductora. 7. Sobre la otra hebra que es antiparalela, la ARN-polimerasa sintetiza unos 40 nucletidos de ARN en un punto que dista unos 1.000 nucletidos de la seal de iniciacin. A partir de ellos, la ADN-polimerasa III sintetiza unos 1.000 nucletidos de ADN, formndose entonces un fragmento de Okazaki. Este proceso se va repitiendo a medida que se van separando las dos hebras patrn. Posteriormente, interviene la ADN-polimerasa I (la ADN-polimerasa aislada por Kornberg), que, primero, gracias a su funcin exonucleasa, retira los segmentos de ARN, y luego, gracias a su funcin polimerasa, rellena los huecos con nucletidos de ADN. Finalmente interviene la ADN-ligasa, que empalma entre s los diferentes fragmentos. Esta hebra es, pues, de crecimiento discontinuo. Como precisa que se despiralice un segmento de varios miles de nucletidos para que se inicie su sntesis, tarda ms en crecer
Orgenes de replicacin

que la otra, y, por ello, se la denomina hebra retardada. 8. El proceso contina as hasta la duplicacin total del ADN. Como se observa en la figura 8, dado que el crecimiento es bidireccional, cada una de las nuevas hebras est sintetizada, en parte, de forma continua y, en parte, de forma discontinua. Solamente en algunos casos excepcionales, las dos hebras del ADN pueden crecer en forma discontinua. En eucariontes (fig. 9) El proceso es similar al que se sigue en las bacterias. Cabe destacar dos diferencias bsicas y varios detalles menores. La primera gran diferencia es que el ADN de los eucariontes est fuertemente asociado a histonas. Se ha observado que, durante la replicacin, la hebra que sirve de patrn a la hebra conductora se queda con las histonas y ambas se enrollan sobre los octmeros antiguos. La hebra que sirve de patrn a la retardada y la retardada se arrollan sobre nuevos octmeros de histonas que llegan a los lugares de replicacin para formar nuevos nucleosomas. La segunda gran diferencia es que, teniendo en

Origen de replicacin Hebra conductora Hebra retardada

ADN 5' 3' Horquilla de replicacin Burbuja de replicacin Hebra conductora ADN en la 5' cromatina 3' Hebra retardada Hebra retardada Hebra conductora

3' 5' Horquilla de replicacin

3' 5'

Origen de replicacin Nuevos nucleosomas

Nucleosoma paterno

9 Replicacin del ADN en los cromosomas eucariticos.

10 Distribucin de los nucleosomas en la replicacin del ADN eucaritico.

287

cuenta que la longitud del ADN de un cromosoma eucaritico es mucho mayor que el ADN bacteriano (unos 50 milmetros frente a poco
a

ms de un milmetro) y que, seguramente debido a la presencia de histonas, el proceso es bastante ms lento (unas diez veces ms lento), en cada ADN de un cromosoma no hay un solo origen de replicacin, sino aproximadamente un centenar. Se forman unas cien burbujas de replicacin. Su distribucin es irregular, pudiendo haber regiones con muchas burbujas y regiones con pocas. Se activan de forma coordinada y constituyen las llamadas unidades de replicacin o replicones (fig. 10). Entre los detalles diferenciables cabe sealar que los fragmentos de Okazaki son ms pequeos, de unos cien a doscientos nucletidos, y que el proceso de replicacin se realiza durante el perodo S de la interfase, que dura de unas seis a ocho horas.

b CUESTIONARIO 4
1. Por qu la hebra retardada se sintetiza de forma discontinua? 2. Por qu la hebra discontinua tarda ms en sintetizarse si cuenta con ms puntos de iniciacin? 3. Despus de extraer y desnaturalizar el ADN de bacterias (Escherichia coli) que estaban iniciando la replicacin, Okazaki observ que haba fragmentos de cadena sencilla y largos, de unos 1.000 nucletidos; si dejaba que la replicacin progresara durante ms tiempo, encontraba fragmentos largos de cadena sencilla y fragmentos cortos. Qu relacin pueden tener estos resultados con el hecho de que las ADN-polimerasas slo actan en sentido 5'3'? 4. Diferencia entre procariotas y eucariotas en la duplicacin del ADN. 5. Copia el siguiente esquema y, sin consultar el libro, rotlalo con los nombres de las enzimas que intervienen en la duplicacin del ADN bacteriano.

11 Adems de la apariencia, tambin son diferentes los mecanismos de duplicacin del ADN en cromosomas procariticos (a) y eucariticos (b).

CUESTIONARIO 3
Completa un cuadro como ste, especificando la funcin de las siguientes enzimas, que intervienen en la duplicacin del ADN bacteriano. Procesos en los que interviene

Enzima ADN-polimerasa I Topoisomerasa I Topoisomerasa II Primasa ADN-ligasa ARN-polimerasa ADN-polimerasa III Helicasa

Funcin

288

Actividades
Lectura
EL ADN RENATURALIZADO
Los trabajos de Doty y Marmur en 1960 descubrieron que si se calentaba a unos 100 C y durante una media hora, una molcula de ADN en doble hlice, todos los puentes de hidrgeno se rompan y las cadenas se separaban. Si posteriormente estas cadenas simples de ADN desnaturalizado se dejaban enfriar lentamente, se formaban algunas molculas nuevas de ADN de doble hlice. Este ADN renaturalizado obtenido por reasociacin presentaba un comportamiento biolgico normal. Este hecho constituye un poderoso instrumento en la investigacin, ya que si se parte de ADN de diferentes individuos, segn el grado de reasociacin de las cadenas, puede deducirse el grado de parentesco entre ellos. 1. En el caso de un homicidio, en el que se dispone de clulas sanguneas del asesino, y en el que no hay ningn inconveniente por parte del acusado a que se haga un anlisis de ADN, explica qu pasos deberan llevarse a cabo para realizar dicho anlisis. 2. Para llevar a cabo pruebas de paternidad. En 1995 unos mdicos de la Universidad de Granada probaron mediante estas tcnicas que dos mellizas eran hijas de padres diferentes. Explica cientficamente este caso. 3. Se ha descubierto que ciertos virus provocan la aparicin de clulas cancerosas en el ratn. Mediante tcnicas de calentamiento (fusin) se ha obtenido ADN desnaturalizado de virus, de clulas cancerosas y de clulas normales. Tras un enfriamiento lento se ha observado que el ADN vrico se ha reasociado muy bien con el de la clula cancerosa, y no lo ha hecho con el de la clula normal. Qu interpretacin se puede dar a este hecho? Cmo se podra prevenir este tipo de cncer? a b 4. En una investigacin zoolgica se encuentran dificultades para establecer si tres especies son igualmente distintas o si dos de ellas son ms prximas, es decir, si tienen un antepasado comn. Explica cmo se podra realizar un anlisis de ADN para resolver este problema y qu cabe esperar si dos de ellas tienen un mayor grado de parentesco.

Cuestiones:
5 5 5 5 5 5 3 3 3 3 3

3 5 3

P
5 3

A C C T A C G A T

P
5 3

P
5 3

3 5 3 5 3 5 3

3. Qu posibles ventajas nos pueden reportar la identificacin y secuenciacin del genoma humano?

SOBRE EL PROYECTO GENOMA

Como sabes, los investigadores de todo el mundo implicados en el ambicioso Proyecto Genoma humano aseguran que para el ao 2000 habrn finalizado su objetivo: la lectura de los 3.000 millones de letras (nucletidos) que componen nuestra biblioteca gentica.
El estudio del ADN de estas tres especies de garzas nos desvelara su proximidad evolutiva. a) Garza real. b) Garza imperial. c) Garza Goliath.

Con esta informacin se podr identificar el origen de las enfermedades hereditarias. stas podrn ser detectadas incluso en los embriones, gracias a sencillos tests genticos y se tratarn mediante la terapia gnica, el revolucionario tratamiento que permite reemplazar genes defectuosos por otros sanos, pero que no est exento de riesgos. Cul es el lmite entre prevenir enfermedades hereditarias y mejorar la raza? Tenemos derecho a inmiscuirnos en la evolucin humana?

2. Respecto a la duplicacin del ADN, contesta a las siguientes preguntas: a) A qu velocidad se aadirn los nuevos nucletidos complementarios? b) Cmo son las dos hebras entre s? c) Puede tener alguna ventaja la aparicin de errores que no perjudiquen la supervivencia del individuo? d) Cmo se denominan, en general, estos errores?

P
5 3

P
5

1. En este esquema se observa una doble hlice de ADN en la que una hebra ha sufrido la prdida de un segmento. a) Qu tipo de enlaces se han roto? b) Cules sern los nucletidos que se aadirn, en qu orden, y a partir de qu extremo? c) Qu enzima lo realizar?

289

18
Aminocidos

El ARN y la expresin del mensaje gentico

ARN polimerasa Ncleo ARN mensajero

TRANSCRIPCIN

ARN de transferencia

N D I C E
INFORMACIN 1 El cido ribonucleico.
El ARN soluble o ARN de transferencia. El ARN mensajero. El ARN ribosmico. El ARN nucleolar. Funciones de los cidos ribonucleicos.
G

Met Pro Ala Met Ser

C A U
U

Val

2 Teora un gen-una enzima. 3 La expresin del mensaje gentico.

El mecanismo de la transcripcin.
P Ribosoma TRADUCCIN Protena A

4 La clave gentica. 5 La traduccin o biosntesis de las protenas. 6 La regulacin de la expresin gentica.

El opern. Control de la biosntesis proteica por AMP cclico. El control de la expresin gnica en eucariontes.

A partir de este dibujo contesta a las siguientes preguntas; si no las sabes, vuelve a intentarlo al acabar el estudio de este captulo. a) Qu funcin realiza el ADN, la ARN-polimerasa, el ARN mensajero, el ARN de transferencia y el ribosoma? b) Por qu el individuo que lleva la valina est contrariado y el que lleva la metionina est contento? c) Qu diferencias hay entre la posicin P y la posicin A del ribosoma?

ACTIVIDADES

290

Lys

C
A
U

ARN Mensajero
G

La biosntesis de protenas.

El cido ribonucleico

1. El ARN soluble o ARN de transferencia

El ARN soluble o de transferencia (ARNt) tiene entre 70 y 90 nucletidos, su peso molecular es aproximadamente 25.000, y se encuentra en el citoplasma en forma de molcula dispersa. Hay unos cincuenta tipos de ARNt. Su funcin es transportar aminocidos especficos hasta los ribosomas, donde, segn la secuencia especificada en un ARN mensajero (transcrita, a su vez, del ADN), se sintetizan las protenas. El ARNt es monocatenario. Presenta zonas con estructura secundaria en doble hlice, debida a la complementariedad entre las bases de unos segmentos y las de otros, y zonas con estructura primaria o lineal, que forman asas o bucles, lo que confiere a la molcula una forma de hoja de trbol. En ella se distingue un brazo llamado brazo D y su asa, un brazo T y su asa, un brazo llamado anticodn y su asa, y un brazo aceptor de aminocidos. En realidad la molcula est mucho ms replegada, adoptando una estructura terciaria en forma de L (fig. 1). Entre los nucletidos que forman los ARNt, adems de A, G, C y U, aparecen otros que llevan bases metiladas, como la dihidrouridina (UH2), la ribotimidina (T), la inosina (I), la metilguanosina (GMe), etctera, que constituyen el 10 % de los ribonucletidos totales del ARNt. El brazo D se denomina as porque contiene dihidrouridina, el brazo T contiene ribotimidina, y el brazo anticodn contiene un triplete

El cido ribonucleico o ARN est constituido por nucletidos de ribosa, con las bases adenina, guanina, citosina y uracilo. No tiene, pues, timina como el ADN. Estos ribonucletidos se unen entre ellos mediante enlaces fosfodister en sentido 5 3, al igual que en el ADN. A diferencia de ste, el ARN es casi siempre monocatenario, excepto en los reovirus que es bicatenario. Se ha observado la existencia de ARN con funcin biocatalizadora, por lo que se ha sugerido que, en el origen de la vida, los ARN pudieron ser las primeras molculas capaces de autoduplicarse. Despus, sera el ADN el encargado de guardar la informacin gentica, ya que su cadena es ms estable. El ARN se encuentra en muchos tipos de virus y en las clulas procariotas y eucariotas. En stas hay de cinco a diez veces ms ARN que ADN. Los ARN se clasifican en ARN bicatenario (en los reovirus) y ARN monocatenario, como el ARN soluble o de transferencia (ARNs o ARNt), el mensajero (ARNm), el ribosmico (ARNr) y el nucleolar (ARNn). El hecho de que las clulas que fabrican grandes cantidades de protenas sean ricas en ARN fue una de las pistas para desvelar la transmisin de la informacin gentica.

1 a) Esquema del ARNt de la alanina. b) Estructura terciaria del ARNt de la fenilalanina. Las zonas ensombrecidas corresponden a las asas de la estructura en hoja de trbol.
Y pseudouridina UH2 dihidrouridina I inosina T ribotimidina GMe metilguanosina GMe2 dimetilguanosina IMe metilinosina

a
Brazo aceptor 5' G 5' G G C 3' G U GMe U G

3' A C C A C C U G C U C A G 3'

Alanina Triplete aceptor

b
54 Asa T

Brazo T

64

Brazo aceptor 76 4 72

56

60 50 15 7 12 69

Extremo aceptor 3'

Asa D 20 Brazo T 5' G C C U U A G U C C G 5' UH2 G Brazo variable Brazo anticodn 3' Brazo anticodn G T C Asa variable 44

3' A G UH2 C G G

U G

5'

G Puentes de hidrgeno G A G G G IMe I C G C C G A

Brazo D

G A UH2

GM2 C U

26

Brazo D (enlace enzima aminoacilsintetasa)

C 5' U U 3' 3' C C

38

Anticodn Asa anticodn Codn 5'

32

Anticodn

ARNm

291

de nucletidos, denominado anticodn, que es complementario de un triplete del ARNm denominado codn. En el extremo 5 de los ARNt se localiza siempre un ribonucletido de guanina, con su grupo fosfato libre. En el extremo 3, que es donde se enlaza el aminocido, se encuentra siempre el triplete C C A. El grupo terminal OH del nucletido A es el que se une al grupo carboxilo del aminocido. En el anticodn hay diferentes tripletes, que estn en correspondencia con el aminocido que capta especficamente cada ARNt (ver fig. 9 en pg. 301).

mado ARN heterogneo nuclear (ARNhn), nombre que hace referencia a la variabilidad de su tamao. ste posee una serie de segmentos con informacin, denominados exones, alternados con otros sin informacin denominados intrones, que luego son suprimidos y no aparecen en el ARNm. Este proceso se denomina maduracin y se produce en el ncleo (fig. 2). El ARNm eucaritico posee en su extremo 5 una guanosina trifosfato invertida y metilada en el nitrgeno 7 (m7 Gppp-...). Esta molcula, que recibe el nombre de caperuza, bloquea la accin de las enzimas exonucleasas que pueden destruir el ARNm, y constituye la seal de inicio en la sntesis de protenas. A continuacin, hay un segmento sin informacin, seguido de otro segmento con informacin que suele empezar con la secuencia A U G. En el extremo 3 o extremo final posee de 150 a 200 nucletidos de adenina, lo que se denomina cola de poli-A. Se considera que sirve de estabilizador frente a las enzimas exonucleasas. Entre la sntesis y la degradacin del ARNm no transcurren ms que unos cuantos minutos. El ARNm eucaritico es monocistrnico, es decir, slo contiene informacin para una cadena polipeptdica. El ARNm procaritico no adopta la estructura del ARN eucaritico, no presenta exones e intrones, carece de caperuza (empieza con un nucletido trifosfato no invertido, por ejemplo: pppG-...) y de cola de poli-A, y adems es policistrnico, es decir, contiene informaciones separadas para distintas protenas.

2. El ARN mensajero
El ARN mensajero (ARNm) es monocatenario, bsicamente lineal, y con un peso molecular que oscila entre 200.000 y 1.000.000. Su funcin es transmitir la informacin contenida en el ADN y llevarla hasta los ribosomas, para que en ellos se sinteticen las protenas a partir de los aminocidos que aportan los ARNt. El ARNm tiene una estructura diferente en procariotas y en eucariotas. El ARNm eucaritico presenta algunas pocas zonas en doble hlice (estructura secundaria), debido a la complementariedad de las bases entre distintos segmentos, y zonas lineales (estructura primaria) que dan lugar a los llamados lazos en herradura. Se encuentra asociado a protenas formando las partculas ribonucleoproteicas mensajeras (estructura terciaria; fig. 2). El ARNm eucaritico se forma a partir del transcrito primario (pre-ARNm), tambin lla-

2 a) Estructura de una partcula ribonucleoproteica mensajera (ARNm). b). Maduracin del ARNm. a
5'

b
ARNhn ( pre-ARNm) EXN m7 Gppp Zonas con codos y bucles debidos a la complementariedad de las bases 5' Empalmado 3' INTRN EXN INTRN EXN OH Cola de poli-A

ARNm

Protena ARNm m7 Gppp 5' Segmento con informacin para traducir

F F

OH 3'

Poli-A 3'

Segmento con informacin que no se traducir

Segmento con informacin que no se traducir

292

3. El ARN ribosmico
El ARN ribosmico (ARNr) es el ARN que constituye, en parte, los ribosomas. Este tipo de ARN representa el 60 % del peso de dichos orgnulos. El ARNr presenta segmentos lineales y segmentos en doble hlice (estructura secundaria), debido a la presencia de secuencias complementarias de ribonucletidos a lo largo de la molcula. Adems, el ARNr est asociado con las protenas ribosmicas, formando una estructura que est relacionada con la sntesis de protenas, ya que proporciona a los ribosomas la forma adecuada para dar alojamiento al ARNm y a los ARNt, portadores de los aminocidos que formarn las protenas durante dicho proceso.

El peso molecular del ARNr oscila entre 500.000 y 1.700.000. En general, el peso de los ARNr y de los ribosomas se suele expresar segn el coeficiente de sedimentacin (s) de Svedberg. Este coeficiente es directamente proporcional a la velocidad de sedimentacin de la partcula durante la ultracentrifugacin. Suponiendo que la partcula sea esfrica, como la velocidad de sedimentacin depende de la masa de la partcula, a partir de este coeficiente se puede calcular su peso molecular. El coeficiente de sedimentacin se expresa en unidades svedberg (S), siendo un svedberg equivalente a 1013 segundos. Las clulas procariotas presentan ribosomas de 70 S, menor peso que los de las clulas eucariotas, de 80 S (fig. 3).

Ribosoma 70 S
(clulas procariotas)

Ribosoma 80 S
(clulas eucariotas)

Subunidad 30 S
F

Subunidad 40 S Subunidad 50 S
F F

ARNr 16 S

ARNr 18 S

Subunidad 60 S
F F

ARN 23 S F ARN 5 S

ARNr 28 S ARNr 5,8 S F ARNr 5 S

3 Las clulas procariotas presentan ribosomas de 70 S que contienen un ARNr de 23 S y un ARNr de 5 S en la subunidad mayor, y un ARNr de 16 S en la subunidad menor. Las clulas eucariotas tienen ribosomas de 80 S, que contienen un ARNr de 28 S, otro de 5,8 S y otro de 5 S en la subunidad mayor, y un ARNr de 18 S en la subunidad menor.

4. El ARN nucleolar
El ARN nucleolar (ARNn) es un ARN que se encuentra constituyendo, en parte, el nuclolo. Se origina a partir de diferentes segmentos de ADN, uno de los cuales se denomina regin organizadora nucleolar. A partir de este ADN, se forma en el nuclolo un ARN de 45 S. Este ARN nucleolar se asocia a protenas, procedentes del citoplasma, muchas de las cuales son las que conformarn los ribosomas. Posteriormente, la gran partcula de ribonucleoprotena se escinde en tres ARN. a continuacin se aade un ARN de 5 S, tambin asociado a protenas, sintetizado fuera del nuclolo, es decir, en el nucleoplasma, a partir de otro segmento de ADN. A partir de todos ellos se forman las dos subunidades ribosmicas, una de 40 S y otra de 60 S, que atraviesan la envoltura nuclear y se unen en el citoplasma, dando lugar a un ribosoma de 80 S (fig. 4).
ADN NCLEO ARN nucleolar (45 S) ARN 18 S

CITOSOL Subunidad ribosmica de 40 S

ARN 28 S ARN 5,8 S ARN 5 S NUCLOLO Subunidad ribosmica de 60 S

ARN (5 S)

ARNm Ribosoma de 80 S

Protenas ribosmicas

4 El ARN nucleolar y su intervencin en la fabricacin de los ribosomas. Se observa cmo el ARN de 45 S se escinde en tres: un ARN de 18 S, un ARN de 28 S y un ARN de 5,8 S.

293

5. Funciones de los cidos ribonucleicos

Las funciones de los ARN pueden resumirse en tres: Transmisin de la informacin gentica desde el ADN a los ribosomas. Las enzimas ARNpolimerasas a partir de un gen de ADN, es decir, una secuencia de nucletidos de ADN con informacin sobre una protena, sintetizan, mediante la complementariedad de las bases, un ARN mensajero, proceso denominado transcripcin. Luego, este ARNm llegar hasta los ribosomas. El ADN es utilizado nicamente como almacn de informacin gentica. Conversin de la secuencia de ribonucletidos de ARNm en una secuencia de aminocidos. Este proceso se denomina traduccin y se realiza en los ribosomas. En l intervienen, adems del ARNm, el ARNr de los ribosomas y el ARNt que transportan los aminocidos, ladrillos del edificio proteico. Almacenamiento de la informacin gentica. Algunos virus carecen de ADN y, por ello, contienen su informacin biolgica en forma de ARN. Por ejemplo, el virus de la gripe, el de la polio, el de la inmunodeficiencia humana, los reovirus (que poseen ARN bicatenario), etc.

ocumento 1

El ARNpn
Existe un quinto tipo de ARN, el ARN pequeo nuclear (ARNpn), denominacin que hace referencia a su pequeo tamao y a su presencia en el ncleo de las clulas eucariotas. Tambin se le denomina ARN-U, por su elevado contenido en uridina. El ARNpn se une a ciertas protenas del ncleo formando las ribonucleoprotenas nucleares (RNPpn), y as acta realizando el proceso de eliminacin de intrones (maduracin del ARNm), gracias a que posee secuencias complementarias a las de los extremos de los intrones.

CUESTIONARIO 1
1. Dibuja un segmento de ARN de slo dos nucletidos. Seala dnde estn los enlaces N-glucosdicos, los enlaces fosfoestricos, el lugar donde se situara el siguiente nucletido, y la direccin de crecimiento de la cadena de ribonucletidos. 2. Por qu muchos ARN, pese a ser monocatenarios, pueden presentar regiones con estructura en doble hlice? 3. Se conocen muchos tipos de ARNt. En qu se diferencian unos de otros? 4. Qu diferencia existe entre las ARN-polimerasas y las ADN-polimerasas, estudiadas en el captulo anterior, en cuanto al inicio de la sntesis?

2 Teora un gen-una enzima

Una vez conocida la estructura del ADN, cmo se duplica, cmo la informacin que contiene puede alterarse (mutaciones), cmo se transcribe a molculas de ARNm, faltaba descubrir cmo ese mensaje se materializa en unas caractersticas concretas del organismo. En 1901, el mdico ingls A. E. Garrod haba observado ciertas enfermedades humanas hereditarias. Una de ellas, la alcaptonuria, se caracteriza por artritismo y ennegrecimiento de los cartlagos y de la orina, cuando sta se pona en contacto con el aire. Estudiando la genealoga de los individuos enfermos, observ que la alcaptonuria era una enfermedad hereditaria. Siempre haba algn antepasado que la haba padecido. La enfermedad slo apareca cuando las dos informaciones recibidas, es decir, la recibida por parte del padre y por parte de la madre, indicaban alcaptonuria. Cuando las dos informaciones eran normales, o cuando simplemente lo era una de ellas, el individuo era normal. Se trataba, pues, de una enfermedad provocada por una informacin gentica anormal, que era recesiva respecto a la informacin correcta.
294

El trmino informacin biolgica hereditaria para un carcter fue sustituido por el de gen. Un gen puede definirse como un fragmento de cido nucleico que tiene la informacin para un determinado carcter. Ocupa en el filamento del cido nucleico una posicin fija, denominada locus. Un mismo locus puede ser ocupado por ms de un tipo de genes respecto a un mismo carcter. Cada uno de los diferentes genes que pueden ocupar un mismo locus se denomina alelo. En el caso anterior se trata de un locus que tiene dos alelos: el alelo normal y el alelo alcaptonuria, siendo el alelo normal (N) dominante, y el alelo alcaptonuria (n) recesivo. Mediante anlisis qumicos se averigu que el motivo del ennegrecimiento de la orina y cartlagos se deba a la presencia del cido homogentsico. Se supuso que en los individuos sanos esta sustancia era transformada en otras y desapareca. Se pudo as pasar de un paralelismo entre gen y carcter, a un paralelismo entre gen y sustancia.

Genes NN Nn nn

Carcter Normal Normal Alcaptonuria

Sustancia en el organismo No hay cido homogentsico. No hay cido homogentsico. S hay cido homogentsico.

Posteriormente, en 1948, Beadle y Tatum abordaron el problema de por qu aparecan estas sustancias en el organismo y por qu se heredaba este carcter. Eligieron para sus experimentos el hongo Neurospora crassa, que slo necesita para vivir sustancias minerales, una fuente orgnica de carbono y biotina. Mediante radiacin con rayos ultravioleta (que alteran el ADN) aparecieron mutantes que ya slo sobrevivan si adems se aada el aminocido arginina, necesario para sintetizar sus protenas. Haban perdido, por tanto, la capacidad de sintetizar este aminocido. Otros mutantes necesitaban o arginina o citrulina, y otros, o arginina o citrulina u ornitina. A partir de aqu se dedujo que la sntesis de arginina deba seguir la siguiente va metablica:
(sustrato)
5

enzimas y que, en cada uno de ellos, aumentaba mucho uno de los componentes de la va de la arginina. La conclusin era obvia: al faltar una enzima, el metabolismo queda bloqueado en aquella sustancia sobre la cual deba actuar. Los mutantes s podan vivir, si al medio se le aada la sustancia que no podan sintetizar, o cualquiera de las sustancias derivadas de ellas, ya que s tenan el resto de las enzimas. Se estableci as un paralelismo entre genes y enzimas, denominndose esta hiptesis teora de un gen-una enzima (Beadle y Tatum). Al alterarse la secuencia de nucletidos de un gen, falta una enzima. Es, pues, mediante las enzimas como se controlan las sustancias y por ellas las caractersticas de los organismos.
GEN 1 enzima 1
5 5

GEN 2 enzima 2
5 5 5

GEN 3 enzima 3
5 5 5

(sustrato)

ornitina

citrulina

arginina

(protenas)

ornitina

citrulina

arginina

(protenas)

Mediante anlisis bioqumicos se pudo confirmar que los diferentes mutantes carecan de determinadas

Mediante este tipo de estudios, denominados Gentica bioqumica, se han podido establecer muchas rutas bioqumicas, entre ellas la del metabolismo de la fenilalanina, al que pertenece la alcaptonuria antes citada.

CUESTIONARIO 2
Se conocen cinco tipos de mutantes. Todos ellos precisan para alimentarse de la sustancia G. Muchos mutantes, si no hay G en el medio, saben producirla a partir de otras sustancias, denominadas A, B, C, D, y E. En la tabla adjunta se indica el tipo de mutante: con un () si es capaz de vivir con esa sustancia, y con un () si no lo es. Indicar el orden de dichas sustancias en la ruta metablica. (A modo de ayuda se indica que como el mutante 5 puede vivir con cualquier sustancia menos con la E, debe ser porque carece de la enzima que transforma E en la siguiente, y, en consecuencia, E debe ser la primera).

A Mutante 1 Mutante 2 Mutante 3 Mutante 4 Mutante 5

3 La expresin del mensaje gentico

Una vez establecido por Beadle y Tatum en 1948 el paralelismo entre genes y enzimas y tras ser propuesto, en 1953, el modelo de doble hlice por Watson y Crick, este ltimo propuso la denominada hiptesis de la colinearidad. En ella se establece una correspondencia entre la secuencia de nucletidos del gen y la secuencia de aminocidos de la enzima que el gen codifica. En el mecanismo por el cual se pasa de una secuencia a la otra se pueden diferenciar dos procesos: uno se realiza en el ncleo, y otro en los ribosomas. En el ncleo se pasa de una secuencia de bases nitrogenadas de un gen (ADN) a una secuencia de bases nitrogenadas complementarias pertenecientes a un ARNm. Este proceso se denomina transcripcin. En los ribosomas se pasa de una secuencia de ribonucletidos de dicho ARNm a una secuencia de aminocidos. Este proceso se denomina traduccin. ADN
transcripcin
5

ARNm

traduccin
5

protenas
295

ADN

C G T A G T G C C C T G C G C T A G

1. El mecanismo de la transcripcin
La transcripcin es el paso de una secuencia de ADN a una secuencia de ARN, ya sea ARNm, ARNr o ARNt. Para ello intervienen el ADN, ribonucletidos trifosfato de A, C, G y U, las ARN-polimerasas (ARNp) y los cofactores sigma () y rho (). Se pueden distinguir dos mecanismos diferentes, segn se trate de bacterias o de clulas eucariotas.

I En bacterias (fig. 5)
En el caso de la sntesis de ARNm se distinguen las siguientes etapas: 1. Iniciacin. En primer lugar, la ARN-polimerasa se asocia con el cofactor sigma (), que permite a esta enzima reconocer y asociarse a una regin concreta del ADN denominada promotor, que a veces es comn a varios genes. En esta regin se han distinguido dos secuencias de consenso, iguales o parecidas a TTGACA y a TATAAT, que se encuentran a distintas distancias antes del punto de inicio. Se han descubierto tambin secuencias intensificadoras, que favorecen la transcripcin. A continuacin, la ARN-polimerasa pasa de una configuracin cerrada a una configuracin abierta y desenrolla, aproximadamente, una
296

T A T G C G C A T T A T G C G C

ARNp en configuracin cerrada asociada a la regin promotor.

T A T G C C G A T T A T G C C G A T

C G C G C T A G C

T A T G C T A A T G

T A T G C T A A T

G G C G C T A C G G T A C

ARNp favoreciendo el primer enlace fosfoestrico del ARN.

G C G C T G A T A T G C T A A T T A T G C T A A T G G C G C T A G C G

p
pp

C T A T
G AO p

T A T G C G C A T

A T T G C C G A T

T A T G C T A A T

C G G C G C T A G

C G T A T G C T A A T

G G C G C T A C

C G C A T T A T G C G C A T

ARNp en configuracin abierta desenrollando una vuelta y aadiendo el primer ribonucletido.

G A C T A T G C C G A T G G C G C T A G C T A T G C T A A T G G C G C T A C G T A T G C T A A T C

G G C C

ARNp avanzando a lo largo del ADN. ARN

p pp GpApUp

Ap U
C A G T

T G C T A T A T A T G C T A A T G C C T T G

pC pA

C G G C G C T A G

T A T G C T A A T

T A T G C G C A T

A C G

A OH p Gp

G G C G C T A G

C C G A T

T G A

p pp

T A T T

G
H O

5 Transcripcin en bacterias.

vuelta de hlice permitiendo la polimerizacin de ARN a partir de slo una de las hebras que se utiliza como patrn. Posteriormente se separa el cofactor . 2. Elongacin o alargamiento. El proceso contina a razn de unos 40 nucletidos por segundo. A medida que la ARN-polimerasa recorre la hebra de ADN patrn hacia su extremo 5, se sintetiza una hebra de ARN en direccin 5 3. Ejemplo de transcripcin: Secuencia de ADN: 3... TAC GC T ... 5 Secuencia de ARNm: 5... AUGCGA ... 3 3. Finalizacin. La finalizacin presenta dos variantes: una en la que se precisa el cofactor , y otra en la que no se precisa. La finalizacin se produce al llegar a una secuencia rica en G y C, que posibilita la autocomplementariedad de la cola del ARN, lo que da lugar a un bucle final que provoca su separacin del ADN. Entonces, ste vuelve a formar la doble hlice y la ARNpolimerasa se separa. 4. Maduracin. Si lo que se sintetiza es un ARNm, no hay maduracin; en cambio, si es un ARNt o un ARNr, hay un transcrito primario, que luego sufre un proceso de corte y empalme.

I En eucariontes (fig. 6)
En primer lugar, hay que resaltar que existen tres tipos de ARN-polimerasa, segn el tipo de ARN que se ha de sintetizar. En segundo lugar, hay que destacar que los genes estn fragmentados de forma que siempre es necesario un proceso de maduracin en el que se eliminen las secuencias sin sentido o intrones y se empalmen las secuencias con sentido o exones. Excepcionalmente, hay genes, como los de las histonas, que no presentan intrones. Finalmente, hay que recordar que en los eucariontes el ADN est asociado a histonas formando nucleosomas. Se ha observado que en genes que se transcriben continuamente (como los de ARNr) el ADN est siempre extendido, en otros siempre est, aparentemente, en forma de nucleosomas, y en otros hay transicin a la forma extendida slo durante la transcripcin. En el caso de la sntesis de ARNm se distinguen las siguientes etapas: 1. Iniciacin. Existe una regin del ADN denominada regin promotora, donde se fija la ARN-polimerasa II, que consta de dos seales denominadas secuencias de consenso: la CAAT y la TATA, a distintas distancias antes del punto de inicio. 2. Alargamiento o elongacin. El proceso de sntesis contina en sentido 5 3. Al cabo de 30 nucletidos transcritos se aade una caperuza constituida por una metil-guanosn-trifosfato invertida (m7 Gppp-...) al extremo 5. 3. Finalizacin. La finalizacin de la sntesis del ARNm parece ser que est relacionada con la secuencia TTATTT. A continuacin, interviene la enzima poliA-polimerasa que aade al extremo final 3 un segmento de unos 200 ribonucletidos de adenina, la llamada cola de poliA, al transcrito primario o pre-ARNm, tambin llamado ARN heterogneo nuclear (ARNhn). 4. Maduracin. Se produce en el ncleo. La maduracin la realiza una enzima denominada ribonucleoprotena pequea nuclear (RNPpn) que es un complejo protena-ARNpn. El ARNpn contiene unas secuencias que son complementarias de las de los dos extremos de los intrones. Al asociarse, el intrn se curva y se desprende. A continuacin, actan ARN-ligasas especficas que empalman los exones.
ppp 5' ADICIN DE LA CAPERUZA ARN polimerasa II INICIACIN ADN

m7 Gppp caperuza 5' ALARGAMIENTO

m7 Gppp caperuza 5'

FINALIZACIN

ADICIN DEL POLI-A m7 Gppp caperuza 5' AAA

OH 3' ARN-polimerasa II

poli-A-polimerasa

AUG E

m7 Gppp caperuza 5'

I E I

UAA

AAAAAAAAAA

Transcrito primario de ARN (precursor)

MADURACIN (RNPpn)

AUG

UAA

m7 Gppp ARNm

AAAAAAAAAAA

OH

6 Transcripcin en eucariotas.

El ARNt y el ARNr presentan tambin procesos de maduracin. En el ARNt cabe destacar la adicin del triplete CCA en el extremo 3. La maduracin del ARNr se inicia con el ARNn, tal y como se explic anteriormente.
297

4 La clave gentica
La interpretacin de la clave gentica, es decir, la relacin que hay entre la secuencia de nucletidos y la secuencia de aminocidos, se consigui a partir de los siguientes descubrimientos: En 1955, Severo Ochoa y Grunberg-Manago aislaron la enzima polinucletido fosforilasa, capaz de sintetizar ARNm sin necesidad de modelo y a partir de cualquier tipo de nucletidos que hubiera en el medio. As, a partir de un medio en el que slo haba UDP, se sintetizaba un ARNm en el que nicamente se repeta el cido uridlico, el llamado poli-U (... UUUUUU...). En 1961, Nirenberg dispuso una serie de veinte tubos con los veinte aminocidos proteicos en cada uno. En cada tubo haba un aminocido diferente marcado con C14. En todos y cada uno de los tubos aadi el poli-U y todos los elementos necesarios para la sntesis proteica. Observ que slo apareca un polipptido radiactivo en el tubo donde se haba marcado la fenilalanina. A partir de un poli-C se identific su colinearidad con la prolina. A partir de un poliG no se obtuvieron resultados satisfactorios y a partir de un poli-A se obtuvo la polilisina. Dado que slo hay cuatro tipos de nucletidos y que intervienen veinte tipos de aminocidos, la colinearidad no se poda establecer uno a uno, ni entre dupletes de nucletidos (42 16), sino, como mnimo, entre tripletes de nucletidos (43 64) y aminocidos. Posteriormente, y mediante mezclas proporcionadas de diferentes ribonucletidos difosfato, se acab de deducir la clave gentica y confirmaron que la colinearidad deba establecerse entre los tripletes de nucletidos y los aminocidos (cuadro I). La expresin cdigo de la vida pas de ser una metfora y til hiptesis de trabajo a una realidad verificada experimentalmente. En la clave gentica se puede observar que para algunos aminocidos hay varios tripletes. Generalmente difieren en un solo nucletido (por ejemplo: UAU, UAC son Tyr). Esta situacin se denomina degeneracin de la clave gentica y representa una ventaja, ya que, aunque se produjera un error en la copia de un nucletido, seguira la colinearidad entre el triplete y el aminocido. Por otro lado, si slo hubiera veinte tripletes traducibles, habra 44 tripletes (64 20 44) sin sentido y un simple error en un nucletido de un triplete lo convertira probablemente en un triplete sin sentido, interrumpindose as la biosntesis. Con la clave actual simplemente habra un aminocido diferente y esto, salvo que pertenezca al centro activo de una enzima, no es peligroso.
298
Segunda letra C A 7 Severo Ochoa. Premio Nobel en 1959.

Primera letra (extremo 5)

UUU phe UCU UCC ser UUC U UUA leu UCA UCG UUG

UAU tyr UAC UAA stop UAG stop

UGU cys U C UGC UGA stop A UGG trp G

Tercera letra (extremo 3)

U CUU CCU CAU his CGU CUC leu CCC pro CAC CGC arg C C A CUA CCA CAA gln CGA G CUG CCG CGG CAG

AUU AUC ile A AUA AUG met

ACU ACC thr ACA ACG

AAU asn AGU ser U C AAC AGC AAA lys AGA arg A G AAG AGG
U GAU asp GGU GGC gly C GAC A GAA glu GGA G GGG GAG

GUU GCU GUC val GCC ala G GUA GCA GUG GCG
CUADRO I. Clave gentica.

CUESTIONARIO 3
1. En un experimento de sntesis artificial de ARNm, en que se dispone de un 70% de ribonucletidos de citosina y un 30% de ribonucletidos de uracilo, decir: a) qu tipos de tripletes son posibles?, b) qu porcentaje habr de tripletes CCC?, y c) qu porcentaje habr de tripletes con dos U y una C? 2. En un experimento de sntesis de protenas in vitro se ha utilizado un ARNm artificial que contiene una combinacin al azar de nucletidos de uracilo y adenina; adems, se han aadido ribosomas distintos, ARNt, ATP, enzimas y los 20 aminocidos. Sin embargo, todas las cadenas polipeptdicas obtenidas contienen muy pocos aminocidos. Podras dar alguna explicacin a estos resultados? 3. Una clula posee una hebra de ADN formada por 120.000 pares de nucletidos. Calcular el nmero de protenas de masa molecular igual a 20.000 daltons, que pueden ser codificadas por esta hebra de ADN. Suponer una masa molecular media de 100 daltons para cada aminocido.

5 La traduccin o biosntesis de las protenas

En la biosntesis de las protenas podemos distinguir las siguientes etapas: a) Activacin de los aminocidos. b) Traduccin: iniciacin de la sntesis. Elongacin o alargamiento de la cadena polipeptdica. Finalizacin de la sntesis. c) Asociacin de varias cadenas polipeptdicas y, a veces, de grupos prostticos, para constituir las protenas. 1. Activacin de los aminocidos. Los aminocidos, en presencia de la enzima aminoacilARNt-sintetasa y de ATP, son capaces de asociarse a un ARNt especfico y dar lugar a un aminoacil-ARNt, liberndose AMP, PPi y quedando libre la enzima, que vuelve a actuar. La unin del aminocido a su ARNt especfico se realiza entre su grupo carboxilo ( COOH) y el radical OH del extremo 3 del ARNt (fig. 8).

a
ARNt PPi aa aa ATP AMP aa AMP

aa AMP

Aminoacil-ARNt Aminoacil-ARNt-sintetasa Aminoacil-ARNt-sintetasa

Adenina

H2C O OP O C C

H O OC C NH2 R Aminocido

8 Activacin de los aminocidos. a) Formacin de un aminoacil-ARNt. b) Aminoacil-ARNt.

CUESTIONARIO 4
1. Escribe la secuencia de ARNm que se transcribira de la siguiente cadena de ADN. ADN: 3' ... TACAAGTACTTGTTTCTT ... 5' 2. Escribe la secuencia de ARNm que se transcribira de la siguiente cadena de ADN. ADN: 5' ... TACAAGTACTTGTTTCTT ... 3' 3. En este segmento de la regin promotor de ADN procaritico se observa una secuencia de consenso a 10 nucletidos del inicio de la transcripcin. Encontrala e indicar cmo ser el principio del ARNm. 3' ... TCT-TAT-AAT-ATC-GTA-GCA-TAC-AGC-TAG-AAC-GAT ... 5'

5'

Aminoacil-ARN-transferencia

4. Tienen una longitud parecida los genes de procariotas y de eucariotas que codifican para una misma cadena polipeptdica? Y los respectivos ARNm?

299

2. Primera etapa de la traduccin: la iniciacin de la sntesis. En las bacterias, el ARNm no experimenta maduracin. Incluso antes de acabarse su sntesis ya se empieza a traducir. El ARNm se une a la subunidad menor de los ribosomas gracias a una secuencia inicial llamada legin lder, que no se traduce, en la que hay unos 10 nucletidos complementarios con el ARN ribosomtico. A stos se asocia el aminoacil-ARNt, gracias a que el ARNt tiene, en una de sus asas, un triplete de nucletidos denominado anticodn, que se asocia al primer triplete codn del ARNm segn la complementariedad de las bases. A este grupo de molculas se une la subunidad ribosmica mayor, formndose el complejo ribosomal o complejo activo que posee dos sitios de unin o centros: el centro peptidil o centro P, donde se sita el primer aminoacil-ARNt, y el centro aceptor de nuevos aminoacil-ARNt o centro A. Todos estos procesos precisan gasto de GTP. El primer triplete que se traduce es el AUG, que corresponde a la formilmetionina. Posteriormente, este aminocido suele ser retirado. En las clulas eucariotas, el ARNm es sintetizado en el ncleo y antes de salir experimenta un proceso de maduracin. En el extremo 5 lleva una caperuza constituida por una metil-guanosn-trifosfato, que permite su identificacin por los ribosomas, y a continuacin la llamada regin lder, que no se traduce. Despus est el triplete AUG que se traduce por el aminocido metionina que, frecuentemente, despus es retirado. 3. Segunda etapa de la traduccin: elongacin de la cadena polipeptdica. Al centro A llega el segundo aminoacil-ARNt. El radical carboxilo del aminocido iniciador se une con el radical amino del aminocido siguiente mediante enlace peptdico. Esta unin es catalizada por la enzima peptidil-transferasa. El centro P queda, pues, ocupado por un ARNt sin aminocido que sale del ribosoma. Se produce entonces la translocacin ribosomal. El dipeptidilARNt queda ahora en el centro P. Todo ello precisa GTP. 4. Tercera etapa de la traduccin: la finalizacin de la sntesis. El final de la sntesis viene informado por los llamados tripletes sin sentido. Son tres: UAA, UAG y UGA. No existe ningn ARNt cuyo anticodn sea complementario de ellos. Son reconocidos, en cambio, por los factores proteicos de liberacin (FR) que precisan gasto de GTP para actuar. Se instalan
300

sobre el centro A y provocan que la peptidiltransferasa haga interaccionar el ltimo grupo COOH con el agua, con lo que queda liberada la cadena polipeptdica. A continuacin, se separan el ARNm y las dos subunidades ribosomales (fig. 9). Un mismo ARNm, si es lo suficientemente largo, puede ser traducido por varios ribosomas a la vez, uno detrs de otro. Si se examina al microscopio electrnico, se observa como un rosario de ribosomas que se denomina polirribosoma. 5. Asociacin de varias cadenas polipeptdicas para constituir las protenas. A medida que se va sintetizando la cadena polipeptdica, sta va adoptando una determinada estructura secundaria y terciaria mediante los enlaces por puente de hidrgeno y los enlaces disulfuro, respectivamente. Tras finalizar la traduccin hay pro-tenas enzimticas que ya son activas y otras que precisan eliminar algunos aminocidos para serlo. Generalmente, se produce la separacin del aminocido metionina o aminocido iniciador. Algunas enzimas necesi-tan asociarse a iones o a coenzimas para ser eficaces. Las protenas pueden estar constituidas por una cadena polipeptdica o por varias subunidades. Las subunidades pueden ser iguales o desiguales, segn que provengan del mismo gen o de genes diferentes.
CUESTIONARIO 5
1. Realiza el dibujo de dos instantes sucesivos de una translocacin ribosomal sobre un ARNm inventado. Consultar la clave gentica. 2. Si una bacteria produce 2.000 tipos de protenas y cada una tiene alrededor de 150 aminocidos, qu longitud mnima expresada en , debe tener su molcula de ADN? 3. Escribe la secuencia de ARNm que se transcribira de la siguiente cadena de ADN bacteriano y la secuencia de aminocidos que resultara de su traduccin. 5'... T A C A A G T A C T T G T T T C T T ... 3' 4. Supn que las dos guaninas se cambian por citosinas. Cmo afectaran estas mutaciones a la secuencia de aminocidos? 5. Supn, ahora, que las dos G se eliminan de la secuencia del ADN. Cmo afectaran estas otras mutaciones a la secuencia de aminocidos de la protena? 6. Qu secuencias nucleotdicas de ADN pueden codificar el siguiente tripptido? H2N- Lys - Met - Glu - COOH 7. Qu secuencias nucleotdicas de ADN pueden codificar el siguiente tripptido? HOOC- Lys - Met - Glu - NH2

NH 2
INICIACIN 3' NH2 ELONGACIN

Ser
NH2

5' CAU
AUG

5' P A
AUG

5' P A 3' 5' 3' NH2

NH 2
F

AUG P

5'

Enlace peptdico

3' 5'

Ser

Ser

Ser

Ser

5'

AUG P

UCA A NH
Me t Se r

5'

AUG P

UCA A

5'

AUG P

UCA A

AUG 5'

UCA P

CCG A

AUG

UCA P

CCG A

Primera translocacin FINALIZACIN

NH
2

3'

Pro 5' 5'

3' 5' HOOC

NH2

AUG

UCA P

CCG A

9 Biosntesis de las protenas. En el nombre de los diferentes aminocidos se ha sealado el lugar que ocupa el grupo amino, para resaltar que la unin con el ARNt o con el siguiente aminocido se realiza mediante el grupo carboxilo.

6 La regulacin de la expresin gentica

Las clulas no estn constantemente sintetizando todos los tipos de protenas sobre las cuales tienen informacin. Si as fuera, se producira un caos metablico. Es evidente, pues, que debe existir un sistema de regulacin. Como la cantidad de protenas sintetizadas depende directamente de la cantidad de ARNm presente en el citoplasma, y como la vida media de ste es muy corta (minutos), la cantidad de ARNm sintetizado regula los niveles enzimticos en el medio. Es, pues, suficiente con regular la sntesis de ARNm. sta depende, en los procariontes, del sustrato disponible, y en las clulas eucariotas de los organismos pluricelulares, del ambiente hormonal del medio interno. Fue en bacterias donde se descubri el modelo de control negativo o del opern y del control positivo o por AMP cclico (AMPc).

UAU

etc.

AUA

UAA

3'

G AU

UAA

3'

5'

1. El opern
El descubrimiento de cmo se controla la sntesis de ARNm se inici a partir del llamado efecto glucosa observado por J. Monod en 1947. Si a un medio de cultivo bacteriano de Escherichia coli con lactosa se aade glucosa, el nivel de la enzima -galactosidasa disminuye sensiblemente, y pasa de 5.000 a 5 molculas por clula. Esta disminucin es lgica, puesto que para conseguir glucosa ya no es preciso desdoblar la lactosa en glucosa y galactosa, reaccin que cataliza la -galactosidasa. Las enzimas aparecen slo cuando son necesarias y luego son degradadas. Posteriormente, durante los aos cincuenta, Jacob y Monod, trabajando con Escherichia coli, descubrieron que las enzimas reprimidas en el experimento
301

CGG

CGG

UGA

UGA

UAU

UGA

CAU

NH2 Met

NH2 Ser

Met

Met

CAU

UCA A NH2

3'

AUG P NH2

UCA A

Met

Met

UG A

Met

Met

NH2

Pro

UGA

CAU

CGG

UGA

UGA

CAU

a
i

ARNp p o

Represor z y a

ARNm

gen regulador de opern zona promotor zona operador

P O

El opern lac en estado normal

b
Z gen estructural de la galactosidasa ARNm i

ARNp p o z y a

gen estructural de la permeasa

gen estructural de la transacetilasa Represor asociado al inductor Galactosidasa Permeasa Transacetilasa Lactosa

El opern lac en presencia de lactosa

Glucosa galactosa

10 El opern lac de Escherichia coli.

11 Funcionamiento del opern lac.

anterior eran tres: la -galactosidasa, la -galactsido permeasa y la -galactsido transacetilasa. Todas ellas estn relacionadas con el metabolismo de la lactosa. De este hecho se concluy que el sustrato (glucosa) no slo reprima una enzima, sino todo el conjunto de enzimas que intervienen en una misma va metablica. En 1961, Jacob y Monod propusieron un modelo denominado opern, que explica cmo se efecta el control de la biosntesis proteica. En este modelo se diferencian dos tipos de genes: los genes estructurales y los genes reguladores. Los genes estructurales son los que codifican las protenas estructurales y las protenas enzimticas. Los genes reguladores son los que codifican las protenas cuya misin es controlar la actividad de los genes estructurales. Estas protenas se denominan represores. En el opern lac de Escherichia coli (fig. 10) hay un solo gen regulador y tres genes estructurales. stos se hallan contiguos y se transcriben todos a la vez. Junto al primer gen estructural que se transcribe, hay dos zonas especficas: la zona promotor, que es donde se fija la ARN-polimerasa, y la zona operador, que es donde se fija el represor.
302

En el opern lac, el represor producido por el gen regulador i se asocia a la zona operador e impide que la ARN-polimerasa, que est en la zona promotor, transcriba los genes estructurales. Este opern funciona segn la denominada induccin enzimtica, ya que existen unas molculas denominadas inductores, que en este caso son las molculas de lactosa, que, al asociarse con los represores, provocan en ellos unas alteraciones en su estructura. Debido a ello, estos represores pierden afinidad por la zona operador, y la ARN-polimerasa, al no encontrar obstculos para su actuacin, transcribe los genes estructurales (fig. 11). Existen otros operones que funcionan segn el sistema de represin enzimtica. Por ejemplo, el opern his de Escherichia coli es responsable de la sntesis de la histidina. Si al medio se aade histidina, desaparecen todas las enzimas necesarias para dicha sntesis. Este tipo de regulacin tambin se denomina represin por producto final. En ella, el represor en estado normal es inactivo, por lo que se fabrican constantemente las enzimas necesarias para producir la histidina; pero, si aparece otra molcula especfica denominada correpresor, en este caso la histidina, el represor se vuelve activo y el complejo represor-correpresor se fija sobre la zona promotor y reprime la sntesis enzimtica.

2. Control de la biosntesis proteica por AMP cclico

Adems del control de la biosntesis a cargo del opern, se ha descrito otro tipo de regulacin: la regulacin debida al AMP cclico. Esta molcula se forma a partir del ATP por la enzima adenilato-ciclasa, que est situada en la cara interna de la membrana citoplasmtica: ATP
adenilato ciclasa
5

AMPc PPi

El AMPc para actuar necesita el concurso de la protena denominada protena activadora del catabolito (CAP). El complejo CAP-AMPc tiene una gran afinidad por una zona que hay en el promotor, anterior al lugar donde se sita la ARN-polimerasa. Parece ser que, sin su presencia, la ARN-polimerasa tiene grandes dificultades para asociarse a su lugar en la zona promotor. Se ha comprobado que cuando aumenta el nivel de glucosa en la clula, disminuye el nivel de AMPc (por un mecanismo todava desconocido). No se forma, pues, el complejo CAP-AMPc, la ARNp no se puede fijar, y, por tanto, no se producen las enzimas para el metabolismo de la lactosa. Esto explica el efecto glucosa antes mencionado, que no quedaba aclarado en el modelo del opern. As pues, slo cuando se agota la glucosa, y adems hay presencia de lactosa, la bacteria produce las enzimas para metabolizar dicha lactosa (fig. 12).

segmentos de ADN que se encuentran fuertemente condensados no se expresan, mientras que los que estn extendidos, incluso sin formar nucleosomas y facilitando la accin de la ARN-polimerasa, sern los que se transcribirn. Segn las zonas que quedan condensadas aparece, durante el desarrollo embrionario, la diferenciacin celular y con ella la organognesis o formacin de rganos en el embrin. Segn el tipo de clula, habr unos receptores de membrana u otros y, por tanto, slo unas sern clulas diana respecto a unas hormonas determinadas. El control de la expresin gnica debida a las hormonas difiere segn se trate de hormonas lipdicas o proteicas. Hormonas lipdicas. Las hormonas lipdicas, como, por ejemplo, las esteroideas, dada su composicin, atraviesan muy fcilmente la membrana citoplasmtica. En el citoplasma se unen a protenas receptoras intracelulares y forman complejos hormona-receptor (H-R), que se dirigen al ncleo. All se fijan sobre secuencias determinadas del ADN e inducen la transcripcin de determinados genes, seguramente facilitando la descondensacin de ciertas zonas de ADN. Por ejemplo, las hormonas anabolizantes provocan la sntesis de protenas musculares. Hormonas proteicas. Las hormonas proteicas, dado el tamao de sus molculas, no pueden atravesar directamente la membrana citoplasmtica. Para ello se unen a protenas receptoras especficas de la membrana y se forma el complejo H-R. Este proceso provoca que la enzima adenilato ciclasa que est en la cara interna de la membrana citoplasmtica se active y pase el ATP a AMPc, que es llamado segundo mensajero (la hormona recibe el nombre de primer mensajero). El AMPc se dirige al ncleo y activa las protenas reguladoras de la transcripcin. De acuerdo con este mecanismo, la hormona no necesita penetrar en la clula, simplemente establece contacto con su membrana para estimular la formacin de AMPc, que se erige como mediador de los efectos biolgicos de la hormona en el interior celular.

3. El control de la expresin gnica en eucariontes

Las clulas de los organismos eucariticos pluricelulares con tejidos diferenciados responden sobre todo a las variaciones hormonales del medio interno. En ellas, las hormonas provocan respuestas similares a las que el sustrato provoca en bacterias. Aunque todas las clulas tienen el mismo ADN, no en todas se manifiesta la misma informacin. (Ah radica la clave del, en cierto modo, todava enigma de la diferenciacin celular.) Por ejemplo, los genes de la hemoglobina slo se expresan en los eritrocitos, los genes de la melanina en las clulas epidrmicas, etc. Los

AMPc Gen regulador ARNp gen 1 gen 2 gen 3

12 Control de la biosntesis proteica por AMPc.

CAP

303

COMPARACIN ENTRE BACTERIAS Y CLULAS EUCARIOTAS EN LOS PROCESOS DE REPLICACIN, TRANSCRIPCIN Y TRADUCCIN Bacterias 1. El ADN no est enrollado formando nucleosomas, y por lo tanto no precisa desenrollarse para ser ledo. 2. Slo hay una burbuja de replicacin. Los fragmentos de Okazaki tienen de 1.000 a 2.000 nucletidos. 3. Los genes son continuos. 4. La transcripcin se realiza en el citosol (el nucleoide est inmerso en el citosol). 5. Hay una sola enzima ARN-polimerasa sea cual sea el tipo de ARN a sintetizar. 6. Inicio de la transcripcin. Las secuencias de consenso ms frecuentes en la regin promotora son: TTGACA y TATAAT. 7. Final de la transcripcin. Finaliza cuando el ARN presenta una secuencia que por autocomplementariedad se dobla, forma un bucle final y por ello se separa. 8. El ARNt y el ARNr proceden de un transcrito primario madurado (cortes y empalmes). El ARNm, a diferencia del eucaritico, se sintetiza directamente, sin previa maduracin (no hay adicin de caperuza, ni eliminacin de intrones, ni adicin de cola de Poli-A). 9. La traduccin del ARNm se inicia antes de que acabe de ser sintetizado. 10. Los ribosomas reconocen al ARNm gracias a que la regin lder contiene una secuencia que se complementa con el ARN ribosmico. El primer triplete que se traduce es el codn AUG ponindose el aminocido formil-metionina. 11. El ARNm puede ser policistrnico, es decir, da lugar a ms de una protena. Clulas eucariotas 1. El ADN est enrollado formando nucleosomas, por lo que generalmente debe desenrollarse. 2. Hay muchas burbujas de replicacin o replicones (3.500 en el genoma de D. melanogaster). Los fragmentos de Okazaki tienen de 100 a 200 nucletidos. 3. A menudo los genes no son continuos sino que presentan intrones intercalados. 4. La transcripcin se realiza en el interior del ncleo. 5. Cada tipo de ARN es sintetizado por uno de los tres tipos de enzimas ARN-polimerasas. 6. Inicio de la transcripcin. Las secuencias de consenso ms frecuentes en la regin promotora son: CAAT y TATA. 7. Final de la transcripcin. Finaliza cuando se llega a la secuencia TTATTT (en el ARN corresponde a AAUAAA). 8. Todos los transcritos primarios experimentan maduracin, pero slo en el pre-ARNm hay adicin de una caperuza (un mGTP invertido) al extremo 5', eliminacin de los intrones, y adicin de cola de Poli-A. 9. El ARNm debe ir desde el ncleo al citosol, donde se realiza la traduccin. 10. Los ribosomas reconocen el ARNm gracias a la caperuza, y consideran al codn AUG ms prximo a ella como el primero, y lo traducen por metionina.

11. El ARNm siempre es monocistrnico.

Actividades
Problemas de gentica molecular
1. Indica a qu tipo de cido nucleico corresponden las siguientes secuencias de bases nitrogenadas: a) 5' ... C C G A T C ... 3' b) 3' ... G G A T C C ... 5' c) 3' ... U A C C G A ... 5' d) 5' ... A C C G G C ... 3' 2. Qu polipptido es codificado por el siguiente trozo de ADN? 3' ... C T T C G T C A A A T G ... 5' 3. Escribe una secuencia de ADN que codifique la sntesis del polipptido H2N-Cys - Gly - Met - Ala-COOH 4. Cuntas secuencias diferentes de ADN llevan informacin para la sntesis del polipptido H2N-Gly - Cys - Gly - Ala - Ser-COOH? 5. Indica en qu tripletes de ARNm, de los que codifican la Gly, es ms probable que la sustitucin al azar de una sola base: a) Codifique la Ser c) Codifique la Met b) Sea un codn sin sentido 6. Supongamos la hebra de ADN: 3' ... A A T A C A A A T ... 5' Durante la transcripcin de la misma hay un error de tal manera que frente al nucletido de C se sita otro de citosina, en lugar de uno de guanina. Se modificar la secuencia peptdica codificada por esa hebra de ADN?

304

Actividades

Ejercicios
1. Completar la siguiente tabla, considerando que la lectura es de izquierda a derecha.
ADN de doble cadena ARNm ARNt Aminocidos

C C A Trp T G A G C A 2. A partir de la siguiente secuencia de nucletidos que se transcribe, y que codifica un fragmento de una determinada protena, consultando la tabla del cdigo gentico, indicar: a) La secuencia del ARNm transcrito. b) La estructura primaria del fragmento de protena sintetizado. ADN = 5 ... TCA-CCG-TAT-GAG-AAT-CAT ... 3. 3. Completar los espacios en blanco consultando la tabla del cdigo gentico.
ADN ARNm ARNt Aminocidos

4. En relacin con el cdigo gentico, responder a las siguientes preguntas: a) En cuntos casos se podra conocer el aminocido incorporado si slo se conocieran los dos primeros nucletidos del codn? b) En cuntos casos se podra conocer el codn si se conoce el aminocido incorporado? c) Cules son los aminocidos que ms fcilmente son sustituidos por otros al cambiar solamente un nucletido del codn? 5. Cul es la secuencia de un segmento de ADN de doble hlice que ha servido de molde para sintetizar el siguiente ARNm: 5... A U C C U C A U G ... 3? 6. Un ARNm, con informacin para una protena, es traducido por ocho ribosomas. Calcular el nmero de veces que deber ser transcrito dicho gen para que se formen 6.000 molculas de protena. 7. Contestar S o NO.
Proc. Euc.

a) EL ARN transcrito primario es ya el ARNm? b) Se realiza la transcripcin y la traduccin en compartimientos distintos? c) La transcripcin y la traduccin son simultneas? 8. Si todas las clulas de un organismo poseen la misma informacin en el ADN, cmo explicaras la existencia, en un mismo individuo, de clulas con aspectos y funciones distintos?

3' T U C Trp A C T

U
C T 3' Qu clulas se representan en las fotografas?

305

19

Mutacin y evolucin

N D I C E
INFORMACIN 1 Las mutaciones. 2 Las mutaciones gnicas.
Concepto y clasificacin. Causas de las mutaciones gnicas. Las mutaciones gnicas y sus sistemas de reparacin.

3 Las mutaciones cromosmicas. 4 Las mutaciones genmicas. 5 Los agentes mutgenos. 6 Mutacin y evolucin. 7 La gentica de las poblaciones.
Poblacin gentica y frecuencias gnicas. Concepto de especie y especiacin.

Los grandes reptiles del Cretcico se extinguieron por motivos an hoy discutidos. Lo que est claro es que su tasa de mutacin fue insuficiente para generar formas capaces de sobrevivir en un medio que haba cambiado rpidamente (seleccin natural).

ACTIVIDADES
Ejemplos significativos de evolucin.

En 1901, Hugo de Vries, trabajando en la especie vegetal Oenothera lamarckiana, encontr inesperadamente entre la descendencia una forma gigante. La denomin forma mutante y cre el concepto de mutacin para referirse a los cambios inesperados en la informacin biolgica. Posteriormente se ha comprobado que, a diferencia del caso anterior, las mutaciones suelen producir cambios muy pequeos y son muy poco frecuentes. Por ello la evolucin es un proceso que requiere miles o millones de aos.

306

Las mutaciones

nuevo organismo tendrn la misma informacin que la clula cigoto. Las mutaciones pueden aparecer espontneamente (mutaciones naturales) o pueden ser provocadas artificialmente (mutaciones inducidas) mediante radiaciones y ciertas sustancias qumicas, los denominados agentes mutgenos. En los humanos la tasa de mutacin espontnea es de un gen mutado por cada 100.000 genes. Dado que en la especie humana hay unos 100.000 genes contenidos en 23 cromosomas, resulta que por trmino medio hay un gen mutado en cada gameto. Como cada cigoto se forma a partir de dos gametos, en cada generacin se incorporan dos genes mutados por individuo y, por tanto, millones, si se considera toda la poblacin mundial (estos valores son considerados demasiado altos por algunos autores). Es la llamada carga gentica de efectos negativos. sta va aumentando en cada generacin, sobre todo en las poblaciones ms desarrolladas, ya que en ellas el uso de frmacos permite la supervivencia de los afectados. Segn la extensin del material gentico afectado, se distinguen tres tipos de mutaciones: Mutaciones gnicas (alteraciones de la secuencia de nucletidos de un gen). Mutaciones cromosmicas (alteraciones de la secuencia de genes de un cromosoma). Mutaciones genmicas (alteraciones en el nmero de cromosomas).

Las mutaciones son alteraciones al azar del material gentico (ADN en las clulas y ADN o ARN en los virus). Normalmente suponen deficiencias y pueden llegar a ser letales. Por lo general son recesivas y permanecen ocultas. Pese a ser normalmente negativas para el individuo, comportan un aspecto positivo para la especie, ya que aportan variabilidad a la poblacin. Ello permite que, si se produce un cambio en el ambiente y las nuevas condiciones son muy adversas para los individuos normales, la existencia de individuos mutantes hace que pueda haber algunos que soporten esas condiciones y que, a travs de ellos, la especie no se extinga. Este proceso se denomina seleccin natural. Las mutaciones permiten, pues, la evolucin de las especies, y con ella la continuidad de la vida a lo largo de millones de aos. Las mutaciones pueden darse en clulas somticas (mutaciones somticas) y en clulas reproductoras (mutaciones germinales). Las mutaciones que se dan en las clulas somticas, salvo que las conviertan en clulas cancerosas, carecen de importancia, ya que si las clulas no son viables, pueden ser sustituidas por otras clulas, y si son viables, al dividirse por mitosis, darn lugar a una colonia o clon de clulas mutantes iguales a la primera, sin ms complicaciones. Las mutaciones germinales s son trascendentales, ya que todas las clulas del

Las mutaciones gnicas

b) Transversiones. Sustituciones de una purina por una pirimidina, o viceversa. Las sustituciones provocan la alteracin de un nico triplete y, por tanto, salvo que indiquen un triplete de parada, o un aminocido del centro activo de una enzima, no suelen ser perjudiciales. Constituyen solamente el 20 % de las mutaciones gnicas espontneas (cuadro I). Mutaciones por prdida o insercin de nucletidos. Estas mutaciones se denominan deleciones o adiciones, respectivamente. Como el mensaje gentico se traduce de triplete en triplete, las deleciones y adiciones, salvo que se compensen entre s, producen un corrimiento en el orden de lectura y, por tanto, alteran todos los tripletes siguientes. Sus consecuencias suelen ser graves. Constituyen el 80 % de las mutaciones gnicas espontneas (cuadro I).
307

1. Concepto y clasificacin
Las mutaciones gnicas son alteraciones en la secuencia de nucletidos de un gen. Por ello tambin se las denomina puntuales. Segn el tipo de alteracin se clasifican en mutaciones por sustitucion de bases, y en mutaciones por prdida o insercin de nucletidos. Mutaciones por sustitucin de bases. Son cambios de una base por otra. Como hay dos tipos de bases, las pricas (A y G), y las pirimidnicas (T y C), se distinguen dos tipos de sustituciones de bases: a) Transiciones. Sustituciones de una purina por otra, o de una pirimidina por otra.

ADN normal Normal ARNm normal Protena normal ADN mutante Transicin ARNm mutante Protena normal ADN mutante Transversin ARNm mutante Protena alterada ADN mutante Delecin ARNm mutante Protena alterada ADN mutante Adicin ARNm mutante Protena alterada

3' . . 5' . . H2N 3' . . 5' . . H2N 3' . . 5' . . H2N 3' . . 5' . . H2N 3' . . 5' . . H2N

TAC AUG Met TAC AUG Met TAC AUG Met TAC AUG Met TAC AUG Met

GGA CCU Pro GGA CCU Pro GGA CCU Pro GGG CCG Pro GGA CCU Pro

GAT CUA Leu GAC CUG Leu GTT CAA Gln ATT UAA Stop GGA CCU Pro

TCA AGU Ser TCA AGU Ser TCA AGU Ser CAA GUU

AGA UCU Ser AGA UCU Ser AGA UCU Ser GAG CUC

GAG CUC Leu GAG CUC Leu GAG CUC Leu AG UC

. . 5' . . 3' COOH . . 5' . . 3' COOH . . 5' . . 3' COOH . . 5' . . 3'

TTC AAG Lys

AAG UUC Phe

AGA UCU Ser

G . . 5' C . . 3' COOH

CUADRO I. Mutaciones gnicas.

CUESTIONARIO 1
1. Las mutaciones son alteraciones al azar o dirigidas hacia un cambio concreto? 2. Las mutaciones, generalmente, mejoran o empeoran la informacin inicial? Por qu son la base de la evolucin de las especies? 3. En una determinada hebra de ADN se han producido las siguientes alteraciones: en lugar de una A hay una G, en lugar de una T hay una C, en vez de una G hay una C, y adems falta un nucletido de C. Qu tipo de mutacin es cada una de ellas? Cul es la ms importante?

2. Causas de las mutaciones gnicas

Las mutaciones gnicas pueden producirse por tres causas: por errores de lectura durante la replicacin del ADN, por lesiones fortuitas, como, por ejemplo, la rotura del enlace que une una base nitrogenada a la desoxirribosa, o por transposiciones (cambios de posicin) de ciertos segmentos del gen. Errores de lectura. Los errores de lectura que pueden aparecer durante la replicacin del ADN pueden deberse a dos causas: a los cambios tautomricos y a los cambios de fase. a) Los cambios tautomricos. Cada base nitrogenada puede presentarse en dos formas diferentes denominadas formas tautomricas o tautmeros, una es la normal y la otra la rara. Ambas formas estn en equilibrio, y espontneamente se pasa de una a la otra, lo que se denomina cambio tautomrico. Esto, si sucede durante la replicacin, implica mutaciones, ya que cambia la base complementaria en la nueva hebra de ADN. Por ejemplo, la forma
308

CAUSAS QUE PRODUCEN MUTACIONES GNICAS

Errores de lectura

Cambios tautomricos Cambios de fases Despurinizaciones Desaminaciones Dmeros de timina Secuencias de insercin Un solo gen Transposones

Lesiones fortuitas

Transposiciones

normal de la G se complementa con la C, mientras que la forma rara de G, es decir, su forma tautomrica, lo hace con la T (fig. 1). b) Los cambios de fase. Son deslizamientos de la hebra que se est formando sobre la hebra molde, de forma que quedan bucles al volverse a emparejar. El crecimiento sigue y la diferencia queda fijada, originndose as la mutacin (fig. 2).

H3C O H N O H N H H N O Forma rara de la citosina N H N N Adenina N N O N Citosina N Forma rara de la adenina H N N H N N Guanina N H N N H N Forma rara de la timina H N O N N

CH3 O H N H O H Timina N H H N H N N N N O N

Forma rara de la guanina

1 Emparejamientos errneos debidos a las formas tautomricas.

Cambio de fase

Adicin de una T ms

T
C G T T T T G C A A A A C C G T T T G C A A A A C

T
C G T T T T G G C A A A A C

2 Cambio de fase que da lugar a una adicin. Los cambios de fase pueden dar lugar a adiciones y a deleciones. Estas secuencias repetidas reciben el nombre de puntos calientes por ser lugares mucho ms mutables que otros.

ocumento 1

Mutacin introducida por un cambio tautomrico en una de las bases del ADN
Los cambios tautomricos producen mutaciones por transicin. Se acaba produciendo un ADN mutado en que, en vez del par G C, habr el par A T.
ACG T C

Forma tautomrica de la guanina

G TC T A G

TGCAG ACG T C TGT AG AC A T C

Tipo silvestre

ACG T C TGCA C

Duplicacin del ADN

AC TG
C
G

Segunda duplicacin del ADN

TC

TGT AG

Mutante

ACG T C TGCAG ACG T C TGCAG ACG T C TGCAG

ADN del progenitor

Tipo silvestre

Resultado de la primera generacin

Tipo silvestre

Resultado de la segunda generacin

309

 Lesiones fortuitas. Las lesiones fortuitas son alteraciones de la estructura de uno o de varios nucletidos, que aparecen de forma natural. Las ms frecuentes son: a) Despurinizacin. Prdida de purinas por rotura del enlace entre stas y las desoxirribosas. Se producen a razn de unas 5.000 a 10.000 por da, en cada clula humana. b) Desaminacin. Prdida de grupos amino en las bases nitrogenadas, que entonces se emparejan con una distinta de la normal. Se producen unas 100 por genoma y da. c) Dmero de timina. Enlace entre dos timinas contiguas. Generalmente provocado por los rayos ultravioleta de la radiacin solar (fig. 3). Transposiciones. Son cambios de lugar espontneos de determinados segmentos de ADN, los denominados elementos genticos transponibles. stos pueden ser menores que un gen (como las llamadas secuencias de insercin), un gen, o un grupo de genes (como los denominados transposones). Las transposiciones pueden producir mutaciones gnicas si el elemento gentico transpuesto se sita dentro de un gen, o mutaciones cromosmicas si pasa a un lugar donde no hay un gen, ya sea dentro del mismo cromosoma o incluso a otro cromosoma (fig. 4).

Timina Timina

Esqueleto de desoxirribosas Rayos ultravioleta

Dmero de timina

3 Los rayos ultravioleta provocan la polimerizacin de la timina.

Centro de insercin

ADN aceptor

Secuencias de insercin presentes en cada extremo

Transposn

CUESTIONARIO 2
1. En qu triplete de ARNm de los que codifican la arginina es ms probable que la sustitucin de una sola base codifique el triptfano? 2. En qu triplete de ADN de los que codifican la prolina es ms probable que la sustitucin de una sola base codifique la histidina? 3. Realiza un esquema de cmo a partir del par A T, si durante la replicacin de la A se empareja por error con una C en lugar de con una T, acaba transformndose en el par G C. Qu tipo de mutacin es? Genes mviles

Transposn insertado

4 Transposones.

3. Las mutaciones gnicas y sus sistemas de reparacin

La replicacin del ADN es un proceso que precisa de una gran precisin. Se ha observado que la ADN-polimerasa posee una actividad exonucleasa denominada correccin de pruebas, que reduce drsticamente la posibilidad de cometer errores. Esta actividad consiste en que la ADN-polimerasa, antes de aadir un nuevo nucletido, comprueba si el anterior es el correcto, y si no lo es, lo retira y lo sustituye por el correcto. A pesar de ello deja un nucletido equivocado por cada 107 nucletidos aadidos. Este
310

valor es admisible en un ADN pequeo como el bacteriano, pero no en el ADN de las clulas eucariotas porque, al ser mucho mayor, la probabilidad de contener equivocaciones es demasiado alta. Para evitar este problema existe un sistema de enzimas, llamado sistema de reparacin, que constantemente revisa el ADN recin sintetizado y arregla estas lesiones. Estos sistemas rebajan el error a slo uno por cada 109 nucletidos replicados. Este error heredable puede suponer una desventaja para unos pocos individuos, pero permite una variabilidad en la descendencia que posibilita la supervivencia de la especie frente a posteriores cambios del medio.

ocumento 2
As, la ADN-polimerasa, a pesar de polimerizar 500 nucletidos por segundo en bacterias (50 nucl/s en mamferos), slo comete un error por cada 107 nucletidos. Este grado de precisin es suficiente para las bacterias, cuyo ADN es de 3 106, pero no en organismos superiores que contienen 3 109 pares de nucletidos por clula, y que tienen billones de clulas. Una tasa de mutacin de 107 supone 300 mutaciones por clula (3 109/107 300) en cada duplicacin del ADN en estos organismos; y si se considera que en los humanos el ADN del cigoto se duplica unos mil billones de veces, el nmero de mutaciones sera tan elevado que se perdera la informacin gentica inicial.

La ADN polimerasa y la correccin de pruebas

La propiedad de correccin de pruebas se deriva de que la ADN-polimerasa aade el nuevo nucletido al OH del carbono 3' de la desoxirribosa del ltimo nucletido aadido y, si ste no es el adecuado, no estar bien situado, por lo que detectar el error y lo corregir. La actividad de correccin de pruebas permite que, si por causas de las formas tautomricas se aade un nucletido en lugar de otro, inmediatamente, al quedar desapareado, puede ser retirado y sustituido por el nucletido correcto.

Existen tres sistemas diferentes de reparacin: las reparaciones con escisin del ADN, las reparaciones sin escisin del ADN, y los sistemas SOS. Reparacin con escisin del ADN. Este proceso se inicia con una endonucleasa, que detecta el error y produce dos cortes a ambos lados del error. Luego acta una enzima exonucleasa que elimina todos los nucletidos del segmento cortado. A continuacin la ADN-polimerasa I sintetiza el segmento de forma correcta, y finalmente una ADN-ligasa une su extremo final. En el caso de un error por mal emparejamiento, por ejemplo, el emparejamiento G T, el sistema distingue si la errnea es la G o la T, gracias a que las adeninas sufren un proceso de metilacin al cabo de unos minutos. Hasta pasado ese tiempo las enzimas de reparacin pueden distinguir la hebra nueva de la hebra patrn (fig. 5). Reparacin sin escisin del ADN. Se conocen mecanismos directos de reversin de las lesiones. Por ejemplo, el caso de las enzimas fotorreactivas, unas enzimas que se activan con la luz y que son capaces de romper los enlaces entre dos pirimidinas contiguas eliminando los dmeros de timina. As pues, la luz produce la reparacin de la lesin que ella misma origin. Sistemas SOS. Si por la accin prolongada de un agente mutgeno importante se produce un nmero elevado de faltas o alteraciones de bases nitrogenadas en la hebra patrn, puede ser que se inicie la duplicacin del ADN sin que los mecanismos de reparacin hayan acabado de arre6 Sistema de reparacin SOS.
Complejo de replicacin Lesin que impide la continuacin de la replicacin Complejo de replicacin bloqueado

Dmero de timina
5' 3' 3' 5'

Endonucleasa
5' 3'

P8

3' 5' 5'p 3' 5'

5' 3'

3'

ADN polimerasa
5' 3' 3'
8

5'p 3' 5'

ADN ligasa
5' 3'
8

3' 5'

5 Reparacin con escisin de ADN.

glarlas. Como la ADN-polimerasa slo reconoce A, T, C, y G, la duplicacin quedara paralizada. Para evitarlo existe un sistema enzimtico denominado enzimas correctoras del sistema SOS que elimina este bloqueo pero a expensas de introducir una base complementaria al azar y por ello muy probablemente errnea. Se evita el bloqueo de la replicacin pero se originan clulas hijas con muchas mutaciones. As pues, es el sistema SOS el que permite que las alteraciones originadas por esos agentes mutgenos acaben dando clulas con mutaciones. Si stas afectan al control de la divisin celular, pueden ser el origen de clulas cancerosas (fig. 6).

Complejo de replicacin alterado por las enzimas del sistema SOS

Nucletido errneo colocado para permitir la duplicacin

Replicacin de ADN

Parada

Induccin de la respuesta SOS

La sntesis de ADN progresa aunque con una alteracin

311

3 Las mutaciones cromosmicas

Son las mutaciones que provocan cambios en la estructura interna de los cromosomas. Se distinguen los siguientes tipos (fig. 7): Delecin (fig. 8). Es la prdida de un fragmento del cromosoma. Si el fragmento contiene muchos genes, la delecin puede tener consecuencias patolgicas o incluso letales. Por ejemplo, en los seres humanos, una delecin en el cromosoma 5 produce el sndrome cri du chat. Los nios afectados por este sndrome emiten unos sonidos semejantes a los maullidos del gato, presentan microcefalia, retraso mental acusado y, generalmente, no llegan a adultos. Si una delecin afecta a los dos cromosomas homlogos, suele ser letal. Duplicacin. Es la repeticin de un segmento de un cromosoma. La rplica puede hallarse en el mismo cromosoma, haberse unido a un cromosoma no homlogo, o incluso haberse independizado con su propio centrmero. Las duplicaciones permiten aumentar el material gentico y, gracias a posteriores mutaciones, pueden determinar la aparicin de nuevos genes durante el proceso evolutivo. Inversin. Es el cambio de sentido de un fragmento en el cromosoma. Si en el segmento invertido se halla incluido el centrmero, se denomina inversin pericntrica y si no, inversin paracntrica. Las inversiones no suelen comportar perjuicios al individuo pero s a los descendientes si durante la meiosis se produce un entrecruzamiento dentro de la inversin. Translocacin. Es el cambio de posicin de un segmento de cromosoma. Cuando se produce por intercambio de segmentos entre dos cromosomas no homlogos, que es lo ms frecuente, se denomina translocacin recproca. Cuando slo hay traslacin de un segmento a otro lugar del mismo cromosoma o de otros cromosomas, sin reciprocidad, se denomina transposicin. Las translocaciones no suelen perjudicar al individuo que las ha sufrido pero s a su descendencia, ya que puede heredar un cromosoma incompleto o con duplicaciones. Estos descendientes heredan de cada progenitor un solo cromosoma de cada tipo y ste, con ms posibilidades todava si ha habido recombinacin, puede ser anormal.

A B C D E

F GH

AB C E
Delecin

FGH

A B C D E

FGH

AB C F
Inversin pericntrica

EDGH

A B C D E

FGH

A B C B C D EG F G H
Duplicacin

A B C D E

FGH
Inversin paracntrica

AD C B E

FGH

MN O P Q

MN O C D E

FGH

AB C DE

A B C DE

FGH
Translocacin recproca

AB PQ

MN O P Q R
Fusin Fisin

A B C DE

FGH
Translocacin no recproca (transposicin)

AD E

F B C GH

M N

R A

7 Mutaciones cromosmicas.

8 Asa de delecin observada en los cromosomas gigantes de Drosophila melanogaster.

312

ocumento 3

Tipos de mutaciones cromosmicas y formas que adoptan durante la meiosis

A B C D E F G I' G H I A A' B' B C C' F' G' H' D E F G I' H I H I A A' B' C' F' 8 G' H' A B C D E F D BC E DG H I

Delecin intercalada

Bucle

Delecin final

A' B' C' D' 8 E' A B C D E

F' G' A' B' C' D' E' F' G' A B C D E F G

Terminacin escalonada

G F' G' H C' I I' J J'

Bucle
A' B' C' D' D A BC D' E F E' F' G' H' C' I' J' A' B' C' P' Q' R' E' F' G' D' C' G HI J

Duplicacin

A' B' C' D' 8 C' D' E' A B C D E F G

Inversin

A' B' H' G' 8 F'

E' D'

Asas de inversin

A B C

M N O

A' B' C'

M' N' O'

A' B' A B C F E D

Translocacin recproca
D P Q R P' Q' R' D' E' F'

Cruces de translocacin Cromosomas F E D no homlogos O M con translocacin

N O M N P Q R

Cromosomas no homlogos sin translocacin

E F

Las mutaciones cromosmicas pueden detectarse en los cromosomas mediante el microscopio (citogentica) gracias a las tcnicas de bandeo y tambin durante el emparejamiento de los cromosomas homlogos en la profase I de la meiosis. Las deleciones y las duplicaciones se reconocen por la formacin de bucles y de terminaciones escalonadas. Las inversiones, por la formacin de las asas de inversin que se producen al coincidir el segmento invertido con su segmento homlogo. Las translocaciones dan lugar a formas en cruz, si afectan slo a dos cromosomas homlogos, o a anillos si ha habido translocacin mltiple.

1. Qu tipos de mutaciones pueden producir bucles? Cules terminaciones escalonadas? Qu diferencias hay entre bucle y asa de inversin? 2. En un cromosoma teido con la tcnica de bandeo se ha denominado cada grupo de bandas con las letras a, b, c, d, e, f, g, h, i, j. Indica qu ha sucedido si la secuencia de bandas es: a) abcdedefghij, b) abcfedghij, c) abcdeghij, y d) abcfghdeij.

ocumento 4

Aparicin del sndrome de Down cuando una parte del cromosoma 21 se ha translocado a un cromosoma grande
Gameto aportado por el otro progenitor Individuo normal con translocacin no recproca Cromosoma n. 21 b c d

Gametos

Individuo normal

Individuo deficiente

Individuo con sndrome de Down

Individuo normal con translocacin no recproca

El sndrome (conjunto de sntomas) de Down, antes denominado mongolismo, aparece cuando en lugar de dos cromosomas 21 hay tres, o porque hay dos y un fragmento de un tercero. El primer caso se debe a un error en la separacin de las cromtidas durante la gametognesis, ms frecuente cuanto mayor es la edad de la madre. El segundo caso, mucho menos frecuente, se debe a una translocacin no recproca de un segmento del cromosoma 21 a otro cromosoma en las clulas del progenitor. El individuo es normal pero no as toda su descendencia. 1. Por qu slo el 25 % tiene sndrome de Down?

313

4 Las mutaciones genmicas

Son las alteraciones en el nmero de cromosomas propio de una especie. Se distinguen estos tipos: Aneuploida. Es la alteracin en el nmero normal (generalmente dos) de ejemplares de uno o ms tipos de cromosomas, sin llegar a afectar al juego completo. Pueden ser nulisomas, monosomas, trisomas, tetrasomas, etc., cuando en lugar de dos cromosomas de cada par no hay ninguno, o hay uno, tres, cuatro, etc. Un ejemplo de monosoma en humanos es el sndrome de Turner, en el que las mujeres, en lugar de tener dos cromosomas X, slo tienen uno (mujeres XO); en total slo tienen 45 cromosomas. Un ejemplo de trisoma en humanos es el sndrome de Down o trisoma del cromosoma 21, en el que los individuos, en vez de tener dos cromosomas tipo 21, tienen tres; en total tienen 47 cromosomas (cuadro II). Euploida. Es la alteracin en el nmero normal de dotaciones haploides (juegos de cromosomas) de un individuo. Incluye la monoploida y la poliploida. La monoploida o haploida es la existencia de una sola dotacin cromosmica, es decir, un solo ejemplar de cada tipo de cromosoma. La poliploida es la existencia de ms de dos ejemplares de cada tipo de cromosomas o, dicho de otro modo, de ms de dos juegos completos de cromosomas. Pueden ser triploidas, tetraploidas, etctera. Son frecuentes en algunas plantas y raNombre de la enfermedad Por alteraciones en los autosomas Sndrome de Down Sndrome de Edwards Sndrome de Turner Sndrome triple X Sndrome de Klinefelter Sndrome duplo Y Tipo de mutacin genmica Trisoma del cromosoma 21 (tienen 47 cromosomas). Trisoma del cromosoma 18 (tienen 47 cromosomas). Un solo cromosoma X (44 autosomas X). Tres cromosomas X (44 autosomas XXX). Tres heterocromosomas (44 autosomas XXY). Tres heterocromosomas (44 autosomas XYY).

ras en los animales. Las formas poliploides tienen hojas y frutos de mayor tamao, por lo que resultan interesantes para la produccin agrcola. La poliploida puede ser inducida artificialmente mediante sustancias como la colchicina, que impide la formacin del huso metafsico, por lo que, al no separarse los cromosomas, aparecen gametos 2 n. La unin de dos de estos gametos origina individuos 4 n. El 47 % de las angiospermas que consumimos son poliploides. Se pueden distinguir las autopoliploidas, cuando todos los juegos proceden de una misma especie, y las alopoliploidas, si proceden de la hibridacin de dos especies diferentes. Las causas de las mutaciones genmicas son: Fusin cntrica. Es la unin de dos cromosomas no homlogos, con prdida del centrmero de uno de ellos (fig. 7). Ejemplo de fusin es el origen de las dotaciones genticas de varias especies de Drosophila (fig. 9) y probablemente el origen del cromosoma 2 humano a partir de dos cromosomas de primate: en humanos n es 23, mientras que en chimpancs y orangutanes n es 24. Fisin cntrica. Es la escisin de un cromosoma en dos. Da lugar a un nuevo centrmero. Segregacin errnea durante la meiosis. Es la distribucin errnea de las cromtidas homlogas entre las clulas hijas durante la meiosis. A una clula irn las dos cromtidas y la otra se quedar sin ninguna.

Cuadro clnico Deficiencia mental. Rasgos faciales orientales. Cara plana y ancha. Retraso mental y en el desarrollo. Hipertensin. Orejas deformadas. Mujeres con retraso en el crecimiento, infantilismo sexual y esterilidad. Mujeres con mamas poco desarrolladas y genitales externos infantiles. Hombres con genitales pequeos. Ausencia de espermatognesis. Retraso mental. Hombres con retraso mental, altos y violentos.

Drosophila virilis (n 6)

Por alteraciones en los heterocromosomas

Drosophila pseudobscura (n 5)

Drosophila willistoni (n 3)

Drosophila melanogaster (n 4)

CUADRO II. Aneuploidas.

9 Origen de los cromosomas de Drosophila. Todas las especies del gnero Drosophila tienen un nmero de cromosomas muy bajo. El origen de las dotaciones cromosmicas puede deberse a la fusin de cromosomas a partir de un patrn original, la dotacin cromosmica de Drosophila virilis.

314

Los agentes mutgenos

per los anillos de las bases nitrogenadas, e incluso romper los enlaces fosfodister con la consiguiente ruptura del ADN y, por tanto, de los cromosomas. Las sustancias qumicas mutgenas. Son sustancias que reaccionan con el ADN y provocan bsicamente tres tipos de alteraciones: a) Las modificaciones de las bases nitrogenadas. Por ejemplo, el cido nitroso (HNO2) las desamina, la hidroxilamina les aade grupos hidroxilo, y el etilmetanosulfonato (EMS) y el gas mostaza les aaden grupos alquilo (metilo, etilo, etc.). b) La sustitucin de una base por otra anloga. Por ejemplo, en lugar de una timina puede situarse el 5-bromouracilo, o en lugar de una adenina la 2-aminopurina. Las modificaciones y las sustituciones de bases nitrogenadas implican emparejamientos con bases distintas de las complementarias. c) La intercalacin de molculas. Se trata de molculas similares a un par de bases enlazadas, como la acridina o la proflavina, capaces de introducirse entre los pares de bases apiladas del ADN. Al duplicarse luego, pueden aparecer inserciones o deleciones de un solo par de bases, con el consiguiente corrimiento en el orden de lectura (fig. 11). La eficacia mutagnica de estos productos es variable para las distintas especies. Otros factores mutgenos son los genticos. Existen genes mutadores que tienden a aumentar la frecuencia de mutacin de otros genes.

Los agentes mutgenos son aquellos factores que aumentan sensiblemente la frecuencia normal de mutacin. Pueden ser agentes fsicos, como las radiaciones, o qumicos, como algunas sustancias qumicas. Las radiaciones mutgenas. Se pueden distinguir dos tipos, segn sus efectos: las radiaciones no ionizantes y las radiaciones ionizantes. a) Las radiaciones no ionizantes. Son los rayos ultravioleta (UV). Son radiaciones electromagnticas, como la luz, pero de menor longitud de onda (entre 160 y 400 nm) y por ello ms energticas. Son muy absorbidas por el ADN. Provocan la ascensin de algunos electrones a niveles de mayor energa, y esto favorece la formacin de enlaces covalentes entre dos pirimidinas contiguas (por ejemplo, los dmeros de timina) y la aparicin de formas tautomricas que darn lugar a mutaciones gnicas del tipo transiciones. b) Las radiaciones ionizantes. Son radiaciones electromagnticas de longitud de onda inferior a los UV, como los rayos X y los rayos (gamma), y las emisiones de partculas como las radiaciones (alfa) y (beta) propias de las explosiones nucleares. Son radiaciones mucho ms energticas que los UV. Provocan la prdida de electrones en algunos tomos del ADN que quedan en forma de iones muy reactivos. Pueden provocar tambin formas tautomricas, llegar a rom-

CUESTIONARIO 3
1. Por qu muchas de las variedades que se utilizan en la agricultura son autopoliploides? Por qu los triploides son estriles y los tetraploides generalmente son frtiles? 2. Por qu el sndrome de Down aparece con cierta recurrencia en la genealoga de algunas familias y en otras familias aparece espontneamente sin recurrencia? 3. Por qu para observar las roturas seas se realizan radiografas pero para observar los embriones humanos se usa la ecografa? Por qu a las mujeres gestantes se les recomienda que no fumen ni tomen bebidas alcohlicas?

Acridina

10 Sesin de radioscopia.

11 Acridinas.

315

Mutacin y evolucin

seleccin natural se puede definir, pues, como la supervivencia del ms apto. Tras el descubrimiento de las leyes de Mendel en 1900 y los grandes avances posteriores, a partir del genetista Dobzhansky, el zologo Mayr, el paleontlogo Simpson y el bilogo Huxley, surgi entre 1938 y 1940 la teora sinttica o neodarwinismo. En ella se aceptan los principios darwinistas de la variabilidad de la descendencia y de la seleccin natural, y se aporta la explicacin de dicha variabilidad, el concepto de poblacin gentica como unidad de evolucin y el concepto gentico de especie, que sustituy al basado en las simples diferencias morfolgicas. La variabilidad de la descendencia en los organismos con reproduccin asexual se debe exclusivamente a las mutaciones, y en los organismos con reproduccin sexual a las mutaciones y, sobre todo, a la recombinacin gentica que se produce en la meiosis. As pues, la aparicin de una bacteria con un ADN diferente del de su progenitora slo puede originarse por mutacin, mientras que en los organismos con reproduccin sexual, por ejemplo, los animales, el nacimiento de un individuo con un ADN distinto del de sus progenitores es obligado, ya que en la ovognesis y en la espermatognesis se produce la recombinacin gentica mediante el entrecruzamiento al azar de los cromosomas homlogos. Tambin puede influir la mutacin, aunque, dado que la frecuencia media de mutacin es muy baja, del orden de 105 en vertebrados (un gameto con un determinado gen mutado por cada 100.000 gametos con ese gen normal), cuantitativamente es poco importante. En las bacterias la tasa de mutacin es todava inferior, del orden de 108 (una bacteria con un gen mutado por cada 100.000.000 de bacterias con ese gen normal), por lo que el grado de variabilidad de la descendencia es nfimo. Esto viene compensado por la elevada tasa de reproduccin que puede llegar a ser de una divisin cada media hora (cuadro III).

La evolucin biolgica es el proceso de transformacin de unas especies en otras mediante una serie de variaciones que se han ido sucediendo, generacin tras generacin, a lo largo de millones de aos. Darwin propuso que el proceso evolutivo se basa en tres factores: el excesivo nmero de descendientes, la variabilidad fenotpica de la descendencia y la seleccin natural. El excesivo nmero de descendientes. Darwin observ que las especies tienen un potencial de reproduccin muy alto, y que si su nmero no crece indefinidamente es porque los recursos alimenticios son limitados. La variabilidad de la descendencia. En los organismos que se reproducen sexualmente se observa que, pese a tener los mismos padres, todos los hermanos son diferentes entre s (salvo los gemelos univitelinos, es decir, los surgidos del mismo cigoto). Darwin (1809-1882) muri sin saber cul era el origen de esta variabilidad. Los trabajos de Mendel, en los que se inicia el camino hacia su explicacin, pese a estar publicados desde 1866, tuvieron muy poca difusin y no fueron conocidos por Darwin. La seleccin natural. Darwin la explica diciendo que como nacen ms individuos que los que pueden sobrevivir, se establece una lucha por la existencia, de un individuo con otros de su misma especie, con individuos de otras especies y con las condiciones fsicas del entorno. Si el ambiente es muy hostil, los individuos menos aptos mueren y slo los ms aptos llegan a reproducirse, y por ello slo stos transmiten sus caractersticas a la generacin siguiente. La

CUADRO III. Tasa de mutacin de un gen determinado por cada replicacin del cido nucleico en el que se encuentra.

Bacterifago T2 (virus) Escherichia coli Neurospora crassa (hongo) Drosophila melanogaster

Inhibicin de la lisis Resistencia a la estreptomicina Fermentacin de la lactosa Independencia de la adenina Ojos blancos Corea de Huntington

1 108 4 1010 2 107 4 108 4 105 1 106 5 106 3 105 4-8 105

Homo sapiens

Aniridia (ausencia de iris) Hemofilia A Acondroplasia (enanismo)

316

La mutacin es, sin embargo, desde un punto de vista cualitativo, mucho ms importante que la recombinacin, ya que la mutacin puede dar lugar a nuevos genes, mientras que la recombinacin simplemente origina agrupaciones distintas de genes. La mutacin es, pues, la base de la variabilidad. Sin mutacin no habra evolucin. Los organismos actuales tendran los mismos genes que los organismos primitivos, es decir, seran iguales. La mutacin permite que de un gen A aparezca un gen a, y si uno de ellos aporta una ventaja, la seleccin aumentar su frecuencia y la especie evolucionar. Si en un locus siempre hubiera homocigosis, es decir, todos los individuos fueran AA, la seleccin no podra variar su frecuencia y para dicho locus no habra evolucin posible.

CUESTIONARIO 4
1. Si las bacterias se reproducen cada media hora, cuntas habr al cabo de 12 horas de infeccin? 2. Una determinada rapaz vive 15 aos, alcanza su madurez sexual a los cinco aos y a partir de ese momento cada ao saca adelante dos polluelos. Cuntos individuos habra al cabo de 5, 10 y 15 aos si no hubiera bajas por falta de alimento, enfermedades, cazadores furtivos, etc.? 3. Segn los datos anteriores se confirma la gran potencialidad reproductiva de las especies, incluso aquellas cuya tasa parece baja. Por qu, sin embargo, en la prctica no es as? Por qu, como sucede en las plagas, a veces s lo es?

7 La gentica de las poblaciones

La teora sinttica, adems de dar una explicacin al origen de la variabilidad, aport los conceptos imprescindibles para explicar el mecanismo de la evolucin. stos son: El concepto de poblacin gentica, con sus frecuencias gnicas y genotpicas, y la idea de que son las poblaciones las que evolucionan y no los individuos. stos mueren con sus caracteres, mientras que las poblaciones s experimentan variaciones al aparecer individuos distintos. Los conceptos de seleccin natural, mutacin, migracin y deriva gentica como factores que alteran las frecuencias gnicas, y cuyos efectos se acumulan durante largos perodos de tiempo, produciendo cambios graduales del fenotipo. El concepto de aislamiento de subpoblaciones como causa que tiende a diferenciarlas hasta tal punto que quedan imposibilitadas de reproducirse entre s, lo que se denomina especiacin. El concepto de especie para los organismos con reproduccin sexual, basado en la incapacidad de intercambio de material gentico entre individuos de distinta especie. y un mismo espacio. El estudio gentico de las poblaciones se basa en el conocimiento de sus frecuencias genotpicas y de sus frecuencias gnicas. Las frecuencias genotpicas son el tanto por uno que hay de cada genotipo. En una poblacin de individuos diploides cada locus est ocupado por dos alelos iguales o distintos. Si para un determinado carcter existen dos genes (A y a), pueden aparecer tres tipos de genotipos (AA, Aa y aa). Si el nmero de individuos que hay de cada uno es n1, n2 y n3, siendo N el nmero total de individuos (n1 n2 n3 N), las frecuencias genotpicas son: n1 n2 n3 f (Aa) ; f (aa) f (AA) ; N N N Si, por ejemplo, hay 4 individuos AA, 12 individuos Aa y 9 individuos aa, las frecuencias genotpicas son f (AA) 4/25 0,16; f (Aa) 12/25 0,48 y f (aa) 9/25 0,36. La suma de todas las frecuencias es siempre 1 (0,16 0,48 0,36 1). Las frecuencias gnicas son el tanto por uno de cada uno de los alelos que hay para cada carcter. Se calculan a partir de las frecuencias genotpicas. En el caso anterior las frecuencias gnicas de A y de a se simbolizan con las letras p y q: 1 f (A) p f (AA) f (Aa) 2 1 f (a) q f (aa) f (Aa) 2
317

1. Poblacin gentica y frecuencias gnicas

Una poblacin es un conjunto de individuos que pueden cruzarse entre s, o sea, son de la misma especie, y que habitan en un mismo lugar. Es decir, una poblacin es un conjunto de individuos que comparten un mismo conjunto de genes (fondo gentico comn)

ocumento 5

Los genes polimrficos

La homocigosis (AA) no posibilita la evolucin, mientras que la heterocigosis (AB) s, ya que la seleccin natural puede favorecer A o B. Cuantos ms alelos haya (A, B, C, D, ...), ms diversidad hereditaria cabe esperar, mayor posibilidad de supervivencia y, por tanto, mayor probabilidad de evitar la extincin. Para conocer el grado de polimorfismo allico, como muchos genes codifican protenas, se puede elegir un determinado nmero de individuos y estudiar en ellos, mediante electroforesis (tcnica que puede detectar alteraciones de incluso un solo aminocido cambiado), los distintos tipos de stas. Mejores son las tcnicas de secuenciacin de ADN, ya que adems permiten conocer aquellas variaciones que no han supuesto cambios de aminocidos, las regiones que no codifican protenas (promotores, operadores, etc.), las que carecen de informacin (intrones y ADN sin informacin), etc. El grado de polimorfismo en plantas es 18,5 %, en invertebrados el 13,4 %, y en vertebrados el 6,6 %. En el hombre este porcentaje significa que presenta polimorfismo en 6.600 genes (100.000 genes 6,6/100 6.600).

En el ejemplo anterior: 4 1 12 10 f (A) p 0,4 25 2 25 25 9 1 12 15 f (a) q 0,6 25 2 25 25 Segn estudiaron Hardy y Weinberg en 1908, en una poblacin de organismos con reproduccin sexual, en la que todos los individuos se cruzan al azar lo que se denomina poblacin panmctica o demo y en la que no hay ni mutaciones, ni migraciones, ni deriva gentica, ni acta la seleccin, las frecuencias gnicas y genotpicas se mantienen constantes de generacin en generacin. La poblacin, pues, no evoluciona, es decir, la herencia por s misma no engendra evolucin. Esto es consecuencia de que la recombinacin gentica no cambia la frecuencia de los genes, simplemente origina un nmero casi infinito de combinaciones diferentes. La ley de Hardy y Weinberg o del equilibrio gentico es, pues, una ley de referencia que en la prctica no se cumple nunca; prueba de ello es que las poblaciones s han evolucionado con el tiempo. La razn es que en la naturaleza no hay panmixia y s hay mutaciones, migraciones, deriva gentica y seleccin natural. Mutaciones. Son cambios inesperados y al azar en la informacin gentica. Gracias a ella, a partir de un gen (A) aparecen otros genes alelos (A1, A2, A3, ...). Son preadaptativas, es decir, no se dan aquellas que son beneficiosas, sino que se dan en todas direcciones y es la seleccin la que favorece sobrevivir y reproducirse slo a los portadores de mutaciones beneficiosas. Las mutaciones que tienden a darse con reiteracin, las llamadas mutaciones recurrentes, son las que tienen importancia en la evolucin; las dems carecen de trascendencia evolutiva. Migraciones. Son las salidas de individuos propios (emigraciones) o las llegadas de individuos
318

de otras poblaciones (inmigraciones). El fondo gentico de una poblacin puede variar por el flujo gentico, es decir, por el aporte o sustraccin de alelos debido a las migraciones. El grado de variacin depende del nmero de desplazados respecto al nmero de residentes, y de la diferencia de frecuencias en que un mismo alelo se presenta en ambas poblaciones. Deriva gentica. Es el cambio en las frecuencias gnicas debido a que el nmero de individuos reproductores, y, por tanto, de gametos, que contribuyen a formar la generacin siguiente, resulta inferior al necesario para que estn bien representadas dichas frecuencias gnicas. Es similar a la desviacin que se observa si, en una urna que contiene 1.000 bolas blancas y 1.000 bolas negras, se hace un muestreo para saber qu proporcin hay. Si se sacan todas, lgicamente se sabe la proporcin sin error; si se sacan 1.000, se obtiene una estima menos exacta, y si slo se sacan 10, se puede obtener una proporcin muy distinta de la real. Un caso especial de deriva es la separacin de unos pocos individuos que dan lugar a una nueva poblacin. Cuantos menos sean, ms influirn sus caractersticas y, por tanto, ms distinta ser su progenie respecto a la poblacin madre: es el llamado efecto fundador. Otro caso especial son las poblaciones de lugares en que peridicamente, por sequas, plagas, incendios, etc., hay reducciones drsticas del nmero de individuos, y, por tanto, hay una gran deriva gentica: es el denominado efecto cuello de botella. Seleccin natural. Es la eliminacin de los individuos menos aptos, es decir, de los individuos que tienen una menor eficacia biolgica. sta se puede definir como la capacidad de sobrevivir y dejar descendencia, esto es, de contribuir con sus genes a la generacin siguiente. La seleccin acta sobre los fenotipos y as produce cambios en las frecuencias genotpicas. De este modo se originan las adaptaciones.

Segn el efecto que produce en la poblacin, se distinguen tres tipos de seleccin natural (fig. 12): a) La seleccin direccional. Es cuando se favorece un fenotipo extremo. Un ejemplo sera el aumento de la talla media de una especie debido a que los individuos ms corpulentos pueden defenderse mejor de sus depredadores. b) La seleccin estabilizadora. Es cuando se favorece un fenotipo intermedio. En el ejemplo anterior sera mantener el tamao medio, debido, por ejemplo, a que los ms pequeos son fcilmente capturados porque corren menos, y los ms grandes tambin, porque son detectados ms fcilmente. Este tipo de seleccin mantiene el polimorfismo de la poblacin, es decir, la coexistencia de dos o ms fenotipos se debe a la superioridad de los heterocigotos o heterosis. c) La seleccin disruptiva. Es cuando se favorecen los dos fenotipos extremos. En nuestro caso, por ejemplo, porque los ms pequeos no son detectados por los depredadores, y los ms grandes logran escapar de ellos. Con el tiempo la poblacin se subdividir en dos subpoblaciones.
Direccional

ANTES DE LA SELECCIN Estabilizadora Disruptiva

DESPUS DE LA SELECCIN

12 Tipos de seleccin natural.

2. Concepto de especie y especiacin

En la actualidad todava no existe una definicin de especie que sirva para todos los organismos; slo la hay para aquellos que tienen reproduccin sexual y que viven hoy en da. En stos, la especie se define como un conjunto de poblaciones formadas por individuos que se pueden cruzar entre s y dar una descendencia frtil. Constituyen, pues, un fondo gentico comn, no existiendo intercambio de genes (flujo gentico) entre especies diferentes. Este concepto de especie no es aplicable ni a las especies fsiles (no se puede saber si dos ejemplares podan o no tener descendencia frtil), ni a las especies con reproduccin asexual. Adems, existe el problema de que algunas especies bien definidas en ocasiones dan hbridos frtiles, como sucede en algunas plantas. El proceso evolutivo mediante el cual a partir de una especie preexistente aparece una nueva especie se denomina especiacin. En una primera fase se pasa de la especie ancestral a la especie nueva (proceso que se denomina anagnesis), y en una segunda fase a partir de dicha especie surgen dos o ms especies (proceso denominado cladognesis) (fig. 13). Se distinguen dos tipos de especiacin: especiacin por aislamiento o gradual y especiacin cuntica o rpida.
EVOLUCIN a b c d e

Cladognesis

Anagnesis

RECONSTRUCCIN

13 Filogenia de las especies a, b, c, d y e.

319

 Especiacin por aislamiento. En ella, para que la poblacin que est evolucionando llegue a constituir una especie distinta, es necesario que quede aislada de las dems. Si hubiera un flujo de genes entre ellas, nunca acabaran diferencindose. Es un proceso lento en el que se van acumulando aquellas caractersticas aparecidas al azar que la seleccin natural considera ventajosas: las llamadas adaptaciones al medio. Por el tipo de aislamiento se distingue la especiacin aloptrica, o especiacin debida a aislamiento geogrfico, y la especiacin simptrica o especiacin no debida a aislamiento geogrfico. a) En la especiacin aloptrica (de alo, diferente, y patria, territorio propio) la poblacin queda dividida en dos reas por causa de una barrera geogrfica (un ro, un glaciar, una zona intermedia desecada, un mar debido al ascenso del nivel del agua o a la fractura de Pangea y la posterior deriva de los continentes, etc.). En las distintas poblaciones, las mutaciones y la deriva sern diferentes y, si adems las condiciones ambientales son distintas, las adaptaciones tambin lo sern. A lo largo de miles de aos la divergencia puede ser tan grande que, aunque se pusieran de nuevo en contacto, no seran capaces de dar descendientes frtiles, es decir, seran dos especies distintas. b) En la especiacin simptrica la divergencia se realiza dentro de la misma rea. Las barreras que impiden el cruzamiento no son geogrficas sino barreras biolgicas, los llamados mecanismos de aislamiento reproductivo (MAR). stos pueden ser poscigticos (debido a la inviabilidad del cigoto o la esterilidad de los hbridos) o precigticos (los que impiden la formacin de cigotos). Hay varios tipos de MAR precigticos: 1. Aislamiento ecolgico. Por ejemplo, en especies fitoparsitas unos individuos se han especializado en parasitar un tipo de-

2.

3.

4.

5.

plantas y otros otro tipo, que vive en la misma zona. Aislamiento estacional. Por ejemplo, unos ejemplares de plantas florecen en una poca y otros en otra. Aislamiento etolgico. Por ejemplo, unos machos que para atraer a las hembras hacen unos movimientos de galanteo distintos de los que ellas reconocen, por lo que no llegan a cruzarse. Aislamiento mecnico. Por ejemplo, entre dos razas de perros, una muy grande y la otra muy pequea. Aislamiento gamtico. Por ejemplo, los gametos masculinos mueren o no son atrados por los gametos femeninos.

Especiacin cuntica. Es la especiacin sbita debida a mutaciones. Generalmente es por poliploida. Puede ser: a) Autopoliploida. Interviene una sola especie. Por ejemplo, si en una planta diploide aparecen por mutacin gametos 2 n, luego, tras la fecundacin, aparecern organismos 4 n (tetraploides) que ya no se podrn cruzar con los anteriores. Tambin, si por una mutacin mittica, una clula somtica 2 n da lugar a una clula 4 n y de ella surge toda una rama que luego se corta y se planta, se puede obtener una planta 4 n que ya no se podr cruzar con su antecesora. b) Alopoliploida. Intervienen dos especies. Si una especie con, por ejemplo, 2 n 12, se cruza con otra con 2 n 16, se puede obtener un hbrido con 2 n 14, que ser estril, ya que al ser los cromosomas distintos no se aparearn durante la meiosis; pero si se fuerza una mutacin del cigoto para que doble su nmero de cromosomas, con colchicina, por ejemplo, se obtendr una planta con 28 cromosomas que ya ser frtil, ya que tendr dos ejemplares de cada tipo.

CUESTIONARIO 5
1. Cmo podras explicar desde el punto de vista evolutivo: a) La diferencia morfolgica entre las alas de un insecto y las de un ave. b) La diferencia funcional de extremidades nadadoras, saltadoras, prensoras, voladoras, etc., de los diferentes grupos de vertebrados. c) La existencia de rganos muy reducidos y sin ninguna funcionalidad, como, por ejemplo, el apndice en la especie humana. 2. La evolucin explica el origen de las especies a partir de una forma inicial de vida, que podra haber surgido de la materia inerte, pero de sta y del Universo no se sabe el origen. Hay contradicciones entre la teora evolutiva y las creencias religiosas? Es lo mismo creyente que creacionista? 3. Darwin public sus ideas slo cuando vio que el joven A. R. Wallace haba llegado a las mismas conclusiones. Quin fue Wallace? Consulta otras fuentes. 4. Quin era Darwin? Haz un informe sobre su vida y aportacin a la Biologa.

320

Actividades
Ejemplos significativos de evolucin
1. Melanismo industrial. La mariposa Biston betularia, bien conocida por los coleccionistas, se presentaba antes siempre en su forma clara (forma tpica). En 1849 se encontr una forma oscura (forma carbonaria) en Manchester, y ahora casi todas (96 %) son oscuras. Lo mismo ha sucedido en otras zonas industrializadas, en las que el uso del carbn ha provocado el ennegrecimiento de las cortezas de los rboles. La explicacin de este cambio es que la forma oscura queda mejor camuflada que la clara y escapa con mayor facilidad de la depredacin de los pjaros. Este cambio se denomina melanismo industrial. Qu tipo de seleccin ha seguido? 2. Anemia falciforme. La anemia falciforme es un tipo de anemia debida a un alelo mutante (S) que provoca el cambio de un aminocido en las dos cadenas polipeptdicas de la hemoglobina. Esto implica un mal funcionamiento de esta protena y por ello la anemia, as como que los glbulos rojos sean falciformes (forma de hoz). Los individuos SS generalmente mueren durante la juventud y, por tanto, cabra esperar que la frecuencia de S fuera muy baja; sin embargo, en ciertas poblaciones de frica y Asia, donde la malaria (enfermedad debida al protozoo Plasmodium que transmite el mosquito Anopheles) causa una gran mortandad, la frecuencia de S es relativamente alta. Esto se ha relacionado con que los individuos con hemoglobina mutada (los SS y los AS) son resistentes a la malaria. En estas poblaciones, los que tienen mayor probabilidad de supervivencia, mayor eficacia biolgica, son los AS (pese a que se fatigan antes que los AA), ya que los AA tienen una alta probabilidad de morir de malaria y los SS de anemia. En EE. UU. los individuos negros descendientes de estas poblaciones presentan una baja frecuencia del gen S, ya que los individuos SS mueren de anemia y los AS no son favorecidos por la malaria frente a los AA. Qu tipo de seleccin se ha seguido en las poblaciones africanas y asiticas?, y en la poblacin norteamericana?, y en las poblaciones africanas, asiticas y americanas consideradas conjuntamente? 3. Coloracin en caracoles. En el caracol de la huerta Cepaea nemoralis se ha observado que las formas sin bandas abundan sobre suelos lisos y las formas con bandas en suelos de aspecto no liso. Igualmente las coloraciones amarillas abundan en las zonas verdes y las rosas y pardas en las zonas pardas. Todo ello se ha relacionado con la capacidad de camuflarse frente a los tordos. Qu tipo de seleccin siguen? 4. Grupos sanguneos. En las diferentes poblaciones humanas se observa que la frecuencia de los distintos grupos sanguneos A, B y O es diferente. Dado que no existe ninguna ventaja en ser de un grupo o de otro, a qu se pueden deber estas diferencias? 5. Fsiles vivientes. Algunos organismos vivos, denominados fsiles vivientes, resultan idnticos a los fsiles de hace ms de 200 millones de aos; por ejemplo, Nautilus,
Homo sapiens neanderthalensis

cacerola de las Molucas, pez celacanto, braquipodos, etctera. Por qu apenas han cambiado de forma? 6. Radiacin adaptativa. En las islas Galpagos, Darwin observ 14 especies de pinzones, cada una de ellas adaptada a un tipo de hbitat y de dieta, por lo que cada especie mostraba un tipo de pico diferente. En las islas en las que faltaba una determinada especie haba otra que se alimentaba de lo mismo, y por ello su pico era similar. Se considera que a estas islas llegaron desde las costas de Ecuador algunos individuos que evolucionaron de forma distinta en cada isla y, dentro de cada isla, segn la forma de alimentarse, es decir, segn el nicho ecolgico que explotaban. Al tratarse de islas volcnicas recientes, haba muchos nichos ecolgicos disponibles y la especiacin fue numerosa. Esto se denomina radiacin adaptativa. Qu tipo de aislamiento existi en cada caso? 7. Anillos de razas. Cuando una poblacin ocupa un rea muy extensa, es posible que los individuos no muy alejados puedan reproducirse entre s, pero no los individuos de los extremos, pues son prcticamente especies distintas. Por ejemplo, despus de la ltima glaciacin, a partir de las gaviotas del mar Caspio, se originaron hacia el oeste las formas noreuropeas y britnicas, y hacia el este las formas siberianas y norteamericanas. stas han pasado a las islas Britnicas pero no se reproducen con las que evolucionaron hacia el oeste, que ya estaban all, ya que la hembra no reconoce al macho de la otra especie. Qu tipo de aislamiento ha producido esta especiacin? Qu tipo de aislamiento la mantiene en las islas Britnicas? 8. Capacidad craneana en homnidos. El crneo de los homnidos ha pasado de 400 cm3 hace tres millones de aos a 1.350 cm3, por trmino medio, en la actualidad. Qu tipo de seleccin han seguido?
Australopitecus africanus Homo erectus

450 cm3
5

1.600 cm3
5

Homo sapiens sapiens

321

20
N D I C E
INFORMACIN 1 Evolucin del concepto de gen. 2 El ADN de los eucariontes. 3 La ingeniera gentica. 4 La ingeniera gentica y la terapia de enfermedades humanas.
Sustancias humanas producidas por bacterias. Ingeniera gentica en humanos.

Los genes y la ingeniera gentica

5 La ingeniera gentica y la produccin agrcola y animal.

La ingeniera gentica aplicada a la produccin agrcola. La ingeniera gentica aplicada a la produccin animal.

6 El cncer: una enfermedad gentica.

Concepto de cncer y su relacin con el ADN. Cncer producido por virus. Cncer producido por sustancias qumicas o por radiaciones. El cncer y la respuesta inmunolgica.

Manipulacin gentica. Introduccin en un embrin de pollo de los elementos del cerebro de una codorniz donde radica el canto.

7 El Proyecto Genoma Humano. 8 Riesgos e implicaciones ticas de la ingeniera gentica.

En 1909 Johannsen dio el nombre de genes a los factores que controlan la herencia de los caracteres. Morgan y su escuela enunciaron la teora cromosmica de la herencia segn la cual los genes eran considerados partculas materiales situadas linealmente a lo largo de los cromosomas. La ingeniera gentica mejora cuantitativa y cualitativamente la produccin animal y vegetal y puede suponer un arma contra muchas enfermedades humanas hereditarias. Pero adems de esperanza, estas tcnicas tambin generan recelos y temores. Hasta qu punto es ticamente aceptable y ecolgicamente prudente la manipulacin gentica?

322

1 Evolucin del concepto de gen

Antes de 1940 se consideraba que el gen era la unidad de funcin, o sea, que el gen era la unidad ms pequea capaz de controlar un carcter, es decir, un atributo fenotpico, como por ejemplo el color de los ojos o la estructura de la hemoglobina. Los experimentos de Beadle y Tatum demostraron, en 1941, que la forma como un gen controla un carcter es mediante la produccin de una enzima que acta en una determinada ruta metablica, posibilitando la sntesis de una determinada sustancia. Es la denominada teora un gen-una enzima. Igualmente, se aceptaba que los genes estaban en los cromosomas como las cuentas estn en un collar. Se consideraba que el gen era la unidad de estructura, y por tanto que el gen era la parte ms pequea susceptible de intercambiarse en una recombinacin, y la parte ms pequea capaz de mutar. Durante la recombinacin meitica poda haber intercambio de genes entre dos cromosomas homlogos, pero no de fragmentos de genes, dado que eran como cuentas indivisibles. Durante los aos 50, los trabajos de Benzer (ver su descripcin al final del tema) con el virus bacterifago T4 (fig. 1), que afectaba los cultivos de la bacteria Escherichia coli (fig. 2), demostraron que el gen s poda ser considerado la unidad de funcin, pero no la unidad de estructura de la informacin gentica. Se descubri que los genes eran divisibles en unidades ms pequeas. Esto ayud mucho a establecer un puente entre la gentica mendeliana y la gentica molecular, es decir, a aceptar que el gen era una secuencia de nucletidos, tal como propona el modelo de la estructura del ADN, presentado en 1953 por Watson y Crick. Benzer propuso los trminos de recn y mutn para designar la parte ms pequea del gen capaz de recombinarse y de mutarse respectivamente. Hoy estos trminos ya no se usan porque se sabe que corresponden al par de nucletidos. Es decir, la unidad de estructura es el nucletido. Tambin propuso el trmino de cistrn para designar la unidad de funcin, que hoy se usa muy poco, ya que se considera sinnimo de gen. La unidad de funcin es, pues, el gen o cistrn. En la actualidad se considera que un gen es un segmento de ADN, o de ARN en ciertos virus, con informacin para una cadena polipeptdica o para un ARN. As se engloba tambin a los genes que informan sobre protenas que no son enzimas, y a los genes que informan sobre ARN distinto del ARNm. Finalmente, hay que sealar que tambin ha cambiado la idea de gen como un segmento continuo de cido nucleico, ya que los genes de las clulas eucariotas normalmente presentan intrones sin informacin para la cadena polipeptdica, que separan los exones que poseen la informacin. Una curiosidad es que en algunos virus se ha descubierto que una misma secuencia de nucletidos puede contener dos informaciones, es decir, dos genes, segn se empiece a leer por el primer nucletido o por el segundo. Son los llamados genes solapados.

2 Siembra de bacterias en un medio de cultivo contenido en una cpsula de Petri.

CUESTIONARIO 1
1. Diferencia estos conceptos: recn, mutn y cistrn. 2. Ordena por tamao (nmero de nucletidos): recn, mutn y cistrn. 3. Qu genes no codifican protenas?

1 Virus bacterifago T4. Se puede distinguir la cabeza, la cola y las fibras caudales.

4. Qu son los genes solapados?

323

2 El ADN de los eucariontes

En los procariontes, el ADN contiene una copia de cada gen y ste est todo l seguido, es decir, sin intrones. Adems, no hay apenas ADN silencioso, es decir, ADN que no se transcribe. En los eucariontes, en cambio, la situacin es totalmente al revs. A pesar de tener 1.000 veces ms ADN que los procariontes, slo un 10 % del ADN de los eucariontes son genes. Los intrones pueden aumentar incluso 10 veces la secuencia codificante. Existen especies prximas que tienen incluso seis veces ms ADN que otras, y hay secuencias de nucletidos que se encuentran varias veces repetidas. Se distinguen tres tipos de ADN: ADN altamente repetitivo o ADN satlite. Constituye un 10 % del total, aunque puede llegar al 50 %. Est constituido por cortas secuencias de entre 5 y 10 pares de bases (pb) que se disponen en tndem (una detrs de otra), y que llegan a repetirse de 106 a 108 veces. Se sita en los extremos (telmeros) y en las constricciones (centrmeros) de los cromosomas, que son zonas genticamente inactivas, es decir, que no se transcriben nunca. Puede que su nica funcin sea mecnica, como el emparejamiento y la segregacin de los cromosomas durante la mitosis y la meiosis. ADN moderadamente repetitivo. Constituye el 20 % del total. Est constituido por diversas secuencias que oscilan entre los 300 pb y los 5.600 pb. El nmero de copias vara entre 10 a ms de 1.000 veces, pudiendo llegar en algn caso a ms de 100.000. No ocupa unos cuantos puntos concretos en el cromosoma, sino que est intercalado en todo el genoma. Comprende los genes que codifican histonas, ARNr, ARNt y secuencias de funcin desconocida. ADN no repetitivo o simple. Constituye el 70 % del total. Contiene la mayor parte de la informacin que pasa a ARNm y da lugar a protenas, y al ADN que est intercalado y que no se transcribe, el ADN espaciador. Entre los genes podemos distinguir los genes de copia nica en el genoma y los genes duplicados, es decir, los que pueden estar representados por unas pocas copias. stas no siempre son iguales, sino que presentan pequeas variaciones y dan lugar a protenas ms o menos aptas segn sea el ambiente, el tejido que se considere, etc. En ocasiones son inservibles y no se transcriben nunca; son los llamados pseudogenes. Se ha sugerido que el origen de muchas secuencias altamente repetidas seran virus o elementos transponibles, que son segmentos capaces de trasladarse de un lugar a otro (ver el captulo siguiente), que se han ido multiplicando dentro del ADN de la clula husped, gracias a su alta capacidad de difusin y al mnimo perjuicio que producen, evitando as el efecto de la seleccin contra ellos. De ah que se llamen ADN egosta. Mientras que en los procariontes, a partir de una misma secuencia de ADN, se pueden fabricar uno o dos productos diferentes si vara el punto de inicio de lectura (genes solapados), en los eucariontes se da el caso contrario, es decir, de diferentes secuencias se sintetiza un solo producto. Un ejemplo de ello lo tenemos en los anticuerpos.
CUESTIONARIO 2
1. Cul es la posible razn por la que los genes que codifican el ARNt, ARNr y las histonas se encuentran replicados hasta ms de 100 veces, dispuestos unos detrs de otros? 2. Cul es la posible funcin de las secuencias cortas que se encuentran repetidas miles de veces, sobre todo en los centrmeros y en los telmeros? 3. Cul es la posible explicacin evolutiva de que en las clulas eucariotas, el ADN que codifica protenas no supere el 1 % del total, es decir, que haya una enorme cantidad de ADN extra (ADN repetitivo, intrones, pseudogenes, etc.)? 4. Qu ventajas presentan los genes duplicados sobre los genes de copia nica? 5. Qu ventajas tiene que no todas las rplicas de los genes duplicados sean iguales, sino que formen familias de genes algo diferentes? 6. Qu posible explicacin puede darse a la existencia de pseudogenes (genes algo diferentes que no se transcriben ni se traducen nunca)?

3 En el ncleo de la clula eucariota se encuentra el ADN.

324

ocumento 1

Los anticuerpos
Extremos amino terminales

S CH1

Cadena pesada

Extremos amino terminales

VH
Centro de unin del antgeno

CH1 S S S S CH2 S S S S CH3 S S CH3 CH2 S S S S CL

Cadena ligera

VH S S S S VL S Centro de unin S del antgeno

S S VL

S S

S S CL

S S

Extremos carboxilo terminales

Durante mucho tiempo fue un enigma cmo la clula poda fabricar anticuerpos especficos contra cada uno de los antgenos, muchos de los cuales son molculas sintetizadas recientemente por el hombre. Se observ que en los anticuerpos tanto las cadenas ligeras como las pesadas tienen una regin constante y una regin variable, que era distinta segn el antgeno con el que interactuaban. Tambin se ob-

serv que, en las clulas madre de los linfocitos, los genes que codificaban la zona variable estaban repartidos por todo el genoma, mientras que en los linfocitos se encontraban prximos entre s, y cerca de los genes responsables de la zona constante. Actualmente se sabe que estos genes pueden trasladarse dentro del genoma de forma diferente y pueden enlazarse entre s de muy distinta manera. Se considera que

el ADN de la regin variable se sintetiza a partir de unos 400 genes variables (V), de unos 12 genes de diversificacin (D) y de unos 4 genes de unin (J). Las diferentes combinaciones que con ellos se pueden formar dan ms de 20.000 regiones variables. stas pueden sufrir alteraciones y unirse de forma diferente a los ADN de las regiones constantes, dando millones de anticuerpos distintos (ver figura).

3 La ingeniera gentica
La ingeniera gentica es una tcnica que consiste en la introduccin de genes en el genoma de un individuo que carece de ellos. Se realiza a travs de las denominadas enzimas de restriccin, que son capaces de cortar el ADN en puntos concretos y as separar los segmentos que interesan. Se denomina ADN recombinante al que se ha formado al intercalar un segmento de ADN extrao en un ADN receptor. Por ejemplo, la integracin de un ADN vrico en un ADN celular. Las enzimas de restriccin hacen posible la formacin de ADN recombinante in vitro. En la actualidad, se puede aislar un gen determinado, el ADN pasajero, y, mediante un vector adecuado, introducirlo en bacterias. stas, al reproducirse, van aumentando el nmero de copias de ese gen. Este proceso de amplificacin se denomina clonacin. El vector puede ser un plsmido bacteriano o un virus.

ocumento 2

La clonacin
La clonacin en general se puede definir como el uso de mtodos asexuales para producir copias exactas de un individuo. Para ello es precisa la existencia de clulas pluripotentes que son extradas del organismo para que se desarrollen posteriormente y formen un nuevo individuo idntico al primero. Este mtodo es desde antiguo muy utilizado en la generacin de plantas, por ejemplo, la reproduccin por esquejes. En anfibios y en mamferos (ratones) se realiza mediante la introduccin de un ncleo de una clula somtica de un individuo original en un vulo al que previamente se le ha extirpado su ncleo haploide. Mediante el perfeccionamiento de esta tcnica, Ian Wilmut y colaboradores (en el instituto Roslin de Edimburgo) han logrado en 1996 un clon de una oveja a partir del material gentico de una clula ya diferenciada de glndula mamaria. Por respeto a la dignidad humana, se ha prohibido la clonacin de personas.

325

I Plsmidos y virus
Un plsmido bacteriano es un pequeo ADN circular de doble hlice del que puede haber varios ejemplares (de 20 a 50) en una misma bacteria. Son como minicromosomas que se duplican autnomamente. Si mediante la lisis de las bacterias quedan libres en el medio, pueden penetrar dentro de otras bacterias, proceso denominado transformacin, especialmente si sus membranas se hacen permeables al ADN, mediante la adicin de cloruro clcico. Las bacterias receptoras adquieren as las propiedades de los genes contenidos en el plsmido. Para conocer qu bacterias han experimentado dicha transformacin, a los plsmidos que se utilizan como vectores de un ADN pasajero, adems de este ADN, se les aaden genes que codifican protenas degradadoras de antibiticos. Esta circunstancia permite luego seleccionar las bacterias que han integrado el plsmido, ya que son la nicas que sobreviven en un medio con antibiticos (fig. 4). Los plsmidos de bacterias no se integran en el cromosoma bacteriano; en cambio, se han descubierto plsmidos en las levaduras, que son clulas eucariotas, que s se integran en los cromosomas. Esto permite utilizarlos como vectores de genes, incluso de gran tamao como son los de mamferos, que previamente se han intercalado dentro de ellos. Igualmente existe un plsmido (denominado Ti), en una bacteria que parasita plantas, uno de cuyos sectores (denominado T) s puede penetrar en las clulas vegetales e insertarse en uno de sus cromosomas. Esto permite utilizarlo como vector de genes que previamente se han intercalado dentro de T (fig. 5). Los virus tambin se utilizan como vectores. Cuando un virus infecta una bacteria y se inicia el ciclo ltico, se destruye el ADN celular, se replica el ADN vrico y se sintetizan las protenas de la cpsida. Posteriormente se encapsulan los ADN vricos formndose nuevos virus. En ocasiones, por error, se encapsulan segmentos del ADN bacteriano. Estos virus defectivos pueden infectar a una segunda bacteria, gracias a las propiedades de la cpsida, e introducir el segmento del ADN de la bacteria hospedadora anterior, proceso llamado transduccin. ste se puede recombinar (intercambiar) con su segmento homlogo de la bacteria actual, por lo que sta adquiere las propiedades de los genes de la clula anterior (fig. 6).

G A A , terminan con T T C. Al cortarse por el mismo punto queda un corto oligonucletido en cada lado del corte, de tal modo que uno es complementario del otro. Son los llamados segmentos cohesivos (fig. 7). stos facilitan la formacin de ADN recombinantes a partir de dos ADN cortados por la misma enzima de restriccin (fig. 8). Dado que en los procariontes no hay proceso de maduracin del ARNm, si se desea intercalar un gen eucaritico en una bacteria, no se puede introducir un segmento de ADN con intrones y exones, sino que se ha de utilizar una enzima de origen vrico, denominada transcriptasa inversa o retrotranscriptasa, para producir ADN a partir de una hebra de ARNm ya maduro (molcula en la que ya no hay intrones). Posteriormente se ha de duplicar para que se forme ADN de doble hlice, llamado ADN complementario (ADNc), y finalmente introducirlo en un vector (un virus o un plsmido) para que lo transporte al interior de la bacteria (fig. 9) Los genes que se han de introducir, el llamado ADN pasajero, pueden provenir de: ADN de una clula que ha sido fragmentado mediante enzimas de restriccin. ARNm aislado, el cual se utiliza como molde para, mediante la enzima transcriptasa inversa de origen viral y otras enzimas, fabricar un ADN de doble hebra. ADN sintetizado artificialmente segn el orden deducido de la secuencia de aminocidos de la protena que se desea fabricar. Esto permite introducir mutaciones y elaborar nuevas enzimas (enzimas de diseo). Se est trabajando en hacer enzimas capaces de catabolizar el insecticida DDT o el petrleo y as, mediante ingeniera gentica, obtener bacterias que permitan la recuperacin de ambientes contaminados por dichas sustancias. Los dos ltimos procesos permiten que una bacteria, organismo en el que no hay maduracin del ARNm, pueda fabricar protenas de clulas eucariotas, cuyos genes suelen presentar intrones y exones y que, por tanto, s presentan maduracin de su pre-ARNm.
CUESTIONARIO 3
1. Por qu en ingeniera gentica es una ventaja utilizar como vector de genes un plsmido que posea informacin sobre resistencia a ciertos antibiticos? 2. Por qu se utiliza la transcriptasa inversa vrica para introducir genes de clulas eucariotas en las bacterias? 3. Las bacterias son capaces de incorporar, a su ADN, segmentos de ADN que haya en el medio externo, con lo que la bacteria adquiere los caracteres informados por ese ADN, proceso denominado transformacin bacteriana. Qu otros dos procesos existen de parasexualidad en bacterias, es decir, de incorporacin de ADN externo?

I La insercin de genes
Para posibilitar la insercin del ADN pasajero en el ADN vector, es conveniente cortar ambos con la misma enzima de restriccin. stas cortan en un punto determinado, situado en unas secuencias (denominadas palindrmicas) que son iguales en ambas hebras y que presentan simetra segn la complementariedad de las bases; es decir, si, por ejemplo, empiezan con
326

Gen de resistencia a un antibitico Plsmido Permeabilizacin con calcio de las membranas bacterianas Bacteria transformada. Ha incorporado el plsmido

El plsmido heredado se ha replicado

Bacteria no transformada. No ha incorporado ningn plsmido. No puede reproducirse en un medio con antibitico Cromosoma bacteriano El plsmido heredado no se ha replicado

Esta bacteria no se podr dividir en un medio con antibitico

4 Transformacin de bacterias.

Plsmido Ti con un gen interesante intercalado en el sector T Clula de planta de tabaco Clula transformada

Clula de planta transgnica

Clulas cultivadas

Plntula

Planta de tabaco transgnica

5 Utilizacin del plsmido Ti como vector de genes en plantas.

ADN vrico
A C B

4
ADN bacteriano Liberacin de viriones maduros tras la lisis de la bacteria

Replicacin del ADN vrico

A C B

5
c A a

Fragmentacin del ADN bacteriano

Un virus que contiene un fragmento del ADN del hospedador anterior infectando a una segunda bacteria

Protenas de la cpsida

3
Algn fragmento de ADN bacteriano se empaqueta en una cpsida en lugar de ADN vrico

6
c b A a

El ADN infectante se recombina con ADN bacteriano. Se produce as la transduccin de genes de una bacteria a otra

6 Transduccin.

327

Plsmido SC 101
Sitio de corte
T A

A T

A T

G C

ADN extrao
Origen de replicacin Corte con endonucleasa Eco RI T T A A A A T T Sitios 1 de corte AATT TTAA AA T T TT A AT Reasociacin A AT A A TT Ligasa de ADN AA T T TT A A A A T 2 3 Corte con endonucleasa Eco RI AATT AATT TTAA TTAA

ADN del virus SV40

Enzima de restriccin Eco RI

G A AT T C C T TA A G

Plsmido quimera

ADN lineal

T A AT TT

7 Rotura del ADN del virus SV40 por la enzima de restriccin Eco RI originando un ADN lineal con segmentos cohesivos.

8 Formacin de un ADN recombinante a partir de un plsmido y de un ADN lineal extrao cortados por la misma enzima de restriccin.

ADN plasmdico

Lazo en horquilla

Cola de poli A 3' AAAA 5' TTTT cebador Transcriptasa inversa viral de oligodT AAAA 5' TTTT 5' 3' ADNc NaOH que degrada el ARNm ARNm TTTT 5'

Rotura 5' AATT 3'

Nucleasa Eco RI 3' Nucleasa S1

ADNc

ADN polimerasa I 3' 5' 3' 5' Tratamiento con exonucleasa 3' 5' Transferasa terminal ms dTTP TTTT 3' 5'

5' TTAA Tratamiento con exonucleasa ADNc de doble 5' cadena 3'

5' Transferasa terminal ms dATP 3' 5' AAAA AAA 5' Calentamiento y enfriamiento lento AAA TTTT Polimerasa I de ADN AAAA TTTT Ligasa de ADN 3' 3' 3'

5' TTTTT

AAAA TTTT

AAAA TTTTT ADN plasmdico ADN de Drosophila

AAAAA TTTTT

AAAAA TTTTT

Plsmido quimera (ADN recombinado)

9 Sntesis de un ADN complementario (ADNc) e insercin de ste en un plsmido.

328

ingeniera gentica y la terapia 4 La de enfermedades humanas

Se conocen unas 3.000 enfermedades genticas en los humanos. El 2 % de los recin nacidos sufren una de esas enfermedades. En la mayora de los casos no se han identificado los genes responsables, slo en algunos se conoce, y en muy pocas de estas enfermedades se dispone de un mecanismo para incorporar el gen correcto a las clulas del individuo afectado. Ante estas dificultades, muchas veces se opta por transferir el gen humano normal a una bacteria, obtener la sustancia a partir de ella y luego inyectarla. Cuando se dispone del mecanismo para hacer llegar el gen correcto a las clulas del ser humano, si esto se realiza en las clulas somticas, la denominada terapia de la clula somtica, se produce un cambio en slo determinadas clulas, no afecta al resto ni a las clulas germinales, por lo que el cambio no es hereditario. Esto es comparable al hecho de recibir un trasplante. Si el gen correcto se hiciera llegar a un vulo, a un espermatozoide o a un cigoto, se denominara terapia de la clula germinal. Todas las clulas del individuo sufriran la modificacin y, por lo tanto, esa alteracin la presentaran los descendientes y todas las futuras generaciones. En la actualidad, la terapia de las clulas germinales no es realizable tcnicamente. muy elevado, esta va de obtencin resulta muy rentable. Adems, se trata de insulina humana en lugar de insulina porcina, que es la que haba antes en el mercado para los enfermos de diabetes. La hormona del crecimiento es un nico polipptido de 191 aminocidos. Tambin se ha introducido su gen en bacterias gracias a un plsmido en el lugar regulado por el promotor del opern lac. Esta hormona se emplea para tratar algunos casos de enanismo. El interfern (IFN) es una protena de peso molecular entre 16.000 y 20.000, que contiene una cadena glucosdica. Se aisl a partir de clulas animales que la producan como respuesta a infecciones vricas. Se ha observado que esta sustancia limita o incluso anula los efectos de la infeccin. La aplicacin del interfern ha sido positiva en enfermedades vricas, como resfriados, hepatitis, herpes, rabia, etc. En aplicaciones prolongadas disminuye los efectos del cncer. Se han observado claras regresiones de las metstasis durante el tiempo que dura su aplicacin (ver el concepto de cncer en este mismo captulo y en el Bloque 6: Inmunologa). Se conocen tres tipos de interferones, segn el tipo de clulas a partir de las cuales se extrae. En la actualidad, se ha conseguido aislar el ADN responsable del interfern en leucocitos y fibroblastos (tejido conjuntivo) infectados. Este ADN se ha introducido en bacterias y, aunque la tasa de obtencin es muy baja debido a la inestabilidad de esta molcula, se espera que en el futuro se mejorar el rendimiento y servir para el tratamiento de las enfermedades vricas y de algunos tipos de cncer. El factor VIII de la coagulacin. La hemofilia es una enfermedad que consiste en la no coagulacin de la sangre, debido a la ausencia de alguna de las protenas que intervienen en el proceso. El 80 % de las veces se debe a la ausencia del factor VIII. A partir de la introduccin en bacterias del gen humano que lo codifica, se ha obtenido dicho factor de forma ms rentable que a partir de la sangre de donantes, y sin el peligro de introducir virus (de la hepatitis B, del SIDA, etctera), como desgraciadamente ha sucedido en varios pases.
329

1. Sustancias humanas producidas por bacterias

Los primeros genes humanos introducidos en bacterias con el fin de obtener sustancias que son necesarias para la vida de muchas personas han sido: el gen de la insulina, el gen de la hormona del crecimiento, el gen del interfern y el gen del factor VIII de la coagulacin. La insulina es la molcula encargada de regular el nivel de glucosa en la sangre. Tiene dos cadenas de aminocidos: el pptido A (21 aminocidos) y el pptido B (30 aminocidos). Una vez aisladas las dos secuencias de nucletidos, se introdujeron por separado, mediante plsmidos, en dos estirpes diferentes de bacterias, detrs del opern lac. stas proporcionaron en muy poco tiempo muchas bacterias portadoras de esos genes. Al aadir lactosa al medio, estas bacterias empiezan a sintetizar pptidos A o B, respectivamente. Luego se retiran, se purifican y se activan los grupos SH para que se unan los dos pptidos y se forme la insulina humana madura. Como el metabolismo bacteriano es

2. Ingeniera gentica en humanos

Otra de las vas seguidas en la terapia gnica es la introduccin del gen correcto en las clulas humanas. Se han clasificado unas 3.000 enfermedades debidas a la deficiencia o alteracin de un gen. De ellas, las primeras sobre las que se ha trabajado son: La talasemia. Bajo este nombre se conoce un grupo de enfermedades relacionadas con la presencia de hemoglobinas diferentes de las normales. Ello da lugar a una anemia ms o menos grave. Es propia de las poblaciones humanas de la cuenca mediterrnea. Se debe a alteraciones en los genes de las hemoglobinas. El tratamiento de estas enfermedades, mediante ingeniera gentica, consiste en retirar clulas de la mdula sea del enfermo, mediante una puncin en los huesos de la cadera, e introducir en ellas el gen correcto mediante un virus, y volverlas al torrente sanguneo para que se implanten de nuevo en la mdula sea. Se ha observado que la seleccin de las clulas

productoras de hemoglobina, entre todos los tipos de clulas de la mdula sea, es una tarea muy difcil, que los genes introducidos se expresan muy poco y que las alteraciones en su manifestacin son muy peligrosas. Se precisa conocer mejor la expresin gnica para mejorar los resultados. La carencia de la enzima adenosn desaminasa (ADA). Esta enfermedad implica un fallo en los linfocitos, que acaba con la vida del paciente. Es conocida con el nombre de enfermedad de los nios burbujas, porque estos nios deben vivir aislados del contacto con grmenes. Al carecer de un sistema inmunitario correcto, cualquier infeccin resulta fatal para el individuo. Se trata por ingeniera gentica mediante un proceso similar al de la talasemia. Las restantes enfermedades que tienen ms probabilidades de ser tratadas en un futuro prximo mediante ingeniera gentica son la carencia de purnnuclesido-fosforilasa (PNF), la citrulinemia, la fenilcetonuria, y la hipercolesterolemia familiar.

5 La ingeniera gentica y la produccin agrcola y animal

Los organismos eucariticos desarrollados a partir de una clula en la que se han introducido genes extraos se denominan organismos transgnicos. La introduccin de genes en clulas eucariotas es ms difcil que en bacterias. Ello se debe a que es ms complicado hacer permeable su membrana, y a que en las vegetales, adems, hay que disolver la pared celulsica. Se conocen tcnicas alternativas como son la microinyeccin (introduccin de ADN mediante una microjeringa y un micromanipulador) y el uso de una pistola que dispara microbalas de metal recubiertas de ADN. En las plantas se suele utilizar como vector un plsmido de una bacteria parsita que le provoca tumores. resisten a varios herbicidas gracias a poseer un gen bacteriano. Variedades transgnicas del trigo ms nutritivas y ms resistentes a las plagas y a los herbicidas gracias a haber incorporado ciertos genes de insectos y de bacterias. Una variedad de tomate que madura ms lentamente, por lo que permite ms das para su transporte, gracias a anular el gen que regula su maduracin al haberlo insertado en sentido inverso. Plantas del tabaco transgnicas que si se rocan con luciferina emiten luz, gracias a la introduccin en fragmentos de hoja, mediante un plsmido, del gen de la enzima luciferasa de las lucirnagas. Esta enzima descompone la sustancia luciferina desprendiendo luz. La adicin de este gen a otros genes que se desea introducir permite reconocer fcilmente si se han incorporado o no. Otro de los campos en los que se est trabajando es la insercin de los genes nif, que posibilitan el aprovechamiento del nitrgeno atmosfrico, N2, por parte de algunas bacterias y cianobacterias, en el genoma de las plantas superiores, para que stas no dependan de la cantidad de nitritos y nitratos del suelo.

1. La ingeniera gentica aplicada a la produccin agrcola

Los principales logros en plantas debidas a las tcnicas de ingeniera gentica han sido: Variedades transgnicas del maz que resisten las heladas gracias a la incorporacin de un gen de un pez muy resistente al fro, variedades que resisten a determinadas plagas gracias a haber incorporado un gen del trigo, y variedades que
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2. La ingeniera gentica aplicada a la produccin animal

Las principales aplicaciones de las tcnicas de ingeniera gentica a la mejora de la produccin animal se han realizado en peces. Ello se debe a que en la mayora de los peces la fecundacin es externa, lo cual permite la introduccin de genes en el cigoto antes de que se unan el ncleo del espermatozoide y el del vulo. Esto se realiza mediante microinyeccin o mediante un campo elctrico que hace permeable su membrana plasmtica. El gen se fija al proncleo masculino (fig. 10). Se obtiene entre un 10 y un 70 % de embriones transgnicos, en vez de un 1 % que es lo que suele obtenerse en mamferos. A partir de estas tcnicas se han conseguido los siguientes logros: Carpas transgnicas que crecen entre un 20 y un 46 % ms rpidamente gracias al gen de la hormona del crecimiento de la trucha arco iris. ste se ha unido a un promotor (regin de ADN que regula la expresin del gen vecino) sensible a los metales pesados. Debido a ello, la expresin del gen se estimula cuando se aade cinc a la dieta.

Salmones transgnicos que resisten mejor las bajas temperaturas gracias a haber incorporado un gen de una especie de platija que vive en el rtico. Este gen produce una protena que se une a los cristales de hielo que se forman en la sangre e impide su crecimiento, por lo que se evita la congelacin del medio interno. En mamferos tambin se han realizado diversos experimentos encaminados a obtener organismos con una mayor tasa de crecimiento. As, en ratones que carecan de la hormona del crecimiento, debido a una mutacin en el gen correspondiente, tras la introduccin del gen de la hormona del crecimiento de rata, mediante microinyeccin en cigotos homocigticos, se han obtenido ratones transgnicos con 800 veces ms hormona que los ratones normales, lo que provoca individuos con ms del triple de peso y tamao. Esto puede tener un gran inters en la produccin animal. En realidad, el nuevo gen no se ha situado en el lugar propio sino en otro; as pues, no se ha corregido el defecto sino que simplemente se ha enmascarado (fig. 11).

Los peces liberan vulos y espermatozoides al medio acuoso: fecundacin externa

50% Embriones no viables Entre 10 y 70% PECES TRANSGNICOS El ADN extrao se ha insertado en el ADN original

50%

A las pocas horas de ser fecundados, todava en el estadio pronuclear, los embriones reciben una microinyeccin de ADN

Embriones viables

PECES NO TRANSGNICOS

Zn

ADN

El cinc (presente en la dieta) hace reaccionar al promotor Promotor Gen Protena deseada

El ADN extrao no ha conseguido engancharse al cromosoma original

11 Ratn transgnico. El ratn de la izquierda, alterado genticamente, procede de un cigoto que ha recibido, mediante inyeccin, el gen GDF 8, cuya expresin produce un grado de crecimiento superior al normal. El ratn de la derecha es normal.

ARN

Hormona del crecimiento

CUESTIONARIO 4
Crecimiento ms rpido

1. Por qu es ms fcil aplicar la ingeniera gentica a los peces que a los mamferos? 2. Por qu en ingeniera gentica es ms fcil trabajar con bacterias que con plantas o con animales? 3. Por qu es importante poder controlar en qu lugar se inserta el gen introducido? 4. Qu es un organismo transgnico?

Protena anticongelante

Posibilidad de sobrevivir en ambientes ms fros

10 Obtencin de peces transgnicos.

331

6 El cncer: una enfermedad gentica

1. Concepto de cncer y su relacin con el ADN
El cncer es una enfermedad que consiste en una multiplicacin acelerada de ciertas clulas alteradas, que forman tumores, y que pueden migrar a otros puntos, a travs del sistema circulatorio y linftico, lo que se denomina metstasis. Si el tumor est muy localizado y no crece indefinidamente, recibe el nombre de tumor benigno. Generalmente, se puede extirpar con facilidad. En cambio, si crece invadiendo y destruyendo los dems tejidos del organismo, con el consiguiente adelgazamiento del individuo, recibe el nombre de cncer maligno. La palabra cncer (cangrejo) alude a un mal que ataca desde dentro. Las clulas cancerosas se diferencian de las normales en que se dividen a gran velocidad, poseen protenas de membrana diferentes (pueden ser detectadas mediante reacciones antgeno-anticuerpo), presentan alteraciones de forma y tienen tendencia a invadir los tejidos prximos. Se considera que la alteracin de las protenas de membrana receptoras de hormonas mitgenas (inductoras de mitosis) puede estar relacionada con su incesante divisin. El paso de clula normal a clula cancerosa, denominado transformacin cancerosa o neoplsica, est relacionado con diferentes factores ambientales que mayoritariamente actan alterando el ADN. Se considera la existencia de ciertos genes, denominados protooncogenes, que, con una pequea alteracin producida por los llamados agentes cancergenos, pasan a oncogenes y stos provocan la transformacin cancerosa. Adems hay otros genes, denominados antioncogenes o genes supresores, que inhiben la divisin celular, establecindose un equilibrio entre unos y otros. En los humanos se han identificado ms de 100 oncogenes y unos 12 antioncogenes. En animales de laboratorio se ha comprobado que el ADN de clulas cancerosas es capaz de provocar la transformacin de clulas sanas en cancerosas, confirmando que la alteracin radica en el ADN. En los humanos se conocen dos tipos de cncer con un claro componente hereditario (el retinoblastoma y el xeroderma pigmentosum), lo cual confirma su relacin con el ADN.

2. Cncer producido por virus

Se conocen varios virus que producen cncer al infectar las clulas (transduccin) de determinados animales de laboratorio; son los denominados virus oncognicos. Todava no se han encontrado en humanos. Estos virus poseen uno o ms genes capaces de producir la transformacin cancerosa; son los denominados oncogenes: por ejemplo, el oncogn src del virus oncognico del sarcoma de Rous, un virus de ARN, que afecta al pollo. Es el virus en el que se descubri la enzima retrotranscriptasa o transcriptasa inversa.

ocumento 3

Los oncogenes
En el virus del sarcoma de Rous se ha observado que el oncogn src produce la protena proteinquinasa que acta fosforilando el aminocido tirosina, lo que cambia las propiedades de muchas protenas. Tiene, pues, una gran influencia y puede ser considerada como una protena reguladora. Se ha observado que el virus no precisa de este oncogn para realizar su ciclo y, por otro lado, que en el ADN del pollo existen secuencias, separadas por intrones, que juntas son complementarias del gen src, que es un segmento de ARN. A estas secuencias juntas se las llama protooncogn, ya que se supone que es el precursor del oncogn. Los oncogenes son muy parecidos a los protooncogenes, no iguales porque entonces la clula sera cancerosa. Los oncogenes pueden utilizarse como sondas para detectar la existencia de protooncogenes en las clulas normales, observando qu segmento del ADN celular se hibrida con el oncogn. Los protooncogenes as localizados han permitido averiguar qu alteraciones en la secuencia de ADN implican la transformacin cancerosa. Mediante enzimas de restriccin se ha cortado el protooncogn y el oncogn por los mismos lugares y se han recombinado los segmentos resultantes, es decir, se han obtenido segmentos mixtos de oncogn y protooncogn. A partir de los segmentos que continuaban produciendo la transformacin cancerosa se ha podido deducir cul es la diferencia. En el caso del cncer humano de vejiga se limitaba a un par de bases (A en lugar de G), de los 5.000 que tena el oncogn. Esto implicaba el cambio de un solo aminocido (valina en lugar de glicina), pero esto es suficiente para que la nueva protena implique las caractersticas de la clula cancerosa.

332

3. Cncer producido por sustancias qumicas o por radiaciones

En los seres humanos, la mayora de los cnceres, excepto algunos tipos de cncer de hgado y de leucemias, no estn relacionados con virus, sino con otros agentes cancergenos, como son las radiaciones UV y X, las radiaciones nucleares, el alquitrn, los ahumados, el pan tostado chamuscado, el amianto, el cloruro de vinilo, las anilinas, algunos conservantes y edulcorantes artificiales, las bebidas alcohlicas, sobre todo las de alta graduacin, y el tabaco; este ltimo directamente relacionado con el cncer de pulmn (fig. 12). Los agentes cancergenos generalmente son mutgenos. Sus efectos no son inmediatos, como sucede con muchos mutgenos, sino que precisan repeticin y otros factores complementarios para que se desencadene la transformacin de clula normal en clula cancerosa. Se considera que adems del agente mutgeno es necesario un proceso promotor, por ejemplo, una recombinacin que site el oncogn bajo un potente promotor que implique su transcripcin y por ello la aparicin de mucha protena alterada. Dado que el sistema inmunitario debera destruir las clulas cancerosas, se considera que debe producirse tambin una alteracin de este sistema, tal vez en los linfocitos T citotxicos, y de la sntesis de interfern.
Riesgo relativo de cncer de pulmn (no fumadores = 1) 50 40 30 20 10 no fumador 1-10 11-20 21-30 31-40 40 o ms cigarros/da cigarros con filtro cigarros sin filtro

4. El cncer y la respuesta inmunolgica

Las clulas cancerosas tienen molculas especiales en su membrana que pueden actuar como antgenos; sin embargo, cuando la respuesta inmune no es la apropiada, el crecimiento tumoral prosigue. La investigacin se ha centrado en ciertos antgenos de las clulas cancerosas que, al ser inoculados en ratones de laboratorio, desencadenan la respuesta inmune de los linfocitos. El objetivo es esperar que estos anticuerpos, al ser introducidos en el enfermo, destruyan las clulas tumorales. Para aumentar su produccin se han fusionado los linfocitos que los producen con clulas tumorales. Los anticuerpos as obtenidos se denominan anticuerpos monoclonales. En la actualidad tambin se sigue investigando en conseguir la inmunidad activa, es decir, la respuesta inmunolgica suficiente de las clulas humanas, mediante el uso de clulas cancerosas atenuadas por irradiacin o por modificacin gentica (ingeniera gentica), o sea, la vacuna frente a uno o varios tipos de cncer. Se ha comprobado que hay sustancias anticancergenas que actan en los sistemas de reparacin del ADN o evitando los procesos promotores. Estas sustancias se encuentran en las frutas, en las verduras, en el aceite de oliva y en el pescado azul. Constituyen la mejor prevencin contra el cncer.

12 Probabilidad (riesgo) relativa de padecer un cncer de pulmn en funcin del nmero de cigarrillos consumidos por da.

13 Crecimiento tumoral. Cncer en la lengua.

ocumento 4

Los anticuerpos monoclonales

Para aumentar la produccin de anticuerpos contra los antgenos de las clulas cancerosas, se han fusionado los linfocitos que los producen con clulas de un mieloma (un tumor del sistema inmunitario). Estas clulas hbridas (hibridomas) combinan la funcin de producir anticuerpos con la proliferacin del tumor, obtenindose as una gran cantidad de anticuerpos denominados anticuerpos monoclonales. Han dado buenos resultados en leucemias y en linfomas pero no sobre tumores slidos. Para aumentar la eficiencia, se han unido a los anticuerpos monoclonales molculas radiactivas, sustancias citotxicas o sustancias antineoplsicas, las cuales actan slo sobre las clulas diana. As, se han obtenido reducciones de hasta un 30 % en los tumores slidos del cncer de colon. Mediante ingeniera gentica se intenta que las clulas cancerosas posean ms antgenos, para que sean ms fcilmente atacadas por los anticuerpos, y que sean ms sensibles a los medicamentos citotxicos.

333

7 El Proyecto Genoma Humano

A finales de los aos 80 se propuso el objetivo internacional de conocer la secuencia de nucletidos (3 109 pares de nucletidos) de los 100.000 genes del ser humano que estn contenidos en los 23 tipos de cromosomas. Con este propsito, se fund en 1988 la Organizacin del Genoma Humano (HUGO), y en 1990 se inici el llamado Proyecto Genoma Humano. El conocimiento de la secuencia normal de nucletidos permitir tener una referencia para la terapia gnica. Se podr conocer si se es portador de una enfermedad gentica que no se manifiesta en los primeros aos de la vida, la posibilidad de que lo haga, y de ese modo poder tomar las precauciones necesarias. Las enfermedades que primero pueden beneficiarse de estos conocimientos son el cncer, la enfermedad de Alzheimer, ciertos asmas y determinadas enfermedades neuronales como la esquizofrenia. En una primera fase, despus de descifrarse el genoma humano, slo se vern beneficios en el diagnstico de enfermedades. Debern pasar unos veinte aos hasta que se empiecen a obtener medicamentos y terapias. En la investigacin pura, si se conocen los genomas de otras especies, se podr deducir de dnde venimos y cmo se ha producido la evolucin. A finales de 2002 se conocen los genomas de diversos virus (MS2, SV40, -X-174, ), de algunas bacterias (Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae y Escherichia coli), de una levadura (Saccharomyces cerevisiae) que es un organismo unicelular eucariota, de un gusano nematodo de un milmetro de longitud y solo 859 clulas (Caenorhabditis elegans), de la mosca del vinagre (Drosophila melanogaster) de una planta (Arabidopsis thaliana) y de gran parte del ADN de la espcie humana (Homo sapiens). La secuencia de nucletidos de cada gen se realiza mediante la electroforesis en geles de distintos fragmentos del ADN y la ayuda de los ordenadores. En 1989 slo se conocan 3 106 y se avanzaba a razn de unos 50.000 nucletidos por ao y grupo de trabajo. Desde 1991, gracias a las nuevas tcnicas, el ritmo de este proceso pas a ser de 500.000 nucletidos por ao y grupo de trabajo. Se ha trabajado con ARNm, lo que simplifica mucho la tarea, ya que slo un 3 % del genoma son genes que codifican protenas. Adems, ha ido aumentando el nmero de laboratorios que trabajan sobre algn aspecto relacionado con la secuenciacin de genes (hoy existen unos 10.000 en todo el mundo). Si contina esta aceleracin se espera que entre el 2003 y el 2007 se conocern el 90 % de los genes, aquellos que son comunes a la mayora de los individuos (en la actualidad se trabaja con varias decenas de individuos de raza caucsica), y que 10 o 20 aos despus se conocer el 10 % restante, es decir, los genes que son distintos en cada individuo. En febrero del 2001, ya se public el 90% del genoma humano por parte de F. Collins (director del Consorcio Pblico del genoma humano) y de C. Venter (presidente de la empresa privada Celera), que haban trabajado por separado. Lo que se present fue la secuencia de los 3.000 millones de nucletidos. Falta saber donde estn todos los genes, como actan y como se reparan. La primera sorpresa fue que tenemos la mitad de genes de lo que se pensaba, que muchos son comunes con las bacterias y otros organismos sencillos y que no hay apenas diferencias entre razas (figura 14). En breve se piensa relacionar unas 60.000 secuencias que difieren en un slo nucletido (snips) presentes en el conjunto de genes humanos con unas 1500 enfermedades hereditarias. Actualmente se est trabajando con ADN de unas cuantas decenas de seres humanos de raza caucsica. Se espera que entre el 2010 y 2020 se conocer el 10% del genoma restante, es decir los genes que son diferentes en cada individuo. Tambin est previsto completar en breve el genoma del ratn, animal muy utilizado en la investigacin farmaceutica.

8 Riesgos e implicaciones ticas de la ingeniera gentica

La tcnica del ADN recombinante se inici en los aos 70, slo 15 aos despus que se descubriera la estructura del ADN, y desde entonces algunos cientficos expresaron sus preocupaciones sobre sus posibles peligros. Por ejemplo, el virus de los simios 40 (SV40) se sabe que produce cncer en los monos. Si se introduce en la bacteria Escherichia coli, que es capaz de vivir en el intestino humano, tal vez originara una bacteria que, si escapa del laboratorio, podra producir cncer en los humanos.
334

En 1974, once bilogos pidieron el establecimiento de normas para regular los posibles peligros de los trabajos con ADN recombinante y pidieron una moratoria respecto a experimentos con genes productores de cncer o sustancias txicas. En 1976 se establecieron las normas para este tipo de experimentos, normas de esterilizacin, salas a baja presin para evitar la salida de aire contaminado en caso de accidente, trabajar con cepas de E. coli genticamente dbiles que no pueden vivir fuera del laboratorio, etc.

En una primera etapa, las cuestiones sobre ingeniera gentica se centraron en la calidad, seguridad y eficacia de los productos. En una segunda etapa, la discusin ha girado en torno a cuestiones ticas y su relacin con los procesos legislativos. Para dar respuesta a estas cuestiones se han creado varias organizaciones, entre ellas el Comit Internacional de Biotica de la Unesco, constituido por unos 50 cientficos de unos 35 pases, fundado por el espaol F. Mayor Zaragoza en 1993. El objetivo de estos comits de biotica es evitar aspectos del progreso que atenten contra la dignidad humana, que la ciencia no sea identificada como parcialmente sospechosa, y que sus posibilidades no generen peligrosidad por falta de definiciones ticas. Los criterios bsicos establecidos son: Lmites por motivos ecolgicos y de sanidad. Se considera que han de existir controles muy estrictos en la produccin de organismos transgnicos cuando stos puedan causar desastres ecolgicos, como extincin de especies naturales debido a su mayor competitividad, causar enfermedades en los humanos (por ejemplo, infecciones debidas a los nuevos virus o nuevas bacterias) o causar contaminaciones, sobre todo de las aguas, debido a nuevos procesos metablicos indeseables. Lmites por motivos ticos y morales. Se considera que muchas aplicaciones que son totalmente lcitas en especies animales y vegetales no lo son en la especie humana debido a la dignidad de la persona. El uso de la ingeniera gentica con la intencin de curar una enfermedad humana (terapia gnica) es moralmente deseable, siempre que se respete la integridad del individuo y no lo exponga a riesgos desproporcionados. En el caso de los embriones, es preciso el consentimiento de los padres. Dado que la intencin curativa del individuo no es aplicable a las clulas reproductoras (no son individuos), no se considera ticamente correcta la aplicacin de estas tcnicas a los gametos humanos. Tambin se prohbe trabajar con embriones humanos con finalidades de simple experimentacin.

Lmites por motivos sociales. Se considera que han de existir lmites legales, basados en el derecho a la intimidad, que impidan la exigencia de un sondeo gnico para acceder a un puesto de trabajo, a una plaza en un centro educativo, a una asistencia sanitaria, a la firma de una pliza de seguros, etc. Lmites por motivos polticos. Se considera que las aplicaciones de la ingeniera gentica en la produccin vegetal y animal han de favorecer a todos los humanos y no solamente a los grupos que dominan estas tcnicas. Podra haber perjuicios econmicos graves si, mediante el establecimiento de patentes de organismos transgnicos, se aumentaran las diferencias entre pases pobres y pases ricos. Hay controversia entre los cientficos sobre la licitud de patentar las secuencias del genoma humano que se vayan descubriendo. Unos consideran que no deberan patentarse nunca, sino ponerlas al servicio de todos los pases. Otros aducen que es lgico que los laboratorios quieran recuperar las inversiones realizadas, tal y como sucede en la industria farmacutica, ya que si esta investigacin fuera costeada por los gobiernos, comportara un aumento de los impuestos que no parecen dispuestos a asumir; y que si no se permite obtener beneficios, es posible que no se comuniquen los avances por miedo a que se prohba patentarlos. La organizacin HUGO defiende que slo se puedan patentar las secuencias de las que se sepa su funcin, tal como marcadores, lugares de actuacin de medicamentos o genes de funcin conocida.

CUESTIONARIO 5
1. Qu peligros respecto al equilibrio ecolgico y respecto a la salud humana se pueden derivar de la ingeniera gentica? 2. Qu ventajas respecto a la alimentacin y a la salud humana cabe esperar de estas tcnicas? 3. Deben existir lmites para determinadas prcticas cientficas? 4. Slo los cientficos deben establecer las normas ticas? Es responsable el cientfico del mal uso que posteriormente se puede hacer de sus descubrimientos? 5. Es posible predecir los posibles efectos negativos en los humanos y en el entorno natural de los organismos transgnicos? 6. Es congruente con la finalidad de la ciencia la posibilidad de escoger, por ejemplo, el color de la piel del hijo? 7. La eleccin de embriones, la clonacin, la creacin de nuevas especies y la produccin de organismos transgnicos, tan generalizadas en la investigacin en animales, pueden ticamente realizarse en humanos? Por qu?

Organismo Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae Drosophila melanogaster Caenorhabditis elegans Arabidopsis thaliana Homo sapiens

Nmero de genes 4.300 6.250 13.600 18.425 25.500 50.000

Tamao del genoma (Mb) 4,6 12,0 (*) 120,0 97,0 (*) 115,0 (*) 3.000,0

(*) Se refiere a la eucromatina excluyendo la heterocromatina.

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Actividades
Lectura
LOS EXPERIMENTOS DE BENZER Y LA ESTRUCTURA FINA DEL GEN
Benzer trabaj con el virus bacterifago T4 capaz de lisar la bacteria Escherichia coli. Obtuvo distintos mutantes del virus que eran incapaces de lisar las bacterias, ya que tenan alterado el gen que controla este proceso. Obtuvo un gran nmero de mutantes diferentes y descubri que, si infectaba una misma bacteria con dos mutantes de distinto tipo, a veces se produca recombinacin entre sus ADN, es decir, intercambio de segmentos, de forma que si, por azar, se unan los segmentos no mutados de uno con los segmentos no mutados del otro, se constitua un ADN normal de virus T4, la llamada forma salvaje (), con la consiguiente lisis de la bacteria. El gen no era, pues, indivisible sino que tena partes. Saba que los segmentos recombinados eran muy prximos, es decir, pertenecan al mismo gen, dado el bajsimo nmero de veces que pasaba (0,05 %). Obsrvese que cuanto ms alejados estn dos segmentos en el cromosoma, ms fcil es que durante la recombinacin uno pase al otro cromosoma homlogo. A partir de los porcentajes de recombinacin entre los distintos mutantes, pudo deducir a qu distancia relativa estaban los distintos sectores mutados del gen y, de ah, el orden en que estaban. Esto es lo que se denomina deducir el mapa de un gen. Si, por ejemplo, la mutacin m y la o se juntan por recombinacin en una misma fibra de ADN un 0,10 % de las veces, la m y la n un 0,03 %, y la n y la o un 0,07 %, el orden y la distancia relativa es: m n o

Mutante m Mutante n n m

Escherichia coli Escherichia coli, cepa B. En estas bacterias los virus mutantes tambin producen lisis ADN recombinante m-n

Mutante m-n Mutante n

Mutante m

Replicacin del ADN vrico Virus carente de mutaciones (forma salvaje ) Experimentos de Benzer en casos de RECOMBINACIN. La frecuencia de los mutantes m-n permite deducir la distancia relativa entre m y n, y as la secuencia de sectores intragnicos.

Benzer tambin se plante averiguar qu tamao tena la unidad de funcin. Encontr que era mucho mayor que la unidad de estructura. Trabaj tambin con el virus T4 pero en situaciones en las que no haba recombinacin; pese a ello encontr que muchas veces, cuando se infectaba la bacteria con dos virus mutantes de distinto tipo, se produca la lisis de la bacteria: se deca que se complementaban. A

partir de ello comprob que haba dos grupos de virus mutantes, el tipo A y el tipo B. Si se infectaba la bacteria con dos virus del mismo tipo, no se produca su lisis; pero si eran de distinto tipo, s lo hacan. Encontr que les faltaban distintas regiones de un lugar denominado rII, de forma que entre los dos s conseguan la informacin necesaria para lisar las bacterias.

336

Actividades
PRUEBA CIS PRUEBA TRANS

m-n

A Lugares mutados en el mismo cistrn m n

B m

Se producir la lisis

No se producir la lisis porque falta la enzima mayor

m-o

A Lugares mutados en cistrones distintos m

B o m

Se producir la lisis

Se producir la lisis

Experimentos de Benzer en casos de COMPLEMENTACIN. Trabaj con cepas K que los virus mutantes no eran capaces de lisar. Slo cuando actan conjuntamente la enzima mayor y la enzima menor se produce la lisis. La va metablica es: Enzima Enzima (1) (2) LISIS

Para comprender esto mejor se puede imaginar que para provocar la lisis de la bacteria hacen falta dos enzimas, la A y la B, de forma que primero acta A originando un producto y sobre ste acta B dando una sustancia capaz de lisar la bacteria. Para ello se necesitan dos informaciones, una que informe sobre una enzima y otra sobre la otra. Benzer propuso el trmino cistrn para definir cada una de estas unidades de funcin. El cistrn equivale prcticamente a lo que actualmente se denomina gen, entendindolo como un segmento de cido nucleico con informacin para una cadena polipeptdica. El cistrn es, pues, una regin gentica cuyas mutaciones no se complementan entre s. El nombre cistrn viene de la prueba cis-trans empleada por Benzer para describir un ensayo de complementacin, en el que dos virus T4 mutantes infectan bacterias conjuntamente, y en las que se observa lo que sucede si las dos mutaciones (m, n y o en el ejemplo) estn en el mismo virus (posicin cis) o en virus distintos (posicin trans), y si afectan al mismo cistrn o a dos cistrones diferentes. En la actualidad se utiliza para dilucidar si dos mutaciones

afectan al mismo cistrn (en posicin trans no se complementan y no dan el carcter normal), o a cistrones diferentes (en posicin trans s se complementan). Cuestiones 1. Qu diferencia hay entre recombinacin y complementacin? 2. Puede haber complementacin en seres diploides? Y en seres haploides? Cmo? 3. Puede haber recombinacin en seres diploides? Y en seres haploides? Cmo? 4. Cmo averiguaras si dos mutaciones afectan al mismo gen o a genes distintos? 5. Si dos virus bacterifagos mutantes que no son capaces de lisar las bacterias por separado, lo son al infectarlas conjuntamente, qu se puede decir de la zona que tienen alterada? Y si son incapaces de hacerlo, pese a actuar conjuntamente?

337

MICROORGANISMOS

338

E INMUNIDAD
N D I C E

Tema 21.
Los microorganismos

Tema 22.
Microorganismos: enfermedades y biotecnologa

Tema 23.
El proceso inmunitario

Tema 24.
Anomalas del sistema inmunitario

Utilizacin de la telemedicina en el Servicio de Radiologa del hospital Trousseau, Pars.

Imagen al microscopio electrnico de una bacteria, Vibrio cholerae.

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21

Los microorganismos

N D I C E
INFORMACIN 1 Concepto y tipos de microorganismos. 2 Los virus.
Estructura de los virus. Origen de los virus Ciclo de los virus.

3 Las eubacterias.
Estructura bacteriana. Fisiologa bacteriana. Tipos de eubacterias.

Alga filamentosa verdeazulada presente en aguas estancadas.

4 Las arqueobacterias. 5 Los microorganismos eucariotas.

Las algas microscpicas. Los protozoos. Los hongos microscpicos.

LABORATORIO
Medios de cultivos bacterianos. La tincin de Gram.

La Microbiologa se encarga de estudiar los seres vivos de tamao microscpico. Aunque no los vemos a simple vista, los microbios o microorganismos estn ampliamente distribuidos por todos los medios ambientes de la Tierra, tanto terrestres como acuticos. S que es posible detectar su presencia cuando se concentran en enormes cantidades, como ocurre en la laguna representada en esta pgina, o por los efectos que producen, como, por ejemplo, las enfermedades que pueden originar en plantas y animales. La mayora de las principales enfermedades de la especie humana, como la tuberculosis, la malaria o el SIDA, son producidas por bacterias, por virus, por hongos microscpicos o por protozoos.

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1 Concepto y tipos de microorganismos

Los microbios o microorganismos son seres vivos de tamao microscpico y para observarlos hay que utilizar el microscopio. El trmino microorganismo es muy impreciso, puesto que incluye tanto seres unicelulares como seres pluricelulares. Adems, hay microorganismos que son auttrofos y los hay que son hetertrofos. Muchos microorganismos carecen de ncleo, por lo que son procariotas, pero tambin los hay eucariotas. Una caracterstica que une a todos los microorganismos, aparte de su pequeo tamao, es que cada clula microbiana puede realizar por s misma todas las funciones vitales como el metabolismo, el crecimiento y la reproduccin. Los microorganismos se clasifican en procariotas y eucariotas. Las diferencias principales entre los seres vivos procariotas y eucariotas pueden verse en el cuadro I.
Caractersticas Tamao Envoltura nuclear Orgnulos ADN Movimiento Pared celular De 0,5 a 2 Sin envoltura. No tienen ncleo y no realizan la mitosis. Slo ribosomas y mesosomas. Una sola molcula; no forma cromosomas. Flagelos de tamao submicroscpico y de estructura fibrilar simple. Delgada y de peptidoglucano. Procariotas De 2 a 200 Con envoltura. Tienen ncleo y realizan la mitosis. Variados (mitocondrias, vacuolas, plastos, ribosomas, etc.). Algunas o muchas molculas; forman cromosomas. Cilios o flagelos microscpicos de estructura fibrilar compleja. Ausente (protozoos), de celulosa (algas) o de quitina (hongos).

Los microorganismos procariotas son las arqueobacterias y las eubacterias, que pertenecen al reino mneras. Los microorganismos eucariotas son las algas microscpicas y los protozoos, que pertenecen al reino protoctistas, mientras que los hongos microscpicos (mohos y levaduras) se incluyen dentro del reino hongos. Aunque el acuerdo no es total entre los bilogos, los virus no son considerados seres vivos, puesto que carecen de toda actividad vital fuera de las clulas; sin embargo, su importancia como agentes transmisores de enfermedades hace que se tienda a estudiarlos como microorganismos. Las unidades empleadas en microscopa para definir las dimensiones de estos seres vivos son la micra o micrmetro (), el nanmetro (nm) y el angstrm (). Sus equivalencias son: 1 mm 103 106 nm 107
Eucariotas

CUADRO I. Diferencias entre los microorganismos procariotas y eucariotas.

CUESTIONARIO 1
1. Di, al menos, dos caractersticas que tengan en comn los microbios procariotas y los microbios eucariotas. 2. Indica las tres caractersticas ms importantes que diferencien los microbios procariotas de los eucariotas. 3. Estudia las semejanzas y diferencias entre las mitocondrias y las bacterias. Podras sacar alguna conclusin?

4. Cules son los microorganismos eucariotas? A qu reinos pertenecen? 5. Aunque los microorganismos empezaron a ser vistos en el siglo XVII, cuando se inventaron los primeros microscopios, sin embargo su existencia era intuida desde mucho tiempo antes. Sabras indicar algunas de las manifestaciones de los microbios conocidas desde la antigedad?

1 a) Bacteria: Bacillus subtilis. b) Virus: VMT. c) Alga: Spirogyra. d) Protozoo: paramecio.

6. Cuntos angstrm () mide una bacteria que tiene 2,3 de longitud?

341

Los virus

Los virus son partculas microscpicas muy sencillas constituidas por un cido nucleico (genoma vrico) que est envuelto por una cpsula proteica y, en ocasiones, una envoltura membranosa. Cuando se encuentran fuera de las clulas (fase extracelular) son totalmente inertes ya que no poseen enzimas para desarrollar un metabolismo propio. A los virus, en su fase extracelular, tambin se los denomina viriones. Los virus son capaces de adherirse a la superficie de otras clulas, introduciendo en ellas su genoma viral (de ADN o de ARN), en donde se reproduce y es capaz de sintetizar las envolturas de nuevos virus, utilizando la materia, la energa y el sistema enzimtico de la clula donde se encuentra (fase intracelular). Los virus, son, por tanto, parsitos obligados.

Se ha definido tambin a los virus como pequeas estructuras encargadas de transportar un cido nucleico entre una clula husped y otra clula husped. De modo retrico se dijo de ellos que eran trocitos de herencia buscando un cromosoma. Los virus son mucho ms pequeos que las clulas ya que su tamao no suele exceder de los 2.500 (una bacteria como Escherichia coli posee unas dimensiones de 25.000 por 10.000 , fig. 2). El virus de la polio, que es uno de los ms pequeos, mide slo 280 , mientras que el del sarampin, que es uno de los ms grandes, alcanza los 2.000 . Segn el husped al que parasitan, los virus se clasifican en virus bacterianos o bacterifagos, virus vegetales y virus animales. Tambin son criterios de clasificacin la posesin de ADN o ARN, la forma de la cpsula proteica, la presencia o no de envoltura membranosa o incluso la posesin o no de algunas enzimas especficas como la transcriptasa inversa.

Escherichia coli 1 m

0,25 m

Bacterifago T2 2,5 m Fibra de ADN

2 Tamao de los virus. Comparacin entre los tamaos de una bacteria como Escherichia coli y el bacterifago T2; ntese tambin la proporcin entre la cpsida de este virus y la longitud de su fibra de ADN.

1. Estructura de los virus

En todo virus se pueden distinguir las tres partes siguientes: Genoma vrico. Se compone de una o varias molculas de ADN o de ARN, pero nunca los dos simultneamente. El cido nucleico de los virus consta de una sola cadena, ya sea abierta o circular, la cual a su vez puede ser bicatenaria o monocatenaria. En los virus con envoltura, el genoma constituye slo el 1-2 % de la partcula viral. Cpsida. Es la cubierta proteica que envuelve al genoma vrico. La funcin de la cpsida es la proteccin del cido nucleico y, en los virus carentes de membrana, el reconocimiento de los receptores de membrana de las clulas a las que el virus parasita. Al conjunto de genoma vrico y cpsida se le llama nucleocpsida.
342

La cpsida est formada por protenas globulares o capsmeros que se disponen de una manera regular y simtrica, lo que determina la existencia de varios tipos de cpsidas: icosadricas, helicoidales y complejas (fig. 3). La cpsida icosadrica es una estructura polidrica con 20 caras triangulares, 12 vrtices y 30 aristas. Est formada por la unin de capsmeros de dos tipos: los hexones y los pentones. Los hexones estn constituidos por seis molculas de protena o protmeros y aparecen formando las caras y las aristas. Los pentones estn formados por cinco protmeros y se hallan en los vrtices del icosaedro. Un ejemplo de virus icosadrico es el virus de las verrugas humano. La cpsida helicoidal est formada por capsmeros dispuestos helicoidalmente, formando una estructura tubular en cuyo interior se

Fibras

Capsmero hexn Unidad estructural

Capsmero pentn

c
Cabeza

Hexn Zona caudal o cola Unidades estructurales constituyendo la cpsida Espinas basales

Eje tubular Vaina Fibra caudal

Pentn 175 ARN

Placa basal

b d
Bicapa lipdica

Nucleoprotena

ARN vrico Envoltura membranosa Protenas Neuraminidasa de Hemaglutinina membrana

Cpsida proteica

3 Formas de los virus. a) Cpsida icosadrica. b) Cpsida helicoidal del virus del mosaico del tabaco (VMT). c) Cpsida compleja del virus bacterifago T2. d) Estructura del virus de la gripe.

sita el cido nucleico. La anchura de esta cpsida es de 175 y su longitud mxima es de 3.000 , como, por ejemplo, en el virus del mosaico del tabaco (VMT) o el virus de la rabia. La cpsida compleja aparece en algunos virus especializados en parasitar bacterias, por lo que reciben el nombre de bacterifagos. Este tipo de cpsida tiene dos partes: la cabeza, de tipo icosadrico y que contiene el cido nucleico, y la cola, adaptada para la inyeccin del cido nucleico en el interior de la bacteria. En la base de la cola existe una placa basal que posee espinas y a la que se unen fibras caudales; la placa, las espinas y las fibras tambin estn formadas por protenas. Pueden contener enzimas y ATP, cuya funcin es destruir la pared bacteriana para facilitar la penetracin del genoma vrico. Envoltura membranosa. Un grupo de virus, como los que producen la rabia, la hepatitis, la gripe, la viruela y el SIDA, poseen una envoltura de tipo membranoso que rodea a la nucleocpsida. Esta envoltura se compone de una doble capa lipdica procedente de las clulas husped parasitadas y de glucoprotenas incluidas en ella, cuya sntesis est controlada por el genoma vrico. Las glucoprotenas sobresalen ligeramente de la envoltura y tienen como fun-

cin el reconocimiento de la clula husped y la induccin de la penetracin del virin en ella mediante fagocitosis.

2. Origen de los virus

La hiptesis ms aceptada actualmente defiende que los virus son formas simplificadas y no formas simples y primitivas. As su origen es muy posterior al inicio de la vida.
CUESTIONARIO 2
1. Podra tener carcter infeccioso una cpsida aislada de un virus? Por qu? Cul es la funcin de la cpsida? 2. Qu motivos hay para decir que los virus no son seres vivos? Qu diferencias hay entre la fase extracelular y la intracelular de los virus? 3. Nombra algunos virus que tengan envoltura membranosa. Qu estructura tiene la membrana que rodea a la nucleocpsida? Qu misin tienen las glucoprotenas de la envoltura membranosa? 4. Qu son los hexones y los pentones? En qu tipo de virus se presentan? 5. Cul es la diferencia entre virin y viroide? 6. Elabora tu propia definicin de virus. Reflexiona. Los consideras seres vivos?

343

ocumento 1

3. Ciclo de los virus

Los virus, al no requerir energa para desarrollar ninguna actividad ni materia para crecer, carecen de funciones de nutricin. Asimismo, carecen de funciones de relacin, pues el contacto con las clulas husped es totalmente fortuito. En cambio, presentan interesantes mecanismos que les permiten reproducirse dentro de las clulas husped. El ciclo vital vrico requiere una clula husped de donde obtener materia y energa para sintetizar nuevos cidos nucleicos y capsmeros. En este ciclo de multiplicacin se pueden distinguir seis fases: 1. fijacin o adsorcin; 2. penetracin; 3. replicacin del genoma vrico; 4. sntesis de capsmeros; 5. ensamblaje de los nuevos virus; 6. lisis o liberacin. Como ejemplos, estudiaremos el ciclo de un virus complejo, el del bacterifago T4 y el de un virus atenuado. En el tema 24, dedicado a las Anomalas del sistema inmunitario, se estudia con detalle el ciclo de un virus con envoltura, el virus del SIDA.

Viroides y priones
A pesar de la simplicidad estructural de los virus, se conocen otros agentes infecciosos ms simples todava: los viroides y los priones. Ambos, como los virus, dependen para replicarse de la maquinaria metablica de clulas vivas. Los viroides estn asociados con ciertas enfermedades de plantas como la patata. Cada viroide se compone de una pequea molcula de ARN de forma circular y monocatenaria, que no est protegida por ningn tipo de cubierta. La infeccin por viroides generalmente causa una atrofia en el crecimiento de la planta que se suma a un desarrollo anormal de tallos y hojas. Una infeccin por viroides (la enfermedad denominada cadang-cadang) ha sido la causante de la desaparicin casi por completo de los cocoteros en muchas zonas de las islas Filipinas. Los priones son nicamente molculas de protena. Uno de los priones estudiados posee 250 aminocidos en su cadena y su tamao es 100 veces ms pequeo que los virus ms reducidos. Los priones, a pesar de carecer de cidos nucleicos, son capaces de autorreplicarse dentro de las clulas, postulndose la posibilidad de que activaran algn gen del ADN husped para que codificara protenas del prin. Se ha constatado que los priones son protenas con la misma o casi la misma secuencia de aminocidos que una protena normal pero que tienen una forma espacial distinta. Los priones son capaces de inducir que las protenas normales de la clula adopten la forma del prin. Generalmente, los priones son protenas de membrana de las neuronas, por lo que suelen provocar enfermedades neurovegetativas. Los priones son resistentes a tratamientos fsicos y qumicos. El sndrome de Creutzfeld-Jakob es la enfermedad humana ms conocida debida a un prin y se caracteriza por perodos de incubacin de varios meses o aos a los que sigue una rpida degradacin del sistema nervioso de la persona afectada, que muere al cabo de un ao de detectrsele los primeros sntomas. La encefalitis aguda bovina o mal de las vacas locas es un caso de un prin similar al del anterior sndrome.

I Ciclo del bacterifago T4

El bacterifago T4 (fig. 4) se compone de una cabeza y una cola en la que hay una placa basal y fibras de fijacin. El genoma se compone de una molcula de ADN bicatenaria que se encuentra profusamente empaquetada dentro de la cabeza. A este ciclo se le llama ciclo ltico porque conduce a la destruccin (lisis) de la clula husped (fig. 4). 1. Fase de fijacin o adsorcin. Hay una gran especificidad en el reconocimiento de los virus por sus clulas husped. Existen componentes moleculares en la superficie de las clulas (protenas, polisacridos o complejos lipoprotenas-polisacridos) que actan como receptores que permiten la adhesin de los viriones. Los bacterifagos se fijan inicialmente a travs de las puntas de las fibras caudales mediante enlaces qumicos, y posteriormente de forma mecnica, al clavar las espinas basales en la pared bacteriana. 2. Fase de penetracin. El bacterifago, mediante enzimas lisozimas situadas en su placa basal, perfora la pared celular de la bacteria y luego contrae la vaina de la cola e introduce el ADN a travs del orificio practicado, con lo que el genoma vrico pasa directamente al citoplasma.

Placa amiloide de PrP (protena principal del prin) causante de la enfermedad de Creutzfeld-Jakob.

344

3. Fase de eclipse. Se le da este nombre debido a que no se observan virus en el interior de la clula. Sin embargo, es cuando hay una mayor actividad metablica inducida por la penetracin del virus. Inicialmente, el cido nucleico vrico, utilizando nucletidos y la enzima ARN-polimerasa del husped, dirige la sntesis de gran cantidad de ARNm viral. Este ARNm viral sirve de base para la sntesis de protenas del virus como los capsmeros, enzimas endonucleasas (las cuales destruyen el ADN bacteriano e impiden su duplicacin), y enzimas endolisinas. El ADN vrico sufre mltiples procesos de replicacin, utilizando para ello los complejos enzimticos de la bacteria. 4. Fase de ensamblaje. Los capsmeros se renen formando la cpsida, mientras que el cido nucleico vrico se pliega y penetra en la misma. 5. Fase de lisis o liberacin. En esta fase, los nuevos viriones salen al exterior debido a la

accin de la enzima endolisina, que acta induciendo la lisis de la bacteria. Los viriones hijos son ya capaces de infectar otras bacterias.

I Ciclo lisognico
Algunos virus, al infectar a una clula husped, no la destruyen, pero su genoma pasa a incorporarse al ADN de la clula husped, permaneciendo en estado de vida latente. A estos virus se los denomina virus atenuados o profagos, y a la clula receptora, clula lisognica (fig. 5). El ADN del profago puede permanecer en forma latente durante varias generaciones de la clula husped, hasta que un estmulo induzca la separacin del profago que iniciar un ciclo ltico tpico. Mientras la clula posea el ADN profago, ser inmune frente a infecciones de este mismo virus. Esta inmunidad se heredar de generacin en generacin en la clula husped, ya que el profago se hereda junto con el ADN celular.

1 FIJACIN

3b

5 REPLICACIN

LISIS ADN bacteriano

ADN vrico ARNm 3a TRANSCRIPCIN 2 PENETRACIN Ribosoma Endonucleasas Endolisinas Capsmeros 4 ENSAMBLAJE 5 LIBERACIN

4 Ciclo vital de un bacterifago como el T4. Puede integrarse en el ADN bacteriano o producir la lisis de la bacteria.
Virus atenuado Genoma del profago

CUESTIONARIO 3
1. Cul es la diferencia esencial entre el ciclo ltico y el lisognico de los virus?

Genoma de la clula husped

Divisin de la clula husped

Estmulo

Inicio del ciclo ltico

2. Describe los procesos que ocurren durante la fase de eclipse de infeccin de un virus. 3. Cmo reconocen los virus a las clulas a las que pueden infectar? 4. Qu se entiende por virus atenuados?

5 Ciclo lisognico de un virus.

345

Divisin en una direccin

ocumento 2

Estreptococos Bacilo Espirilo

Divisin en dos direcciones

Las bacterias beneficiosas

Aunque quizs al or el trmino de bacteria, la mayora de la gente piensa en las que son patgenas y producen enfermedades, bien es cierto que la mayora de ellas o son inocuas para los seres vivos, o son beneficiosas para los ecosistemas, o bien incluso su actividad puede ser provechosa para la especie humana. En slo un gramo de tierra de cultivo frtil puede haber ms de dos billones de bacterias. Muchas de ellas (las bacterias nitrificantes) son capaces de transformar nutrientes inorgnicos en otros de los que se aprovechan las plantas. Otras bacterias son descomponedoras, por lo que son capaces de incorporar nuevos nutrientes minerales al sustrato procedentes de la descomposicin de la materia orgnica animal y vegetal, reciclando de esta manera los limitados nutrientes de la Tierra. Los mamferos rumiantes como la vaca y la oveja son herbvoros y pueden aprovecharse de la celulosa de las hierbas que ingieren slo gracias a bacterias, que degradan la celulosa. Todos los animales tienen en el tramo final de su tracto digestivo ingentes cantidades de bacterias que se alimentan de la materia orgnica de los alimentos indigeribles y contribuyen a formar las heces del animal. El conocimiento de la fisiologa microbiana ha permitido, entre otras cosas, mejorar la produccin vegetal y aplicar una serie de tcnicas industriales para la obtencin de diferentes sustancias o productos de los microorganismos que se utilizan en la industria alimentaria o en medicina. As, las bacterias fermentadoras son utilizadas para hacer yogur, quesos, vinagre y bebidas alcohlicas. Otras bacterias son capaces de producir ciertas molculas, los antibiticos, que se usan para luchar contra otros microorganismos patgenos. Modernamente, ciertas especies bacterianas son empleadas en las depuradoras de aguas residuales, lo que permite liberar a las aguas resultantes de microorganismos patgenos y convertirlas en aptas para el riego de campos de cultivo.

Vibrio

Coco

Estafilococos

c
Divisin en tres direcciones

Sarcinas

6 a) Tipos morfolgicos de bacterias. b) Agrupaciones de cocos. c) Cadena de bacilos.

3 Las eubacterias
Son organismos procariotas que estn representados actualmente por unas 2.000 especies. Las bacterias son organismos muy antiguos, ya que existen evidencias fsiles de bacterias de hace 3.500 millones de aos. Pese a ser organismos muy simples con pocas estructuras internas y slo cuatro formas externas, las bacterias presentan una gran variabilidad de metabolismos. Su tamao oscila entre las 13 del Bacillus anthracis y 1 del Streptococcus aureus. Son los organismos ms pequeos que disponen de todos los elementos y dispositivos metablicos necesarios para la obtencin y transformacin de la materia en cualquier medio, para crecer y para replicarse. Las bacterias poseen cuatro tipos morfolgicos (figura 6): los bacilos, en forma de bastn; los cocos, de forma esfrica; los espirilos, en forma de bastn espiralado; los vibrios, como una coma ortogrfica. Algunas bacterias forman agrupaciones de individuos ya que, al dividirse, las bacterias hijas se mantienen unidas mediante sus cpsulas. Los bacilos suelen presentar cadenas lineales de individuos, ya que su divisin tiene lugar en una sola direccin. Los cocos, segn las posibles direcciones de divisin, presentan distintas agrupaciones que reciben el nombre de estreptococos si forman cadenas, estafilococos si forman racimos o sarcinas si forman asociaciones tridimensionales regulares.
346

1. Estructura bacteriana
La organizacin interna de las bacterias es mucho ms simple que la de las clulas eucariotas; sin embargo, su estructura superficial es ms compleja (figura 7). Los principales componentes estructurales de las bacterias se resumen en el cuadro II.
Cpsula bacteriana (puede faltar) Pared bacteriana Membrana plasmtica Hialoplasma o citosol Citoplasma Ribosomas Morfoplasma Inclusiones

ADN bacteriano CUADRO II. Elementos estructurales de las bacterias.

I Cpsula bacteriana
Es una capa externa sin estructura definida, de un grosor que oscila entre 100 y 400 y que aparece en casi todos los grupos bacterianos patgenos. Esta cubierta, que es el equivalente bacteriano de la matriz extracelular de las clulas animales, es rica en glcidos de gran tamao, generalmente polmeros de glucosa, cido urnico, cido glucurnico, acetilglucosamina y glucoprotenas. A la cpsula bacteriana se le atribuyen varias funciones: en primer lugar, la regulacin de los procesos de intercambio de agua, iones y sustancias nutritivas con el medio externo; como esta envoltura contiene gran cantidad de agua, acta como mecanismo de resistencia ante la desecacin del medio. Sirve tambin para permitir la adherencia entre la bacteria y los tejidos del husped, as como dificultar el reconocimiento y la destruccin de la bacteria por los anticuerpos, bacterifagos y otras clulas fagocticas. Adems, la cpsula permite la formacin de colonias de bacterias.
Fimbrias Ribosoma

red presenta una capa de murena, que es un peptidoglucano formado por una red cuya base es N-acetilglucosamina (NAG) y N-acetilmurmico (NAM) unidos alternadamente y que forman largas cadenas (fig. 8). Los NAM poseen enlazada una cadena de cuatro aminocidos: L-alanina, D-isoglutmico, L-lisina (o bien cido diaminopimlico) y D-alanina. Las cadenas de NAG y NAM estn unidas por enlaces cruzados que se establecen en las cadenas de aminocidos. La pared de las Gram positivas es monoestratificada y est constituida por una capa gruesa (200800 ) de peptidoglucanos (murena), a la que se asocian protenas, polisacridos y cidos teicoicos. La pared de las Gram negativas es biestratificada, con una capa basal fina (20-30 ) de peptidoglucanos, sobre la cual hay una membrana externa (60180 de espesor) constituida por una doble capa lipdica que contiene un gran nmero de protenas, la mayora con actividad enzimtica, y lipopolisacridos que se proyectan hacia el exterior. La pared mantiene la forma de la bacteria frente a las variaciones de presin osmtica. Tambin acta como una membrana semipermeable, regulando el paso de iones. Esta envoltura, una vez formada, es resistente a la accin de los antibiticos, ya que stos actan sobre las enzimas que regulan la formacin de la pared. La destruccin de la pared deja inerme a la bacteria.

ADN bacteriano Mesosoma

I Membrana plasmtica
Es una envoltura que rodea al citoplasma. Est constituida por una membrana de tipo unitario de 75 de espesor. Su estructura es idntica a la de las clulas eucariotas, variando slo algunas de las molculas que la componen; por ejemplo: en la membrana bacteriana no hay esteroides, que en las membranas de las clulas eucariotas puede constituir del 5 al 25 % de todos los lpidos de membrana. Una particularidad que presenta la membrana bacteriana es la existencia de unos repliegues internos que reciben el nombre de mesosomas (fig. 9). Las funciones de la membrana plasmtica bacteriana son las mismas que en la clula eucariota, es decir, limitan la bacteria y regulan el paso de sustancias nutritivas. Los mesosomas incrementan la superficie de la membrana plasmtica, sirven para sujetar el cromosoma bacteriano y adems tienen gran importancia en la fisiologa bacteriana, puesto que en ellos hay gran cantidad de enzimas que son utilizadas para los siguientes fines: Dirigir la duplicacin del ADN bacteriano mediante la ADN-polimerasa. Realizar la respiracin, ya que se supone la existencia de una estructura de membrana similar a los complejos ATP-sintetasas de las mitocondrias.
347

Membrana plasmtica

Pared Cpsula

Citoplasma Vacuola de gas

Inclusiones

Flagelo

7 Morfologa general de una bacteria.

I Pared bacteriana
Es una envoltura rgida y fuerte que da forma a las clulas bacterianas. Su anchura oscila entre los 50 y los 100 . La tincin de Gram permite diferenciar dos tipos de bacterias en funcin de la estructura de la pared: las bacterias Gram positivas y las bacterias Gram negativas. En ambos tipos de bacterias, la pa-

a
(NAG) CH2OH OH H ACNH O O (NAM) CH2OH O

b
NAM NAM NAM NAM NAM NAM NAG NAG NAG NAG NAG NAG NAM NAM NAM NAM NAM NAM

Membrana plasmtica

Membrana plasmtica

ACNH O NAG NAG NAG NAG NAG NAG CH3CHCO NAM NAM NAM NAM NAM NAM L-alanina cido NAM NAG NAG NAG NAG NAG D-isoglutmico L-lisina D-alanina N-acetilmurmico NAM NAG N-acetilglucosamina

Gram

Gram

Murena Membrana externa

Murena Polisacridos, cido teicoico y protenas

Uniones cruzadas formadas por cadenas de aminocidos

8 a) Molculas base de los peptidoglucanos (murena) de la pared de las bacterias. b) Estructura general de los peptidoglucanos. c) Diferencia entre bacterias Gram y Gram .

La fotosntesis en bacterias fotosintticas, ya que las molculas del fotosistema I (PSI) se sitan en la membrana del mesosoma.
(las que tienen la enzima nitrato Asimilar NO3 (las bacterias que tienen la ensintetasa) o NO2 zima nitrito sintetasa) en las bacterias nitrificantes; asimilar N2 atmosfrico (las bacterias que tienen la enzima nitrogenasa).

metabolismo. Estas inclusiones estn dispersas por el citoplasma, sin membrana que las asle del medio interno. Las sustancias que forman grnulos son polisacridos (almidn, glucgeno), lpidos (triacilglicridos, cridos) y volutina (es decir, polifosfatos y azufre). Las inclusiones sirven como elementos de reserva nutritiva.

I Ribosomas
Son partculas globulares de unos 200 a 250 de dimetro que aparecen libres en el citoplasma bacteriano en nmero de unos 10.000. Estn constituidos por dos subunidades que no siempre se encuentran unidas (fig. 9 c). Las subunidades se diferencian por su velocidad de sedimentacin, siendo de 30 S la menor, de 50 S la mayor y de 70 S la del ribosoma completo. La subunidad menor tiene un peso molecular de 900.000 y est constituida por una molcula de ARN (peso molecular 600.000) y 21 protenas diferentes. La subunidad mayor tiene un peso molecular de 1.600.000 y est constituida por dos molculas de ARN y 34 protenas. Los ribosomas bacterianos actan realizando la sntesis de protenas mediante un mecanismo idntico al de las clulas eucariotas, pero siempre estn libres en el citoplasma.

I Vesculas gaseosas
Son estructuras huecas de cuerpo cilndrico y extremos cnicos, que contienen gas. Pueden existir desde slo unas pocas a varios centenares por bacteria. Las vesculas estn constituidas por molculas proteicas, que se alinean formando una membrana rgida; esta membrana es impermeable al agua y a los solutos, pero permite pasar los gases. Tambin permiten la flotabilidad de las bacterias que las poseen, como las bacterias fotosintticas purpreas y verdes.

I ADN bacteriano
El ADN de la bacteria est constituido por una sola molcula circular de tipo bicatenario muy plegada y que suele estar unida a los mesosomas. Esta molcula es muy larga en comparacin con el tamao de la bacteria. As, el bacilo Escherichia coli, que mide 2 , posee un ADN de 1.400 (proporcin de 1:700). En las clulas bacterianas puede haber tambin una o varias molculas pequeas de ADN denominadas plsmidos. La regin del citoplasma bacteriano en el que se encuentra condensado el ADN recibe el nombre de nucleoide.

I Inclusiones
Son grnulos de reserva de diversos tipos de sustancias que la bacteria sintetiza en momentos de abundancia de alimentos, o bien son residuos de su
348

El ADN bacteriano es una doble hlice circular, generalmente con superenrollamientos. Est asociado a protenas similares a las histonas, formando estructuras ms o menos condensadas. Su funcin es mantener y conservar la informacin gentica y dirigir el funcionamiento de todo el metabolismo bacteriano.

I Flagelos
Son prolongaciones finas cuya longitud es varias veces la de la bacteria. Aparecen en un nmero que vara entre 1 y 100. Dependiendo de la situacin de los flagelos, las bacterias pueden ser: montricas, loftricas, anftricas y pertricas (fig. 10 a). Los flagelos bacterianos son mucho ms sencillos que los de las clulas eucariotas. En ellos se distinguen dos partes: la zona basal y el tallo. La zona basal est constituida por el cuerpo basal y por el codo, ambos formados por protenas (fig. 10 b). El cuerpo basal se compone de un bastn central y cuatro estructuras discoidales. Los dos discos internos, que estn asociados a la membrana plasmtica, giran sobre s mismos transmitiendo su movimiento al resto del flagelo, mientras que los otros dos discos estn
a

fijos y se encuentran incrustados en la pared, uno en la capa de murena y el ms externo en la membrana externa (en las bacterias Gram negativas). El codo tiene una curvatura de unos 90 y es algo ms grueso que el tallo del flagelo. ste, que tiene un grosor que oscila entre los 100 y 200 , contiene un nmero variable de fibras que aparecen trenzadas y que estn constituidas por molculas de la protena llamada flagelina. El tallo es ligeramente ondulado pero rgido. Los flagelos permiten la locomocin de las bacterias que los poseen.

I Pelos y fimbrias
Son estructuras huecas y tubulares constituidas por molculas proteicas que aparecen en la superficie externa de algunas bacterias Gram negativas (fig. 10 c). Su grosor oscila entre los 40 y los 80 . Las fimbrias son cortas y muy numerosas, mientras que los pelos son largos y tan slo se presentan uno o dos por bacteria. Pelos y fimbrias carecen de misin locomotora. Se cree que las fimbrias permiten a las bacterias fijarse al sustrato, mientras que los pelos participaran en el intercambio de material gentico con otras bacterias.

Esfricos

Dendrticos Tubulares

Laminares

ARNr 16 S

c
30 S

21 protenas

ARNr 23 S

b
FOTOSNTESIS NH NADPH2 ATP
4

ARNr 5 S 50 S 34 protenas

Sustrato orgnico

ATP

CATABOLISMO MEDIO INTERNO ADN

9 a) Tipos de mesosomas en la membrana bacteriana. b) Funciones principales de las enzimas situadas en los mesosomas de bacterias fotosintticas y quimiosintticas. c) Estructura y componentes de los ribosomas de Escherichia coli.

DUPLICACIN

QUIMIOSNTESIS Sustrato orgnico N2 NO 3 NO2 o inorgnico O2 H2O

349

b
Escherichia coli

Filamento flagelar (tallo)

Montricas (un solo flagelo)

Codo

Direccin de la rotacin Membrana externa Pared bacteriana

Loftricas (varios flagelos en un solo polo)

Cuerpo basal

Capa de murena

Membrana plasmtica

Anftricas (grupos de flagelos en ambos polos)

Bastn

Discos Fimbrias de adherencia

Pelo sexual

Cpsula Pared bacteriana

Pertricas (flagelos rodeando a la bacteria)

Membranas plasmticas

10 a) Diversas denominaciones de las bacterias segn la disposicin de los flagelos. b) Estructura del flagelo de una bacteria Gram como Escherichia coli. Los discos inferiores actan de rotores, proporcionando una velocidad de casi 200 vueltas/segundo al codo y al tallo del flagelo. En las bacterias Gram falta el disco superior. c) Esquema de los pelos sexuales de conjugacin y las fimbrias de adherencia.

CUESTIONARIO 4
1. Seala las diferencias entre la pared de una bacteria Gram y la de una Gram . 2. Cules son las principales diferencias entre la cpsula y la pared bacteriana? 3. Qu es la murena? Cules son las molculas que la constituyen? 4. Disea la estructura de la pared bacteriana y comprala con la pared de la clula vegetal. 5. Para qu utilizan las bacterias las inclusiones? 6. Cules son las principales funciones que desempean los mesosomas en la fisiologa bacteriana? 7. Qu son los plsmidos? Qu diferencia tienen en relacin con el ADN bacteriano? 8. Sera correcto hablar de parejas de cromosomas homlogos en las bacterias? Por qu? 9. Qu son las bacterias anftricas? Cules son las principales diferencias estructurales y de funcionamiento de los flagelos bacterianos y los flagelos de las clulas eucariotas? 10. Indica las funciones de los pelos y las fimbrias bacterianos. 11. Investiga sobre los posibles beneficios que nos pueden reportar las bacterias.

2. Fisiologa bacteriana
Las bacterias, como cualquier ser vivo, desarrollan funciones de nutricin, de relacin y de reproduccin. Funciones de nutricin. Las bacterias forman un grupo muy heterogneo en cuanto a nutricin, ya que sus diferentes especies pueden realizar todos los tipos de metabolismo existentes (ver tema 14: Anabolismo hetertrofo). Una misma especie puede, incluso, poseer dos tipos de metabolismo diferentes que van utilizando facultativamente, dependiendo de la abundancia nutritiva del medio. Las bacterias pueden ser fotoauttrofas, como las bacterias purpreas sulfreas; fotohetertrofas, como las bacterias purpreas no sulfreas; quimioauttrofas, como las bacterias incoloras del azufre; y tambin quimiohetertrofas, como la gran mayora de las bacterias. Funciones de relacin. Muchas bacterias disponen de movilidad. El desplazamiento puede efectuarse mediante reptacin sobre un sustrato slido, mediante movimientos de contraccin y dilatacin, o mediante movimiento flagelar.

350

a
1. Bacteria funcional
ADN ADN

2. El ADN se condensa y se rodea de una membrana procedente de los mesosomas

ADN Pared Membrana

Mesosoma Duplicacin del ADN

ADN hijo

Inicio de la esporulacin

Protoplasto Exospora 6. Germinacin 7. Germinacin de la de la endospora exospora

Membrana Exosporio Cubierta Externa Corteza

3. El ADN queda encerrado dentro de una membrana

Formacin de un nuevo mesosoma y separacin de ambos Aparicin de un septo de separacin

Finalizacin de la tabicacin Separacin de las bacterias hijas

5. Formacin de la cubierta externa y de la endospora

4. Formacin del exosporio (delgado) y de la corteza (gruesa) alrededor del protoplasto

11 a) Ciclo de esporulacin de una bacteria. b) Reproduccin por biparticin en bacterias.

Se han comprobado respuestas frente a estmulos luminosos (fototactismo) en bacterias fotosintticas y tambin a estmulos qumicos (quimiotactismo). Una de las respuestas mejor conocidas frente a variaciones del medio es la formacin de esporas o formas de resistencia, muy frecuente en las bacterias que viven en los suelos. Estas bacterias, frente a condiciones adversas del medio, entran en perodos de metabolismo reducido y protegen su ADN formando alrededor de l una compleja cubierta y dando lugar a la endospora, llamada as porque se forma dentro de la bacteria intacta (fig. 11 a). Las esporas son extremadamente resistentes a altas temperaturas (hasta 80 C) y tambin soportan condiciones de sequedad, accin de agentes qumicos como cidos y desinfectantes o radiaciones durante largos perodos de tiempo. Al presentarse de nuevo condiciones propicias, las esporas germinan y dan lugar a bacterias con todas sus funciones. Funciones de reproduccin. La reproduccin de las bacterias es asexual. Se realiza mediante una biparticin, a la que preceden una duplicacin del ADN y una separacin de las dos molculas en las dos bacterias hijas (fig. 11 b). La reproduccin est ligada a la actividad de los mesosomas, que dirigen la duplicacin del ADN y la creacin de la membrana de separacin entre las dos nuevas bacterias. stas son genticamente idnticas. Las colonias bacterianas son clones.

Las bacterias poseen adems unos mecanismos, definidos como parasexuales, mediante los cuales intercambian informacin gentica con otras bacterias, sean o no de la misma especie. Existen tres procesos de intercambio gentico: la conjugacin, la transduccin y la transformacin (fig. 12). La conjugacin es un proceso en el cual una bacteria, considerada donadora, transmite ADN, a travs de los pelos, a otra bacteria receptora. Existen dos tipos de bacterias donadoras: las F y las Hfr (del ingls high frequency of recombination o alta frecuencia de recombinacin). Las bacterias receptoras se significan por F. Las bacterias donadoras poseen pequeas molculas de ADN, los plsmidos, que pueden ser transmitidos durante la conjugacin, denominndose factores F o episomas; las bacterias F poseen el episoma libre en el hialoplasma, mientras que las Hfr lo tienen incorporado a su ADN. En ocasiones, una bacteria F puede pasar a Hfr si su episoma se incorpora al ADN bacteriano. Las bacterias Hfr, antes de la conjugacin, duplican su ADN, incluido el factor F. Al transmitir la copia de ADN, generalmente slo pasa un fragmento de sta a la bacteria receptora. Debido a que el factor F pasa en ltimo lugar, suele quedar en el interior de la bacteria donadora. El ADN transferido se recombina con el ADN de la bacteria receptora.
351

Cuando la bacteria donante es F+, suele transferirse nicamente el factor F, que no se recombina con el ADN de la bacteria receptora; sta queda convertida en F+ . La transduccin es un fenmeno de intercambio gentico que requiere un agente transmisor, que generalmente es un virus, el cual transporta fragmentos de ADN procedentes de la ltima bacteria parasitada. La transformacin es un proceso por el cual una bacteria introduce en su interior fragADN bacteriano

mentos de ADN, que aparecen libres en el medio procedentes de la lisis de otras bacterias. Estos mecanismos de intercambio gentico explican la variabilidad que pueden presentar algunas bacterias al habitar junto a otras distintas. Un ejemplo de este proceso es la resistencia a antibiticos que presentan ciertas bacterias patgenas al convivir en el intestino con bacterias simbiontes que resisten bien la accin de estos productos farmacuticos.
Lisis de la bacteria. Quedan libres en el medio trozos de ADN

Episoma

Bacteria F

Ataque de un virus con ADN de una bacteria Trozo de ADN

Pelo sexual

Bacteria F Transduccin Bacteria F

Pelo

Transformacin Recombinacin gentica

Conjugacin

12 Mecanismos parasexuales.

3. Tipos de eubacterias
La clasificacin de las eubacterias es una labor extremadamente complicada, puesto que hay que acudir a detalles no slo morfolgicos sino tambin fisiolgicos y ecolgicos. Segn el Manual de Bergey, el ms moderno intento de solucionar la sistemtica de las bacterias, los principales grupos de bacterias son los siguientes: Bacterias purpreas y verdes. Son bacterias fotosintticas anaerobias que poseen un pigmento muy parecido a la clorofila a denominado bacterioclorofila (fig. 13), y un solo fotosistema en su mecanismo fotosinttico. Las bacterias purpreas deben su color a la combinacin de la bacterioclorofila, verde, con carotenoides, de color rojizo o naranja. El fotosistema de las bacterias purpreas se encuentra asociado a sistemas membranosos de forma laminar o tubular conectados a la membrana plasmtica, mientras que en las bacterias verdes se encuentra en los clorosomas, sistemas membranosos de forma cilndrica y tambin unidos a la membrana plasmtica. Las bacterias purpreas
352

CH3 OC H3C N H N H3C H H2C H CH2 H O COOCH3 Mg N CH3 N H H H3C H H C2H5

COOC20H39 Fitol

13 Estructura de la bacterioclorofila.

y las verdes se denominan sulfurosas si utilizan el H2S como fuente de hidrgenos, mientras que se consideran no sulfurosas si utilizan para ello molculas orgnicas.

 Cianobacterias. Se llaman tambin cianofceas o algas verde-azuladas y son eubacterias fotosintticas aerobias. Su nombre hace referencia a la presencia de un pigmento azul llamado ficocianina, que se suma a la clorofila a. Pueden presentarse como clulas aisladas o formar colonias filamentosas. El tamao de las clulas de cianobacterias puede oscilar desde 1 mm hasta 60 en el caso del gnero Oscillatoria. Las cianobacterias presentan una capa gelatinosa externa que permite la formacin de colonias. Cada clula presenta una pared celular similar a la de las bacterias Gram negativas. El citoplasma aparece dividido en dos zonas: una central de aspecto translcido denominada centroplasma, que es el lugar en donde est el ADN de la clula, y el resto del citoplasma, que se denomina cromoplasma, debido a la presencia de unos sculos en los cuales estn los pigmentos fotosintticos (clorofila a, carotenoides, ficocianina y ficoeritrina). El cromoplasma contiene adems ribosomas, grnulos de volutina, vacuolas de gas (en especies marinas) y carboxisomas, que contienen enzimas que fijan el dixido de carbono. La nutricin de las cianofceas se basa en la actividad fotosinttica que se produce en los sculos (posibles precursores de los tilacoides de los cloroplastos de las clulas eucariotas) mediante un mecanismo similar al que tiene lugar en los cloroplastos de las plantas, es decir, utilizando el agua como dador de hidrgenos y desprendiendo oxgeno. Algunas cianobacterias filamentosas pueden fijar el nitrgeno atmosfrico, actividad que est relacionada con la presencia de heterocistos en la colonia. Los heterocistos son clulas incoloras, de mayor tamao que las dems, de paredes celulsicas y llenas de nitrgeno. Las cianofceas carecen de mecanismos que faciliten el movimiento; sin embargo, las colonias poseen un sistema de desplazamiento de tipo reptante. Su reproduccin es sencilla, mediante divisin por biparticin a travs de la aparicin de septos transversales. Las cianobacterias se han adaptado a una gran variedad de hbitats. Las hay en el mar y en las aguas dulces; otras son capaces de resistir aguas termales de hasta 90 C; otras forman asociaciones simbiticas con hongos para formar los lquenes. Proclorfitas. Son eubacterias fotosintticas que contienen clorofilas a y b. La posesin de membranas internas tipo tilacoides hace que se parezcan a los cloroplastos de las clulas eucariotas. La mayora de las especies conocidas viven como endosimbiontes en el interior de procordados del grupo de las ascidias.

Bacterias nitrificantes. Son eubacterias quimioauttrofas capaces de formar compuestos orgnicos gracias a la energa liberada en reacciones de oxidacin de compuestos nitrogenados inorgnicos. Hay dos grupos de bacterias nitrificantes: las bacterias oxidantes de amonio ), como las del gnero Nitrosomonas, que (NH4 ), y las transforman el amonio en nitrito (NO2 bacterias oxidantes de nitritos, como el gnero Nitrobacter, que oxidan nitritos a nitratos ). Las bacterias nitrificantes viven en los (NO3 suelos y en los sedimentos marinos y son muy importantes, puesto que transforman los nutrientes inorgnicos en sustancias de las que se pueden aprovechar las plantas. Bacterias fijadoras de nitrgeno. Son bacterias aerobias Gram negativas capaces de fijar el nitrgeno de la atmsfera. Son bacterias que viven preferentemente en los suelos, como los gneros Azotobacter y Rhizobium; este ltimo suele establecer simbiosis con plantas leguminosas. Espiroquetas. Son eubacterias delgadas, largas y ligeramente onduladas. Presentan fibrillas internas que, al rotar, proporcionan movimiento de torsin o flexin a la bacteria. Son muy frecuentes en los medios acuticos; otras especies producen enfermedades en los animales y en la especie humana, como Treponema pallidum, causante de la sfilis. Bacterias del cido lctico. Son bacterias anaerobias tolerantes al oxgeno, Gram positivas y fermentativas, que producen cido lctico como producto final. Entre los gneros ms importantes se encuentran Streptococcus y Lactobacillus. Micoplasmas. Son pequeas bacterias sin pared bacteriana pero cuya membrana plasmtica contiene esteroles, que le confieren gran estabilidad. Pueden tener forma de diminutos cocos (0,2 de dimetro) o formar filamentos parecidos a los de los hongos. La mayora de los micoplasmas son patgenos, produciendo enfermedades en plantas y en la especie humana, como, por ejemplo, la neumona atpica.
CUESTIONARIO 5
1. Qu tipos de nutricin tienen las bacterias? 2. Qu es una endospora? Qu les faculta a las bacterias que tienen capacidad de formar endosporas? 3. Qu utilidad puede tener el que una bacteria pueda efectuar la transformacin? 4. Qu son los episomas? Cul es la diferencia entre las bacterias Hfr y las F ?

353

Las arqueobacterias

La secuenciacin molecular del ARN ribosmico ha permitido separar claramente a un grupo de procariotas que anteriormente se incluan entre las eubacterias: las arqueobacterias. Estos procariotas poseen una membrana plasmtica cuyos lpidos carecen de cidos grasos y en vez de ellos tienen hidrocarburos que se unen a la glicerina mediante enlaces ter (COC) en vez de enlaces ster (COOC). Los lpidos de las membranas arqueobacterianas pueden ser apolares y polares; estos ltimos estn dispuestos en la membrana, como los de las eubacterias y los de las clulas eucariotas, con los grupos polares dirigidos hacia fuera y los grupos apolares hacia dentro. Adems, las membranas pueden ser bicapas o monocapas (fig. 14). Las paredes celulares de las arqueobacterias carecen de peptidoglucanos y de D-aminocidos. En cambio, poseen seudopeptidoglucanos (N-acetilglua
grupos polares glicerol cadenas isoprenoides protenas de membrana

cosamina y N-acetiltalosaminurnico unidos mediante enlace 1 3, ms L-aminocidos) y polisacridos (galactosamina, cido glucurnico y glucosa) o protenas, segn las especies. El genoma de las arqueobacterias est formado por una sola molcula de ADN circular, ms pequeo que el de las eubacterias. El metabolismo arqueo-bacteriano sigue el mismo patrn que el de las eubacterias. Muchas especies son auttrofas y otras muchas son capaces de colonizar medios de condiciones extremas. As, las arqueobacterias haloflicas viven en aguas hipersalinas como las del mar Muerto, las arqueobacterias termoflicas viven en aguas termales o hbitats volcnicos ricos en azufre, las arqueobacterias metangenas viven en condiciones de anaerobiosis, como por ejemplo en el tracto intestinal de los animales, y son capaces de producir metano (CH4) a partir de diferentes sustratos como el CO2. Se cree que los primeros organismos que aparecieron sobre la Tierra posiblemente fueron muy parecidos a las actuales arqueobacterias.

14 Estructura de las membranas en arqueobacterias. a) Bicapa. b) Monocapa.

15 Arqueobacteria: Metanococcus janschi.

5 Los microorganismos eucariotas

Algas y hongos, aunque poseen muchas especies macroscpicas, disponen tambin de representantes dentro del mundo microbiano, algunos muy importantes en el ciclo de los ecosistemas terrestres y acuticos. Los protozoos, a menudo considerados errneamente animales por disponer de movilidad, son todos microscpicos. plantas superiores al disponer de falsas races, tallos y hojas. Las algas viven preferentemente en hbitats acuticos. De gran importancia son las algas microscpicas marinas (fitoplancton), pues constituyen el primer eslabn en la cadena alimentaria marina. Otras viven en aguas dulces, aguas termales, en el fango e incluso sobre la corteza de los troncos. Las algas contienen cloroplastos donde se encuentran los pigmentos fotosintticos, entre los que hay varios tipos de clorofilas, xantofilas y carotenoides. La pared celular suele ser de celulosa, como en las plantas superiores, pero a veces se le aaden otras molculas como pectina, xilanos y mananos. En ocasiones, a los componentes de la pared celular se les aaden sustancias minerales como carbonato clcico o slice, que endurecen la cubierta de la clula. Hay

1. Las algas microscpicas

Se conoce con el nombre de algas a una serie de grupos de protoctistas que efectan la fotosntesis. Forman un grupo muy heterogneo pues se encuentran especies unicelulares, pluricelulares microscpicas o macroscpicas, e incluso especies de gran talla (hasta ms de 20 metros) que por su forma semejan
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tambin algunas algas unicelulares que carecen de pared celular. Como mecanismos de locomocin tienen los flagelos y el movimiento deslizante. Las algas se pueden reproducir asexualmente mediante biparticin, mediante esporas o por fragmentacin, como es el caso de las algas puricelulares. La reproduccin sexual se ha comprobado en las algas diatomeas, los clorfitos, fefitos y rodfitos. En este ltimo caso se ha comprobado que suele haber alternancia de generaciones, ya que hay individuos de
Grupo Pirrfitos o dinoflageladas Clorfitos o algas verdes Euglenfitos Crisfitos Fefitos o algas pardas Rodfitos o algas rojas Pigmentos Clorofilas a, c, -caroteno, dinoxantina Clorofilas a, b, xantofilas y -carotenos Clorofilas a, b, -carotenos, xantofilas Clorofilas a, c, -carotenos, xantofilas Clorofilas a, c, carotenos, xantofilas Clorofila a, y -carotenos, ficocianina, ficoeritrina

un alga que forman esporas (esporfitos) e individuos que forman gametos (gametfitos). Los esporfitos son diploides y los gametfitos suelen ser haploides. La clasificacin de los diferentes grupos de algas tiene en cuenta, entre otros caracteres, los pigmentos fotosintticos presentes, los materiales de reserva del citoplasma y la composicin de la pared celular. En el cuadro III se especifican los principales grupos de algas y sus caractersticas.
Morfologa Unicelulares Unicelulares y pluricelulares Unicelulares Unicelulares Pluricelulares, muchas de gran talla Unicelulares y pluricelulares Pared celular Celulosa Celulosa Sin pared celular Celulosa y slice (diatomeas) Celulosa Celulosa, con agar-agar a veces calcificada

Sustancia de reserva Almidn Almidn Paramilo Aceites, crisolaminarina Aceites, crisolaminarina Un tipo de almidn llamado almidn de flordeas

CUADRO III. Clasificacin y caractersticas de algas.

2. Los protozoos
Son organismos unicelulares eucariticos hetertrofos que carecen de pared celular. Presentan caractersticas que los hacen parecer a los animales, como su capacidad de desplazamiento, su irritabilidad ante diferentes estmulos, el modo de captura del alimento y la complejidad de sus procesos digestivos. Algunos pueden formar colonias de varios individuos. Los principales grupos de protozoos y algunas de sus caractersticas se pueden ver en el cuadro IV. El tamao de los protozoos puede oscilar entre 3 y 800 . Viven en ambientes acuticos o hmedos y generalmente tienen vida libre, aunque los esporozoos y otras especies son parsitos. Los protozoos se mueven mediante pseudpodos, cilios o flagelos. Los pseudpodos son prolongaciones del cuerpo de la clula de tipo redondeado o alargado que sirven, adems de para la locomocin, para la captura de presas; se presentan slo en los sarcodinos. Los cilios y los flagelos poseen idntica estructura interna: tienen nueve pares de microtbulos formando un crculo en la periferia y otro par de microtbulos en el centro. Los cilios son

propios de los ciliforos y suelen presentarse homogneamente por toda la clula, pueden concentarse en determinadas zonas o bien presentarse slo alrededor del citostoma. Los flagelos los poseen los mastigforos, existiendo un nmero bajo de ellos (1, 2, 4 o pocos ms) en cada clula. Los protozoos se alimentan de bacterias, de algas unicelulares, de otros protozoos, de invertebrados microscpicos como los rotferos o simplemente de partculas de materia orgnica presente en el medio. La reproduccin asexual se produce principalmente por simple divisin binaria o bien por esporulacin. La divisin binaria comporta un proceso casi idntico al de la mitosis de las clulas de los metazoos. La esporulacin se efecta en los esporozoos, lo cual permite a estos protozoos parasitar a numerosas clulas en un corto perodo de tiempo. En los ciliforos se lleva a cabo un fenmeno de sexualidad llamado conjugacin, que consiste en la fusin temporal de dos individuos con intercambio de ADN, lo que conduce a la formacin de dos individuos con un genoma algo diferente del original.
355

Grupo Mastigforos o flagelados Sarcodinos o amebas Apicomplejos o esporozoos Ciliforos o ciliados

Locomocin Mediante flagelos Mediante seudpodos Mediante contraccin del cuerpo Mediante cilios

Reproduccin Fisin longitudinal, mediante gametos Fisin simple o mltiple, mediante gametos Fisin multiple Por fisin transversal, por conjugacin

Otras caractersticas Viven en aguas dulces o son parsitos Algunos con teca calcrea (foraminferos) o de slice (radiolarios) Son endoparsitos Tienen dos ncleos y una boca celular (citostoma y citofaringe)

CUADRO IV. Clasificacin y caractersticas de protozoos. Grupo Zigomicetes Ascomicetes Basidiomicetes Oomicetes Deuteromicetes Tipos de esporas Zigosporas Ascosporas Basidiosporas Oosporas Conidiosporas Hifas Sifonadas Septadas Septadas Sifonadas Septadas Hbitats En los suelos, en la materia vegetal en descomposicin En los suelos, en la materia vegetal en descomposicin En los suelos, en los vegetales en descomposicin En el agua En los suelos, en los vegetales en descomposicin, sobre la piel de los animales Ejemplos Moho del pan Levaduras Las setas Mohos del agua Penicillium (hongo productor de la penicilina), hongo del pie de atleta

CUADRO V. Clasificacin y caractersticas de hongos.

3. Los hongos microscpicos

Los hongos son organismos eucariotas unicelulares o pluricelulares carentes de pigmentos fotosintticos, por lo que no pueden realizar la fotosntesis; tienen por lo tanto nutricin hetertrofa mediante la absorcin de alimento orgnico muerto (nutricin saproftica) previamente digerido en el exterior de las clulas gracias a la secrecin de potentes enzimas. La mayor parte de los hongos viven en ambientes terrestres, bien en el suelo o sobre materia vegetal muerta, a cuya descomposicin contribuyen. Muchos hongos son parsitos de plantas y animales. Los hongos pluricelulares forman esporas que al desprenderse y germinar producen filamentos microscpicos denominados hifas, cuyas clulas pueden estar completamente separadas (hifas septadas) o bien incompletamente (sifonadas). El conjunto de las hifas de un hongo se denomina micelio. Muchas esporas se forman despus de la reproduccin sexual mediante la fusin de gametangios, como las oosporas de los oomicetes y las zigosporas de los zigomicetes, o bien dentro de esporangios como los ascas (ascosporas) y los basidios (basidiosporas). Principales hongos microscpicos: Los mohos son hongos filamentosos constituidos por hifas. Son muy abundantes en la naturaleza y se pueden apreciar sobre el pan, el queso o las frutas, porque forman una fina capa pare356

cida al fieltro. Las esporas de los mohos se forman, sin que haya reproduccin sexual previa, en el extremo de hifas especiales; se denomina conidios a los esporangios y conidiosporas a las esporas que se forman en l. Las levaduras son hongos unicelulares que se reproducen asexualmente por gemacin. No forman micelios y se presentan principalmente en medios muy azucarados, como las frutas, en las flores y en la corteza de los rboles. Debido a los procesos fermentativos que desarrollan, muchas levaduras, como las del gnero Saccharomyces, son utilizadas industrialmente para obtencin del alcohol etlico de las bebidas alcohlicas, como la cerveza y el whisky, o para la obtencin del pan (cuadro V).

CUESTIONARIO 6
1. Qu se entiende por gametfitos y esporfitos? En qu microorganismos se encuentran? 2. Qu caractersticas hacen que los protozoos se parezcan a los animales? 3. Cul es la finalidad del proceso de conjugacin que se efecta en los protozoos ciliforos? 4. Qu son las hifas? Qu diferencia hay entre las hifas septadas y las sifonadas? 5. Cmo se nutren los hongos?

LABORATORIO

Medios de cultivos bacterianos

Aunque las bacterias estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, para conocer detalles de su fisiologa es necesario estudiarlas en el laboratorio en cultivos controlados y puros. Los medios de cultivo bacterianos son disoluciones acuosas con nutrientes orgnicos (monosacridos, cidos grasos, aminocidos, cidos orgnicos, bases nitrogenadas, etctera) e inorgnicos (sales minerales), que satisfacen los principales elementos qumicos que necesitan las bacterias para su metabolismo. Algunas bacterias especficas tambin necesitan la presencia de ciertos oligoelementos en su medio de cultivo para poder reproducirse. Los medios de cultivo de bacterias se preparan en medio lquido en tubos de ensayo a los que se aaden la muestra de bacteria que se quiere cultivar; frecuentemente se utilizan cultivos en estado de gel (semislido) que se obtienen al aadir al medio lquido una sustancia gelificante como el agar-agar, que se obtiene de algas marinas. Los medios de cultivo semislidos se preparan en cpsulas de Petri. Prepara un medio de cultivo con los siguientes ingredientes: 1.000 ml de agua destilada, 10 g de glucosa, 8 g de fosfato potsico, 1 g de sulfato amnico, 0,2 g de sulfato magnsico, 0,05 g de cloruro clcico y aade una pequea cantidad de agar-agar para que gelifique el medio en una cpsula de Petri. Deja expuesta la cpsula al aire o bien efecta varios toques aislados en el medio con el asa de cultivo que previamente ha contactado con medios donde es factible la presencia de bacterias como el suelo, el agua contaminada o el yogur. Observa lo que ha pasado al cabo de varios das. Qu ha aparecido en el medio de cultivo? Cmo lo interpretas?

Procedimiento: 1. Colocar y extender sobre un portaobjetos bien limpio una muestra bacteriana (procedente de un cultivo, de un yogur, del sarro dental recogido con un palillo, etc.). 2. Dejar secar al aire y luego fijar la muestra al portaobjetos mediante calor, colocando el portaobjetos sobre la llama del mechero de alcohol, procurando que no llegue a quemarse la muestra. En el caso de que la muestra bacteriana proceda del yogur, es conveniente echar alcohol sobre el portaobjetos para que arrastre la grasa que contiene el yogur. 3. Teir con el colorante de cristal de violeta (filtrado) durante 60 segundos. 4. Lavar la muestra con agua destilada. 5. Teir con lugol durante 3 minutos. 6. Lavar abundantemente con etanol y posteriormente con agua destilada. 7. Teir con safranina durante 2 minutos y lavar con agua corriente. 8. Secar suavemente la muestra con papel de filtro, pero sin frotar. 9. Observar al microscopio con el objetivo de inmersin, colocando una gota de aceite de inmersin. Qu forma tienen las bacterias que has preparado? Forman colonias o agrupaciones? De qu color las ves? Con este mtodo de tincin, las bacterias aparecen teidas de color azulado o rojizo, lo que se debe a la diferente estructura que tiene la pared bacteriana en las bacterias. Todas las bacterias permiten el paso del colorante cristal de violeta, que las tie de azul. La pared bacteriana de las llamadas bacterias Gram positivas forma, ante el tratamiento con lugol, una especie de esmalte impermeable al alcohol, por lo que este reactivo no las decolora, de modo que se mantienen de color azulado incluso despus del tratamiento con safranina. En cambio, las bacterias Gram negativas carecen de los componentes qumicos en su pared para formar el citado esmalte, por lo que se decoloran con el etanol; la posterior tincin con safranina hace que estas bacterias se tian de color rojizo. Son las bacterias que has teido Gram positivas o Gram negativas? Puedes deducir cul es la estructura de la pared de las bacterias que has preparado?

Cultivo en medio lquido

Cultivo en medio slido Asa de cultivo

La tincin de Gram
Esta tcnica de tincin permite la observacin de las bacterias al microscopio ptico y tambin, segn su respuesta a los colorantes, clasificarlas en dos grupos, las Gram positivas y las Gram negativas. Material necesario: colorantes (cristal violeta, lugol y safranina), agua destilada, etanol, papel de filtro, portaobjetos, microscopio con objetivo de inmersin, aceite de inmersin, mechero de alcohol.

A la izquierda Bacterias Gram +; a la derecha, Gram .

357

22
N D I C E
INFORMACIN 1 Los microorganismos patgenos.
Algunos conceptos sobre enfermedades infecciosas. La infeccin microbiana. Los factores de virulencia.

Microorganismos: enfermedades y biotecnologa

2 Las enfermedades infecciosas.

Enfermedades transmitidas por contacto directo y heridas. Enfermedades transmitidas por el aire. Enfermedades transmitidas por va sexual. Enfermedades transmitidas por el agua y los alimentos. Enfermedades transmitidas por animales.

3 La quimioterapia. 4 La biotecnologa microbiana.

Los microorganismos y los procesos de fermentacin. La produccin de antibiticos. La produccin de vitaminas, aminocidos y enzimas. Los microorganismos y el control de plagas de insectos. Los microorganismos y la industria alimentaria. Los microorganismos y la ingeniera gentica. Los microorganismos y la depuracin de las aguas residuales.

5 El control de los microorganismos.

Los agentes antimicrobianos fsicos. Los agentes antimicrobianos qumicos.

Hay microorganismos patgenos (virus de la varicela en el nio), pero otros participan en la elaboracin de productos muy tiles (yogur, vinos, quesos, vacunas, antibiticos...).

6 Los microorganismos y los ciclos biogeoqumicos. ACTIVIDADES

Muchos seres microscpicos han azotado a la humanidad produciendo enfermedades desde tiempo inmemorial; algunas de estas enfermedades se han controlado mientras que otras todava son incurables. El avance en la tecnologa ha permitido aprovechar el aspecto positivo que suponen algunos microorganismos al producir alimentos, antibiticos, vitaminas, etc. El mundo microbiano nos depara an muchas sorpresas en el campo de la ingeniera gentica.

358

1 Los microorganismos patgenos

La gran mayora de los microorganismos son inocuos para los dems seres vivos. Muchos de ellos incluso se han adaptado a las condiciones especiales que tienen los tejidos de los animales, viviendo en ellos, en su piel, en sus conductos digestivos o respiratorios; son la denominada flora normal. Sin embargo, los microbios ms conocidos son aquellos que producen enfermedades infecciosas en las plantas, en los animales y en la especie humana; stos son los microorganismos patgenos. Para que estos microbios puedan manifestar sus efectos nocivos deben penetrar en los seres vivos. La mayora de los animales estn bien protegidos en sus superficies externas mediante pieles gruesas, escamas, cutculas, secreciones, etc., de modo que la penetracin de estos microbios patgenos suele efectuarse a travs de heridas o mediante los conductos naturales de los animales como los digestivos, respiratorios o genitourinarios. Hay microorganismos que normalmente no son patgenos pero pueden serlo cuando disminuyen los mecanismos defensivos de un animal: son los microorganismos oportunistas. transmisores de la enfermedad. Se les denomina individuos portadores. Puede ser que en ellos el microbio est an en fase de incubacin o bien que hayan padecido la enfermedad y la hayan superado, pero el microbio siga estando en forma latente en ellos. El aislamiento o limitacin de movimientos de personas y animales que estn infectados se llama cuarentena y afecta al tiempo ms largo de posible contagio de la enfermedad; en la actualidad, slo se obliga a efectuar cuarentena en las siguientes enfermedades graves: fiebre amarilla, peste, clera, fiebre tifoidea y fiebre recurrente.

1. Algunos conceptos sobre enfermedades infecciosas

Se habla de epidemia cuando al mismo tiempo se dan muchos casos de individuos enfermos de la misma enfermedad en una determinada comunidad o rea geogrfica pequea. En cambio, una pandemia es una enfermedad infecciosa distribuida por una zona extremadamente amplia de la Tierra. Si una enfermedad infecciosa afecta de manera constante a una determinada comunidad pero con una incidencia no muy alta en la poblacin, se dice que es endmica. Algunas enfermedades infecciosas que se producen primariamente en diversos animales como el ganado vacuno, los cerdos, los perros, los murcilagos y los conejos, pueden transmitirse secundariamente a la especie humana por el contacto con estos animales. A estas enfermedades se las denomina zoonosis. Se conoce por el nombre de reservorios a aquellos lugares donde los microorganismos patgenos pueden sobrevivir fuera de los huspedes y desde donde pueden iniciar la infeccin. Los reservorios pueden ser tanto objetos inanimados como seres vivos. A los seres vivos que son imprescindibles para la transmisin del microorganismo patgeno hasta el hospedador definitivo se les llama vectores de la enfermedad (fig. 1). Hay personas que aun no teniendo sntomas de una enfermedad infecciosa, llevan en su interior el microbio patgeno y son, por lo tanto, potenciales
1 Los insectos son habituales vectores de algunas enfermedades producidas por microorganismos patgenos, que transmiten mediante sus picaduras. La mosca tse-tse transmite el tripanosoma, protozoo responsable de la enfermedad del sueo en el ser humano.

2. La infeccin microbiana
El primer paso que se da cuando un microbio va a infectar a un ser vivo es su adherencia a las clulas del husped. En esta adherencia suele existir especificidad de husped (una bacteria que infecte a la especie humana difcilmente se adherir a los tejidos de otra especie) y especificidad de tejidos, ya que el microorganismo tiene preferencia por adherirse a determinado tipo de tejidos. En la adherencia a las clulas del husped intervienen macromolculas de la superficie del microbio como las que se encuentran en las cubiertas de virus y bacterias, o bien intervienen las fimbrias, en el caso de las bacterias. Aunque algunos microbios patgenos pueden producir sus efectos nocivos cuando se encuentran fijos a las superficies de los tejidos, lo ms frecuente es que penetren a travs de los epitelios mediante pequeas
359

roturas en stos. Inicialmente se produce un foco de infeccin situado muy cerca del lugar de entrada del microbio, donde ste se localiza y reproduce. Espinillas y fornculos son casos comunes de focos infecciosos producidos por bacterias del grupo de los Staphylococcus. Posteriormente, los microbios pueden acceder a las vas linfticas y a los ganglios linfticos, donde ponen en marcha la defensa inmunolgica de tipo celular. La inflamacin de los ganglios linfticos es un claro indicio de infeccin microbiana. Si los microorganismos alcanzan los vasos sanguneos, se extienden a otras partes del cuerpo del husped donde se reproducen, pudiendo concentrarse en tejidos especficos como el hgado o bazo o bien producirse una infeccin generalizada o sistmica en diferentes rganos a la vez.

Hay dos categoras de toxinas: las que son liberadas al medio que circunda al microorganismo o exotoxinas y las que producen su efecto formando parte del microorganismo, sin ser liberadas, o endotoxinas. Las exotoxinas suelen ser protenas que tienen una gran especificidad para ciertos tejidos; as se habla de neurotoxinas, cuando son exotoxinas que atacan a las clulas del sistema nervioso, y enterotoxinas las que afectan a las clulas epiteliales digestivas causando diarreas. Algunas exotoxinas tienen efectos txicos incluso en ausencia del microorganismo que las produce, de modo que alimentos contaminados con toxinas pueden ser capaces de producir la enfermedad, como ocurre con el botulismo. Las exotoxinas, al ser molculas proteicas, inducen en el cuerpo de los hospedadores la sntesis de anticuerpos especficos denominados antitoxinas. Las exotoxinas pierden su carcter txico cuando son calentadas o cuando son tratadas con ciertas sustancias qumicas llamadas toxoides, como el formaldehdo, el fenol y la -propiolactona. Las principales enfermedades producidas por exotoxinas son el botulismo, el clera, la difteria y el ttanos. Las endotoxinas son molculas estructurales de la membrana externa de la pared celular de bacterias Gram negativas. Su composicin qumica es de tipo lipopolisacrido y su actividad txica la tienen tanto si estn formando parte de la pared celular intacta como cuando son liberadas al medio al desintegrarse la bacteria (cuadro I).
Endotoxinas Bacterias Gram negativas Lipopolisacridos Generales, produciendo fiebre y shock Son termoestables No inducen la produccin de anticuerpos Baja

3. Los factores de virulencia

Se conoce con el nombre de virulencia el grado en el que un microorganismo patgeno es capaz de producir una enfermedad. El mecanismo por el que los microorganismos son patgenos, o factor de virulencia, no se conoce en muchos casos; sin embargo, en algunos s se ha llegado a identificar, como ocurre con las toxinas y con ciertas enzimas segregadas al medio. Las toxinas son sustancias producidas por microorganismos, principalmente bacterias, que tienen efecto txico o venenoso en los tejidos del husped.
Caracterstica Microorganismo productor Naturaleza qumica Efectos en el husped Tolerancia al calor Efectos inmunolgicos Toxicidad

Exotoxinas Bacterias Gram positivas y Gram negativas Protenas Especficos sobre tejidos Se desnaturalizan Inducen la produccin de anticuerpos Alta, hasta en dosis muy pequea

CUADRO I. Diferencias entre las exotoxinas y las endotoxinas. a b

Liberacin de hialuronidasa Bacterias

Exotoxina (veneno)

Fibrina

Plsmido de virulencia

Flagelo (movilidad)

Fimbria (adherencia) Hemoaglutinina (adherencia a clulas sanguneas)

Endotoxina (veneno)

Estafilococo Clula de los tejidos

2 a) Factores de virulencia que pueden existir en un microorganismo patgeno. b) Bacterias invadiendo tejidos gracias a la secrecin de hialuronidasa. c) Estafilococos sanguneos coagulando el fibringeno al producir coagulasa.

360

Otros microorganismos deben su virulencia a la produccin de enzimas extracelulares como la hialuronidasa, la coagulasa, la lecitinasa, la leucocidina y las hemolisinas. Bacterias como Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes producen hialuronidasa, enzima que hidroliza el cido hialurnico, uno de los componentes del cemento extracelular que hace que las clulas de los tejidos permanezcan unidas, por lo que la cohesin entre las clulas disminuye y las bacterias tienen ms facilidad para invadir el tejido (fig. 2 b). Otra bacteria, Clostridium perfringens, segrega lecitinasa que hidroliza los lpidos de membrana de las clulas del husped. Esta misma bacteria es capaz de producir tambin colagenasa, que acta destruyendo las fibras de colgeno que hay en muchos tejidos como el conjuntivo, el hueso o el cartlago. Algunos Staphylococcus producen coagulasas que provocan que el fibringeno del plasma sanguneo del husped se transforme en fibrina, que forma unas fibras que rodean a las bacterias, con lo que las protege de la accin de los macrfagos sanguneos (fig. 2 c). Las enzimas leucocidinas lisan leucocitos del husped. Las hemolisinas, producidas por una gran variedad de

bacterias, lisan glbulos rojos, liberando al plasma su hemoglobina. Otros factores de virulencia son las fimbrias de adhrencia bacterianas, las molculas de hemoaglutininas que existen en la cubierta de muchas bacterias, los flagelos bacterianos y los plsmidos con genes de virulencia (fig. 2 a).
CUESTIONARIO 1
1. Qu diferencia hay entre los microorganismos patgenos y los oportunistas? 2. Di a qu tipo de enfermedad infecciosa pertenece una infeccin que afecta a poblaciones humanas muy extendidas por toda la Tierra. En qu se diferencia de una epidemia? 3. Cules son las principales diferencias entre las endotoxinas y las exotoxinas bacterianas? 4. Indica la diferencia entre el vector y el portador de una enfermedad infecciosa. 5. Seala las diferencias y similitudes entre los toxoides y las antitoxinas. 6. Existen otros factores de virulencia distintos de las toxinas? Cules? Cmo acta la hialuronidasa? Y las hemolisinas?

2 Las enfermedades infecciosas

Los microorganismos capaces de originar enfermedades infecciosas en los seres vivos son muy variados: pueden ser virus, bacterias, hongos o protozoos. En el cuadro II se indican las principales enfermedades infecciosas que pueden afectar a la especie humana. Una manera de clasificar las enfermedades microbianas, adems de por el tipo de microorganismo que las produce, es por el medio en que son transmitidas. As tenemos enfermedades infecciosas que se transmiten por contacto directo, por el aire, por va sexual, por el agua o los alimentos o bien mediante vectores animales. una invasin microbiana. Los microorganismos que penetran a travs de las heridas pueden estar presentes sobre la piel del animal, encontrarse en el objeto que ha producido la herida, o bien provenir del suelo, de la ropa contaminada, de las heces humanas o incluso de la orina. Es de extrema importancia tratar inmediatamente las heridas, por pequeas que sean, con un agente desinfectante y evitar tocar la zona herida con todos aquellos objetos donde potencialmente pueda haber microbios patgenos.

1. Enfermedades transmitidas por contacto directo a travs de heridas en la piel (cuadro III)
Muy pocos microorganismos patgenos pueden penetrar a travs de la piel intacta de los animales, por lo que deben aprovechar las roturas que se producen en ella para invadir el cuerpo de stos. Pequeas heridas producidas en el ambiente domstico o escolar, heridas producidas en accidentes, heridas de bala o metralla producidas en el campo de batalla, o incluso las incisiones quirrgicas, pueden ser el origen de
3 La lepra es una enfermedad infecciosa bacteriana producida por Mycobacterium leprae. Afecta a todo el organismo y se acompaa de alteraciones en la piel y mucosas.

361

Enfermedades producidas por virus Fiebre amarilla Gripe Hepatitis vrica Herpes genital Paperas Poliomielitis Rabia Sarampin SIDA Varicela Viruela

Enfermedades producidas por bacterias Botulismo Clera Difteria Enfermedad del legionario Envenenamiento por estafilococos Faringitis Gangrena gaseosa Gastroenteritis Gonorrea Lepra (fig. 3) Meningitis Peste Neumona Sfilis Ttanos Tifus Tos ferina Tuberculosis

Enfermedades producidas por protozoos Disentera amebiana Enfermedad de Chagas Enfermedad del sueo Kala-azar Malaria

Enfermedades producidas por hongos Blastomicosis Candidiasis Pie de atleta Tia

CUADRO II. Principales enfermedades microbianas en la especie humana. Enfermedad Rabia Microorganismo Rhabdovirus (virus de ARN con envoltura) Efectos Se transmite por la mordedura de perros, gatos, murcilagos. El virus ataca al sistema nervioso. Los sntomas aparecen de tres a ocho semanas despus de la mordedura: fiebre, alucinaciones, desorientacin, hiperactividad, hidrofobia. Puede conducir a la muerte. Se trata mediante sueroterapia y se previene con una vacuna. La potente neurotoxina producida altera el sistema nervioso, provocando la contraccin violenta e involuntaria de msculos como los del cuello y las mandbulas. La mortalidad es de ms del 50 %. Se trata con relajantes musculares y antitoxinas. La exotoxina segregada degrada los fosfolpidos de las membranas celulares del husped, con lo que el tejido afectado empieza a degenerar (gangrena). En este proceso se libera gran cantidad de gas hidrgeno. Se trata con la extirpacin del tejido afectado, con antitoxina y antibiticos. Lesiones ms o menos circulares en la piel o en la dermis. Se trata con fungicidas como la nistatina.

Ttanos

Clostridium tetani, (b) que se encuentra esporulado en el suelo y en el intestino de animales herbvoros. Clostridium perfringens (b)

Gangrena gaseosa

Dermatomicosis (como la tia del pelo y el pie de atleta)

Hongos dermatfitos

CUADRO III. Principales enfermedades transmitidas a travs de la piel o mediante heridas (b bacteria).

2. Enfermedades transmitidas a travs del aire (cuadro IV)

Muchos microbios se transmiten por el aire dentro de microgotas de humedad (aerosoles) o sobre partculas de polvo, ambas de tamao microscpico e invisibles al ojo humano. Estas microgotas o partculas pueden proceder de personas enfermas que las expelen a travs, por ejemplo, del estornudo, de la tos o incluso del habla, o bien proceden del medio ambien362

te contaminado. Se ha calculado que en un simple estornudo de una persona enferma pueden existir de 10.000 a 100.000 bacterias. La inhalacin por parte de personas enfermas de estas microgotas o micropartculas puede iniciar en ellas un foco infeccioso. Los microorganismos que se transmiten por el aire infectan generalmente las vas respiratorias de los animales. Las infecciones respiratorias son las que con ms frecuencia originan los microbios patgenos.

Enfermedad Resfriado comn Gripe

Microorganismo Rhinovirus (virus de ARN con cpsula icosadrica) Ortomixovirus (virus de ARN con envoltura y 8 nucleocpsidas de forma helicoidal) Paramixovirus (virus de ARN con envoltura) Paramixovirus

Efectos Infeccin de los epitelios de las fosas nasales y de la faringe. Congestin nasal, descarga nasal, estornudos, tos y fiebre ligera. Infeccin de las vas respiratorias superiores y a veces del pulmn. Fiebre alta, dolores de cabeza, escalofros y fatiga. En los casos graves se puede complicar con una neumona. Frecuentemente es una enfermedad epidmica. Se puede evitar con vacunacin anual (fig. 4). Enfermedad infantil. Infeccin de vas respiratorias y de otros tejidos en casos graves. Tos, fiebre, enrojecimiento de los ojos, ronchas en la piel. Se puede prevenir con vacuna. Infeccin del conducto respiratorio superior, inflamacin de las glndulas salivales (partidas). La infeccin puede progresar a los testculos, el pncreas y el cerebro. Se trata con vacuna.

Sarampin

Paperas

Varicela

Infeccin del tracto respiratorio y ganglios linfticos. Despus de Herpesvirus (virus de ADN de doble cadena, nucleocpsida la diseminacin va sangunea, aparecen erupciones cutneas prominentes en diferentes partes del cuerpo. La vacunacin no es del todo eficaz. icosadrica y con envoltura) Diversas especies del gnero Streptococcus (b) Mycobacterium tuberculosis (b) Streptococcus pneumoniae (b) Corynebacterium diphteriae (b) Inflamacin intensa de la garganta, fiebre ligera, malestar general e infeccin del odo medio y de las amgdalas. Se trata con antibiticos como la penicilina. Infeccin del pulmn y de otros rganos. Se trata mediante quimioterapia (estreptomicina, isoniacida). Infeccin de los pulmones. La bacteria segrega una exotoxina de accin citoltica. Los sntomas son fiebre, escalofros y dolor en el pecho. Se trata con penicilina. Infeccin de la garganta y de las amgdalas. La exotoxina producida destruye las clulas epiteliales de la garganta, y origina un exudado que puede obstruir la trquea y dificultar la respiracin. Los riones y el corazn tambin pueden verse afectados. Se trata con antitoxina y se previene con una vacuna.

Faringitis Tuberculosis Neumona

Difteria

CUADRO IV. Principales enfermedades infecciosas transmitidas a travs del aire (b bacteria).

4 La vacuna anual contra la gripe debe tener en cuenta la facilidad de mutacin de este virus.

contaminada, o en el momento del nacimiento a partir de madres infectadas. La mayora de las ETS son fcilmente curables mediante tratamiento con antibiticos y quimioterapia, pero otras como las originadas por virus son difciles o imposibles de curar por el momento, por ejemplo el SIDA. La mejor manera de atacar estas enfermedades son los mtodos preventivos en las relaciones sexuales. Las principales ETS son la gonorrea, la sfilis, el herpes genital, la hepatis B y el SIDA. Por la importancia actual del SIDA, y por sus efectos particulares en el organismo, esta enfermedad ser tratada con amplitud en el tema 24: Anomalas del sistema inmunitario.

3. Enfermedades transmitidas por va sexual (cuadro V)

Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) o enfermedades venreas estn extendidas en todo el mundo, y afectan principalmente a la poblacin adolescente y a los jvenes hasta 30 aos. Los microorganismos que causan estas enfermedades se transmiten, de las personas infectadas a las sanas, a travs de las relaciones sexuales, aunque algunos pueden tambin infectar a travs de otros medios como jeringuillas contaminadas, por transfusiones de sangre

5 Persona afectada de SIDA.

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Enfermedad SIDA

Microorganismo Retrovirus o VIH (virus de ARN con envoltura)

Efectos El virus ataca a los linfocitos T y los destruye, causando una disminucin importante de las defensas inmunolgicas del enfermo. La infeccin tiene una fase asintomtica que puede durar varios aos, antes de que aparezcan los sntomas graves de la enfermedad. Hasta el momento la enfermedad es fatal casi en el 100 % de los casos por la inexistencia de un tratamiento adecuado (fig. 5). Infecciones y ampollas alrededor del ano, en la uretra y en la vagina, en el sexo femenino, y en el pene en el hombre. Fiebre, dolor al orinar y dolores genitales. Hasta el momento la enfermedad es incurable pero se pueden aliviar las ampollas con la sustancia acylovir, anloga de la guanina. Debilidad general, nuseas, vmitos frecuentes, fiebre y amarilleamiento de la piel. Se puede adquirir tambin a travs de transfusiones sanguneas contaminadas, jeringuillas y agujas contaminadas y en el nacimiento. Existe una vacuna muy efectiva. La bacteria produce una potente endotoxina. Inflamacin de la mucosa vaginal de la mujer, que en muchos casos es una portadora asintomtica de la enfermedad. En el hombre produce infeccin del canal uretral, con dolor al orinar y descarga de pus amarillento. Si la infeccin se extiende puede producir esterilidad en el hombre. Se trata con antibiticos. Lesiones iniciales de la piel (chancro) en los genitales y otras zonas del cuerpo, posteriormente aparece una erupcin cutnea generalizada y, si la infeccin se extiende, pueden quedar afectados el sistema nervioso y los vasos sanguneos. Se trata con penicilina. Inflamacin de las paredes de la vagina (vaginitis) con flujo vaginal pastoso en la mujer y uretritis (inflamacin de la uretra) en ambos sexos. Se trata con fungicidas (quimioterapia). Vaginitis con flujo vaginal y dolor al orinar en la mujer; infeccin de la uretra en ambos sexos y de la prstata y vesculas seminales en el hombre. ste en muchos casos no presenta sntomas de la enfermedad. Se trata mediante quimioterapia.

Herpes genital

Herpesvirus (virus de ADN de doble cadena, de cpsida icosadrica y envoltura) Picornavirus (virus de ADN de doble cadena y envoltura)

Hepatitis B

Gonorrea

Neisseria gonorrhoeae (b)

Sfilis

Treponema pallidum (b)

Candidiasis vaginal Tricomoniasis

Candida albicans (h)

Trichomonas vaginalis (p)

CUADRO V. Principales enfermedades de transmisin sexual (b bacteria; h hongo; p protozoo).

Ncleo Amebas jvenes Glbulo rojo fagocitado Ameba activa (trofozoto) Ncleos INTESTINO DELGADO EN LAS HECES Cubierta Ncleos Desenquistamiento Quiste multinucleado Cubierta Quiste unicelular Grnulos de reserva INTESTINO GRUESO Ncleo Estado prequstico Glbulo rojo Ncleo

6 Ciclo biolgico de Entamoeba histolytica, protozoo causante de la disentera amebiana. La infeccin se adquiere al consumir alimentos o agua contaminada con quistes del microbio. En el tubo digestivo, los quistes dan origen a amebas que migran al intestino grueso convirtindose en amebas activas que se alimentan (trofozotos) de las clulas del tejido epitelial intestinal y de clulas sanguneas de los capilares, produciendo diarreas a veces teidas de rojo. Las amebas se transforman en quistes unicelulares que salen al exterior del animal con las heces. Dentro del quiste, el ncleo se divide varias veces. Si los quistes son ingeridos por otro animal, se producir la rotura de la cubierta (desenquistamiento) y la salida de las amebas jvenes, que inician otro ciclo infectante.

364

Enfermedad Poliomielitis

Microorganismo Poliovirus (virus de ARN de cpsida icosadrica)

Efectos Infeccin inicial en la faringe y el intestino, despus fiebre, dolor y rigidez de los msculos del cuello y de la espalda. En los casos ms graves, el virus puede afectar al sistema nervioso y causa parlisis de las piernas. Se previene con vacunas.

Hepatitis A Botulismo

Virus hepatitis A (virus de Infeccin del hgado. Sntomas: fiebre, prdida de apetito, fatiga e ictericia ARN con cpsida icosadrica) (amarilleamiento de la piel). Clostridium botulinum (b) Enfermedad producida por la neurotoxina de la bacteria, que envenena los alimentos y que acta sobre la capacidad del sistema nervioso de controlar la contraccin muscular. Sntomas: doble visin, dificultad al hablar, parlisis del diafragma, pudiendo ocurrir la muerte por fallo respiratorio. Se trata con la antitoxina. Gastroenteritis producida por la proliferacin de la bacteria en el intestino. Sntomas: diarrea, vmitos, dolores de cabeza y abdominales y fiebre. Los principales alimentos que se contaminan con Salmonella son: los huevos, la leche y sus derivados, las aves y la carne. Se transmite principalmente a travs del agua contaminada. Infeccin del tubo digestivo, donde la enterotoxina producida por la bacteria ataca al epitelio intestinal, originando una diarrea grave (prdida de hasta 10 litros de lquidos diarios) que puede llevar a la muerte del paciente. Se previene con una vacuna y purificando el agua potable. Se produce una enterotoxina que origina diarrea, nuseas y vmitos. Los alimentos que se contaminan ms frecuentemente son: salsas, ensaladas, flanes, postres de crema, huevos y pudding. Infeccin por los quistes del protozoo a travs del agua o de alimentos contaminados por heces. Sntomas: ulceracin del epitelio intestinal, diarrea con eliminacin de sangre y moco. En casos graves, el parsito puede invadir el pulmn, el hgado y el cerebro. Tratamiento mediante quimioterapia.

Salmonelosis

Salmonella (varias especies) (b)

Clera

Vibrio cholerae (b)

Envenenamiento por estafilococos Disentera amebiana o amebiasis

Staphylococcus aureus (b)

Entamoeba histolytica (p) (fig. 6)

CUADRO VI. Principales enfermedades infecciosas transmitidas por el agua y los alimentos (b bacteria; p protozoo).

4. Enfermedades transmitidas por el agua y los alimentos (cuadro VI)

El almacenado inadecuado de los alimentos, condiciones sanitarias deficientes en su manipulacin o el cocinado incompleto pueden ser la causa de ciertas enfermedades infecciosas debido a la presencia de microorganismos patgenos en los alimentos. El agua contaminada con restos fecales puede transmitir algunas enfermedades. Las enfermedades transmitidas por el agua o los alimentos pueden producirse debido a la proliferacin de los microorganismos en el cuerpo del animal que los ingiere o bien por las toxinas existentes en los alimentos, sin que sea necesaria la presencia del microbio patgeno. Debido a la naturaleza de la transmisin, muchas de las enfermedades de este tipo afectan al tracto digestivo. Otras pueden afectar a otras partes del cuerpo como el sistema nervioso, los msculos o el corazn. Los microorganismos que causan estas enfermedades pueden ser virus, bacterias o protozoos. La legislacin espaola especifica cules son las condiciones que deben cumplir las personas que manipulan los alimentos. Los consumidores debemos ser exigentes con la higiene en este sentido.

5. Enfermedades transmitidas por animales (cuadro VII)

Los principales animales que son utilizados por algunos microbios patgenos, como vectores para llegar a los hospedadores definitivos, son del grupo de los artrpodos, como las garrapatas y otros caros, los piojos, las pulgas, los mosquitos y las moscas. Estos animales, al picar a la especie humana o al contaminar sus alimentos, le transmiten los microbios. Algunos artrpodos son simples vectores mecnicos que slo transportan a los microbios en ciertas zonas de su cuerpo como las patas o los apndices bucales. En otras ocasiones, los artrpodos son vectores biolgicos, puesto que no slo transportan al microorganismo, sino que, adems, ste desarrolla en ellos parte de su ciclo vital. Frecuentemente, los artrpodos captan los microbios patgenos de otros animales, como las ratas, que de esta manera son considerados como reservorios de los microbios. Algunas enfermedades infecciosas transmitidas por artrpodos han tenido una historia trgica en siglos pasados, causando grandes mortandades (pandemias) en la humanidad como la peste, y otras, an hoy, tienen una gran incidencia entre algunas poblaciones, como ocurre con la malaria y la fiebre amarilla.
365

EN EL MOSQUITO ANOPHELES
12 Formacin de esporozotos dentro del ooquiste. Cubierta

13 Liberacin de los esporozotos y migracin a las glndulas salivares del mosquito.

EN LA ESPECIE HUMANA
Hgado 2 Migracin de los esporozotos.

Invasin y multiplicacin de los esporozotos en las clulas hepticas. Clula heptica 4 Salida de los merozotos en las clulas hepticas.

1 Picadura del mosquito infectado e inoculacin de los esporozotos.

11 Desarrollo de ooquistes en la pared del estmago del mosquito. 10 Fecundacin de vulos y espermatozoides.

6 Rotura de los glbulos rojos y liberacin de nuevos merozotos. 5 Multiplicacin de los merozotos. 8 Picadura de un mosquito en una persona infectada y captacin de los gametocitos. Merozoto CICLO ERITROCITARIO Gametocito dentro de un glbulo rojo. Glbulo rojo Gametocito dentro de un glbulo rojo. 7 Formacin de gametocitos

9 Transformacin de los gametocitos en vulos y espermatozoides en el estmago del mosquito.

7 Ciclo del Plasmodium, protozoo causante de la malaria en la especie humana. En este ciclo, extremadamente complejo y que requiere la intervencin de un mosquito para completarse, existen varias formas del parsito como los esporozotos que infectan las glndulas salivales del mosquito y el hgado de la especie humana, los merozotos que forman un ciclo de infeccin en los glbulos rojos (eritrocitos) del hombre, los gametocitos o clulas germinales y los ooquistes de resistencia. Al final de cada ciclo de infeccin eritrocitaria, cuando multitud de glbulos rojos se rompen y liberan los merozotos, se producen episodios de fiebres (fiebres recurrentes). Enfermedad Fiebre amarilla Microorganismo Flavivirus (virus de ARN de cpsula icosadrica y envoltura lipdica) Yersinia pestis (b) Vector Efectos

Mosquito (Aedes Infeccin del hgado, del rion y otros rganos. aegypti): lleva el virus Sntomas: fiebre, nuseas y vmitos, dolores en su saliva y lo transmite musculares, albuminuria e ictericia. Hay vacuna. en las picaduras. Pulga de las ratas; los reservorios son roedores salvajes y ratas domsticas. Garrapata del perro, que es, a su vez, vector y reservorio. Infecciones de los ganglios linfticos con abultamiento de stos (bubones), manchas oscuras en la piel debido a hemorragias, delirio, shock y la muerte en pocos das. Tratamiento con estreptomicina y prevencin con vacuna. La bacteria es parsito intracelular del ncleo o del citoplasma de clulas endoteliales de capilares sanguneos. Sntomas: fiebre, dolor de cabeza, diarreas, vmitos y erupciones cutneas en las palmas de las manos y plantas de los pies. Tratamiento con antibiticos. Infeccin de las clulas hepticas (esporozotos) y eritrocitos sanguneos (merozotos). Sntomas: fiebres recurrentes, escalofros, dolores de cabeza y musculares y anemia. Se trata con quimioterapia. Actualmente se est trabajando para conseguir una vacuna. Infeccin de los vasos sanguneos, luego el parsito puede invadir el sistema nervioso central, causando inflamacin del tejido cerebral y medular, lo que determina la postracin extrema de los enfermos (sueo).

Peste

Fiebre de las Montaas Rocosas

Rickettsia rickettsii (b)

Malaria o Paludismo

Varias especies del gnero Plasmodium (p) (figura 7)

Mosquito Anopheles, que es un vector biolgico.

Enfermedad del sueo

Trypanosoma brucei (p)

Mosca tse-tse (Glossina palpalis).

CUADRO VII. Principales enfermedades infecciosas transmitidas por animales (b bacteria; p protozoo).

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CUESTIONARIO 2
1. Qu son los aerosoles y qu importancia tienen en la transmisin de enfermedades infecciosas? Sabras indicar alguna enfermedad relacionada con los aerosoles? 2. Indaga en las diferentes tablas de las enfermedades infecciosas y realiza un cuadro con las enfermedades producidas por toxinas microbianas en que conste el nombre de la enfermedad, el microorganismo que la produce y el modo de transmisin de la enfermedad. 3. Qu diferencias hay entre la hepatitis A y la B? Cmo puede una persona infectarse de una u otra enfermedad? 4. Dolor al orinar, infeccin de la uretra, eliminacin de pus amarillento a travs del pene. Qu enfermedad infecciosa tiene estos sntomas en un hombre? Qu microorganismo la produce y cmo se puede transmitir? 5. Qu tipo de enfermedades pueden producir las bacterias del gnero Staphylococcus? Cul es la causa de estas enfermedades? 6. Indica las principales manifestaciones sintomticas del clera. Qu microorganismo la produce? Cmo se puede prevenir esta enfermedad? Conoces alguna otra enfermedad que se transmita de manera muy similar? 7. Cmo una infeccin iniciada por poliovirus puede producir parlisis irreversible? 8. A qu se deben las fiebres peridicas que se padecen en la malaria? 9. Cules son los reservorios de la peste? Cmo se puede transmitir esta enfermedad a la especie humana?

La quimioterapia

aromticas, etc. Los antibiticos son muy tiles para el tratamiento de enfermedades producidas por bacterias; algunos, no obstante, tambin tienen efectos contra los hongos patgenos. El mecanismo de accin de los antibiticos es variado (cuadro VIII), ya que va desde la inhibicin de la sntesis de las paredes celulares de las bacterias patgenas y la destruccin de los fosfolpidos de las membranas celulares, hasta la inhibicin de la sntesis del ADN, del ARN y de las protenas de los microbios patgenos. Los antibiticos de amplio espectro son los que ejercen su accin sobre una gran variedad de microorganismos. Algunas bacterias son resistentes a ciertos antibiticos gracias a que son capaces de inactivarlos o bien sus cubiertas no son permeables al antibitico. Cepas de bacterias mutantes pueden ser capaces de resistir a los antibiticos. Los principales agentes quimioteraputicos sintticos son las sulfonamidas o sulfamidas, que forman un conjunto de sustancias que interfieren en algunas reacciones importantes en los microbios patgenos e inhiben su crecimiento. Otros agentes son la isoniacida, que es utilizada en el tratamiento de la tuberculosis; el AZT es utilizado para disminuir los efectos infecciosos del virus del SIDA; la cloroquina es utilizada contra la malaria y la pentamidina contra la enfermedad del sueo.
Mecanismo de accin Interfiere en la sntesis de protenas Interfiere en la sntesis de protenas Induce la sntesis de protenas anormales Induce la sntesis de protenas anormales Interfiere en la sntesis de protenas Inhibe la sntesis de la pared bacteriana Inhibe la sntesis de la pared bacteriana

Muchas enfermedades producidas por microorganismos patgenos son tratadas mediante el uso de variadas sustancias qumicas. A stas se las llama agentes quimioteraputicos y al tratamiento en s, quimioterapia. Los agentes quimioteraputicos para ser efectivos deben tener una toxicidad selectiva, atacando a los microbios que causan la enfermedad pero sin daar a las clulas de los tejidos del husped. Hay dos categoras de agentes quimioteraputicos: los que son producidos normalmente por otros microorganismos, llamados antibiticos, y los que son de origen sinttico, es decir, producidos en el laboratorio. Algunos antibiticos ya se ha conseguido sintetizarlos en el laboratorio. Los antibiticos son sustancias qumicas producidas en el metabolismo de algunas bacterias del grupo de las actinomicetales y por ciertos hongos filamentosos. Su composicin qumica es variada, lo que ha determinado que se hayan establecido familias de antibiticos con una composicin similar; as hay antibiticos que contienen hidratos de carbono, otros que son pptidos o derivados de aminocidos, otros que son quinonas, otros que son derivados de molculas
Antibitico Cloramfenicol Eritromicina Neomicina Estreptomicina Tetraciclina CUADRO VIII. Principales antibiticos. Cefalosporina Penicilina

Microorganismo Streptomyces venezuelae (bacteria) Streptomyces erythereus (bacteria) Streptomyces fradiae (bacteria) Streptomyces griseus (bacteria) Streptomyces rimosus (bacteria) Cephalosporium sp. (hongo) Penicillium chrysogenum (hongo)

367

4 La biotecnologa microbiana
Los procesos industriales que utilizan los microorganismos como base para la obtencin de sus productos constituyen la llamada microbiologa industrial o biotecnologa microbiana. La biotecnologa microbiana tradicional emplea los microorganismos, tal y como se encuentran en la naturaleza, para la transformacin de algunas molculas en otras que tienen ms utilidad, como son los productos de los procesos fermentativos que llevan a cabo muchos microorganismos; para la obtencin de antibiticos y otras sustancias qumicas; para la obtencin de vacunas; para el control biolgico de plagas de insectos; para la produccin de alimentos. Recientemente se estn utilizando microorganismos alterados genticamente mediante mtodos de ingeniera gentica para obtener sustancias tiles, como determinadas hormonas. Los microorganismos utilizados en la biotecnologa proceden de la naturaleza, pero se han seleccionado a partir de sus capacidades para producir determinados productos. Lo primordial es que el microbio sea capaz de crecer rpidamente, resista el ser cultivado a gran escala y pueda producir la sustancia til en una cantidad apreciable y en el menor tiempo posible. producto se llama fermentacin. El fermentador debe disponer de conductos para aadir el medio de cultivo y los microbios, de vlvulas para permitir la salida de los gases indeseables que se produzcan, y de grifera para poder extraer peridicamente el producto de la fermentacin. Como en toda degradacin orgnica se libera calor, alrededor de los fermentadores suele haber una cubierta externa de enfriamiento (fig. 8).
Sello estril Motor Controlador del pH Reservorio cido/base y bomba Impulsor Escape

Vapor

Cubierta de enfriamiento Entrada de agua de enfriamiento

Salida de agua de enfriamiento Caldo de cultivo Aspersor (burbujas de aire) Aire estril

1. Los microorganismos y los procesos de fermentacin

Algunos microorganismos no patgenos son muy interesantes, puesto que son capaces de transformar ciertas sustancias o sustratos en productos de gran importancia para la especie humana. Estas transformaciones qumicas corresponden a reacciones catablicas en que molculas orgnicas son degradadas incompletamente sin intervencin de una cadena respiratoria y sin gasto de oxgeno o de otro sustrato oxidante, producindose otras molculas orgnicas ms simples; se trata, por lo tanto de fermentaciones. No obstante, algunas de las transformaciones qumicas que se llevan a cabo en estos transformadores industriales son aerobias, es decir, con intervencin de la cadena respiratoria, por lo que no son fermentaciones, sino respiraciones aerbicas con oxidacin incompleta del sustrato. Las fermentaciones a escala industrial se llevan a cabo en los denominados fermentadores. Se trata de depsitos de diferente capacidad (desde unos pocos litros hasta ms de 400.000) en los que existe un lquido que es el medio de cultivo de microorganismo. El medio de cultivo y los microbios industriales se mezclan mediante un sistema de palas interno que se llama impulsor. La transformacin del sustrato en el
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Cosecha

8 Estructura de un fermentador industrial.

El etanol es una de las sustancias ms importantes obtenidas en los fermentadores industriales. Aparte de ser un disolvente orgnico usado comnmente en la industria qumica, el etanol es la sustancia propia de las bebidas alcohlicas. Las levaduras del gnero Saccharomyces obtienen etanol degradando incompletamente molculas de glucosa, mediante la fermentacin alcohlica cuya ecuacin global es: glucosa (C6H12O6) 5 5 2 etanol (CH CH OH) 2 CO 3 2 2 Las bebidas alcohlicas que se obtienen de las fermentaciones producidas por las levaduras son: el vino, que procede de la fermentacin del azcar de la uva por parte de la levadura S. ellipsoideus; la cerveza, que se obtiene fermentando granos de semilla de cebada (malta) por la levadura S. cerevisiae; y las bebidas destiladas. stas se obtienen por fermentacin en caliente y posterior concentracin del etanol producido mediante destilacin, con lo que se obtiene una bebida con mayor grado alcohlico. La destilacin de la malta fermentada produce el whisky,

 la destilacin del jugo de la caa de azcar (melaza) fermentado produce el ron, y la destilacin del zumo de uva fermentado produce el brandy. En todas estas bebidas destiladas interviene la levadura S. cerevisiae. El cido lctico es una molcula con variedad de usos: sales del cido lctico (lactatos) son utilizadas en el tratamiento de anemias (lactato de hierro) y en las deficiencias de calcio (lactato de calcio); lactatos de sodio son empleados en sustancias plastificantes. El cido lctico es producido por bacterias como Lactobacillus bulgaricus que degradan la lactosa segn la siguiente reaccin global que corresponde a la fermentacin lctica: lactosa (C12H22O11) H2O 5 5 2 glucosa (C H O ) 5 6 12 6 5 4 cido lctico (CH CHOHCOOH) 3 El medio de cultivo para esta fermentacin lctica es un lquido (suero de leche), constituido por una solucin acuosa de lactosa, varias sales y vitaminas. La produccin de cido lctico se hace en varios niveles (fig. 9). Al cabo de dos das, la fermentacin en el tanque grande se ha completado; se debe hervir el contenido del tanque para coagular las protenas producidas y poder separar el cido lctico, en forma de lactato sdico, que debe ser purificado.
PROCESO DE CULTIVOS EN LABORATORIO

El vinagre o cido actico es otro de los productos que se obtiene mediante la biotecnologa microbiana. Las bacterias aerobias de los gneros Acetobacter y Gluconobacter (bacterias del cido actico) tienen la facultad de degradar incompletamente el etanol hasta obtener cido actico mediante la siguiente reaccin global: 2 etanol (CH3CH2OH) 2O2 5 5 2 cido actico (CH COOH) 2H O 3 2 Esta reaccin requiere oxgeno, de modo que no se trata de una verdadera fermentacin, aunque frecuentemente se habla de ella como de la fermentacin actica. El sustrato para esta transformacin puede ser el vino, la sidra o una disolucin de alcohol etlico. Uno de los fermentadores usados en este proceso es el de Frings (fig. 10), un recipiente de madera relleno en parte de virutas de madera o serrn inoculadas con las bacterias del cido actico; sobre las virutas va goteando constantemente el medio de cultivo y existe una corriente de aire constante que atraviesa las virutas. El cido actico producido se va acumulando en el fondo del fermentador.
Entrada de alcohol etlico diluido

Goteo del medio de cultivo

Placa perforada

Virutas de madera inoculadas con bacterias que transforman el alcohol etlico en cido actico

PROCESO DE FERMENTACIN INDUSTRIAL Cultivo de lactobacilos en leche

cido actico en la cmara de recoleccin

Grifo de recoleccin

Fermentacin de la lactosa

Extraccin de inculos

Cultivo de lactobacilos en suero de leche

10 Fermentador de Frings para la produccin de cido actico.

CUESTIONARIO 3
Filtracin Evaporacin Purificacin CIDO LCTICO

1. Qu diferencia hay entre los antibiticos y las sulfonamidas? En qu se parecen? 2. Qu caractersticas debe tener una sustancia qumica para poder ser llamada agente quimioteraputico? 3. Cmo actan los antibiticos? Qu microorganismos los producen? 4. Define lo que se entiende por fermentador. Cules son los principales elementos del fermentador? 5. Cmo se obtienen las bebidas alcohlicas destiladas? Cul es su principal diferencia respecto a las no destiladas? 6. Nombra diez microorganismos que producen sustancias tiles mediante catabolismo. Ver tambin las dos pginas siguientes.

PRODUCTO EXTRACCIN Y PURIFICACIN

9 Fases de la produccin industrial de cido lctico. Se parte primero de pequeos cultivos bacterianos en tubos de ensayo y matraces, con leche como medio de cultivo. Posteriormente se pasa a cultivos en suero de leche en recipientes mayores de los que se sacan muestras (inculos) que servirn para iniciar el proceso en fermentadores industriales de gran volumen. El producto obtenido peridicamente de estos fermentadores hay que filtrarlo, purificarlo y evaporar los componentes voltiles para separar el cido lctico.

369

2. La produccin de antibiticos
Los antibiticos son productos de sntesis, no de catabolismo. Hasta el momento se conocen cerca de 800 antibiticos producidos por microorganismos: hongos del gnero Penicillium y bacterias de los gneros Bacillus y Streptomyces. La seleccin de los microorganismos productores de antibiticos se suele efectuar al azar en la naturaleza (fig. 11). La produccin industrial de antibiticos ha crecido espectacularmente desde la dcada de los 50 y tiene una gran importancia en el rea de la medicina. Son varias las causas que han contribuido a ello: El descubrimiento de especies microbianas que tienen mayor capacidad de produccin. Por ejemplo, inicialmente la penicilina era obtenida del hongo Penicillium notatum, pero actualmente se usa otra especie, P. chrysogenum, que produce ms cantidad de penicilina. El mejoramiento de los medios de cultivo y el desarrollo de la tcnica de cultivo sumergido en los fermentadores industriales, que permiten el crecimiento de los microbios en grandes volmenes. La seleccin de cepas mutantes de los microbios productores, que tienen ms capacidad de producir antibiticos. Las cepas mutantes se pueden obtener artificialmente mediante el uso de rayos X y rayos ultravioleta.

La mejora en el mtodo de extraccin del antibitico de la mezcla de cultivo.

3. La produccin de vitaminas, aminocidos y enzimas

La mayora de las vitaminas que se aaden a los alimentos o se utilizan en compuestos farmacuticos son sintetizadas en el laboratorio. Slo algunas de ellas, por lo complicado de su sntesis, son producidas industrialmente mediante procesos de fermentacin microbiana. La vitamina B12 es producida industrialmente a partir de las bacterias de los gneros Pseudomonas y Propionitacterium, que llegan a rendir hasta 60 mg de vitamina / litro de medio de cultivo. La riboflavina es producida por diversos microorganismos como bacterias y hongos, entre los que destaca el hongo del gnero Ashya, que es capaz de producir ms de 6 g de vitamina por litro de medio de cultivo. Muchos microorganismos pueden sintetizar aminocidos a partir de precursores nitrogenados inorgnicos como el sulfato amnico, como ocurre con las bacterias de los gneros Corynebacterium y Brevibacterium. Generalmente, el aminocido es sintetizado en mayor cantidad de la que necesita el microbio, de modo que el excedente es segregado al exterior. Esta caracterstica

11 Pasos seguidos en el proceso de produccin de antibiticos. Antes de proceder a la produccin industrial del antibitico hay que determinar el efecto de ste y diferentes concentraciones de l sobre diversas bacterias, lo que se conoce como espectro antibacteriano. Igualmente hay que efectuar test de toxicidad con animales de experimentacin para observar la aparicin de posibles efectos secundarios.
Obtencin de muestras bacterianas de la naturaleza (suelo, agua...). 1 Inoculacin en medio de cultivo. 4 Si hay actividad antimicrobiana (crecimiento inhibido alrededor de la lnea horizontal), se contina el cultivo en el laboratorio. 5

2 Seleccin de colonias.

Cultivo puro 3 Se inocula un medio de cultivo con la bacteria cultivada (raya horizontal) y despus varias bacterias diferentes (rayas verticales).

6 Tanque de fermentacin en el laboratorio para producir antibitico.

7 Concentracin del antibitico.

8 Test de toxicidad.

Determinacin del espectro antimicrobiano.

Zonas de inhibicin microbiana alrededor del disco impregnado de antibitico.

Bacteria A

Bacteria B

Bacteria C

Bacteria D

9 Produccin industrial en el fermentador.

10 Obtencin de viales de antibiticos.

ANTI BITICO

ANTI BITICO

ANTI BITICO

370

es la que se aprovecha para la produccin industrial de aminocidos a partir de microorganismos. Los aminocidos producidos son utilizados en la industria alimentaria para potenciar el sabor de los alimentos, como edulcorantes artificiales, como aditivos alimentarios o como antioxidantes. Ejemplos de aminocidos producidos por fermentacin microbiana son el cido glutmico, la lisina, la glicina, la metionina y la alanina. Diversos hongos (Penicillium, Mucor, Aspergillus) y bacterias producen enzimas en mayor cantidad de la que pueden utilizar, de modo que expulsan las molculas sobrantes, que actan en el medio circundante como enzimas extracelulares. Esta propiedad es utilizada en biotecnologa microbiana para obtener industrialmente enzimas en un proceso aerobio que utiliza medios de cultivo similares a los usados para la produccin de antibiticos. Las principales enzimas producidas industrialmente son diversas proteasas, la amilasa, la renina, la glucosa oxidasa y la pectinasa. Estas enzimas se utilizan en panadera, pastelera, farmacia, medicina, lavandera y en la industria textil.

para eliminar poblaciones de insectos dainos. La ventaja que tiene este mtodo de control de insectos en relacin con el uso de insecticidas es que stos tienden a acumularse en el suelo o bien van a parar a las aguas continentales y tienen efectos negativos en el medio ambiente. En cambio, las toxinas de los microbios entomopatgenos, aunque matan a los insectos, no suelen tener efecto txico en otros animales superiores ni en la especie humana.

5. Los microoganismos y la industria alimentaria

La presencia de microorganismos patgenos en los alimentos y la transmisin de enfermedades infecciosas mediante ellos ya han sido explicadas con detalle anteriormente. Otros microorganismos, generalmente no patgenos, se encuentran contaminando los alimentos ms comunes como carnes, frutas y verduras, huevos, mariscos y otros productos del mar, y la leche. Por ello diferentes organizaciones internacionales como la FAO han establecido una serie de normas que deben cumplir los alimentos para que puedan ser consumidos sin peligro para la salud humana y entre ellas se encuentra el control microbiolgico de los alimentos. En este control se pretende observar los microbios de los alimentos mediante el uso del microscopio ptico y la elaboracin de preparaciones microscpicas, determinar a qu grupos pertenecen (bacterias, hongos, protozoos), averiguar el tipo metablico a que pertenecen (aerbico, anaerbico, facultativo), efectuar un recuento de su abundancia en el alimento y como fin ltimo determinar la especie a que pertenecen. Establecida una abundancia mxima de microorganismos (en nmeros de clulas por mg o ml) permitida en los alimentos, stos, despus del control, pueden considerarse aptos o no aptos para su consumo. La preservacin de los alimentos antes de su consumo requiere tambin una serie de prcticas para evitar la proliferacin de microbios indeseables como son, segn el tipo de alimentos, el manipulado asptico, el tratamiento con calor (hervido, pasteurizacin, esterilizacin) o con bajas temperaturas (refrigerado o congelacin), deshidratacin, el aadido de aditivos qumicos o bien el tratamiento de los alimentos con rayos ultravioleta o radiacin ionizante. Hay otros microorganismos cuya actividad es utilizada para obtener alimentos para la especie humana. Los ms importantes son los capaces de fermentar diferentes alimentos como frutos, vegetales y la leche. La fermentacin microbiana de estos alimentos contribuye a conservarlos y a darles un sabor y aroma caractersticos. La fermentacin de los alimentos se efecta a partir de los propios microorganismos que llevan los alimentos o bien se realiza gracias
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4. Los microorganismos y el control de plagas de insectos

Recientemente, algunos microorganismos han sido utilizados como bioinsecticidas para controlar el excesivo crecimiento de la poblacin de algunas especies de insectos muy perjudiciales para la agricultura. Los microorganismos infectan a los insectos adultos o a sus estados larvarios, y los matan o bien son capaces de segregar diversas sustancias, como protenas, que actan como veneno para los insectos cuando stos las ingieren; son los microorganismos entomopatgenos. Algunos virus y ciertas especies de bacterias y hongos son utilizados de esta manera

12 Todos los alimentos conservados han debido pasar un control microbiolgico y en muchos casos han sido esterilizados mediante agentes fsicos.

a microorganismos que son aadidos al sustrato alimenticio, como ocurre con la fabricacin del queso. Entre los alimentos fermentados ms frecuentes se encuentran los que proceden de la fermentacin de la leche (derivados lcteos), como la leche blgara, el yogur, el kfir (mezcla de fermentacin lctea y alcohlica) y el queso.

6. Los microorganismos y la ingeniera gentica

Los avances en el manipulado de genes de unas clulas a otras o ingeniera gentica han determinado que los microorganismos, fciles de cultivar en medios artificiales y de reproduccin rpida, tomen un papel importante en este campo, principalmente como organismos productores de molculas de importancia en medicina o en el metabolismo humano, como hormonas proteicas, protenas no hormonales, vacunas y otras molculas de accin inmunolgica (interfern e interleucinas) (cuadro IX). Bsicamente, la ingeniera gentica microbiana consiste en introducir el gen que se encarga de controlar la produccin de la molcula que se pretende conseguir, y que procede de una molcula de ADN donante, en el material gentico de una bacteria, principalmente en alguno de sus plsmidos. stos, luego son aadidos a un medio de cultivo con bacterias, que los incorporan a su material gentico mediante el proceso de la transformacin. Las bacterias con estos nuevos plsmidos se reproducen, clonan el gen recibido y adquieren la capacidad de producir la molcula til, que posteriormente es recuperada del medio de cultivo. El proceso descrito anteriormente es en realidad mucho ms complejo. En primer lugar hay que proceder a aislar los plsmidos que se quieren modificar genticamente. Esto se consigue rompiendo las cubiertas bacterianas mediante mtodos qumicos o fsicos, con lo que los componentes citoplasmticos quedan libres en el medio. Centrifugando despus, mediante un gradiente de densidad de una solucin de estos componentes citoplasmticos, se puede separar la fraccin que contiene los plsmidos. A continuacin, tratando el ADN donante y las molculas de los plsmidos con enzimas endonucleasas de restriccin especficas, se producen roturas
Funcin Prevencin de la hepatitis. Prevencin de la rabia. Prevencin del clera. Prevencin del sarampin. Regula la cantidad de glucosa en la sangre. Tratamiento de la diabetes. Estimula el desarrollo celular y el crecimiento del individuo. Regula el metabolismo del calcio. Inhibicin de la replicacin intracelular de los virus. Estimulacin de los linfocitos T. Estimula la produccin de glbulos rojos.

ocumento 1

La pasteurizacin
El trmino pasteurizacin proviene del microbilogo francs Louis Pasteur, quien fue el primer cientfico que experiment con el calor para inhibir el desarrollo de los microorganismos en los alimentos. Preocupado por eliminar la presencia de microbios, pero asimismo porque los alimentos no perdieran sus caractersticas de sabor o aroma, Pasteur dise un mtodo de calentamiento suave que se hizo famoso inmediatamente en todo el mundo: la pasteurizacin. Se trata de un mtodo que no mata a todos los microbios presentes, por lo que no se puede hablar de tcnica esterilizante. El proceso de pasteurizacin ms conocido es el que se aplica a la leche. La pasteurizacin de la leche consiste en elevar rpidamente la temperatura de sta hasta 71,7 C y mantenerla en este estado durante 15 segundos, para enfriarla despus rpidamente. sta es la pasteurizacin rpida de la leche, que permite efectuarla en flujo continuo a travs de intercambiadores de calor, en grandes volmenes y en poco tiempo. Otra tcnica de pasteurizacin es la de elevar la temperatura de la leche hasta 63 C, mantener esta temperatura durante 30 minutos y luego bajarla rpidamente. La leche pasteurizada debe ser envasada inmediatamente y el producto obtenido ser mantenido a baja temperatura para retardar el crecimiento de los microorganismos que han sobrevivido al proceso de pasteurizacin. Otras bebidas y productos alimenticios, como la cerveza, el vino o el vinagre, tambin son sometidos a procesos similares de pasteurizacin.

Producto Vacuna hepatitis B Vacuna de la rabia Vacuna del clera Vacuna del sarampin Insulina Hormona del crecimiento Hormona paratiroidea CUADRO IX. Principales productos obtenidos por ingeniera gentica bacteriana. Interfern Interleucina 2 Eritropoyetina

Tipo de molcula Vacuna Vacuna Vacuna Vacuna Hormona Hormona Hormona Inmunolgica Inmunolgica Hormona

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Endonucleasa de restriccin

7. Los microorganismos y la depuracin de las aguas residuales

Las aguas resultantes del uso domstico o industrial llevan gran cantidad de sustancias qumicas txicas que es preciso eliminar o tratar antes de que se produzca el vertido al medio ambiente. En las plantas depuradoras de aguas residuales, el tratamiento secundario permite eliminar las sustancias orgnicas indeseables mediante el uso de diferentes microorganismos. stos oxidan, mediante reacciones de digestin y fermentacin, la materia orgnica del agua de desecho a molculas ms simples, como el CO2 y el metano (CH4). Este tratamiento secundario se puede realizar anaerbicamente en tanques cerrados, o bien aerbicamente en tanques abiertos en los que el agua se airea, con lo que aumenta la velocidad de biodegradacin de las molculas orgnicas. En los medios acuticos, una manera de medir aproximadamente la cantidad de materia orgnica presente es mediante la llamada demanda bioqumica de oxgeno (DBO), que es la capacidad de consumir oxgeno que tiene una masa de agua. A ms materia orgnica en el agua, ms microorganismos pueden oxidarla y, por lo tanto, hay ms consumo de oxgeno. A medida que la materia orgnica va disminuyendo, al ser degradada por los microorganismos, la DBO desciende. Una planta depuradora de aguas residuales en perfecto funcionamiento puede reducir la DBO inicial hasta en un 90 %. Las aguas residuales tratadas en la depuradora, con menos sedimento y materia orgnica y sin microorganismos patgenos, ya pueden ser vertidas a cursos de agua o al mar, donde tendrn la mnima incidencia en el medio ambiente.

ADN donante Plsmido vector ADN exgeno, pasajero o diana

Formacin de ADN recombinante

Introduccin del plsmido recombinante en bacterias

Divisin bacteriana (clonacin)

Obtencin amplificada del producto proteico codificado por el ADN diana.

13 Formacin del ADN recombinante.

similares en ambas molculas, desprendindose del ADN donante el gen que se quiere clonar. Los trozos del ADN donante que contienen el gen tienen tendencia a unirse a los plsmidos rotos, formndose nuevos plsmidos (plsmidos recombinantes) que llevan el gen del ADN donante (fig. 13). La incorporacin de los plsmidos recombinantes por transformacin en las bacterias frecuentemente requiere un tratamiento secuencial de fro y calor en una solucin de cloruro clcico (CaCl2), lo que altera la permeabilidad de la pared bacteriana y facilita la entrada de los plsmidos. A pesar de los grandes avances obtenidos en la manipulacin gentica de los microorganismos, algunos problemas an no estn solucionados. Muestra de ello son la incorrecta unin del gen en el plsmido, la inestabilidad del plsmido recombinante dentro de la bacteria, la accin de las endonucleasas que cortan el ADN en trozos demasiado pequeos y fragmentan el gen, o incluso la dificultad en recuperar y purificar el producto obtenido por la manifestacin del gen en las bacterias transformadas. El futuro de la ingeniera gentica microbiana se prev casi sin lmites, a medida que se vayan solucionando los problemas que se presentan, y contribuir al desarrollo de la salud humana, a la evolucin adecuada del medio ambiente, a la produccin de nuevos alimentos y a otros aspectos de la vida de la especie humana, de los animales y de las plantas.

CUESTIONARIO 4
1. Indica cules han sido los factores que han influido en el aumento de la produccin industrial de antibiticos. 2. Qu se entiende por microorganismos entomopatgenos? Para qu son usados? 3. Cules son los principales productos de sntesis microbiana que se pueden obtener industrialmente? 4. Qu son las enzimas endonucleasas de restriccin? 5. Describe el proceso general que se sigue para la obtencin de un producto por ingeniera gentica microbiana. 6. Qu se entiende por control microbiolgico de los alimentos? 7. Qu son los plsmidos recombinantes? 8. Cmo puede una bacteria producir la hormona del crecimiento humano? 9. Qu es la demanda bioqumica de oxgeno (DBO) y qu relacin tiene con los microorganismos?

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5 El control de los microorganismos

Aunque el conocimiento cientfico de la fisiologa microbiana es relativamente reciente, diversos mtodos de control de microorganismos han sido empleados para procesar alimentos, o en medicina, desde hace cientos de aos, incluso antes de que se sospechara la existencia de los microbios. Por ejemplo, se puede citar el secado de alimentos, la conservacin en sal y el hervido de alimentos y el tratamiento de heridas con agentes qumicos. Las sustancias que actan sobre los microorganismos se llaman agentes antimicrobianos y si actan especficamente pueden ser antivricos, antibacterianos, antifngicos o antiprotozoicos. Hay dos categoras de agentes antimicrobianos: aquellos que matan a los microbios o microbicidas y los que slo inhiben su crecimiento pero no los matan o microbiostticos. De nuevo, si estos agentes actan especficamente se habla de bactericidas, fungicidas, bacteriostticos, fungiostticos, etc. Se llama esterilizacin a la destruccin de todos los microorganismos que hay en cualquier sustrato, sea biolgico (tejidos humanos, alimentos) o no (ropa, intrumentos quirrgicos, etc.). Los agentes antimicrobianos pueden actuar a varios niveles que van desde la rotura o destruccin de las cubiertas microbianas, como la pared bacteriana o membrana celular, a la alteracin de las propiedades fsicas del citoplasma microbiano o a la inactivacin de enzimas. Los agentes antimicrobianos pertenecen a dos categoras: agentes fsicos y agentes qumicos.
% de clulas vivas 100

50 C
10

60 C
1

0,1

70 C

Tiempo

14 Mortalidad de los microorganismos en relacin con el tiempo y la temperatura. Se puede apreciar que, a medida que aumenta la temperatura, la mortalidad se acelera. Un dato utilizado frecuentemente es el tiempo de reduccin decimal (indicado con unas flechas en la grfica), que es el tiempo que, a una temperatura determinada, la poblacin microbiana alcanza una densidad diez veces menor que la inicial.

1. Los agentes antimicrobianos fsicos

La exposicin de los microbios a altas temperaturas es uno de los mtodos de esterilizacin ms utilizados. La temperatura a que se someten los microorganismos y el tiempo de la exposicin determinan el grado de la muerte microbiana (fig. 14). El tratamiento con calor hmedo produce una desnaturalizacin y una coagulacin de las protenas de los microorganismos, mientras que el calor seco ms bien origina una oxidacin de sus componentes celulares. La esterilizacin con calor hmedo suele requerir temperaturas menos elevadas y menos tiempo de exposicin que con calor seco. Por ejemplo, la bacteria Bacillus anthracis, que produce una enfermedad llamada ntrax, es destruida completamente tratndola con calor hmedo a 100 C durante 2 a 15 minutos, mientras que con calor seco es eliminada a 140 C con un tiempo de exposicin de hasta 180 minutos. No todos los microorganismos tienen la misma
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resistencia a las altas temperaturas. Los menos resistentes son los protozoos y los hongos, que normalmente mueren cuando son sometidos a 50-70 C durante 5-10 minutos. La mayora de las bacterias mueren cuando se tratan durante cierto tiempo entre 70 y 100 C. Las ms resistentes son las endosporas bacterianas. El mtodo ms utilizado y efectivo para esterilizar con calor hmedo es el autoclave (fig. 15). Otros mtodos son el tratamiento con agua en ebullicin (100 C), la pasteurizacin y la incineracin. El tratamiento con bajas temperaturas por debajo del punto de congelacin inhibe el crecimiento microbiano, por lo que es un mtodo muy utilizado para la conservacin de alimentos, de animales de experimentacin o de drogas farmacuticas. Este mtodo es simplemente bacteriosttico, puesto que no suele matar a los microorganismos. Otro mtodo de esterilizacin es el uso de diferentes radiaciones. Las radiaciones ionizantes, como los haces de electrones de alta energa, los rayos X y los rayos gamma, tienen capacidad de ionizar molculas orgnicas como las protenas y el ADN, modificando su composicin qumica. Estas radiaciones son microbicidas y adems tienen capacidad de atravesar materiales, por lo que son utilizadas para esterilizar alimentos envasados y equipamientos mdicos. La luz ultravioleta es una radiacin no ionizante que es absorbida por algunos componentes celulares como

las molculas de ADN, produciendo mutaciones o inhibiendo o alterando su duplicacin. Los rayos gamma no tienen capacidad de penetrar a travs de materiales, por lo que son utilizados para esterilizar el aire o las superficies de objetos hospitalarios. Los microorganismos que se encuentran en el aire o en lquidos son generalmente eliminados mediante el proceso de filtracin del fluido o gas en que viven. Los filtros utilizados son medios microporosos que dejan pasar el lquido o gas, pero que retienen los microorganismos. Los filtros ms sencillos utilizados son los filtros de membrana (fig. 16).

2. Los agentes antimicrobianos qumicos

Hay numerosas sustancias qumicas que inhiben el crecimiento de los microorganismos o los matan. Estos agentes antimicrobianos qumicos son utilizados en gran cantidad de lugares y situaciones como en los hospitales, en las escuelas, en los domicilios particulares, en los lugares pblicos, en las industrias. Estas sustancias qumicas estn destinadas a eliminar los

microbios tanto de sustratos biolgicos como de objetos inanimados y su accin es variada, existiendo aquellos que tienen un amplio espectro de accin contra variados microorganismos y otros cuya accin es ms especfica. Los agentes qumicos esterilizantes como el formaldehdo y el glutaraldehdo matan todas las formas microbianas de las superficies que son tratadas. Los desinfectantes matan a los microorganismos que producen enfermedades infecciosas, pero no destruyen a las esporas microbianas, y suelen ser utilizados para tratar superficies inanimadas; como ejemplo de desinfectantes tenemos los compuestos fenlicos, que se emplean en la desinfeccin de superficies, y el sulfato de cobre, que acta como alguicida en piscinas y albercas. En cambio, los antispticos son sustancias que se usan para matar o impedir el crecimiento de los microbios presentes en las heridas sufridas en la piel de animales; los antispticos ms utilizados son el etanol al 70 %, la solucin de yodo, el agua oxigenada (perxido de hidrgeno o H2O2) y los detergentes. Cada uno de estos agentes qumicos acta sobre determinadas estructuras de los microorganismos y su modo de accin es variado (fig. 17).
Indicador de presin de la cmara Vlvula Recipiente del medio a filtrar Lquido para filtrar

Corriente de aire Aire

Puerta Pinza

Manivela Cmara del autoclave Membrana del filtro Termmetro Tubo conectado en la fuente de vaco Base porosa

Regulador de presin Flujo de aire hmedo caliente Lquido esterilizado

Salida al exterior

15 Estructura de un autoclave.
ESTRUCTURAS CELULARES Pared celular bacteriana

16 Esquema de un filtro de membrana.

AGENTES ANTIMICROBIANOS QUMICOS Y MODOS DE ACTUACIN Fenol, hiploclorito sdico (causan la lisis de la pared) Fenol, alcoholes, detergentes (perforan la membrana) Hiploclorito, sales de yodo, glutaraldehdo (se combinan con grupos SH2) Glutaraldehdo (se combina con grupos NH2)

Citoplasma Ribosomas Sales de mercurio (coagulan protenas citoplasmticas)

17 Actuacin de los principales agentes antimicrobianos qumicos.

ADN o ARN

NH2

SH

Membrana plasmtica

375

6 Los microorganismos y los ciclos biogeoqumicos

La materia que ha existido en la Tierra, desde su formacin, ha sido prcticamente la misma, ya que se recibe poca materia procedente del universo y adems tampoco se pierde mucha hacia el espacio exterior. Segn la ley de la conservacin de la materia, sta no se crea ni se destruye, pero s est en constante transformacin debido a los fenmenos fisicoqumicos que se llevan a cabo en la Tierra y a la accin de los seres vivos. Muchos de los elementos qumicos que componen los materiales terrestres estn sometidos a unos circuitos cclicos que consisten, bsicamente, en que pasan de formar parte de materia inorgnica inerte a formar parte de materia constitutiva de seres vivos y de stos, posteriormente, de nuevo a materia inorgnica inerte, cerrndose el ciclo. Estos ciclos de la materia son los ciclos biogeoqumicos. El papel de los microorganismos en los ciclos biogeoqumicos es vital, puesto que slo ellos son capaces de realizar la funcin de descomposicin de la materia orgnica compleja muerta (cadveres de animales y restos de vegetales) en materia orgnica sencilla y, posteriormente, la transformacin de sta en materia inorgnica (mineralizacin). La mineralizacin que efectan los microorganismos permite, por un lado, incorporar materia inerte a la biosfera impidiendo que sta se vaya agotando y, por otro lado, pone a disposicin de los organismos vegetales materia inorgnica utilizable. A continuacin se estudiarn los ciclos biogeoqumicos de los principales elementos qumicos constitutivos de la materia orgnica y el papel que desempean los microorganismos. Los microorganismos y el ciclo del carbono. El carbono es el tomo ms abundante e importante de la materia viva, constituyendo el esqueleto de la mayora de las biomolculas simples (monosacridos, cidos grasos, aminocidos y nucletidos) y complejas. Los microorganismos fottrofos (bastantes bacterias y todas las algas microscpicas) captan el CO2 atmosfrico y fijan el carbono a molculas orgnicas (CH2O) en presencia de la luz (fotosntesis); sin embargo, los organismos fotosintticos tambin respiran, por lo que degradan materia orgnica y desprenden CO2 de nuevo a la atmsfera (fig. 18). Este proceso se resume en la siguiente reaccin: (CH2O) O2 CO2 H2O
respiracin fotosntesis

Muchas bacterias, las bacterias descomponedoras, efectan reacciones de descomposicin de la materia orgnica, mediante fermentacin butrica (Bacillus amilobacter y Clostridium butiricum), en la que se descomponen restos vegetales, o la fermentacin ptrida (Bacterium linens, Clostridium sporogenes), en la que se descompone materia orgnica de tipo proteico o aminoacdico. Ciertos hongos basidiomicetes, los denominados hongos de la putrefaccin de la madera, son tambin capaces de descomponer restos vegetales, al utilizar la celulosa y la lignina de estos restos como fuente de carbono y energa. Como productos de estas descomposiciones se producen, adems de sustancias orgnicas malolientes, dos compuestos de carbono, el CO2 y el metano (CH4). El metano es producido slo por arqueobacterias anaerbicas, llamadas metangenas, a partir de diversos sustratos, como se puede observar en las reacciones que siguen: CO2 (dixido de carbono) 4H2 5 CH4 2H2O 4 CH3OH (metanol) 5 3 CH4 CO2 2O CH3COOH (cido actico) 5 CH4 CO2. Las arqueobacterias metangenas viven en ambientes anaerobios como los fangos de los pantanos, las cinagas y los sedimentos marinos de profundidad. Algunas de ellas se han adaptado a vivir como endosimbiontes dentro de protozoos o bien en el interior de los tubos digestivos de animales como el estmago de los mamferos rumiantes. Otras bacterias tienen capacidad de oxidar el metano al estado de CO2. Al formarse ste, se incorpora a los gases de la atmsfera y se cierra el ciclo. Los microorganismos y el ciclo del azufre. El azufre (S) es un tomo que se encuentra en numerosas rocas y sedimentos de la Tierra en forma de minerales de sulfato (SO2 4 ), como el yeso, o en forma de minerales de sulfuro (S2), como la pirita. En los seres vivos, el azufre es uno de los bioelementos primarios, al entrar en la composicin de algunas molculas orgnicas como ciertos heteropolisacridos y aminocidos. Las bacterias tienen un papel muy importante en la transformacin de los compuestos de azufre. Las bacterias oxidantes del azufre como Thiobacillus, oxidan el azufre elemental o los sulfuros, produciendo sulfatos y obteniendo con ello energa para sus procesos vitales. Otras bacterias,

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Bacterias oxidantes del metano

ATMSFERA CO2 RESPIRACIN Microorganismos aerobios y anaerobios FERMENTACIN (CH2)n MATERIA ORGNICA Microorganismos anaerobios

METANO

CH4

FOTOSNTESIS Bacterias fotosintticas Algas microscpicas

Arqueobacterias metangenas

18 Esquema de la funcin de los microorganismos en el ciclo del carbono.

las reductoras de sulfatos, como Desulfovibrio, efectan reacciones anaerbicas, inversas a las anteriores, utilizando los sulfatos como molculas aceptoras de electrones, con lo que los transforman en sulfuros; las bacterias reductoras de sulfatos son abundantes en medios acuticos con abundante materia orgnica en descomposicin y sulfatos disueltos. Los sulfatos presentes en el medio pueden ser utilizados por muchos seres vivos y, al ser reducidos a sulfuro de hidrgeno (H2S), el azufre puede ser incorporado a molculas orgnicas como aminocidos. Los microorganismos y el ciclo del hierro. En la materia mineral, el hierro (Fe) se encuentra en forma de compuestos ferrosos (Fe2; como la pirita y la limonita) o frricos (Fe3; como el oligisto). En los seres vivos, el hierro forma parte de algunas molculas orgnicas como la hemoglobina de la sangre y los citocromos de la cadena respiratoria. Diferentes bacterias que viven en medios pantanosos con lodos sometidos a ambientes anaerbicos son capaces de reducir los minerales del hierro en estado frrico a estado ferroso. ste es ms soluble que el hierro en estado frrico, por lo que esta reduccin contribuye a movilizar el hierro, que tiende a acumularse en estado frrico en el fondo de cinagas y pantanos, y lo pone a disposicin de otros seres vivos. La bacteria Thiobacillus ferrooxidans es una de las bacterias capaces de oxidar compuestos de hierro en estado ferroso y transformarlos en estado frrico en un medio cido, con lo que obtiene energa para su metabolismo. Este tipo de oxidacin bacteriana es muy comn en zonas contaminadas con vertidos cidos, como ocurre en las inmediaciones de las minas de carbn y otros minerales.

Los microorganismos y el ciclo del nitrgeno. En los seres vivos, el nitrgeno es un elemento imprescindible para la formacin de los aminocidos y de los nucletidos. En la naturaleza, el nitrgeno est a disposicin de los seres vivos en forma de nitratos (NO 3 ) en los suelos y en el agua, y en forma gaseosa de N2 en la atmsfera. Cuando mueren los animales o las plantas, las bacterias descomponedoras, mediante fermentaciones ptridas, degradan sus compuestos orgnicos nitrogenados, como las protenas, y producen amoniaco (NH3). Los animales vivos excretan constantemente al medio varios tipos de sustancias de desecho que contienen nitrgeno, como urea y cido rico. Los mismos microorganismos descomponedores transforman estos productos nitrogenados en amoniaco. La accin de los microorganismos descomponedores va enriqueciendo los suelos con amoniaco, lo que se denomina amonificacin. Las bacterias nitrificantes del suelo desarrollan el proceso de nitrificacin, oxidando aerbicamente el amoniaco. Este proceso ocurre en dos pasos: primero las bacterias del gnero Nitrosomonas transforman el amoniaco en nitrito (NO 2 ) o nitrosacin, y luego las bacterias del gnero Nitrobacter transforman el nitrito en nitrato (NO 3 ) o nitratacin. Los nitratos del suelo ya pueden ser absorbidos por las plantas para incorporarlos a molculas orgnicas. Otras bacterias, como las del gnero Pseudomonas, realizan anaerbicamente un proceso inverso al de la nitrificacin, ya que transforman los nitratos en N2 gaseoso, que se incorpora a la atmsfera; a esta transformacin se la llama desnitrificacin (fig. 19). Aunque el 79 % de la atmsfera est formado por N2, slo algunas bacterias de los gneros Azotobacter, Clostridium y Rhizobium y algunas
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 cianobacterias (Anabaena, Nostoc) son capaces de aprovecharlo. Estas bacterias convierten el N2 en molculas de amoniaco (NH3), en el proceso denominado fijacin del nitrgeno (N2 6 H 6 e 5 2 NH3), por lo que se las llama bacterias fijadoras de nitrgeno. Los microorganismos y la degradacin de los hidrocarburos. Algunos microorganismos como bacterias, levaduras y mohos son capaces de utilizar los hidrocarburos como fuente de materia orgnica para su metabolismo. La oxidacin de los hidrocarburos por estos microorganismos debe efectuarse en ambiente aerbico; los vertidos de hidrocarburos domsticos o los de accidentes de petroleros que forman una capa en la superficie del mar son rpidamente atacados por estos microorganismos, que se adhieren a las microgotas

de hidrocarburos y los van degradando a CO2. En cambio, los hidrocarburos que descienden y se acumulan en sedimentos marinos anaerbicos o de profundidad se ven libres de este ataque microbiano y pueden quedar inalterados durante millones de aos. Esta propiedad de degradacin de los hidrocarburos por parte de microorganismos se est aplicando recientemente para contrarrestar los derrames de crudos al mar por petroleros accidentados. La utilizacin de bacterias para eliminar los hidrocarburos se ha denominado biorremedio y se efecta para complementar los trabajos de tipo mecnico de la limpieza de los crudos; la adicin de nutrientes inorgnicos como fsforo y nitrgeno, en la lucha biolgica contra los hidrocarburos, produce un aumento significativo en la velocidad de su degradacin por parte de las bacterias.

19 Los microorganismos en el ciclo del nitrgeno.

ATMSFERA RESTOS NITROGENADOS DE SERES VIVOS Microorganismos descomponedores
NO2

N2 Bacterias fijadoras de nitrgeno NH3 DESNITRIFICACIN Bacterias desnitrificantes

NITRIFICACIN Bacterias nitrificantes

NO3

ASIMILACIN POR LAS PLANTAS

ocumento 2
CUESTIONARIO 5
1. Cul es la diferencia entre desinfectante y antisptico? Cita algunos de ellos. 2. Para qu se utiliza la autoclave? De qu tipo de aparato antimicrobiano se trata? 3. Diferencia entre agente microbiano, microbicida y microbiosttico. Cita algn ejemplo de cada tipo. 4. Por qu el tratamiento con calor hmedo es ms efectivo que con calor seco? 5. En qu se diferencian los rayos gamma y la luz ultravioleta como agentes esterilizadores? 6. Indica los lugares y modos de accin de los siguientes agentes antimicrobianos: fenol, alcohol etlico, solucin de yodo, rayos ultravioleta, calor hmedo, glutaraldehdo. 7. Indica qu ocurrira en los ecosistemas terrestres si desaparecieran las bacterias que estn relacionadas con el ciclo del nitrgeno. Podran seguir funcionando? 8. Qu son los ndulos radicales de las leguminosas?

Los ndulos radiculares de las leguminosas

Algunas plantas como las leguminosas (alfalfa, juda, guisante, trbol, habas, etc.) poseen unos abultamientos en sus races denominados ndulos radiculares. En estos ndulos se encuentran grandes cantidades de bacterias del gnero Rhizobium. La estrecha asociacin simbitica de la planta con las bacterias permite a stas fijar el nitrgeno atmosfrico, fenmeno que no podran realizar separadas de la planta. Parte del nitrgeno fijado por las bacterias es cedido a la planta en forma de componentes nitrogenados solubles, que son empleados en el metabolismo, y parte pasa al suelo, con lo que ste se enriquece de componentes nitrogenados. Se ha calculado que las bacterias de los ndulos de las leguminosas pueden fijar anualmente de 50 a 100 kg de nitrgeno atmosfrico en una hectrea de terreno, mientras que las bacterias libres del suelo slo pueden fijar hasta 12 kg.

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Actividades
Conceptos
1. Medicin de la actividad antimicrobiana de los antibiticos. El efecto de los antibiticos sobre los microorganismos se calcula efectuando sencillas pruebas de laboratorio. Una de ellas es el mtodo de difusin en agar-agar. Prepara un medio de cultivo con agar-agar tal como se indic en el tema anterior e inocula en l un tipo de bacterias del aire de las que aparecieron en la prctica del tema anterior. Deja que estas bacterias colonicen el medio de cultivo uniformemente. Consigue pequeas cantidades de diferentes antibiticos (te pueden servir viales de antibiticos no utilizados) y recorta discos de cartulina de 1 cm de dimetro. Impregna los discos con los diferentes antibiticos y coloca los discos bien separados, y etiquetados para identificar el antibitico que llevan, sobre el medio de cultivo bacteriano. Djalos as durante uno o dos das y observa lo que ha pasado en el cultivo bacteriano. Puedes interpretar lo que ha ocurrido? Qu se forma alrededor de cada disco? Puedes deducir cul es el mejor antibitico para contrarrestar a esa bacteria? Si en tu escuela no tienes medios para realizar esta prctica, observa el dibujo, que corresponde a una prueba antimicrobiana idealizada, y contesta a las mismas preguntas que anteriormente.
Halos de inhibicin

2. Relaciona los siguientes conceptos de las dos columnas. Anopheles calor hmedo enfermedad venrea agua oxigenada vino rayos gamma Streptococcus pyogenes tetraciclina plsmido recombinante neurotoxina autoclave hialuronidasa malaria ingeniera gentica Clostridium botulinum antisptico antibitico radiacin ionizante gonorrea Saccharomyces

3. Relaciona los siguientes microorganismos con las enfermedades que producen y el tipo de transmisin: Microorganismo Paramixovirus Treponema pallidum Trypanosoma brucei Rhabdovirus Poliovirus Trichomonas vaginalis hongo dermatfito Vibrio cholerae Flavivirus Mycobacterium tuberculosis
PRUEBA DE LA DILUCIN EN TUBOS

Enfermedad poliomielitis tricomoniasis pie de atleta paperas enfermedad del sueo sfilis tuberculosis rabia clera fiebre amarilla
Primer tubo con lquido limpio

Transmisin heridas alimentos piel Aedes aegypti sexual agua contaminada mosca tse-tse aire

P E C N T

Concentracin mnima inhibitoria

P E T N C Penicilina Estreptomicina Tetraciclina Neomicina Cloramfenicol

ANTIBIOGRAMA

La concentracin mnima de antibitico que es capaz de inhibir el crecimiento bacteriano se calcula mediante otra prueba denominada tcnica de concentracin en tubos. En esta prueba se preparan soluciones de concentraciones crecientes del antibitico en tubos de ensayo y posteriormente se inocula en los tubos a la bacteria que se quiere probar. En los tubos con concentracin pequea de antibitico las bacterias crecern, lo que se podr observar por el enturbiamiento del lquido. A partir de determinada concentracin de antibitico, las bacterias no crecern y el lquido de los tubos se mantendr transparente. A la concentracin mnima de antibitico en la que no crecen las bacterias se la llama concentracin inhibitoria mnima (CIM).

Disminucin de la turbidez Aumento de concentracin del antibitico

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23

El proceso inmunitario

N D I C E
INFORMACIN 1 La defensa del organismo frente a los cuerpos extraos.
Las barreras primarias. Las barreras secundarias.

2 La inmunidad.
La inmunidad natural. La inmunidad artificial.

3 El sistema inmunitario.
Los linfocitos. Las clulas presentadoras de antgenos. Los rganos linfoides. Los antgenos. Los anticuerpos.

Epidemia de peste pulmonar en la India. Hospital de enfermedades infecciosas de Nueva Delhi.

4 Mecanismos de accin del sistema inmune.

La respuesta inmune. La reaccin antgeno-anticuerpo. El sistema del complemento.

ACTIVIDADES

En la lucha por la existencia, los organismos estn expuestos a una legin de invasores que no se ven a simple vista y que en ocasiones son ms peligrosos que los animales a los que sirven de alimento, puesto que actan desde dentro y van matando lentamente: son los microorganismos como los virus, las bacterias, los protozoos y los hongos o las molculas txicas producidas por ellos. Para impedir los efectos txicos de los microorganismos o de sus molculas, los animales han desarrollado a lo largo de la evolucin una serie de mecanismos de defensa. Aunque los invertebrados tienen tambin sistemas de defensa, stos son muy primitivos y es en los vertebrados donde podemos encontrar los mecanismos ms sofisticados, como los que representa el denominado sistema inmunitario.

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1 La defensa del organismo frente a los cuerpos extraos

1. Las barreras primarias
Para invadir el cuerpo de los animales, los microbios deben atravesar su piel o bien penetrar por alguno de sus orificios naturales. La piel de los mamferos es una barrera mecnica casi infranqueable para los microorganismos gracias a su grosor y al proceso de queratinizacin y descamacin de sus capas celulares ms externas. Adems, la secrecin de las glndulas sebceas y el sudor determinan la existencia de un pH algo cido que resulta perjudicial para la supervivencia de microbios. Por aadido, la flora bacteriana de nuestra piel impide el asentamiento y desarrollo de otros microbios que se depositan sobre ella. No obstante, la piel puede ser traspasada fcilmente por los microorganismos a travs de lesiones en ella, como las producidas por las heridas. Otros vertebrados, como los peces y los reptiles, tienen escamas en la piel que la hacen, si cabe, an ms infranqueable. La presencia de pelos (mamferos) o de plumas (aves) en la epidermis de los vertebrados puede dificultar tambin la invasin de microorganismos. En las aberturas naturales de los animales como la boca, el ano, las fosas nasales, las vas respiratorias, urogenitales y digestivas, las barreras defensivas son las secreciones mucosas que recubren los epitelios. En la saliva, en la secrecin lacrimal y en la secrecin nasal existe una enzima, la lisozima, que es capaz de destruir la capa de murena de la pared bacteriana; en el esperma se encuentra la espermina, de accin bactericida. Las secreciones cidas del epitelio vaginal y de los conductos digestivos como el estmago contribuyen a formar un ambiente desfavorable para la vida y proliferacin de los microorganismos. En las mucosas respiratorias, los microbios y las partculas extraas que quedan atrapados en el mucus son eliminados mediante el movimiento ciliar de las clulas epiteliales, por la tos y por el estornudo. Tambin la flora bacteriana propia del tubo digestivo de cada animal contribuye a impedir la proliferacin de microorganismos patgenos mediante un proceso de antagonismo, compitiendo por los nutrientes o liberando sustancias inhibitorias. La piel y todas estas secreciones de las aberturas o conductos de los animales reciben el nombre de barreras defensivas primarias (fig. 1).
1 Estructura esquemtica de las barreras defensivas primarias de los animales.

Pelo Descamacin Sudor Cilios cidos grasos cidos grasos

Mucus EPIDERMIS Glndula sudorpara Pulmones Mucus

Boca

Glndula sebcea

Estmago Secrecin cida Mucus Flora intestinal

2. Las barreras secundarias

Cuando los microbios logran vencer las dificultades que representa atravesar estas barreras primarias y penetran en el interior de los animales, se pone en marcha en stos el mecanismo de defensa fagoctica. Entre las clulas sanguneas de los vertebrados superiores se encuentran varios tipos de leucocitos con capacidad fagocitaria, como los monocitos y los neutrfilos (fig. 2).

Los monocitos (2-8 % del total de leucocitos), despus de permanecer varios das en el torrente sanguneo, migran a diferentes tejidos u rganos (tejido conjuntivo, sinusoides hepticas, bazo, pulmones, mdula sea, ganglios linfticos) y se transforman en clulas ms grandes y con mayor capacidad fagoctica, los denominados macrfagos. El conjunto de macrfagos recibe el nombre de sistema retculoendotelial.
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Ncleo

Retculo endoplasmtico rugoso

Pseudpodos Vacuola fagoctica Mitocondrias

Ncleo lobulado

Golgi

Golgi

Vesculas Lisosomas MONOCITO Nuclolo MACRFAGO Lisosomas NEUTRFILO

Grnulos

2 Estructura de los monocitos, macrfagos y neutrfilos.

Los neutrfilos o micrfagos (50-70 % del total de leucocitos) se encuentran en gran nmero en el torrente sanguneo y tienen una vida media mucho ms corta que los macrfagos. Las sustancias qumicas que liberan los tejidos infectados por los microbios atraen quimiotcticamente a los neutrfilos que son capaces de salir de los vasos sanguneos (mecanismo de diapdesis) gracias a su movimiento ameboide. El proceso de la fagocitosis, bien sea por macrfagos como por micrfagos, es un tipo de endocitosis que comporta el englobamiento de microorganismos en vacuolas fagocticas, la incorporacin de las enzimas hidrolticas de los lisosomas a estas vacuolas (fagolisosomas) y la destruccin de los microorganismos fagocitados, as como el aprovechamiento de las biomolculas producidas en este proceso. Para facilitar el proceso fagoctico se produce en el cuerpo

de los animales una serie de fenmenos entre los que destaca la dilatacin de los vasos sanguneos locales (con lo que llega ms sangre y, por tanto, ms leucocitos a la zona infectada) y el aumento de la permeabilidad vascular, lo que facilita la salida de plasma y de clulas sanguneas: es la denominada respuesta inflamatoria. La ltima barrera defensiva de los animales ante el ataque de microorganismos, una vez superada la barrera fagoctica, es el sistema inmunitario, constituido por sustancias qumicas orgnicas, los anticuerpos, y por clulas especiales que se encargan de reconocer especficamente a microorganismos y molculas extraas, de unirse a ellos y facilitar su destruccin. Las clulas fagocticas sanguneas y el sistema inmunitario constituyen una barrera defensiva secundaria que acta ya en el interior del animal.

La inmunidad

El concepto de inmunidad hace referencia al hecho de ser invulnerable a determinada enfermedad infecciosa. Desde hace tiempo se saba que personas que haban superado con xito alguna infeccin, muy raramente volvan a enfermar de la misma dolencia, es decir, eran inmunes a esa enfermedad. La Inmunologa es la ciencia que se encarga de estudiar todo lo relacionado con la inmunidad a las infecciones, es decir, el sistema inmunitario. La principal caracterstica de la inmunidad es que es especfica. As, por ejemplo, una persona que ha pasado la varicela es inmune a esta enfermedad pero no a otras como el tifus o la rabia.
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Adems, la inmunidad a determinada enfermedad infecciosa tiene memoria en el animal, puesto que perdura un cierto tiempo, que puede ser desde slo unos das a toda la vida. No hay que confundir la inmunidad con la simple resistencia a las enfermedades en la que los animales no discriminan a los diferentes microbios y que tampoco perdura en el tiempo.

1. La inmunidad natural
Los animales adquieren inmunidad de manera natural cuando, al verse expuestos a una invasin microbiana, su sistema inmunolgico empieza a actuar produciendo anticuerpos especficos contra esos microbios. Si se vence a la invasin microbiana, como los anticuerpos permanecen durante un tiempo en la sangre, durante este tiempo el animal est inmunizado

contra esos microbios. Como son los propios mecanismos inmunolgicos del animal los que han logrado la inmunidad, se dice que sta es activa. El feto de los mamferos tambin puede adquirir inmunidad natural mientras est en el tero materno, puesto que a travs de la placenta recibe constantemente los anticuerpos que hay en la sangre de la madre. De esta manera, las cras de los mamferos consiguen una inmunidad de tipo pasivo hasta que sus mecanismos inmunolgicos se desarrollan completamente.

mielitis y el tifus. Las vacunas son preventivas y no curativas, ya que producen sus efectos tras unos das en que el organismo fabrica los anticuerpos. Son efectos bastante duraderos, pues esos anticuerpos se continan produciendo durante cierto tiempo. La sueroterapia confiere tambin inmunidad artificial al organismo. La sueroterapia consiste en tratar al paciente aquejado de una enfermedad infecciosa con anticuerpos especficos de los antgenos. Estos anticuerpos pueden obtenerse mediante tcnicas de clonacin a partir de linfocitos capaces de producirlos (anticuerpos monoclonales), o a partir de suero de caballo previamente vacunado con el antgeno. Este ltimo mtodo presenta el peligro de introducir sustancias no deseadas. La sueroterapia se utiliza con fines curativos en individuos ya enfermos, obtenindose una inmunidad artificial pasiva de duracin limitada. Existen sueros contra enfermedades infecciosas como la escarlatina, el botulismo y el ttanos, as como contra diversos venenos de serpientes.
CUESTIONARIO 1
1. Qu es el sistema retculoendotelial? 2. Qu se entiende por diapdesis? Qu clulas tienen esta capacidad y qu ventaja tiene? 3. Qu diferencia hay entre los monocitos y los neutrfilos? Cmo actan en la defensa del organismo? 4. Qu es la respuesta inflamatoria? 5. Cules son las dos principales caractersticas de la inmunidad? 6. Diferencia claramente entre vacunacin y sueroterapia. Qu tipos de inmunidad se obtienen con cada uno de estos mecanismos?

2. La inmunidad artificial
La inmunidad tambin puede adquirirse artificialmente mediante el uso de tcnicas ajenas al organismo. El mdico ingls Edward Jenner, a finales del siglo XVIII, consigui que personas sanas fueran inmunes a la viruela, una enfermedad infecciosa que causaba mortandades de hasta el 50 % de las personas afectadas. El mtodo que us fue inyectar a personas extractos de pstulas de vacas enfermas de cow-pox, una enfermedad muy parecida a la viruela humana. Las personas inyectadas nunca padecieron la viruela. Jenner invent de esta manera el mtodo de la vacunacin (obviamente, vacuna viene de vaca). Ahora sabemos que la vacunacin consiste en inyectar microbios muertos o atenuados de la enfermedad que se quiere prevenir, que en la persona ponen en activacin el sistema inmunitario formndose anticuerpos especficos y generando as inmunidad de tipo activo. Actualmente se dispone de vacunas contra gran nmero de enfermedades infecciosas como el clera, la tuberculosis, la difteria, el ttanos, la viruela, el sarampin, la meningitis, la rabia, la polio-

El sistema inmunitario

El conjunto de clulas y de molculas implicadas en los procesos de inmunizacin forma el llamado sistema inmunitario. La caracterstica ms importante de este sistema es su capacidad de reconocimiento de molculas extraas al organismo, lo que provoca el desencadenamiento de una serie de procesos celulares y moleculares que conducen a la neutralizacin o destruccin de esas molculas extraas. Tiene una extraordinaria importancia en la defensa del organismo ante infecciones microbianas y ante desrdenes celulares patolgicos como los tumores. Todas las molculas que son capaces de activar el sistema inmunitario reciben el nombre de antgenos. En principio, cualquier macromolcula ajena al

organismo es reconocida por el sistema inmunitario, que desencadena una respuesta inmunolgica. Estas respuestas pueden ser de dos tipos: respuestas propiciadas por clulas (inmunidad celular) y respuestas producidas por molculas llamadas anticuerpos (inmunidad humoral). Ambos tipos de respuesta estn relacionadas con las clulas sanguneas llamadas linfocitos. Los rganos linfoides son todos aquellos donde se forman, se transforman o se acumulan los linfocitos (fig. 3).

1. Los linfocitos
Los linfocitos (20-40 % del total de glbulos blancos) son clulas que se encuentran en la sangre y en la linfa, tienen el ncleo grande y redondeado y escaso citoplasma. Se denominan clulas inmunocompetentes porque son la base de los dos tipos de inmunidad, la humoral y la celular. Los linfocitos
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proceden de clulas madre hematopoyticas pluripotenciales, puesto que darn origen a los eritrocitos, a los diferentes tipos de leucocitos y a las plaquetas. En el adulto, estas clulas madre se encuentran en la mdula sea roja de los huesos. Los linfocitos producidos por ellas maduran en el timo o en la propia mdula sea. Existen dos tipos de linfocitos: los linfocitos B y los linfocitos T (cuadro I). Los linfocitos B se forman en la mdula sea en los mamferos, mientras que en las aves maduran en la bolsa de Fabricio. Son los responsables de la denominada inmunidad humoral. Estos linfocitos tienen protenas (anticuerpos de superficie) en la superficie externa de su membrana plasmtica que son capaces de reaccionar con antgenos especficos de microorganismos; los linfocitos B, al activarse ante el contacto con un antgeno, se convierten en clulas plasmticas, algo ms grandes y con un retculo endoplasmtico desarrollado, que se encargan de producir anticuerpos libres especficos (fig. 4). Los linfocitos T maduran en el timo y no son capaces de producir anticuerpos libres. No obstante, disponen, en la superficie de su membrana, de receptores capaces de reconocer antgenos de la superficie externa de otras clulas. Los receptores de las clulas T son macromolculas constituidas por dos cadenas proteicas unidas de manera no covalente a protenas de superficie de la membrana plasmtica (complejo CD3). Los receptores de los linfocitos T slo tienen un lugar de reconocimiento de antgenos. Las protenas del complejo CD3 son importantes, puesto que son las que transmiten al interior del linfocito T la informacin de la interaccin de los

antgenos a los receptores T. Los linfocitos T son los que intervienen en la inmunidad de tipo celular. Los linfocitos T pueden producir diferentes tipos de respuesta inmunitaria, lo que se debe a la existencia de tres tipos de ellos: Los linfocitos citotxicos destruyen a las clulas infectadas por virus antes de que stos proliferen en su interior. Los linfocitos T colaboradores se encargan de activar a los linfocitos B y de iniciar la proliferacin de los linfocitos T mediante la secrecin de unas molculas llamadas interleucinas; la accin de los linfocitos colaboradores no acaba aqu, puesto que tambin son capaces de activar a los macrfagos sanguneos aumentado su capacidad de fagocitosis, accin que desempean gracias a la secrecin de otra interleucina denominada interfern. Un ltimo tipo de clulas T, llamadas supresoras, inhibe la actividad de las clulas colaboradoras e indirectamente provoca que cese la produccin de anticuerpos. Un tipo particular de clulas de tipo linfocitario son las clulas asesinas (o clulas NK, del ingls natural killer). Estas clulas, que se encuentran normalmente en la sangre de los vertebrados, se encargan de destruir algunos tipos de clulas cancerosas o bien clulas infectadas por virus, pero siempre de manera muy poco especfica, desconocindose hasta el momento la manera como estas clulas discriminan entre clulas normales y anormales del organismo.

3 Funcionamiento esquemtico de la inmunidad humoral y celular.

INMUNIDAD HUMORAL
Anticuerpo de superficie Antgenos Linfocito B Clula plasmtica Produccin de anticuerpos

Proliferacin, maduracin

Virus

Bacterias

INMUNIDAD CELULAR

Receptor

Molculas Hongos Protozoos extraas Antgenos

Receptores especficos Microorganismo Destruccin

Maduracin, proliferacin Linfocito T Linfocito citotxico

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LINFOCITOS T y B Linfocitos T Linfocitos B

RGANOS QUE LOS POSEEN Y PROPORCIN EN QUE SE ENCUENTRAN Linfocitos T Linfocitos B

Se originan en el timo. No producen anticuerpos. Intervienen en la inmunidad celular. Se inactivan difcilmente con los rayos X.

Se originan en la bolsa de Fabricio o en la mdula sea roja. Producen anticuerpos. No intervienen en la inmunidad celular. Se inactivan muy fcilmente con los rayos X.

Sangre Linfa Bazo Ganglios linfticos

85 % 90 % 65 % 85 %

15 % 10 % 35 % 15 %

CUADRO I. Diferencias esenciales entre los linfocitos B y los T.

Retculo endoplasmtico rugoso (muy desarrollado, para la sntesis de las cadenas proteicas de los anticuerpos)

Nuclolo

Grnulos Aparato de Golgi

Aparato de Golgi

Centrolo

Ribosomas Retculo endoplasmtico rugoso LINFOCITO INDIFERENCIADO Heterocromatina (disposicin en rueda de carro)

CLULA PLASMTICA 12-16 DE DIMETRO

4 Diferencia entre un linfocito indiferenciado y una clula plasmtica.

2. Las clulas presentadoras de antgenos

Se conocen con este nombre diferentes tipos de clulas como los macrfagos sanguneos, las clulas dendrticas de los rganos linfoides y las clulas de Langerhans de la piel que son capaces de activar a los linfocitos T al presentarles molculas de antgenos unidas a macromolculas de su membrana. El mecanismo de presentacin de los antgenos a los linfocitos T parece ser que funciona as: las clulas presentadoras son capaces de captar molculas de antgeno solubles y de hacerlos entrar en su interior mediante endocitosis. A los endosomas formados se aaden las molculas hidrolticas de los lisosomas que se encargan de degradar las protenas del antgenos y transformarlas en pptidos ms sencillos. Parte de estos pptidos finalmente va a parar a la membrana plasmtica, donde son asociados a las protenas MHC, denominadas tambin complejo principal de histocompatibilidad. Los pptidos de origen antignico quedan as expuestos al exterior de las clulas presentadoras. La presentacin de pptidos antignicos por parte de estas clulas determina que algunos linfocitos T colaboradores reconozcan a estos pptidos gracias a

NH2 H2N

NH2 NH2

Antgeno IgD

HOOC

COOH EXT

Linfocito B

Receptor de linfocito B HOOCCOOH Membrana INT 2 cadenas NH2 NH2 polipeptdicas ( y ) EXT Receptor Membrana de linfocito T HOOCCOOH INT

Linfocito T

5 Receptores de superficie de linfocitos B y T.

sus receptores de membrana, que se unen especficamente a los antgenos presentados. Este reconocimiento de antgenos, por parte de linfocitos T colaboradores, provoca que stos queden activados. La secrecin de interleucinas por parte de estos linfocitos T activados estimula la proliferacin de linfocitos T y la conversin de linfocitos B en clulas plasmticas productoras de anticuerpos (fig. 6).
Se ha calculado que en el cuerpo humano puede haber un total de 2 1012 linfocitos, lo que equivale a un volumen celular equivalente al del cerebro o al del hgado.

385

Protena MHC

Clula presentadora de antgeno

Linfocito B Antgeno (endocitosis) Protena MHC Pptido

Antgeno Anticuerpo de superficie

Pptido antignico Receptor de la clula T Endosoma

Linfocitos B activados (clulas plasmticas)

Secrecin de interleucinas Linfocito T Linfocitos T activados

Secrecin de anticuerpos libres

6 Funcin de las clulas presentadoras de antgenos en la respuesta inmonolgica. Estas clulas captan antgenos disueltos mediante endocitosis y los degradan en pptidos ms sencillos que posteriormente van a parar al exterior de la membrana asociados a las protenas MHC. Estos pptidos antignicos son reconocidos por los receptores de los linfocitos T colaboradores, que quedan activados, lo que provoca su proliferacin y la maduracin de los linfocitos B para producir anticuerpos.

3. Los rganos linfoides

Reciben este nombre todos aquellos rganos relacionados con la formacin, maduracin o acumulacin de linfocitos. Son rganos linfticos primarios aquellos en los que se produce la maduracin definitiva de los linfocitos, como la mdula sea roja, el timo o la bolsa de Fabricio de las aves. En cambio, el bazo, los ganglios linfticos y el tejido linfoide difuso o con folculos linfticos son los rganos linfoides secundarios, porque es en ellos donde los linfocitos desempean su funcin reaccionando contra antgenos especficos (fig. 7). La mdula sea roja se encuentra en el adulto en el interior de los huesos planos como los que forman el crneo, de los huesos cortos como las costillas y de las epfisis o cabezas de los huesos largos. En la mdula sea roja se encuentran las clulas madre, precursoras de los linfocitos. Estas clulas madre pueden madurar en la propia mdula sea, con lo que se transforman en linfocitos B, o salen de la mdula sea y migran al timo donde se transforman en linfocitos T. La bolsa de Fabricio es una estructura linfoide que se encuentra nicamente en las aves, asociada a la cloaca. En la bolsa de Fabricio maduran clulas madre hematopoyticas que migran desde la mdula sea roja y se transforman en linfocitos B. El timo, que es un rgano algo atrofiado en el adulto, es extremadamente importante para el desarrollo de los linfocitos T. Algunas clulas madre hematopoyticas de la mdula sea mi386

gran al timo y en l se transforman en linfocitos T. stos, en el mismo timo, son sometidos a una intensa seleccin que provoca que el 95 % de ellos sea eliminado; el 5 % restante migra a los rganos linfoides secundarios donde acaban de transformarse en linfocitos T. El bazo es un rgano de unos 200 gramos de peso en la especie humana y que se encarga de filtrar la sangre, pues en l se eliminan eritrocitos y leucocitos defectuosos. Adems, en el bazo hay zonas ricas en linfocitos B y zonas ricas en linfocitos T separadas. Estos linfocitos responden muy bien ante la presencia de antgenos extraos en la sangre. La misin de los ganglios linfticos es similar a la del bazo; se encargan de filtrar la linfa gracias a la accin de clulas macrofagocitarias que hay en su interior. En la especie humana, los ganglios linfticos tienden a concentrarse en los capilares linfticos de las ingles, axilas, zona cervical y subclavicular. Su inflamacin es indicio de la existencia de una infeccin microbiana y de la accin del aparato inmunolgico (fig. 8). En diferentes partes del cuerpo se encuentran linfocitos, clulas plasmticas y fagocitos aislados de manera difusa o formando agregados denominados folculos linfticos. Suelen estar asociados con el epitelio de revestimiento de cavidades internas, por lo que se denominan estructuras linfoepiteliales. Las ms importantes de estas estructuras son las amgdalas, el apndice y las placas de Peyer (en relacin con el intestino delgado). En estas estructuras linfoepiteliales se acumulan clulas inmunocompetentes.

Adenoides Timo Amgdalas Ganglios linfticos Bazo Vasos linfticos aferentes Vlvula Folculo secundario Seno marginal Corona de linfocitos Zona germinal

Placas de Peyer

Trabcula Corteza

Folculo linfoide primario Mdula

Apndice

Mdula sea

Vaso linftico eferente Vena Arteria

Cpsula Seno medular

Vasos linfticos

7 rganos y estructuras linfoides del sistema inmunitario humano.

8 Estructuras de un ganglio linftico. La linfa llega al ganglio a travs de los vasos aferentes y sale de l a travs del nico vaso eferente. Los linfocitos se encuentran en la periferia (corona) de los folculos secundarios, en la corteza del ganglio. La linfa fluye por los senos marginal y medular y entre las trabculas corticales.

4. Los antgenos
Toda sustancia que sea capaz de desencadenar una respuesta inmunitaria recibe el nombre de antgeno. Generalmente, los antgenos son macromolculas que pertenecen a microorganismos (heteroantgenos) y, por tanto, muy extraas al organismo que produce la respuesta inmunitaria. Pero tambin pueden actuar como antgenos molculas de otro individuo de la misma especie (isoantgenos), como las mucoprotenas del sistema ABO sanguneo humano, y molculas del propio animal (autoantgenos), volvindose el aparato inmunolgico contra uno mismo en el fenmeno llamado autoinmunidad, causa de graves enfermedades. Esto ltimo es un fenmeno muy raro, puesto que el sistema inmunitario de un animal tiene capacidad para reconocer las molculas propias y diferenciarlas de las extraas. Muchas macromolculas pueden actuar como antgenos, como casi todas las protenas, muchos polisacridos y lpidos complejos que se encuentran sobre la pared celular bacteriana o cpsulas vricas, o bien son liberados por microorganismos de manera disuelta en el medio interno del animal. Muchas molculas que no son inmungenas adquieren esta propiedad al combinarse con protenas. Los antgenos presentan una pequea zona de su molcula, denominada determinante antignico, mediante la cual se unen especficamente a los receptores de membrana de los linfocitos. En los antgenos

proteicos, el determinante suele estar formado por slo cuatro o cinco aminocidos. El antgeno se dice que es univalente cuando tiene un solo determinante antignico en su molcula, de modo que nicamente se puede unir a l un anticuerpo, mientras que es polivalente cuando tiene varios lugares de unin del mismo o de diferentes anticuerpos (fig. 9). Los antgenos se diferencian de los llamados haptenos en que stos son pequeas molculas que tienen capacidad para unirse a anticuerpos especficos, pero que por s solos no son inmunognicos, es decir, no estimulan ni la produccin de anticuerpos ni la de clulas inmunocompetentes. Sin embargo, los haptenos pueden adquirir propiedades antignicas cuando se unen a molculas denominadas transportadoras, generalmente protenas. La presencia de determinados antgenos en el cuerpo de un animal estimula la proliferacin de los linfocitos que tienen los receptores especficos contra esos antgenos. Esta idea de formacin de linfocitos especficos recibe el nombre de teora de la seleccin clonal, que admite que los receptores ya estn preformados en el aparato inmunolgico incluso antes de la presencia de los antgenos; ante la entrada de los antgenos, las clulas con receptores especficos son seleccionadas entre un inmenso repertorio de clulas con diferentes receptores, y estimulada su proliferacin y maduracin (fig. 10).
387

Determinante

Linfocitos en reposo

Anticuerpo Antgeno univalente

Linfocito 1

Linfocito 2

Linfocito 3

Linfocito 4

Antgeno

Seleccin clonal

Reconocimiento del antgeno

Proliferacin Determinantes Anticuerpos Receptores de linfocitos Antgeno polivalente Linfocito activado 2 Respuesta inmunolgica

9 Antgenos monovalentes y polivalentes.

10 Mecanismos de la seleccin clonal. Entre los diferentes tipos de linfocitos en estado de reposo que hay en la mdula sea roja y en el timo ante la aparicin de un determinado antgeno slo son seleccionados aquellos que tienen los receptores de membrana especficos, los cuales se activan y proliferan e intervienen en la respuesta inmunolgica.

5. Los anticuerpos
Los anticuerpos son molculas proteicas producidas por los linfocitos B que estn destinadas a unirse especficamente a los antgenos. Los anticuerpos producidos por los linfocitos B pueden quedar adheridos a la membrana plasmtica del linfocito B donde actan como anticuerpos de superficie receptores de antgenos, o bien son segregados al exterior de la clula como anticuerpos solubles circulantes en la sangre, donde pueden llegar a constituir hasta el 20 % del peso total de las protenas del plasma sanguneo. Las clulas plasmticas (linfocitos B maduros) son incapaces de dividirse, tienen una vida corta pero emplean una parte muy importante de su maquinaria de sntesis proteica en producir anticuerpos. Los anticuerpos son protenas del grupo de las globulinas y por sus propiedades inmunolgicas reciben tambin el nombre de inmunoglobulinas (Ig). La estructura bsica de las Ig son cuatro cadenas polipeptdicas: dos cadenas ligeras o L iguales y dos cadenas pesadas o H tambin idnticas. Ligadas a las cadenas H hay molculas de oligosacridos cuya funcin an no se conoce. Las cadenas H y L estn unidas entre s por puentes disulfuro. Se combinan dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras para formar una molcula tridimensional en forma de Y, compuesta por un tallo constituido por parte de las dos cadenas pesadas con los radicales cido (COOH) terminales y por dos brazos formados por el resto de las cadenas pesadas y por las dos cadenas ligeras, todas ellas con los radicales amino (NH2) terminales.
388

H2N Zona de unin al antgeno Cadena ligera (L)

NH2 Zonas bisagra

H2N

Zona de unin NH2 al antgeno      Regin variable

HOOC
Puentes disulfuro Hidrato de carbono

COOH

Regin constante

Cadena pesada (H) HOOC COOH

11 Estructura esquemtica de un anticuerpo del tipo de las IgG.

En la base de los brazos de las cadenas H hay una zona llamada bisagra constituida por unos pocos aminocidos por donde los brazos pueden moverse libremente respecto al resto de la molcula, lo que facilita la unin a antgenos con diferentes determinantes antignicos. Los extremos aminados de las cadenas H y L se denominan porcin variable de la Ig, puesto que cada tipo de anticuerpo tiene esta zona de las cadenas con una secuencia diferente de aminocidos: los dos extremos de la Y de los anticuerpos son los centros de unin a los antgenos, de modo que una molcula de anticuerpo es bivalente. El lugar de unin con cada antgeno se puede considerar como un hueco entre las porciones variables de una cadena H y otra L en el que encaja el determinante antignico del antgeno especfico. El resto de las cadenas H y L se llama porcin constante y carece de la propiedad de unirse a los antgenos (fig. 11).

Sitio de unin del antgeno

Sitio de unin del antgeno

Antgeno Determinante antignico

Zona de unin al antgeno

Cadena glucdica Cadena ligera

Cadena ligera

Cadenas pesadas Porcin variable cadena L Porcin variable cadena H

Dominio efector

12 Representacin idealizada de la unin de un antgeno a una de las dos zonas de unin del anticuerpo.

13 Modelo tridimensional de una IgG obtenido mediante anlisis cristalogrfico de rayos X.

Se conocen cinco tipos diferentes de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgD, IgA e IgE, las cuales se diferencian entre s por el tipo de las cadenas H.
S S
S S

Las IgG o gammaglobulinas son los anticuerpos ms numerosos de la sangre, donde pueden llegar a alcanzar hasta el 85 % de las inmunoglobulinas circulantes en la especie humana. Su peso molecular es del orden de 150.000 y se componen de dos cadenas L y de dos cadenas H de tipo gamma a las que se unen molculas de oligosacridos. Adems de unirse a anticuerpos, las IgG son capaces de activar tanto al complemento como a los fagocitos sanguneos (macrfagos y micrfagos). Las IgG son los nicos anticuerpos capaces de atravesar la placenta y penetrar en el feto (fig. 13). Las IgM son los primeros anticuerpos que se producen ante la exposicin inicial a un antgeno. Tienen un peso molecular del orden de 900.000 y estn compuestas por cinco monmeros de anticuerpos unidos por puentes disulfuro y por una cadena polipeptdica denominada J. Las cadenas H son de tipo m. Tienen una gran avidez por molculas o microorganismos antignicos polivalentes, como los virus, encargndose tambin de activar a los macrfagos y al sistema del complemento (fig. 14). Las IgA estn constituidas por cuatro cadenas polipeptdicas como las IgG, dos cadenas L y dos cadenas H de tipo alfa, aunque este monmero puede asociarse con otro o con dos ms mediante una cadena J, dando dmeros o trmeros. Se originan en estructuras linfoides subepiteliales y se encuentran en la sangre y en diversas secreciones como la leche, el mucus

-S-S-

-S-S-

14 Estructura de la IgM, formada por cinco monmeros y una cadena J, unidos por puentes disulfuro.

respiratorio e intestinal, la saliva y las lgrimas, con lo que colaboran en la eficacia de las barreras primarias de defensa de los animales. Las IgA de estas secreciones contienen adems otra cadena polipeptdica denominada componente secretor que se cree impide que estas Ig sean hidrolizadas por las enzimas proteolticas del lquido segregado (fig. 15). Las IgE tienen un peso molecular del orden de 190.000 y se componen de dos cadenas L y de dos cadenas H de tipo psilon. Se encuentran principalmente en los tejidos y son las causantes principales de los fenmenos de alergia. Las IgD se componen de dos cadenas L y de dos H de tipo delta y tienen un peso molecular aproximado de 180.000. Son anticuerpos de la superficie de linfocitos B sirviendo como receptores de antgenos especficos.
389

Cadena J
S S

CUESTIONARIO 2
1. En la estructura de las clulas plasmticas, qu es lo que destaca poderosamente y cul es la causa? 2. Qu diferencia hay entre los receptores de superficie de los linfocitos B y T? 3. Qu son las interleucinas y qu misiones tienen?
Cadena J

4. Cmo se activan los linfocitos T? 5. Cules son las ideas bsicas que propone la teora de la seleccin clonal? 6. Qu inmunoglobulinas no son capaces de atravesar la placenta? Cules son las que confieren inmunidad al feto? 7. En un anticuerpo, qu importancia tiene la porcin variable de sus cadenas polipeptdicas? Y la porcin constante, qu misin tiene? Qu significado tiene la zona de bisagra?

Componente secretor

15 Estructura de un dmero de IgA.

4 Mecanismos de accin del sistema inmune

1. La respuesta inmune
La deteccin de molculas extraas de tipo inmunognico, como muchas de las que poseen los microorganismos patgenos, pone en marcha todo el complejo mecanismo de proliferacin y maduracin de clulas inmunocompetentes y de produccin de anticuerpos, lo que se denomina respuesta inmune. Se conocen dos tipos de respuesta inmune: la primaria y la secundaria (fig. 16). Respuesta inmune primaria. Es la que se produce ante el primer contacto con un determinado antgeno. Al cabo de varios das de este contacto empiezan a aparecer anticuerpos en la sangre del animal infectado cuya produccin va en aumento exponencial hasta una fase estacionaria en la que empiezan a declinar. Los anticuerpos que se forman en esta respuesta son del tipo de las IgM. Al cabo de varias semanas, estas IgM son casi imperceptibles en la sangre. Respuesta inmune secundaria. Cuando el aparato inmunolgico detecta por segunda vez la presencia del mismo antgeno, origina una respuesta bastante distinta de la anterior: hay menos retraso entre la entrada del antgeno y la aparicin de anticuerpos, que son del tipo de las IgG; siendo su produccin mucho ms rpida, los valores de concentracin de estas Ig en la sangre son mayores y su persistencia en la sangre es muy superior (hasta varios aos). Las caractersticas de la respuesta inmune secundaria (respuesta ms rpida, ms intensa y de ms larga duracin) indican claramente que existe una memoria inmunolgica. La base de esta memoria inmunolgica hay que buscarla en los linfocitos, algunos de los cuales, tras el primer contacto con el antgeno, se transforman en clulas de memoria (B o T) de larga duracin, sobreviviendo gran parte de la vida del animal. Los linfocitos de memoria estn circulando continuamente en la sangre y en los rganos

Concentracin de anticuerpos

Fase estacionaria Respuesta inmune primaria Fase estacionaria Respuesta inmune secundaria

Retraso

Aumento exponencial

Aumento exponencial Retraso Tiempo Primer contacto con el antgeno Segundo contacto con el antgeno

16 Caractersticas de las respuestas inmunes primaria y secundaria.

390

linfoides secundarios, por lo que rpidamente detectan una nueva entrada del antgeno, gracias a la mayor avidez de sus receptores de superficie por el antgeno, desencadenando una rpida produccin de IgG.

2. La reaccin antgeno-anticuerpo
Los anticuerpos, al reconocer a los antgenos, se unen a ellos mediante enlaces de Van der Waals, fuerzas hidrofbicas o inicas, en una reaccin denominada antgeno-anticuerpo (fig. 12). En esta unin, que se lleva a cabo entre las porciones variables de las cadenas H y L del anticuerpo y los determinantes antignicos, no se establece ningn enlace covalente entre antgeno y anticuerpo, por lo que la reaccin es reversible. Esta reaccin se puede expresar de la siguiente manera: Ag (antgeno) Ab (anticuerpo) AgAb La reaccin se desplaza hacia uno u otro lado segn las concentraciones de antgenos y de anticuerpos y de la intensidad de su reaccin. La afinidad de un anticuerpo por un antgeno est determinada por la intensidad de las interacciones que se establecen entre el antgeno y el determinante antignico. La reaccin antgeno-anticuerpo es extraordinariamente especfica: un anticuerpo puede reconocer entre una multitud de determinantes antignicos nicamente aquellos que le son complementarios. Existen diferentes tipos de reaccin antgeno-anticuerpo: Reaccin de precipitacin. Cuando los antgenos son macromolculas solubles con varios determinantes (antgenos multivalentes), los anticuerpos libres en el plasma sanguneo, al unirse con ellos, forman complejos tridimensionales insolubles que precipitan (fig. 17).

Reaccin de aglutinacin. Se produce al reaccionar los anticuerpos con molculas de antgenos situados en la superficie de bacterias u otras clulas. Como resultado de esta reaccin, las clulas forman agregados que sedimentan con facilidad. Los antgenos de la superficie de las clulas que provocan aglutinacin se denominan aglutingenos, mientras que sus anticuerpos especficos se llaman aglutininas (fig. 17). Una variedad particular de la aglutinacin es la aglutinacin pasiva, que consiste en la adherencia de antgenos solubles a la membrana de las clulas; posteriormente, los anticuerpos contra estos antgenos, al reaccionar con ellos, determinan la aglutinacin de las clulas a las que estaban ligados. Este fenmeno se da frecuentemente en los glbulos rojos de la sangre (fig. 18). Reaccin de neutralizacin. Se efecta principalmente con los virus y consiste en la disminucin de la capacidad infectante del virus cuando se unen los anticuerpos con los determinantes antignicos de la cpsula vrica. Esta reaccin es reversible, pudiendo volver a activarse de nuevo los virus. Reaccin de opsonizacin. Los microorganismos o las partculas antignicas son fagocitados ms vidamente por los fagocitos sanguneos cuando tienen unidas a su superficie molculas de anticuerpos. Esto se debe a que la unin de los anticuerpos produce un aumento de la adherencia del complejo antgeno-anticuerpo a la superficie de los macrfagos y micrfagos sanguneos, lo que facilita su fagocitosis. Los microorganismos recubiertos de anticuerpos se dice que estn opsonizados (del griego opson: listo para comerse) (fig. 20).

17 a) Reaccin de precipitacin. Una molcula soluble antignica con varios determinantes diferentes (1, 2 y 3 en el esquema) puede unirse a varios anticuerpos distintos, formndose un complejo tridimensional que precipita. b) Reaccin de aglutinacin. a b

3 1 3 3 2 1 2 3 2 2

Clula Determinante

391

Hemates

Antgenos

Anticuerpos

Aglutinacin pasiva

18 Aglutinacin pasiva de los hemates medida por antgenos que se adhieren a su membrana plasmtica.

19 Macrfagos pulmonares fagocitando un cuerpo extrao.

Bacteria opsonizada

Anticuerpo

3. El sistema del complemento

El complemento se denomina as porque ayuda o complementa y a la vez aumenta los mecanismos de la respuesta inmune. Est compuesto por una veintena de protenas plasmticas del tipo de las globulinas, que, a diferencia de los anticuerpos, se encuentran siempre presentes en el plasma. Las protenas que forman este sistema reaccionan frente a gran variedad de complejos antgeno-anticuerpo y sus efectos consisten principalmente en provocar la lisis de los microorganismos con complejos antgeno-anticuerpo adheridos. El funcionamiento del sistema del complemento se inicia cuando una globulina de este sistema es fijada por el complejo antgeno-anticuerpo; se inicia entonces una secuencia de activaciones de las restantes protenas del complemento que conducen finalmente a la formacin de una enzima activa del grupo de las proteasas que acta sobre la membrana del microorganismo y la destruye, produciendo en ella poros. Por estos poros salen al exterior las pequeas molculas citoplasmticas del microorganismo, mientras que el agua extracelular entra en l produciendo su hinchamiento y su posterior destruccin o lisis. Se ha comprobado que el sistema del complemento acta tambin en la liberacin de histamina por las clulas denominadas mastocitos. La histamina provoca un aumento de la permeabilidad de los capilares sanguneos de la zona infectada, por lo que llegan a sta ms glbulos blancos y ms anticuerpos. Algunas protenas del sistema del complemento tienen efectos quimiotxicos positivos sobre los micrfagos sanguneos, a los que atraen promoviendo la fagocitosis, y tambin son responsables de la inflamacin local de la zona infectada.

Determinante antignico

Bacteria opsonizada Receptor de membrana

Fagocito sanguneo (macrfago, neutrfilo)

Fagocitosis

20 Mecanismo de la opsonizacin.

392

Cabeza del fmur

Mdula sea roja

Eritropoyesis

Trombopoyesis

Eritrocitos

Proliferacin

Proliferacin Plaquetas Clula madre pluripotencial

Transporte de O2

Coagulacin de la sangre

Clula precursora de linfocito B Monocito

Clula precursora de linfocito T Clula precursora asesina (pre-NK) Linfocito T en reposo

Neutrfilo Clula asesina (NK) IL Linfocito T citotxico Linfocito T de memoria

IL IT
8

Macrfago

Linfocito T colaborador Linfocito B en reposo Linfocito T supresor

Clula plasmtica

Linfocito B de memoria

Secrecin de perforinas

Fagocitosis Fagocitosis Anticuerpos Complemento

Secrecin Secrecin de perforinas

IL IT

F F F F

Interleucinas Interfern Activacin Inhibicin

Clula diana

21 Funcionamiento general del sistema inmunolgico y dems clulas defensivas en la especie humana.

393

ocumento 1

Secuelas de la viruela
La viruela es una enfermedad infecciosa producida por un virus que tuvo su origen en Asia. Los rabes la propagaron a Europa y, posteriormente, la colonizacin americana hizo que tambin se extendiera por el Nuevo Mundo. Es una enfermedad muy contagiosa y epidmica que, adems de su alta mortalidad, deja en las personas que sobreviven cicatrices permanentes. La vacuna de Jenner contribuy a disminuir drsticamente la mortalidad causada por esta enfermedad en el mundo. Hasta 1979, momento en que la Organizacin Mundial de la Salud consider erradicada la viruela del mundo, la vacunacin contra la viruela era obligatoria.

Jenner: vacunacin contra la viruela.

CUESTIONARIO 3
1. Enumera tres diferencias claras entre la respuesta inmune primaria y la secundaria. 2. Qu se entiende por memoria inmunolgica? En qu bases fisiolgicas se asienta esta memoria inmunolgica? 3. Qu es la opsonizacin y para qu se realiza? 4. Cul es la diferencia entre las reacciones antgeno-anticuerpo de precipitacin y aglutinacin? 5. Qu tipo de uniones se dan entre los antgenos y los anticuerpos? Qu se entiende por afinidad de un anticuerpo por un antgeno? 6. Indica la importancia que tiene el sistema del complemento en el mecanismo inmunolgico. 7. Qu se entiende por antgeno polivalente? 8. Qu es un hapteno?

Actividades
Conceptos
1. Utiliza tus conocimientos o la informacin contenida en el texto y rellena el siguiente cuadro: Clulas Neutrfilos Linfocitos citotxicos Plaquetas Macrfagos Clulas asesinas (NK) Linfocitos supresores Eritrocitos Clulas plasmticas Linfocitos colaboradores Funcin Defensa inmunitaria (hum. - cel.) o inespecfica

394

Actividades
2. Contesta a las siguientes preguntas relacionadas con las defensas celulares de los animales: Explica brevemente la importancia de las clulas madre de la mdula sea roja de los huesos. Cules son las clulas sanguneas que se encargan de fagocitar cuerpos extraos? Qu necesitan los monocitos para activarse y adquirir la capacidad fagocitaria? Qu clulas segregan perforinas? Cmo llevan a cabo sus funciones los linfocitos T colaboradores? Cul es la misin de los linfocitos T supresores? Cmo actan las clulas plasmticas? De qu maneras son atacadas las clulas extraas al organismo? 3. Comentario de texto. Lee atentamente el texto que sigue y realiza las actividades que se indican. El descubrimiento de la perforina o protena formadora de poros signific un gran avance en el conocimiento del mecanismo por el que los ya mencionados linfocitos pueden eliminar a los agentes patgenos. O al menos sirvi para proponer una hiptesis con visos de verosimilitud: la perforina, almacenada junto con otras enzimas en el citoplasma de la mayora de linfocitos T citotxicos y de las clulas asesinas, es secretada cuando estos linfocitos se ponen en contacto con la clula extraa que tienen que destruir. La perforina produce los correspondientes poros en la membrana del visitante y con la secrecin de las enzimas se consigue la lisis y la rpida muerte del agresor. Un mecanismo que, sin embargo, tal vez por simple e intuitivo y, sin duda, porque se comprob que algunos linfocitos que no contienen perforina conservan su capacidad ltica, fue cuestionado por algunos cientficos. Con el estudio de Kgi puede adelantarse que la funcin de la perforina ha quedado establecida con bastante precisin. En su investigacin, el cientfico, despus de lograr mediante ingeniera gentica una variedad de ratn capaz de producir perforina, ha comprobado que los animales que carecen de la protena formadora de poros no responden, ni vencen, a la infeccin producida por el virus de la coriomeningitis, as como tampoco controlan el crecimiento de ciertos tipos de tumores. William R. Clark, del Instituto de Biologa Molecular de la Universidad de California (Los ngeles), como experto en este campo, ha sealado, despus de conocer los resultados del trabajo suizo, que la perforina tiene, inequvocamente, un crucial papel en la respuesta de los linfocitos T citotxicos frente al virus de la coriomeningitis. La capacidad de respuesta citotxica de estos ratones carentes de perforina, segn ha demostrado tambin Kgi en su investigacin, no queda anulada en su totalidad. Ello indica que existen, efectivamente, otros posibles mecanismos lticos, adems del de las perforinas, por ahora desconocidos y que parece obvio que, despus de este importante primer paso, han de ser motivo de estudio en un futuro inmediato.
Vicent Fonollosa. La Vanguardia, Suplemento de Medicina y Salud, 17 de junio de 1994.

Perforinas, las ms eficaces armas de la inmunologa

En circunstancias normales, los agentes patgenos la mayora infecciosos no lo tienen fcil para penetrar en el organismo: el sistema inmunolgico el aparato defensivo, vigilante siempre y con recursos suficientes, se lo impide, sin apenas fallos y con probada eficacia. Entre los defensores del cuerpo, determinados tipos de linfocitos concretamente, y entre otros, los linfocitos T citotxicos y las denominadas clulas asesinas o agresoras son los encargados de plantar cara, y si es posible derrotar, al enemigo. Y, en realidad, casi siempre lo consiguen. Los resultados a la vista estn. Pero cmo lo hacen, cmo aniquilan al atacante, qu mecanismo utilizan, son algunos de los interrogantes que la inmunologa slo ha contestado en parte. No obstante, con las investigaciones realizadas por David Kgi y su equipo, del Instituto de Inmunologa Experimental de la Universidad de Zurich, en Suiza, recientemente publicadas en las pginas de la revista Nature, parece que pueden atisbarse algunas de las respuestas hasta ahora desconocidas. Una de ellas es la relativa al mecanismo mediante el cual los linfocitos centinelas destruyen, lisan, a los elementos ofensivos, y, en particular, al preciso mecanismo derivado de la actividad que tiene una protena llamada perforina sintetizada por los linfocitos, cuyo efecto primordial es el de producir poros en la membrana del agente daino y, posteriormente, provocar su lisis. Los linfocitos T citotxicos y las clulas asesinas son elementos celulares del organismo cuya principal funcin es la de eliminar las clulas que infectan los virus y las que han sufrido un posible cambio canceroso. Son los autnticos guardianes del cuerpo. Impiden el paso a cualquier agente agresor, aunque en su celo defensivo se erigen en lo que en este caso no sera deseable en resistente barrera inmunolgica que no facilita en modo alguno la aceptacin de los rganos que se trasplantan y los rechazan, como si de algo extrao que as es en realidad se tratara.

Realiza un resumen de las ideas ms importantes del texto con una extensin de 10-15 lneas.

Contesta a las siguientes preguntas: Qu es la perforina y qu clulas la producen? Cules son los efectos de la perforina? Sobre qu clulas acta? Cmo crees que las clulas que producen perforinas logran reconocer a las clulas sobre las que actuarn? Cmo se ha comprobado experimentalmente la accin inmunolgica de las perforinas?

395

24
N D I C E
INFORMACIN 1 La autoinmunidad. 2 Las enfermedades de autoinmunidad. 3 La hipersensibilidad. 4 La inmunodeficiencia.
La inmunodeficiencia congnita. La inmunodeficiencia adquirida.

Anomalas del sistema inmunitario

1. Se separa el gen del virus que contiene informacin para la sntesis de la protena antignica de la cubierta. 2. Se inserta este gen en el material gentico de otro virus de bajo carcter patgeno.

3. Se deja que se reproduzca este ltimo virus en un cultivo de clulas, por lo que el gen de la protena antignica tambin se duplica. 4. Se deja que el gen del virus exprese su informacin en las clulas del cultivo, con lo que se forman molculas de la protena antignica, que posteriormente se extraen. 5. Se inyecta una solucin purificada de las protenas antignicas de la cubierta del virus en una persona sana. Se espera que el aparato inmunolgico de esta persona se ponga en accin contra esta protena y forme anticuerpos y linfocitos especficos, cuya memoria permitir eliminar al virus cuando ocurra la verdadera infeccin.

5 El SIDA y el sistema inmunolgico.

El virus del SIDA. Accin del VIH sobre el sistema inmune. Modalidades de contagio del virus del SIDA. Fases y sntomas del SIDA. Diagnosis y tratamiento del SIDA.

6 Los trasplantes y los fenmenos de rechazo.

Los trasplantes y sus clases. Clases de rechazo.

7 El cncer y el reconocimiento inmunolgico. Mtodos de deteccin precoz del cncer.

Las clulas cancerosas. El diagnstico precoz del cncer.

Ingeniera gentica en la obtencin de vacunas.

8 La inmunoterapia. 9 Sueros y vacunas. Importancia industrial de su fabricacin.

La ingeniera gentica est teniendo una gran importancia en el campo de la inmunologa, puesto que es posible hoy en da descubrir los genes que codifican protenas antignicas en los microbios patgenos y, de esta manera, se pueden elaborar vacunas. Arriba tienes esquematizados los pasos que se seguiran para obtener una de ellas. Por qu no se pueden cultivar virus fuera de clulas vivas? Qu pretenden las vacunas al ser inyectadas en personas?

396

La autoinmunidad

En condiciones normales, el aparato inmunolgico de un animal es capaz de reconocer las molculas de su propio cuerpo y distinguirlas de aquellas que son extraas, produciendo anticuerpos slo contra las extraas. Sin embargo, a veces, las poderosas armas del aparato inmunolgico se pueden volver contra uno mismo al fabricar anticuerpos contra elementos del propio organismo. Se trata del fenmeno de la autoinmunidad. sta hay que entenderla como un fallo del sistema inmunitario que es incapaz de reconocer como propias determinadas molculas y, a consecuencia de ello, se originan enfermedades graves que pueden llevar incluso a la muerte del animal. Las molculas del propio organismo que provocan autoinmunidad se denominan autoantgenos. Algunas protenas que estn confinadas o recluidas en rganos concretos del animal pueden actuar como autoantgenos, como por ejemplo protenas situadas en el cristalino del ojo, en el tejido cerebral o en los espermatozoides. El confinamiento de estas protenas en zonas del cuerpo situadas a distancia de los rganos linfoides determina que los linfocitos no lleguen a alcanzarlas y, de esta manera, no se hayan desarrollado mecanismos de tolerancia para ellas. Siempre que se liberan estas protenas a la circulacin sangunea debido a alguna lesin en esos tejidos, se produce una respuesta autoinmunitaria.

Durante el desarrollo del sistema inmunitario tambin se forman linfocitos que no saben reconocer a los antgenos forneos (heteroantgenos) de las molculas propias. En condiciones normales, estas clulas anmalas o linfocitos autorreactivos son eliminadas en el timo, pero excepcionalmente pueden emigrar desde el timo, los ganglios linfticos o desde el bazo a la circulacin sangunea y llegar a algunos rganos del cuerpo donde se desarrollan fenmenos de autoinmunidad. Los linfocitos B autorreactivos forman anticuerpos especficos para molculas propias y, al producirse el complejo autoantgeno-anticuerpo, se originan anomalas de autoinmunidad. Tambin se ha observado la existencia de linfocitos T autorreactivos. Anlisis bioqumicos han permitido detectar que muchos microbios, como bacterias y virus, han desarrollado la estrategia de formar complejos moleculares, principalmente protenas, muy parecidos a los que existen en el cuerpo del animal al que van a infectar, lo que se denomina mimetismo molecular (fig. 1). Como ejemplo comprobado de mimetismo molecular se puede citar el adenovirus de tipo 2 que tiene en las protenas de su cpsida secuencias aminoacdicas muy similares a las que existen en las protenas de la vaina de mielina de los axones neuronales. Por este motivo, el sistema inmunitario, que ataca rutinariamente a los adenovirus de tipo 2, puede verse engaado por este mimetismo molecular y llegar a atacar a su propia vaina de mielina.

1 Algunos antgenos forneos (mimticos) son muy parecidos a molculas propias. Ambos son presentados por molculas HLA anmalas a los linfocitos, cuyos receptores de membrana son incapaces de diferenciarlos. De esta manera, molculas propias pueden tener capacidad antignica: son los autoantgenos.

CLULA PRESENTADORA

Molcula propia (autoantgeno)

CLULA PRESENTADORA

Molcula HLA anmala

LINFOCITO T

Antgeno extrao mimetizado

Receptor del Linfocito T

397

2 Las enfermedades de autoinmunidad

La mayora de las anomalas o enfermedades de autoinmunidad las sufren personas que tienen determinados tipos de protenas MHC (o protenas del complejo principal de histocompatibilidad) asociados a la membrana de sus clulas. En la especie humana, las protenas MHC se denominan HLA (del ingls Human Leucocyte-associated Antigen) porque se descubrieron en leucocitos. Las protenas HLA son las que determinan qu porciones de las molculas de los microorganismos infecciosos son presentadas a los linfocitos T para que stos queden activados e inicien la respuesta inmunolgica. Determinadas protenas HLA (anmalas) se unen a fragmentos mimticos del microbio y lo presentan a los linfocitos T, los cuales a partir de aqu ya son incapaces de distinguir las molculas propias que son semejantes a las mimetizadas: se ha vulnerado la autotolerancia y se produce una anomala por autoinmunidad. Se ha calculado que, aproximadamente, entre el 5 % y el 7 % de las personas adultas de Europa y Amrica del Norte padecen una enfermedad de autoinmunidad al menos una vez en su vida, con una mayor incidencia en el sexo femenino (75 %) que en el masculino (25 %). La mayora de los rganos o estructuras orgnicas, clulas, etc., pueden verse afectados por fenmenos de autoinmunidad y los efectos son variados y van desde la destruccin del rgano hasta la hiperproduccin de hormonas, pasando por la destruccin de las uniones neuro-musculares. En el cuadro I, que aparece al final del epgrafe, se presentan las principales anomalas o enfermedades por autoinmunidad que se conocen en la especie humana. La ms conocida es la denominada esclerosis mltiple. Es una enfermedad que afecta a la sustancia blanca del sistema nervioso central y que produce, entre otros sntomas, hormigueos y dolores en piernas y brazos, anomalas en la visin, problemas de equilibrio y falta de fuerza en piernas y brazos. Todos estos sntomas son debidos al deterioro de la vaina de mielina que recubre los axones de las neuronas, o proceso de desmielinizacin. Los principales procesos inmunolgicos implicados en la desmielinizacin estn esquematizados en la figura 2. Autoantgenos situados en la vaina de mielina son atacados por autoanticuerpos y por los macrfagos activados. Finalmente, queda el axn desprovisto de mielina (desnudo), lo que produce importantes cambios en la transmisin del impulso nervioso a travs de l y conduce a diferentes disfunciones neurolgicas.

2 Mecanismos inmunolgicos que ocurren durante el proceso de desmielinizacin de los axones en la esclerosis mltiple: 1) fagocitosis de los virus por los macrfagos; 2) presentacin de molculas antignicas vricas a los linfocitos T; 3) activacin y proliferacin de linfocitos T; 4) los linfocitos T activados salen de los vasos sanguneos y llegan a la sustancia gris del cerebro; 5) nueva activacin de linfocitos T gracias a autoantgenos presentados por las clulas nerviosas de la gla; 6) activacin de linfocitos B en el tejido cerebral; 7) formacin de anticuerpos que atacan a los autoantgenos de la vaina de mielina; 8) secrecin de interfern por los linfocitos T que activan a los macrfagos; 9) los macrfagos fagocitan los restos de vaina de mielina atacada por los autoanticuerpos.
Virus 1
Presentacin del antgeno del virus

3
Activacin Proliferacin

Neurona 2 Linfocito T
Vaina de mielina

Vaso sanguneo

Macrfago Linfocito B
Linfocito T saliendo del capilar y atravesando la barrera hemato-enceflica

Antgeno de la vaina de mielina Desmielinizacin

Anticuerpos

7
Interfern

Activacin

6 9 8 Linfocito T
Proliferacin y activacin de linfocitos T

Macrfagos
Axn desprovisto de vaina de mielina

Clula nerviosa de la gla

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Enfermedad autoinmune Esclerosis mltiple Lupus eritematoso Psoriasis Enfermedad de Graves Enfermedad de Addison Anemia perniciosa Anemia hemoltica autoinmunitaria Artritis reumatoide Diabetes juvenil

Localizacin orgnica Tejido cerebral y mdula espinal Diferentes tejidos, ADN, plaquetas Piel Tiroides Glndulas suprarrenales Clulas parietales del estmago Eritrocitos (protenas de membrana) Tejido conjuntivo Clulas del pncreas

CUADRO I. Principales enfermedades por autoinmunizacin.

Macrfago Vaso sanguneo Maduracin Interleucina Linfocito T IgE Receptor Clula de IgE plasmtica Basfilo Mastocito Alrgenos

CUESTIONARIO 1
1. Qu son los autoantgenos y los heteroantgenos? 2. Qu son los linfocitos autorreactivos? En qu se diferencian de los linfocitos normales? 3. Qu se entiende por mimetismo molecular en el campo de la inmunologa? Qu consecuencias puede tener este mimetismo molecular? 4. Qu son las molculas HLA y qu relacin tienen con los fenmenos de autoinmunidad? 5. Cul es el origen de las anomalas de tipo nervioso que se producen en la esclerosis mltiple y qu relacin existe con el aparato inmunolgico?

Linfocito B

3 Sensibilizacin de los mastocitos y los leucocitos basfilos en los fenmenos de hipersensibilidad.

La hipersensibilidad

Las reacciones inmunolgicas tienden a ser de tipo protector, pues tienen el objetivo de eliminar los antgenos extraos sin producir dao a la persona. Sin embargo, en ocasiones, las respuestas inmunolgicas lejos de ser beneficiosas llegan a ser perjudiciales para el organismo, ya que inducen daos en diferentes tejidos. El sistema inmunitario puede llegar a actuar de manera excesiva ante molculas inocuas o poco peligrosas, produciendo efectos graves e incluso la muerte del animal. Es lo que se entiende por anafilaxis, que viene del griego ana (contra) y phylaxis (proteccin). Por ejemplo, al inyectar por segunda vez a animales de laboratorio un extracto de anmonas marinas, al contrario de lo que puede esperarse, esos animales mueren. Se habla de hipersensibilidad para indicar la capacidad de un animal de reaccionar ante un antgeno inocuo o poco peligroso. El trmino alergia es utilizado comnmente para referirse a ciertas reacciones de hipersensibilidad,

mientras que un alrgeno es un antgeno que provoca hipersensibilidad. Pueden ser alrgenos el polen de algunas plantas, esporas de los hongos, ciertas protenas como las de sueros sanguneos extraos o las de algunas vacunas, sustancias que hay en ciertos alimentos como en los huevos, en las nueces, en los guisantes o en las judas, ciertos medicamentos como la penicilina y las sulfamidas, microorganismos del polvo como los caros o algunas formaciones animales como el pelo y la caspa ajena. El animal que ha sido sometido por primera vez a un alrgeno se llama hipersensible o alrgico. Hay dos tipos principales de reacciones hipersensibles. En una de ellas, los efectos nocivos aparecen a los pocos minutos de estar en contacto con el alrgeno, mientras que en la otra los efectos se notan al cabo de varias horas o das. Se trata, respectivamente, de la hipersensibilidad inmediata y de la retardada. El primer contacto entre el alrgeno y el aparato inmunitario no produce ningn sntoma externo pero s que induce mecanismos bioqumicos que permanecen en estado latente hasta el segundo contacto, lo que se denomina sensibilizacin (fig. 3). En este proceso,
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Efecto Contraccin de los bronquios Estimulacin y secrecin de mucosidad en vas respiratorias Vasodilatacin

Sntomas Dificultad respiratoria Congestin de vas respiratorias Enrojecimiento de zonas locales, bajada de presin sangunea que puede ser mortal Hinchazn local Dolor y picor en la piel

son el asma, la fiebre del heno, la urticaria, la enfermedad del suero, la glomerulonefritis y las incompatibilidades de hemates maternofetales del sistema Rh. La alergia a la penicilina es tambin un caso de hipersensibilidad inmediata. Al inyectar alrgenos por va intravenosa a individuos hipersensibles se produce anafilaxis generalizada y el shock anafilctico. Lo mismo ocurre ante picaduras de abejas o avispas a individuos hipersensibles (fig. 4). En cambio, si la inyeccin del alrgeno es por va subcutnea, slo se produce un intenso prurito o picor en la zona inyectada al que sigue la aparicin de una roncha plida e irregular.
Mareos, convulsiones, prdida de conciencia o muerte a causa de una cada de la presin sangunea. Hinchazn de los labios y la lengua, hasta el punto de que impide tragar y respirar. La constriccin de las vas respiratorias inferiores puede causar pitos y otras dificultades respiratorias de tipo asmtico. La hinchazn de la laringe puede causar ahogo.

Aumento de permeabilidad de los capilares Estimulacin de terminaciones nerviosas

CUADRO II. Principales efectos que produce la histamina y sntomas externos.

los alrgenos son captados por los macrfagos sanguneos, los degradan y exponen al exterior parte de sus molculas unidas a complejos MHC. Los linfocitos T reconocen estos fragmentos presentados por los macrfagos y segregan interleucinas-4; estos mediadores qumicos actan en los linfocitos B, que maduran a clulas plasmticas y segregan anticuerpos del tipo de las IgE, llamados tambin reaginas. Estos anticuerpos estn destinados a unirse a receptores especficos de membrana en clulas como los mastocitos de los tejidos y los leucocitos basfilos de la sangre. Y aqu acaba todo en una primera instancia, con los mastocitos y los basfilos recubiertos de IgE. El segundo contacto con el alrgeno provoca que las molculas alrgenas se unan a las IgE adheridas a los mastocitos y a los basfilos, lo que a su vez activa una cascada de reacciones enzimticas en el interior de estas clulas. Como resultado de ello, se liberan al exterior los mediadores qumicos alrgicos que hay en los mastocitos y en los basfilos. El ms importante de los mediadores alrgicos y el que produce efectos ms nocivos es la histamina1. En el cuadro II se muestran sus principales efectos y los sntomas que aparecen cuando se libera. Otros mediadores son la serotonina, la prostaglandina D, la bradiquinina y el factor activador de las plaquetas. Estos mediadores alrgicos provocan efectos perjudiciales ms o menos graves que pueden conducir incluso a la muerte del animal: es el denominado shock anafilctico, que se produce a los pocos minutos de la segunda exposicin al alrgeno. El shock anafilctico es, por lo tanto, un caso de hipersensibilidad inmediata. En los mamferos, el shock anafilctico produce, entre otros efectos fisiolgicos, la constriccin de los bronquios, la obstruccin de los capilares pulmonares por trombos constituidos por plaquetas y leucocitos, urticaria, hemorragias intestinales e insuficiencia cardaca. Otros ejemplos de hipersensibilidad inmediata
400

Pueden producirse ataques de corazn potencialmente fatales a consecuencia de una cada grave de la presin sangunea. La dilatacin de los grandes vasos sanguneos contribuye a un accidente cerebrovascular, disminucin de la presin sangunea que afecta al corazn y al cerebro. Algunas veces se producen nuseas, vmitos, espasmos abdominales y diarrea.

Las erupciones cutneas, la urticaria por ejemplo, son los sntomas ms comunes.

4 Efectos que puede producir en las personas hipersensibles la simple picadura de una abeja despus de difundirse por la sangre el veneno del animal. Los mastocitos sensibilizados liberan los mediadores alrgicos y se produce el shock anafilctico generalizado de inmediato.

En algunas ocasiones, los fenmenos de alergia o hipersensibilidad aparecen al cabo de varias horas o das de la segunda exposicin al alrgeno, lo que se denomina hipersensibilidad retardada. Este tipo de
1

La histamina, aparte de sus efectos negativos en los fenmenos de hipersensibilidad, es una sustancia que tiene efectos positivos en la respuesta inflamatoria en casos de lesin de tejidos, ya que, al ser segregada, provoca vasodilatacin y el aumento de permeabilidad de los vasos, con lo que llegan ms clulas defensivas y reparadoras al tejido daado.

Anomalas de hipersensibilidad Shock anafilctico Asma bronquial Urticaria Fiebre del heno Rinitis alrgica Dermatitis

Principales sntomas Hipotensin arterial, insuficiencia cardaca, constriccin bronquiolar Dificultad e insuficiencia respiratoria Erupciones cutneas y picor Conjuntivitis, rinitis, fiebre, dolor de cabeza, insomnio, anorexia Estornudos seguidos, secrecin nasal abundante Picor, aparicin de vesculas y costras en la piel

Estructura afectada Aparato circulatorio, aparato respiratorio Bronquios Dermis de la piel Mucosa nasal, faringe y conjuntiva del ojo Mucosa nasal Piel

CUADRO III. Principales anomalas de hipersensibilidad y sus manifestaciones.

hipersensibilidad est mediada por clulas. Los linfocitos T, activados ante el segundo contacto con el alrgeno, segregan varios tipos de interleucinas e interfern , que son los responsables de la activacin de los macrfagos y de la atraccin de stos y de otras clulas, como los monocitos y los neutrfilos, hacia los tejidos afectados. En la hipersensibilidad retardada, los macrfagos activados tienden a adherirse unos con otros en la zona afectada formndose ndulos granulosos y liberndose enzimas hidrolticas que pueden destruir los tejidos circundantes. Una de las reacciones de hipersensibilidad retardada ms conocida es la que ocurre cuando se in-

yectan bacilos de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis) a cobayas que previamente ya haban padecido la enfermedad. Los animales sufren una inflamacin de la zona inyectada mayor que la que aparece en los animales tambin inyectados pero que no haban estado enfermos de tuberculosis. Esto se utiliza en la actualidad para apreciar si una persona ha sufrido o no anteriormente la tuberculosis; es la llamada prueba de la tuberculina. Otros microorganismos que pueden producir fenmenos de hipersensibilidad retardada son bacterias como el bacilo de la lepra, hongos como Candida albicans, virus como el Herpes y protozoos como Leishmania.

La inmunodeficiencia

Se entiende por inmunodeficiencia la incapacidad del sistema inmunitario de atajar las infecciones microbianas. Las causas pueden ser diversas, como trastornos genticos (y, por tanto, hereditarios), fallos en el desarrollo normal de los rganos linfoides primarios o secundarios o bien infecciones vricas. Las inmunodeficiencias conducen a que las personas que las tienen sean extremadamente sensibles a las infecciones microbianas, incluso de aquellos microbios que tienen en condiciones normales una baja patogeneidad, y caigan enfermas de los denominados sndromes de inmunodeficiencia. Estos sndromes o enfermedades pueden ser primarios o congnitos, si ya se nace con ellos, o bien adquiridos, cuando se desarrollan a lo largo de la vida de la persona.

1. La inmunodeficiencia congnita
La inmunodeficiencia congnita es una anomala inmunitaria de tipo gentico, se nace ya con ella y es

hereditaria. La diagnosis de esta inmunodeficiencia son algunas enfermedades infecciosas graves y de tipo repetitivo que aparecen en el nio desde el nacimiento o a los pocos meses de edad. Las inmunodeficiencias de este tipo ms frecuentes se deben a defectos en los linfocitos B que no son capaces de producir anticuerpos normales o en la cantidad necesaria. Tambin pueden deberse al fallo en la sntesis de las protenas que forman el complemento o a linfocitos T que no desarrollan correctamente sus funciones. En algunos casos, el desarrollo anormal de los rganos linfoides como el timo, durante el proceso embrionario, provoca un fallo en la formacin o maduracin de linfocitos T. Si el fallo del aparato inmunolgico se debe a la incapacidad en la produccin de anticuerpos, las anomalas de inmunodeficiencias aparecen a partir de los seis meses de edad, momento en que ya se han perdido la mayora de las IgG recibidas de la madre durante el embarazo a travs de la placenta. En cambio, si el fallo ha ocurrido en la inmunidad inespecfica o bien est relacionado con los linfocitos T, los fenmenos de inmunodeficiencia pueden aparecer desde el mismo momento del nacimiento.
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Cuando hay inmunodeficiencia congnita, microorganismos muy variados, incluso algunos no patgenos, pueden producir infecciones, como, por ejemplo, virus, bacterias (estreptococos, estafilococos, Escherichia coli), hongos y protozoos. Los microbios infecciosos pueden asentarse en diferentes rganos y originar enfermedades muy diversas, generalmente graves como meningitis, gripe, neumonas, otitis, bronquitis, que pueden llevar a la muerte. Los tratamientos, segn el tipo de inmunodeficiencia congnita, van desde la terapia con agentes antimicrobianos especficos (antibiticos, antimicticos), la inyeccin peridica de gammaglobulinas, el aislamiento del paciente en habitaciones estriles (nios burbuja) o el trasplante de mdula sea.

2. La inmunodeficiencia adquirida
La inmunodeficiencia adquirida es la que se consigue con posterioridad al nacimiento, en algn momento de la vida de la persona. Muchos tipos de cncer en estado avanzado inducen secundariamente algn estado de inmunodeficiencia. Son particular-

mente importantes en este aspecto los que afectan a clulas o a rganos del aparato inmunolgico como las leucemias y los linfomas (tumores de los ganglios linfticos). La leucemia linfoide crnica se debe a la proliferacin de un tipo de linfocitos B (monoclonales) anormales de vida media larga que se acumulan en los vasos sanguneos perifricos, en la mdula sea y en los diferentes rganos linfoides. En estos linfocitos B, la produccin de anticuerpos (gammaglobulinas) es muy inferior a la normal, por lo cual las personas que padecen esta enfermedad estn muy expuestas a las infecciones microbianas. Las manifestaciones clnicas de esta leucemia son estado de cansancio, inflamacin de ganglios linfticos e infecciones, apareciendo en general a partir de los 40 aos. Las anemias, las hemorragias y las infecciones que ocurren durante esta enfermedad conducen a la muerte de la persona al cabo de 3-5 aos, aunque se dan casos de supervivencia ms prolongada. La invasin de ciertos microorganismos patgenos, como el virus del SIDA, puede inducir tambin fenmenos de inmunodeficiencia adquirida.

5 El SIDA y el sistema inmunolgico

El SIDA es una enfermedad que ha provocado una gran alarma social, tanto por sus graves efectos como por el rpido incremento que da a da est teniendo el nmero de afectados por ella. El SIDA o Sndrome de Inmuno Deficiencia Adquirida es una enfermedad grave producida por un virus que ataca a clulas del sistema inmunolgico, reduciendo su capacidad y provocando su destruccin. Como consecuencia, el funcionamiento del sistema inmunitario queda muy debilitado. La persona afectada por el virus queda prcticamente indefensa ante gran cantidad de infecciones microbianas y, en ella, la incidencia de algunos tipos de cncer queda aumentada. Las personas infectadas por el virus del SIDA pueden permanecer sin manifestar ningn sntoma de la enfermedad durante meses e incluso aos. Sin embargo, al cabo de este tiempo, se produce un progresivo debilitamiento del sistema defensivo y aparecen una serie de sntomas nerviosos, digestivos e infecciones muy caractersticas que llevan finalmente a la muerte de la persona. Varios casos de neumona detectados en 1981 en homosexuales de la ciudad de Los ngeles llevaron a la deteccin del SIDA por vez primera. La neumona, producida por el protozoo Pneumocystis carinii, generalmente inofensivo, iba acompaada de otras in402
GP120 Bicapa lipdica ARN GP41 P17 P24 Proteasa Cpsida Integrasa Transcriptasa inversa

5 Estructura bidimensional del virus del SIDA (VIH).

fecciones y de sarcoma de Kaposi, un tipo de cncer maligno de la piel. Poco despus, se detectaron nuevos casos en Nueva York y en San Francisco, siempre en hombres homosexuales jvenes que previamente haban disfrutado de muy buena salud. En todos ellos se encontr una cantidad anormalmente baja de linfocitos T colaboradores o linfocitos T4, por lo que se asociaron estos desrdenes con una anomala del sistema inmunitario y en particular con una inmunodeficiencia. A principios de 1982, el Centro de Control de Enfermedades (CDC) de la salud

pblica de los Estados Unidos propuso el nombre de AIDS para referirse a esta enfermedad. Pronto se descubrieron nuevos casos de SIDA no solamente en homosexuales sino tambin en drogadictos que se inyectaban drogas intravenosas, en hemoflicos, en personas que haban recibido transfusiones de sangre, en personas que haban mantenido contactos sexuales con enfermos del SIDA e incluso en nios nacidos de madres afectadas de la enfermedad. Los casos conocidos de SIDA se fueron multiplicando en proporciones espectaculares en cada ao que transcurra (fig. 6), estimndose por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) que en el ao 2000 habr entre 13 y 18 millones de enfermos de SIDA. Se prev adems que la enfermedad se incrementar drsticamente en los pases asiticos en los prximos aos.

Estimacin de la OMS para el ao 2000

CASOS DE SIDA: 13-18 millones

1.000.000

1.250.000

850.000

1986 1988 1990 1991 1992 1993 1994 1995

2000

SEROPOSITIVOS
Aos Australia > 25.000

200.000

> 600.000

60.000

400.000

500.000

1. El virus del SIDA

El virus del SIDA o VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana) fue aislado por vez primera en 1983 por el equipo de Luc Montagnier en el Instituto Pasteur de Pars. Es extremadamente pequeo (1/10.000 mm) y se compone (fig. 5) de un ncleo interno o cpsida de forma troncocnica, hueco y que est constituido por una protena denominada P24. En el interior de la cpsida se encuentra el material gentico del virus en forma de dos hebras de ARN que contienen un total de 9.000 nucletidos y que se encuentran ligadas, cada una de ellas, a una molcula de una enzima, la transcriptasa inversa. Dentro de la cpsida se encuentran tambin otras protenas de tipo enzimtico como la integrasa, una proteasa y una ribonucleasa. Toda la cpsida se halla a su vez rodeada por una envoltura esfrica formada por una capa proteica continua interna (protena P17) y por una bicapa lipdica externa como la que forma las membranas de las clulas eucariotas, a la que se asocian diferentes protenas que se incrustan entre las molculas lipdicas (protenas GP41) o que se proyectan hacia fuera de ellas (protenas GP120). En la actualidad se conoce la existencia de dos cepas o modalidades de virus del SIDA muy similares entre s. Uno de ellos, el VIH-1 es el ms generalizado en todo el mundo y el que produce los efectos ms desvastadores en las personas infectadas. El otro, o VIH-2, ha sido detectado en poblaciones del frica occidental, es menos virulento y se diferencia del VIH-1 en algunas protenas de la envoltura. Se ha comprobado que el material gentico del virus del SIDA est sometido constantemente a mutaciones en su ARN, que se traducen principalmente en modificaciones en la estructura de sus protenas de membrana que actan como antgenos de superficie. ste es uno de los motivos por el cual es extremadamente difcil encontrar una vacuna contra el virus.

Norteamrica > 1 milln

Europa occidental 500.000

Europa oriental Asia central 50.000 Asia oriental 25.000 Sureste Asitico 1,5 millones

frica norte Prximo Oriente > 750.000 Latinoamrica 1 milln frica Subsahariana 7,5 millones

6 Evolucin de los casos declarados de SIDA y estimacin por la OMS para el ao 2000. Se calcula que en 1992 los casos reales de la enfermedad habran sobrepasado ampliamente los 2 millones. En el mapa, distribucin geogrfica de las personas infectadas por el VIH (seropositivas) en 1993.

ocumento 1

Origen y expansin del VIH

Se cree que el virus del SIDA ya se encontraba presente desde hace tiempo en ciertas poblaciones africanas que lo toleraban relativamente bien. El anlisis de sangre congelada tomada en el Zaire en 1959 y la presencia en ella de anticuerpos para el virus, demuestra que el VIH ya se encontraba en la poblacin humana en aquella poca. La administracin de vacunas desde la Segunda Guerra Mundial mediante el uso de jeringas no desechables ha podido contribuir, paradjicamente, a expandir el virus. Hay quien opina que el VIH podra proceder de mutaciones a partir de otros virus que producen inmunodeficiencias en varios primates africanos como el chimpanc, los SIV (Simian Inmunodeficiency Virus), que se encuentran genticamente relacionados con el VIH. Tambin se admite en la actualidad que toda la serie de cambios que ha habido en el mundo industrializado en las ltimas dcadas (migraciones de poblacin, viajes de turismo o negocios, promiscuidad sexual, la drogadiccin por drogas inyectables, etc.) han provocado que el virus, inicialmente aislado, se haya expandido enormemente y por alguna circunstancia an no conocida se haya vuelto mucho ms patgeno.

30-40 millones

403

2. Accin del VIH sobre el sistema inmune

Todos los virus necesitan entrar en el interior de una clula viva para reproducirse, y el VIH no es una excepcin. El VIH es capaz de entrar en la persona a travs de las heridas de la piel o de las mucosas de las aberturas naturales. Ms adelante se vern con ms detalle los diferentes mtodos de contagio del virus. De cualquier manera, el virus llega a la circulacin sangunea mediante la cual se distribuye por todo el cuerpo. Las protenas GP120 de la envoltura del virus son capaces de unirse estrechamente con las protenas CD4 que se encuentran en diferentes tipos de clulas del sistema inmune, pero son en particular los linfocitos T colaboradores o T4 los ms afectados por disponer de gran cantidad de receptores CD4 en sus membranas. Los procesos que ocurren durante la infeccin del virus y su replicacin dentro de las clulas inmunocompetentes se detallan en la figura 7. Hay que decir, no obstante, que, una vez que el material gentico del virus ha quedado integrado en el de la clula inmunitaria, puede quedar inactivo en forma de provirus durante un tiempo ms o menos prolongado antes de comenzar a duplicarse a expensas del material de la clula husped. Finalmente, es-

ta duplicacin ocurre y tambin consecuentemente la produccin de nuevos virus hijos que salen de las clulas infectadas y van a infectar a otras sanas. La infeccin por el VIH produce en las clulas inmunocompetentes una prdida apreciable de sus funciones defensivas y, si la infeccin es elevada, puede llegar a destruir a estas clulas. Al comienzo de la infeccin por el VIH se desarrolla una respuesta inmunolgica intensa, ya que los linfocitos B producen anticuerpos especficos contra las molculas antignicas del virus y los linfocitos T citotxicos se encargan de destruir a las clulas infectadas por ellos. Se cree, sin embargo, que una determinada cantidad de clulas infectadas no son atacadas y en ellas el virus se va replicando lentamente durante meses o aos. Durante este tiempo, las personas infectadas se sienten bien y sin ningn sntoma de la enfermedad: es la llamada fase asintomtica. En el plasma sanguneo de estas personas, no obstante, hay grandes cantidades de anticuerpos contra molculas del VIH (son personas seropositivas) y la proporcin de linfocitos T4 va disminuyendo progresivamente a medida que avanza la infeccin. Finalmente, llegar el momento en que el sistema inmune se haya debilitado tanto que sern generalizadas las infecciones microbianas y se desarrollarn ciertos tipos de tumores: es la fase sintomtica.

7 Mecanismos de accin del virus del SIDA dentro de los linfocitos T. 1. Unin de las protenas GP120 del virus a los receptores CD4 del linfocito. VIH 2. Fusin de la envoltura del virus con la membrana celular del linfocito (husped) y entrada en ste de la nucleocpsida. 1 Receptor 3. Reabsorcin de las protenas de la nucleocpsida y ARN vrico 2 de membrana liberacin del ARN vrico y la transcriptasa inversa. Transcriptasa CD4 4. Accin de la transcriptasa inversa formando una cainversa dena de ADN por cada una de ARN, apareciendo 3 cadenas hbridas ARN-ADN del virus. ADN 5. Degradacin de la cadena de ARN por la ribonuvrico LINFOCITO cleasa y sntesis de nuevas cadenas de ADN, formndose dos dobles cadenas de ADN vricos. NCLEO 6. Entrada de las dobles cadenas de ADN en el ncleo 4 ADN husped del linfocito. 7 7. Integracin de las dobles cadenas de ADN vricas en 6 el ADN del husped mediante la enzima integrasa. Estado de inactividad del ADN vrico como provirus. 8 9 5 8. Expresin del ADN vrico formndose ARN-m de la ARN cpsida y ARN viral. vrico Ribosomas ARNm ARN vrico 9. Migracin de las molculas de ARN-m de la cpsida y de ARN del virus al citoplasma del linfocito. ARNm 10. Formacin de protenas del virus gracias a la accin 10 de los ribosomas del linfocito. 11 11. Reordenacin de las nuevas molculas del virus. 12. Aparicin de abultamientos en la membrana del linfocito por el lugar por donde aparecern los virus hijos. 13. Los abultamientos se hacen mayores, se reorganiza la envoltura del virus con la membrana citoplasmti12 13 ca del linfocito y finalmente los virus hijos se separan de la clula husped.

404

3. Modalidades de contagio del virus del SIDA

El virus del SIDA, a pesar de sus devastadores efectos, es un virus bastante frgil, puesto que tiene escasa supervivencia fuera del organismo y adems es muy sensible al calor, destruyndose ya a la temperatura de 60 C. Aunque an no se sabe cmo controlar y neutralizar al virus, s que se conoce cmo puede transmitirse en la especie humana. Bsicamente hay tres modalidades de contagio: va sangunea, mediante contactos sexuales y por va materno-fetal. A travs de la sangre ocurre cuando sangre de una persona infectada se pone en contacto con la sangre de una persona sana. Para que esto suceda, en la persona sana debe haber alguna lesin en la piel, puesto que la piel intacta es impenetrable para el virus. La modalidad ms frecuente de infeccin va sangunea es mediante el uso de jeringas y agujas contaminadas de uso compartido, cosa que es frecuente entre las personas que se drogan mediante inyeccin intravenosa. Mediante transfusiones de sangre o inyeccin de hemoderivados procedentes de personas infectadas (seropositivas) tambin se puede adquirir el virus; sin embargo, en la actualidad, es muy difcil la infeccin por esta va
PUEDE haber transmisin del VIH
Relacin sexual mediante penetracin vaginal sin profilctico. Relacin sexual mediante penetracin anal sin profilctico. Contacto sexual oral-genital (fellatio y cunnilingus). Transfusiones sanguneas. Jeringas y agujas contaminadas y compartidas. A travs de la placenta. En el momento del parto. Durante la lactancia con leche materna. Agujas de acupuntura (riesgo terico, no se han descrito casos). Agujas de tatuaje (riesgo terico, no se han descrito casos). Hojas de afeitar (riesgo terico, no se han descrito casos).

ya que desde 1987 en todas las donaciones de sangre se efecta una prueba obligatoria de deteccin de anticuerpos anti-VIH, aceptndose slo la sangre de las personas seronegativas. La transmisin mediante relaciones sexuales es la ms generalizada en la actualidad. La presencia de VIH en las secreciones vaginales y en el esperma, as como la fragilidad de las mucosas genitales, que sufren microlesiones durante la penetracin, permiten que el VIH se ponga en contacto con la sangre del receptor sano. Las prcticas anales comportan ms riesgo de infeccin, puesto que la mucosa rectal es mucho ms fina que la vaginal y es ms fcil que sufra lesiones. Las infecciones causadas por enfermedades de transmisin sexual en un miembro de la pareja (gonorrea, sfilis, herpes genital, etc.) aumentan las probabilidades de infeccin por el VIH. Existe un alto riesgo de contagio en contactos sexuales con personas que ejercen la prostitucin, en individuos promiscuos que tienen relaciones sexuales con personas diferentes y en el mundo homosexual masculino. Aunque el riesgo de contagio crece al aumentar el nmero de contactos sexuales, en teora, uno solo de estos contactos es suficiente para adquirir el VIH. En las relaciones heterosexuales, durante el perodo menstrual de la mujer es cuando hay mayor riesgo de contagio debido al flujo de sangre. Finalmente, se ha demostrado que el riesgo de infeccin es mayor en el sentido hombre-mujer que en el sentido contrario. El contagio materno-fetal nicamente se produce si la mujer embarazada est infectada por el VIH, ya que ste es capaz de atravesar la placenta y llegar a la sangre del feto. Asimismo, el feto puede infectarse en el mismo momento del parto, ya que en este momento se producen microlesiones tanto en el canal del parto (vagina) como en la piel del recin nacido. Se ha estimado que la probabilidad de que una mujer seropositiva d a luz a un hijo infectado est entre un 20 % y un 50 %, por lo que a estas mujeres se les recomienda que no queden embarazadas. La lactancia materna tambin es un medio de contagio, ya que la leche materna de madres seropositivas tiene grandes cantidades de VIH.
CUESTIONARIO 2
1. Bajo qu condiciones, microorganismos que no son patgenos pueden adquirir esta facultad y producir graves infecciones? 2. A qu se debe la leucemia linfoide crnica? 3. Qu importancia tiene la transcriptasa inversa en el ciclo del virus del SIDA?

NO hay transmisin del VIH

Por la comida y por la bebida. Por los besos en la mejilla y profundos sin lesin en mucosa. Por estrechar la mano. Por el sanitario y en las duchas pblicas. Por los animales domsticos. Por la visita a un hospital o al mdico. Por uso del telfono pblico. Por ir a una piscina pblica. Por ir a una escuela donde haya nios seropositivos. Por donar sangre. Por tomar medios pblicos de transporte.

CUADRO IV. Sobre el contagio del VIH.

405

Casos acumulativos por milln de habitantes

180 160 140 120 100 80 60 40 20
< 50 50-100 100-150 150-200 < 200 > 200 de habitantes

Casos por milln

82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94

8 Distribucin de la epidemia del SIDA en Espaa. En el mapa, las diferentes provincias estn coloreadas segn el nmero de casos acumulados de SIDA por milln de habitantes (datos de junio de 1995). En el diagrama de barras, evolucin del nmero acumulativo de casos por milln de habitantes desde que se detect la enfermedad en 1982. El dato de 1994 indica que, desgraciadamente, Espaa se encuentra en cabeza destacada entre los pases europeos en cuanto al nmero acumulado de enfermos por milln de habitantes. En septiembre de 1995, el nmero total de enfermos declarados de SIDA en Espaa era de 34.618.

4. Fases y sntomas del SIDA

Despus de la entrada del virus, hay una fase de incubacin que dura entre 1 y 6 semanas en la que no se aprecia ningn sntoma de su presencia. A continuacin, y debido a la proliferacin del virus en las clulas inmunocompetentes, hay una fase de infeccin aguda que comporta sntomas parecidos a los gripales con estados febriles, dolores articulares y musculares, nuseas, vmitos, diarreas, etc., que remiten al cabo de unas dos semanas. En algunas personas infectadas, estos sntomas de la fase aguda no son apreciables. Al cabo de 1 a 4 meses la persona infectada comienza a producir anticuerpos anti-VIH que, aunque no son suficientes para destruir al virus, s que lo mantienen a raya transitoriamente y reducen la fase aguda de infeccin. A partir de este momento, las personas son portadores de anticuerpos anti-VIH o seropositivas y se inicia la fase asintomtica que puede durar hasta 10 aos y en la que los sntomas graves de la enfermedad no aparecen. Sin embargo, s que pueden detectarse en aproximadamente el 20 % de los seropositivos algunos sntomas menores como inflamacin de los ganglios linfticos, fiebre y sudores nocturnos, ligera prdida de peso (10 % o ms del peso corporal), sensacin de cansancio y diarreas persistentes. Aunque estos sntomas menores pueden tener diferentes orgenes infecciosos, puede ser significativo, como indicativo de la infeccin por el VIH, su carcter de persistencia. Cuando el aparato inmunitario ya est fuertemente deteriorado por la infeccin del VIH, comienza la fase sintomtica con manifestaciones graves que son
406

las que caracterizan a la enfermedad del SIDA. Se calcula que alrededor del 60 % de los portadores del VIH desarrollan la enfermedad dentro de los 10 aos de la penetracin del virus en su organismo. Las manifestaciones graves del SIDA son las siguientes: Sistema nervioso: afecciones neurolgicas que provocan la encefalopata por VIH (prdida de fuerza muscular, parlisis, disminucin de las facultades mentales, disminucin de la agudeza visual y descoordinacin). Aparato digestivo: diarreas continuadas, gran prdida de peso, prdida de apetito, cansancio y debilidad, lo que se denomina caquexia por el VIH. Infecciones oportunistas producidas por microorganismos que ven abonado el campo debido a la disminucin importante de las defensas inmunolgicas. Las enfermedades ms importantes producidas por estas infecciones en enfermos de SIDA estn reflejadas en el cuadro V que aparece al final del epgrafe. Incidencia de cnceres malignos oportunistas como el sarcoma de Kaposi (30-40 % de los enfermos de SIDA lo padecen) que afecta a la piel y a las mucosas y que se detecta por la aparicin de manchas de color violceo y los linfomas o tumores del tejido linftico. La enfermedad del SIDA va evolucionando alternando etapas de mejora y de recada, gracias al perfeccionamiento en el uso de agentes antiinfecciosos contra los microbios oportunistas. Sin embargo, tres aos despus de haber sido detectado el SIDA, la mortalidad de los afectados llega al 95 %.

Enfermedad Neumona Meningoencefalitis Herpes cutnea Esofagitis Diarreas digestivas crnicas Tuberculosis

Microorganismo Pneumocystis carinii (protozoo) Toxoplasma gondii (protozoo) Virus del herpes Candida albicans (hongo) Varios microorganismos Mycobacterium tuberculosis (bacteria) Pulmones

rgano

Encfalo y meninges nerviosas Piel Mucosa bucal y esfago Tubo digestivo Pulmones y tejidos extrapulmonares

CUADRO V. Principales infecciones que sufren los afectados por el SIDA en la fase sintomtica.

5. Diagnosis y tratamiento del SIDA

La diagnosis del SIDA se efecta por mtodos indirectos mediante la extraccin de sangre de la persona, cuyo suero se pone en contacto con antgenos del VIH. De esta manera, se detecta la presencia de anticuerpos anti-VIH. A esta sencilla prueba se le denomina mtodo ELISA y en la actualidad es obligatoria para todas aquellas personas que pretenden donar sangre, rganos, tejidos, vulos o esperma, y se aconseja realizarla voluntariamente si se ha estado sometido a situaciones de riesgo o si se va a establecer una nueva relacin sexual. No existe actualmente ningn medicamento que permita atacar el origen del SIDA, esto es, destruir el VIH y eliminarlo del organismo. En cambio, s que se han descubierto recientemente frmacos que ralentizan el proceso de reproduccin del VIH, con lo que se alarga la supervivencia de los enfermos. La contrapartida a estos descubrimientos es que estos productos son ciertamente txicos y deben ser utilizados en dosis muy pequeas para evitar males secundarios.

9 Microfotografa del virus del SIDA.

ocumento 2

Entre estos frmacos se encuentran el AZT (azidotimidina), el DDI (didedoxiinosina), el DDC (didedoxicitidina) y las antiproteasas, algunos de ellos todava en fase de experimentacin. De todos ellos, el ms conocido y el que tiene mejores resultados teraputicos es el AZT, un producto que al penetrar en las clulas infectadas por el VIH inhibe la enzima transcriptasa inversa, impidiendo, por lo tanto, la formacin de molculas de ADN a partir del ARN del virus, con lo que se detiene la formacin de nuevas molculas de VIH. El tratamiento con AZT disminuye la incidencia de infecciones oportunistas pero en algunos casos provoca efectos secundarios muy graves. En estos momentos se estn probando terapias de combinacin de medicamentos como la triple, compuesta de un inhibidor de la proteasa (nelfinavir) y dos inhibidores de la transcriptasa inversa (zidovudina y lamivudina), en la que se tienen puestas muchas esperanzas. La investigacin en este campo sigue abierta.
CUESTIONARIO 3
1. Indica cinco maneras por las que una persona puede infectarse con el virus del SIDA. Se puede transmitir el virus en las donaciones de sangre? En qu condiciones? 2. Cules son las fases que se pueden apreciar en la infeccin del virus del SIDA? 3. Qu es el AZT?

Prevencin del SIDA

Ante la carencia de teraputicas seguras y definitivas ante el SIDA, se est poniendo especial nfasis en la divulgacin de las pautas de comportamiento bsicas para evitar la infeccin. En las relaciones sexuales estn la fidelidad a la pareja, o en caso contrario, la utilizacin de profilcticos. En cuanto a los contagios va sangunea, evitar el contacto con sangre o mucosas de otras personas, no compartir nunca jeringas ya utilizadas, como tampoco hojas de afeitar, cortaas u objetos punzantes o cepillos de dientes. En centros hospitalarios y farmacuticos, el control a que estn sometidos la sangre, el plasma, tejidos y rganos para trasplantes hace prcticamente imposible, hoy da, la infeccin por transfusiones o trasplante de rganos y tejidos. La recomendacin de no tener hijos a mujeres y hombres seropositivos tambin hay que contemplarlas como medidas preventivas.

407

6 Los trasplantes y los fenmenos de rechazo

1. Los trasplantes y sus clases
Generalmente, cuando se procede a efectuar un injerto o trasplante de un rgano ocurren una serie de fenmenos en la persona receptora que conducen generalmente a que el injerto u rgano sea rechazado. La causa de este rechazo es la puesta en marcha del sistema inmunolgico del receptor, que reconoce molculas del injerto u rgano trasplantado como extraas al organismo y las atacan desde mltiples frentes. El grado de respuesta inmunolgico depende del origen del rgano trasplantado. Segn la procedencia del rgano, se habla de autoinjerto, si procede de la misma persona, como por ejemplo los de piel de una a otra zona del cuerpo; de isoinjerto, si procede de otra persona diferente pero de la misma constitucin gentica, como ocurre entre gemelos monovitelinos; de aloinjerto, si procede de otra persona distinta y de diferente constitucin gentica; y finalmente de xenoinjerto, si el rgano trasplantado procede de un individuo de otra especie diferente de la del receptor. Obviamente, hay un progresivo aumento de respuestas inmunolgicas desde los autoinjertos hasta los xenoinjertos debido a que disminuye la compatibilidad de tejidos entre el donante y el receptor. citos T y B, a la de los macrfagos, a la formacin de complejos anticuerpo-complemento en las arteriolas renales y a la accin de plaquetas sanguneas (fig. 10). Cuando parece que el rgano trasplantado se ha adaptado al cuerpo del receptor, puede ocurrir un rechazo tardo o crnico al cabo de tres o ms meses debido a diferentes reacciones de hipersensibilidad contra los tejidos trasplantados. La causa primaria de las reacciones de rechazo estriba en las protenas MHC (HLA en la especie humana) que tienen en su membrana los linfocitos y la gran mayora de las dems clulas. Existe una inmensa variabilidad en cuanto a la estructura de las MHC (o HLA), pero cada individuo tiene su tipo particular que es reconocido por las clulas de su sistema inmunitario. En resumen, el sistema MHC est constituido por diferentes molculas (protenas estructurales de membrana fundamentalmente), de modo que sus mltiples combinaciones dan lugar al mosaico antignico caracterstico de cada individuo. Las molculas MHC de las clulas del tejido trasplantado actan como antgenos extraos y desencadenan el proceso de rechazo. Los mtodos por los que las clulas de los tejidos trasplantados son atacadas por el sistema inmunitario del receptor son muy variados y estn resumidos en la figura 11. No hay ningn problema en los trasplantes en los que los sistemas de histocompatibilidad (protenas MHC o HLA) del donante y de receptor son iguales; pero esto, desgraciadamente, slo ocurre en aquellas personas que tienen una constitucin gentica idntica, como es el caso de los gemelos monovitelinos. Tampoco lo hay en trasplantes de tejidos que no reciben irrigacin sangunea o la tienen muy escasa, como es el caso de la crnea del ojo, ya que en estos casos las clulas extraas no se ponen en contacto con las clulas inmunitarias del receptor y no se desencadena ninguna reaccin inmunolgica. En los dems casos, para disminuir la probabilidad del rechazo se intenta que exista el mximo grado de histocompatibilidad entre donante y receptor, analizndose en ellos el grupo sanguneo y el tipo de HLA que tienen sus clulas. Antes del trasplante se suele someter al futuro receptor a una serie de tratamientos con inmunosupresores, como la ciclosporina, destinados a disminuir la actividad del sistema inmunolgico y su reconocimiento de molculas extraas, lo que puede llevar a problemas de tipo infeccioso si el paciente no se encuentra aislado convenientemente.

2. Clases de rechazo
Se habla de rechazo primario cuando el sistema inmunitario del receptor entra en contacto por vez primera con los tejidos trasplantados y stos finalmente no logran insertarse en el receptor. Debido a la memoria inmunolgica de la persona que recibe el trasplante, si con posterioridad se lleva a cabo un segundo trasplante de tejidos procedentes del mismo donante, se produce un fenmeno de rechazo o rechazo secundario que se realiza ms rpidamente y con efectos ms graves que el primero. Segn los efectos y el momento en que sobrevengan los fenmenos de rechazo se puede hablar de varios tipos. El rechazo hiperagudo ocurre a los pocos minutos de efectuarse el trasplante, y se debe a la presencia de anticuerpos preexistentes en la sangre del receptor y que reconocen a las molculas MHC (protenas del complejo principal de histocompatibilidad) extraas y las destruyen. El rechazo agudo ocurre ms tarde, desde varios das hasta un mes despus del trasplante, y se debe principalmente a la accin de los linfo408

Epidermis del receptor

Tejido injertado

Epidermis del receptor

Vasos sanguneos

3-7 das: revascularizacin

7-10 das: cicatrizacin

7-10 das: infiltracin celular en el tejido injertado Macrfagos Tejido necrtico Linfocitos Monocitos 12-14 das: formacin de trombos sanguneos y necrosis del tejido injertado

12-14 das: aceptacin

Vasos sanguneos daados ACEPTACIN DEL INJERTO RECHAZO DEL INJERTO

10 Fases que ocurren en la aceptacin (A, columna de la izquierda) o rechazo agudo (B, columna de la derecha) de un aloinjerto, como, por ejemplo, un trozo de piel.

Macrfago activado
Fagocitosis

Complemento
Lisis celular

Plaquetas

Adhesin y formacin de trombos

Interfern

Clula del tejido trasplantado

Linfocito T activado

Secrecin de perforinas

Fagocitosis de clulas opsonizadas

Fagocito sanguneo

Interfern

Secrecin de perforinas Antgeno extrao

Clula asesina (NK)

Anticuerpo Activacin

11 Diferentes mtodos de destruccin de las clulas de los tejidos trasplantados.

409

ocumento 3

Reflexin tica sobre la donacin de rganos

En todas las sociedades humanas, el individuo tiene el derecho y la obligacin de luchar contra la enfermedad para conseguir el bienestar que proporciona la vida en salud. El tratamiento contra las enfermedades y los diferentes mtodos utilizados para prevenirlas han creado una inquietud moral en las diferentes culturas que se ha traducido en el establecimiento de unas normas ticas al respecto. En la cultura occidental, los trasplantes de tejidos o de rganos no se han visto exentos de la aparicin de una biotica que marque las principales pautas que deben regular los trasplantes. Las exigencias ticas de los trasplantes abarcan no slo los problemas tcnicos de la propia intervencin quirrgica sino tambin los aspectos sociales y personales que acompaan a la accin del trasplante. La valoracin moral de los trasplantes gener una gran controversia hace algunas dcadas pero en la actualidad el inters se centra ms bien en los problemas tcnicos del trasplante y en los fenmenos de rechazo. Los autoinjertos o autotrasplantes no conllevan ningn tipo de problema tico puesto que es la misma persona la que proporciona el tejido injertado, como ocurre en los injertos de tejidos en personas quemadas. Los trasplantes entre personas vivas diferentes, en principio no plantean problemas ticos cuando se trata de trasplantes de partes pequeas del cuerpo del donante que no afectan de manera importante a sus principales funciones y que con el tiempo se pueden regenerar, como es el caso de transfusiones de sangre, de porciones de piel o de hueso. Los trasplantes de rganos vitales, como el rin, entre personas vivas, plantearon en su da numerosos problemas de tipo tico entre algunos moralistas, quienes defendan que no es tico hacer un mal (en este caso, una mutilacin como es la extraccin de un rin) para conseguir un bien en otra persona. Hoy en da, este tipo de trasplantes estn ampliamente admitidos por la opinin pblica y por la mayora de moralistas, porque los avances de la medicina han conducido a que existan muy pocos riesgos para el donante y para el receptor, y tambin por los valores de solidaridad humana que conllevan. Sin embargo, son necesarias una serie de normas, entre las cuales se pueden citar: Que el donante aporte su rgano con total libertad. Que el trasplante sea necesario y que exista una correcta relacin entre el beneficio que se puede conseguir con l y el dao que se pueda producir en el donante. Que la operacin que se realice tenga serias probabilidades de xito. Los trasplantes de rganos procedentes de cadveres no plantean problemas de tipo tico. No es un requisito ni siquiera que el difunto hubiera expresado en vida su consentimiento para la utilizacin de sus rganos, ya que la autorizacin la pueden dar sus familiares directos despus de la muerte. El nico problema que existe es determinar exactamente la muerte de la persona, que debe coincidir con la muerte cerebral. ticamente no es correcto utilizar para los trasplantes slo los cadveres de indigentes o personas sin familia, como tampoco lo es comerciar con los rganos de los cadveres. En el futuro se pueden plantear problemas de tipo tico si llegan a ser viables los trasplantes de tejido cerebral, que podran alterar la personalidad del receptor, o los de rganos genitales.

cncer y el reconocimiento inmunolgico. 7 El Mtodos de deteccin precoz del cncer

1. Las clulas cancerosas
En condiciones normales, las clulas de los tejidos de los animales tienen un funcionamiento perfectamente controlado. Sin embargo, en ocasiones, un grupo de clulas se reproduce anrquicamente, sin seguir las normas genticamente establecidas del tejido donde se encuentran, originando un ncleo de clulas anormales. Esto motiva que el rgano donde se encuentran quede afectado en su morfologa, en su tamao y en su fisiologa y que las clulas normales queden daadas. Se habla entonces de tumor o neoplasia.
410

Un tumor cuyas clulas no se multiplican indefinidamente y permanecen localizadas en un rgano determinado se dice que es benigno. En cambio, es maligno otro que crece continuamente y cuyas clulas son capaces de invadir rganos cercanos. El trmino de cncer es sinnimo de tumor maligno. Se habla de metstasis para referirse a aquellas clulas anormales o cancerosas que escapan del rgano daado y emigran va sangunea a otros rganos sanos donde pueden desarrollar tambin otros tumores (fig. 12). Los efectos del cncer pueden provocar

el debilitamiento general del individuo y la alteracin de algunas de sus funciones que conducen en muchos casos a la muerte de la persona. Las clulas normales de los tejidos pueden transformarse en cancerosas mediante agentes qumicos (como el metilcolantreno) o fsicos (como la luz ultravioleta), denominados carcingenos, o bien por la accin de ciertos virus. En este ltimo caso, los virus inducen cncer debido a la expresin de los llamados oncogenes o genes del cncer. En ciertos casos, las clulas normales se transforman en cancerosas espontneamente, debido posiblemente a mutaciones al azar.
PROPIEDADES DE LAS CLULAS CANCEROSAS Origen clonal a partir de una sola clula. Proliferacin indefinida. Actividad bioqumica alterada. Citoesqueleto anormal. Anomalas cromosmicas como aneuploidas.

tienen las clulas normales. Son los antgenos tumorales (fig. 13). Estos antgenos tumorales son especficos para cada tipo de clulas cancerosas. Los antgenos tumorales determinan la puesta en marcha del sistema inmunitario como la produccin de anticuerpos especficos y la actividad de los linfocitos T citotxicos, de las clulas asesinas (NK) y de los macrfagos. Sin embargo, la respuesta inmune a las clulas cancergenas es en muchos casos ineficaz como lo demuestran las estadsticas de personas fallecidas cada ao por los diferentes tipos de cncer. Los mecanismos por los cuales las clulas cancerosas escapan a la accin del sistema inmunitario no estn nada claros. Se postula que las clulas cancerosas tendran capacidad de modular sus antgenos tumorales de modo que stos desapareceran de la superficie de las clulas en presencia de anticuerpos sanguneos especficos, con lo cual no seran reconocidas como extraas. Tambin se ha observado que las clulas cancerosas tienen una cantidad muy baja de molculas MHC en su membrana, lo que determinara que los linfocitos T citotxicos no lograran reconocerlas de manera adecuada.
c Tumor maligno Clula cancerosa invasora

Las clulas cancerosas tienen en su superficie celular molculas antignicas diferentes de las que
a Clula cancerosa

Vaso sanguneo

Tumor benigno

d Clulas cancerosas invadiendo vasos sanguneos

12 Fases en el crecimiento de un tumor y formacin de metstasis. a) Una clula aislada del tejido desarrolla una morfologa distinta y adquiere una alta tasa de multiplicacin, con lo que se convierte en clula cancerosa. b) Las clulas cancerosas proliferan y forman una masa localizada en el tejido o tumor benigno. c) Las clulas tumorales adquieren la propiedad de invadir los tejidos circundantes, con lo que se ha formado un tumor maligno. d) Clulas cancergenas migradoras alcanzan los vasos sanguneos y pueden llegar a otros rganos alejados donde formarn ncleos de clulas cancergenas o metstasis.

2. El diagnstico precoz del cncer

La lucha contra los tumores malignos se basa en el diagnstico precoz de los mismos, cuando estn bien localizados y an no ha comenzado la fase invasora de la metstasis. Es en estos momentos en los que es preciso intervenir quirrgicamente para extirpar el tumor. Sin embargo, el perodo preclnico u oculto de muchos tipos de cncer puede durar aos, de modo que, cuando se detecta, la intervencin mdica casi siempre suele ser tarda, retrasndose la evolucin de

la enfermedad cancerosa en todo caso slo algunos meses. Los mtodos preventivos contra el cncer son por el momento el control sanitario de sustancias de las que se ha demostrado su accin carcinognica, como el tabaco, algunas anilinas, las radiaciones ionizantes, ciertas hormonas, etc. Se necesita estudiar la supuesta accin carcinognica de otras sustancias, as como potenciar la investigacin para que sea el propio sistema inmunolgico el que controle el desorden de las clulas tumorales.
411

Clula normal

Clula cancerosa CUESTIONARIO 4

1. Explica las diferencias entre el rechazo agudo y el hiperagudo. 2. Qu misin tiene la ciclosporina en las operaciones de trasplante de rganos? 3. En qu se diferencia un tumor benigno de uno maligno?

Antgenos normales de la superficie celular

4. Cmo escapan las clulas cancerosas a la accin del sistema inmune? Antgenos especficos del tumor 5. Es cierto que los aloinjertos no producen fenmenos de rechazo, especialmente si proceden de familiares del receptor? 6. Qu es la metstasis? Qu efectos tiene?

13 Al ocurrir la transformacin de las clulas normales en cancerosas aparecen en la superficie de estas ltimas complejos proteicos que se convierten en antgenos de superficie tumorales especficos.

La inmunoterapia

El actual conocimiento del sistema inmunitario y de su funcionamiento ha permitido la puesta en marcha de procedimientos basados en el propio sistema de defensa para lograr vencer los microorganismos infecciosos o suplir las deficiencias del sistema inmunolgico en algunas enfermedades y en el cncer, lo que se denomina inmunoterapia. En el tratamiento contra las anomalas de autoinmunidad se debe procurar la reduccin de la respuesta autoinmune manteniendo intacta la res-

puesta inmune normal. Sin embargo, esto ltimo no se ha podido conseguir hasta el momento. Un tratamiento inespecfico contra muchas enfermedades de autoinmunidad son las drogas inmunosupresoras como los corticoesteroides, la azatioprina o la ciclosporina A, que disminuyen la proliferacin de linfocitos pero que exponen al paciente al riesgo de infecciones. La extirpacin de la glndula tiroides y la plasmafresis, o centrifugacin del plasma sanguneo del paciente para eliminar los complejos autoantgenos-autoanticuerpos, son tambin mtodos generales utilizados para paliar los fenmenos autoinmunes. Se estn experimentando algunas terapias especficas como la utilizacin de sustancias

14 Funcionamiento de una de las vacunas que se estn ensayando contra el virus del SIDA. La inyeccin de un extracto purificado de protenas del virus provoca que el individuo fabrique anticuerpos contra ella, aumentando el nmero de molculas de anticuerpos que podrn actuar contra virus enteros.

VIH

La GP160 es inyectada en un paciente de VIH asintomtico

Antes de la inyeccin

GP160 Anticuerpos contra GP160

Se asla la GP160

Despus de la inyeccin

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bloqueantes de los autoantgenos, o la induccin de la tolerancia a los mismos. La administracin de antihistamnicos o la inyeccin peridica de dosis crecientes de alrgenos especficos pueden solucionar algunos de los problemas que aparecen en la hipersensibilidad inmediata. En las inmunodeficiencias el tratamiento consiste en mantener un nivel adecuado de IgG o gammaglobulinas mediante inyecciones peridicas de estos anticuerpos. En el caso especial del SIDA se estn ensayando diversos tipos de vacunas (figura 14), pero hasta el momento estas pruebas no han dado resultado positivo, entre otros motivos, por el hecho de la gran capacidad de variacin antignica que exhibe el VIH, lo que las hace inefectivas al poco tiempo. La lucha contra el rechazo de los rganos en los trasplantes se efecta mediante agentes inmunosupresores inespecficos, como corticoesteroides y la

ciclosporina A, o bien mediante irradiacin de rayos X de los rganos linfoides (timo, bazo y ganglios linfticos) que reducen la poblacin de linfocitos, con lo que la probabilidad del rechazo se atena. La inmunoterapia del cncer est muy desarrollada, existiendo en la actualidad varias tcnicas, la mayora de las cuales tienden a aumentar los mecanismos de defensa del organismo. Algunas sustancias, inyectadas localmente en el ncleo cancergeno, pueden estimular la activacin de los macrfagos y la produccin de interleucina. Los mensajeros qumicos del sistema inmunitario como el interfern pueden ser utilizados en la terapia del cncer para aumentar los ataques contra los antgenos de las clulas cancergenas (fig. 15). En la actualidad se est investigando en la terapia gentica contra el cncer, insertando en el cdigo gentico de clulas cancerosas genes especficos que aumentan la actividad del sistema inmunitario o descubriendo tcnicas para inhibir la actividad de los oncogenes.
Enfermedad Difteria Origen del suero Suero de caballo Suero de caballo Suero de caballo Suero con IgG humana Suero con IgG humana o suero de caballo Suero con IgG humana Suero con IgG humana

Molcula de MHC

Clula T

Botulismo Picadura de serpiente Hepatitis A y B Ttanos Rabia

Antgeno tumoral Macrfago

Clula T

Sarampin

CUADRO VI. Sueros para inmunizacin pasiva.

Interfern

2 meses 4 meses 6 meses 15 meses 15-24 meses

Vacuna triple (difteria-tos ferina-ttanos) y vacuna de la polio Vacuna triple (segunda dosis) y vacuna de la polio (segunda dosis) Vacuna triple (tercera dosis) Vacuna sarampin - paperas - rubola Vacuna triple (primer recordatorio) Vacuna de la polio (primer recordatorio)

18 meses-5 aos Vacuna de la meningitis bacteriana 4-6 aos 15 El interfern en la inmunoterapia del cncer. Los antgenos tumorales deben ser presentados a los linfocitos T unidos a molculas MHC para que se empiece a desarrollar la respuesta inmunolgica. El interfern aumenta este efecto de presentacin, con lo que se consigue activar una mayor cantidad de clulas T. Vacuna triple (segundo recordatorio) Vacuna sarampin - paperas - rubola (segunda dosis) Vacuna difteria-ttanos

4-16 aos

CUADRO VII. Periodizacin de la rutina de vacunas en la infancia y pubertad.

413

9 Sueros y vacunas. Importancia industrial de su fabricacin

Durante el presente siglo, los avances para la erradicacin de enfermedades infecciosas que afectan a las poblaciones humanas han sido espectaculares. A ello han contribuido de manera importante el descubrimiento de vacunas y sueros que han permitido inmunizar activa o pasivamente a millones de personas. En las ltimas tres dcadas, la vacunacin de nios del Tercer Mundo ha pasado del 5 % a cerca del 80 % en 1995 (datos de la OMS). La inmunizacin pasiva mediante sueros que llevan anticuerpos (IgG) preformados slo debe efectuarse en casos de extrema necesidad, puesto que pueden existir respuestas inmunolgicas en el paciente que recibe el suero ajeno. Si el suero con anticuerpos preformados procede de otro animal, como el caballo, el receptor puede formar IgE especficas contra esos anticuerpos que pretenden curar la enfermedad. Los complejos IgE-anticuerpos del suero del caballo pueden activar la liberacin de mediadores qumicos como la histamina y provocar una reaccin anafilctica. La inyeccin de IgG humanas lleva menos riesgo de respuesta inmune de tipo hipersensible. Se utilizan algunos sueros para conseguir inmunizacin inmediata en personas enfermas o que poseen toxinas debidas a picaduras de animales (ver cuadro VI). Las actuales vacunas estn constituidas por microorganismos atenuados (tuberculosis, sarampin, rubola), por microorganismos muertos pero que tienen todava capacidad antignica (clera, polio, rabia) o por macromolculas purificadas del microorganismo (meningitis, difteria, ttanos). Las vacunas de microorganismos atenuados tienen un alto poder inmunognico y se administran en una sola dosis; por el contrario, tienen el riesgo de poderse convertir en virulentas. Las vacunas de microorganismos muertos por el calor, sea por sustancias qumicas o por rayos , no se convierten en virulentas pero necesitan de varias dosis para que produzcan sus efectos. Las vacunas de macromolculas antignicas de microorganismos tienen el inconveniente de que es difcil disponer de una suficiente cantidad del componente purificado. En la actualidad es posible aislar los genes que codifican determinantes antignicos en los microorganismos. Estos genes pueden ser introducidos en bacterias, levaduras o cultivos de clulas de mamferos donde son clonados y donde producen grandes canti414

dades de un determinante antignico especfico que posteriormente es utilizado para elaborar la vacuna correspondiente. La ingeniera gentica est siendo utilizada para maximizar las respuestas inmunolgicas de las personas contra los antgenos de los microorganismos, diseando vacunas que hagan resaltar la inmunidad celular o la humoral. La inmunizacin mediante vacunas persigue que sea el propio organismo el que dirija la respuesta inmunolgica contra los microorganismos patgenos a la par que se genera una memoria inmunolgica ante ellos, de modo que este mtodo de inmunizacin es activo. La administracin de vacunas ha determinado que decaiga drsticamente la incidencia de enfermedades infecciosas en las poblaciones humanas, especialmente en los nios, en los que se sigue un mtodo rutinario de vacunacin con la edad (cuadro VII).

ocumento 4

Las vacunas en el mundo

A pesar de todos estos avances en el campo de la inmunizacin, se calcula que cada ao mueren ms de cinco millones de nios por enfermedades que podran ser evitadas con una vacuna. Obstculos de ndole econmica determinan que la vacunacin an no alcance a todas las reas del Tercer Mundo, de aqu la importancia de encontrar metodologas de obtencin de vacunas y sueros que abaraten los costes de produccin y que las hagan llegar a todas las poblaciones humanas. Cientficos y organizaciones de todo el mundo luchan denodadamente para descubrir nuevas vacunas contra las enfermedades que asolan las poblaciones humanas en el presente, como la malaria (ms de un milln de muertes cada ao), enfermedades digestivas diarreicas (4-5 millones de personas mueren cada ao), la hepatitis B (mas de 200 millones de personas estn infectadas crnicamente por el virus). Hasta el momento, y a pesar de esfuerzos a nivel cientfico y econmico sin precedentes, no se ha encontrado ninguna vacuna efectiva contra el virus del SIDA, que ha infectado ya a casi 20 millones de personas.

CUESTIONARIO 5
1. Indica algunos mtodos utilizados para tratar los fenmenos de autoinmunidad. 2. Qu misin tiene el interfern en la terapia contra el cncer? 3. Qu efecto tiene la irradiacin con rayos X de los rganos linfoides? En qu tipo de tratamientos se utiliza esta terapia?

Direccin de arte: Jos Crespo Proyecto grfico: Pep Carri / Sonia Snchez Equipo de diseo: Rosa Marn, Rosana Naveira, Rosa Barriga y Javier Tejeda Dibujos: Javier de la Hoz, David Cabacas, Carlos Aguilera, Jos Mara Valera y Caty Dez-Hochleitner Coordinacin artstica: Pedro Garca Direccin tcnica: ngel Garca Coordinacin tcnica: Francisco Moral Composicin, confeccin y montaje: Begoa Pascual, Marisa Valbuena y Fernando Calonge Correccin: Gerardo Z. Garca Documentacin y seleccin de fotografas: Nieves Marinas Fotografas: A.G.E. / SCIENCE PHOTO LIBRARY / Mehau Kulyk; A.G.E. FOTOSTOCK; Algar; Angelier / CNRS / BIOL. MOLECULE ET CELLULE DU DEVELOPPEMENT/UNIVERSIT P. ET. M. CURIE-GROUPE GENES ET DEVELOP; BIBLIOTECA NACIONAL, MADRID; C. Jimnez Prez; CNRI; CNRI / ADVANCED IMAGING / PHOTOTAKE, DR. D. KUNKEL / PHOTOTAKE, DR. G. MURTI, INSTITUT PASTEUR, PHOTOTAKE, Pr. CASTANO-OVERSEAS, Pr. J. J. Hauw, Pr. S. CINTI-UNIVERSITE DANCONE, PrG Gimnez Martin, Secchi-lecaque/Roussell-Uclaf; CONTIFOTO / POPPERFOTO; CONTIFOTO / SYGMA / A. H. Bingen, Baldev, Bernard Annebicque, F. Pitchal, J. P. Laffont, James Andanson, Jean-Pierre Amet, CONTIFOTO / VISA REPORTAGE / D. Brandelet; D. Lezama; Doctor Subirana; Dra. M. Durfort; Dra. Nicole Angelier; EFE; EFE / AP PHOTO / Keith Weller; EFE / EPA PHOTO; EFE/SIPA SANT / Florence Durand, Creuzet-Strambi, Dave Gatley, F. Durand, Jean-Michel Delage, Kadir Can, Laski, Martin Sasse, Paul Quayle / Orion, R. Jansson, Von Der Becke; FACULTAD DE BIOLOGA DE BARCELONA; G Y J ESP. EDICIONES; G. Giorcelli; GALERA NACIONAL DE RETRATOS, LONDRES; GARCA-PELAYO/Juancho; G. Rodrguez; HOSPITAL DE LA BEATA, MADRID; INSTITUTO PASTEUR; J. Jaime; J. L. G. Grande; J.Vicente Resino; J. Carlos Muoz; Krauel; M. Moreno; M. Lpez Escribano; MICROS / Jos Mara Blanco Salom; MUSEO COLEGIO CARLO ALBERTO, TURN; MUY INTERESANTE; ORONOZ; P. Esgueva; P. Lpez; ZEISS; ARCHIVO SANTILLANA.

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