Universidade Federal de Minas Gerais

Instituto de Cincias Exatas

Departamento de Qumica Relatrio 1 Cromatografia em camada delgada e cromatografia em coluna
Isabela de Avellar Costa, Ricardo Jos da Silva Jnior
Curso de Farmcia, Turma T5, Professora Henriete da Silva Vieira Belo Horizonte, 10 de abril de 2013

Introduo
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de anlise que possibilita a identificao, purificao e separao de substncias partindo do princpio de diferena de velocidade com que as substncias se movem pela fase estacionria quando arrastadas por um solvente em movimento. Realizaram-se duas tcnicas cromatogrficas para a realizao dos experimentos. A cromatografia em camada delgada (CCD) e a cromatografia em coluna(CC). Na cromatografia em camada delgada, uma placa de vidro coberta com uma fina camada de slica e a amostra aplicada numa extremidade e o solvente empregado em uma cuba de eluio, como mostra a figura 1. So obtidas fraes dessa eluio que normalmente acompanhada pela anlise em CCD. Os objetivos dos experimentos so introduzir as tcnicas de CCD e CC, estudar a fotoisomerizao cis-trans do azobenzeno e extrair pigmentos vegetais e fracionlos por meio de CC.

Materiais e Mtodos
CCD - Parte I Isomerismo cis-trans no Azobenzeno Aplicou-se usando um tudo capilar uma gota da soluo de azobenzeno (ponto de fuso 69C) em uma placa cromatogrfica. Levou-se a placa ao sol por 15 minutos. Em uma cuba seca adicionou-se o solvente Tolueno (ponto de fuso -95C) de modo a atingir no mais que 1cm de altura e um pedao de papel filtro para saturar de vapor a cuba. Retirou-se a placa do sol e aplicou-se a soluo de azobenzeno que ficou no escuro. Introduziu-se a placa na cuba de eluio e deixou-se o eluente subir at cerca de 1cm abaixo da extremidade superior da placa. Removeu-se a placa e marcou-se com um material fino a posio atingida pelo eluente (frente do eluente). Colocou-se a placa na estufa para a evaporao do solvente e mediu-se as distncias entre o ponto de aplicao da amostra e a frente do eluente e tambm a distncia entre o ponto de aplicao e o centro de casa mancha. Fez-se os clculos de Fator de Reteno (Rf) atravs na equao 1. Rf = Distncia percorrida pela subs. = d1 distncia percorrida pelo eluente d2 Equao 1. Clculo de Rf Associou-se as manchas ao cis-azobenzeno e ao trans-azobenzeno. Parte II Identificao dos compostos Benzidrol e Benzofenona

Figura 1. Processo de aplicao e de eluio Como a slica polar, substncias que interagem com a mesma so pouco arrastadas pelo solvente e substncias apolares so mais arrastadas na placa pelo solvente que tambm apolar. Na cromatografia em coluna um tubo de vidro empacotado com a fase estacionria e a eluio feita na vertical com um ou mais solventes (figura 2).

Figura 2. Coluna de eluio

Transferiu-se a ajuda de uma esptula pequena quantidade de uma substncia desconhecida

(substncia A) para um vidro de penicilina e dissolveu-se a substncia em trs gotas de acetona (ponto de fuso -94,6C). Aplicou-se duas vezes com um tubo capilar essa soluo em uma placa cromatogrfica. Pegou-se outro vidro de penicilina e adicionou-se pequena quantidade de outra substncia desconhecida (substncia B). Diluiu-se com trs gotas de acetona e aplicou-se duas vezes na mesma placa cromatogrfica onde foi aplicada a soluo A, porm aplicou-se em pontos diferentes cada substncia. Procedeu-se a eluio da placa com tolueno na cuba, removeu-se a placa aps a eluio, secou-se o solvente da placa na estufa e introduziu-se a placa em uma cuba reveladora contendo iodo. Aguardou-se at completa complexao do iodo para visualizao das manchas. Removeu-se a placa e com uma lapiseira contornou-se as manchas. Fez-se os clculos de Rfs e associou-se as manchas ao Benzidrol (ponto de fuso 65C) e Benzofenona (ponto de fuso 48,5C). CC Extrao e fracionamento de pigmentos vegetais Para o empacotamento da coluna, fixou-se uma coluna de vidro em um conjunto suporte. Com a torneira fechada adicionou-se 10mL de Hexano (ponto de fuso -94C) e um pequeno chumao de algodo na coluna com auxlio de um basto de vidro. Adicionou-se com a ajuda de um funil uma suspenso contendo 5g de slica e hexano de modo a acomodar bem a suspenso na coluna. Para preparar o extrato, pesou-se 10g de folhas de espinafre sem as nervuras centras e ferveu-se em 100mL de gua destilada (ponto de fuso 0C) por 2 minutos em um bquer de 250mL. Desprezou-se a gua na pia, resfriou-se as folhas em gua gelada e secou-se as folhas com papel absorvente. Em um almofariz contendo 15mL de acetona e hexano (1:1) triturou-se as folhas at obter uma soluo verde. Transferiu-se a soluo para um bquer pequeno e adicionou-se 2 pontas de esptulas de slica ao bquer para incorporar o extrato. Colocou-se o bquer no banho maria agitando sempre com o basto para no projetar at o solvente secar completamente, obtendo-se um p bem fino e verde. Para a eluio, com a torneira fechado, colocou-se outro chumao de algodo e o extrato no topo da coluna. Colocou-se o hexano at completar a coluna. Colocou-se embaixo da coluna um erlenmeyer de 125mL, abriu-se a torneira e coletou-se hexano at a 1 banda ficar bem prxima torneira. Fechou-se a torneira, trocou-se o erlenmeyer. Abriu-se a torneira e recolheu-se a 1 banda (Frao I) at o eluente perder a cor. Substitui-se o hexano por acetona e em outro erlenmeyer recolheu-se hexano e acetona at que a 2 banda ficasse bem prxima da torneira. No 4 erlenmeyer recolheu-se ento a 2 banda (frao II) eluda pela acetona. Ao todo utilizou-se

aproximadamente 75mL de hexano e 15mL de acetona para eluir. Mediu-se esses volumes com o auxilio de uma proveta de 25mL.

Resultados e Discusso
CCD No realizou-se a Parte I Isomerismo cistrans no Azobenzeno pois o Azobenzeno havia acabado no laboratrio. Porm pode-se prever o resultado do experimento. O azobenzeno exposto luz produz tanto o isomerismo cis quanto o trans j que sua ligao pode ser quebrada se exposta luz (Figura 3).

Figura 3. Isomerismo cis-trans do Azobenzeno Ento no local de aplicao do azobenzeno exposto apareceriam duas manchas, uma correspondente ao cis-azobenzeno e outra ao trans-azobenzeno e no local de aplicao do azobenzeno no exposto luz s apareceria uma mancha correspondendo ao transazobenzeno. Como pode-se observar pela estrutura molecular do trans e do cis azobenzeno, a isomeria cis mais polar do que a isomeria trans, j que os grupos mais volumosos (C6H5) esto no mesmo lado da molcula. Portanto, a placa ficaria conforme a figura 4.

Figura 4. Placa cromatogrfica aps revelao no iodo Observa-se ento que a amostra que ficou mais prxima do ponto de aplicao correspondente ao cis-azobenzeno que mais polar e interage mais fortemente com a slica da placa. As outras duas machas, mais distantes do ponto de aplicao so correspondentes ao trans-azobenzeno que mais apolar e interagiu mais com o eluente (tolueno). Previu-se esse resultado, entretanto no pde ser possvel prever os clculos de Rfs j que no realizou-se o experimento.

A Parte II Identificao dos compostos Benzidrol e Benzofenona, foi realizada sem nenhum problema. Observou-se na placa duas manchas, uma mais longe do ponto de aplicao e correspondente substncia A e outra mais prxima da placa, correspondente substncia B (figura 5).

analisada e aplicada numa extremidade e o desenvolvimento do cromatograma deve ser feito em atmosfera saturada com o solvente empregado, numa cuba de eluio. 2Em que situaes CCD pode ser utilizada com tcnica de separao/ purificao?

Para, por exemplo, separar compostos orgnicos a partir de extratos naturais. Nesse caso o extrato primeiro submetido cromatografia em coluna e posteriormente cromatografia em camada delgada, onde misturas so identificadas e as substncias separadas. 3Complete a tabela abaixo: Estrutura Substncia Figura 5. Placa cromatogrfica aps revelao na cuba de iodo. Assim concluiu-se que a substncia B mais polar que a substncia A j que interagiu mais fortemente com a slica que tambm polar. Analisou-se a estrutura do benzidrol e da benzofenona (figura 6) e observou-se que o benzidrol mais polar que a benzofenona, pois possu um grupo hidroxila. Polaridade (ordem crescente) Cis Azobenzeno > Trans Azobenzeno Rf

Cisazobenzeno Transazobenzeno Benzidrol

No realizado No realizado

Benzidrol > Benzofenona

0,358

Benzofenona

0,448

Figura 6. Estrutura da benzofenona e do benzidrol Assim associou-se que a substncia A a benzofenona, pois mais apolar e o benzidrol a substncia B, pois mais polar e realizou-se o seguinte clculo de Rf:

4-

Qual azobenzeno foi utilizado na atividade? Justifique.

Utilizou-se o trans-azobenzeno, uma vez que esta sua configurao antes de passar pela fotoisomerizao. Aps este processo, ele transformase em cis-azobenzeno. 5Qual deles o mais estvel? Por qu?

O mais estvel o trans-azobenzeno, pois nesta conformao haver menor repulso entre os grupos, j que os mais volumosos esto em locais opostos. Aps os experimentos respondeu-se o questionrio abaixo: 1Em que consiste a tcnica CCD? 6O que ocorreu durante a irradiao de luz? Equacione a reao qumica correspondente ao processo.

A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs da migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana. Uma placa de vidro revestida com uma fina camada de um material adsorvente (geralmente slicagel) formando as cromatoplacas. A amostra a ser

Os azo-derivados possuem a ligao N=N, que fotoquimicamente sensvel na regio do visvel. Assim, ocorreu a isomerizao do composto, transformando o trans-azobenzeno em cisazobenzeno, como podemos observar na equao qumica abaixo (equao 2):

2-

Considerando que os carotenos apresentam cores prximas do amarelo enquanto as clorofilas so verdes, avalie as polaridades das misturar obtidas e identifique o contedo das mesmas.

Equao 2. Transformao de trans-azobenzeno em cis-azobenzeno pela luz. 7Identifique as substncias A e B.

O caroteno foi extrado com hexano, que um solvente apolar. Portanto o caroteno apolar. J a clorofila foi extrada com a acetona, que um solvente polar. Logo, as clorofilas so polares. 3Correlacione a polaridade com a estrutura qumica dos componentes da mistura.

A substncia A a benzofenona e a B o benzidrol. 8Como a confirmao da identidade dessas substncias poderia ser feita, utilizando CCD?

Devido diferena de polaridade das duas substncias, poderamos utilizar a CCD para confirmar a identidade dessas substncias, analisando-se o quanto cada uma delas foi arrastada pelo solvente. Assim, a que ficasse mais retida seria o Benzidrol e a que fosse mais arrastada seria a Benzofenona. CC Extrao e fracionamento de pigmentos vegetais. Com o experimento de extrao de pigmentos do espinafre extraiu-se duas fraes de pigmentos: uma frao mais apolar e amarela claro, que foi eluda primeiro pelo hexano que tambm apolar e uma frao mais polar e verde, que foi eluda pela acetona que tambm polar. Conhecendo que os dois pigmentos do espinafre so os carotenos, com cor amarelada e a clorofila com cor esverdeada, podese concluir que a frao I era o caroteno e a frao II a clorofila. E observando-se a estrutura das duas substncias (figura 7) nota-se que a clorofila mais polar que o caroteno e por isso foi eluda com a acetona.

Os carotenos so hidrocarbonetos e possuem uma cadeia de carbono longa. Isso confere molcula um carter apolar. J as clorofilas possuem funes como cetonas, steres, aldedos e cidos carboxlicos que confere molcula um carter polar. 4Um aluno leu rapidamente o procedimento experimental e comeou esta prtica, no entanto, ao invs de utilizar inicialmente o hexano ele confundiu e comeou a coluna com acetona. Discuta o que voc acha desta troca de eluentes.

A troca de eluentes no ir separar as substncias e ambas sero arrastadas pelo solvente. Isso ocorre porque a substncia menos polar (caroteno) est interagindo menos com a coluna, e o solvente, mesmo sendo polar, o arrastar juntamente com a clorofila, que polar. 5Faa uma pesquisa sobre outros adsorventes que podem ser utilizados em mtodos de separao por cromatografia em coluna, mostrando qual a diferena entre eles.

Outros adsorventes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de clcio, slica gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. A alumina usada comercialmente pode ser cida, bsica ou neutra. A alumina cida til na separao de cidos carboxlicos e aminocidos; a bsica utilizada para a separao de aminas. Concluso Com os experimentos realizados concluiu-se que ambas as tcnicas de cromatografia so muito eficientes para identificao, separao e identificao de substncias e que normalmente se faz necessria a utilizao concomitante da cromatografia em coluna e da cromatografia em camada delgada. Referncias bibliogrficas Apostila de qumica orgnica experimental para farmcia 2013

Figura 7. Estrutura do caroteno e da clorofila Aps o experimento respondeu-se o questionrio abaixo: 1Consulte na literatura as estruturas dos carotenos e das clorofilas.

As duas estruturas esto presentes na figura 7.