Microbiologia Industrial Aula 10. Resoluo de exerccios para prova 02. Aula 07. Elementos de enzimologia e cintica enzimtica.

1. Os dados cinticos que seguem so da reao catalisada pela prostaglandina endoperxido sintase. Considerando-se apenas os valores das duas primeiras colunas, determine a v mx e o K m da enzima. O ibuprofeno um inibidor da prostaglandina endoperxido sintase. Inibindo a sntese das prontaglandinas, o ibuprofeno reduz a inflamao e a dor. Usando os dados da primeira e terceira colunas da tabela, determine o tipo de inibio que o ibuprofeno exerce sobre a enzima. [cido araquidnico] Velocidade de formao Velocidade de formao do PGG 2 com (mM) do PGG 2 (mM/min) 10mg/mL de ibuprofen (mM/min) 0,5 23,5 16,67 1,0 32,2 25,25 1,5 36,9 30,49 2,5 41,8 37,04 3,5 44,0 38,91 2. A pesar de sua alta especificidade, as enzimas podem sofrer ao de agentes que reduzem sua capacidade de catalisar reaes. Apresente as principais formas de inibio reversveis explique como cada uma atua sobre a enzima e compare as em um grfico apresentando suas peculiaridades. 3. Embora existam mtodos grficos para a determinao precisa dos valores de v mx e k M de uma reao catalisada enzimaticamente, algumas vezes esses valores podem ser estimados rapidamente por inspeo dos valores de v 0 para concentraes crescentes de [S]. Estime os valores de v mx e k M de uma reao enzimtica em que foram obtidos os resultados apresentados a seguir.

4. Determine os valores de v mx e k M para os seguintes resultados obtidos de uma reao enzimtica.

S (M) V 0 (M/min.)

2,5x10-6 28

4,0x10-6 40

1x10-5 70

2x10-5 95

4x10-5 112

1x10-4 128

2x10-3 139

1x10-2 140

2x10-2 140

5.

6. Estudo-se a hidrolise do amido pela enzima alfa amilase e tambm se analisam os efeitos de trs inibidores: maltose, dextrina limite e alfa dextrina. A tabela mostra o melhor ajuste para os pontos experimentais da equao de Michaelis Mente pelo mtodo de Lineweaver Burk para a reao da enzima e para cada inibidor. a) Determine os parmetros cinticos, v mx e k M , em cada caso. b) Determine o tipo de inibio que a maltose, a dextrina limite e a alfa dextrina exercem sobre a enzima alfa amilase. Inibidor No Maltose Dextrina Alfa dextrina Equao = 0,0269 x + 0,0078 = 0,0325 x + 0,0098 = 0,0395 x + 0,0115 = 0,0373 x + 0,0078

y y y y

Aula 08. Crescimento microbiano. 1. Diferencie entre os termos velocidade do crescimento e tempo de generao. 2. Por que o crescimento exponencial origina grandes populaes celulares em curtos perodos de tempo?. 3. O que uma grfica semi logartmica. 4. Imagine uma populao de bactrias dividindo-se por fisso binria em funo do tempo. Quantifique a velocidade de reproduo bacteriana. O tempo voc quem estabelece. Escreva uma expresso matemtica que exprima este comportamento populacional. 5. Calcule o nmero de clulas que uma determinada bactria vai produzir aps 20 geraes. 6. Se um tipo bacteriano leva 25 minutos para se dividir, como o caso da Escherichia coli, o tempo para ocorrerem 20 geraes de.... ? 7. Em que fase da curva de crescimento se dividem as clulas? 8. Quando no ocorre a fase de latncia? 9. Por que as clulas entram em fase estacionaria? 10. Por que um reconto de viveis mias sensvel que um reconto ao microscpio? 11. O que suposio se realiza quando se relaciona o reconto em placa com o numero de clulas. 12. Descreva como se logra uma diluio 10-7 de um cultivo bacteriano. 13. O que a grande anomalia da tcnica de reconto em placa? 14. Candida utilis cresce em glicerol com velocidade especfica de crescimento mxima de =0,095 h-1. Qual o tempo necessrio para esse microrganismo duplicar a sua massa na fase exponencial de crescimento de um processo microbiolgico industrial? 15. Durante o estudo do crescimento de um microorganismo a volume constante foram obtidos os seguintes dados experimentais:

Pede-se: Identificar as diversas fases de crescimento do microrganismo. O tempo que o microrganismo leva para duplicar a sua massa na fase exponencial de crescimento. A produtividade mxima em clulas que pode ser obtida desse processo.
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16. O crescimento de Bacillus subtilis em caldo nutriente medido mediante absorbncia a 620nm, obtm-se os seguinte valores para a fase exponencial do crescimento:

a) Determine o tempo de duplicao. b) Explique o fundamento do mtodo utilizado para medir o crescimento o microbiano.

Aula 09. Meios de cultura, substratos e processos em microbiologia industrial. 1. O que caractersticas devem ter os substratos para ser utilizados em microbiologia industrial? Cite exemplos de substratos empregados em microbiologia industrial. 2. Cite trs tipos principais de produtos industriais que se podem obtiver com microrganismos e de exemplos de cada um deles. 3. Qual aminocido que se produze comercialmente em maiores quantidades? 4. Quais so as vitaminas produzidas por microbiologia industrial, poderia nomear os microrganismos implicados? 5. Os microrganismos so ideais para a produo de enzimas a grande escala. Cite exemplos de enzimas industriais e suas aplicaes. 6. O que so as extremoenzimas? O que usos indstrias tm? 7. Por que se necessita oxignio para produzir vinagre? 8. Qual o composto qumico orgnico que se produze comercialmente a partir de Aspergillus niger? 9. Por que o cido ctrico produzido por Aspergillus niger se considera um metabolito secundrio? 10. Qual a relao que existe entre a produo do ferro e a produo de cido ctrico por parte de Aspergillus niger? 11. Escreva uma reao qumica ajustada que explique a ao que tem a levedura em a fabricao do po. 12. Por que to importante manter condies de oxignio em o fermentador quando se cultiva a levedura para obtiver biomassas de clulas? 13. Por que as leveduras tm tanta importncia industrial? 14. Faa uma tabela resumo sobre processos microbiolgicos industriais, coloque as seguintes colunas: produto, substrato, microrganismo. 15. A penicilina um metabolito primrio ou secundrio? Por qu? 16. Quais tipos de metabolitos: primrios ou secundrios, podem super-produzir-se mais facilmente? Por qu?