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La colorazione istologica, citochimica e istochimica:


Il fine quello di aumentare il contrasto dei componenti morfologici cellulari o tessutali affinch ne risulti una migliore analisi microscopica, oppure quello di identificare e localizzare specifiche sostanze chimiche allinterno di una cellula (citochimica) o di un tessuto (istochimica): in questultimo caso si sfrutta la propriet di alcuni reagenti di formare con specifici composti chimici contenuti in cellule e tessuti dei prodotti colorati (nel caso di microscopia ottica) o dei prodotti opachi agli elettroni (nel caso di microscopia elettronica). I coloranti si classificano in acidi e basici in base al tipo di radicali ionizzabili delle macromolecole con cui essi si legano, e spesso sono mescolati insieme in miscele per e idenziare pi! costituenti contemporaneamente. Acidi: presentano gruppo cromoforo acido (anionico). "i si legano componenti che hanno affinit per gli acidi (acidofili), cio basi, i cui gruppi ionizzabili sono principalmente gli amminici. #oloranti acidi sono leosina, l$range %, il &ight %reen, la fucsina acida. Basici: presentano gruppo cromoforo basico (cationico). "i si legano componenti che hanno affinit per le basi (basofili), cio acidi, i cui gruppi ionizzabili sono principalmente i carbossilici, gli ossidrilici, i solforici, i fosforici. #oloranti basici sono lematossilina, il blu di metilene, il erde di metile, la pironina. NB: 'cidofilia e basofilia dipendono dal p( della soluzione colorante: )s. le proteine sono basofile a alori di p( superiori al punto isoelettrico ( alore di p( al li ello del quale il numero di cariche positi e eguaglia quello delle negati e), ma sono acidofile a alori di p( inferiori al punto isoelettrico. Metacromasia = propriet di alcuni composti chimici ad alto *+ e contenenti molti gruppi anionici (come glicosaminoglicani acidi) di assumere con certi coloranti basici (come blu di toluidina) una colorazione di ersa da quella del colorante impiegato: questi coloranti, di colore blu (ortocromatico) allo stato monomerico quando diluiti in soluzione, se si legano in gran quantit a un substrato, formando cos, dimeri e polimeri, appaiono di colore rosso (metacromatico) poich assorbono la luce ad una lunghezza donda pi! bassa.

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&e tecniche coloranti pi! comuni sono: -. *Ematossilina eosina (EE) = lematossilina basica si lega a molecole acide conferendo colore blu iolaceo. utilizzato per il nucleo e i ribosomi (ricchi di /0' ) 10'), il 1)1, la matrice cartilaginea. &eosina acida colora le sostanze basiche in rosso o rosa. utilizzata per il citoplasma (ricco di proteine basiche) e per le fibre collagene. 2. *Acido periodico-Schi (!AS) = utilizzato per i polisaccaridi, consiste in un trattamento preliminare con acido periodico che ossida i glicidi -,23 glicol o -3ammino,23idrossi degli zuccheri in gruppi aldeidici, i quali si combinano con il reatti o di 4chiff (o leucofucsina, ottenuto trattando la parafucsina contenuta in fucsina basica con acido solforoso) formando un prodotto di colore rosso magenta. 4ono *'43positi e la mucina delle cellule calciformi del sistema gastrointestinale e di quello respiratorio, le membrane basali, la cartilagine e il glicogeno. 5. *"olorazione tricromica di Masson = specifica per il tessuto connetti o, in particolare per il collagene. #olora nuclei e strutture basofile in nero (dallematossilina ferrica), collagene in erde o blu (rispetti amente dal &ight %reen e dal blu di anilina), il citoplasma e gli eritrociti in rosso (da fucsina acida 6 78lidine ponceau). 9. Alcian #l$ = colora in blu i mucopolisaccaridi acidi e i proteoglicani acidi. "ira al erde se associato con an %ieson. :. *%an &ieson = utilizzata per asi sanguigni, campioni di cute, e tessuto connetti o in cui il collagene rosso (dalla fucsina acida), i nuclei sono blu o neri (rispetti amente da )mallume3#elestin blue e da ematossilina ferrica), il citoplasma e gli eritrociti sono gialli (da fucsina acida 6 acido picrico) e lelastina in blu (se e entualmente si associa un colorante specifico per questultima, come ad esempio la soluzione di ;eigert). <. *&iemsa ' (right = utilizzato per gli elementi del sangue e di altre cellule in striscio. #olora i nuclei di blu scuro o ioletto (dal blu di metilene), il citoplasma di blu chiaro, (sempre dal blu di metilene), e gli eritrociti di rosa pallido (dalleosina). =. *"olorazione tricromica di &oldner = usata per distinguere losso mineralizzato dallostoide (non mineralizzato), colora i nuclei (di osteoblasti, osteociti, osteoclasti e cellule del midollo) di nero (dallematossilina ferrica), il collagene di erde (dal &ight %reen), il citoplasma di rosso (da fucsina acida 6 78lidine ponceau), gli eritrociti di arancio (dall$range %).

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>. )mpregnazione con Argento*+ro = i prolungamenti neuronali e gliali si colorano di marrone, nero, o oro. ?. Metodo di Nissl o #l$ di metilene = consiste nellutilizzo di un colorante basico (come la tionina) per colorare di blu gli acidi nucleici, in particolare l10' citoplasmatico contenuto nei ribosomi liberi e nel 1)1. @al olta engono e idenziati degli aggregati che engono appunto chiamati sostanza di 0issl. -A. S$dan nero*+smio = usati per strutture contenenti lipidi poich i si solubilizzano, danno una colorazione nera. In particolare losmio iene utilizzato in microscopia elettronica poich in grado di fissare i lipidi depositandosi nelle membrane plasmatiche, rendendole perciB elettrondense (post3fissazione in tetrossido di osmio). --. +rceina = colora di marrone le fibre elastiche e i cromosomi. -2. *Azan = usato per il tessuto connetti o e per componenti citologici dei tessuti epiteliali, colora i nuclei di rosso (dallazocarminio), il collagene, la membrana basale e la mucina di blu (dal blu di anilina), il tessuto muscolare e gli eritrociti di arancio (dall$range %). -5. Bl$ di tol$idina = usato per la colorazione di sezioni semifini (- Cm) e per lo studio dei glomeruli e dei ner i, lega anche i granuli dei mastociti. 4ebbene normalmente colori di blu, in particolari condizioni (ad esempio in paraffina) ira al rosso per metacromasia. -9. *,erde di metile-!ironina = per mostrare contemporaneamente /0' e 10', la cromatina (contenente /0') si colora di erde (dal erde di metile), mentre il nucleolo e le zone basofile del citoplasma (contenenti 10') si colorano di rosso (dalla pironina). -:. *-eazione di .e$lgen = specifica per /0', che appare di colore rosso porpora (cromatina e cromosomi) mentre il nucleolo ed il citoplasma rimangono incolori: prima si sottopone la sezione ad idrolisi acida con acido cloridrico, affinch si scinda il legame glucosidico purina3 desossiribosio e si liberi cos, il gruppo aldeidico del desossiribosio, che iene quindi trattato con il reatti o di 4chiff.
(*) = sono miscele.