Practica N 1 GERMINACION Y BROTAMIENTO.

I.

DATOS INFORMATIVOS: Tema: Germinacin y Brotamiento o Germinacin en maz o Brotamiento en tubrculos de papa Responsables: grupo N 1 o Neira Huamn Elfer o Bravo Villavicencio Alex o Caja Lulayco Samuel o Sempertegui Campos Doris Edith Tutor: Dr. Juan Chvez Rabanal

Tipo de investigacin: Investigacin descriptiva-evaluativa Lugar de investigacin: Laboratorio de Fisiologa de Cultivos de la Universidad Nacional de Cajamarca Altitud: 2536 msnm Latitud: 7 10! S Longitud: 78 29! W Temperatura ambiente: 17 C Temperatura estufa: 30C Temperatura cmara oscura: 17% Fecha de incubacin: 18 de abril del 2012 Fecha de finalizacin: 02 de mayo del 2012

II.

INTRODUCCION: La germinacin y brotamiento depende de factores: intrnsecos y extrnsecos. Entre los primeros tenemos la viabilidad, que es variable, dependiendo de las condiciones de

extremadamente

almacenamiento y tipo de semilla, y la longevidad. Entre los factores extrnsecos tenemos: agua, CO2, O2, temperatura y luz. Para cada especie y factor existe un mnimo y un mximo. Durante la formacin de las semillas, se acumulan cantidades relativamente grandes de materiales de reserva que son los que permitirn el crecimiento y desarrollo de la plntula, hasta que sta pueda establecerse como una unidad fotosintetizadora y comenzar su vida auttrofa independiente. Durante la germinacin, estas sustancias son hidrolizadas y

transportadas al eje embrinico en crecimiento. El carbohidrato de reserva ms importante es el almidn, que se encuentra en forma de granos en el citoplasma. La germinacin es propia para semilla botnica (granos de maz) y el brotamiento propia de semilla vegetativa (tubrculo de papa). La germinacin es la aparicin y desarrollo a partir del embrin, de aquellas estructuras esenciales que, para un cierto tipo de semilla, indican la capacidad de producir plantas normales en condiciones ambientales favorables. El presente trabajo desarrollado en laboratorio permitir tener una visin clara de los procesos bioqumicos y morfolgicos, durante la germinacin y brotamiento, bajo diferentes tratamientos.

III.

OBJETIVOS: Determinar el mejor tratamiento y condiciones para romper la dormicin de semillas. Comprobar el efecto de inhibidores qumicos y fsicos sobre la germinacin y brotamiento.

IV.

MATERIALES Y REACTIVOS Cmara oscura Estufa Recipientes de plstico. Semilla de papa Semilla de maz Papel absorbente Cmara digital Reguladores del crecimiento: giberelinas

Ilustracin 1: cmara oscura

V.

MARCO TEORICO La dormicin de las yemas de rboles o tubrculos, en general se debe a un balance hormonal determinado, inducido por condiciones ambientales especficas. La relacin entre giberelinas y citocininas que disminuyen por un lado y el cido abscsico que aumenta por el otro, determinan la entrada en reposo o dormicin. Obviamente el proceso inverso rompe la latencia o dormicin. Existen mtodos para interrumpir o romper la latencia en las semillas. La accin del suelo y los microorganismos, las fluctuaciones de temperatura y humedad, el pasaje a travs del tracto digestivo de aves

u otros animales, por las propias labranzas, por fenmenos naturales, vientos fuertes, lluvias copiosas. El efecto de una o varias de estas condiciones, "ablandan" las llamadas semillas "duras". Por mtodos artificiales tambin es posible ablandar los tegumentos, por ejemplo con escarificado mecnico, o tratamientos qumicos con cidos fuertes como el sulfrico, agua caliente, etc. Factores relacionados con los procesos de dormancia y

brotamiento. Balance de almidones y azcares Contenido de cido ascrbico y glutatin Presin parcial del anhidrido carbnico en el medio ambiente Autogeneracin de inhibidores voltiles Deshidratacin Inhibidores qumicos endgenos Balance hormonal Actividad enzimtica Sntesis proteica Sntesis de ARN Depresin de ADN

Germinacin y emergencia El proceso de germinacin se puede dividir en las siguientes etapas: 1) imbibicin 2) hidratacin de enzimas hidrolticas y sintticas 3) divisin y alargamiento celulares 4) presin de la radcula (o de la plmula) sobre el tegumento y emergencia a travs de ste. El inicio de cada fase no tiene necesariamente este orden, ni inhibe la ocurrencia de la anterior, sino que pueden ser simultneas. Necesariamente la semilla seca debe absorber agua para poder germinar. El ritmo de absorcin depende de la temperatura y la

permeabilidad de los tegumentos, tamao de la semilla y composicin qumica de las reservas. El metabolismo de una semilla germinante es catablico y anablico, a la vez. Los productos de la hidrlisis de las sustancias almacenadas son utilizados como fuente de energa y como elementos constitutivos de enzimas y protenas estructurales, necesarias para el desarrollo del embrin. Resumen de la germinacin etapa v0 Absorcin de agua por la semilla-Imbibicin. El embrin hidratado libera Giberelinas que alcanzan las clulas de aleurona. Difusin hacia el endospermo de las enzimas hidrolticas

producidas en la capa de aleurona. Hidrlisis del almidn con produccin de glucosa, y que por difusin alcanza al embrin. Elongacin de la radcula. Elongacin del Coleoptilo con la Pluma en su interior. Aparicin de 3 a 4 races seminales laterales. Esto debido a la elongacin del Mesocotilo el cual empuja al coleoptilo hacia la superficie del suelo. Desarrollo de races seminales o adventicias que cumplirn la funcin de absorcin del agua y nutrientes durante la Etapa V6.

Brotamiento en tubrculos. Una condicin bsica para obtener niveles de productividad elevados en un cultivo de papas es lograr que los tubrculossemillas alcancen el estado de brotamiento ms adecuado al momento de la siembra. En general es necesario considerar dos factores estrechamente

relacionados con la emisin de brotes:

1. la variedad de papa, responsable principalmente de diferencias importantes en la duracin del perodo conocido como dormancia de los tubrculos. 2. la edad fisiolgica del tubrculosemilla, fuertemente influida por las condiciones de almacenamiento. Las condiciones favorables para inducir el brotamiento son:

almacenamiento bajo oscuridad, temperatura de 15 a 20C y una humedad relativa de 90%. Diversos factores afectan la duracin del perodo de dormancia: la variedad de papa las condiciones durante el crecimiento del cultivo la temperatura de almacenamiento los daos mecnicos ocasionados al tubrculo el grado de madurez del tubrculo al momento de la cosecha el tamao del tubrculosemilla. Productos del mercado que inducen el brotamiento disulfuro de carbono 2 cloro-etanol Rindite Broetano

VI. 6.1.

MARCO METODOLOGICO (TRATAMIENTOS) Brotamiento de tubrculo-semilla (Solanum tuberosum) a. Tratamiento con calor. i. protocolo 1: tratamiento con calor o variedad papa precoz / tarda o colocar caja oscura o temperatura de 18-25 C o Observar respuesta de tratamiento ii. Protocolo 2: golpe frio-calor o variedad precoz / tarda

o cmara fra (2-6 C) / 2-4 semanas. o luego colocar a caja oscura: T 18-25C o observar respuesta de tratamiento. b. Tratamiento con cido giberelico o Concentracin: 2-15 ppm o Dosificacin. La Unidad de Semilla del CIP recomienda usar 2ppm de AG3 para tratar tubrculos cuyo perodo est por finalizar y 5 ppm para tubrculos an dormantes. Los mejores resultados se obtienen cuando el tratamiento se realiza antes de que los cortes y magulladuras hayan cicatrizado. o Preparacin. (5 ppm para 200 litros de agua). Con este volumen de solucin se pueden tratar 7501000 kg de tubrculos. o Disuelva 1 gramo de AG3 en 100 ml de alcohol 96% (10 mg de AG3 por cada 1 ml de alcohol 96%). o Agite bien hasta que se disuelva. o Agregue 200 litros de agua. o Procedimiento. Los tubrculos recin cosechados se lavan y se desinfectan, se secan al aire y luego se sumergen en una solucin de cido giberlico (5 ppm) por 10 minutos. Despus del tratamiento los tubrculos deben secarse al aire y colocarse en una cmara o ambiente caliente a 1825C para inducir el brotamiento. Luego de 15 das el brotamiento es total. o Precauciones. Cuando se usan concentraciones ms altas de AG3 y mayor tiempo de inmersin se pueden inducir brotes ahilados, emergencia dispareja y plantas atpicas. Para reducir los efectos adversos del AG3 se sugiere eliminar los primeros brotes apicales. 6.2. Germinacin de semilla de maz (Zea mays). o Madurez fisiolgica: grano choclo

o Madurez absoluta: grano seco o Porcentaje de humedad en el momento de cosecha: 18% o Porcentaje de humedad en almacn: 10-12% o Porcentaje de humedad en almacn a largo plazo: 6% o Fases de la germinacin: Fase 1: hidratacin. Fase 2: germinacin propiamente dicha. Fase 3: crecimiento. a. Protocolo 1: maz remojado en agua fra / 12 horas. o Placa 1: temperatura ambiente o Placa 2: temperatura de refrigeracin 6C o Placa 3: temperatura estufa 30C b. Protocolo 2: maz remojado en agua tibia 40 C / 12 horas o Placa 1: temperatura ambiente o Placa 2: temperatura de refrigeracin 6C o Placa 3: temperatura estufa 30 VII. 7.1. RESULTADOS Y DISCUSIONES. Resultados o Fecha y hora de incubacin: 18 de abril del 2012, aproximadamente 12:30 pm. o Temperatura estufa: 30C o Temperatura cmara oscura: 17C o Temperatura de refrigeracin: 6C.

BROTAMIENTO tratamiento con calor tratamiento con Cuatro yemas iniciando el brotamiento (R1) Cuatro yemas brotadas de 3-4 con una longitud entre 1 y 2 milmetros. milmetros en longitud.

1control:20/04/12

(R2)

tres

yemas

brotadas

de

milmetros en longitud.

(A21) cuatro-cinco brotes milmetros en longitud.

de

3 (R1) Cuatro-tres brotes milmetros en longitud.

de

6-7

2control:23/04/12

(A22) cuatro brotes de 2 milmetros en (R2) cuatros brotes de 2-3 milmetros longitud. en longitud.

(A21) cuatro brotes de 2-5 cm en (R1) trece brotes entre 3-2.5 cm en longitud. longitud.

(A22) cinco brotes de 1.5-2 cm en (R2) cuatros brotes de 1.5 cm en longitud. longitud. 3control:02/05/12

Se puede observar tres brotes por yema. Races de dos, tres y hasta cuatro cm en longitud.

Se puede observar; desde dos, tres y ocho brotes por yema. Races de siete y nueve cm en longitud.

El protocolo frio-calor: se ha observado que el tubrculo-semilla durante el frio (6C) permanece en dormicin, pero cuando se incrementa la temperatura (calor) se rompe la dormancia y empieza el brotamiento.

GERMINACION Remojado en agua fra Temperatura ambiente: hidratacin, aumento de volumen de la semilla acompaado de una No presenta cambios visibles alta tasa respiratoria. Trtamiento AG3 en cmara oscura.

1control:20/04/12

Temperatura estufa: (T1) tres semillas germinadas, la radcula atraviesa la cubierta seminal.

(T2) cero germinadas. Temperatura de refrigeracin: la semilla gana humedad pero no presenta cambios visibles.

Temperatura ambiente: (A1) cinco semillas germinadas. Radcula 6 milimetros.

2control:23/04/12

(A2) una semilla germinada.

Temperatura estufa: (T1) ocho semillas germinadas: hipocotleo 2.2 cm, radcula 3 cm.

(T2) seis semillas germinadas

Temperatura de refrigeracin: la semilla permanece sin presentar cambios visibles. La dormancia no es interrumpida. Temperatura ambiente: plantas muertas por: deshidratacin stress hdrico punto de marchitez permanente. 3control:23/04/12

El resultado final de semillas tratadas con cido giberelico se obtuvo como resultado: Ocho germinadas y dos inviables. Cinco germinadas y cinco Temperatura estufa: inviables. (T1) ocho semillas germinadas y cuatro Plmula 14 cm y radcula 17 cm. inviables: plmula 8cm, radcula 9 cm.

(T2) siete semillas germinadas y cinco inviables: plmula de 12 cm, radcula 18.5cm. Presenta largos pelos absorbentes en busca de nutrientes.

Temperatura de refrigeracin: la semilla permanece sin presentar cambios visibles. La dormancia no es interrumpida.

7.2.

Discusiones. Las variedades precoces y tardas influyen en el rompimiento del periodo de reposo y la velocidad del brotamiento. La brotacin produce un consumo de sustancias de reserva, prdida de agua, disminucin de peso y volumen y arrugamiento de la epidermis .

Tratamientos con Calor. Los tubrculos se colocan en el interior de la estufa a 30C, que a su vez funciona como cmara oscura, hasta que se produzca el brotamiento. Golpe de fro ms calor. Este mtodo da buenos resultados con variedades precoces o cuando el perodo de reposo ha llegado casi al final. Los tubrculos cosechados se limpian, se desinfectan y se dejan suberizar (cicatrizacin de cortes y magulladuras). Se colocan en una cmara fria a 4C por dos a cuatro semanas y luego se transfieren a un ambiente de 18-25C para inducir el brotamiento. Si los tubrculos no brotan despus de dos o tres semanas, se repite el proceso hasta que broten. Tratamiento con cido giberlico (AG3). El AG3 es una hormona vegetal que no es txica para humanos ni animales y es de fcil manejo. Estudios realizados en diferentes pases han demostrado su eficiencia. Las concentraciones varan de 2 a 15 ppm, (2 a 15 gramos de AG3 en 1000 litros de agua) y la inmersin de los tubrculos debe hacerse durante 10 a 20 minutos. Esto depende de la variedad y del estado de reposo en el que se encuentran los tubrculos. Para el caso de germinacin el primer control, despus de 48 horas, se pudo observar hidratacin y en algunos casos la germinacin propiamente dicha.

El tercer control corresponde a una plena fase de crecimiento denominadas plntulas. Las plntulas presentan una intensa clorosis, por la ausencia de clorofila, esto ocurre porque las plantas estn creciendo en condiciones de oscuridad. CONCLUSIONES

VIII.

El tratamiento con cido giberelico en cmara oscura es el ms eficiente para inducir brotamiento completo, 10 das para semilla precoz y 15 das para tardas. El protocolo con calor trabaja mejor con variedades precoces o cuando el perodo de reposo casi ha finalizado. Si despus de romper la dormancia, obtenemos tubrculos con un solo brote, se considera mala semilla, por el contrario se recomienda tubrculos con un mnimo de tres brotes. Las bajas temperaturas (por debajo de 5C) inhibe el brotamiento de tubrculos y germinacin de semillas. Las semillas tratadas con cido giberelico al final mostraron un mayor poder germinativo y crecimiento. La temperatura de 30C promueve muy bien la germinacin, se obtuvieron un mayor nmero de semillas germinadas y brotes. La oscuridad es importante durante la germinacin, pero no es determinante ya que tambin germinaron las semillas expuestas a la luz aunque con retraso. En el caso de los tubrculos de papa los brotes emergen primero, luego las races en nmero variado. Por lo tanto en un primer momento los brotes presentan mayor longitud en relacin con las races. En la germinacin, la radcula emerge primero, por lo tanto en un primer momento presenta un mayor crecimiento en relacin coleoptilo. Cuando la radcula ha logrado atravesar la cubierta seminal le quedan dos caminos seguir creciendo o morir. Las semillas que interrumpieron su crecimiento despus de germinadas por deshidratacin indica las necesidades de agua para llevar a cabo actividades metablicas.

LITERATURA CONSULTADA: o Dr. Juan E. Chvez Rabanal. (2012).curso de Fisiologa de Cultivos. Universidad Nacional de Cajamarca. o Lallana, Vctor H.; Lallana Mara del C. (2001). MANUAL DE PRACTICAS DE FISIOLOGIA VEGETAL. Facultad de Ciencias Agropecuarias UNER. Disponible en: http://www.fca.uner.edu.ar/academicas/deptos/catedras/fisiologiaveg/m_did actico/manual_practicas/GerminacionED.pdf o Jos L. Marca / Oscar A. Hidalgo. Fascculo 2.4. Mtodos para Acelerar el Brotamiento de los Tubrculos-semillas. Disponible en: http://www.neiker.net/neiker/papata/documentos/manuales/manuales%20CI P/M%C3%A9todos%20para%20Acelerar%20el%20brotamiento%20de%20l os%20tub%C3%A9rculos%20semilla.pdf