Leccin 2.

Observacin de microorganismos

1.

Fundamentos del microscopio ptico

1.1 El microscopio de campo claro 1.2 Tincin de microorganismos para su observacin al microscopio de campo claro 1.3 Microscopio de contraste de fases 1.4 Microscopio de campo oscuro 1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con lser

3. Fundamentos del microscopio electrnico

3.1 Microscopio electrnico de transmisin 3.2 Microscopio electrnico de barrido

Recorrido de la luz Aumento Imagen visualizada ojo

Lente ocular Imagen intermedia (invertida respecto a la muestra)

Lente objetivo Muestra Ninguno Condensador Fuente de luz

Microscopio ptico

Tincin de clulas para la observacin microscpica

Extensin de una fina capa de clulas sobre el porta

Adicin del colorante lavado y secado Secado al aire

Fijacin por flameado del porta

Se coloca una gota de aceite de inmersin sobre el porta y se observa con el objetivo de 100X

Tincin de Gram
Tincin del frotis Paso 1
Previamente fijado al calor, con cristal violeta Durante 1 minuto. Todas las clulas se tien de color azul-violeta.

Paso 2

Aadir Lugol, dejar actuar 2 minutos Todas las clulas siguen de color azul-violeta.

Gram +

Decolorar con alcohol Paso 3

Las clulas Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran.

Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos. Las clulas G+ se ven azul-violeta.

Paso 4

Las G- rosas o rojas.

Gram -

Microscopio de Campo Claro

Alga verde (eucariota)

Microscopio de Fluorescencia
Bacteria filamentosa Teida con naranja de acridina

Microscopio de Contraste de Fases

Saccharomyces cerevisiae

Microscopa Confocal por Lser

Cianobacteria filamentosa

Microscopio lser de barrido confocal

Sonda filogentica

Colorante fluorescente

Microscopio de fluorescencia Tincin clulas con sondas filogenticas unidas a un colorante fluorescente

FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales

Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 NO2-) Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- NO3-)

Oxidacin anaerobia de metano en sedimentos marinos Agregados de bacterias metanognicas (rojo) rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular est teido con un colorante filogentico (FISH) diferente

Bacterias sulfato-reductoras Bacterias metanognicas

Micrografa Lser Confocal de una muestra de fango de aguas residuales

Microscopio Electrnico

Transmisin

Barrido