UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FSICA LABORATORIO DE ANLISIS POR INSTRUMENTACIN

INFORME DE INVESTIGACIN ESPECTROMETRA DE MASAS

ALUMNO: MUOZ VASQUEZ, ANDY 080942I

Espectrometra de masas
1. INTRODUCCIN La espectrometra de masas, es una tcnica de anlisis cualitativo, de amplia utilizacin para la determinacin de estructuras orgnicas, por si sola o en una combinacin con otras tcnicas de espectrofotometra. Ante todo esto, ha de hacerse notar que la espectrometra de masas tiene muy poco en comn con las tcnicas clsicas de espectrofotometra ya que en sentido estricto, no es propiamente un mtodo espectroscpico (desde el punto de vista clsico, un espectro es una informacin bidimensional que representa un parmetro relacionado con la emisin o absorcin de una radiacin con la energa de dicha radiacin) en la espectrometra de masas no se utilizan ningn tipo de radiacin, por lo que bsicamente no puede ser considerada como un tcnica espectroscpica. Otra diferencia esencial que presenta la espectrometra de masas con las espectroscopias clsicas, es que en estos ltimos mtodos, los procesos los procesos que se originan son puramente fsicos, no destructivos, de forma que la muestra utilizada para la obtencin del espectro no se modifica qumicamente y se puede volver a recuperar; por lo contrario, en la espectrometra de masas, durante la obtencin del espectro tienen lugar procesos qumicos con lo que la muestra utilizada se destruye y no puede recuperarse, este hecho no es un inconveniente grave ya que la cantidad de muestra necesaria para la obtencin de un espectro de masas, es pequesima, del orden del g.

2. HISTORIA DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS La espectrometra de masas tiene su origen en los experimentos desarrollados en el Cavendish Laboratory de la Universidad de Cambridge en Inglaterra en 1897 por Joseph John Thomson, l descubri que descargas elctricas en gases producan iones y que estos rayos de iones podan adoptar diferentes trayectorias parablicas de acuerdo a su masa cuando pasaban a travs de campos electromagnticos. Thomson realiz la construccin del primer espectrmetro de masas, llamado parbola espectrogrfica (Figura 1), para la determinacin de la relacin masa/carga de iones.

Figura 1. Parbola espectrogrfica construida por J.J. Thomson

Uno de los estudiantes de Thomson, Francis William Aston fue quien diseo varios espectrmetros de masas en los cuales los iones eran dispersados por sus masas y enfocados de acuerdo a su velocidad. Esto permiti mejorar el poder de resolucin de masas y el posterior descubrimiento de istopos de diferentes elementos que estn presentes en la naturaleza.

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Thomson recibi el Premio Nobel de Fsica en 1906 y Aston el Premio Nobel de Qumica en 1922. En la dcada de los 20s, Arthur J. Dempster de la Universidad de Chicago, desarroll un analizador magntico que enfocaba iones formados por impacto electrnico (electron impact) sobre un colector elctrico. Este diseo fue adaptado por Josef Mattauch, Richard Herzog, Kenneth Bainbridge, Alfred Nier y otros, permitiendo importantes descubrimientos en fsica atmica y nuclear en los 30s. Pero fue hasta la dcada de los 40s que los primeros espectrmetros de masas comerciales aparecieron. Durante los 30s y 40s, Nier y algunos otros incorporaron las tecnologas de vaco y electrnica para mejorar el desempeo de los primeros diseos de espectrmetros. Instrumentos de doble enfoque, que combinan analizadores magnticos y electrostticos fueron introducidos permitiendo incrementar la precisin. Estos instrumentos fueron originalmente desarrollados con el propsito de determinar en forma precisa los pesos atmicos de los elementos y sus istopos. En la dcada de los 40s se construyeron los primeros espectrmetros de masas disponibles comercialmente por medio de diferentes compaas de Europa y Estados Unidos. En esta dcada tambin se desarroll el espectrmetro de masas de tiempo de vuelo (time-of-flight, TOF), un concepto propuesto como un analizador ms barato y simple en el cual los iones son separados en base a sus diferencias en velocidad cuando son acelerados en un tubo de vuelo lineal. A principios de los 50s, los patrones de fragmentacin de los iones comenzaron a ser entendidos, aunque los aparatos disponibles estaban limitados en el rango de masas. Otro tipo de instrumento desarrollado para el propsito de acoplar el espectrmetro de masas a un cromatgrafo de gases fue el filtro de masas cuadrupolo, el cual usa un campo elctrico cuadrupolar conteniendo componentes de radiofrecuencia y corriente directa para separar iones. En 1953 el analizador de masas cuadrupolo fue patentado. Este analizador fue reportado por Wolfgang Paul de la Universidad de Bonn, quien despus gan el Premio Nobel de Fsica en 1989 por su trabajo de trampa de iones (ion trapping). En 1956 las primeras muestras biolgicas (esteroides) fueron exitosamente analizadas. En los 60s la espectrometra de masas se estableci como una tcnica para caracterizar compuestos orgnicos. Este fue asistido con la introduccin de una fuente de ionizacin qumica. Otros mtodos de ionizacin surgieron incluyendo desorcin de campo, ionizacin secundaria (secondary ionization MS o SIMS), desorcin de plasma y desorcin lser. Aparecieron las primeras publicaciones cientficas especializadas incluyendo Organic Mass Spectrometry. La espectrometra de masas en tndem (MS/MS) surgi con el desarrollo de procedimientos de disociacin por induccin de colisin, permitiendo obtener informacin estructural de componente de una mezcla usando dos etapas de anlisis de masas. En 1974 se desarroll la espectrometra de masas Fourier ICR (FT-ICR MS). Una importante ventaja de este sistema es que permite detectar simultneamente varios iones y estos espectrmetros de masas tambin logran tener muy alta resolucin de masas. En los 80s se desarrollaron las tcnicas de ionizacin capaces de ionizar eficientemente molculas biolgicas. Michael Barber en Manchester desarrollo la tcnica FAB (Fast Atom Bombardment) la cual utiliza una fuente de tomos pesados neutrales para ionizar compuestos de una superficie de una matriz lquida. John Fenn de la Universidad Yale refin la fuente de iones originalmente reportada por Malcolm Dole de la Universidad Northwertern casi dos dcadas antes de la tcnica de ionizacin de electrospray (ESI).

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Matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) fue tambin desarrollada en los 80s por Franz Hillenkamp y Michael Karas. En esta tcnica, las molculas son desorbidas por un lser de una superficie slida o lquida conteniendo una matriz de compuesto orgnico. Las tcnicas ESI y MALDI han permitido la introduccin de molculas biolgicas de ms de 1 milln de Daltons en los espectrmetros de masas como iones estables en fase gaseosa. Actualmente, los espectrmetros de masas son utilizados para el estudio de un amplio rango de sustancias y materiales con alta precisin y sensibilidad. Los campos de aplicacin son desde estudios astronmicos del sistema solar, geofsica y geoqumica, hasta anlisis qumicos y en forma fundamental en investigaciones de qumica, toxicologa, ciencias ambientales, y en forma creciente en ciencias biolgicas y biomdicas. 3. FUNDAMENTOS TERICO-TCNICOS Hoy en da, esta tcnica contina teniendo los mismos fundamentos que en su origen, aunque el espectrmetro de hoy en da poco tenga que ver con su predecesor. La espectrometra de masas se fundamenta en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su diferente masa. El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas:

Ionizacin de la muestra. Aceleracin de los iones por un campo elctrico. Dispersin de los iones segn su masa/carga. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

Fig.2: Esquematizacin del paso de una muestra por los principales componentes de un instrumento de espectroscopia de masas.

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A. Ionizacin de la muestra La ionizacin de la muestra se consigue por bombardeo mediante electrones (e-) segn el proceso: M + e- M+ + 2e-

B. Aceleracin de los iones por un campo elctrico Convertimos una fraccin significativa de los tomos formados en la etapa 1 en un flujo de iones, generalmente positivos y de carga nica. La velocidad que adquieren viene regida por la frmula:

Donde V es el potencial aplicado, e la carga del electrn y m la masa. Cuando las partculas aceleradas se someten a la accin de un campo magntico (H) describen una trayectoria circular de radio r alrededor de este campo, desarrollando una fuerza centrfuga mv2/r, la cual es igual a la fuerza de atraccin del campo Hev. De esto deducimos que el radio es igual a:

C. Dispersin de los iones segn su relacin masa/carga Basndonos en la ecuacin anterior podemos calcular la relacin m/e que es:

Dado que la mayora de los iones formados en la segunda etapa tienen una sola carga y que el resto de parmetros se mantienen constantes, la relacin m/e suele ser la masa del in. La utilidad analtica de un espectrmetro de masas depende de la resolucin del instrumento, o capacidad del mismo para separar dos partculas de diferente masa. D. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica El ordenador al que est conectado el aparato recoge las distintas seales y las reproduce en forma de espectrograma, formato de fcil interpretacin.

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4. ESPECTRMETRO DE MASAS Un Espectrmetro de Masas es un instrumento que mide las masas de molculas individuales que han sido convertidas en iones. Un espectrmetro de masas no mide la masa molecular directamente, pero mide la relacin masa/carga de los iones formados de las molculas. Los espectrmetros de masas tienen siete componentes mayores

Sistema de entrada. Fuente de iones. Analizador de masas. Un detector. Un sistema de vaco. Sistema de control. Sistema de datos.

El sistema de entrada, junto con la fuente de iones y el tipo de analizador de masas definen el tipo de espectrmetro y las capacidades del sistema.

Figura 2. Componentes bsicos de un espectrmetro de masas

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Los instrumentos usados estn compuestos de una combinacin de sistemas de entrada, fuentes de iones, y analizadores de masas (Tabla 1). Tabla 1. Variantes de componentes del sistema de espectrometra de masas Componente Sistema de entrada Fuente de iones Variantes 1. Directo 2. Columna capilar cromatografa liquida. 1. Impacto electrnico. 2. Ionizacin qumica. 3. Ionizacin de campo. 4. Desercin de campo. 5. Bombardeo con tomos rapidos. 6. Electrospray, incluyendo nanospray y microspray. 7. Matrix-assisted laser desorption (MALDI) 1. Cudruplo. 2. Trampa de iones (ion trap). 3. Tiempo de vuelo (time of flight TOF). 4. Analizador FT-ICR.

Analizador de masas

Los procesos bsicos asociados con la espectrometra de masas abarcan desde la generacin de iones en fase gaseosa de un analito, y la medicin de las relaciones masa/carga ( m/z) de estos iones. La formacin de iones de la muestra en fase gaseosa es un prerequisito esencial en el proceso del espectrmetro de masas en el proceso de verificacin de masas moleculares o anlisis. Aunque los primeros espectrmetros de masas requeran que la muestra estuviera en forma gaseosa, nuevos desarrollos han permitido incluir muestras en soluciones lquidas o en una matriz slida. Dependiendo del tipo de entrada y tcnica de ionizacin usada, la muestra puede ya estar en forma de iones en solucin, o puede ser ionizada en conjunto con su volatilizacin por otros mtodos en la fuente de iones. El estudiar el analito como un ion en fase gaseosa le dan dos caractersticas fundamentales. La primera caracterstica fundamental es que el movimiento de los iones en fase gaseosa puede ser controlado en forma precisa en campos electromagnticos que contienen los iones a estudiar y pueden ser manipulados para probar el movimiento del ion en el campo. Debido a que el movimiento de los iones es proporcional a la relacin m/z del ion, esto justifica la medicin de la m/z y por lo tanto la masa del analito. Los detalles concernientes a diferentes tipos de tcnicas de anlisis de masas y tcnicas de ionizacin utilizadas determinan factores tales que la precisin y exactitud de la medicin de m/z, la resolucin, y el rango de m/z del analizador. La segunda caracterstica fundamental es que el uso de iones en fase gaseosa incrementa la sensibilidad del espectrmetro de masas. El movimiento preciso de iones en campos electromagnticos que permiten medir m/z tambin les provee contencin y enfoque. Durante el proceso de medida de m/z, los iones son transmitidos con gran eficiencia a los detectores de partculas que registran la llegada de estos iones. Estas llegadas son detectadas con gran sensibilidad debido a una combinacin de seales de bajo fondo y la eficiente generacin de electrones secundarios que pueden subsecuentemente ser multiplicados por factores de 105 o mayores. El mantenimiento de la precisin y exactitud de estos movimientos y por lo tanto de la sensibilidad del anlisis requiere operacin experta del sistema de espectrometra de masas.

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Algunas desventajas del uso de iones en fase gaseosa es la dificultad de generacin de los iones y colocarlos en la fase gaseosa, adems de la complejidad de los instrumentos utilizados en este tipo de experimentos. El desarrollo de la ionizacin por electrospray y MALDI han aportado dos importantes mtodos para la produccin de iones de pptidos y protenas en fase gaseosa. Otra consecuencia de la complejidad de los instrumentos es el alto precio de tales instrumentos en trminos su adquisicin y costos de mantenimiento. Sin embargo, en general y considerando la sofisticacin, productividad y reproducibilidad de los experimentos desarrollados, se puede justificar que el costo de la espectrometra de masas es proporcional con los costos asociados con otros componentes en los proyectos de investigacin que requieren este tipo de anlisis.

5. INSTRUMENTACIN EN ESPECTROMETRA DE MASAS Veremos las partes esenciales de un espectrmetro de masas:

Sistema de entrada de muestras. Cmara de ionizacin. Acelerador. Analizadores. Detector.

A. Sistema de entrada de muestras.

En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se convierten al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce lentamente en la cmara de ionizacin. La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco. En los espectrmetros de masas ms modernos encontramos diferentes tipos de sistemas de entrada:

Sistemas indirectos de entrada: es el sistema ms clsico y el ms simple, en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que est a baja presin. El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar posibles prdidas por adsorcin. Entrada por sonda indirecta: los lquidos y los slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a travs de un cierre de vaco. El sistema de cierre se utiliza para controlar la cantidad de aire que entra despus de la insercin de la sonda en la regin de ionizacin. Las sondas tambin se usan cuando la cantidad de muestra es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad. Sistemas de entrada cromatogrficos y de electroforesis capilar: es un tipo de sistema de entrada especial, est indicado su uso cuando al espectrmetro de masa va acoplado un sistema de cromatografa de gases o de lquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas.

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B. Cmara de ionizacin

Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los componentes de una muestra en iones. En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador.(Skoog, Hiller, Hieman, 2000, 212). La formacin de iones del analito es el punto de arranque de arranque de un anlisis por espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado para la formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos categoras:

Fuentes de fase gaseosa: en estas primero se volatiliza la muestra y luego se ioniza.

Estn generalmente restringidas a compuestos trmicamente estables que tengan puntos de ebullicin menores de unos 500C. En la mayora de los casos, estos requerimientos limitan la utilizacin de las fuentes de fase gaseosa a compuestos con pesos moleculares menores de unos 103 Daltons. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002, 486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 1000 Daltons. Fuentes de desorcin: en estas la muestra en estado slido o lquido, se transforman directamente en iones gaseosos. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002, 486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 100000 Daltons. Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes blandas.

Fuentes duras: comunican suficiente energa a las molculas para que estn en un estado de energa altamente excitado. La relajacin posterior, implica la rotura de las uniones produciendo iones fragmentados. Su espectro da lugar a muchos picos y nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e informacin estructural de los analitos. Fuentes blandas: dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro con muy pocos picos dndonos informacin til ya que nos permite la determinacin exacta del peso molecular de la molcula o molculas.

Espectrometra de masas TIPO Fase Gaseosa NOMBRE Y ACRNIMO Impacto de electrones (EI) Ionizacin qumica (CI) Ionizacin por campo (FI) Desorcin Desorcin por campo (FD) Ionizacin por electronebulizacin (ESI) Desorcin/ionizacin asistida por una matriz (MALDI) Desorcin por plasma (PD) Bombardeo con tomos rpidos (FAB) Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS) Ionizacin por termonebulizacin (TS) AGENTE IONIZANTE electrones energticos iones gaseosos reactivos electrodo de elevado potencial electrodo de elevado potencial campo elctrico elevado haz de lser fragmentos de fisin del 252Cf haz de tomos energticos haz de iones energticos elevada temperatura

Fig. 3: Clasificacin de los distintos tipos de cmaras de ionizacin, indicando sus nombres y acrnimos y especificando cada sus agentes ionizantes.

TIPOS DE CAMARAS DE IONIZACIN;

a) FUENTES DE FASE GASEOSA

Impacto de electrones (EI).

Se somete a la muestra a una temperatura suficientemente elevada (normalmente mediante un filamento caliente de wolframio o de renio) como para producir un vapor molecular, el cual posteriormente se ioniza bombardeando las molculas originadas con un haz de electrones de elevada energa. Pese a sus desventajas, esta tcnica es la que se ha usado para determinar la mayora de los espectros que componen las colecciones de espectros (Rouesac, Rouesac, 2003, 78)

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Figura 4. Ionizacin por Impacto Electrnico

Fuentes de ionizacin qumica (CI).

En la ionizacin qumica los tomos gaseosos de la muestra (tanto de un sistema de entrada indirecto como de una sonda caliente) se ionizan al colisionar con los iones producidos al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo (normalmente metano). Normalmente se utilizan iones negativos, aunque la ionizacin qumica de iones negativos se utiliza ocasionalmente en aquellos analitos que contienen tomos muy electrnegativos.

Fuentes de ionizacin por campo (FI).

En las fuentes de ionizacin por campo, los iones se forman bajo la influencia de un campo elctrico elevado (108 V/cm). Estos campos se producen al aplicar elevados potenciales (10 a 20 kV) a emisores especialmente construidos. Que estn formados por numerosas puntas finas cuyos dimetros son menores a 1 m. A menudo estos emisores adquieren la forma de un fino hilo de wolframio en el cual se han formado dendritas o filamentos microscpicos de carbono por pirlisis de benzonitrilo en un campo elctrico elevado. El resultado de este tratamiento es la aparicin de centenares de microagujas de carbn que emergen desde la superficie del hilo. En este caso el analito adquiere poca energa vibracional y rotacional por lo que tiene poca fragmentacin (Rouesaoc, Rouesaoc, 2003, 93-94)
b) FUENTES DE DESORCIN

En las dos ltimas dcadas se han desarrollado numerosos mtodos de ionizacin por desercin para tratar muestras no voltiles o termodinmicamente inestables. Estas tcnicas prescinden de la volatilizacin y de la posterior ionizacin y en su lugar se suministra energa a la muestra

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slida o lquida de diversas maneras, de modo que se provoca la formacin directa de iones gaseosos. Como consecuencia se obtienen espectros muy simplificados. Fuentes de desorcin por campo (FD). Esta fuente de ionizacin usa un emisor con mltiples puntas, similar al usado en las fuentes de ionizacin por campo. En este caso el electrodo se coloca sobre una sonda que puede retirarse y recubrirse con una disolucin de la muestra, despus de reinsertarla la ionizacin se produce tras proporcionar un potencial elevado a este electrodo. En ocasiones es necesario calentarlo hacindole pasar una corriente pero puede ocurrir una degradacin trmica antes de completarse la degradacin.

Figura 5. Fuente de FD

Figura 6. Sonda y emisor de FD

Desorcin/ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI). Esta tcnica de reciente descubrimiento nos permite calcular pesos moleculares exactos de extractos de biopolmeros polares en un intervalo de masas moleculares de varios cientos de miles de Daltons.

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En esta tcnica se mezcla una disolucin acuoso/alcohlica de la muestra con un exceso de una sustancia matriz que absorbe la radiacin. La disolucin resultante se evapora en la superficie de una sonda metlica que se utiliza para la introduccin de la muestra. La mezcla slida se expone a la accin de un haz de lser pulsante, provocando la sublimacin del analito a iones que son introducidos en un espectrmetro de tiempo de vuelo para el anlisis de masas (Creel, Howart, 1993, 336-342). Ionizacin por electronebulizacin (ESI/MS). Esta tcnica se ha convertido en una de las ms importantes para el anlisis de biomolculas de pesos superiores a 100.000 Daltons. Se realiza en condiciones atmosfricas de presin y temperatura. La disolucin de la muestra se bombardea a travs de una aguja capilar de acero inoxidable a un flujo de algunos microlitros por minuto. Las agujas se mantienen a un potencial de varios kV con respecto al electrodo cilndrico que rodea a dicha aguja. La niebla de finas gotitas cargadas resultantes pasa a travs de un capilar de desolvatacin donde se produce la evaporacin del disolvente y de las molculas del analito y donde estas adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven ms pequeas por la evaporacin del disolvente, su densidad aumenta producindose la desorcin de los iones en la atmsfera gaseosa. Fuentes de bombardeo con tomos rpidos (FAB). Con este tipo de fuentes, las muestras en un estado condensado, a menudo en una matriz de una disolucin de glicerol, se ionizan por bombardeo con tomos de xenn o argn de elevada energa. Tanto los iones positivos como negativos del analito son expulsados de la superficie de la muestra por un proceso de desorcin. El haz de tomos rpido se obtiene pasar iones acelerados de argn o xenn de una fuente o can de iones a travs de una cmara que contiene tomos de argn o xenn a una presin de unos 10-5 torr. Setos experimentan una reaccin de intercambio de electrones en resonancia con los tomos obtenindose un haz de tomos de alta energa. (Plascencia, 2003, 13) Desorcin por plasma (PD). El deterioro del 252Cf produce dos fragmentos de fisin que viajan en direcciones opuestas. Un fragmento golpea la muestra anulando entre 1-10 iones analticos. El otro fragmento golpea un detector y desencadena la puesta en marcha de la adquisicin de datos. Este mtodo es especialmente interesante para molculas largas de origen biolgico. Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS). Un haz de luz ionizado primitivo como 3He+,16O+, o 40Ar+ es acelerado y enfocado hacia la superficie de la muestra y chisporrotea entrando dentro de la fase gas. Aproximadamente el 1% del material chisporroteado entra en forma ionizada, el cual ya puede ser analizado. SIMS tiene la ventaja que puede ser continuamente chisporroteado desde la superficie y determinar las concentraciones analticas en funcin de la distancia desde la superficie original (perfil de profundidad) Ionizacin por termonebulizacin (TS).

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La ionizacin por termonebulizacin se usa para elementos reflectantes. Una muestra es depositada encima de una cinta metlica, que puede ser de Pt o Re y una corriente elctrica calienta el metal a altas temperaturas. La cinta es revestida de grafito que reduce la desfragmentacin.
C. Sistema acelerador.

En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los electrones son obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una pequea diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partculas su velocidad final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de partculas.
D. Analizadores de masa.

Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre diferencias muy pequeas de masa. Adems, los analizadores deberan de permitir el paso del nmero suficiente para producir corrientes inicas fciles de medir. Al igual que sucede con los monocromadores pticos, a los que los analizadores son anlogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe de llegar a un equilibrio que est regido por la resolucin del espectrmetro de masa. Existen diferentes tipos de analizadores de masas:

Analizadores de sector magntico: los analizadores de sector magntico utilizan un imn permanente o un electroimn para hacer que el haz procedente de la fuente de iones se desplace con una trayectoria circular de 180, 90 o 60. Estos analizadores tambin son llamados de enfoque simple.

Fig.3: Diagrama esquemtico de un analizador de masas de sector magntico equivalente a los utilizados en espectrometra de masas, recalcar la ubicacin del sector magntico (laminated magnet)

Espectrmetros de doble enfoque: este trmino se usa en los espectrmetros en los cuales las aberraciones direccionales y las aberraciones de energa de una poblacin de iones se minimizan simultneamente. El doble enfoque se consigue utilizando combinaciones de campos magnticos y electrostticos cuidadosamente seleccionados.

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Espectrmetro de masa cuadrupolar: son normalmente menos caros y ms robustos que los de sector magntico, adems tambin ofrecen la ventaja de emplear tiempos de barrido pequeos (<100ms), lo cual es particularmente til para realizar barridos de picos cromatrogrficos en tiempo real. Son, con diferencia los ms utilizados hoy en da

Fig.4: Diagrama de un espectrmetro de masa cuadrupolar, que es uno de los tipos de analizadores de masa ms utilizados en espectrometra de masas dado su bajo precio y robustez.

Analizadores de masas de tiempo de vuelo (TOF): en estos aparatos se producen los iones positivos peridicamente por bombardeo de la muestra con impulsos de electrones, de iones secundarios o de fotones generados por lser. Los iones producidos de esta forma son acelerados en un tubo analizador libre de campo mediante un campo elctrico pulsante de 103 a 104 V. La separacin de los iones en funcin de la masa se produce durante su recorrido hacia el detector, situado al final del tubo. Estos aparatos presentan ventajas como la robustez, simplicidad, fcil acceso a las fuentes de iones y el virtualmente ilimitado intervalo de masas, pero tienen no obstante una sensibilidad y una resolucin limitadas. Analizadores de trampa de iones: es un dispositivo en el que los cationes o aniones gaseosos pueden formarse y quedar confinados durante largos periodos de tiempo por la accin de campos elctricos y/o magnticos. Los espectrmetros de trampa de iones son ms robustos, compactos y ms econmicos que los anteriores. Transformada de Fourier (FT): Como sucede con los instrumentos de infrarrojo y de resonancia magntica nuclear, los espectrmetros de masas de transformada de Fourier proporcionan mejores relaciones seal/ruido, velocidades mayores y sensibilidad y resolucin ms elevadas.

La parte fundamental de un instrumento de transformada de Fourier es una trampa de iones en la cual los iones circulan en rbitas bien definidas durante largos periodos. Tales cavidades se construyen aprovechando el fenmeno de resonancia inica ciclotrnica. La resolucin es espectrometra de masas de transformada de Fourier est limitada por la precisin en la medida de la frecuencia ms que por las rendijas o las medidas de campo. Es posible alcanzar una resolucin extremadamente elevada (superior a 106) dado que las medidas de frecuencia se pueden realizar con elevada precisin.

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Fig.5: Diagrama de un analizador de masa de transformada de Fourier donde podemos ver sus diferentes elementos, resear la situacin de la pompa de iones (turbo pump) cuya funcin se seala arriba y que es parte fundamental de este instrumento.
E. Detectores.

Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual generalmente est constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un dnodo el cual emite varios electrones ms al recibir el impacto de cada electrn. Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente fuertemente amplificada, por un procedimiento muy similar al que se utiliza en los tubos fotomultiplicadores. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por procedimientos electrnicos y se lleva a un sistema registrador. Existen principalmente 3 tipos de detectores: i. Copa Faraday

Este es un detector elctrico convencional, iones positivos que impactan sobre el colector son neutralizados por electrones despus de pasar a travs de una resistencia. La cada de voltaje en la resistencia de acuerdo a un estndar es la medicin de la corriente del ion. La seal del voltaje de la resistencia es entonces amplificada por un amplificador DC o por un electrmetro. El pequeo electrodo de metal que intercepta los iones positivos est montado en una jaula de Faraday. La corriente del ion medida y amplificada es directamente proporcional al nmero de iones y al nmero de cargas de los iones. La respuesta de la copa faraday es independiente de la energa, la masa, o la naturaleza qumica de los iones. Este tipo de detector es simple, barato, resistente y

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fiable. Posee alta precisin, sensibilidad y produce poco ruido de salida. La principal desventaja es que tiene un gran retraso inherente a la simplificacin del sistema. Por esto es que se utiliza para mediciones precisas o de corrientes de iones poco cargados y no debe ser usado para realizar examinaciones rpidas (por ejemplo en sistemas GC/MS).

ii.

Multiplicador de Electrones (Electron Multiplier)

El multiplicador de electrones (electron multiplier) utiliza el principio de emisin secundaria de electrones para afectar la amplificacin. En el dinodo discreto (discrete-dynode) los iones provenientes del analizador de masas son enfocados sobre un dinodo que emite electrones en proporcin directa al nmero de iones bombardeados hacia l. Los electrones secundarios del dinodo (iones en electrones) son acelerados y enfocados hacia un segundo dinodo, el cual tambin emite electrones secundarios (electrones en electrones). De este modo, la amplificacin es llevada a cabo a travs de un efecto cascada de electrones secundarios de dinodo a dinodo, ya que el nmero de electrones que llegan a un dinodo es menos al que sale del mismo. Cada etapa es un dinodo de cobre-berilio conectado a un potencial sucesivamente mayor por un divisor de voltaje. Pueden llegar a tener de 10 a 20 etapas amplificando la seal en un orden de hasta 107.

Este tipo de detectores son de amplio uso, ya que adems de ser sistemas confiables, baratos y que pueden captar casi todos los electrones poseen sistemas electrnicos y mecnicos simples, aunque pueden no ser tan sensibles (al no tener amplificacin de seal) y un tiempo de respuesta lento debido a alta impedancia en el amplificador.

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Un diseo alternativo de multiplicador de electrones utiliza un dinodo continuo en forma de cuerno hecho de vidrio cubierto con plomo. Este vidrio cubierto es elctricamente resistente y provee un gradiente elctrico que est conectado a una fuente de poder. Hacia el final del cuerno se ajusta el ngulo para poder captar todos los iones y convertirlos en electrones secundarios. Estos electrones secundarios son atrados a lo largo de un gradiente elctrico positivo en el cuerno, estos electrones chocan con la pared y ms electrones secundarios son expulsados, provocando amplificacin. La forma de dinodo continuo (frecuentemente llamado channeltron) es curva para prevenir que iones positivos causen seales de ruido debido a ionizacin secundaria de molculas residuales de gas.

La rpida respuesta y alta sensibilidad, con una ganancia de 106 hacen que el detector multiplicador de electrones sea indispensable en sistemas como el GC/MS. iii. Detector de Microcanales

Un arreglo de capilares de vidrio huecos (de 10-25mm de dimetro), unidos a un material emisor de electrones, formando un microcanales. Manteniendo estos microcanales a un alto voltaje permite a los iones golpear el material y expulsar electrones, esto causa una avalancha, creando electrones secundarios con una ganancia de 103-104. Estos detectores son tiles en seales de baja intensidad.

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Los microcanales pueden tambin emitir electrones a travs de pantallas fosforescentes. Un detector de arreglo de fotodiodo es usado para convertir los fotones liberados en seales elctricas.

6. OBTENCIN Y ANLISIS DE UN ESPECTRO DE MASAS Como consecuencia del bombardeo electrnico en la cmara de ionizacin, las molculas se rompen en una serie de fragmentos, siempre que una misma molcula se rompa en las mismas condiciones nos dar el mismo tipo y nmero de fragmentos y constituyen la fragmentacin patrn. Gracias a esto se pueden determinar que es la muestra por comparacin y por otra parte, la intensidad relativa de los distintos picos, permite deducir la proporcin en que cada componente se encuentra en la muestra. El pico del espectrograma que aparece con valor ms elevado de m/e corresponde a la molcula ionizada sin fragmentar y recibe el nombre de masa patrn. Esta masa patrn nos permite determinar con rapidez y precisin la masa molecular, siempre que se opere con una tensin de ionizacin no excesivamente elevada, la cual producira la fragmentacin total de la molcula. El pico mayor del espectrograma de masa se llama pico base. Normalmente la altura de este

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pico se toma como valor cien. Las intensidades de los dems picos se expresan en porcentajes de la intensidad del pico base.

Fig.: Aspecto clsico de un espectrograma de masas, en el que se sealan su pico base y su in molecular ms importante. La tabla situada a la derecha nos indica la concentracin y la relacin m/z de cada uno de los elementos presentes en el analito. En el anlisis de estructura por medio de espectrometra de masas de la acetona (C3H6O) se observan diferentes fragmentos de iones y el ion molecular en m/z=58.

Los iones ms intensos han sido marcados con su m/z. Los fragmentos de ion son usados por los espectrometristas de masas para deducir las estructuras moleculares. Algunas veces los smbolos [+] y [-] son usados para indicar los iones radicales, esta informacin es til para determinar los patrones de fragmentacin. Se observa que la prdida de 15 Da del ion molecular de la acetona da un ion de m/z=43 indicando la presencia de un grupo metil (CH3) en la molcula original, la prdida de 28 Da da un ion con m/z= 15 sugiriendo la presencia de CO. Al analizar estas prdidas y organizando las posibles estructuras a partir de los iones obtenidos, se puede deducir la estructura del compuesto original. Algunas prdidas comnmente observadas son de agua (H2O 18 Da), amonio (NH3 17 Da) y grupo fenil (C6H5 77 Da).

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Otra aplicacin de la espectrometra de masas es la determinacin de masas. Cada istopo de cada elemento (excepto para carbono al cual se le asign un valor de 12.00000 Da) tiene una masa no entera nica. La determinacin de mediciones de masa permite determinar composicin qumica. En el espectro de masas es posible distinguir entre monxido de carbono (CO, m/z=27.995) y nitrgeno (N2 m/z=28.006) por mediciones exactas de sus masas.

7. APLICACIONES Las aplicaciones son tan numerosas y abarcan tantos campos que resulta complicado citarlas todas, a continuacin veremos las ms caractersticas:

Elucidacin de la estructura de molculas orgnicas y biolgicas. Determinacin del peso molecular de pptidos, protenas y oligonucleicos. Identificacin de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel. Determinacin de secuencias de aminocidos en muestras de polipptidos y protenas. Deteccin e identificacin de especies separadas por cromatografa y electroforesis capilar. Identificacin de drogas de abuso y sus metabolitos en sangre, orina y saliva. Control de gases en enfermos respiratorios durante los procesos quirrgicos. Pruebas para confirmar la presencia de drogas en sangre de caballos de carreras y en atletas olmpicos. Datacin de ejemplares en arqueologa. Anlisis de partculas en aerosoles. Determinacin de residuos de pesticidas en alimentos. Control de compuestos orgnicos voltiles en el agua de suministro

Vamos a ver ahora de un modo ms extenso las principales aplicaciones de esta tcnica.

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Aplicaciones cualitativas

Determinacin del peso molecular de todas las sustancias que pueden volatilizarse por la posicin del pico correspondiente a la masa patrn. Determinacin de la formula molecular. Si el instrumento es de gran resolucin bastar la determinacin precisa de su masa molecular para poder atribuirle una frmula emprica. Otras veces puede determinarse por la relacin entre las alturas del pico correspondiente a la masa patrn y la de los picos de los istopos. Existe una tercera forma que sera con la regla del nitrgeno, segn la cual todas las sustancias orgnicas con peso molecular par deben de contener un nmero par o ningn tomo de N y los de nmero impar deben de contener un nmero impar. Por el contrario los fragmentos moleculares por rotura de enlace, tienen una masa impar si contienen cero o nmero par de tomos de N y masa par si el nmero de tomos de N es impar. Identificacin de compuestos por su fragmentacin patrn: la fragmentacin de la mayor parte de las molculas produce un gran nmero de picos que permiten la identificacin de numerosos compuestos y el reconocimiento de ciertos grupos funcionales de ellos. Se han descrito una serie de reglas generales que rigen los procesos de fragmentacin, los cuales son de gran utilidad para la determinacin de los espectros. Identificacin de productos de reaccin o de productos metablicos: se usa en cintica qumica y en farmacologa pudindose llegar a identificar impurezas y metabolitos a concentraciones de pocas partes por milln. Caracterizacin y anlisis de polmeros: el polmero se piroliza en condiciones controladas y los productos voltiles se hacen pasar a un espectrmetro para su anlisis. Anlisis de sangre: gracias a la rapidez del mtodo, se puede emplear incluso como control durante un proceso quirrgico. As se puede determinar a gran velocidad las concentraciones hemticas de monxido y dixido de carbono, oxgeno, nitrgeno, gases anestsicos (como el NO). Estudiar la abundancia de istopos: Esta fue la finalidad con la que fue creada la tcnica y en la actualidad se usa para anlisis por dilucin de istopos, estudios con trazadores isotrpicos, estudiar la edad de las muestra por su proporcin de istopos con la ventaja frente a los radiactivos que se pueden medir los istopos no radiactivos.

Aplicaciones cuantitativas. Para la determinacin cuantitativa de los componentes de una mezcla es conveniente que cada uno de ellos presente por lo menos un pico que difiera claramente de los dems. La calibracin se realiza por comparacin de los picos con patrones adecuados. Las alturas de los picos son directamente proporcionales a las presiones parciales de los componentes volatilizados en la muestra. Las aplicaciones cuantitativas de la espectrometra de masas para anlisis cuantitativo son de dos tipos:

Determinacin cuantitativa de especies moleculares o tipos de especies moleculares en muestras orgnicas, biolgicas y ocasionalmente inorgnicas: normalmente tales anlisis se llevan a cabo haciendo pasar la muestra a travs de una columna cromatogrfica o de electroforesis capilar y posteriormente por el espectrmetro. Determinacin de la concentracin de elementos en muestras inorgnicas y, en menor medida, de muestras orgnicas y biolgicas: las concentraciones de analito en

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este caso se obtienen directamente a partir de las alturas de los picos de los espectros de masas. Se crean curvas de calibrado que nos permiten el anlisis cuantitativo gracias a la existencia de picos nicos para cada componente y cada valor de m/z.

8. CONCLUSIONES Espero que el estudio realizado sobre la Espectrometra de masas les ayude a entender este complejo instrumento y poder aplicarlo con una mayor efectividad. De este trabajo destaco la importancia de esta tcnica desde sus comienzos hace ms de cien aos hasta la actualidad donde nos la encontramos como un instrumento altamente especializado y aplicable en multitud de campos. Pese a sus casi cien aos de edad continua siendo uno de los instrumentos ms recurridos a la hora de analizar todo tipo de muestras ya que de ella se destaca su gran versatilidad, facilidad de uso y fundamentalmente, porque es uno de los pocos instrumentos que te permiten realizar un anlisis cualitativo y cuantitativo de forma simultnea y de calidad. Sus mbitos de uso se encuentran un tanto restringidos dado su elevado precio, su principal enemigo y retractor, pero que no est impidiendo que cada da se imponga ms frente a otras ms innovadoras y su demanda no haga ms que aumentar. Vemos que el estudio exhaustivo de este instrumento es fundamental para su ptima utilidad, ya que te permite combinar diferentes tipos de cada uno de sus elementos para adecuarlo a las necesidades de cada investigacin. Hoy en da se contina investigando en nuevas instrumentos de mejora para esta tcnica, ya que cada da se exigen resultados con mayor precisin o simplemente porque se analizan muestras en las que se requiere una mayor especializacin. Esta variabilidad ha hecho que contine vigente y se mantenga altamente adaptada en la actualidad, unido, como no, a su alta aplicabilidad en campos tan variados como la medicina, criminalstica, I+D farmacutica o los laboratorios de biologa molecular entre otros.

9. BIBLIOGRAFA Skoog,D.A, Hiller F.J, Nieman T.A, 2001, Principios de Analisis Instrumental, Madrid: Mc Graw Hill, 5 Edicin, 490 pgs http://www.ugr.es/~quio red/espec/ms1.htm http://mural.uv.es/caloan/ http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Spec_Masas.pdf

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