Universidad Nacional autnoma de Mxico Facultad de estudios superiores Cuautitln Departamento de Ciencias Biolgicas Seccin de Bioqumica y Farmacologa Humanas

Asignatura Anatoma e Histologa Humanas Grupo 1302 Bioqumica Diagnostica Procesamientos de muestras histolgicas Integrantes
Flores Prez Luis ngel Rodrguez Gmez Luca Ruiz Moreno Raymundo Ivn

Equipo No 10 Profesoras:
M en C, Tais Nopal Guerrero Mara Vernica Vzquez Cianca

02/ Septiembre / 2013 09/ Septiembre / 201

Objetivos
Aprender las tcnicas para la manipulacin de muestras histolgicas realizando una inclusin con los rganos de Rata en parafina y comprender el fundamento de los artefactos que podran llevarse a cabo en el proceso.

Introduccin
"La fijacin es esencialmente un mtodo para la preservacin de la morfologa y composicin qumica de la clula. Durante la fijacin, las sustancias albuminoides del tejido pasan del estado sol, como se encuentran en vida, al de gel, cuyo contenido de agua es menor. De esta manera, se detienen los procesos post-mortem y las estructuras se conservan con un mnimo de artificios, preparndolas para tratamientos ulteriores (Thompson 1966, Garca del Moral 1993, Eltoum et al. 2001)". DESHIDRATACION La funcin principal de este proceso es la extraccin del agua del tejido. -Se realiza antes de la inclusin y antes del montaje. Es necesaria para la utilizacin de medios no acuosos (hidrofbicos) como la parafina, celoidina y algunos plsticos, porque no infiltran en tejidos con agua. Una excesiva deshidratacin produce un tejido duro difcil de cortar. Una deshidratacin incompleta produce que el agente aclararte no actu apropiadamente y se obtendrn bloques blandos, adems produce la mayor cantidad de problemas en los pasos posteriores del procesamiento histolgico. (L. Carson, 2006) Las sustancias que actan como agentes desecantes se eligen dependiendo de la sustancia que deseemos secar, pudiendo as ser de tipo cidas, neutras, o bsicas. Entre todos los agentes desecantes existentes, los ms frecuentes suelen ser los desecantes para desecadores y los desecantes utilizados para disoluciones. (ngeles Mndez, 2011) Por otro lado tenemos la parafina, la cual se utiliza debido a su gran afinidad y capacidad de absorcin, en cuanto a disolventes apolares se refiere, como por ejemplo, el hexano o el benceno. (ngeles Mndez, 2011) ACLARAMIENTO Los reactivos usados tienen un alto ndice de refraccin y pone a tejido claro o transparente. Miscible en agentes deshidratantes y medios de infiltracin. El uso de agentes aclarantes durante largos periodos produce endurecimiento.

Una aclaracin excesiva produce desnaturacin de protenas dificultando la microtoma. Ejemplos- Xileno, Tolueno, Benceno. (L. Carson, 2006) .

INFILTRACION Mantiene a las clulas y estructuras celulares en su relacin propia al ser cortadas en secciones finas. Medios de inclusin solubles en agua (hidrofilos), Polietilglicol (PEG) / Carbowax. Infiltra directamente despus del fijador, sin pasar por deshidratacin y aclaramiento, por lo que la grasa no se disuelve, sin embargo, esto no ocurre en tejidos con gran cantidad de grasa (ej. tejido adiposo).Se infiltran los tejidos con estos medios cuando quedan muy blandos. (L. Carson, 2006) INCLUSION *Es esta etapa se forma un bloque encapsulando al tejido en el medio de inclusin usado para procesar y permitir al medio solidificar. Debe tenerse en cuenta la orientacin del tejido con la que posteriormente se cortar. (L. Carson, 2006) En resumen, un fijador tiene como misin: * Evitar la autolisis debida a los propios enzimas. * Proteger el corte o la pieza del ataque bacteriano. * Insolubilizar los componentes celulares que se desean estudiar. * Preparar a las distintas estructuras para posteriores tratamientos. * Evitar la disolucin de determinados compuestos en el fijador. * Conservar o provocar determinadas reacciones qumicas.

Diagrama de Flujo (2005). Histologa Bsica. Barcelona, Espaa: Masson S.A. pag. 54 EL procedimiento se llev a cabo hasta el punto 5 en el diagrama. las propiedades fsicas.DDiagrama

de Flujo

Observaciones y Resultados:
1- Durante el proceso de deshidratacin y aclaramiento del tejido observaste algn cambio de color o apariencia? Evidentemente se not un cambio en cuanto al color de la muestra, la consistencia se hizo ms rgida, en nuestro caso era el testculo de la rata y fue bastante notoria el color ms claro, y en cuanto al tejido Liposo fue disminuido. 2- A tu parecer y en comparacin a lo observado en la prctica anterior de un tejido sin fijar y un tejido fijado Existe algn cambio que hayas observado, cules? En el Tejido fijado hay mayor facilidad en cuanto a su manejo puesto que es rgido y a simple vista es ms resistente cabe mencionar que el tejido ya no puede tener algn cabio de putrefaccin y nos facilita su corte. En el tejido sin fijar es un tanto incomodo en su manipulacin puesto que es un tejido frgil, que puede sufrir cambios Post-Mortem, los cortes no se pueden llevar a cabo muy bien. 3- Desacuerdo a lo anterior consideras que la fijacin realizada fue correcta? Nuestra fijacin como tal no fue la correcta, al momento de terminar la aclaracin con el Xilol y al comenzar la infiltracin con la parafina no alcanzo parafina suficiente para nuestra muestra.

Testculo de Rata

1.5 cm de Dimetro No se llev a cabo la infiltracin por falta de parafina.

Anlisis de resultados
En la prctica pudimos observar que el tejido de los testculos de la rata fijado con formol al 10% es ms fcil de manipular debido a que el fijador evita la autolisis que es una alteracin de las caractersticas estructurales de la clula. Se tiene que utilizar un fijador para resistir su posterior manipulacin. Observamos que el fijador le dio a nuestra muestra firmeza. A la muestra se le agrego de manera creciente alcohol etlico que es un agente deshidratante muy comnmente utilizado. Esto se hizo con concentraciones al 80%, 95% y 100% durante 30 minutos, esto para que las concentraciones de agua disminuyan. Al momento de realizar la deshidratacin se logr observar un cambio en cuanto al color del tejido ya que antes de deshidratar nuestro tejido este tena un color gris y al ir avanzando la deshidratacin el tejido se volvi blanco, este tuvo una consistencia rgida. Tambin notamos que el tejido adiposo disminuyo levemente. Es necesario mencionar que el proceso de deshidratacin se tiene que realizar gradualmente ya que cambios drsticos en la concentracin del alcohol etlico puede propiciar que el protoplasma de contraiga provocando distorsiones en las celular y tejidos. Largas exposiciones a soluciones de altas concentraciones o soluciones anhidras tambin contraen los tejidos y causan rupturas internas. Es por eso que se tiene que aplicar la metodologa adecuadamente para que esto no suceda. Se tiene que realizar el aclaramiento para servir como solvente de la parafina. El equipo no pudo realizar la infiltracin/inclusin debido a que no alcanzamos parafina, pero este paso es muy necesario ya que penetra los tejidos uniformemente logrando que los cortes se realicen mas fcilmente.

Conclusiones
Al llevar a cabo las tcnicas de deshidratacin, aclaramiento e infiltracin, aunque esta ltima solo se haya llevado a cabo solo en una pequea parte de nuestra muestra hemos dejado en ptimas condiciones la muestra para posteriormente llevar a cabo un corte en el micrtomo. Nos dimos cuenta que es necesario seguir detalladamente cada paso ya que si no lo hacemos de esta manera el tejido puede perder sus propiedades fsicas y qumicas, alterando nuestros resultados a la hora de observar la muestra en el microscopio.

Bibliografa
Luiz C. Junqueira, Jose Carneiro. (2005). Histologia Basica. Barcelona, Espaa: Masson S.A. Maria Elsa Gomez De Ferraris, Antonio Campos Muoz. (2000). Histologia y Embriologia Bucodental. Madrid, Espaa: Medica Panamericana. www.uv/univirtual. (Agosto de 2009)