Determinacin de Mesfilos Aerobios Determinacin de Mesfilos Aerobios Se analizaran muestras de chile habanero procedente de la Central de Abastos, se har por

duplicado denominndose muestra A y muestra B respectivamente. La tcnica tiene una duracin de 48hrs para ver los resultados. Materiales a utilizar Para analizar la muestra de Chile habanero, es muy importante tener estriles ciertos materiales que nos sern tiles, estos son: 2 vasos de licuadora con sus respectivas tapas. 6 tubos de ensayo con sus tapas metlicas. 1 cuchillo. Trozos de papel aluminio. 2 aspas de licuadora. Pipetas de diferentes volmenes. Nota: *Envolver el vaso y la tapa de la licuadora por separado. *Los trozos de papel aluminio deben ser envueltos con papel estraza. *Envolver todos los materiales con papel aluminio. *Las pipetas se esterilizan en el horno durante 2hr.

Tambin se utilizaran: -Cajas de petri. -Alcohol al 70%. -2 mecheros. -Balanza digital. -1 tabla para picar la muestra. -Bolsas estriles. Toma de la muestra. Temporizar la muestra que se analizara, ser denominada de la siguiente manera: A Muestra B -Cubre bocas. -Guantes estriles. -Esptula. -Tijeras. -Papel estraza.

Jess Rodrigo Enrquez Domnguez

Ing. Qumica

Determinacin de Mesfilos Aerobios Corte de la Muestra

1. Para tomar la muestra, se esteriliza el rea donde se va a trabajar 2. Encender los dos mecheros. 3. Tener cerca todo lo que se va a utilizar: Muestras de Chile habanero, bolsas estriles, cajas de petri, balanza digital, guantes estriles (Abrir dentro del rea estril), tabla para picar, cuchillo, papel aluminio. 4. Tomar un trozo de papel aluminio y cubrir la tabla para picar. 5. Sacar la muestra de chile habanero y colocarlo en la tabla. 6. Cortar el chile habanero (tomar muestras de todos los lados posibles). 7. Cuidar que la muestra no toque la mesa. 8. Colocar la tapa de una caja de petri en la balanza y tararla. 9. Pesar la muestra de chile habanero (10gr) sobre la caja de petri previamente tarada. 10. Una vez pesada la muestra, colocarla en una bolsa estril. Preparacin de solucin reguladora de fosfatos (Solucin Concentrada) Disolver 34gr de fosfato de potasio monobsico en 500ml de agua. Ajustar al Ph a 7.2 con una solucin de NaOH 2N. Completar con agua, hasta un litro. Esterilizar a presin. Conservar en refrigeracin.

Preparacin de solucin reguladora de fosfatos (Solucin de Trabajo) Tomar 1.25ml de la solucin concentrada Aforar a 1000ml

Preparacin del medio slido: Agar Mtodos Estndar (AME). Se prepararon 270ml de AME, entonces la relacin seria: 23.5gr AME--------- 1000ml H2O X ---------- 270ml H2O X = 6.4grs

Con la solucin de trabajo llenar un matraz con 90ml por muestra, llenar con 9ml de la solucin reguladora de fosfatos (solucin de trabajo) en tubos de 16*160mm. Una ves llenados todos los tubos, esterilizarlos a presin junto con el matraz que contenga los 90ml de solucin reguladora de fosfatos (solucin de trabajo). Jess Rodrigo Enrquez Domnguez Ing. Qumica 2

Determinacin de Mesfilos Aerobios Licuado de la muestra 1) Una ves picada la muestra de chile y preparadas las soluciones reguladoras de fosfato se procede a licuar la muestra en un rea estril. 2) Se agrega al vaso de la licuadora, una porcin de la solucin de reguladora (la del matraz) y la muestra de chile habanero. 3) Se sube el interruptor durante 3 segundos y se baja, realizar 3 sesiones de subir y bajar el interruptor. 4) Ya que se ha licuado la muestra regresar al matraz la muestra con el resto de la solucin. 5) Flamear el tapn rpidamente y tapar el matraz. 6) Se contina con el mismo procedimiento con la siguiente muestra.

Diagrama del proceso

Tomar 10gr de muestra Tomar 90ml de la Solucin de trabajo

Mtodo de Siembra.

Licuar

Ya que se han hecho las diluciones (ver elobtenemos diagrama La solucin que es de proceso), se procede a inocular dilucin primaria en el Agar mtodos estndar. denominada En nuestro caso, debido a la gran concentracin de (Dilucin 10-1) bacterias q se tuvo al hacer las diluciones hasta 10-3, tomamos la decisin de hacer diluciones de 10-4 y 10-5

CONDICIONES ASEPTICAS
10-5
1 ml de muestra

Tomar 1ml de la Disolucin 10-1 y diluir en 9ml de solucin de 1 ml de trabajo (fosfatos). Esta muestra disolucin se -2 denominara 10

Tomar 1ml de la Disolucin 10-2 y diluir en 9ml de solucin de trabajo (fosfatos). Esta disolucin se denominara 10-3
10-3

AME Jess Rodrigo Enrquez Domnguez

AME Ing. Qumica 3

Determinacin de Mesfilos Aerobios

1. Tomar 1ml de muestra 2. Agregarle 30ml de AME 3. Homogenizar (6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrs a adelante) 4. Una ves inoculado en placas y homogenizado, incubar a 35 C +/- 2 durante 24hrs +/- 2hrs. Una ves que pasaron las 24hrs. Obtuvimos los siguientes resultados Dilucin 10-4 10-5 Muestra A 55 8 0 Muestra B
Incontable

79

58

Jess Rodrigo Enrquez Domnguez

Ing. Qumica