IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

PRESENTES EM EXTRACTOS FOLIARES DE

Ceratonia siliqua (alfarrobeira)
 Introdução : Ceratonia siliqua (alfarrobeira)

 Objectivos

 Materiais

 Métodos

 Bibliografia
Introdução : Ceratonia siliqua (alfarrobeira)

A alfarrobeira (Ceratonia siliqua) pertence à família

Fabaceae

 Poderá ter sido trazida pelos gregos da Ásia Menor e

posteriormente terá sido levada pelos árabes para o Norte
de África, Espanha e Portugal.

 Pensa-se que as suas sementes foram usadas, no antigo

Egipto, para a preparação de múmias; e também foi
utilizada durante muito tempo como uma medida para
pesar diamantes.
Utilização da planta:
 Vagem: semente (donde é extraída a goma, que é constituído por
hidratos de carbono complexos (galactomananos) e que tém aplicações na
indústria alimentar, farmacêutica, têxtil e cosmética).

polpa (é utilizada na alimentação animal devido ao seu sabor

e às suas características químicas (taninos) e dietéticas, e também pode ser
utilizada em preparações culinárias).

fruto.

A alfarrobeira contém princípios activos de accão antiprolife-

rativa.

http://pt.wikipedia.org/wiki/Alfarroba
 E as folhas?

http://pt.wikipedia.org/wiki/Alfarroba
 Objectivo

Identificar proteínas presentes em folhas moída da alfarrobeira

que possam ter alguma aplicação fitoterapêutica.
Materiais
 Folhas da alfarrobeira secas e moídas (originais da Ásia Menor).
 Tampão Tris-HCl.
 NaCl.
 EDTA.
 PMSF.
 Bradford Protein Assay.
 SDS
 Poliacrilamida.
 Reagente de Coomassie.
 Etanol.
 Ácido Fosfórico
 Água Desionizada
 TEMED
 Glicina
 Ureia
 Métodos
1- Preparação da amostra :

a) macerar as folhas da alfarrobeira em tampãoTris-HCl e PMSF.

b) centrifugar o extracto proteico e submeter o sobrenadante ao Assay de Bradford

para determinar a concentração total de proteínas.

www.piercenet.com/media/CoomassieScheme.gif
2- Separação das proteínas:

Separação das proteínas de acordo com o seu peso molecular (MW) em

gel de SDS-PAGE.

www.nationaldiagnostics.com
3- Visualização e Avaliação

Corante Comassie Blue é o mais indicado devido a sua sensibilidade e

compatibilidade com a espectrometria de massa.
4- Análise das proteínas em software

Softwares mais utilizados: ImageMaster, Melanie e PDQuest

Os softwares permitem: detecção, alinhamento, comparação,

emparelhamento e quantificação das proteínas.

http://www.e-escola.pt/mgallery/default.asp?obj=2771
5- Identificação das proteínas por espectrometria de massa

d) Excisar a proteína do gel

f) Digerir a amostra com tripsina e extrair os péptidos do gel.

h) Determinar a composição das proteínas e sua sequência de

aminoácidos.

j) Elucidar a sua estrutura tridimensional

l) Caracterizar a proteína funcionalmente e avaliar o seu potencial

fitoterapêutico.
 Bibliografia
 BRADFORD, M. M., 1976. A rapid and sensitive method for the quantification of
microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.
Anal. Biochem. 72: 248-254.

 SALLÉ, J.L., 1996. O Totum em Fitoterapia- abordagem de fitoterapia, Robe

Editorial, São Paulo, p.201

 http://www.bio-rad.com

 http://www.e-escola.pt

 http://www.molecularstation.com

 http:// www.piercenet.com

 http://pt.wikipedia.org/wiki/Alfarroba

 http://www.nationaldiagnostics.com