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VALORACIN DE LAS DROGAS. Introduccin Valorar o evaluar las drogas vegetales, significa identificarlas y determinar su calidad o pureza. La calidad de una droga se traduce en su valor intrnseco o lo que es lo mismo la cantidad de principios activos presentes en ella. La identificacin de las drogas se hace generalmente comparando una muestra representativa de la droga problema con un espcimen autntico, corroborando el resultado con la informacin suministrada por la literatura cientfica que describe su identidad. La pureza de una droga es un aspecto sobre el cual tratan las Farmacopeas, Formularios, Cdex, Normas, etc. La evaluacin de las drogas se realiza por varios mtodos como son: La percepcin, la microscopia, el fsico-qumico, y el biolgico. Las actividades prcticas que a continuacin se relacionan, estn encaminadas fundamentalmente a la identificacin y evaluacin de drogas mediante el empleo de los mtodos de percepcin, microscopia y fsico-qumico tanto cualitativos como cuantitativos y algunos mtodos de aislamiento y purificacin de sus principios activos. I.1 MTODOS DE PERCEPCIN. Se refiere a la evaluacin por medio de los rganos sensoriales y tiene en cuenta entre otros: Morfologa; tamao; olor; color externo e interno y fractura de los rganos vegetales. Actividad prctica No1 EVALUACIN MACROSCPICA DE LAS DROGAS Introduccin. Esta fase del trabajo de laboratorio tiene como objetivos familiarizar al alumno con drogas crudas y capacitarlos para interpretar adecuadamente las monografas que sobre las mismas se describen en los compendios oficiales. Por conveniencia para su estudio, las drogas se agrupan de acuerdo a su clasificacin morfolgica en: rganos subterrneos; corteza y leos; flores; frutos; semillas y una categora final que incluye las drogas que no pueden clasificarse bajo los anteriores acpites entre las cuales se encuentran resinas, muclagos, etc. Para la realizacin de esta prctica, es importante rememorar los aspectos botnicos que son indispensables en el estudio de las partes de una planta en el libro de texto. El objetivo de la misma es realizar la descripcin macroscpica de drogas y aprender la metodologa de trabajo establecida oficialmente. Parte experimental. Como primer aspecto antes de comenzar las descripciones macro morfolgicas, el alumno debe conocer para las drogas a evaluar la siguiente informacin: Nombre cientfico. Uso tradicional o reconocido. Nombre vulgar o vernculo. Planta endmica o aclimatada.

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Familia botnica.

Con la ayuda del microscopio estereoscopio, el alumno realizar una monografa de las drogas crudas a evaluar, teniendo en cuenta para las mismas los siguientes acpites: A. rganos subterrneos. Las estructuras subterrneas a estudiar de inters farmacognstico se clasificarn en alguna de las siguientes categoras: Raz, Rizoma, Bulbo y Tubrculo. Se observar prcticamente las caractersticas siguientes: 1. Tamao: Dimensiones en largo y dimetro 2. Color. 3. Olor. 4. Forma y consistencia: Algunos de los trminos usados para describir la forma son: rectos, torcidos, simples y ramificados; tambin generalmente se habla de forma cilndrica, cnica, fusiforme, ovoide, piriforme, napiforme, etc. 5. Condicin: Fresca, seca, entera, cortada, privada de algn tejido. 6. Caracteres de la superficie: Lisa, arrugada, estriada, anillada, fisurada. Presencia o no de cicatrices y yemas. 7. Seccin transversal: Tamao relativo de la corteza, del leo y de la medula. 8. Fractura: Describir como se rompe la pieza cuando se somete a presin; puede ser completa, incompleta, corta, fibrosa, dura, dbil, flexible, cornea, etc. 9. Otras particularidades. B. Corteza y leos. La mayora de los trminos descriptivos aplicados a los rganos subterrneos tambin pueden ser utilizados para cortezas y leos. Pueden destacarse adems algunas peculiaridades como: 1. Forma de la pieza: Curvada, aplanada, acanalada, tubo simple, tubo doble, tubo compuesto. 2. Superficie externa: Cicatrices de hojas, presencia de lenticelas, 3. Superficie interna: Color, estriaciones, surcos, etc. C. Hojas. Para describir las hojas podemos guiarnos por las siguientes caractersticas: 1. Forma: Puede clasificarse tomando en cuenta el pecolo, pice, base, bordes, lmina o contorno y venacin. (Ver Fig. 1a - f) 2. Textura: Membranosa, coriceas, frgil, suculenta. 3. Superficie: Glabra o pubescente. 4. Color. mohos, lquenes, etc.

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5. Olor. 6. Dimensiones: Largo y ancho. 7. Condicin: Fresca, seca, completa, rota. 8. Peculiaridades: Presencia de glndulas, puntuaciones, pelos, etc.

Fig. 1a Algunos tipos de hojas atendiendo al pecolo.

Fig. 1b Tipos de hojas de acuerdo al pice.

Fig. 1c Tipos de hojas atendiendo a la base.

Fig. 1d Tipos de hojas atendiendo al borde del limbo.

Fig. 1e Tipos de hojas de acuerdo al contorno o forma.

Fig. 1f Tipos de hojas atendiendo a las nerviaciones. D. Flores. Al describir las flores tendremos en cuenta las siguientes caractersticas: 1. Estado de desarrollo. 2. Condicin: Fresca, seca, completa o parte de ella. 3. Color. 4. Olor. 5. Peculiaridades: Aspectos morfolgicos ms sobresalientes como son: tipo de inflorescencia, tipo de cliz, tipo de ptalos, nmero de estos, tipo de ovario, estambres etc. E. Frutos. Al hacerse el estudio macroscpico del fruto deben definirse que tipo y / o que parte del mismo constituye la droga. Las caractersticas ms importantes son: 1. Pericarpio: Color, textura, uniforme o modificado. 2. Dehiscencia. 3. Forma. 4. Dimensiones. 5. Color. 6. Olor. 7. Marcas externas o peculiares. F. Semillas Las caractersticas ms relevantes a considerar son:

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1. Caracteres fsicos: Forma, dimensin, dureza, peso, etc. 2. Color. 3. Olor. 4. Peculiaridades. Determinacin de las dimensiones de las hojas. En la descripcin de las hojas, uno de los parmetros evaluados son sus dimensiones, (Largo y ancho), los cuales pueden variar en dependencia del grado de desarrollo de la planta en el momento de la recoleccin. El estudio estadstico de la homogeneidad o dispersin de estos valores resulta importante para reconocer si en un tamao de muestra determinado, los valores encontrados se encuentran dentro de los informados en la monografa de referencia, si esta existe. En el estudio macro morfolgico de las hojas se incluye por tanto la dimensiones. evaluacin de sus

Para ello se selecciona un tamao de muestra n = 50 y con la ayuda de un pie de Rey o de una regla graduada se determina el largo y el ancho de las mismas. Aplicando los conocimientos estadsticos adquiridos se realizan los histogramas o representaciones graficas de cada parmetro y se determinan los valores de la media, desviacin estndar y coeficiente de variabilidad, analizando la correspondencia entre los valores calculados y los valores grficos. Actividad Prctica No 2 ALTERACIONES DE LAS DROGAS Introduccin Debido a condiciones inadecuadas de recoleccin y almacenamiento, las drogas crudas pueden sufrir distintas alteraciones. Estas alteraciones pueden afectar o no los principios activos sobre los cuales recae la accin farmacolgica de la droga. Toda evidencia de ataque por roedores, como pelos, heces y orina, es inaceptable y revela un gran descuido en la recoleccin y almacenamiento. Los roedores son trasmisores potenciales de diversas enfermedades, entre ellas; fiebre tifoidea, la peste bubnica y la lepra murera. Las ratas tambin albergan garrapatas y caros que son vectores de otras enfermedades. El deterioro de las drogas por insectos y en particular por roedores, convierten a la droga en su contrario, es decir, algo potencialmente peligroso para la salud humana, lo cual implica que no es apta para el consumo. El objetivo de esta actividad prctica es la deteccin en las drogas de insectos, los cuales se separan de las drogas por medios mecnicos y por medio de lquidos de diversa densidad. Los aspectos tericos deben ser revisados en el libro de texto. Parte experimental Materiales y reactivos.

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Placa de Petri. Microscopio estereo. Embudo separador. Plancha elctrica. Beaker de 500 mL. Beaker de 100 mL. Beaker de 50 mL. Tapones de goma. Varilla de vidrio. Pinzas. ter de petrleo 60-80 oC.

A. Deteccin de pelos de roedores. La droga se coloca extendida en una placa de Petri y se observa al microscopio estereoscpico con el menor aumento. Con la ayuda de una pinza se separan los pelos que se encuentren en la muestra. Observar los caracteres morfolgicos del pelo con el lente 400x en el estereoscopio. Comparar dichos caracteres con los de un cabello humano. B. Deteccin de heces de roedores (escbalos) Los escbalos de roedores pueden observarse al examinar la droga extendida en una placa de Petri. Tienen forma cilndrica terminando en punta ms aguda en uno de los extremos. El color vara de gris a marrn oscuro, casi negro con mayor frecuencia. El tamao esta generalmente en el rango de 3 - 10 mm. Tiene una densidad mayor que el agua, lo cual debe comprobarse colocando el escbalo en un beaker con agua suficiente. C. Deteccin de insectos. Para detectar insectos en la droga, se sigue la siguiente tcnica: Se coloca la droga ( 5 g aproximadamente), en un beaker con 150 mL de agua y se calienta hasta ebullicin. Se deja enfriar y se le aaden 30 mL de ter de petrleo 60 80 oC. y se agita vigorosamente. Se deja reposar y se decanta a un embudo separador la fase etrea con la interfase y algo de la fase acuosa. Se elimina abriendo la llave del embudo casi toda la fase acuosa. Por la boca del embudo se elimina, decantando con cuidado parte de la fase etrea. El resto se agita y se deposita rpidamente en un beaker pequeo. Se observan los insectos en el microscopio estereoscpico y se ubican en su tipo. Actividad prctica No 3 DETERMINACIN DE MATERIAS EXTRAAS Introduccin Se entiende por materias extraas, aquellas partes de la droga que no corresponden a las exigencias que seala la monografa en cuanto a color, tamao, estado y grado de pulverizacin, mezclas de otras partes de la planta o de otras plantas, polvo, arena, piedra y otras sustancias minerales. Este mtodo se basa en el examen visual de la droga cruda, pudiendo auxiliarse de lupas o del microscopio estereoscpico. El objetivo de esta actividad es determinar el contenido de materias extraas en una droga. Parte experimental

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Materiales y Equipos. Placas de Petri Balanza tcnica. Lupa o microscopio estereoscopio.

A. Peso de la muestra. Para este ensayo se utilizan, segn el tipo de droga, las cantidades siguientes: De semillas y frutos muy pequeos ---------------------------------------------10 g. De semillas y frutos normales --------------------------------------------------- 20 g. De drogas pulverizadas ----------------------------------------------------------- 50 g. De flores, hojas, hierbas, cortezas, races, rizomas y bulbos. --------- 100 g. B. Orden de ensayos. Determinacin de partes de la droga que no se corresponden con las exigencias que seala la monografa. Determinacin de partes de otras plantas. Determinacin de mezclas minerales (polvo, piedra, etc.)

C. Procedimiento. Teniendo en cuenta el peso de la droga sealado en el epgrafe A; proceda a la separacin manual de las partes sealadas en el epgrafe B, con la ayuda de una pinza o medio adecuado. Una vez concluido, pese cada una de las partes por separado. El resultado se expresa en por ciento y se calcula por la frmula siguiente:

P=
Donde:

X x 100 M

P = Porcentaje de materia extraa segn su clasificacin. X = Peso de la materia extraa. M = Peso inicial de la droga.

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I.2 MTODOS MICROSCPICOS. Los mtodos microscpicos ayudan a evidenciar los caracteres histolgicos de las drogas, as como a detectar posibles adulteraciones de las drogas en polvo. Tambin es til en microanlisis cualitativo y cuantitativo de polen, estomas, esporas, pelos epidrmicos, etc. En estos mtodos juega un papel importante los conocimientos adquiridos en histologa vegetal. La histologa se ocupa del estudio microscpico de los caracteres anatmicos de las clulas y tejidos; mientras que la histoqumica estudia las tcnicas encaminadas a la localizacin microscpica de los compuestos qumicos contenidos en las clulas y tejidos. Aunque son consideradas como ciencias independientes, no cabe dudas de que mediante el empleo de las tcnicas histoqumicas se aumenta el contraste de las distintas estructuras anatmicas y se facilita el estudio histolgico. Actividad prctica No 4 TCNICAS DE CORTE E INCLUSIN. Introduccin. Para llevar a cabo el estudio histolgico y posteriormente las reacciones histoqumicas, es necesario dominar tcnicas de corte para la obtencin de secciones muy finas del material vegetal, que faciliten su observacin al microscopio. El corte puede realizarse a mano con una cuchilla afilada, pero el xito de esta operacin depende de la habilidad del operario y del tipo de material, por ello este mtodo no es ventajoso ya que el mismo no es reproducible y algunos materiales no se pueden cortar adecuadamente. Para obtener cortes finos y reproducibles se utiliza el micrtomo; pero para ello es necesario darle a la muestra la debida consistencia y sujecin; emplendose para ello algunos mtodos, entre los que se encuentra la inclusin. Dentro de los mtodos de inclusin se encuentra: En parafina. En gelatina. En carbowax. Son objetivos de esta prctica el aprendizaje de los mtodos de corte e inclusin as como de la identificacin de los elementos anatmicos del tejido estudiado. Para la realizacin de esta actividad el estudiante debe revisar los aspectos tericos correspondientes en el libro de texto. Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipos. Parafina Bao histolgico. Carbowax 600 y 1500. Micrtomo. Papel grueso. Microscopio. Dedales para muestras. Seis beakers. Regla. Tijera.

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A. Inclusin en parafina. La inclusin en parafina es el mtodo ms ampliamente utilizado para dar la adecuada consistencia y sujecin al material que se va a cortar en secciones para la observacin al microscopio. Para confeccionar el molde de inclusin, sobre un papel grueso se trazan las lneas que se muestran en la Fig.2 y se siguen las siguientes instrucciones:

C A B

D A' B'

a a' C'

b b' D'

Fig. 2 Molde de inclusin en parafina. Doble el papel grueso a lo largo de CC' y DD'. Despus doble a lo largo de AA' y BB'. Doble el papel hacia atrs segn aa' y bb'. Doble y saque hacia atrs el papel segn las diagonales cortas de un extremo. Para completar el dobles ponga el final y lado perpendicular con el dobles de la diagonal, corte y vire hacia adentro la hoja resultante del final de la pared. Levante el lado opuesto de la pared, doble esta hoja hacia atrs. Finalmente doble hacia abajo y hacia atrs la seccin superior de la pared final y cierre as de modo seguro, un extremo. Repita toda la operacin con el otro extremo para obtener el molde.

Los pasos necesarios para la inclusin se ilustran en la Fig.3. El proceso normal de deshidratacin dura unas 12 horas para las piezas chicas y de 27 a 49 horas para las piezas mayores. La impregnacin de 4 a 6 horas en el primer recipiente de parafina fundida para desplazar el reactivo intermediario otras 4 a 6 horas en el segundo recipiente.

EtOH 45%

EtOH 60%

EtOH 75%

EtOH 95%

EtOH absoluto Reactivo Intermediario

ESTUFA

PARAFINA

PARAFINA

PARAFINA DE INCLUSION

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Fig. 3 Esquema de la inclusin en parafina. Para adaptar este esquema al tiempo de la prctica se utilizarn drogas que no requieran el proceso de fijacin o lavado, procedindose de la siguiente forma: Coloque la pieza de la droga a incluir en el dedal para muestra y pngalo en el primer recipiente para la deshidratacin, espere 10 min. ; pselo al segundo recipiente y de ah a los restantes empleando el mismo tiempo para cada uno. Para los dos pasos de impregnacin el tiempo a emplear ser de 15 min. en cada uno. Finalmente se incluye en el molde colocando la pieza incluida, sostenida con una pinza y aadiendo la parafina fundida, esperando hasta su solidificacin. B. Inclusin en Carbowax. El esquema de inclusin en carbowax se presenta en la Fig.4. Se excluye como en el caso anterior las operaciones de fijado y lavado. En la adaptacin del mtodo para el tiempo de la prctica se toman 10 min. para agua / carbowax 600 y para carbowax 600. En los pasos de impregnacin el tiempo es de 15 min. cada paso. Para la inclusin se emplear las barras de Leuchart (Fig.5). Estas barras consisten en dos barras de metal, cada una de las cuales esta doblada en uno de sus extremos en ngulo recto y que unidas en sentido inverso forman un rectngulo. Esta barras se colocan sobre una plancha de metal pulido o cristal grueso, que servirn de fondo al rectngulo, para construir el reservorio dentro del cual ir la muestra a incluir.
ESTUFA

Carbowax 600 50%

Carbowax 600 Carbowax 600

Carbowax 1500

Fig. 4 Esquema de la inclusin en Carbowax.

Fig. 5 Barras de Leuchart C. Realizacin de los cortes. Descripcin de los caracteres anatmicos. Para realizar un corte en el micrtomo de deslizamiento, el alumno debe identificar los elementos del instrumento sealados en el esquema de la Fig.6 y comprender los fundamentos de su funcionamiento bajo la gua del instructor. Despus montar el bloque de inclusin en la mordaza y efectuar el corte. Una vez realizado el corte para su observacin, es necesario realizar los siguientes pasos: a) Si se trata de una inclusin en parafina. Colocar el corte en el bao histolgico.

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Aadir al porta objetos una gota de solucin de albmina-glicerina 1:1 y se introduce en el bao histolgico por debajo del corte para recogerlo. Se saca, se deja escurrir y se seca en la estufa 15 min. (Fijacin) Despus de seco se desparafina realizando 3 pases por Xilol y1 por agua. Se coloca el cubreobjeto y se observa al microscopio.
CUCHILLA

MORDAZA BASE

TORNILLO MICROMETRICO

Fig. 6 Esquema del micrtomo de deslizamiento. 2. Si se trata de un corte en Carbowax: Se realiza la fijacin, colocando el corte sobre el portaobjeto que contiene la solucin de albmina-glicerina 1:1. Se lava con agua. Se coloca el cubreobjeto y se observa al microscopio.

En la observacin microscpica el estudiante debe identificar los caracteres anatmicos del tejido y dibujar el corte. Para corroborar la eficiencia del mtodo puede realizar un corte a mano y comparar sus resultados. Actividad prctica No 5 CORTES POR CONGELACIN. Introduccin. Dentro de los mtodos empleados para darle a la muestra a cortar la debida consistencia, se encuentran tambin los de congelacin entre los cuales podemos citar: CO2. Congelacin con N2 lquido. Efecto Peltier.

De acuerdo con el mtodo utilizado para producir el fro y la congelacin utilizaremos para realizar los cortes el micrtomo de enfriamiento con CO2 y el micrtomo de enfriamiento con N2 lquido. La expansin adiabtica de los gases reales produce un descenso de la temperatura. Para distintos gases en igualdad de condiciones la magnitud de este descenso est determinado por el coeficiente de Joule-Thomson. Este principio se utiliza en el micrtomo de congelacin de CO2. La expansin del CO2 se produce en el cabezal del micrtomo como se muestra en la Fig. 7.

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CUCHILLA

ORIFICIOS

TORNILLO MICROMETRICO REGULADOR

BALON DE CO2

Fig. 7 Esquema del micrtomo de congelacin por CO2. El cabezal no es ms que un cilindro hueco de poca altura con una serie de agujeros en la periferia para permitir la salida del gas. Sobre la tapa del cabezal se dispone un pequeo cilindro de papel (abierto por ambos extremos) donde se coloca la muestra en el lquido de inclusin. Despus de la congelacin se forma un bloque cilndrico que se adhiere firmemente a la superficie del cabezal de forma consistente para el corte. Un esquema similar al anterior (Fig.8) utiliza N2 lquido para producir la congelacin. Inyectando aire en el termo, se produce una presin positiva que impulsa el nitrgeno hacia el cabezal donde llega generalmente en estado gaseoso a una temperatura lo suficientemente baja para enfriar profundamente el cabezal. Las flechas rectas indican los dos movimientos bsicos del micrtomo para realizar el corte. El objetivo de esta actividad, es el aprendizaje de los mtodos de corte por congelacin. Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipos. Placas Petri Micrtomo por congelacin por CO2 Papel para cilindro. Goteros. Micrtomo de congelacin por N2 lquido. Lquido de inclusin Pinzas Microscopio de transmisin.

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CUCHILLA

Fig. 8 Esquema del micrtomo de congelacin por nitrgeno lquido. A. Corte con micrtomo de CO2.

ORIFICIOS

BASE

Se coloca un TERMO O DEWAR cilindro pequeo de papel en la parte central de la superficie del cabezal. Mediante la llave de regulacin se suministra CO2 al cabezal para producir la congelacin. Se aaden unas gotas de lquido para sellar el fondo. Con una pinza se adhiere la muestra al fondo congelado y se orienta en la posicin adecuada. Se llena el cilindro con lquido de inclusin, una vez congelada la muestra se retira el cilindro de papel con una cuchilla y se efecta el corte en la misma forma utilizada para realizar el corte por inclusin en parafina. Los cortes se recogen de la superficie de la cuchilla arrastrndolas con unas gotas de lquido de inclusin hacia una placa Petri que contiene dicho lquido. De la placa de Petri se recogen con un gotero y se colocan sobre el portaobjetos. Se tapa con el cubreobjeto y se observa al microscopio. B. Corte con micrtomo de N2 lquido. La congelacin se produce inyectando aire en la vasija termo para forzar la salida del N2 hacia el cabezal. Los procedimientos para la preparacin de la muestra y el corte son similares a los descritos para el corte por congelacin con CO2. La pieza a cortar debe impregnarse durante 6-12 h en el lquido de inclusin antes de realizar el corte. El lquido de inclusin debe prepararse de la siguiente forma: Polietilenglicol 4000 Polietilenglicol 600 Sodio Lauril Sulfato Agua destilada ------------------------------------------------------------------------------------------------- ------------------2, 0 g. 0,5 g. 0,1 g. 8 mL.

C. Descripcin de los caracteres anatmicos. En la observacin microscpica el estudiante debe identificar los caracteres anatmicos del tejido y dibujar el corte. Para corroborar la eficiencia del mtodo puede realizar un corte a mano y comparar sus resultados. Los detalles anatmicos que deben observarse y dibujar dependen de la parte con que se realiz el corte y se describen adecuadamente en el libro de texto. Actividad prctica No 6 REACCIONES HISTOQUMICAS SOBRE TEJIDOS VEGETALES. Introduccin.

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La histoqumica es la ciencia que estudia las tcnicas encaminadas a microscpica de los compuestos qumicos contenidos en las clulas y tejidos. la localizacin

Es por tanto el objetivo fundamental de esta actividad la realizacin de las tcnicas de tincin que permiten la identificacin microscpica de diferentes compuestos qumicos. Es importante para la realizacin de esta actividad que el alumno maneje los mtodos de corte del tejido vegetal. Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipos. Cortes histolgicos Microscopio de transmisin Porta y cubre objetos. Plancha elctrica. Goteros Reactivos de tincin Microscopio de luz UV. Cmaras de tincin.

A. Deteccin de sales inorgnicas. 1.Sales de potasio: a) Con solucin de dipicrilamina de sodio, se forman rombos amarillos con ngulos o agregados ramificados. b) En el corte seco colocado en una solucin verde de nitrato de cobre y calentado, aparecen cubitos marrones oscuros de nitrito de potasio-cobre. 2. Sales de sodio. Se colocan los cortes en una solucin de acetato de zinc-uranilo. A la luz ultravioleta los cristales se observan fuertemente fluorescentes, con ambos extremos afilados; pueden tambin ser romboides, hexagonales y deformados. 3. Sales de calcio. Se presentan como oxalato de calcio, solubles en cidos minerales. Se les encuentra en forma de drusas, rafidios y cristales individuales. a) Despus de la adicin de cido sulfrico del 3 al 5 % se forman agujas y cristales con sus extremos ranurados. La reaccin se hace ms sensible al aplicar cido sulfrico en alcohol al 96%. Con cido sulfrico al 75 % se forman agujas de yeso (sulfato de calcio) b) Como picrolonato de calcio: Se utiliza el cido picrolnico puro saturado en alcohol al 20 %, se forman cristales amarillos, granulosos, de superficies mltiples, insolubles en cloroformo y agua y difcilmente solubles en alcohol al 90 %. c) El cido oxlico de los cristales de oxalato de calcio se comprueba como sal de plata, poniendo el corte de la droga en una solucin de nitrato de plata acidulada (10 % de AgN03,en10 %de HNO3). Alrededor de los cristales de oxalato de calcio se forman lentamente prismas de oxalato de plata.

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d) Se comprueba el cido carbnico de los carbonatos de calcio contenido en los cistolitos, observando las burbujas de gas que surgen al aadir el cido clorhdrico. 4. Sales de hierro. Se trata con una solucin de ferricianuro de calcio al 5 % y se aade cido clorhdrico al 3 %, producindose coloracin azul. 5. Sales de cobre. Se reconoce como ferricianuro de cobre mediante ferricianuro de calcio producindose una coloracin marrn. B. Deteccin de hidratos de carbono. La reaccin del -naftol (Molisch) resulta positiva con todas las categoras de azucares, inulina, almidn y por tanto no es especifica, se humedece la muestra con -naftol al 20 % en alcohol y se aade cido sulfhdrico concentrado. Aparece una coloracin rojoviolceo. 1. Monosacridos. a) Solucin de Fehling: Se mezcla una gota de la solucin A ms otra de la solucin B. Se deposita en el corte y se calienta. Se hace visible un precipitado de xido de cobre, rojo anaranjado o amorfo. b) Las cetonas se prueban segn Seliwanoff: Se calienta con cido concentrado con un 0,5 % de resorcina, generndose una coloracin roja. clorhdrico y cido clorhdrico,

c) Para la formacin de osazonas, una gota de reactivo de fenilhidracina se coloca en el corte a examinar, cubierto con el portaobjetos. Se mantiene durante tres minutos bajo la accin del vapor de agua; aparecen las agujas amarillas de osazona. d) Para la formacin de hidrazonas, el corte se embebe con dos gotas de la solucin 2. Solucin 1: Clorhidrato de mbar. fenilhidracina 1 parte y 10 partes una gota de la solucin 1 y

de glicerina guardada en frasco

Solucin 2: Una parte de acetato de sodio en 10 partes de glicerina dem a la anterior. La preparacin se calienta en un bao Maria. Un ensayo positivo es cuando se observa microscopio cristales de naranja a rojo correspondientes a las fenilhidrazonas. 2. Celulosa. a) Produce con el reactivo de cloro-zinc-yodo, en fro, una coloracin azul violeta. b) Tratando con cido sulfrico al 80 % y con adicin de agua y yodo en solucin, se forma coloracin azul. 3. Hemi-celulosa. Son fcilmente solubles en cido sulfrico al 30%; algunas hemicelulosas lo son en solucin caliente de hidrato de cloral. 4. Pectinas. al

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Son insolubles en cuoxan (disolucin reciente de hidrxido de cobre en amoniaco concentrado) y fcilmente solubles en agua caliente y se colorean igual que los muclagos, con azul de metileno o rojo neutro. 5. Muclagos y gomas. Las caractersticas de los muclagos de hincharse se hace visible tratndolos con idantreno. Se pone el corte seco o el polvo en la solucin de dos partes de idantreno con ocho partes de agua y se observa inmediatamente que los trozos de muclagos se hinchan; observados al microscopio se muestran como manchas claras llenas de partculas de idantreno, o sea aparece como una mancha transparente en el preparado oscuro. C. Deteccin de Lignina. 1. La lignina se detecta humedeciendo el corte con una solucin de floroglucinol y luego con cido clorhdrico al 5%; se obtiene una coloracin roja. 2. Una solucin de sulfato de anilina al 2% en agua produce una coloracin amarilla. 3. Si durante 5 min. se trata con una solucin de permanganato, se lava con agua, luego se trata con cido clorhdrico diluido durante dos min. se lava de nuevo y se trata con amoniaco, aparece una coloracin rosada.

D. Deteccin de sber y cutina. Al contrario de la celulosa son insolubles en cuoxan, cido sulfrico concentrado y cido crmico concentrado. 1. Se pueden colorear utilizando colorantes grasos: Con una solucin al 6 % de rojo Sudan III en alcohol y glicerina a partes iguales, durante media hora, calentando de vez en cuando y lavando bajo el microscopio con alcohol al 50% hasta que toda la materia colorante superflua se elimine y solo se observe la tincin roja de esos tejidos. 2. EL sber puede tambin teirse con rojo escarlata al 0,5 % en solucin de hidrato de cloral, con, adicin de amoniaco a manera de alcalinizar; se calienta varias veces y se observa al cabo de i0 min. 3. Con hidrxido de potasio al 40 %, con calentamiento cuidadoso, se producir coloracin amarilla e hinchamiento de la membrana suberosa. 4. Unas gotas de solucin saturada de yodo, aadidas al corte previamente tratado con cido sulfrico al 90 % y lavado con agua, tie el sber y la cutina de amarillo. E. Deteccin de celulosa, sber y cutina. Triple tincin. Colocar el corte en El portaobjetos. Aadir unas gotas de solucin de floroglucinol al 2 % en etanol y dejar evaporar casi a sequedad. Aadir dos gotas de cido sulfrico acuoso (6:3). Esperar 5 seg., secar el exceso de solucin cida y aadir unas gotas del reactivo preparado con 5 partes de cido sulfrico concentrado y tres partes de solucin saturada de yoduro de potasio en glicerina. Dejar actuar la mezcla unos 2 seg. y lavar con solucin de cido sulfrico (6:3). Este lavado no debe ser completo. Observar al microscopio, si la celulosa no toma la tincin adecuada se lava con solucin de cido sulfrico (7:3)

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La celulosa toma color azul y la cutina y el sber amarilla. F. Deteccin de aceites fijos. 1. Los cortes en hidrato de cloral y rojo escarlata al 0,5 % dejndolos bajo calentamiento algn tiempo, aparecen las grasas como esferas rojas en el preparado. 2. Despus del tratamiento con Sudan III en glicerina, aplicando calor y lavando con alcohol al 50 %, aparecen las gotas de grasas coloreadas de rojo. G. Deteccin de albminas. Generalmente son granos de aleuronas que se presentan en varias formas en muchas semillas. La comprobacin de la presencia de albmina se hace por reacciones coloreadas, debindose tener en cuenta que la reaccin positiva slo indica la presencia de un cierto grupo en la molcula de albmina. 1. La reaccin de Milln produce, cuando se calienta con el corte una coloracin roja difusa, que indica el grupo de la tirosina en la molcula de albmina. 2. La reaccin de biuret, utiliza solucin saturada de sulfato de cobre por ms o menos media hora; luego de lavar con agua y tratar con hidrxido de potasio al 40 %, se forma una coloracin violeta que indica grupos CONH2 o sea el enlace peptdico. 3. La reaccln xantoproteica utiliza cido ntrico concentrado, el cual colorea la albmina, cuando se calienta, de amarillo, y al sobresaturarla con amoniaco el color se torna pardo marrn. La reaccin no es completamente especifica puesto que tambin las resinas dan una coloracin amarilla. Esta reaccin es causada por el grupo triptfano y la fenilalanina. 4. Los granos de aleurona son disueltos en hidrato de cloral y para hacerlos visibles se colocan los preparados en aceite de almendras, glicerina o una solucin de azcar concentrada; as aparecen como pequeas esferitas. 5. Los componentes de un grano de aleurona se pueden visualizar si el corte se coloca en sacarosa concentrada conteniendo yodo, o mejor, en una solucin de yodo-glicerina. Al cabo de unos minutos se ve el cristaloide coloreado de amarillo oscuro en la masa clara y el globoide se percibe como una esferita incolora. H. Deteccin de aceites voltiles. El corte se humedece con una solucin de Sudan III al 5 % en etanol al 70 %. Despus de 15-20 minutos se lava el exceso de colorante con etanol al 50 %. Se adiciona una gota de glicerina y se observa al microscopio. Los aceites esenciales aparecen como puntos o gotas rojas dentro de las clulas.

I. Deteccin de aldehdos. El corte se humedece con una solucin de difenilamina al 1 % en cido sulfrico concentrado. La preparacin se calienta con un bao Maria: Si hay formaldehdo: La solucin se colorea de verde de forma estable. Si hay otros aldehdos: La preparacin se colorea de verde y cambia posteriormente a rojo. J. Deteccin de aminocidos y aminas.

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El corte se humedece con una solucin de ninhidrina al 5 % en etanol. La preparacin se calienta en un bao Maria. El ensayo es positivo si aparecen zonas azul oscuro a violeta: K. Deteccin de alcaloides. El corte se humedece con una solucin de cido tartrico al 5% en etanol. Se deja secar y se aade solucin reactiva de Dragendorff. Los alcaloides se detectan como puntos o aglomeraciones rojoladrillo sobre fondo amarillo-naranja. L. Deteccin de antocianinas. Los colores rojo o azul de los cortes de forma natural, debido a las antocianinas, cambian a un color verde si el corte se trata con una gota de amoniaco concentrado. M. Deteccin de flavonoides. El corte, se humedece con etanol y se aade una solucin de hidrxido de potasio al 10% en etanol. Las partes que contienen flavonoides se colorean de amarillo. N. Deteccin de quinonas. El corte se humedece con una solucin de hidrxido de potasio al 10% en etanol al 50 %. EL desarrollo de una coloracin rojiza indica un ensayo positivo. O. Deteccin de enzimas (oxidasa). El corte se humedece con una solucin de bencidamina al 10% en etanol al 60%. La reaccin se observa transcurridos 45 minutos: Color azul: Si la enzima infiere acidez al tejido. Color carmelita: Si la enzima infiere basicidad al tejido. P. Deteccin de glucsidos. Se basa en el ensayo de Guignard por la produccin de cido hidroxiamnico al descomponerse los glucsidos. El corte se embebe 30 min. con una solucin de cido pcrico en agua al 1 %. Se lava con agua y se aade una gota de solucin de carbonato de sodio al 10% en agua. Un ensayo positivo se indica por el desarrollo de una coloracin roja. Q. Deteccin de taninos. Al observarse al microscopio drogas que contienen taninos, se destacan stos como masas de contenido marrn oscuro y/o rojo. 1. Se humedece El corte con una solucin de vainillina alcohlica al 1% y se aade una gota de cido clorhdrico apareciendo una coloracin rojo brillante. 2. Humedeciendo la preparacin con p-dimetilamino benzaldehdo al 3 % en solucin de cido sulfrico al 60 %, se torna de color rojo. 3. El corte se humedece con una solucin acuosa de cloruro frrico al10 % y una gota de solucin diluida (1-5%) de carbonato de sodio en agua. Si hay taninos la preparacin se colorea de azul o verde. El estudiante deber realizar todas las observaciones e informar sus resultados.

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Actividad practica No 7 EXAMEN E IDENTIFICACIN DE DROGAS EN POLVO. Introduccin. Las caractersticas microscpicas junto con las reacciones microqumicas de las drogas en polvo se utilizan para la identificacin de las especies. Estas caractersticas son lo suficientemente constante para posibilitar una evaluacin adecuada de la droga. Caractersticas tales como el color y el olor y aspectos cualitativos de las reacciones con yodo y floroglucina, la presencia o ausencia de oxalato de calcio, ofrecen criterios para clasificar las drogas en polvo. Deducciones ms concluyentes se apoyan o estn basadas en rasgos anatmicos caractersticos. Tejidos como vasos, pelos, fibras, sber o corcho, glndulas, estomas, etc. y reacciones para la deteccin de taninos, quinonas, grasas, resinas, azcares, protenas, etc; facilitan una identificacin ms precisa. El objetivo de esta actividad es la evaluacin microscpica de drogas en polvo. Parte experimental Materiales y reactivos. Equipos Porta y cubre objetos Reactivos de tincin. Microscopio de transmisin. Droga en polvo

En cualquier examen de una droga en polvo, se deben hacer las siguientes observaciones: A. Color El color puede revelar la parte del vegetal de que se trate. Las hojas y las plantas compuestas son generalmente verdes, las drogas de corteza son bronceadas o. marrones, mientras que los rganos bajo tierra son generalmente de colores claros. B. Reaccin con solucin de yodo. Los almidones y la mayor parte de los rganos bajo tierra dan una reaccin positiva intensa. Leos, corteza y flores frecuentemente contienen almidn y los grnulos, o son pequeos o estn ausentes. (Fig.9)

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Fig. 9 Granos de almidn. C. Reaccin con el reactivo de floroglucina. Cortezas y leos generalmente contienen tejido lignificado en cantidades ms grandes que cualquier otra parte de la planta. La ausencia de fibras lignificadas es una caracterstica frecuente y significativa en la identificacin. D. Presencia de ciertas clulas. La deteccin y caracterizacin de las siguientes clulas o tejidos en las drogas en polvo son necesarias para su identificacin. 1) Elementos conductores: No estn presentes en las drogas de corteza. Los vasos de las hojas y de las flores son generalmente pequeos (Fig. 10)

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Fig. 10 Elementos conductores 2) Estomas: Estn presentes en hojas, partes de flores y algunos tallos. El arreglo de las clulas acompaantes puede ayudar a la caracterizacin (Fig. 11)

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Fig. 11 Clulas epidrmicas (A, B, C y D). Estomas (E, F, G y H) 3) Clulas de parnquima: Son generalmente abundantes en races y rizomas y poco frecuentes en cortezas y leo (Fig. 12) 4) Pelos: Se encuentran comnmente como elementos de hojas, flores, frutos, semillas, etc. (Fig. 13 y 14) 5) Clulas de sber: No se encuentran en hojas, flores, leos o partes de frutos y pueden estar ausentes en algunas cortezas, races y rizomas (Fig. 15) 6) Tambin pueden encontrarse como elementos microscpicos de las drogas en polvo, fibras (Fig. 16), esclridos (Fig. 17) y colnquima (Fig. 18) E. Presencia de ciertas sustancias qumicas. 1) Oxalato de calcio. Cuando estn presentes como cristales se describen para cada especie y son de considerable importancia en la caracterizacin (Fig 19) 2) Aleurona. Los granos de aleurona estn presentes en semillas fundamentalmente.

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Fig. 12 Clulas de parnquima

Fig. 13 Pelos tectores. Las pruebas de taninos, aceites fijos, aceites esenciales, quinonas, etc; resultan tambin de valor. Para la realizacin de todos los ensayos qumicos pueden llevarse a cabo las reacciones referidas en la actividad practica anterior.

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Fig. 14 Pelos secretores.

Fig. 15 Clulas de sber. Pueden emplearse adems los siguientes reactivos: Mezcla aclarante. Hidrato de cloral / glicerina / agua (5:3:2) Se suman los efectos aclarantes del hidrato de cloral y de la glicerina, las soluciones no son excesivamente viscosas. Es un buen aclarante. Agua de Yodo. Se agitan en un matrz con l00 mL de agua y uno o dos cristales de yoduro de potasio, aproximadamente 0,1 g de yodo. No se filtra, en el fondo del frasco deber quedar siempre algo de yodo sin disolver. Carmn-verde yodo. Se someten a ebullicin 1,2 g de carmn con 100 mL de disolucin acuosa de sulfato aluminio potsico a1 15%. Se enfra y se filtra. Se aaden 10 mL de disolucin acuosa de verde yodo al 0,75%. La lignina y la suberina se tien de verde mientras que la celulosa de rojo-violeta. Sudn III. Se disuelve bajo reflujo 0,5 g de rojo Sudan III en 50 mL de etanol al 96%, o de isopropanol. Se deja enfriar, se filtra y se aaden 50 mL de glicerina. Aceites fijos, aceites esenciales, ceras, cutina y suberina. fijan el colorante llpfilo colorendose de rojo despus de algn tiempo.

El estudiante deber realizar todas las observaciones e informar sus resultados.

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Fig. 16 Fibras.

Fig. 17 Esclereidos.

Fig. 18 Tipos de colnquima

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Fig. 19 Cristales de oxalato de calcio. Actividad practica No 8 ESTUDIO MICROSCPICO DE LOS GRANOS DE POLEN Introduccin. Los granos de polen, constituyen un producto natural utilizado en la preparacin de alergenos; son con frecuencia caractersticos para una especie y algunas familias de plantas. El tamao, la forma, la estructura y frecuencia de los poros y la naturaleza de la superficie; son rasgos caractersticos utilizados para la identificacin. EL objetivo de esta actividad es que el estudiante reconozca los granos; determine su tamao y aprenda a realizar conteos de los mismos. Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipos Portaobjetos Cubreobjetos Solucin de Calberla Etanol Petrolato slido Polen de diferentes especies. Microscopio de transmisin Micrmetro ocular. Micrmetro de platina.

A. Reconocimiento de granos de polen. Seleccione 3 muestras de polen de un herbario y coloque una pequea cantidad en el centro de una lmina o portaobjetos. Aada una gota de etanol en el centro y deje que se seque la preparacin.

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Repita la operacin y seque el anillo oleoso. Aada una gota de solucin de Calberla, cbrala cuidadosamente, examine y dibuje el polen teniendo en cuenta los siguientes elementos. 1) Tamao: Puede oscilar entre 10 - 200 micrones. Determine el tamao promedio de sus muestras. 2) Forma: Puede ser redonda, ovalada, polidrica, irregular, elptica, etc. 3) Espesor de la exina y de la entina. 4) Estructura y frecuencia de los poros. 5) Naturaleza de la superficie: Puede ser, reticular, granular, enrollada, agujereada, especiculada. pilosa, etc. B. Abundancia de polen atmosfrico. Se exponen tres lminas recubiertas con una pelcula fina y uniforme de petrolato, durante 24 horas a la atmsfera. Seleccione un lugar que ofrezca proteccin de la lluvia, viento etc. Traslade las lminas en una caja apropiada, tia cada lmina con solucin de Calberla, cbrala y cuente el nmero de granos de polen bajo el cubreobjetos en un rea definida. Determine el nmero promedio de granos por centmetro cuadrado. Seleccione el polen predominante. Haga un conteo diferencial e informe todos los resultados. I.3 MTODOS FSICO-QUMICOS APLICADOS AL ANLISIS DE DROGAS CRUDAS. PARMETROS DE CONTROL DE LA CALIDAD. Mediante el empleo de los mtodos fsico-qumicos de anlisis puede determinarse y establecerse la calidad de una droga, as como, completar su identificacin. Esta etapa de trabajo de laboratorio tiene como objetivo ejercitar a los estudiantes en la realizacin de mtodos de anlisis que permitan la evaluacin de drogas crudas. Para la realizacin de estas actividades es importante adquiridos en las asignaturas precedentes. rememorar y aplicar los conocimientos

La evaluacin fsico-qumica de las drogas comprende diferentes cuales describimos a continuacin. Actividad prctica No 9

mtodos, algunos de los

DETERMINACIN DE CENIZAS TOTALES, SOLUBLES EN AGUA E INSOLUBLES EN CIDO. Introduccin Se denominan cenizas totales al residuo inorgnico que se obtiene al fundamentalmente en su determinacin gravimtrica. incinerar una droga,

Las cenizas solubles en agua es aquella parte de las cenizas totales que se disuelven en agua y las cido insolubles, el residuo que se obtiene despus de la disolucin de las cenizas totales en cido clorhdrico al 10%. Parte experimental Materiales y reactivos.

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Crisol de porcelana o platino. cido clorhdrico al 10 % Trpode. Agua destilada. Tringulo de porcelana. Papel de filtro libre de cenizas Mechero. Acido ntrico reactivo. Mufla. Desecadora. Solucin de nitrato de amonio 10g/100mL. Perxido de hidrgeno concentrado.

A. DETERMINACIN DE CENIZAS TOTALES. Se determina la masa de no menos de 2.0g ni ms de 3.0g de la porcin de ensayo pulverizada y tamizada con una desviacin permisible de 0.5mg en un crisol de porcelana o platino (en dependencia de la sustancia analizada) previamente tarado. Caliente suavemente la porcin de ensayo aumentando la temperatura hasta carbonizar y posteriormente incinere en un horno mufla a una temperatura de 700 a 750 oC, si no se seala otra temperatura en la norma especfica, durante 2h. Se enfra el crisol en una desecadora y se pesa, repitindose el proceso hasta que dos pesadas sucesivas no difieran en ms de 0.5mg por g (masa constante) Para obtener la masa constante los intervalos entre calentamiento y pesada son de 30min. Si el residuo presenta trazas de carbn, se le aaden unas gotas de solucin de perxido de hidrgeno concentrado, cido ntrico o solucin de nitrato de amonio al 10% m/v y se calienta hasta evaporar los solventes. Al enfriar el crisol el residuo es de color blanco o casi blanco. Expresin de los resultados:

C=

M2 - M M1 - M

x 100

C = porcentaje de cenizas totales en base hidratada. M = masa del crisol vaco (g) M1= masa del crisol con la porcin de ensayo(g) M2= masa del crisol con la ceniza (g) 100= factor matemtico para los clculos. Los valores se aproximan hasta las dcimas. B. DETERMINACIN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA. A las cenizas totales obtenidas en A, se le aaden de 15 a 20 mL de agua. El crisol se tapa y se hierve suavemente a la llama del mechero durante 5min. La solucin se filtra a travs del papel de filtro libre de cenizas. El filtro con el residuo se transfiere al crisol inicial, se carboniza en un mechero y luego se incinera en un horno mufla de 700-750 oC, durante 2h. Posteriormente se coloca en una desecadora y cuando alcance la temperatura ambiente se pesa. Se repite el procedimiento hasta alcanzar peso constante. Expresin de los resultados.

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M2 - Ma Ca = M1 - M

x 100

Ca = porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada. M2 = masa del crisol con las cenizas totales (g). Ma =masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g) M1 = masa del crisol con la muestra de ensayo (g) M = masa del crisol vaco. 100 = factor matemtico. Los valores se aproximan a las dcimas. C. DETERMINACIN DE CENIZAS INSOLUBLES EN CIDO CLORHDRICO. Procedimiento. A las cenizas totales obtenidas segn la tcnica, se le aaden de 2-3 mL de cido clorhdrico al 10%. El crisol se tapa con un vidrio reloj y se calienta sobre un bao de agua hirviente durante 10min. Se lava el vidrio reloj con 5mL de agua caliente y se une al contenido del crisol. La solucin se filtra a travs de un papel de filtro libre de cenizas; se lava el residuo con agua caliente hasta que el filtrado acidulado con cido ntrico p.a; al cual se le aade una o dos gotas de solucin de nitrato de plata 0.1mol/L, no muestre presencia de cloruros. El filtrado con el residuo se deseca de 100 a 105 o C, se transfiere al crisol inicial y se incinera en un horno mufla a una temperatura de 700-750 o C durante 2h (si no se seala otra temperatura en la norma especfica) Posteriormente se coloca en una desecadora y cuando alcance la temperatura ambiente se pesa. Se repite el procedimiento hasta obtener masa constante. Expresin de los resultados

M2 - M B= M1 - M

x 100

B= porcentaje de cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada. M = masa del crisol con la porcin de ensayos (g) M2= masa del crisol con la ceniza (g) 100= factor matemtico. Los valores se aproximan hasta las dcimas.

Actividad prctica No 10 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE HUMEDAD Introduccin. La presencia de exceso de agua en las drogas vegetales, puede promover el crecimiento de hongos, insectos y la hidrlisis de constituyentes que pueden provocar el deterioro de la droga. Es por ello, que los lmites en el contenido de agua debe ser determinado para las drogas vegetales, especialmente para aquellas que absorben fcilmente la humedad o en las cuales el deterioro puede ser promovido por la presencia de un exceso de agua. Los lmites de agua usualmente establecidos en las farmacopeas oscilan entre 8 y 14% con pocas excepciones. Los dos mtodos ms usados para determinar el contenido de

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agua en las drogas vegetales son el gravimtrico (prdida por desecacin) y el azeotrpico (destilacin con tolueno). El mtodo gravimtrico es el ms fcil, pero no es aplicable a drogas que contengan sustancias voltiles. El mtodo azeotrpico requiere de un equipo especial, lo cual comparativamente dificulta su uso, pero es aplicable a drogas que contengan sustancias voltiles. A. PRDIDAS POR DESECACIN. MTODO GRAVIMTRICO. en masa que muestra una droga

Se basa en la determinacin gravimtrica de la prdida despus de ser desecada en la estufa. Parte experimental. Materiales y Equipos. Balanza analtica vD 0,1 mg. Cpsula de porcelana Estufa u horno de calentamiento Desecadora.

Procedimiento. De la muestra de laboratorio, con el grado de trituracin que determine la norma especfica, se pesan 2g con desviacin permisible de 0.5 mg y se transfieren a una cpsula de porcelana previamente tarada y desecada a 105 oC hasta masa constante; seguidamente se deseca a 105 oC durante 3h. La cpsula se coloca en la desecadora donde se deja enfriar a temperatura ambiente y se pesa, colocndose nuevamente en la estufa durante 1h, volvindose a pesar, hasta obtener una masa constante. Expresin de los resultados.

M2 - M1 Hg = M2 - M

x 100

Hg = prdida en peso por desecacin (%). M2 = masa de la cpsula con la muestra de ensayos (g) M1 = masa de la cpsula con la muestra de ensayo desecada (g) M = masa de la cpsula vaca. 100 = factor matemtico. Los resultados se aproximan a las dcimas. B. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE AGUA. METODO AZEOTRPICO. Se basa en la destilacin por arrastre con tolueno, del agua contenida Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipos. Plancha elctrica o fuente de calor Tolueno. Equipo del esquema (Fig 20) en la droga.

Procedimiento.

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A un baln de 500 mL se transfiere 200 mL de tolueno, se le aaden 2 mL de agua, se monta el equipo, se le aade tolueno al tubo colector hasta el cuello. Se coloca en la fuente de calor y se destila hasta que el volumen de agua en el tubo colector permanezca constante y se mide el volumen inicial de agua (V1). Se deja enfriar el tolueno (tolueno saturado). De la de 0.5 equipo en el muestra de ensayo pulverizada y tamizada, se pesan 10g, con un error mximo mg y se transfiere al baln que contiene el tolueno saturado de agua; se pone el a la fuente de calor nuevamente y se destila hasta que el volumen de agua tubo colector permanezca constante, midindose el volumen final de agua (Vt).

Fig. 20 Equipo de determinacin de humedad. Mtodo azeotrpico. Expresin de los resultados.

Vt - V1 H= M

x 100

H = Humedad residual (%) V1 = Volumen de agua inicial (mL) Vt = Volumen de agua final (mL) 100 = Factor matemtico. Los resultados se aproximan hasta las dcimas.

Actividad prctica No 11 DETERMINACIN DE SUSTANCIAS SOLUBLES. Se basa en la extraccin de las sustancias solubles en agua, alcohol o mezclas hidroalcohlicas, mediante maceracin y evaporacin hasta sequedad de una alcuota del extracto. Parte experimental. Materiales y reactivos. Balanza analtica. Disolvente indicado (agua, alcohol o mezclas hidroalcohlicas) Erlenmeyer de boca esmerilada con tapa 250 mL. Zaranda. Embudo. Pipetas de 20 mL. Papel de filtro. Cpsula de porcelana. Bao de agua.

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Estufa.

Procedimiento. De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, se pesan exactamente 5 g y se transfieren a un erlenmeyer de 250 mL; se aaden 100 mL del disolvente, se tapa y se agita durante 6 h, dejndose en reposo hasta el da siguiente; se agita 30 min, se deja reposar alrededor de media hora ms y se filtra por papel. Se toma una alcuota de 20 mL que se transfiere a una cpsula previamente tarada. Se evapora sobre bao de agua, se deseca en estufa a 105 oC durante 3h, se enfra y se pesa. Expresin de los resultados.

Ss =

R.500.100 M (100-H)

Ss = sustancias solubles (%). H = humedad de la muestra (%) 500 y 100 = factores matemticos para los clculos. R = residuo de la muestra (g) M = masa de la muestra (g). Los resultados se aproximan hasta las dcimas.

I.4 ESTUDIO QUMICO CUALITATIVO. Antes de realizar la extraccin completa de la muestra a ser analizada, es necesario llevar a cabo pruebas preliminares sencillas y rpidas que permitan detectar cualitativamente la presencia de determinados grupos de compuestos. Esto se logra mediante las tcnicas de "screening" (tamizaje), que se ayudan de la microqumica para evidenciar estos grupos de constituyentes mediante formacin de precipitados, coloraciones, etc. Estas reacciones se caracterizan porque son selectivas para las clases o grupos de compuestos que se investigan, son simples y rpidas, detectan la mnima cantidad posible y utilizan un mnimo de equipo de laboratorio. No debe olvidarse que cuando se obtiene un resultado negativo, este puede deberse a la ausencia de la clase de compuestos buscada, a la seleccin errnea del solvente para extraer, a la presencia de sustancias extraas que interfieran o a una concentracin en el orden de trazas del compuesto ensayado. Con relacin a la seleccin del disolvente, este da lugar a diferentes mtodos o esquemas de trabajo para el tamizaje fitoqumico.

Actividad prctica No 12 TAMIZAJE FITOQUMICO Introduccin.

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En el desarrollo de esta actividad se persigue el aprendizaje y aplicacin de tcnicas de tamizaje al material vegetal fresco, seco o en forma de extracto blando o seco. En este caso se emplea un esquema general que utiliza la extraccin sucesiva con solventes de polaridad creciente. Para el desarrollo de esta actividad es necesario rememorar las reacciones qumicas estudiadas en las asignaturas precedentes y revisar otras reacciones de mayor especificidad para cada grupo en su libro de texto. Parte experimental. Materiales y reactivos. Gradillas ter etlico Tubos de ensayo Etanol. Agua destilada Reactivos del tamizaje.

Procedimiento: La planta fresca, seca o el residuo de una extraccin; es sometida a tres extracciones sucesivas segn el esquema de la Fig. 21, a cada extracto I, II y III, se le mide el volumen obtenido y se le calcula su concentracin, esto es, gramos de sustancias extradas por mL de extracto. Para ello tome una alcuota de 5 mL y pselo a una cpsula previamente tarada, evapore a sequedad en bao de agua y pese nuevamente. Se procede de igual forma que la tcnica descrita para la determinacin de sustancias solubles.

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30 - 50 g MATERIAL VEGETAL

EXTRAER CON 90 -150 mL DE TER ETLICO POR MACERACION DURANTE 48 HORAS A TEMPERATURA AMBIENTE FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ETREO

RESIDUO SLIDO
Secar y pesar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON ETANOL POR MACERACIN DURANTE 48 HORAS. FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ALCOHLICO

RESIDUO SLIDO
Secar y pesar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL RESIDUO EN VOLUMEN CON AGUA DESTILADA POR MACERACIN DURANTE 48 HORAS. FILTRAR

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ACUOSO

RESIDUO SLIDO Secar, pesar y desechar

Fig. 21 Extraccin sucesiva del material vegetal para la aplicacin de tcnicas de Tamizaje Fitoqumico. Posteriormente en cada extracto por separado se procede de acuerdo a los esquemas representados en las Figuras 22, 23 y 24. En cada caso para realizar los ensayos se procede de la siguiente forma: Ensayo de Sudan: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos grasos, para ello, a la alcuota de la fraccin en el solvente de extraccin, se le aade 1 mL de una solucin diluida en agua del colorante Sudan III o Sudan IV. Se calienta en bao de agua hasta evaporacin del solvente.
EXTRACTO ETREO DIVIDIR EN FRACCIONES

5 mL ENSAYO DE SUDAN
(ACEITES Y GRASAS)

5 mL

ENSAYO DE BALJET
(LACTONAS Y COUMARINAS)

15 mL (dividir en 3 porciones) ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

5 mL ENSAYO DE LIEBERMANN-BUCHARD
(TRITERPENOS-ESTEROIDES)

Fig. 22 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto de ter etlico.

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La presencia de compuestos grasos se considera positiva si aparecen gotas o una pelcula coloreada de rojo en el seno del lquido o en las paredes del tubo de ensayos respectivamente.
EXTRACTO ALCOHLICO DIVIDIR EN FRACCIONES

1mL ENSAYO DE CATEQUINAS

2 mL ENSAYO DE FEHLING
(AZ. REDUCTORES)

2 mL ENSAYO DE LIEBERMAN-BUCHARD

2 mL ENSAYO DE Cl Fe
(FENOLES Y TANINOS)
3

2 mL ENSAYO DE BORNTRAGER
(QUINONAS)

(CARDENLIDOS)

2 mL ENSAYO DE KEDDE

2 mL ENSAYO DE RESINAS

(TRITERPENOS-ESTEROIDES)

6 ML en 3 porciones ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

2 mL ENSAYO DE BALJET
(LACTONAS)

2 mL ENSAYO DE NINHIDRINA
(AMINOCIDOS)

2 mL ENSAYO DE ANTOCIANIDINA 2 mL ENSAYO DE SHINODA

(FLAVONOIDES)

2 mL ENSAYO ESPUMA
(SAPONINAS)

Fig. 23 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohlico. Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides, para ello, si la alcuota del extracto est disuelta en un solvente orgnico, este debe evaporarse en bao de agua y el residuo redisolverse en 1 mL de cido clorhdrico al 1 % en agua. Si el extracto es acuoso, a la alcuota se le aade 1 gota de cido clorhdrico concentrado, (calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez). Con la solucin acuosa cida se realiza el ensayo, aadiendo 3gotas del reactivo de Dragendorff, si hay opalescencia se considera (+), turbidez definida (++), precipitado (+++). Ensayo de Mayer: Proceda de la forma descrita anteriormente, hasta obtener la solucin cida. Aada una pizca de cloruro de sodio en polvo, agite y filtre. Aada 2 3 gotas de la solucin reactiva de Mayer, si se observa opalescencia (+), Turbidez definida (++), precipitado coposo (+++). Observacin: En el caso de alcaloides cuaternarios y/o amino-xidos libres, stos solo se encontrarn en el extracto acuoso y para considerar su presencia la reaccin debe ser (++) (+++), en todos los casos, ya que un resultado (+), puede provenir de una extraccin incompleta de bases primarias, secundarias o terciarias.
EXTRACTO ACUOSO DIVIDIR EN FRACCIONES

6 ML en 3 porciones ENSAYOS DE DRAGENDORFF MAYER Y WAGNER

(ALCALOIDES)

2 mL ENSAYO DE SHINODA
(FLAVONOIDES)

10 mL ENSAYO DE MUCLAGOS 1 2 GOTAS ENSAYO DE PRINCIPIOS AMARGOS

2 mL ENSAYO DE FEHLING
(AZ. REDUCTORES)

2 mL ENSAYO DE CLORURO FRRICO

(TANINOS)

2 mL ENSAYO DE ESPUMA
(SAPONINAS)

Fig. 24 Esquema de las reacciones a realizar en el extracto acuoso. Ensayo de Wagner: Se parte al igual que en los casos anteriores de la solucin cida, aadiendo 2 3 gotas del reactivo, clasificando los resultados de la misma forma.

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Ensayo de Baljet: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactnico, en particular Coumarinas, aunque otros compuestos lactnicos pueden dar positivo al ensayo. Para ello, si la alcuota del extracto no se encuentra en alcohol, debe evaporarse el solvente en bao de agua y redisolverse en la menor cantidad de alcohol (1 mL). En estas condiciones se adiciona 1mL del reactivo, considerndose un ensayo positivo la aparicin de coloracin o precipitado rojo (++ y +++) respectivamente. Ensayo de Hidroxamato frrico para coumarinas: Una gota del extracto se coloca en una placa de porcelana y se aade una gota de clorhidrato de hidroxilamina disuelto en etanol al 10 %. Se aaden unas gotas de hidrxido de potasio al 10% en etanol y se calienta a la llama hasta burbujeo, se aaden unas gotas de cido clorhdrico 0.5 mol/L y una gota de cloruro frrico al 1% en agua. El desarrollo de una coloracin violeta (+), claro (++), intenso (+++). El reactivo de Baljet se prepara de la siguiente forma: Solucin 1: Hidrxido de sodio al 10 % en agua. Solucin 2: cido pcrico al 1 % en etanol. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar. Ensayo de Borntrager: Permite reconocer en un extracto la presencia de quinonas. Para ello si la alcuota del extracto no se encuentra en cloroformo, debe evaporarse el solvente en bao de agua y el residuo redisolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de hidrxido de sodio, hidrxido de potasio amonio al 5 % en agua. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su ulterior separacin. Si la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo, el ensayo se considera positivo. Coloracin rosada (++), coloracin roja (+++). Ensayo de Liebermann-Burchard: Permite reconocer en un extracto la presencia de triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer un ncleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la posicin 5-6. Para ello, si la alcuota en bao de agua y anhdrido actico y se gotas de cido sulfrico rpido de coloracin: del extracto no se encuentra en cloroformo, debe evaporarse el solvente el residuo redisolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayos se dejan resbalar 2-3 concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se tiene por un cambio

1- Rosado-azul muy rpido. 2- Verde intenso-visible aunque rpido. 3- Verde oscuro-negro-final de la reaccin. A veces el ensayo queda en dos fases o desarrollo de color. Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio generalmente ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades importantes de estos compuestos. IMPORTANTE : Para realizar este ensayo no puede haber agua en el medio de reaccin pues sta con el cido sulfrico reacciona de forma violenta y puede ocurrir un accidente. La reaccin de Liebermann-Burchard se emplea tambin para diferenciar as estructuras esteroidales de los triterpenoides, las primeras producen coloraciones azul o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa rojo, rosado o prpura. Estas coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos, xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes.

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Ensayo de catequinas: Para ello, tome de la solucin alcohlica obtenida una gota, con la ayuda de un capilar y aplique la solucin sobre papel de filtro. Sobre la mancha aplique solucin de carbonato de sodio. La aparicin de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica un ensayo positivo. Ensayo de resinas: Para detectar este tipo de compuesto, adicione a 2 mL de la solucin alcohlica, 10 mL de agua destilada. La aparicin de un precipitado, indica un ensayo positivo. Ensayo de Fehling: Permite reconocer en un extracto la presencia de azcares reductores. Para ello, si la alcuota del extracto no se encuentra en agua, debe evaporarse el solvente en bao de agua y el residuo redisolverse en 1-2 mL de agua. Se adicionan 2 mL del reactivo y se calienta en bao de agua 5-10 minutos la mezcla. El ensayo se considera positivo si la solucin se colorea de rojo o aparece precipitado rojo. El reactivo se prepara de la siguiente forma: Solucin A: Se pesan 35 g de sulfato cprico hidratado cristalizado y se disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL. Solucin B: Se pesan 150 g de tartrato de sodio y potasio y 40 g de hidrxido de sodio y se disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar. Ensayo de la espuma: Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpnica. De modo que si la alcuota se encuentra en alcohol, se diluye con 5 veces su volumen en agua y se agita la mezcla fuertemente durante 5-10 minutos. El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie del lquido de ms de 2 mm de altura y persistente por mas de 2 minutos. Ensayo del cloruro frrico: Permite reconocer la presencia de compuestos fenlicos y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles como taninos. A una alcuota del extracto alcohlico se le adicionan 3 gotas de una solucin de tricloruro frrico al 5 % en solucin salina fisiolgica (cloruro de sodio al 0.9 % en agua). Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos. A una alcuota del extracto se aade acetato de sodio para neutralizar y tres gotas de una solucin de tricloruro frrico al 5 % en solucin salina fisiolgica, un ensayo positivo puede dar la siguiente informacin general: Desarrollo de una coloracin rojo-vino, compuestos fenlicos en general. Desarrollo de una coloracin verde intensa, taninos del tipo pirocateclicos. Desarrollo de una coloracin azul, taninos del tipo pirogalotnicos. Ensayo de la ninhidrina: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia de aminocidos libres o de aminas en general. Se toma una alcuota del extracto en alcohol, o el residuo de la concentracin en bao de agua, si el extracto se encuentra en otro solvente orgnico, se mezcla con 2 mL de solucin al 2 % de ninhidrina en agua. La mezcla se calienta 5-10 minutos en bao de agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolla un color azul violceo. Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal. Si la alcuota del extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de cido clorhdrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metlico. Despus de la reaccin se espera 5 minutos, se aade 1 mL de alcohol amlico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que se separen.

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Si la alcuota del extracto se encuentra en agua, se procede de igual forma, a partir de la adicin del cido clorhdrico concentrado. El ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amlico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos. Ensayo de Kedde: Permite reconocer en un extracto la presencia de glicsidos cardiotnicos. Una alcuota del extracto en etanol se mezcla con 1 mL del reactivo y se deja reposar durante 510 minutos. Un ensayo positivo es en el que se desarrolla una coloracin violceo, persistente durante 1-2 horas. El reactivo de Kedde se prepara de la siguiente forma: Solucin 1: cido 3.5 dinitrobenzico al 2 % en metanol. Solucin 2: Hidrxido de potasio al 5.7 % en agua. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar. Ensayo de antocianidinas: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia de estas estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calientan 2 mL del extracto etanlico 10 min. con 1 mL de HCL conc. Se deja enfriar y se adiciona 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amlico. Se agita y se deja separar las dos fases. La aparicin de color rojo a marrn en la fase amlica, es indicativa de un ensayo positivo. Ensayo de muclagos: Permite reconocer en los extractos de vegetales la presencia de esta estructura tipo polisacrido, que forma un coloide hidrfilo de alto ndice de masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae. Para ello una alcuota del extracto en agua se enfra a 05 C y si la solucin toma una consistencia gelatinosa el ensayo es positivo. Ensayo de principios amargos y astringentes: El ensayo se realiza saboreando 1 gota del extracto acuoso o del vegetal y reconociendo el sabor de cada uno de estos principios, bien diferenciados al paladar. Tambin pueden realizarse otros ensayos no comprendidos en este esquema de tamizaje, para la deteccin de otros compuestos. A continuacin expondremos algunos de estos ensayos. Glicsidos cianogenticos: Coloque unos 5 g de material vegetal en un erlenmeyer de 125 mL y adicione suficiente agua para humedecer la muestra. Prepare un papel de picrato de sodio sumergiendo una tira de papel de filtro en una solucin recin preparada de picrato de sodio (5 g de carbonato de sodio + 0.5 g de cido pcrico y cantidad suficiente de agua para 1000 mL); conserve esta solucin en frasco seco. Aproximadamente 1 mL de cloroformo se aade a la muestra humedecida para resaltar la actividad enzimtica. Inserte el papel de picrato de sodio en el recipiente con la muestra, colocndolo de forma tal que no toque las paredes del mismo. Tape el recipiente y caliente a 35 C por unas 3 horas. Observe los cambios de coloracin del papel, si en 3 h no se produce variacin, puede afirmarse la ausencia de los glicsidos cianogenticos, pero si en 15 min. el papel cambia de amarillo a diferentes tonos rojos, indica la presencia de HCN en cantidades apreciables. 1. Aceites, hidrocarburos y carotenos: En un embudo de separacin al cual se le coloca un pedacito de algodn en el orificio interior, se adicionan 5 g de droga en polvo y 15 mL de solvente de baja polaridad (ter de petrleo o tetracloruro de carbono). Tape el embudo para evitar la evaporacin del disolvente y djelo en reposo 6 h como mnimo. Abra la llave del embudo y obtenga de esta forma el extracto.

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2. Ensayo de aceite fijo, secante o esencial: Tome 5 mL del extracto y djelo evaporar sobre un vidrio reloj o placa petri a temperatura ambiente. La aparicin de un lquido oleoso despus de la evaporacin, si deja mancha de grasa sobre el papel de filtro indica presencia de aceite fijo. Si al evaporarse el disolvente aparece una pelcula fina resinosa, indica presencia de aceite secante. Si al evaporarse el disolvente aparece un lquido oleoso aromtico que no deja mancha de grasa sobre el papel de filtro indica la presencia de aceite esencial. 3. Ensayo de hidrocarburos: Tome 10 mL del extracto y djelo evaporar al aire, disuelva el residuo obtenido en acetona calentando suavemente sobre bao de agua si fuera necesario. Deje algunas horas en el refrigerador. La aparicin de un precipitado, indica la presencia de hidrocarburos. 4. Ensayo de carotenos: Si el ensayo de hidrocarburos descrito en II, resultara positivo, filtre el precipitado obtenido y disuelva el residuo en 2 mL de cloroformo. Tome la solucin clorofmica y adicione reactivo de Carr-Price. La aparicin de una coloracin verdeazulada indica presencia de carotenos. Los resultados obtenidos en el tamizaje fitoqumico son tabulados de la TIPO DE EXTRACTO ALCOHOLICO ACUOSO siguiente forma:

METABOLITO ENSAYADO

ETEREO

OTRO

Aclarando

adems:

Nombre de la especie botnica. rgano ensayado. Peso del material seco. Fecha de la realizacin del ensayo. Anlisis y discusin de sus resultados con relacin a lo planteado por la literatura.

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II. MTODOS TOTALES. DE EXTRACCIN DE SUSTANCIAS NATURALES. EXTRACTOS

Los mtodos y tcnicas operatorias a seleccionar para realizar la extraccin y/o aislamiento de principios activos de un material vegetal, dependen de diversos factores, siendo entre ellos fundamentales: a) b) c) d) e) f) Tipo de sustancia en cuestin (su naturaleza qumica), para adecuar el proceso. Su contenido en agua. Su grado de fragmentacin (tamao de partcula). La temperatura y su influencia sobre la solubilidad y la descomposicin de las sustancias (alteraciones qumicas posibles). Estabilidad o labilidad del producto. Seleccin del disolvente o menstruo, la cual debe hacerse sobre la base de criterios, tales como: que no reaccionen con los componentes de la mezcla, que no forme compuestos estables o azetropos, que sea trmicamente estable y no sea oxidante o incremente la volatilidad de los compuestos, para una separacin ptima. Cambios en la relacin de particin slido / lquido. Recuperacin del soluto segn la proporcin de particin. Formacin de emulsiones, debido a agentes superficiales que provocan la separacin de pequeos volmenes de lquido para formar una tercera fase (glicsidos, saponinas, protenas, cidos grasos) Costo del proceso. Trabajo involucrado, reproducibilidad y factibilidad. Eficiencia del proceso extractivo escogido.

g) h) i)

j) k) l)

En el mercado farmacutico generalmente hallamos cuatro tipos de extractos: a) extractos secos; b) extractos blandos; c) extractos hidroalcohlicos (fluidos y tinturas) y d) extractos oleosos. En todos ellos la concentracin de principios activos es ptima, facilitndose la dosificacin de los mismos. Los extractos secos se obtienen por la concentracin de los licores extractivos mediante evaporacin al vaco o por atomizacin. Como las sustancias termodegradables pueden desnaturalizarse, se recurre hoy da a la liofilizacin, procedimiento que respeta el contenido enzimtico, vitamnico y hormonal de las preparaciones vegetales frescas. Los extractos hidroalcohlicos son los que extraen la mayor diversidad de componentes qumicos presentes en drogas. De ellos las dos variantes ms comunes son: a) Extracto fluido: concentracin del extracto correspondiente a cada gramo de droga hasta 1 mL. b) Tintura: concentracin del extracto correspondiente a cada gramo de droga hasta: Tintura al 10 % --------- 10 mL. Tintura al 20 % --------- 5 mL. Tintura al 50 % --------- 2 mL. Los extractos blandos son lquidos espesos o masas semislidas, que se obtienen por concentracin de los licores extrados sin llegar a sequedad. Generalmente cada gramo de licor extractivo es equivalente a 2-6 g de droga. Las principales tcnicas extractivas son: maceracin, infusin, destilacin y extraccin continua. lixiviacin o percolacin, digestin,

Maceracin: Consiste en remojar la droga cruda fragmentada con el solvente o menstruo, para que este penetre la estructura celular y disuelva las sustancias. El material se agita espordicamente por un perodo de 2-14 das en recipiente cerrado. Finalizado el

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proceso se decanta el lquido filtrando y exprimiendo el residuo, lavando el mismo con una pequea porcin de menstruo. Lixiviacin: El material pulverizado se coloca en un percolador (Fig. 25), se macera previamente (30 min.) y se hace pasar continuamente el solvente a travs de este (hasta que desaparezcan las burbujas de aire provocadas por el peso del material). Digestin: Es una forma de maceracin donde se aplica calor moderado al material pulverizado, lo cual incrementa el poder disolvente. Para que el solvente pueda usarse continuamente por reciclaje, se adapta un condensador al baln donde se efecta la digestin. Infusin: La droga se extrae con agua caliente, pero sin someterla a ebullicin o con agua fra. El agua min. se vierte sobre ella, manteniendo bien cerrado el recipiente, durante unos 30

Decoccin o cocimiento: La droga cruda se somete a ebullicin con agua. Destilacin: Es el proceso de evaporar una sustancia, condensar los vapores y recogerlos al estado lquido. Comprende variantes que dependen de la naturaleza del vegetal y de la termo labilidad de las sustancias (Fig. 26)

Fig. 25 Tipos ms empleados de percoladores. Extraccin continua: El material vegetal se trata con un disolvente que disuelve uno o algunos de sus componentes. Este mtodo utiliza aparatos especialmente diseados tales como el Soxhlet y los extractores lquido-lquido (Fig. 27) Las actividades que a continuacin se relacionan tienen como objetivo ejercitar a los estudiantes en la realizacin de algunos mtodos de obtencin de extractos, para lo cual deben profundizar los aspectos tcnicos en su libro de texto.

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Fig. 27 Equipos de extraccin contnua.

MENSTRUO

DROGA CRUDA

MACERACION

DECANT ACION

FRACCION I MACERADO

RESIDUO FILT RAR

ESCURRIR

FRACCION II

RESIDUO MENST RUO PARA LAVAR

FRACCION III

DESECHAR

REPOSO T ANQUE COLECTOR FILT RACION

PRODUCTO TERMINADO

Fig. 28 Extraccin de tinturas por maceracin

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Actividad prctica No 13 OBTENCIN DE EXTRACTOS FLUIDOS Y TINTURAS. Introduccin. Para la obtencin de estos tipos de extractos, pueden ser empleados los mtodos de extraccin siguientes: maceracin, percolacin y repercolacin. Para realizar estos procedimientos debe haberse comprobado la calidad de las materias primas a utilizar (requisitos de calidad de la droga cruda y pureza y concentracin del menstruo) El tamao de partcula de la droga cruda no debe exceder de 5 mm. la comprobacin de la masa de la droga y el volumen de menstruo lograr los extractos de la forma prevista. Generalmente se preparan tinturas drogas potentes o muy activas (drogas heroicas) y de un 20 a 50 % menor actividad. (drogas no heroicas). A. OBTENCIN DE TINTURAS POR MACERACIN. Materiales y reactivos. Recipiente de vidrio o acero inoxidable con tapa. Papel de filtracin mediana. Recipiente de color mbar. Balanza tcnica. Droga. Menstruo seleccionado. Debe efectuarse a utilizar para al 10 % para para drogas de

Procedimiento. En un recipiente de vidrio o acero inoxidable con tapa, se vierte el 90 % del menstruo requerido; se le aade la droga cruda pesada y se mezcla bien. La mezcla debe ocupar como mximo las 3/4 partes del recipiente. Se tapa el recipiente y se macera el nmero de das establecidos, agitando 15 min. dos veces al da. Transcurrido el tiempo de maceracin, el lquido se extrae por decantacin y el residuo se filtra por papel de filtracin de velocidad moderada, se escurre y se lava con menstruo hasta completar el volumen de tintura establecido. En este procedimiento debe evitarse lo ms posible la evaporacin del menstruo. Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el esquema siguiente: Temperatura. De 8-10 oC De 15-20 oC Ambiente Tiempo de reposo. No menos de 4 das 15 das. 30 das. vidrio mbar y se extrae

Transcurrido ese tiempo se filtra y evapora en recipiente de una porcin para ensayos. (Fig. 28) B. OBTENCIN DE TINTURAS POR PERCOLACIN. Materiales y reactivos Recipiente de vidrio o acero inoxidable. Percolador.

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Algodn o gasa. Papel de filtracin de velocidad moderada. Frasco mbar. Balanza tcnica. Droga cruda fragmentada. Menstruo seleccionado.

Procedimiento: 1. A un recipiente de virio o acero inoxidable (tanque, cubeta o cubo) de poca profundidad, se le transfiere la droga cruda pesada y se humedece con menstruo, procurando que no quede lquido residual. (Generalmente se emplea para la humectacin un volumen no menor del peso de la droga). Se deja reposar ( para que la masa vegetal embeba el menstruo y se hinche) de 15 min. a 4 h en dependencia de la dureza y caractersticas de la droga cruda. 2. En un percolador cuyo orificio de salida se cubre con algodn o gasa u otro material inerte, se transfiere la droga humectada. La superficie se cubre con papel o placa de filtro o un disco metlico con orificio y se presiona. 3. Para garantizar que no queden burbujas de aire en la masa vegetal, se vierte menstruo con el orifico de salida del percolador abierto y cuando este comienza a salir se cierra el mismo. Se sigue vertiendo menstruo hasta que este cubra la masa vegetal y quede de 3-5 cm por encima de ella. Se recircula la tercera parte del volumen del lquido contenido en el percolador y si baja el nivel del lquido, este se repone. Se macera durante 24 h. 4. Se abre el orificio de salida y se deja salir el percolado a la vez que se aade ms menstruo, establecindose un flujo de 3-5 mL / min. hasta obtener la cantidad de tintura necesaria. (Sobre la base de un kg de droga): 10 L si es tintura al 10 % 5 L si es tintura al 20 % 2 L si es tintura al 50 %. 5. Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el siguiente esquema: De 8 a 10 o C, no menos de 4 das. De 15 a 20 oC 15 das, temperatura ambiente 30 das. 6. El lquido es evacuado por sifn del sedimento posteriormente se filtra el restante por gravedad, a presin o con vaco a travs de papel de filtracin de velocidad moderada, evitando lo ms posible la evaporacin y se envasa en recipiente plstico apto para contener productos farmacuticos. Se extrae una porcin para ensayos y se le realizan los anlisis establecidos, si cumple con los parmetros se envasa. C. OBTENCIN DE EXTRACTOS FLUIDOS POR PERCOLACIN. Materiales y reactivos Recipiente de vidrio o acero inoxidable. Percolador. Algodn o gasa. Papel de filtracin mediana. Frasco de color mbar. Balanza tcnica. Droga cruda fragmentada. Menstruo seleccionado.

Procedimiento:

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Los primeros tres pasos se desarrollan de la forma descrita en la obtencin de tinturas por percolacin, seguidamente se abre el orificio de salida y se deja salir el percolado a la vez que se aade ms menstruo, establecindose un flujo de 3-5 mL / min., hasta obtener una primera fraccin de 85% de extracto, los que se guardan en un recipiente. Se detiene la extraccin y con el volumen de menstruo requerido, se macera durante 24 h y se hace una extraccin de 1L del extracto. Este proceso se repite por segunda vez. Los ltimos 2 L de extracto obtenido se renen y se concentran a una temperatura que no exceda los 60 oC hasta obtener el volumen requerido (15% restante, se prefiere la concentracin por vaco). Este extracto blando se mezcla con la primera fraccin obtenida y si fuese necesario se aade menstruo hasta completar el volumen del extracto fluido. Se deja reposar en un recipiente bien cerrado segn el esquema siguiente: De 8 a 10 30 das.
o

C, no menos de 4 das. De 15 a 20

C, 15 das. Temperatura ambiente,

Transcurrido el tiempo de reposo se filtra por papel de velocidad moderada, evitando lo ms posible la evaporacin, y se envasa en recipientes de vidrio color mbar o recipientes de plstico aptos para contener productos farmacuticos. Se toma una muestra para ensayo. D. OBTENCIN DE EXTRACTOS FLUIDOS POR REPERCOLACIN. Materiales y Reactivos. Cuatro percoladores. Algodn, gasa o papel de filtro. Beakers. Probeta. Frasco con tapa. Balanza tcnica. Droga cruda. Menstruo seleccionado.

Procedimiento. Excepto el paso de la extraccin del percolador, los dems son vlidos en este mtodo. Se prepara una batera de percoladores (4 5) con la misma cantidad de droga, utilizando el menstruo que va saliendo de un percolador para humectar el otro de la forma siguiente: Extracciones: 2do da: Del percolador I se evacua un volumen H de extracto con el que se humedece la droga del percolador II y se deja humedecer de la misma forma que se hizo para el percolador I. Al percolador I se aade un volumen T= H+M de menstruo fresco estando la llave abierta. Se deja salir un volumen M de extracto del percolador I y se cierra hasta el otro da. La materia prima hinchada se carga en el percolador II y se le aaden los lquidos del percolador I (volumen M), se recircula y despus se cierra la llave. Se deja hasta el da siguiente. 3er da: Siguiendo el mismo procedimiento se incorpora el percolador III a la batera, teniendo presente siempre que el menstruo fresco se incorpora por el percolador de ms tiempo montado (PI).

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4to da: Idem al tercero. 5to da: Se evacua de los percoladores montados un volumen en litros equivalente al peso en Kg de la carga de material vegetal en cada percolador. La fraccin obtenida del percolador IV constituye la primera fraccin de producto terminado, la que se reserva en recipiente aparte. Se repone el volumen extrado del percolador IV con la misma cantidad de extracto proveniente del percolador anterior y as sucesivamente se transfieren las fracciones de un percolador al siguiente. La mecnica que se sigue es semejante a la descrita anteriormente con la diferencia de que del percolador I se extrae el lquido contenido en l despus de lo cual se elimina este percolador del proceso. Por otra parte el lquido requerido para completar el volumen del percolador II, se hace con menstruo fresco. 6to da y siguientes: Siempre que haya droga cruda para seguir montando nuevos percoladores se sigue igual que para el 5to da. Se recuerda que la fraccin del producto terminado se extrae del ltimo, es decir del montado el da anterior; y que el percolador mas agotado en cuanto a droga sale del proceso. Cuando no haya mas percoladores que montar, la transferencia de un percolador a otro, se limita a la cantidad del extracto que equivale a una fraccin del producto terminado, extrayendo siempre la fraccin correspondiente a cada percolador montado, por el ltimo percolador. Lgicamente en los ltimos percoladores montados queda siempre un remanente de menstruo que se renen al final. Este lquido residual puede adicionarse a las fracciones de producto terminado siempre que se conozca el ttulo de ambas partes; tambin se utiliza como menstruo en un prximo lote de la misma droga cruda. En resumen se obtienen tantas fracciones de producto terminado como percoladores se hayan montado, debiendo coincidir el volumen de extracto fluido con el peso de la droga cruda empleada. (Fig. 29).

Fig. 29 Esquema de obtencin de extractos fluidos por repercolacin.

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III. MTODOS TINTURAS FSICO-QUMICOS APLICADOS AL ANLISIS DE EXTRACTOS Y

El empleo de mtodos fsico-qumicos de anlisis, permite establecer la calidad de los extractos obtenidos a partir de drogas crudas, as como controlar su estabilidad. La evaluacin de los extractos comprende un conjunto de mtodos, alguno de los cuales sern descritos en las actividades prcticas relacionadas a continuacin, cuyos fundamentos han sido estudiados en asignaturas precedentes. Actividad prctica No 14 MTODOS GENERALES PARA EL ANLISIS DE EXTRACTOS. Introduccin. Para la determinacin de los parmetros de calidad de un extracto o de un aceite esencial, son empleados algunos mtodos que pueden ser comunes para ambos y otros que sean especficos para algunos de ellos. En aquellos especficos se realizarn las aclaraciones correspondientes. A. DETERMINACIN DE LOS REQUISITOS ORGANOLPTICOS. Determinacin de olor: Se toma una tira de papel secante de aproximadamente 1 cm de ancho por 10 cm de largo y se introduce un extremo en la muestra de ensayo. Se huele y se determina si corresponde con la caracterstica del producto. Determinacin del color: Se toma un tubo de ensayos bien limpio y seco y se llena hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se observa el color, la transparencia, la presencia de partculas y la separacin en capas. Se informa los resultados. B. DETERMINACIN DE LA DENSIDAD RELATIVA. Se entiende por densidad relativa a la relacin entre la masa de un volumen de la sustancia a ensayar a 25 oC y la masa de un volumen igual de agua a la misma temperatura. Este trmino equivale a peso especfico.

Materiales y reactivos. Picnmetro de al menos 10 mL de capacidad. Balanza analtica vD 0,1mg LSP 200 g.

Procedimiento: Primeramente psese el picnmetro vaco y seco a 2 C y llnese con la porcin de ensayo, mantngalo a la temperatura de 25 C ( 1 C) durante 15 min., y ajstese el lquido al nivel empleado, si es preciso, una tira de papel para extraer el exceso y secar exteriormente el picnmetro. Se pesa cuidadosamente el picnmetro con la porcin de ensayo y se repite la operacin con el agua destilada a 25 C, despus de limpio el picnmetro. Expresin de los resultados:

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La densidad relativa a 25 C se calcula por la siguiente frmula:

D25 =
donde: M1 : peso del picnmetro con la muestra (g) M2 : peso del picnmetro con el agua (g) M: peso el picnmetro vaco (g).

M1 - M M2 - M

Los resultados se aproximan hasta la tercera cifra. C. Determinacin del ndice de refraccin. El ndice de refraccin es una constante caracterstica de cada sustancia, la cual representa la relacin entre el seno del ngulo de incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin cuando la luz pasa oblicuamente a travs del medio. Esta relacin viene dada por la siguiente ecuacin:

Sen i

=n Sen r

As los refractmetros utilizan como principio de medicin, la determinacin del ngulo lmite el cual presenta en el campo visual un contraste claro y otro oscuro. La lnea de separacin entre ambos campos establece el ngulo lmite de la luz incidente. Materiales y reactivos. Refractmetro de Abb Varilla de vidrio. Solucin mezcla de alcohol etlico-ter dietlico (1:1) para la limpieza del equipo.

Procedimiento: Se coloca sobre el prisma de medicin una gota de agua destilada, utilizando para ello una varilla de vidrio que no tenga cantos agudos, se ajusta el equipo seleccionando la zona del espectro visible que aparece en la lnea lmite del campo visual, moviendo el compensador cromtico y colocando la interseccin del retculo sobre la lnea lmite de los campos claro y oscuro. Despus de haber realizado el ajuste del muestra de ensayo sobre el prisma de medicin, la luz por medio del espejo, de modo tal que entrada del prisma de medicin y se proceda de Expresin de los resultados. Se hacen tres lecturas y se calcula el promedio deben diferir en ms de 0.002. Si las determinaciones no se efectan frmula siguiente: Nd25 =Ndt + 0.00044 (t-25) donde: a de las mismas. Dos o ms lecturas no refractmetro, se coloca una gota de la se cierra el termoprisma y se enfoca la misma incida sobre la apertura de la misma forma que con el agua.

la temperatura de referencia se emplea la

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Nd25 = ndice de refraccin a 25 C Ndt = valor ledo en la escala del aparato a la temperatura t. t = valor de la temperatura a que se realiza la medicin (C) 0.00044 =factor de correccin por grado Celcior. Los valores se aproximan hasta las milsimas. D. Determinacin del pH de extractos y tinturas: La acidez o la alcalinidad de las soluciones acuosas se caracterizan por el valor del ndice de hidrgeno, pH. El pH es por tanto un ndice numrico que se utiliza para expresar la mayor o menor acidez de una solucin en funcin de los iones hidrgeno. Se calcula tericamente mediante la ecuacin: pH= -log a[H+] a[H +] = actividad de los iones hidrgeno. En la prctica, la medicin de pH se lleva a cabo por medio de la lectura de pH en la escala de un instrumento medidor de pH, ya sea digital o analgico. Esta lectura est en funcin de la diferencia de potencial establecida entre un electrodo indicador y un electrodo de referencia usando como solucin de ajuste de la escala del medidor de pH, una solucin reguladora del mismo. Materiales y reactivos Medidor del pH con electrodo de vidrio combinado. Solucin reguladora de pH, para rango de 0-7, preparada de la siguiente forma: 2,5 g de Bitartrato de potasio para 250 mL de agua (pH= 3,5).

Procedimiento. Ajuste el equipo con la solucin reguladora de pH adecuada al rango en que realizar la determinacin. Posteriormente determnese el valor del pH de la muestra. Los resultados se darn apreciando hasta la dcima. E. Determinacin de los slidos totales. La determinacin de la variacin de la masa, debido a la prdida o eliminacin de sustancias voltiles por accin el calor, mediante un proceso de evaporacin de la porcin de ensayo y secado del residuo en estufa, hasta masa constante, se le asigna como slidos totales. Materiales y reactivos. Cpsula de porcelana, platino o cristal. Bao de agua. Balanza analtica de LSP 200 g y vD 0.1 mg. Desecadora conteniendo slica gel. Estufa con temperatura controlada (105 2 C) Pipeta aforada de 5 mL. se

Procedimiento: 5,0 mL del producto se llevan a una cpsula previamente tarada a 105 C, se evapora sobre bao de agua hasta que el residuo est aparentemente seco. Se pasa entonces hacia una estufa y se deja hasta peso constante (aproximadamente 3 h). Se retira la cpsula

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de la estufa y ambiente. se coloca en una desecadora hasta que alcance la temperatura

Para obtener la masa constante entre una pesada y otra se mantendr un tiempo de secado de 60 minutos. Expresin de los resultados. La cantidad de slidos totales, expresado en %, R, se calcula por la siguiente frmula:

St =
donde:

Pr - P V

x 100

Pr= masa de la cpsula ms el residuo (g) P= masa de la cpsula vaca (g) V= volumen de la porcin de ensayo. 100=factor matemtico para el clculo. Observacin: En evaporacin (R). caso de aceites esenciales se denomina como residuo de

F. Determinacin del contenido alcohlico. Consiste en la obtencin de una solucin hidroalcohlica mediante el proceso de destilacin de la muestra y donde debe garantizarse que todo el alcohol presente en la misma sea arrastrado hacia el destilado. Con la posterior determinacin del peso porcentaje de alcohol de la muestra. Materiales y reactivos. Equipo de destilacin de contenido alcohlico. Matraz aforado de 100 mL. Pipeta aforada de 25 mL. Picnmetro con termmetro (Geissler). especfico de dicho destilado se obtiene el

Procedimiento Se seleccionar el mtodo A B en dependencia del producto que se vaya a analizar. MTODO A: resinosas). (Para productos que no contengan sustancias voltiles, ni sustancias cidas

Se miden 25 mL del producto, el cual ha sido enfriado a 20 C ( 2 C); a un baln de destilacin de 500 mL se aaden 150 mL de agua para anlisis y algunas perlas de vidrio u otro material que contrarreste el bumping. Se conecta teniendo cuidado que las uniones estn bien cerradas. Se destilan de 90-95 mL recogiendo el mismo en un matraz aforado de 100 mL, el cual se encuentra sumergido en un bao de hielo. Se lleva la temperatura del destilado a 20 C (1 C) aproximadamente y se enrasa con agua para anlisis la cual ha sido enfriada a 20 C ( 2 C).

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Tambin se determina el peso especfico de la solucin a 20 C ( 1 C) empleando un picnmetro con termmetro (Geissler). MTODO B: (Para productos con sustancias voltiles o resinosas cidas) Se miden 25 mL de la preparacin la cual ha sido enfriada a 20 C ( 2 C) y se transfiere a un baln de destilacin de 500 mL. Se aaden 150 mL de agua para anlisis y algunas perlas para evitar el bumping. Se conecta el equipo teniendo cuidado de que las uniones estn bien selladas. Se destilan alrededor de 100 mL recogiendo el destilado en un embudo separador de 500 mL, se aade suficiente cantidad de cloruro de sodio para saturar el lquido (aproximadamente 31 g). Se aaden 100 mL de ter de petrleo de 40-60 C y se agita vigorosamente durante 2 3 min. Se deja reposar la mezcla durante unos 20 min., se lleva la capa inferior a un baln de destilacin. La capa etrea remanente se lava con 25 mL de una solucin saturada de cloruro de sodio, se dejan separar bien ambas capas y se incorpora la capa acuosa (inferior) al baln de destilacin. Se hace alcalina la solucin del baln con NaOH 1 mol / L, usando fenolftalena sdica como indicador, se aaden algunas perlas de vidrio u otro material para evitar el bumping adems de 100 mL de agua para anlisis. Se conecta el equipo y se destila alrededor de 95 mL del lquido, recogindolo en un matraz aforado de 100 mL que se encuentra en un bao de hielo. Llevar la temperatura del destilado a 20 C antes de diluir agua para anlisis previamente enfriada tambin a 20 C. Expresin de los resultados. El peso especfico se determina como sigue: hasta el enrase usando

P.E =
donde:

M1 - M M2 - M

M1 = peso del picnmetro con la muestra a 20 C. M2 = peso del picnmetro con agua a 20 C M = peso del picnmetro vaco Se determina el por ciento de alcohol en la muestra segn los datos de la Tabla II. G. Anlisis capilar: (Especfico de extractos y tinturas) Es un mtodo ingenioso e interesante para la caracterizacin de extractos y tinturas. Este mtodo se basa en los fenmenos de absorcin y de reparticin de sustancias en materiales colorantes a travs de los espacios capilares del material inerte que constituye el papel de filtro.

Materiales y reactivos Beaker Pyrex de 100 mL de aproximadamente 5 cm de dimetro 70 cm de alto. Bandas de papel de filtro de 4 cm x 20 cm. Cmara protectora de la luz. Probeta o copa graduada de 25 mL. Lmpara de luz UV de 366 nm.

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Procedimiento Se vierten 20 mL de la muestra o de la disolucin de la muestra indique en un beaker de 100 mL, colquelo en la cmara banda de papel de filtro verticalmente de manera que su sumergida dentro de la muestra, pero sin tocar el fondo ni las (Fig. 30). cuando la monografa lo protectora. Coloque una extremidad inferior est paredes del recipiente.

Cierre la cmara y deje transcurrir 2 horas, al cabo de este tiempo se retirar el papel y se deja secar. Una vez seco se proceder a su inspeccin visual y caracterizacin. Tabla II. Valores de peso especfico para la determinacin del contenido alcohlico. Peso especfico 0,9710 0,9715 0,9720 0,9725 0,9730 0,9735 0,9740 0,9745 0,9750 0,9755 0,9760 0,9765 0,9770 0,9775 0,9780 0,9785 0,9790 0,9795 0,9800 0,9805 0,9810 0,9815 0,9820 0,9825 0,9830 0,9835 0,9840 0,9845 % alcohol (V/V) 95,93 94,12 92,32 90,49 88,66 86,81 84,96 83,11 81,26 79,39 77,53 75,67 73,82 71,96 70,10 68,24 66,38 64,55 62,72 60,90 59,09 57,28 55,48 53,71 51,94 50,19 48,45 46,73 Peso especfico 0,9850 0,9855 0,9860 0,9865 0,9870 0,9875 0,9880 0,9885 0,9890 0,9900 0,9905 0,9910 0,9915 0,9920 0,9925 0,9930 0,9935 0,9940 0,9945 0,9950 0,9955 0,9960 0,9965 0,9970 0,9975 0,9980 0,9985 0,9990 0,9995 1,0000 % alcohol (V/V) 45,02 43,32 41,62 39,95 38,28 36,63 34,99 33,37 31,76 30,19 27,07 25,53 24,01 22,49 20,99 19,50 18,04 16,59 15,15 13,71 12,01 10,89 9,49 8,10 6,74 5,38 4,03 2,68 1,34 0,00

Examen e interpretacin de la imagen Para el anlisis e interpretacin de la imagen se tienen en cuenta los aspectos siguientes: Color. Altura. Descripcin de las diferentes partes. Cambios de coloracin con vapores de amonaco. Examen bajo la luz ultravioleta.

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Fig. 30 Esquema del anlisis capilar.

Color: El color de la imagen se define en su conjunto inicialmente como: Vivamente coloreada. Poco coloreada. Muy poco coloreada.

En dependencia de la tonalidad que predomine en toda la imagen y posteriormente se detallan los colores caractersticos de cada una de las 4 zonas si son fcilmente detectables. Altura: La altura de una imagen capilar se determina midiendo con una regla graduada en cm, del borde inferior del papel a la franja, siendo esta inversamente proporcional al grado alcohlico de la muestra. La altura promedio de una imagen capilar es de 8 cm aproximadamente, de ah que se pueden clasificar las imgenes en: Altas: De 8,0 cm en adelante. Medianas: Entre 5,0-8,0 cm. Pequeas: Menos de 5,0 cm. En el anlisis de la imagen es posible distinguir 4 zonas: Franja: Lmite superior de ascensin del lquido. Sub-franja: Regin generalmente poco coloreada, comprendida entre la franja y la zona superior de la banda. Banda: Zona generalmente pigmentada debido a la presencia de sustancias coloreadas. Sub-banda: Situada debajo de la banda hasta el lmite de inmersin (Fig. 31). Fig. 31 Partes de la imagen capilar

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Descripcin de las diferentes partes: Una de las zonas de mayor inters es la franja, que sta puede ser o no traslucida, lo que denotar la presencia de resinas o aceites esenciales y grasas. En la franja tambin debe describirse la forma que sta adopta, dentro de ella: (Fig. 32). Lineal. Festonada Dentada ( regular o irregular). Profundamente dentada.

Fig. 32 Formas de la franja. En la sub-banda debe considerarse el color y la longitud de la misma. La banda debe observarse a trasluz, ya que puede ser translcida. En algunas imgenes como en la de la tintura de ajo, colombo, condurango aloe, no se aprecia la banda, mientras que en otras aparecen bandas dobles como la grindelia. La sub-banda que comprende toda la parte de la imagen situada debajo de la banda, es quiz la menos importante, aunque debe considerarse su color. Posibles cambios por alcalinidad La alcalinizacin consiste en exponer la imagen capilar a los vapores de amonaco, para observar los posibles cambios de coloracin. Es recomendable realizar la alcalinizacin de la imagen capilar inmediatamente despus de su anlisis para garantizar que la misma an est hmeda. El efecto de la alcalinizacin es temporal ya que debe desaparecer al retirar la tira de papel de los vapores amoniacales. Las imgenes pueden variar su coloracin desde el amarillo hasta el violeta, por la accin de estos vapores y en otros casos puede no cambiar, es por ello que resulta de gran inters para la caracterizacin de la imagen. Examen bajo la luz UV a 366 nm Resulta de gran inters para la caracterizacin de algunas muestras, ya que en ellas aparecen materiales fluorescentes que se detectan fcilmente exponiendo la tira de papel con la imagen capilar bajo los rayos de la luz UV. As tenemos por ejemplo los extractos de quina que exhiben una fluorescencia azul o los de hidrastis, con una fluorescencia amarillo brillante.

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Contrariamente con el ensayo de alcalinidad en este caso debe dejarse secar bien la tira de papel despus de corrido el anlisis, antes de observarla bajo la luz. Factores que influyen en el anlisis capilar 1. Factores extrnsecos: a) Calidad del papel de filtro. b) Temperatura en que se desarrolla el anlisis. c) Tiempo de corrimiento. 2. Factores intrnsecos: a) Tiempo de fabricacin de la tintura. 1.a) Calidad del papel de filtro: El soporte del anlisis capilar, o sea, el papel de filtro, juega un rol importante en el aspecto de la imagen obtenida, ya que el mismo puede variar la altura de la imagen, el aspecto de la franja, etc. Debe por tanto tenerse en cuenta la clase de papel y el sentido de la fibra del papel al cortar las tiras. 1.b) y c) Temperatura y tiempo de corrimiento: Se ha comprobado que a bajas temperaturas la altura se reduce, mientras que a temperaturas mayores de C tiende a subir de 1 a 2 cm por encima de lo normal. De igual forma, para corrimiento de ms de 2 horas la imagen obtenida es ms oscura y la franja tiende a tomar borde irregularmente dentado. Por lo que los mejores resultados se obtendrn para 2 horas y a temperaturas de 25 C ( 1). 2.a) Tiempo de fabricacin de la tintura: La altura de la imagen disminuye con relacin mas tiempo de fabricacin. El color de imagen disminuye fabricacin. en intensidad a la normal para muestras de

en

muestras con

mayor tiempo de

Influye tambin en el aspecto de la franja y la banda.

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IV. ALGUNOS MTODOS DROGAS Y EXTRACTOS. Introduccin Los anlisis cuantitativos de drogas y extractos requieren de una manipulacin precisa para lograr dosificar los principios activos ensayados. Existen algunos mtodos generales que permiten determinar la concentracin de algunos principios activos en sus mezclas y otros que permiten cuantificar un principio activo en particular. Las actividades prcticas que a continuacin se relacionan estn basadas en la determinacin de principios activos en sus mezclas y tienen como objetivo que el estudiante adquiera manipulacin y destreza en la realizacin de estas determinaciones. Actividad prctica No15 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE TANINOS EN DROGAS VEGETALES. Introduccin Los taninos estn ampliamente distribuidos en las plantas y se encuentran disueltos en el jugo celular, con frecuencia en algunas vacuolas. Son sustancias de composicin qumica compleja. Cuando se degradan o hidrolizan se obtienen polifenoles relativamente simples. En general son polmeros de alto peso molecular que forman soluciones coliodales cuando se disuelven con agua. Dan reacciones caractersticas de coloracin con las sales frricas y precipitacin. algunos reactivos de QUMICOS CUANTITATIVOS APLICADOS AL ANLISIS DE

El objetivo de esta prctica es la determinacin cuantitativa de taninos en drogas vegetales para lo cual daremos a conocer diferentes mtodos. A. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO CON POLVO DE PIEL. Parte experimental Materiales y reactivos. SR cido fosfotngstico. Matraz de 25 mL. Soln. de carbonato de sodio. Embudo. Polvo de piel. Papel de filtro 12 cm de dimetro Pirogalol. Espectrofotmetro UV-VIS.

Procedimiento. En un matraz de 25 mL se diluye la cantidad indicada de droga finamente pulverizada con 150 mL de agua. La mezcla se lleva a ebullicin y se deja reposar durante unos 30 minutos en bao de agua. Posteriormente la mezcla se enfra en agua corriente a 20C y se diluye con agua potable a 250 mL. Despus que se sedimentan las partculas de drogas, se filtra el lquido sobrenadante a travs de un filtro de papel de 12 cm de

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dimetro. Los primeros 50 mL filtrados se desechan la determinacin. y los siguientes se utilizan para

Polifenoles totales: Se pipetean 5,0 mL de lquido filtrado y se diluyen con agua a 25,00 mL. A 2,00 mL de esta solucin se le aaden 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y cuidadosamente se le aaden tambin 17,0 mL de solucin de carbonato de sodio (50,0 g/100,0 mL). Despus de 120 seg. de aadida la solucin de carbonato de sodio, se mide la absorbancia (A1) de la solucin en celda de 1 cm de espesor a una longitud de onda de 750 nm, usando agua como blanco. Polifenoles no reactivos con polvo de piel: A 10,0 mL de lquido filtrado se le aaden 0,100 g de polvo de piel y se agita por una hora. La mezcla se filtra. Se pipetean 5,00 mL de filtrado y se diluyen con agua a 25,0 mL. A 2,0 mL de esta solucin se le aade 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y cuidadosamente se le aaden tambin 17,0 mL de solucin de carbonato de sodio (50,0 g/100,0 mL). Despus de 120 seg. de aadida la solucin de carbonato de sodio se mide la absorbancia (A2) de la solucin en celda de 10 mm de espesor a longitud de onda 750 nm, usando agua como blanco. Solucin de referencia: Se disuelven 0,500 g de pirogalol en 100,00 mL de agua. Se pipetean 5,0 mL de esta solucin y se diluyen con agua a 100,00 mL. A 2,00 mL de esta solucin se le aaden 1,00 mL de solucin reactivo de cido fosfotngstico y cuidadosamente se le aaden tambin 17,00 mL de solucin de carbonato de sodio, se mide la absorbancia (A3) de esta solucin en celda de 1 cm de espesor a la longitud de onda de 750 nm, usando agua como blanco. Expresin de los resultados:

% de tanino =
donde:

6250 (A1 - A2) Ew1 Ew2 (100 - a) A3

A1= absorbancia de los polifenoles totales. A2= absorbancia de los polifenoles no reactivos con polvo de piel. A3= absorbancia de la solucin de comparacin. a= prdida por desecacin en porcentaje de masa. Ew1= pesada de la droga en gramo. Ew2= pesada del pirogalol en gramo. % taninos, calculados como pirogalol sobre la base de la droga desecada a 105 C. B. MTODO DEL PERMANGANATO DE POTASIO. Parte experimental Materiales y reactivos. Solucin ndigo carmn. Beakers 1L. Solucin gelatina. Bureta 50 mL. Solucin acidificada de NaCl Probetas 25 y 50 mL. Solucin KMnO4 0,1 mole/L Pipetas 2 mL.

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Agitador de vidrio.

Procedimiento. Adicionar 25 mL de solucin de ndigo carmn y 750 mL de agua a 2 mL de extracto acuoso. Aadir solucin de permanganato lentamente con una bureta y con agitacin hasta obtener coloracin verde claro. Continuar la valoracin hasta dbil. cambio de color a amarillo brillante con el borde rosado

Designe los mL de KMnO4 utilizados como "a". Mezcle 20 mL del extracto, 80 mL de agua destilada, 50 mL de solucin de gelatina, 100 mL de solucin cida de NaCl y 10 g de Caoln polvo en un frasco. Tape el frasco y agite durante unos minutos. Deje sedimentar y filtre a travs de papel de filtro. Mezcle 25 mL de filtrado, con 25 mL de solucin de ndigo carmn y 750 mL de agua. Valorar con KMnO4; designe los mL consumidos como "b" Calcule el porcentaje de taninos totales segn:

(a - b) . equiv. KMnO4 . 0,0042 % de tanino =mL de alicuota tomada del extracto

C. MTODO DEL TUNGSTO-MOLIBDICO-FOSFRICO. Parte experimental. Materiales y reactivos. Etanol Balanza analtica. Tungstato de sodio Erlenmeyer. c. fosfomolbdico Zaranda. Carbonato de sodio deshidratado Embudo. cido tnico Papel de filtro. Pipeta de 5mL. Matraz aforado 50 mL. Equipo reflujo.

Procedimiento. 10,0 g de la droga en polvo se lleva a un frasco cnico de 250 mL con 500 mL de alcohol al 50 %. Se mantiene en agitacin durante 6 h en zaranda, se deja en reposo 8 h y se agita nuevamente 30 min. y se filtra. Se transfieren 3 mL del filtrado a un matraz aforado de 50 mL y se diluye con agua destilada hasta enrase (Sm). Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno (B, P, M1 y M2) y se procede de la siguiente forma:

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Reactivo

M 1 y M2

Soln. muestra. (SM) 1,0 mL Soln referencia 3,0 mL Agua destilada 5,0 mL 2,0 mL 4,0 mL Reactivo para taninos. 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL Se agita se deja en reposo 5 min. Soln. Sodio carbonato 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL Se completa con agua destilada hasta enrase y se mezcla bien Se leen la absorbancia de la solucin de referencia y las muestras a 700 nm en un trmino no mayor de 2 min. Los clculos se determinan segn:

X=
donde:

Am . P . 1000 .100 Ap . Pm . (100 - p)

X = % de taninos en la droga. Am = absorbancia de la muestra. Ap = absorbancia de la soln de referencia. P = masa de la sustancia de referencia (g). P = % de humedad de la droga. PM = masa de la droga (g) 1000 y 100 = factor matemtico para el clculo. Reactivo para tanino. Se disuelven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de cido fosfomolbdico y 5 mL de cido fosfrico al 85 % en 75 mL de agua destilada. Se refluja la solucin por 2 h y despus se completa a 100 mL con agua. Solucin de carbonato de sodio. Se disuelven 10 g de carbonato de sodio anhidro en 50 mL de agua destilada. Solucin de referencia. Se pesan con exactitud 25 mg de cido tnico (previamente secado a 100 C durante 2 h) y se disuelven en agua hasta completar 100 mL. Se pipetean 20 mL de la solucin y se diluye a 100 mL con agua destilada (Sr). Actividad prctica No 16 CUANTIFICACIN DE ALCALOIDES Introduccin

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La dosificacin de los alcaloides en las plantas, es un problema de gran importancia farmacutica, debido a que las drogas no contienen generalmente un alcaloide sino mezcla de ellos, aprovechando, en el segundo caso el comportamiento particular de algunos de ellos. As por ejemplo unos son voltiles (conicina), otros se descomponen (lobelina); otros se racemizan (hiosciamina), otros se saponifican por los lcalis (cocana),etc. Por estas razones se procura encontrar para alcaloides el mtodo preciso de dosificacin, lo cual explica las diversas tcnicas que se conocen ante la imposibilidad de encontrar una sola lnea general. En los diferentes mtodos de determinacin cuantitativa de alcaloides en el anlisis de las drogas, debe tenerse en cuenta tres pasos fundamentales: a) Extraccin total de los alcaloides. b) Purificacin del extracto. c) Dosificacin. Los mtodos de purificacin de alcaloides ms usuales son los mtodos qumicos, fsico-qumicos y biolgicos. Entre los mtodos qumicos, los ms empleados son el gravimtrico, el volumtrico y entre los fsicoqumicos el colorimtrico. El objetivo de esta prctica es la determinacin cuantitativa de alcaloides totales por diferentes mtodos. Parte experimental. Materiales y reactivos. Erlenmeyerde150 mL Agitador mecnico. Embudo Bureta Bao Mara Algodn ter etlico Goma tragacanto. Rojo de metilo. HCL 0,1 mole/L. NaOH 30 %. Cloroformo. Etanol

DOSIFICACIN DE LOS ALCALOIDES DE LA QUINA. Procedimiento En un erlenmeyer de 150 mL disuelva tanto como pueda 1g de polvo de la droga en una mezcla de 1 mL de agua destilada y 4 mL de etanol. Agite frecuentemente y vigorosamente durante 2 min. con 54 mL de ter y 13 mL de cloroformo. Aada 2,5 mL de NaOH 30 % y siga agitando durante 10 min. Agregue 1g de goma tragacanto y agite. Filtre decantando por muy poco algodn en un segundo erlenmeyer. Evapore inmediatamente al bao Mara y a este residuo agregue 5 mL de etanol al 95% y evapore de nuevo completamente. Disuelva el residuo, calentando ligeramente al bao Mara si fuera necesario, en 10 mL de etanol, agregue 10 mL de agua hervida y10 gotas de rojo de metilo. Valore con HCl 0,1 mol/L hasta obtener una coloracin roja. Diluya con 50 mL de agua y titule de nuevo hasta obtener una coloracin roja.

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1 mL de HCl 0,1 mol/L corresponde a 30,94 mg de alcaloides calculados como promedio. Actividad prctica No 17 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE BASES TOTALES EN LAS PLANTAS. Introduccin En la literatura se pueden encontrar una gran variedad de mtodos encaminados a la determinacin cuantitativa de la totalidad de las bases presentes en las plantas de uso medicinal. De los mtodos descritos, uno de los ms sencillos es el que se fundamenta en la valoracin de las bases totales utilizando cido perclrico en cido actico libre de agua y violeta cristal como indicador; mtodo de gran sensibilidad y poco error segn se detalla a continuacin: Es conocido, que cuando el cido perclrico se disuelve en cido actico se forma el in acetacidio (CH3COOH2)+. Si se compara con el agua, el cido actico es un aceptor de protones considerablemente ms dbil; por lo tanto, cuando un cido que sea fuerte donador de protones se disuelve en l, no se mantiene el equilibrio en la direccin de los productos de disociacin. Como consecuencia, un cido que sea fuerte donador de protones, es un electrolito ms dbil en cido actico que en agua. CH3COOH + HClO4 CH3COOH2 + ClO4- CH3COOH2+ + ClO4En este caso, una solucin de cido perclrico en cido actico presenta una acidez mayor que en el agua, ya que el in acetacidio formado es un donador de protones ms fuertes que el hidronio, cuestin reportada primeramente por Conant y Hall. Debido a la baja constante dielctrica del cido actico, slo una pequea parte de la sal disuelta est en forma inica pudiendo por tanto, postular el equilibrio antes descrito. Estas cuestiones sern determinantes para el viraje necesario en el punto final del indicador a utilizar, violeta cristal, por interaccin de ste con un medio de gran acidez. Este indicador, estructuralmente, se caracteriza por el in para-dimetil-amino-trifenil-carbnico. En l, el tomo de carbono central debido a su deficiencia de electrones, presenta caractersticas de atraccin de electrones (antiauxcromo), mientras que los anillos aromticos forman el sistema de conjugacin entre este tomo de carbono y el grupo dimetilamino que cede electrones (auxocromo). Ambos grupos estn conjugados y resuenan, dando lugar de esta forma a la absorcin en el visible. El tomo de nitrgeno, sin embargo, es coordinativamente insaturado. Por esta razn, el colorante acta como una base poliacdica apantallando protones y de esta forma, durante la aceptacin de protones, la interaccin del grupo amino nucleoflico con el carbono central electroflico gradualmente decrece y como consecuencia, el color del indicador cambia.

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(CH3)2N

C
3

CH3N

N(CH3)2
2

etc.

violeta (A) (CH3)2N H

+

(A) + H

(CH3)2N
2

etc.

violeta azul (B) (B) + H (CH3)2N H

+

C
2

N(CH3)2

etc.

amarillo (C)
Los equilibrios para el sistema Bruckenstein son los siguientes: cido perclrico-violeta cristal propuestos por Kolthoff y

I+ClO4- + HClO4 IH2+(ClO4-)2 (b) IH2+(ClO4-)2 + HClO4 IH3+(ClO4-)3 (C) En ellos se determin que (a) y (b) tienen picos de absorcin a 590 y 630nm respectivamente, mientras que (c) absorbe por debajo de los 450 nm. As el cambio de violeta cristal es gradual y la acidez de cada cambio decrece por sucesivas adiciones de protones, ya que el segundo y el tercer protn alcanzan un colorante ionizado positivamente. En cido actico, sin embargo, la primera transicin es brusca; ya que la afinidad protnica de la base anloga es mucho mayor que el del agua y la fortaleza del cido catinico se decrece considerablemente. No obstante, debido al rango de absorcin en cada caso, el peligro de error se va eliminando, ya que entre el cambio violeta a azul, por ejemplo, hay una diferencia de 40nm, lo que es perfectamente perceptible por el ojo humano y que es determinante para el uso de este indicador al valorar con el sistema cido perclrico-cido actico. El objetivo de esta prctica es determinar las bases totales presentes en una droga, empleando un mtodo volumtrico. Parte experimental Materiales y reactivos Erlenmeyer 25 y 50 mL. Erlenmeyer de 100mL. Embudo Buchner Kitasato Embudo separador Frasco volumtrico 50 mL Frasco volumtrico 25 mL Papel pH. Bao Mara Violeta cristal. NH4OH conc. Dicloro etano

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H2S04 2%. NaOH 5% Cloroformo. CO3K2. Cl04H CH3COOH.

Procedimiento 2 g de planta seca y pulverizada, se colocan en un erlenmeyer de 100 mL y se mezcla ntimamente con 1 mL de NH4OH conc. y se extraen 3 veces durante 4 5 min., con 50 mL de dicloro etano cada vez; filtrando en cada caso por Buchner. Los extractos orgnicos reunidos se extraen 5 veces con 10 mL de H2SO4 2 % en un embudo separador. Los extractos cidos se renen y se filtran a un volumtrico aforado de 50 mL, completndose a este volumen. De esta solucin cida se toman 20 mL y se llevan a pH 8 con NaOH al 50 % en un embudo separador, extrayndose 5 veces con 5 mL de Cl3CH cada vez. Los extractos clorofrmicos se renen en un erlenmeyer y se secan con CO 3K2 anhidro (1 hora) Se filtra la fraccin a un volumtrico de 25 mL, completando a este volumen, del cual, 10 mL se evaporan a sequedad (en bao Mara) disolviendo el residuo en una mezcla de 10 mL de Cl3CH, 5 mL de CH3COOH y una gota de indicador, destinndose a la valoracin. El proceso se repite como mnimo 2 veces para sacar un promedio. Se valora con la mezcla cida hasta cambio del indicador de violeta a azul proceso que debe realizarse gota a gota para poder observar el cambio. Calcule las bases totales segn la ecuacin:

R=
Donde:

C+f 0,32

.P

R = Bases totales en mg/g de planta, expresndose en funcin de la base ms abundante en la planta, cuyo peso molecular es predominante en la mezcla. C = mL de mezcla cida utilizada en la valoracin. f = Factor de correccin segn la estandarizacin de la mezcla cida utilizada p[ara valorar. 0,32 = Peso real en g de la planta valorada. P = Peso molecular de la base ms abundante expresada en mg. Actividad prctica No 18 ANLISIS CUANTITATIVO DE ANTRAQUINONAS PRESENTES EN UNA DROGA. Introduccin. Las quinonas son dicetonas insaturadas, que por reduccin, se convierten en polifenoles, los que fcilmente las regeneran por oxidacin. Por sus colores amarillo a violeta, contribuyen a la pigmentacin de numerosos vegetales y de algunos animales. Algunas como la vitamina K, la ubiquinona (coenzima Q) y las plastoquinonas intervienen en los fenmenos respiratorios, transportando electrones, por lo que se les encuentra en todos los seres vivos. Sin considerar las anteriores, alrededor de la mitad de las

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conocidas se han encontrado en Angiospermas, otras tantas en hongos y vegetales unicelulares; pero casi no se han localizado quinonas en las monocotiledneas. Por el sistema aromtico que dan al reducirse, se les puede dividir en: benzoquinonas, naftoquinonas, antraquinonas y fenantroquinonas. Si los grupos cetnicos estn contiguos se le llama orto y si estn separados por un grupo vinilo, para. Las antraquinonas constituyen el grupo ms numeroso de quinonas. Se encuentran frecuentemente en las Rubiaceaes, Rhamnaceaes y Poligonaceaes. Las cualidades tintreas y purgantes de algunas plantas de esta familias se debe a sus quinonas. La mayora de las antraquinonas estn hidroxiladas en C 1 y C2 y con frecuencia estn en forma de glicsidos, los que se hidrolizan durante el aislamiento.

Parte experimental. Materiales y reactivos. Erlenmeyer de 150 mL Metanol-agua 1:1 Embudo HCL 10 %. Papel de filtro Eter etlico. Papel indicador rojo congo H2S04 50 %. Embudo separador Soln. de NaOH 1 mol/L. Soln. HCO3Na 1 mol/L.

Procedimiento. En un erlenmeyer se colocan 10 g de planta molida y se le aaden 50 mL de una solucin de metanol agua 1:1. Se agita durante 30 min. Se filtra y el residuo se somete nuevamente al mismo proceso dos veces ms. Se elimina el metanol al vaco, en bao de agua y se acidifica la solucin restante con HCL al 10 % hasta que tome coloracin azul el papel de rojo congo. Extraer 5 veces con 20 mL de ter acuosa que se desecha. etlico. Reunir las fases etreas y separar la fase

La fase etrea se extrae con 5 mL de equivalente 1 mol/L 4 veces, reunindose extracto etreo.

solucin de HCO 3Na de concentracin molar los extractos acuosos y desechndose el

Al extracto acuoso se le aaden 40 mL de ter y se acidifica con cido sulfrico al %, teniendo cuidado pues se produce la eliminacin de un gas.

50

Se separa la fase etrea. La fase acuosa se extrae con 20 mL de ter 2 veces y se procede a unir con la anteriormente extrada. Filtre por papel y pase el filtrado a un matraz aforado de 100 mL y complete con ter. (Esta solucin es muy sensible a la luz, por lo que se debe trabajar rpido. Tome 5 mL de esta solucin y extraiga con 10 mL de

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NaOH de concentracin molar en equivalente 1 mol/L. Tome la fase acuosa y adale 0,3 mL de H2O2 al 3 %. Caliente en bao Mara durante 4 min. Enfre. Lea en el foto colormetro con filtro 530. Determine la concentracin de la muestra en la grfica previamente trazada con el patrn. Patrn. En un baln aforado de 100 mL, aada 0,01 g de 1,8 dihidroxiantraquinona y enrase a 100 mL con H2O. En 5 embudos de separacin aada las siguientes cantidades: a) 29,9 b) 29,7 c) 29,5 d) 28,0 e) 28,0 mL mL mL mL mL de de de de de ter 0,1 ter 0,3 ter 0,5 ter 1,0 ter 2,0 mL mL mL mL mL de de de de de patrn patrn patrn patrn patrn.

Aada 10 mL de NaOH de conc. molar en equivalente 1 mol/L a cada uno. Mezcle lentamente durante 3 min. y djelo en reposo. Separe la fase acuosa y lea en cubeta de 1 cm con filtro 530 contra NaOH de concentracin molar en equivalente 1 mol/L. Determine la grfica y realice los clculos. Actividad prctica No 19 DETERMINACIN CUANTITATIVA EN ACEITES ESENCIALES. Introduccin. En los aceites esenciales pueden realizarse determinaciones cuantitativas de grupos y componentes que respondan a una misma funcin, atribuyendo el porcentaje de los mismos al componente en particular que presente mayor proporcin. Los mtodos que se describen a continuacin permiten evaluar algunos componentes de los aceites esenciales y tienen como objetivo el desarrollo de habilidades prcticas en los estudiantes Parte experimental. A. DETERMINACIN DEL NDICE DE ACIDEZ. Materiales y reactivos. Balanza analtica Alcohol etlico al 90 %. Fenolftaleina. Solucin alcohlica KOH 0,1 mol/L.

Procedimiento. Se pesa exactamente, con precisin hasta las milsimas, de 2 a 5 g del aceite a ensayar. Se aade alcohol etlico al 95 % (neutralizado) un volumen igual en mg a 5 veces el peso de la muestra y 5 gotas de fenolftaleina. Se agita hasta total disolucin y se valora con solucin alcohlica de KOH 0,1 mol/L. El ndice de acidez se calcula por la frmula siguiente:

IA =
donde:

56,1 . V . Z g

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V = mL de KOH 0,1 mol/L consumidos. Z = conc. molar en equiv. de la solucin de KOH 56,1 = miliequivalentes de KOH expresados en mg. g = peso de la muestra en gramos. B. DETERMINACIN DEL NDICE DE STERES Y EL PORCENTAJE DE Materiales y reactivos. Balanza analtica Etanol al 95 % Frasco de saponificacin Fenolftaleina Condensador Soln acuosa NaOH 0,1 mol/L Bao Mara Soln alcoholica KOH 0,5 mol/L Fragmentos de plato poroso Soln HCL 0,5 mol/L STERES.

Procedimiento. Se pesan exactamente de 2 a 5 g de la muestra en el frasco de saponificacin, con una precisin hasta la milsimas. Se aade alcohol etlico al 95 %, un volumen igual a 5 veces el peso de la muestra y 3 gotas de solucin indicadora de fenolftaleina, neutralizando despus los cidos, con solucin acuosa de NaOH 0,1 mol/L Se aaden 10 mL de solucin alcohlica de KOH 0,5 mol/L medidos exactamente y algunos fragmentos de plato poroso y se ajusta el condensador de reflujo al frasco de saponificacin, reflujando en Bao Mara durante 1 hora. Se deja enfriar y se aade al condensador 10 mL de alcohol etlico neutro. Se desmonta el condensador, se adiciona 5 gotas de solucin indicadora de fenolftaleina y se valora el exceso se lcali con solucin de HCL 0,5 mol/L. Paralelamente con el ensayo de la muestra se realiza un ensayo en blanco. El ndice de steres se calcula por la frmula siguiente, teniendo en cuenta el ndice de acidez.

IE =
donde:

56,1 . (V - V') . N g

56,1 = Miliequivalentes de KOH expresados en mg. V = mL de KOH 0,1 mol/L consumidos. V' = mL de KOH consumidos en el ensayo en blanco. N = Conc. molar de la solucin de NaOH 0,1 mol/L. g = gramos de aceite empleados para el ensayo. El porcentaje de steres se calcula por la siguiente frmula.

%E =
donde:

56,1 . (V - V') . N 10g

56,1= miliequivalente de KOH expresados en mg.

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V = mL de la solucin de KOH consumidos. V' = mL de la solucin de KOH consumidos en el ensayo en blanco. N = Conc. molar de la solucin de NaOH 0,1 mol/L. 10 g = cantidad de aceite empleado en el ensayo.

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V. MTODOS DE EXTRACCIN, METABOLITOS SECUNDARIOS. Introduccin. La extraccin de principios activos comprende una serie de mtodos de trabajo, dentro de los cuales pueden sealarse, la extraccin simple, continua, por contracorriente, etc., dependiendo esto de la naturaleza, qumica del principio activo y el disolvente a emplear. Entre los mtodos de purificacin pueden emplearse, entre otros, la cristalizacin, sublimacin, cromatografa, etc. Sirviendo tambin este ltimo mtodo, para la identificacin de diferentes productos. En las actividades prcticas que relacionamos a continuacin se describen una serie de mtodos de trabajo cuyo objetivo fundamental est basado en la adquisicin de habilidades prcticas de los estudiantes. Actividad prctica No 20 OBTENCIN Y CARACTERIZACIN DE ACEITES ESENCIALES. Introduccin. Este procedimiento, responde a un mtodo de obtencin de extractos por destilacin, pudiendo servir adems como mtodo cuantitativo de anlisis. La destilacin comprende variantes segn si el material fresco o seco se altera por ebullicin con agua. En la destilacin de una mezcla de dos lquidos inmiscibles, las cantidades relativas en peso de los dos lquidos que se recogen en el colector son directamente proporcionales a: 1. Las tensiones de vapor de ambos lquidos a la temperatura de destilacin. 2. A sus masas molares. Adems, la mezcla destilar a una temperatura constante mientras exista por lo menos algo de cada uno de los componentes. Para la obtencin de aceites esenciales, pueden ser empleados alguno de representados en la Fig. 26 epgrafe II. los equipos PURIFICACIN E IDENTIFICACIN DE ALGUNOS

Parte experimental. Materiales y reactivos Balanza analtica. Plancha elctrica o fuente de calor. Baln o matraz de destilacin. Aparato para la determinacin de aceite esencial. Pesa filtrode25 mL. Bao de agua termostatado. Pipeta de 1 mL. Bureta de 25 mL. Polarmetro.

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Sulfato de sodio. ter etlico. Soln. de NaCl 1% m/v. Etanol absoluto (el cual se lleva a diluciones de 70, 80 y 90%

Procedimiento. Se pesan 100 g de la droga seca y molida, sino se especifica otra cosa en la norma, se transfieren a un baln de destilacin de 1 L, se aaden 400 mL de solucin de cloruro de sodio y se conecta el equipo de destilacin de aceite. Se calienta el baln a ebullicin y se ajusta la destilacin a 2-3 mL / min. Mantener la destilacin por 2 h o ms de acuerdo a la monografa de la droga. Finalizada la destilacin, dejar enfriar y aadir por el condensador pequeas porciones de ter di etlico. Transfiera el contenido a un embudo separador, adale de 2 3 mL ms del ter di etlico, agite decante la fase acuosa. Al extracto etreo, adale 0,5 g de sulfato de sodio anhidro y lave el residuo con varias porciones de ter di etlico, los cuales se renen en el pesa filtro. Evapore el solvente cuidadosamente en bao de agua a temperatura no mayor de 40oC y determine la masa del aceite voltil por la diferencia entre las pesadas del pesa filtro vaco y con el aceite esencial. Expresin de los resultados.

% a. e =

A1 . 100 100 - H Pa - Pv M

.100 (en base anhidra)

% a. e =
donde:

. 100 (en base hidratada)

Pa = Masa del pesa filtro con acite voltil (g) Pv = Masa del pesa filtro vaco. 100 = Factor matemtico. M = Masa de la droga (g). H = Humedad de la droga (%) A1 =% de aceite esencial en base hidratada. Los resultados se aproximan hasta las dcimas. El aceite esencial obtenido se reserva para su anlisis correspondiente, dentro de los que se encuentran: A. DETERMINACIN DE LA SOLUBILIDAD EN ALCOHOL. Se dice que el aceite esencial es soluble en N volmenes (20 como mximo) de alcohol etlico de determinada graduacin, si el volumen mnimo de alcohol adicionado para obtener una solucin lmpida es N veces el volumen de aceite esencial. Procedimiento. Medir con pipeta 1 mL de aceite esencial previamente enfriado a 20 oC, el cual se lleva a una probeta de 25 mL. Por medio de una bureta se aade el alcohol de la graduacin a ensayar gota a gota al aceite esencial, agitando con frecuencia. Cuando se obtiene una solucin lmpida, se registra el volumen consumido. Expresin de los resultados. Se informa que el aceite esencial es soluble en N volmenes de alcohol de la graduacin ensayada, con aproximacin de los valores hasta las dcimas.

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B. PODER ROTATORIO. Esta determinacin se realiza mediante el empleo del polarmetro, el cual mide la desviacin del plano de la luz polarizada que se produce al atravesar la misma, una sustancia colocada en un tubo de longitud 1 dm. Procedimiento. Llenar el tubo del polarmetro con aceite esencial previamente enfriado a 20 oC, evitando que queden burbujas de aire. Realizar la determinacin. Expresin de los resultados. t = l

donde: t =Poder rotatorio = ngulo de desviacin de la luz. l = longitud del tubo. Los resultados se aproximan hasta las dcimas. Se determinarn tambin el ndice de refraccin y la densidad relativa (ver epgrafe II.1) Actividad prctica No 21

EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE FLAVONOIDES DE VEGETALES. Introduccin.

Los flavonoides son compuestos ampliamente representados en el reino vegetal, donde se encuentran generalmente en forma de glicsidos y en muchos casos dando pigmentacin variada a los mismos. Responden al ncleo de las fenil cromonas y desde el punto de vista farmacolgico contrarrestan la fragilidad capilar de los vasos sanguneos, favoreciendo por tanto los procesos circulatorios. Para el desarrollo de la prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: 1. 2. 3. 4. Ncleos estructurales de los flavonoides y propiedades de los mismos. Mtodos de preparacin (extraccin). Ensayos para su reconocimiento. Inters farmacutico.

Objetivo de la actividad. Obtener un extracto rico en flavonoides y realizar la caracterizacin del mismo. Parte experimental.

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Procedimiento. Se toman 50 g de epicarpio de un ctrico (naranja, toronja, etc.), se calienta en un erlenmeyer 30 min., con una cantidad de etanol que cubra todo el material triturado y un pequeo exceso. Se filtra el extracto en caliente y con el filtrado se realizan los siguientes ensayos: a) Una alcuota se concentra en bao de agua y se realiza una cromatografa en placa delgada, corriendo en acetona-etanol (2:1) y revelando con cido sulfrico al 50 % y calor. b) Una alcuota se trata con solucin reactiva de cloruro frrico. Observe. c) Una alcuota se trata con el reactivo de Fehling (A + B y calor en bao de agua). Observe. d) Una alcuota se trata con 1 mL de cido clorhdrico concentrado y un pedazo de Mg metlico. Observe. e) El resto de la solucin se concentra hasta aproximadamente 1mL. Se aaden 10 mL de ClH 5%. Enfriar. Si aparece precipitado (hesperidina), decante la solucin y al slido realcele el ensayo (b) para confirmar que es hesperidina por la aparicin de un color vino. Se informar el resultado de los ensayos realizados en la actividad. Actividad prctica No 22 AISLAMIENTO DE NARINGINA DE LA CORTEZA ESPONJOSA DE LA TORONJA. Introduccin El albedo o parte esponjosa de la corteza de los ctricos, se compone fundamentalmente de celulosa, carbohidratos, sustancias pcticas, flavonoides, aminocidos y vitaminas. El flavonoide principal del albedo, la naringenina se aisl por primera vez por De Vry en 1866, en las flores de los ctricos de Java, de las uvas y de diferentes ctricos amargos. Su caracterstica fundamental es su fuerte amargor, que necesita el tratamiento comercial de los jugos con enzimas para hidrolizar el glicsido y eliminar su amargor.

alfa glucosa - O - beta glucosa

OH

OH
Parte experimental. Materiales y reactivos. Batidora Equipo para destilar Celite Etanol Isopropanol Corteza de ctrico

Procedimiento

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Una parte de corteza (en pedazos) en peso y 4 partes en peso de agua, se calientan a 90 oC durante 10 min. y se filtra. El proceso de repite una vez ms. Los extractos reunidos se calientan a ebullicin con un 1 % en peso de celite. Se filtra y se concentra hasta 1/9 parte del volumen inicial. Se refrigera y la naringenina cristaliza como cristales octahidrato de p.f. 83 oC. El producto se recristaliza de isopropanol disolviendo en ebullicin y filtrando. Al refrigerar la naringenina cristaliza como dihidrato de p.f. 171 oC. Realizar una cromatografa en capa delgada empleando celulosa como fase estacionaria y como disolvente etanol agua 60:40. Como revelador se emplea lmpara UV a 366 nm y AlCl3 1% en metanol. Debe aparecer una mancha carmelitoza a Rf 0,86 Se calculan los rendimientos de las dos cristalizaciones y se informa el anlisis cromatogrfico. Actividad prctica No 23 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE QUINONAS DE VEGETALES. Introduccin. Las quinonas son dicetonas insaturadas, que por reduccin se convierten en polifenoles, los que se regeneran fcilmente por oxidacin. Por sus colores de amarillo a violeta, contribuyen a la pigmentacin de numerosos vegetales y algunos animales. Para la prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: d) d) d) d) Ncleos estructurales de las quinonas y propiedades de las mismas. Mtodos de extraccin. Ensayos para su reconocimiento. Inters farmacutico.

Objetivo de la actividad. Obtener un extracto rico en quinonas y realizar la caracterizacin del mismo. Parte experimental. Materiales y reactivos. Extracto de aloe. Etanol. HCl 1%. Cloroformo. Acetona. Slica gel G. NaOH 5 %. Benceno. Beaker. Plancha de calentamiento. Embudo separador. Mortero. Placas cromatogrficas. Lmpara UV. Tubos de ensayo.

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Procedimiento. a) 0,5 g de extracto de aloe se disuelven en 10 mL de etanol, calentando ligeramente en bao de agua. Se mezcla con 40 mL de HCl al 1 % y se extrae en embudo separador 2 x 10 mL de cloroformo. El cloroformo se destina para los ensayos. b) Una alcuota se concentra en bao de agua y se realiza una cromatografa en placa delgada, corriendo en acetona y revelando: Con luz UV. Asperjando con NaOH 5 % y observando a la luz UV. al 5%. Dejar

c) Una alcuota se agita en tubo de ensayos con igual volumen de NaOH reposar. Observar la coloracin de las fases.

d) Una alcuota se concentra en bao de agua. Se redisuelve en1 mL de benceno y se agita en tubo de ensayo con igual volumen de NaOH al 5%. Dejar reposar. Observar la coloracin de las dos fases. Se informar el resultado de los ensayos en la prctica. Actividad prctica No 24 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE SAPOGENINAS ESTEROIDALES EN DROGAS VEGETALES. Introduccin. Las saponinas y en particular aquellas que contienen un aglicn de tipo esteroidal son de gran inters para la Industria farmacutica, ya que los ncleos esteroidales sirven como fuente de materia prima para la sntesis parcial de hormonas. Para la realizacin de esta prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: 1. 2. 3. 4. 5. Que son las saponinas y sapogeninas? Estructuras ms importantes y fuentes naturales. Mtodos de extraccin de las drogas. Mtodos de reconocimiento y caracterizacin. Por qu son materia prima para la Industria farmacutica?

Objetivo de la actividad: Obtener un crudo de sapogeninas esteroidales por uno de los mtodos establecidos y realizar la caracterizacin del mismo. Parte experimental Materiales y reactivos. HCl 4 mol/L. Equipo de reflujo. n-hexano. Embudo. Cloroformo. Papel de filtro. Slica gel. Equipo Soxhlet.

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H2SO4 50%. Balanza tcnica. S. R Salkowski. Placas cromatogrficas S. R Rosenheim. Cmaras cromatogrfica. H2SO4. Tubos de ensayo. Anhidrido actico.

Procedimiento. 50 g de droga se mezclan con 250 mL de HCl 4 mol/L y se calienta a reflujo durante 1 hora. Se filtra en caliente lavando el residuo varias veces con agua fra. El lquido cido del filtrado se elimina y el residuo se seca. El residuo oscuro seco se coloca en el dedal de un equipo Soxhlet y se extrae durante 45 min. con n-hexano o ter de petrleo (no menos de 15 descargas del equipo) El solvente se concentra y el residuo se pesa para calcular el % de rendimiento. El extracto de saponinas se redisuelve en 1 mL de cloroformo. Se puntea del mismo en una placa cromatogrfica de slica gel G para observar las sapogeninas presentes, revelando con cido sulfrico al 50% y calor. El resto del extracto clorofrmico se subdivide para realizar los ensayos de: a) Liebermann-Burchard. b) Rosenheim (c. tricloro actico 90%) c) Salkowski. Disolvente Cloroformo - acetona (7:3) Sapogenina yucagenina diosgenina - sitosterol hecogenina tigogenina Rf 0,4 0,9 0,85 0,7 0,85 Color al revelar. Morado azul. Rosado. Morado gris. Amarillo. Carmelita gris

Se informar el calculo del % de rendimiento y los resultados de la caracterizacin.

Actividad prctica No 25 DETERMINACIN SIMULTNEA DE SAPONINAS Y TANINOS EN UN EXTRACTO VEGETAL. Introduccin En las tcnicas de tamizaje, los errores ms comunes corresponden a los ensayos falso positivos y negativos. Por ello, algunos extractos deben purificarse de forma rpida y sencilla para evitar

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interferencias que aseguren la afirmacin del resultado del ensayo empleado y la reproducibilidad de la determinacin. Este es el caso de las saponinas y taninos frente al ensayo de hemlisis, por ello se desarrolla la tcnica que se describe. Objetivo de la actividad. Determinar la presencia de saponinas y taninos en un extracto vegetal sin que uno de ellos interfiera en los ensayos del otro. Parte experimental Materiales y reactivos. n-hexano. Equipo reflujo. Etanol 80 %. Papel de filtro Soln. salina. Embudo. Oxido de magnesio. Tubos de ensayo. Plancha de calentamiento.

Procedimiento. 5 g de drogas se extraen reflujando 15 min. con n-hexano. Se filtra y la droga desengrasada, se extrae reflujando 15 min. con 100 mL de etanol al 80 %. Se enfra y se filtra. El extracto se concentra a sequedad en bao de agua o con evaporador rotatorio. El residuo se extrae en caliente con 10 mL de solucin salina. Se filtra. El proceso se repite. Los extractos salinos reunidos se dividen en 1/3 y 2/3. La alcuota menor se somete a los ensayos de taninos seleccionados para la actividad. La alcuota mayor se calienta con 5 g de xido de magnesio hasta formar una pasta. Dicha pasta se calienta con 10 mL de etanol al 80 %. Se filtra y el filtrado se somete a los ensayos de saponinas seleccionados para la actividad. Se informar los resultados de los ensayos realizados. Actividad prctica No 26 PREPARACIN Y CARACTERIZACIN DE ESTEROLES DE CERAS VEGETALES. Introduccin. Los esteroles son alcoholes slidos de 27 29 tomos de carbono, con el ncleo fundamental del androstano y que pueden obtenerse tanto de fuentes animales como vegetales ya sea en forma libre o esterificados con cidos grasos. Algunos de ellos, en dependencia de las sustituciones (por Ej. El estigmasterol) pueden servir como fuente de materia prima para la semisntesis de hormonas. Para el desarrollo de la prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: a) Ncleos estructurales de los esteroles y propiedades de los mismos. b) Mtodos de extraccin.

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c) Ensayos para su reconocimiento. Objetivo de la actividad. Obtener un extracto de esteroles y realizar la caracterizacin del mismo. Parte experimental. Materiales y reactivos. Equipo de reflujo. Embudo separador. Tubos de ensayo. Placas cromatogrficas. Cmara cromatogrfica. Plancha de calentamiento. Cera. H2SO4 concentrado. Cloroformo. Acetatode etilo. ter de petrleo KOH 15 % en etanol. Anhdrido actico. S. R de Rosemheim

Procedimiento. 10 g de cera vegetal se saponifican con 60 mL de KOH al 15 % en etanol. Despus de 1 h de reflujo, en caliente, se aaden 60 mL de agua. La mezcla se lava en embudo separador con 30 mL de cloroformo. El cloroformo que corresponde a la fraccin insaponificable donde deben estar contenidos los esteroles se somete a los siguientes ensayos: Una alcuota se concentra en bao de agua y se realiza una cromatografa en placa delgada corriendo en ter de petrleo-acetato de etilo (2:1) y revelando con cido sulfrico al 50 % y calor. Una alcuota se somete al ensayo de Rosemheim (c. tricloroactico 90%). Se informar el resultado de los ensayos en la actividad. Actividad prctica No 27 AISLAMIENTO Y RECONOCIMIENTO DE ESTEROLES MEDIANTE LA FORMACIN DE DIGITNIDOS. Introduccin. Las propiedades del colesterol de formar complejos poco solubles con cantidades equivalentes de digitonina, se describi por primera vez por Windaus en 1910. Otros alcoholes forman estos complejos pero difieren en solubilidad y estabilidad respecto a los esteroles. Por ello, la precipitacin de los esteroles con digitonina es un mtodo efectivo para el aislamiento y purificacin de esteroles de la serie 3-hidroxi. Esta metodologa permite la cuantificacin de los esteroles ayudado por un agente precipitante como es el tricloruro de aluminio en medio cido. Parte experimental.

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Materiales y reactivos. Acetona AlCl3 Colesterol Digitonina Dimetil sulfxido Etanol ter HCl Metanol n-Hexano Sulfato de sodio anhidro Cloroformo Centrfuga Equipo Soxhlet Plancha de calentamiento

Procedimiento Una pequea porcin de material vegetal seco y molido se desengrasa en equipo Soxhlet con nhexano. El extracto se concentra a sequedad y el residuo se pesa. Al residuo se aade igual peso de KOH y 150 mL de etanol agua (1:1). La mezcla se calienta a reflujo dos horas. La misma se vierte en caliente sobre 150 mL de agua. Se filtra y la solucin se lava 2 x 100 mL de cloroformo. Los lavados de cloroformo se renen con el slido anteriormente filtrado, se concentra por destilacin y el residuo se destina para el anlisis de la composicin de esteroles. 100 mg. De colesterol, estigmasterol, sitosterol y el extracto, se disuelven de forma independiente en 100 mL de acetona etanol (1:1). Cada solucin por separado se mezcla con 10 gotas de HCl 3,5 % y 10 mL de digitonina al 0,5 % en etanol acuoso al 50%. Se adicionan 10 mL de AlCl 3 al 10% en agua. La mezcla se calienta 15 min. a 45 oC. Se enfra en bao de hielo y se centrfuga. Se decanta el lquido y la purificacin final de los digitnidos se realiza tratando el residuo con 20 mL de acetona, centrifugando, decantando el lquido y recuperando el slido. Para recuperar los esteroles, el residuo correspondiente al extracto vegetal saponificado, se mezcla con 20 mL de dimetil sulfxido y se calienta con vapor de agua 15 min. Al enfriar deben precipitar los esteroles. La solucin se lava en embudo separador 2 x 70 mL de n-hexano. Las fases de lavado reunidas se secan con sulfato de sodio anhidro, se filtran y se concentran a sequedad. El residuo donde estn los esteroles se destina para un anlisis cromatogrfico. Anlisis cromatogrfico. En una placa delgada de slica gel G 60 se aplica el residuo anterior contra los patrones disponibles de esteroides tipo esteroles. Se emplea como disolvente cloroformo y como revelador H 2SO4 50 % en agua y calor. Al calentar los esteroles aparecen como manchas coloreadas de diferentes tonalidades. En el informe se indica los esteroles que formaron digitnidos y los posibles presentes en el extracto, de acuerdo a la metodologa aplicada.

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Actividad prctica No 28 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE GLICSIDOS CARDIOTNICOS EN DROGAS VEGETALES. Introduccin. Los glicsidos cardiotnicos son estructuras de tipo esteroidal con una estereoqumica especfica y un agrupamiento lactnico insaturado de especial importancia para su efecto biolgico. Desde la antigedad se utilizan como venenos potentes por lo que es importante su localizacin en drogas vegetales para su consumo racional por la poblacin debido al peligro que las mismas implican. Para el desarrollo de esta prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: a) Cules son los glicsidos cardiotnicos ms interesantes y los azcares que involucran? b) Fuentes naturales y mtodos de preparacin. c) Mtodos de reconocimiento y caracterizacin. d) Inters biolgico. Objetivo de la actividad. Obtener un crudo de glicsidos cardiotnicos que permita realizar ensayos de caracterizacin de los mismos. Parte experimental. Materiales y reactivos. Erlenmeyer de 500 mL. Plancha de calentamiento. Papel de filtro. Embudo. Agitador de vidrio. Papel de pH. Cmara cromatogrfica. Embudo separador. Tubos de ensayo. Placas cromatogrficas. NaOH Etanol al 50 %. Suspensin de Ac2Pb Acetato de etilo. Sulfato de sodio Cloroformo Metanol H2SO4 50 % S. R Baljet S. R Kedde S.R Raymond - Marthund S.R de Legal.

Procedimiento.

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Para la extraccin de los glicsidos cardiotnicos un grupo de estudiantes trabajar con Thevetia (tevetsidos) y otro grupo con Nerium (oleandrsidos) con la siguiente metodologa: 20 g de droga se calienta 15 min. en un erlenmeyer con 100 200 mL de etanol al 50 % (v/v). Se filtra y al filtrado se le aade una suspensin de acetato de plomo (5 g de acetato de plomo en 20 mL de agua. Aadir agitando NaOH en solucin hasta pH alcalino) .Se mezcla y se filtra. Al filtrado se le aaden 2 g de sulfato de sodio y se lava en embudo separador 2 x 15 mL de acetato de etilo o de cloroformo. Las fases orgnicas se dividen en 5 tubos de ensayos y se concentran a sequedad en bao de agua. Con ellos se realizan los siguientes ensayos: a) Cromatografa en capa delgada corriendo en cloroformo-metanol (7:3) y revelando con cido sulfrico al 50 % y calor. b) Ensayo de Baljet. c) Ensayo de Kedde. d) Ensayo de Raymond - Marthund. e) Ensayo de Legal. Se informar el resultado de todos los ensayos realizados en la actividad.

Actividad prctica No 29 AISLAMIENTO DE CERINA Y FRIEDELINA DEL CORCHO. Introduccin Cheoreul fue el que por primera vez aisl los alcoholes triterpenoides del corcho, cerina y friedelina. Los mismos son los componentes mayoritarios de los productos solubles del corcho y fcilmente recristalizables de cloroformo. La friedelina est en una composicin mayor del 1 % y la cerina en el orden de 0,1 %.

HO

O CERINA
Parte experimental. Materiales y reactivos. Acetato de etilo

O FRIEDELINA

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2,4-dinitrofenilhidracina HCl Cloroformo Corcho triturado.

Procedimiento. 100 g de corcho triturado se reflujan con 500 mL de acetato de etilo durante 3 horas (o se extraen en equipo Soxhlet con el mismo disolvente). El extracto carmelita oscuro se concentra a sequedad. El residuo se trata con 5 mL de cloroformo y se refrigera. Cristaliza la cerina en forma de agujas p.f. 255 256 oC. La friedelina queda en las aguas madres. Las aguas madres se concentran lentamente hasta turbidez. En este momento se aaden 5 mL de acetona. El precipitado est constituido por friedelina cruda que se recristaliza de acetato de etilo dando agujas de p.f. 262 263. Preparacin de fenilhidrazonas. 50 mg. De cada triterpenoide por separado se disuelven en 5 mL de etanol y se aaden 30 mg de 2,4-dinitrofenilhidracina y una gota de HCl concentrado, despus de la disolucin de la mezcla con ligero calentamiento. Se refluja el sistema 5 10 min. y se enfra en bao de hielo. En ambos casos se forman cristales de color naranja. Derivado de la cerina: Funde con descomposicin a 253 255 oC. Derivado de la friedelina: Funde a 297 299 oC con descomposicin Se calcularn los rendimientos de los triterpenoides y los puntos de fusin encontrados. Actividad prctica No 30 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE PROTENAS VEGETALES. Introduccin. Las protenas son polipptidos comunes de encontrar en el protoplasma de todas las clulas de animales y vegetales. En algunos vegetales el contenido proteico es importante, ejemplo el frjol de soya que contiene un 37 %, el man un 26 % y las almendras un 21%. Todas producen aminocidos por hidrlisis y por ello son de gran importancia para el hombre. Para el desarrollo de la prctica, el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: a) b) c) d) Protenas, ejemplos de los tipos y propiedades Mtodos de extraccin Mtodos de reconocimiento y caracterizacin Inters biolgico

El objetivo de la actividad es: Obtener un extracto de protenas vegetales que permita realizar ensayos de caracterizacin. Parte experimental

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Materiales y reactivos SR gelatina Solucin acuosa concentrada de c. pcrico Solucin de eosina cido actico glacial Solucin salina fisiolgica Sulfato de amonio 10 % SR ninhidrina Embudo. Mezcladora. Papel de filtro. Tubos de ensayos. Papel de pH.

Procedimiento. 5 g de la droga se trituran durante 20 min. con 25 mL de agua fra. Se filtra y el filtrado se subdivide en 5 partes para realizar los siguientes ensayos. Todos los ensayos se realizarn en paralelo y de forma comparativa con una solucin recin preparada de gelatina. a) b) c) d) e) f) Aadir solucin acuosa concentrada de cido pcrico en igual volumen. Observar. Aadir solucin muy diluida de eosina. Observar Aadir cido actico glacial hasta pH cido. Observar. Aadir solucin salina fisiolgica en igual volumen. Observar. Aadir solucin de sulfato de amonio al 10 % en igual volumen. Observar. Si en los dos ltimos ensayos hay precipitado, decantar y al precipitado realizar el ensayo de la ninhidrina.

Se informar el resultado de los ensayos realizados en la actividad. Actividad prctica No 31 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE ALCALOIDES EN UNA DROGA VEGETAL. Introduccin. Los alcaloides son sustancias naturales generalmente de origen vegetal, con al menos 1 nitrgeno (involucrado en la mayora de los casos) en forma de un heterociclo. Ms del 90 % de las estructuras conocidas son bsicas y presentan de alguna forma efectos biolgicos lo cual justifica su inters. Se biosintetizan a partir de aminocidos, slo se preparan por vegetales superiores de metabolismo acabado, ya que son el paso final de rutas metablicas en las drogas que los contienen. Para la realizacin de la prctica el estudiante debe revisar los siguientes aspectos: 1. 2. 3. 4. Definicin y tipos estructurales. Propiedades y mtodos de extraccin. Ensayos de reconocimiento y caracterizacin. Inters biolgico.

Objetivo de la actividad. Obtener un extracto crudo de alcaloides de una droga y realizar ensayos de caracterizacin del mismo. Parte experimental.

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Materiales y reactivos HCl al 1 %. Sulfato de sodio. KOH al 10 %. Acetato de etilo. Etanol. S. R de Dragendorff. S. R de Mayer. S. R de Hager. S. R de Wagner. Erlenmeyer 200 ml. Embudo. Papel de filtro. Embudo separador. Tubos de ensayo. Placas de cromatografa. Cmara cromatogrfica. Plancha de calentamiento.

Procedimiento. Para el desarrollo de la prctica se utilizarn las siguientes drogas: Vicaria (Catharanthus roseus). Campana (Datura sp.). Jazmn (Ervatamia coronaria). Ponas (Hamelia patents). Rauwolfia sp. A 25 mL de un extracto alcohlico de la planta, se le aaden 75 mL de ClH al 1 % y 1 g de sulfato de sodio. Se filtra y el filtrado se alcaliniza con KOH al 10 %. Se lava la solucin en embudo separador 2 x15 mL de acetato de etilo. El acetato de etilo se divide para los siguientes ensayos: a) Una alcuota se concentra en bao de agua y se realiza una cromatografa en capa delgada, corriendo en acetato de etilo-etanol (1:1) y revelando con solucin reactiva de Dragendorff. b) Una alcuota se concentra a sequedad, se aade 1 mL de HCl al 1 % y se realiza el ensayo de Dragendorff. c) Una alcuota de la misma forma que en (b) se realiza el ensayo de Mayer. d) Una alcuota de la misma forma que en (b) se realiza el ensayo de Hager (c. pcrico). e) Una alcuota de la misma forma que ( b) se realiza el ensayo de Wagner. Se informar el resultado de los ensayos realizados en la actividad. Actividad prctica No 32 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE UN ACEITE FIJO. Introduccin.

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Los aceites fijos de los vegetales se extraen generalmente de las semillas, hay casos, como el Olivo, donde la parte utilizada es el pericarpio del fruto. El mtodo ms utilizado industrialmente, para extraer el aceite, es la expresin en fro o en caliente. Tambin se puede utilizar con este propsito la extraccin con solventes orgnicos. El objetivo de esta prctica es extraer las semillas del vegetal convenientemente triturada de forma continua con solvente orgnico. De esta forma se extrae todo el aceite hasta agotar el material. Finalmente se evapora el solvente utilizando un bao de agua y se recupera el aceite. A partir de los datos obtenidos se calcula el contenido de aceite crudo del material original. El aceite obtenido se caracteriza mediante la determinacin del ndice de refraccin y reacciones qumicas. Parte experimental Materiales y reactivos Extractor Soxhlet Gotero Mortero con su mano Dedal de Soxhlet Plancha elctrica Cuchilla Refractmetro Abbe 2 beakers de 50 mL Microscopio compuesto Soporte universal Porta y cubreobjetos Pinzas Agitador de vidrio Bao de agua Algodn Semillas del vegetal Talco o tierra de diatomea ter etlico ter de petrleo 40 60 oC S. R. de Serger

Procedimiento. Se trituran 9 g del material vegetal con 2 g de talco. El material resultante se coloca sin presionar en el dedal. El dedal se coloca en el extractor Soxhlet y se extrae con ter de petrleo 40 60 o C. La extraccin se realiza en forma continua unas 15 veces para asegurar la extraccin completa del aceite. El extracto etreo se evapora en un beaker tarado en bao de agua a la temperatura de 70 oC hasta peso constante. Por diferencia de peso se determina la cantidad de aceite crudo extrado. Con el dato obtenido se calcula el porcentaje de aceite en el material dado. Se determina el ndice de refraccin del aceite obtenido en el equipo y se compara con el valor reportado en la literatura. Ensayos de coloracin. Reaccin de Serger para aceites vegetales.

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5 mL de aceite fijo se disuelven en 10 mL de ter y se agitan con 1 mL de reactivo de Serger (solucin recin preparada de 0,1g de molibdato de sodio en 10 mL de cido sulfrico). Deje en reposo, observe la coloracin que aparece en la capa inferior. Realice esta experiencia con diferentes aceites fijos y comprelo con el aceite obtenido por Ud. en la prctica. Actividad prctica No 33 CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA DE CARBOHIDRATOS. Introduccin. Los carbohidratos son muy comunes en los extractos acuosos de diferentes plantas medicinales, en particular frutos y / o tubrculos. Diferentes mtodos se han desarrollado para su anlisis, siendo uno de los ms simples el que proponemos en la siguiente metodologa de trabajo. Parte experimental. Materiales y reactivos. Celite Slica gel G 60 Placas de cristal Estufa Asperjador cido actico concentrado cido sulfrico concentrado Anisaldehdo n- butanol Etanol ter etlico Patrones de carbohidratos. Material vegetal.

Procedimiento. El material vegetal se extrae a ebullicin durante 10 min. con agua (cantidad que la cubra ms 1 cm por encima) Se filtra. El extracto se calienta con un 1% en peso de Celite durante 5 min. y se filtra. El extracto se destina para el anlisis cromatogrfico contra los patrones disponibles. Cromatografa en capa delgada. Se emplean placas de slica gel G 60 y como fase mvil: n-butanol cido actico ter etlico Agua (9:6:3:1). Como revelador se emplea 0,5 mL de anisaldehdo disuelto en 9 mL de etanol, 0,5 mL de cido sulfrico concentrado y 0,1 mL de cido actico. Azcar Sucrosa Glucosa Fructosa Xylosa Ribosa Rhamnosa Rf 0,09 0,22 0,27 0,40 0,47 0,55 Color con anisaldehdo Violeta Azul Violeta Gris Azul Verde

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Se informar los posibles carbohidratos que se detectan en el extracto acuoso del material vegetal procesado.

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VI. GLOSARIO DE TRMINOS BOTNICOS Aquenio: Fruto seco, indehiscente, con el pericarpio separado de la nica semilla que contiene. Axila: Fondo del ngulo superior que forma la hoja, brctea, etc, con el eje caulinar con que se inserta. Brctea: rgano vegetal foliceo generalmente asociado a flores e inflorescencias, pero bien diferentes a las hojas normales. Bulbo: Estructura generalmente subterrnea de las plantas, que le permite protegerse de la sequa a la yema vegetativa principal; generalmente formado por las hojas u otras estructuras foliceas en funcin de reserva. Cabezuela: Sinnimo de captulo floral. Cliz: Estructura ms externa de la flor, compuestas por varias semejantes a hojas y de color verde. piezas generalmente

Captulo: Tambin llamada cabezuela, inflorescencia tpica de las especies del gnero Asteraceae (Compositae), que agrupa un nmero variable de flores ssiles sobre un eje corto y generalmente dilatado (receptculo). Cpsula: Fruto seco, dehiscente, generalmente conteniendo un nmero grande de semillas. Corola: Estructura floral, situada a continuacin del cliz y generalmente formada por piezas de mayor tamao y colores vistosos (ptalos). A veces ausente, o no diferenciada del cliz. Cotiledn: La primera o cada una de las primeras hojas de la planta, que se forman en el embrin de las plantas con flores. Dehiscentes: Relativo a los frutos u otro rgano vegetal, que se abren para dispersar las simientes cuando estn maduras. Envainadora: Que forma vainas y rodea parcial o totalmente un miembro u rgano de la planta. Estipete: Tallo largo y no ramificado de las plantas. Trmino utilizado para designar otras estructuras semejantes a un tallo. En Amrica se asigna el trmino al pecolo de los helechos. Espiga: Inflorescencia en la que las flores se disponen, sin pednculos, a lo largo de un eje ms o menos prolongado. Membranceo: Con aspecto de membrana. Oleaginosa: Rico en aceites fijos. Palminervia: Se dice dela nervadura de la hoja, cuyos nervios parten aparentemente de un mismo punto y divergen recordando la forma de una mano abierta. Pauciflora: De pocas flores. Pecolo: Pequea rama que une la base de las hojas con la rama o tallo al que est adherida. Cuando est ausente se dice que la hoja es ssil o sentada. Pednculo: Pequea rama que une a la flor a la rama o tallo, del que parte o se aleja de la inflorescencia de la que forma parte. Penacho: Conjunto de hojas o pelos.

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Plntula: Pequea planta recin nacida. Pubescente: Carcter atribuido a cualquier rgano vegetal cubierto total o parcialmente de pelos suaves y finos. Peloso: Cubierto totalmente de pelos, sin especificar caractersticas (longitud, grosor, textura, etc) de los mismos

Peltado: Relativo a las hojas que presentan forma redondeada y el pecolo insertado en el centro. Pericarpio: Parte externa del fruto que rodea a la semilla para su proteccin; suele estar formada por tres partes: epicarpio, mesocarpio y endocarpio. Pistilo: rgano sexual femenino de las flores, formado por el ovario, el estilo y el estigma. Racimo: Inflorescencia compuesta de un eje central a cuyo lados se disponen las flores con sus correspondientes pedicelos florales. Reniforme: En forma de rin. Rizoma: Tallo subterrneo, generalmente alargado y desarrollado cercano a la superficie del suelo, puede o no acumular sustancias de reservas. Roseta: Se dice de las hojas que en la base del tallo o de las ramas, se disponen muy juntas a causa de la brevedad de los entrenudos, formando una estructura en forma de rosa. Sarmentoso: Carcter relativo a las plantas con ramas largas, finas y flexibles que suelen apoyarse en cuanto objeto encuentren al crecer, como es el caso de la bouganvillea. Sentada: Trmino vulgar equivalente a ssil. Ssil: Cualquier rgano de la planta que carece de soporte o pie. Sicono: Nombre que se aplica a las compuestas de la higuera y otras especies del gnero Ficus, formadas por un receptculo cnico o en forma de pera, en cuyo interior se disponen flores y frutos diminutos. Silcua: Fruto capsular, alargado, que se abre a travs de estructuras longitudinales a partir de la base. Suculentas: Estructura del vegetal muy carnosa y gruesa, que poseen abundante jugo. Sumidades floridas: Inflorescencias. Umbela: Inflorescencia en la que a partir del extremo del pednculo o tallo principal, ocasionalmente ensanchado a modo de receptculo, parten todos los pedicelos florales (radios de la umbela generalmente de igual longitud.) Verticilo: Conjunto de tres o ms rganos, generalmente hojas, que parten de un mismo punto en el tallo o rama.

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VII. SOLUCINES Y REACTIVOS 1. 2. Alcohol extractivo: 84 mL de alcohol de 95 % y agua destilada csp 100 mL. cido clorhdrico diluido (10%): 36 mL HCl concentrado (d = 1,16; 31 %) en agua csp 1 L. cido clorhdrico c(HCl /z*) 1mol / L: 85 mL de HCl concentrado, en agua csp 1 L. cido sulfrico diluido (10%): 52 mL de H2S04 concentrado en unos 100 mL de agua destilada. Enfrese a temperatura ambiente y diluya con agua a1 L. Solucin saturada de cido pcrico: 2 g de c. pcrico en agua destilada csp 100 mL. Se reposa por 24 h, se agita y se filtra. Solucin pcrica - clorhdrica: La Solucin saturada acuosa de cido se mezcla con el cudruple volumen de HCL al 30%. Solucin de cido picrolnico: Solucin saturada en alcohol al 20 % o en agua. S. R de acetato de plomo c(PbAc2 /z*)0,5 mol/L: 6,5 g de cristales transparentes de acetato de plomo se disuelven en suficiente agua recin hervida para obtener 100 mL. Se preserva en frascos mbar bien cerrados. S. R de acetato de calcio: Acetato de calcio al 10 % en agua destilada. Solucin de cido silicotngstico: 5 g de c. silicotngstico se disuelven en H2SO4 c(H2SO4/z*)6 mol/L csp 100 mL S. R de amonaco: 400 mL de amonaco concentrado al 28 % en suficiente cantidad de agua para 1 L. Almidn indicador: Se tritura1 g de almidn soluble en 10 mL de agua fra y se vierte lentamente, con agitacin constante, en 200 mL de agua hirviente. Se hierve hasta obtener un lquido transparente; deje sedimentar, filtre y utilice solamente el lquido sobrenadante. Solucin de cido tnico: 1 g de tanino (cido tnico) en 8 mL de agua y1 mL de etanol. Debe prepararse en el momento de usarse. S. R de anilina clorhdrica: 2 g de cloruro de anilina se diluyen en 65 mL de etanol al 90 % y35 mL de agua destilada; se aaden 2 mL de HCl concentrado. Solucin de cido crmico: Solucin acuosa al 50% S. R de Bial: 1 g de orcinol se disuelve en 500 mL de HCl, agregando luego 25 gotas de una solucin de cloruro frrico al 10 %. Solucin de bencidina: Solucin alcohlica al 5 % o en cido al 5%. Solucin de bencidina cprica: 10 mL de solucin de acetato de bencidina, se satura con acetato de cobre al 3 %. Solucin de Bromuro de potasio: Bromuro de potasio al 20 % en agua. Reactivo de Baljet: Solucin A:1 g de cido pcrico (2,4,5-Trinitrofenol) en 100 mL de etanol. Solucin B: 10 g de NaOH en 100 mL de agua.

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21. Reactivo de Benedict: Solucin A: 17,3 g de citrato de sodio; 10 g de carbonato de sodio anhidro y 60 mL de agua. Solucin B: 1,73 g de cuso4.5H2O en 15 mL de agua. Se mezclan ambas soluciones y se afora a100 mL. Reactivo de Bertrand: 5 g de cido silicotngstico cristalizado se disuelven en 100 mL de agua destilada. Para detectar ciertos alcaloides, se acidula la solucin con HCl al 10 %. Reactivo de Burchardat: 2 g de cristales de yodo, 4 g de KI y agua destilada csp 100 mL. Buffer de acetato: Acetato de amonio al 10 %; se le aade en el momento de usarse, suficiente cantidad de amonaco al 10 % para llevar el pH a 8,1 - 8,3. Buffer de Borato: 3,092 g de cido brico y 3,728 g de cloruro de potasio, en 250 mL de agua; se agrega suficiente cantidad de NaOH c(NaOH/z*)1 mol/L, para llevar el pH a 8,18,3. S. R de cloruro de calcio: Solucin acuosa de cloruro de calcio al 10 %. S. R de cloruro de bario: Cloruro de bario al 10 % en agua. S. R de cloruro de hierro: Cloruro frrico al 10 % en agua. S. R de cloruro mercrico: Disuelva 68 g de HgCl2 en agua y diluya hasta 1 L. S. R de cloruro frrico-ferricianuro: Se mezclan partes iguales de cloruro frrico al 0,3 % y ferricianuro de potasio al 0,3 %. Si se utiliza en cromatografa de papel, el cromatograma se sumerge en la mezcla reactiva, luego en HCl diluido y por ltimo en agua; finalmente se seca. Solucin de clorozinc-yodo: 30 g de cloruro de zinc, 5 g de yoduro de potasio, y 1 g de cristales de yodo, se disuelven en 14 mL de agua. Conservar en frasco mbar. Solucin de cuoxam (cobre amoniacal): Triturar 0,5 g de carbonato cprico con 10 cc de solucin concentrada de amonaco (d = 0.88), lentamente y agitando la mezcla. Solucin de carbonato de sodio c(CO3Na2 /z*)2 mol/L: 12,5 g de carbonato de sodio se disuelven en agua destilada, csp 100 mL. Solucin cromo-actica: Fuerte: 1 mL de c. actico glacial y 100 mL de c. crmico al 1 %. Dbil: 10 mL de c. actico glacial; 25 de c. crmico al 1 %; 65 mL de agua. Solucin de Calberla: 5 mL de glicerina; 10 mL de etanol y15 mL de agua destilada; se le agregan 2 gotas de fushina bsica en solucin acuosa saturada. S. R de Carr-Price: Cloruro de antimonio en cloroformo, al 20%. S. R de Dragendorff: Mezclar21,3 mL de cido ntrico (d =1,42) con suficiente agua destilada para hacer 62 mL. En 20 mL de esta solucin se disuelven 5 g de subnitrato de bismuto. Por separado, se disuelven 31,2 g de yoduro de potasio en 69 mL de agua. Mezclar luego ambas soluciones. Dragendorff modificado: Solucin A: 17 g de subnitrato de bismuto; 200 g de cido tartrico, en 800 mL de agua. Solucin B: 160 g de yoduro de potasio en 400 mL de agua.

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39. S. R de la DNP(2,4-dinitrofenilhidracina): 0,4 g de DNP se disuelven en 100 mL de HCl c(HCl /z*)2 mol/L Solucin de dicromato de potasio c(K2Cr2O7 /z*)1mol/L: 49,035 g del reactivo pulverizado y desecado a 120 C, se disuelven en agua hasta 1 L. S. R del p-dimetilaminobenzaldehido (EHRLICH): Solucin acuosa al 10%. S. R de difenilamina sulfrica: Difenilamina disuelta en H2SO4 concentrado al 1 %. S. R de digitonina: Digitonina al 0,5 % en etanol al 85 %. S. R de Duquenois: Acetaldehdo fresco 12 gotas, 1 g de vainillina en 50 mL de alcohol. S. R de Emerson: Es la mezcla de las soluciones de carbonato de sodio al 0,5 %, 4aminoantipirina al 5,4 % y ferricianuro de potasio al 5,4%. S. R de Florogucina: Solucin al 1 % en alcohol de 90 %. S. R de Fehling: Solucin A: 7 g de sulfato de cobre se disuelven en 100 mL de agua destilada, conteniendo 0,1 mL de c. sulfrico. Solucin B: 35 g de tartrato de sodio y potasio y 15,5 g de NaOH disueltos en 100 mL de agua. Se mezclan partes iguales de A y B, en el momento de usarse. S. R de Flin: 100 g de tungstato de sodio disueltos en750 mL de agua; 20 g de cido fosfomolbdico mezclados con 50 mL de cido fosfrico. Se refluja por 2 horas, filtrar y enrasar a 1 L. S. R de fosfato de sodio: Solucin acuosa al 1 %. S. R de Ferricianuro de potasio: 1 g de ferricianuro de potasio en 10 mL de agua. S. R de Frohde: 1 g de molibdato de sodio en 100 mL de c. sulfrico. Solucin de gelatina: 1 % de gelatina en agua. Si se desea prepararle en glicerina, se utiliza la misma al 50 %, con un 1 % de fenol como conservador. Glicerina yodada: Yoduro de potasio al 3 % en glicerina al 50 %. Solucin de resina de guayaco: 1 % de resina de guayaco en alcohol al 90 %. S. R de Gibbs: 2,6-dicloroquinona cloroimida al 2 % en cloroformo. S. R de Guignard (papel de picrato): Se sumerge una tira de papel de filtro en solucin saturada de cido pcrico c( c. pcrico /z*) 0,05 mol/L; se deseca y luego se humedece con carbonato de sodio al 10 % y se deseca de nuevo. Gelatina salina (para sangre): Gelatina al 3 % se mezcla con una solucin de sal comn (NaCl al 0,7 %, con adicin de 0,6 g de fosfato de sodio para obtener un pH de7,4. Despus de calentar a unos 35o C, aadir un 5 % de sangre desfibrinada. Puede aadirse 0,50 % de Nipagn como conservador. Solucin alcohlica de hidrxido de potasio c(KOH /z*)0,5 mol/L: Se disuelven 28,05 g de hidrxido de potasio en 1000 mL de alcohol. Se titula contra HCl c(HCl /z*) 0,05 mol/L en presencia de anaranjado de metilo. Use tapn de goma.

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59. Solucin de hidrxido de potasio c(KOH /z*) 1 mol/L: Disuelva14,3 g de KOH en suficiente cantidad de agua destilada para hacer 100 mL Solucin de hidrxido de sodio: 10 % de NaOH en agua. S. R de Hirsch: Solucin de cido tricloro actico al 10 % Solucin de hidrato de cloral: Solucin acuosa al 66 % Solucin de hidrxido de calcio (agua de cal): Aproximadamente Ca(OH)2 al 0,15 % en agua. S. R de Kedde (modificacin de Bus y Taylor): cido 3,5-dinitrobenzoico al 2 % en metanol. KOH al 5,7 % en agua. Solucin de Lugol: Yodo al 1 % con un 2 % de KI, en agua. S. R de Legal: Nitroprusiato de sodio al 5 % en agua; se sigue con 3 gotas de NaOH c(NaOH /z*)2 mol/L. S. R de Liebermann: 1 mL de c. sulfrico concentrado se mezclan con 20 mL de anhdrido actico y 50 mL de cloroformo. S. R de Marquis: cido sulfrico, seguido de 1 gota de formaldehdo al 40 %. S. R de Mayer: 1,258 g de cloruro mercrico se disuelven en 60 mL de agua. Por otra parte se disuelven 5 g de yoduro de potasio en 20 mL de agua, se mezclan ambas soluciones y se enrasa a 100 mL con agua. S. R de Millin: Se disuelven 6 mL de mercurio en 54 mL de cido ntrico fumante (d =1,52), sin calentar y diluyendo la solucin con un volumen igual de agua. S. R de Marme: Disolver 5 g de yoduro de cadmio y 10 g de yoduro de potasio en 100 mL de agua. S. R de Mandelin: Disolver 1 g de vanadato de amonio en 200 mL de c. sulfrico concentrado (d = 1,843). Djese sedimentar y filtre. Preparar al momento de usarse. S. R de Molisch: 15 % de -naftol en alcohol de 95 %. Se aaden 3 gotas de c. sulfrico concentrado. Solucin de nitrato de plata: Solucin acuosa al 10 %. S. R de Nesler: Se disuelven 3,5 g de yoduro de potasio y 1,25 g de cloruro mercrico en 80 mL de agua, aadiendo una solucin saturada en fro de cloruro mercrico, con agitacin constante hasta que permanezca un precipitado ligeramente rojizo y luego disolviendo 12 g de hidrxido de sodio. Despus de aadir algunos mL ms de la solucin de cloruro mercrico, el volumen se lleva a 100 mL con agua. S. R de p-nitrofenilhidracina: Solucin del reactivo, saturada en cido actico al 15 %. Solucin de permanganato de potasio c(KMnO4 /z*) 1 mol/L: Disolver 3,3 g de KMnO4 en un litro de agua destilada. Se hierve por 15 minutos; se cubre el recipiente y se deja en reposo por dos das, para luego filtrar por asbesto. Solucin de Picrato de sodio: 0,5 g de cido pcrico y 5 g de carbonato de sodio. Agua csp 100 mL.

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79. 80. 81. S. R de Raymond: Solucin al 1 % de m-dinitrobenceno en etanol. S. R de rojo escarlata: Una solucin al 0,5 % en hidrato de cloral al 66 %, se aaden gotas de amonaco. S. R de Sanin: 20 g de trtaro emtico, 20 g de cloruro de sodio, 40 g de acetato de sodio, 50 g de bitartrato de sodio y potasio, todo disuelto en agua csp 1000 mL. S. R de Sonneschein: 17,5 g de cido molbdico, 13,5 g de carbonato de sodio y fosfato disdico al 5 %, 30 mL. S. R de Seliwanoff: 0,30 g de resorcinol en 100 mL de HCl al 12,5%. S. R de Shonteten: Solucin de borato de sodio 1:20, en agua. Solucin de subacetato de plomo: Triturar 14 g de PbO hasta consistencia homognea, con10 mL de agua; transfiera esta pasta a un frasco, usando otros 10 mL de agua, para enjuagar. Disuelva 22 g de acetato de plomo en70 mL de agua y adase esta solucin a la mezcla. Agtese vigorosamente durante 5 min. y luego deje reposar por 7 das, agitando eventualmente. Fltrese y adase por el filtro agua hervida csp 100 mL. Solucin reveladora para cromatografa de carotenoides: Bencina: 60 partes, benceno: 35 partes, cloroformo: 1,25 partes, isopropanol: 0,06 partes y acetona 0,55 partes. S. R de sulfato mercrico: Solucin acuosa al 1%. S. R de sulfato de magnesio: Solucin acuosa al 1%. Solucin salina normal: Cloruro de sodio al 0,9 % en agua. S. R de Sudn III: Solucin al 6 % en partes iguales de alcohol y glicerina. Solucin de sulfato de anilina: Solucin al 2 % en cido sulfrico al 0,5 %. Solucin para la Taleoquinina: 1 mL de agua de bromo, adicionndose gotas de amonaco, en presencia de una solucin de quinina al 1:200. S. R de Tartrato ferroso: 1 g de sulfato ferroso anhidro se disuelve en 1 L de agua, conjuntamente con 5 g de tartrato de sodio y potasio. S. R de Tollens: A 2 mL de nitrato de plata al 5 % se le aade 1 gota de NaOH al 10%. Se agrega hidrxido de amonio hasta redisolver el precipitado. S. R de Vainillina: Solucin alcohlica al 1%. S. R de Vainillina clorhdrica (Reactivo de Rosenthaler): 1 g de vainillina en10 mL de HCl concentrado. S. R de Vainillina sulfrica: 0,5 g de vainillina disueltos en 8 mL de etanol y 2 mL de c. sulfrico concentrado. S. R de Valser: Agregue una solucin de 10 g de yoduro de potasio en suficiente agua destilada para hacer 100 mL, a 14 g de yoduro mercrico, hasta la disolucin de este. Filtre y deseche el exceso.

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99. S. R de Van UrK: p-dimetilaminobenzaldehdo al 0,2 % en cido sulfrico al 65 %. Se le aaden 0,2 mL de solucin de cloruro frrico al 5 %, por cada 100 mL de reactivo.

100. S. R de Vrins: A una solucin de 10 partes de molibdato de amonio en 100 partes de agua, se aaden 60 partes de cido ntrico puro (d = 1,15). Se digiere algunas horas al bao de Mara y se aade a la solucin enfriada, cido fosfrico al 25 %, hasta que no se forme precipitado. Se lava el precipitado de fosfomolibdato, se mezcla con agua regia en un matraz de vidrio y se hierve para expulsar el amonaco. Se evapora el lquido a sequedad, se disuelve el residuo en c. ntrico diluido (10 %) y se filtra. 101. S. R Verde de bromocresol: A una solucin al 0,3 % del colorante en metanol al 80 % se le aaden 8 gotas de NaOH al 30 % por cada 100 mL. 102. S. R de Vitali: HNO3 concentrado (d =1,40) una gota; evaporar a sequedad, enfriar. Repetir. Luego agregar gotas de KOH al 10 % en metanol, recin preparado. 103. S. R de Wagner: Se disuelven 2 g de yodo y 2 g de yoduro de potasio en un pequeo volumen de agua, y luego llevando el enrase a 100 mL, con agua. 104. S. R de Wassacky: 2 g de p-dimetilaminobenzaldehdo, con 6 g de cido sulfrico concentrado y 0,4 mL de agua. 105. S. R de Xantidrol: 0,5 mL de solucin de xantidrol, se la aaden a 1 mL de c. clorhdrico fumante y se completa a 100 mL con c. actico de 96 %. 106. S. R de Yoduro de potasio: 16,5 g de KI se disuelven en suficiente agua para obtener 100 mL. 107. Solucin de Zincuranilo: 10 g de acetato de uranilo se disuelven en 6 mL de c. actico al 30 % bajo calentamiento, y se lleva a 50 mL con agua (Solucin A).30 g de acetato de Zinc se mezclan con 3 mL de c. actico al 30 % y se diluye con agua a 50 mL(Solucin B). Se mezclan A y B en caliente, formndose un lquido transparente al cual se le agrega una pizca de sal y se filtra despus de reposo de 24 horas. 108. ndigo carmn (Indicador): 3 g de indicador en solucin de cido sulfrico (25 mL en 500 mL de agua destilada) csp 500 mL. 109. S. R gelatina: Embeber 25 mL de gelatina durante 1 h en solucin saturada de NaCl, calentar hasta disolucin de gelatina, enfre, diluya con solucin no saturada de NaCl hasta 1 L. 110. Solucin acidificada de cloruro de sodio: Acidifique 975 mL de solucin saturada de NaCl con 25 mL de cido sulfrico.

Nota: Para la preparacin de estas soluciones reactivos, algunas publicaciones pueden sugerir ciertas variaciones, sin que por ello se introduzcan cambios sustanciales. Los porcentajes anotados se entienden que son en peso / volumen, excepto para los alcoholes donde estn en v / v.

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BIBLIOGRAFA

1. Albornoz, A. R. : Productos Naturales. Publicaciones UCV. Caracas 1980. 2. Claus, E. P., V. R. Tyler : Farmacognosia. Ed. Ciencia y Tcnica.1970. 3. Domnguez, X. : Mtodos de investigacin fitoqumica. Ed. Limusa, Mxico 1973. 4. Guenther, E. : The essential oils. Vol. 1-6. Van Nostrand Co. 1962. 5. Harbone, J. B. : Phytochemical methods. Chapman and Hall. Londres. 1973. 6. Ikan, R. : Natural products a Laboratory guide. Israel Univ. Press. Jerusalem. 1969. 7. Manske, R. H. : The Alkaloids. Vol. 1 - 17. Academic Press. 1950 - 1979. 8. Normas Ramales. Drogas crudas y Extractos y tinturas. NRSP 309, 311 y 312. MINSAP 1992. 9. Trease G. E. : Pharmacognosy. Bailliere. Tindall. Londres. 11na Ed. 1978. 10. Trease. G. E.; W.C. Evans: Farmacognosia. Interamericana. Mc Graw - Hill. 13ava Ed. 1991

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INDICE

I. VALORACIN DE LAS DROGAS. Error! Bookmark not defined. I.1 MTODOS DE PERCEPCIN. 1 Actividad Prctica No 1 EVALUACIN MACROSCPICA DE LAS DROGAS 1 Actividad Prctica No 2 ALTERACIONES DE LAS DROGAS 7 Actividad Prctica No 3 DETERMINACIN DE MATERIAS EXTRAAS 8 I.2 MTODOS MICROSCPICOS. 10 Actividad Prctica No 4 TCNICAS DE CORTE E INCLUSIN. 10 Actividad Prctica No 5 CORTES POR CONGELACIN. 13 Actividad Prctica No 6 REACCIONES HISTOQUMICAS SOBRE TEJIDOS VEGETALES . 15 Actividad Prctica No 7 EXAMEN E IDENTIFICACIN DE DROGAS EN POLVO. 21 Actividad Prctica No 8 ESTUDIO MICROSCPICO DE LOS GRANOS DE POLEN 28 I.3 MTODOS FSICO-QUMICOS APLICADOS AL ANLISIS DE DROGAS CRUDAS. PARMETROS DE CONTROL DE LA CALIDAD. . 29 Actividad Prctica No 9 DETERMINACIN DE CENIZAS TOTALES, SOLUBLES EN AGUA E INSOLUBLES EN CIDO. 29 Actividad Prctica No 10 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE HUMEDAD 31 Actividad Prctica No 11 DETERMINACIN DE SUSTANCIAS SOLUBLES. 33 I.4 ESTUDIO QUMICO CUALITATIVO. 34 Actividad Prctica No 12 TAMIZAJE FITOQUMICO 34 II. MTODOS DE EXTRACCIN DE SUSTANCIAS NATURALES. EXTRACTOS TOTALES. 42 Actividad Prctica No 13 OBTENCIN DE EXTRACTOS FLUIDOS Y TINTURAS. 45 III. MTODOS FSICO-QUMICOS APLICADOS AL ANLISIS DE EXTRACTOS Y TINTURAS 49 Actividad Prctica No 14 MTODOS GENERALES PARA EL ANLISIS DE EXTRACTOS. . 49 IV. ALGUNOS MTODOS QUMICOS CUANTITATIVOS APLICADOS AL ANLISIS DE DROGASY EXTRACTOS 58 Actividad Prctica No 15 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE TANINOS EN DROGAS VEGETALES. 58 Actividad Prctica No 16 CUANTIFICACIN DE ALCALOIDES 61 Actividad Prctica No 17 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE BASES TOTALES EN LAS PLANTAS. 63 Actividad Prctica No 18

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ANLISIS CUANTITATIVO DE ANTRAQUINONAS PRESENTES EN UNA DROGA. 65 Actividad Prctica No 19 DETERMINACIN CUANTITATIVA EN ACEITES ESENCIALES. . 67 V. MTODOS DE EXTRACCIN, PURIFICACIN E IDENTIFICACIN DE ALGUNOS METABOLITOS SECUNDARIOS 70 Actividad Prctica No 20 OBTENCIN Y CARACTERIZACIN DE ACEITES ESENCIALES. . 70 Actividad Prctica No 21 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE FLAVONOIDES DE VEGETALES. 72 Actividad Prctica No 22 AISLAMIENTO DE NARINGINA DE LA CORTEZA ESPONJOSA DE LA TORONJA. 73 Actividad Prctica No 23 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE QUINONAS DE VEGETALES. 74 Actividad Prctica No 24 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE SAPOGENINAS ESTEROIDALES EN DROGAS VEGETALES. 75 Actividad Prctica No 25 DETERMINACIN SIMULTNEA DE SAPONINAS Y TANINOS EN UN EXTRACTO VEGETAL. 76 Actividad Prctica No 26 PREPARACIN Y CARACTERIZACIN DE ESTEROLES DE CERAS VEGETALES. 77 Actividad Prctica No 27 AISLAMIENTO Y RECONOCIMIENTO DE ESTEROLES MEDIANTE LA FORMACIN DE DIGITNIDOS. 78 Actividad Prctica No 28 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE GLICSIDOS CARDIOTNICOS EN DROGAS VEGETALES. 80 Actividad Prctica No 29 AISLAMIENTO DE CERINA Y FRIEDELINA DEL CORCHO. 81 Actividad Prctica No 30 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE PROTENAS VEGETALES. 82 Actividad Prctica No 31 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE ALCALOIDES EN UNA DROGA VEGETAL. 83 Actividad Prctica No 32 EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE UN ACEITE FIJO. 84 Actividad Prctica No 33 CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA DE CARBOHIDRATOS. . . 86 VI. GLOSARIO DE TRMINOS BOTNICOS 88 VII. SOLUCINES Y REACTIVOS 90 BIBLIOGRAFA 96