TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

Conjunto de tcnicas desenvolvidas - 1970 MARCO IMPORTANTE: Descobrimento das enzimas de restrio e da DNA ligase "POSSIBILITARAM A OBTENO DO DNA RECOMBINANTE"

ENZIMA DE RESTRIO
Endonucleases encontradas em bactrias Papel biolgico: Proteo do genoma bactriano de invaso viral, clivando qualquer DNA exgeno; Reconhecem de restrio) seqncias de 4-8

nucleotdeos de ambas as fitas de DNA (Stios

MECANISMOS DE AO DAS ENZIMAS DE RESTRIO

PRODUO DE TERMINAIS OU PONTAS CEGAS

-N-N-A-G-C-T-N-N-N-N-T-C-G-A-N-N-

Alu I

-N-N-A-G C-T-N-N-N-N-T-C G-A-N-NPonta cega

PRODUO DE TERMINAIS OU PONTAS COESIVAS

-N-N-G-A-A-T-T-C-N-N-N-N-C-T-T-A-A-G-N-N-

Eco RI

-N-N-G A-A-T-T-C-N-N-N-N-C-T-T-A-A G-N-NPonta coesiva

CLONAGEM GNICA
1-CLIVAGEM DE DNA COM ENZIMAS DE RESTRIO 2- OBTENO DE UMA MOLCULA DE DNA REC.

CLONAGEM DE DNA

ELETROFORESE EM GEL
Agarose ou poliacrilamida - Poliacrilamida oferece maior preciso na separao que a agarose

IMPORTNCIA: Separao de fragmentos de

DNA e determinao do tamanho comparando a padres de PM conhecidos. Visualizao: brometo de etdeo e fonte de luz UV As bandas visualizadas com uma fonte de luz UV podem ser fotografadas

DNA e RNA
Poli-nions: migram para o eletrodo POSITIVO (anodo) quando colocados em campo eltrico DNA dupla fita: Relao massa ~ carga lquida Em funo da natureza repetitiva dos fosfatos

BROMETO DE ETDEO

http://www.uniscience.com.br/site/images/gred.jpg

VISUALIZAO DE DNA EM GEL

BROMETO DE ETDEO