LOS ESTOMAS

pequeos orificios o poros de las plantas, localizados en la superficie de sus hojas. Constan de dos grandes clulas de guarda y oclusivas rodeadas de clulas acompaantes. La separacin que se produce entre las dos clulas de guarda (que se pueden separar por el centro mantenindose unidas por los extremos) denominada "ostiolo", regula el tamao total del poro y por tanto, la capacidad de intercambio de gases y de prdida de agua de las plantas. Las races no presentan estomas. Las plantas parsitas sin clorofila como Monotropa y Neottia no tienen estomas (Orobanche los tiene en tallo). Las partes areas sin clorofila (hojas variegadas) pueden tener estomas pero no son funcionales (Louguet 1990), igual que los de los ptalos.
Nivel de los estomas en la epidermis Althernanthera, lagunilla: al mismo nivel

Mikania cordifolia: elevados

Pinus: hundidos

Criptas estomticas de Nerium oleander en vista superficial

Estomas en vista superficial de epidermis

Clulas oclusivas con cloroplastos

Eichhornia crassipes, camalote

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Mecanismos fisiolgicos de apertura y cierre de estomas

La apertura estomtica que se produce en respuesta a la luz o a la disminucin del CO2 en el mesfilo, se debe al aumento relativo del p de las clulas oclusivas con respecto al de las clulas vecinas. En condiciones de igualdad de a en todos los puntos del sistema, esta diferencia de p es la resultante de la diferencia de o. La disminucin del o en las clulas oclusivas se produce por acumulacin de solutos. El K+ es el soluto cuantitativamente ms importante. La acumulacin de K+ es balanceada por la acumulacin de aniones, principalmente malato y Cl-. En el interior de las clulas oclusivas se forman cidos orgnicos, principalmente mlico, que provienen de la lisis del almidn y cuyos protones se intercambian con los iones K+. As, el notable aumento de los aniones malato y/o Cl- y de los K+ hace que el o de las clulas oclusivas se haga ms negativo, ingrese agua por la diferencia de potencial agua que se establece, aumente el p, se deforme la clula oclusiva gracias a su estructura particular, y el poro se abra. Se han observado aumentos de hasta 0,5 M en la concentracin del K+, lo cual es suficiente para

determinar un descenso del o de alrededor de 2 MPa, si el aumento en K+ va acompaado por el de un anin monovalente.

Fig. 16: Conductancia foliar (gs) en funcin de la concentracin de ABA en la solucin xilemtica de plantas de maz. Las variaciones en ABA xilemtico se generaron por diferentes tratamientos de sequa (,o) o enriqueciendo artificialmente la savia con ABA (). Se muestra la relacin para tres rangos de potencial agua foliar en los das previos a la observacin. De Davies, Tardieu y Trejo (1994) Plant Phys 104:309-314.

El cierre de los estomas sigue el camino inverso: se produce por una prdida de iones K+ y de cantidades equivalentes de un anion por parte de las clulas oclusivas con el

consiguiente aumento de su o, lo que a su vez determina una salida de agua y la disminucin de la turgencia de las clulas oclusivas. Tanto la apertura como el cierre son procesos activos. La apertura es causada por la acumulacin de solutos en las clulas oclusivas, mientras que el cierre se debe a la salida de los mismos. El K+ y el Cl- se mueven entre las clulas oclusivas y clulas de la epidermis. En gramneas este movimiento parece estar restringido a las clulas subsidiarias. La acumulacin de K+ es un proceso quimiosmtico, es decir se utiliza ATP para bombear protones desde el interior de la clula hasta el apoplasto. Este proceso de extrusin, puesto en marcha por el estmulo lumnico, genera un gradiente de potencial elctrico entre ambas caras de la membrana; y este gradiente a su vez impulsa la acumulacin de K+. Las ATPasas intervienen en el proceso de extrusin de H+, pero tambin los canales de K+ ubicados en la membrana son una parte importante del mecanismo. Estos canales son sensibles al gradiente de potencial elctrico transmembrana y al Ca2+. Experimentos recientes sugieren que el Ca2+ cumple el rol de mensajero secundario en la respuesta de los estomas al ABA. Es decir, el ABA no afectara directamente al mecanismo de apertura de los estomas sino que provocara un cambio en la concentracin de Ca2+ en el citoplasma. El incremento del Ca2+ citoslico, promovido por el ABA, se producira tanto por la entrada de dicho ion desde el espacio extracelular como por la remocin del mismo desde los compartimentos intracelulares, a travs de diversos canales de selectividad diferencial. El incremento en la concentracin del Ca2+ inhibira la accin de las ATPasas, y en consecuencia provocara la depolarizacin de las membranas. Esta depolarizacin activara los canales de K+ que permitiran la salida de este ion al apoplasto. Existen dos fuentes de energa metablica para la apertura de los estomas, dependiendo, por ejemplo, de la calidad de la luz utilizada como estmulo. Estas dos fuentes son la fotofosforilacin (asociado a la fotosntesis) y la fosforilacin oxidativa (asociada a la respiracin). El cierre de los estomas en oscuridad es inhibido por inhibidores de la respiracin, por lo que se deduce que tambin el cierre estomtico puede ser un proceso activo.

En algunos casos en que se produce una disminucin brusca del p de las clulas del mesfilo y de la epidermis puede ocurrir una apertura pasiva transitoria del estoma. En estas condiciones el mayor p en las clulas oclusivas (en relacin a las otras clulas epidermicas) determina que las mismas, liberadas de la presin a las que se hallaban sometidas por las otras clulas de la epidermis, se deformen determinando, en consecuencia, la apertura del estoma.

FACTORES QUE AFECTAN EL APERTURA Y CIERRE DE ESTOMAS Respuesta de los estomas a factores externos e internos

Las respuestas de los estomas se denominan directas cuando el estmulo acta sobre las clulas oclusivas e indirectas si acta, en primera instancia, sobre otras clulas (por ejemplo las del mesfilo). Respuesta a la luz

La Fig. 11 muestra una respuesta tpica de la resistencia foliar (r l) a los efectos de la irradiancia. La forma de la curva que relaciona r l con la irradiancia es similar para muchas especies y edades de hoja, pero puede haber diferencias importantes entre especies en cuanto al valor mnimo de rl que alcanzan y en cuanto al valor de la irradiancia necesario para determinar ese valor mnimo. La edad de la hoja y las condiciones en que se cultivaron las plantas tambin pueden influir sobre esa relacin. Hay casos de apertura parcial en oscuridad.

Fig. 11: Influencia del nivel de irradiancia sobre la magnitud de la rl.

Los estomas responden a la luz por tres vas diferentes. Existe una respuesta directa a la radiacin fotosintticamente activa (RFA), una respuesta directa a la luz azul, y una respuesta indirecta a la RFA.

La respuesta indirecta a la RFA se produce debido a la reduccin producida por la fotosntesis de la concentracin de CO2 del espacio areo del mesfilo y la subsiguiente respuesta de los estomas a esa disminucin de la concentracin de CO2.

En la respuesta directa a la RFA el fotorreceptor es la clorofila de las clulas oclusivas. En la respuesta directa a la luz azul interviene un fotorreceptor an no identificado, y en la respuesta indirecta a la RFA, el fotorreceptor es la clorofila en las clulas del mesfilo.

Estos tres tipos de respuestas no ocurren siempre simultneamente ni en todas las hojas tienen la misma importancia relativa.La respuesta relativa a la luz azul y a la luz roja vara ampliamente entre especies, y an para hojas de una misma planta que han crecido en diferentes ambientes lumnicos, o en plantas con diferente disponibilidad de agua. En algunos casos slo se observa la respuesta a la

luz azul. Esto ocurre en hojas sin clorofila o con partes de la lmina sin clorofila. Hay tambin ejemplos de carencia del efecto directo de la RFA por falta de cloroplastos en los estomas. Por ejemplo, esto sucede en varias especies del gnero Paphiopedilum cuyos estomas son funcionales aunque carecen de clorofila. Respuesta al CO2

Los estomas son sensibles a la concentracin intercelular de CO 2 (Ci) (Fig. 12). Los estomas se abren cuando Ci disminuye y se cierran cuando aumenta. El mecanismo de accin del CO2 sobre los estomas an no se conoce. Los primeros indicios de que los estomas no son sensibles a la concentracin de CO 2 en la superficie de la hoja surgieron hace muchos aos de la observacin de que estomas totalmente cerrados no responden a cambios en la concentracin externa de CO2. Experimentos recientes en las que se ha manipulado independientemente las concentraciones de CO2 en la superficie externa de la hoja y en la cmara subestomtica muestran claramente que el grado de apertura de los estomas depende de la concentracin interna y no de la externa.

Entre los factores responsables que al anochecer los estomas se cierren gradualmente, se encuentra el aumento del CO2 en las cmaras subestomticas debido a la progresiva disminucin de la fotosntesis, por lo que va aumentando la incidencia del desprendimiento de CO2 por respiracin.

Experimentalmente se puede demostrar este efecto del CO 2 sobre el movimiento estomtico de diversas maneras. Por ejemplo, se puede observar que los estomas permanecen abiertos en oscuridad si la planta, al transferirse de la luz a la oscuridad, se la coloca en una atmsfera desprovista de CO2. Se puede obtener, en cambio, un cierre parcial de los estomas a la luz, cuando se coloca la planta en una atmsfera con alta concentracin de CO2.

Fig. 12: Respuesta de la conductancia estomtica a la concentracin de CO 2 en el espacio intercelular en hojas de Xanthium strumarium. De Mott (1988) Pl Phys 86:200-203.

Respuesta a la presin de vapor de agua Se ha descubierto que los estomas de muchas especies son sensibles al dficit de presin de vapor (DPV) de agua hoja-aire (es decir la diferencia entre la presin de vapor a saturacin a la temperatura de la hoja y la presin de vapor actual del aire que rodea la hoja). Por otra parte, cuando se examina las respuestas de los estomas a la temperatura en condiciones de DPV constante, tambin puede encontrarse variaciones en resistencia estomtica (Fig. 13).

Fig 13: Efectos de la diferencia de presin de vapor hoja-atmosfera (W) y la temperatura ( : 20C, 25C, :30C, :35C) sobre la conductancia foliar (g) de hojas de soja (Glycine max ) para condiciones de alta irradiancia (1700 mol m -2 s-1) y 330 ppm de CO 2 en la superficie externa de la hoja. De Ball, Woodrow y Berry (1987) Progress in Photosinthesis Research. Vol IV. Se carece por ahora de una adecuada comprensin del mecanismo de control involucrado en esta respuesta. Se ha sugerido que las clulas oclusivas y subsidiarias tienen una pobre conexin hidrulica con las clulas de la epidermis y el mesfilo y, a la vez,

pierden agua con cierta facilidad desde sus caras internas. Segn esta nocin, un aumento de transpiracin en respuesta a un aumento del dficit de presin de vapor llevara a un deterioro del balance hdrico de las clulas oclusivas y a su cierre parcial, auqnque no exista un efecto detectable de el aumento de transpiracin sobre el potencial agua del mesfilo. Los efectos del DPV sobre la resistencia estomtica sirven para enfatizar la necesidad de no limitar nuestra visin del proceso transpiratorio a un modelo fsico relativamente esttico en la que varia un factor a la vez. As, en la relacin T=C r 31

el DPV (o sea, C) tiene impacto sobre la transpiracin tanto porque afecta el numerador como el denominador de esa relacin. El efecto neto de un cambio de DPV sobre la tasa de transpiracin ser, entonces, consecuencia de la interaccin entre ambas vas de efecto (cambio en el gradiente y cambio en la resistencia estomtica). Respuesta a la temperatura

La resistencia o conductancia estomtica es afectada por la temperatura, tal como se observa en la Fig. 13 si se contrasta los valores de conductancia para un mismo valor de DPV (por ejemplo, para 10 mmol mol-1). Por lo general, la conductancia estomtica aumenta con la temperatura hasta un ptimo para luego declinar a altas temperaturas. El valor del ptimo puede cambiar con la especie. Al igual que el caso del DPV, no tenemos an una comprensin adecuada de las conexiones entre el sistema de control de la apertura estomtica y la temperatura. Una parte, al menos, de ese efecto est mediado por los efectos de la temperatura sobre la concentracin de CO2 en la cmara subestomtica. La temperatura tiene efectos diferentes sobre las tasas de fotosntesis y respiracin, tendiendo la ltima a aumentar ms que la primera a mayores temperaturas. En consecuencia, el balance entre estos dos procesos tiende a moverse hacia una mayor concentracin de CO 2 en la cmara subestomtica a medida que aumenta la temperatura. No est dems sealar que en la naturaleza un cambio de temperatura normalmente tambin afecta al DPV, lo que constituira una va indirecta adicional de la accin de la temperatura. En muchas circunstancias, buena parte de las variaciones diarias en conductancia estomtica en cultivos bien provistos de agua y fuera del atardecer y el amanecer son explicables por los efectos del DPV y la temperatura. Respuestas al estrs hdrico

Se sabe hace ya mucho tiempo que los estomas juegan un papel fundamental al regular el intercambio de agua entre la hoja y la atmsfera circundante, y que se cierran en circunstancias en que el suministro de agua desde el suelo es deficiente. Lo que es menos claro es el funcionamiento de los mecanismos de control involucrados en estas respuestas.

Se puede demostrar una asociacin entre el potencial agua de las hojas y r s (Fig. 14), asociacin que parece coherente con el papel del estado hdrico de las clulas oclusivas en la determinacin de la apertura y cierre de los estomas, tal como veremos en la seccin siguiente. Las informaciones disponibles acerca de las relaciones entre el a de la hoja y la rl, coinciden en que existe un umbral mximo de a de la hoja por debajo del cual los estomas comienzan a cerrarse, llamado umbral de sensibilidad estomtica. Este umbral puede variar entre -0,7 y -1,8 MPa y aparentemente depende del potencial osmtico de la hoja, que vara segn la especie a que pertenece, el estado ontognico del individuo y de la hoja, y de su historia previa.

Fig. 14: Respuesta de la magnitud de la resistencia foliar en Panicum maximum al potencial agua foliar. Sin embargo, la asociacin entre resistencia foliar y potencial agua foliar del tipo que se muestra en la Fig. 14 no parece ser evidencia de causalidad, o cuando ms, es solamente un prueba parcial y limitada. Dos clases de evidencia apuntan a que las conexiones entre el comportamiento estomtico y el estrs hdrico no se limitan a los efectos del potencial agua foliar. Una de esas evidencias es que en situaciones de un desecamiento progresivo del suelo, los estomas comienzan a cerrarse antes que se pueda detectar disminuciones en el potencial agua de las hojas. La otra proviene de experimentos en las que se somete el suelo de una maceta a potenciales de presin crecientes a medida que se va desecando el suelo de la maceta. Esto crea una situacin en que la reduccin del potencial mtrico del suelo que se produce con el desecamiento se ve balanceado por el aumento de potencial de presin, y las hojas mantienen su potencial agua. Sin embargo, los estomas de esas plantas se van cerrando progresivamente a medida que aumenta el grado de desecacin del suelo. Estas evidencias sugieren que hay algn otro factor involucrado en el control de los estomas bajo condiciones de estrs hdrico y, por otra parte, que habra algn mensaje que se mueve desde las races hasta las hojas cunado se deseca el suelo.

El candidato ms fuerte (aunque no el nico) para el papel de mensajero raz-hoja es el cido abscsico (ABA), uno de los reguladores de crecimiento nativos de las plantas. Se sabe que el ABA produce el cierre estomtico a la luz cuando se asperjan las hojas con soluciones de muy baja concentracin (10-6 M), o cuando se flotan trozos aislados de epidermis en soluciones de ABA . Adems, existen mutantes de tomate (flacca) y papa (droopy) caracterizados por una muy limitada capacidad de sintetizar ABA. Plantas de estos mutantes tienen un muy pobre control estomtico y se marchitan fcilmente, recuperando un grado importante de control estomtico cuando se aporta ABA exgeno. Estas evidencias apuntan a que el ABA es necesario para el normal funcionamiento de los estomas. Por ltimo, se sabe que un sitio importante de sntesis del ABA son las races, y que el contenido de ABA en estos rganos aumenta con el desecamiento del suelo (Fig. 15).

Fig. 15: Relacin entre el contenido de ABA en races de maz y el contenido de agua promedio del suelo que rodea a esas races. Resulta difcil establecer una relacin firme entre el contenido de ABA de las hojas y la resistencia estomtica, posiblemente porque una fraccin importante del ABA que llega a las hojas en la corriente transpiratoria queda acumulada en las clulas del mesfilo, donde no influira sobre la fisiologa estomtica. Sin embargo, se ha encontrado una buena correlacin entre la concentracin de ABA en el xilema de plantas de maz y la conductancia estomtica, tanto cuando ese nivel de ABA deriva de distintos grados de desecamiento del suelo como cuando se inyecta ABA exgeno en la corriente transpiratoria (Fig. 16).

Esta asociacin conductancia estomtica/concentracin de ABA en la corriente transpiratoria se ha encontrado en varias especies. Sin embargo, el anlisis cuidadoso de los resultados de experimentos en los que se produce el desecamiento del suelo, sugiere que hay otros niveles de control adicionales al nivel de ABA en el jugo xilemtico. As, cuando se clasificaron los datos del experimento graficado en la Fig. 16 segn el estado hdrico de las hojas en el da anterior al de la observacin, se observa un aumento de sensibilidad estomtica al ABA a medida que se hizo ms negativo el potencial agua foliar en el tiempo previo a la observacin. Este hallazgo es coherente con una serie de observaciones, hechas con ABA y con otros reguladores de crecimiento para una serie de procesos, donde se comprob que la respuesta final depende tanto de la sensibilidad del tejido al regulador como de la concentracin del mismo. Una interpretacin del aumento de respuesta a igual concentracin de ABA a medida que el potencial agua de la hoja decreci de valores superiores a -1.3 MPa a menores de -1.6 MPa (Fig. 16), es que la sensibilidad de los estomas ha sido modificada por la exposicin previa a potenciales agua bajos.

An quedan muchos interrogantes por resolver antes de que podamos tener una descripcin completa de las conexiones entre una exposicin de una planta al estrs hdrico y los detalles del control de la conductancia estomtica. Estas incluyen, por ejemplo, el papel del mesfilo en el control del nivel de ABA que llega a la clulas oclusivas, el papel de otros mensajeros raz-hoja, y la identificacin precisa de los sistemas de control de la

sensibilidad de los estomas al ABA. A pesar de estas incertidumbres, parece claro que el ABA juega un papel importante en el control de las respuestas al estrs hdrico, y que el papel de la accin directa del potencial agua de las clulas oclusivas tiene una importancia menor o nula en comparacin a lo que sugiere la asociacin representada en la Fig. 14. En contraposicin, estan comenzando a aparecer indicios que el potencial agua foliar podra tener algn papel en la determinacin de la sensibilidad estomtica al ABA.