UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON FACULTAD: CIENCIAS Y TECNOLOGIA CARRERA: INGENIERIA DE ALIMENTOS

MATERIA : LABORATORIO DE ANALISIS DE ALIMETOS DOCENTE : GIANNINI ZALLOCCO MARIA ESTHER ESTUDIANTE : JHOANA QUINO CHOQUE GRUPO :3 FECHA : 15/ VI / 09

COCHABAMBA BOLIVIA

DETERMINACIN DE VITAMINA C

1. INTRODUCCION:
La dieta es la fuente de todos los nutrientes para los seres humanos. Estos se dividen clsicamente en componentes de la dieta que proporcionan energa (carbohidratos, grasas y protenas), fuentes de aminocidos esenciales y no esenciales (protenas), cidos grasos insaturados (grasas), minerales (oligominerales), y vitaminas (compuestos orgnicos hidrosolubles y liposolubles). orgnicas necesarias para la nutricin de mamferos; las sustancias requeridas nicamente por microorganismos y clulas en cultivo deben definirse como factores de crecimiento, para evitar afirmaciones sin Una vez ingerida con el alimento es absorbida al intestino, transportada a una clula y asimilada en su interior. Hay vitaminas que se transforman en coenzimas, como la vitamina B y la mayora de las hidrosolubles, a excepcin de la C. Otras vitaminas tienen otros modos de actuacin. Son responsables de importantes procesos biolgicos, produccin del pigmento visual, necesarias para la produccin de protrombina, osificacin o funcionan como antioxidantes. Las vitaminas no generan energa, son acalricas. Sus carencias o deficiencias originan trastornos y patologas concretas. Las vitaminas son consideradas como nutrientes porque el organismo las necesita para poder aprovechar otros nutrientes, participando en los procesos metablicos del organismo, todas tienen un papel metablico especfico. Esta definicin distingue entre vitaminas y oligoelementos esenciales, que son nutrientes inorgnicos necesarios en pequeas cantidades. Tambin excluye a los aminocidos esenciales, que son sustancias orgnicas preformadas y necesarias, que se encuentran en la dieta en cantidades mucho mayores. El trmino vitamina se restringe aqu para incluir nicamente las sustancias fundamento cientfico en cuanto a su beneficio teraputico, como las vitaminas para los seres humanos. Cuando la vitamina se encuentra en ms de una forma qumica (p. ej., piridoxina, piridoxal, piridoxamina), o como un precursor (p. ej., caroteno para vitamina A), esos anlogos a veces se denominan vitmeros. Las vitaminas, a pesar de su composicin qumica diversa, pueden definirse como sustancias orgnicas que deben obtenerse en pequeas cantidades a partir del ambiente, porque los seres humanos no pueden sintetizarlas de novo, o su velocidad de sntesis es inadecuada para la conservacin de la salud (por Ej., la produccin de cido nicotnico (niacina) a partir del triptofano). En la mayor parte de los casos, la fuente ambiental es la dieta, ya que el organismo es incapaz de sintetizarlas, pero una excepcin obvia a esta regla general es la sntesis endgena de vitamina D que se puede formar en la piel con la exposicin al sol, y algunas pueden formarse por la flora intestinal (las vitaminas K, B 1, B12 y cido flico, que se forman en pequeas cantidades en la flora intestinal), o sintetizarse en el hgado a travs de sus precursores (p. ej. los carotenos, y la vitamina A) Las vitaminas son sustancias orgnicas, de naturaleza y composicin variada imprescindibles en los procesos metablicos que tienen lugar en la nutricin de los seres vivos. No aportan energa, ya que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energticos suministrados por la alimentacin. Normalmente se utilizan en el interior de las clulas como antecesoras coenzimas, a partir de las cuales se elaboran miles de enzimas que regulan las reacciones qumicas de las que viven las clulas. Los antiguos mtodos biolgicos utilizados para determinar o incluso demostrar la actividad biolgica de las vitaminas en la actualidad han sido reemplazados por los mtodos microbio-lgicos (EMB). Los mtodos fisico-qumicos, principalmente la cromatografa gas lquido (GLC) y la cromatografa lquida de alta presin (HPLC) han sido aplicados para solucionar muchos problemas relacionados con el anlisis de las vitaminas La vitamina C es una de las que analizaremos, la propiedad qumica ms importante del cido ascrbico es su oxidacin, por la transferencia de uno o dos electrones; debido a esto ayuda a prevenir la oxidacin de las molculas solubles en agua. Tambin, indirectamente, protege a las vitaminas A y E de la oxidacin, as como a algunas vitaminas del grupo B; tales como la riboflavina, tiamina, cido flico, y cido pantotnico. Acta como un desintoxicante y puede reducir los efectos colaterales de drogas como la cortisona, aspirina e insulina y puede reducir la toxicidad de metales pesados como el plomo, mercurio y arsnico. Gracias a su poder reductor, el cido ascrbico se puede determinar por valoracin con soluciones oxidantes La estabilidad de la vitamina C es otro inconveniente, porque es la ms lbil de las vitaminas de los alimentos. La mayor prdida se produce durante la recoleccin, el procesamiento y almacenamiento debido a la oxidacin; la cual es acelerada por la luz, el oxgeno, el calor, el incremento del pH, la actividad de agua, la presencia de cobre y sales ferrosas y por las oxidasas, por lo que su extraccin debe realizarse en medio cido

Si bien en la literatura aparecen reportados varios mtodos para la determinacin de cido ascrbico, recopilados en un trabajo anterior, el mtodo recomendado por la AOAC es la titulacin con el indicador redox 2,6 diclorofenolindofenol, aunque dicha valoracin se aplica preferentemente a los extractos vegetales.

2. OBJETIVOS:
Realizar el anlisis del contenido de vitamina C (acido ascrbico) en muestras frutales por el mtodo volumetrico con titulacin de 2,6 Diclorofenol

3. FUNDAMENTO TEORICO:
Las vitaminas son sustancias orgnicas imprescindibles en los procesos metablicos que tienen lugar en la nutricin de los seres vivos. No aportan energa, puesto que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energticos suministrados por la alimentacin. Normalmente se utilizan en el interior de las clulas como precursoras de los coenzimas, a partir de los cuales se elaboran los miles de enzimas que regulan las reacciones qumicas de las que viven las clulas. Si bien las vitaminas individuales difieren mucho en cuanto a estructura y funcin, se aplican algunas aseveraciones generales. Las vitaminas hidrosolubles slo se almacenan en una cantidad limitada y se requiere consumo frecuente para conservar la saturacin de los tejidos. Las vitaminas liposolubles pueden almacenarse en cantidades muy abundantes, y esta propiedad les confiere un potencial de toxicidad grave que excede mucho la del grupo hidrosoluble. En la forma que se consumen, muchas vitaminas no tienen actividad biolgica y requieren procesamiento in vivo. En el caso de varias vitaminas hidrosolubles, la activacin incluye fosforilacin (tiamina, riboflavina, cido nicotnico, piridoxina), y es posible que tambin requiera acoplamiento a nucletidos purina o piridina (riboflavina, cido nicotnico). En sus principales efectos conocidos, las vitaminas hidrosolubles participan como cofactores para enzimas especficas, en tanto al menos dos vitaminas liposolubles, A y D, se comportan como hormonas e interactan con receptores intracelulares especficos en sus tejidos blanco. De acuerdo a su solubilidad la podemos clasificar a las vitaminas en: Hidrosolubles: Se caracterizan porque se disuelven en agua, por lo que pueden pasarse al agua del lavado o de la coccin de los alimentos. Muchos alimentos ricos en este tipo de vitaminas no nos aportan al final de prepararlos la misma cantidad que contenan inicialmente. Las vitaminas hidrosolubles son generalmente coenzimas o precursores de ellos. En consecuencia, la carencia de una vitamina se traduce en el frenado o paralizacin de la reaccin en la que est implicada, con las consecuencias biolgicas previsibles. El cido ascrbico, por ejemplo, es esencial para la actividad de la prolinhidroxilasa, un enzima que intervienen en la sntesis del colgeno; la vitamina B12 es esencial para la actividad de la malonil-CoA mutasa, que transforma el metilmalonil-Coa en succinil-CoA, mientras que el folato es una parte esencial de la molcula del propio coenzima A. Las vitaminas liposolubles tienen funciones menos definidas, y en algunos casos todava no bien conocidas a nivel molecular, aunque su deficiencia tambin da lugar a enfermedades carenciales A diferencia de las vitaminas liposolubles no se almacenan en el organismo. Esto hace que deban aportarse regularmente y slo puede prescindirse de ellas durante algunos das. El exceso de vitaminas hidrosolubles se excreta por la orina, por lo que no tienen efecto txico por elevada que sea su ingesta. Complejo B: - Liberadoras de Energa: Tiamina (B1), Riboflavina (B2), Niacina (B3), Biotina y Acido Pantotnico. - Hematopoieticas: Acido Flico y Vitamina B12 - Otras: Piridoxina (B6), Piridoxal y Piridoxamina. Las fuentes de esta vitamina son: hgado, rin, carne, huevos, marisco y productos lcteos. Se ha observado deficiencia de esta vitamina en vegetarianos estrictos; infecciones intestinales crnicas y ancianos, as mismo el consumo de alcohol aumenta sus necesidades. Es la responsable de problemas de absorcin y anemia perniciosa.

No Complejo B: Vitamina C (Acido Ascrbico) Liposolubles Son las que se disuelven en disolventes orgnicos, grasas y aceites. Se almacenan en el hgado y tejidos adiposos, por lo que es posible, tras un aprovisionamiento suficiente, subsistir una poca sin su aporte. Si se consumen en exceso (ms de 10 veces las cantidades recomendadas) pueden resultar txicas. Esto les puede ocurrir sobre todo a deportistas, que aunque mantienen una dieta equilibrada recurren a suplementos vitamnicos en dosis elevadas, con la idea de que as pueden aumentar su rendimiento fsico. Esto es totalmente falso, as como la creencia de que los nios van a crecer ms cuantas ms vitaminas les hagamos tomar. Las vitaminas son Vitamina A (Retinol, -Catotenos), Vitamina D (Colecalciferol), Vitamina K ( Filoquinonas, Menaquinonas) y Vitamina E (Tocoferoles), de la cuales mencionaremos de manera abreviada. Vitamina A: Retinol. La vitamina A slo est presente como tal en los alimentos de origen animal, aunque en los vegetales se encuentra como provitamina A, en forma de carotenos. Los diferentes carotenos se transforman en vitamina A en el cuerpo humano. Se almacena en el hgado en grandes cantidades y tambin en el tejido graso de la piel (palmas de las manos y pies principalmente), por lo que podemos subsistir largos perodos sin su aporte. Se destruye muy fcilmente con la luz, con la temperatura elevada y con los utensilios de cocina de hierro o cobre. La funcin principal de la vitamina A es la proteccin de la piel y su intervencin en el proceso de visin de la retina. Tambin participa en la elaboracin de enzimas en el hgado y de hormonas sexuales y suprarrenales. El dficit de vitamina A produce ceguera nocturna, sequedad en los ojos (membrana conjuntiva) y en la piel y afecciones diversas de las mucosas. En cambio, el exceso de esta vitamina produce trastornos, como alteraciones seas, o incluso inflamaciones y hemorragias en diversos tejidos. El consumo de alimentos ricos en vitamina A es recomendable en personas propensas a padecer infecciones respiratorias (gripes, faringitis o bronquitis), problemas oculares (fotofobia, sequedad o ceguera nocturna) o con la piel seca y escamosa (acn incluido). Su funcin principal consiste en la proteccin del tejido epitelial, en la intervencin de los mecanismos que permiten el crecimiento y la reproduccin y en el ciclo bioqumico de la retina (formacin del pigmento rodopsina) Vitamina D: calciferol. La vitamina D es fundamental para la absorcin del calcio y del fsforo. Se forma en la piel con la accin de los rayos ultravioleta en cantidad suficiente para cubrir las necesidades diarias. Si tomamos el sol de vez en cuando, no tendremos necesidad de buscarla en la dieta. En pases no soleados o en bebs a los que no se les expone nunca al sol, el dficit de vitamina D puede producir descalcificacin de los huesos (osteoporosis), caries dentales graves o incluso raquitismo. Vitamina K . La vitamina K es un principio esencial en la dieta para la biosntesis normal de varios factores necesarios en la coagulacin de la sangre. La vitamina K en presencia de diarrea, antibiticos que reducen la flora intestinal, o cualquiera de los sndromes de malabsorcin. Vitamina E: En animales, los signos de deficiencia de vitamina E comprenden anormalidades estructurales y funcionales de muchos rganos y sistemas. Esas alteraciones morfolgicas se acompaan de defectos bioqumicos que parecen afectar al metabolismo de cidos grasos y muchos otros sistemas de enzimas. Es notable el hecho de que un gran nmero de signos y sntomas de deficiencia de vitamina E en animales se asemejan de manera superficial a estados patolgicos en seres humanos; sin embargo, hay pocas pruebas inequvocas de que la vitamina E tiene importancia nutricional en seres humanos . La Vitamina C o Acido Ascrbico (objetivo de nuestra prctica) El trmino vitamina C debe usarse como un nombre descriptivo genrico para todos los compuestos que muestran desde el punto de vista cualitativo la actividad biolgica del cido ascrbico y la podemos encontrar en carnes, cereales, frutas (ctricos, sanda, meln, papaya, mango, kiwi) hortalizas, leche de vaca, verduras, entre otros.

Entre sus principales funciones tenemos: - Antioxidante y captador de radicales libres - Formacin y reparacin de colgeno - Sntesis de Proteoglucanos - Participa en el metabolismo de Tirosina, carbohidratos, histamina, noradrenalina y hierro - Cofactor en varias reacciones orgnicas El cido Ascrbico acta como un fuerte agente reductor y en su oxidacin cede dos tomos de hidrgeno para transformarse en cido dihidroscrbico, que tambin tiene actividad de Vitamina C. La ausencia de sta vitamina da como resultado la enfermedad conocida como Escorbuto la cual se caracteriza por un defecto de la sntesis de colgeno, que queda de manifiesto por la falta de cicatrizacin de heridas, defectos de la formacin de los dientes, rotura de capilares que conducen a la aparicin de abundantes petequias, debilidad muscular, perdida del cabello, entre otros. El cido ascrbico es una cetolactona de seis carbonos, que tiene relacin estructural con la glucosa y otras hexosas, se oxida de modo reversible en el organismo hacia cido deshidroascrbico. Este ltimo compuesto posee actividad completa de vitamina C. Las frmulas estructurales del cido ascrbico y del cido deshidroascrbico son las siguientes:

cido ascrbico y deshidroascrbico. Tomado de Goodman y Gilman. Las bases farmacolgicas de la teraputica. Usos: La vitamina C puede tener muchos efectos positivos, incluyendo los siguientes. Refuerza las funciones del sistema inmune. Protege contra el cncer. Es necesario en el proceso de curacin de heridas. Ayuda a prevenir cataratas. Incrementa el colesterol HDL (bueno). Disminuye los riesgos de enfermedades cardacas. Reduce la presin sangunea. Es til en el tratamiento de alergias. Mantiene saludables los vasos sanguneos. Neutraliza el asma y los espasmos. Ayuda a combatir la infertilidad masculina. Ayuda a proteger a los diabticos contra complicaciones a largo plazo. Protege contra sarpullidos y sus efectos. Puede asistir en el tratamiento de sangrado de encas, contusiones leves y artritis. Asiste al tratamiento de artritis y otros estados inflamatorios. Si usted consume mucha carne curada, procesada o preservada como la panceta, chorizo, jamn, salchichas o fiambres, debera saber que la vitamina C ayuda a prevenir que este tipo de alimentos generen causantes de cncer, "nitrosaminas" en el estmago. Es una buena idea ingerir alimentos ricos en vitamina c, o en su defecto, ingerir suplementos de vitamina C, al mismo tipo que consume alimentos procesados. Suplementos: La vitamina C est presente en muchas frutas y vegetales. Los alimentos que son excelentes fuentes de vitamina C incluyen el jugo de naranja, pimienta verde, pomelo, papaya, uva, meln, frutillas, mango, brcoli, jugo de tomate, repollo de Bruselas, coliflor y col. La vitamina C tambin se halla en

verduras de hojas verdes crudas y cocidas (espinaca, nabo verde); tomates, papas, calabaza, frambuesa y anan enlatados o frescos. Esta vitamina es sensible a la luz, el aire, y el calor. Ingerir vegetales crudos o no tan cocidos, incrementa su contenido de vitamina C. Otros suplementos: Se puede adquirir la vitamina C tanto de forma natural como sinttica, tambin llamada cido ascrbico, en una gran variedad de formas de suplementos. Las tabletas, cpsulas y tabletas masticables son probablemente las ms populares, pero la vitamina C tambin viene en polvo cristalino, tableta efervescente y en forma lquida. Se puede adquirir un rango de dosage de 25 mg a 1.000 mg por tableta. Est disponible la vitamina C "protegida" si nota que el cido ascrbico provoca malestar al estmago. La vitamina C esterificada es una modalidad disponible de vitamina C la cual, consideran los fabricantes, es mejor absorbida por el cuerpo. La experiencia en laboratorio ha demostrado que esto ltimo no es as, y tambin se demostr que la vitamina C comn es absorbida adecuadamente. Precauciones: En general la vitamina C no es txica. En altas dosis ( ms de 2.000mg diarios) puede causar diarrea, gas, o trastorno estomacal. Consulte a su mdico antes de ingerir suplementos de vitamina C en caso de tener algn problema de rin. Los nios cuyas madres ingieren 6g o ms de vitamina se pueden desarrollar escorbuto debido a la repentina ingesta diaria de gotas. Interacciones posibles: La vitamina C tiene los siguientes efectos en el cuerpo. Incremento de la absorcin de hierro de alimentos y suplemento de hierro o suplementos multivitamnicos y/o minerales. Disminucin en la absorcin de cobre. Interfiere con el anlisis de sangre para la vitamina B12, informe a su mdico en caso de ingerir vitamina C, al momento del anlisis de sangre. No tiene efectos adversos con otros medicamentos o hierbas. La vitamina C es utilizada para desintoxicar el hgado de drogas y otros qumicos. Si est actualmente tomando medicamentos, consulte a su mdico antes de ingerir suplemento de cualquier vitamina. ANALISIS DE VITAMINAS Debido a que las vitaminas no se almacenan y el contenido en los alimentos vara grandemente, es necesario efectuar el anlisis de estos compuestos, para as: a) Establecer los requerimientos diarios de las personas b) Establecer los alimentos que los aportan en mayor calidad. Al analizar a las vitaminas no se puede establecer un mtodo general para cuantificarlas a todas, sino que cada una va a poseer su mtodo con sus restricciones y especificaciones. En general los mtodos se pueden clasificar de la siguiente manera: 1. a) Vitaminas Hidrosolubles Qumicos y Fsicas: a. b. c. d. e. f. Fluoromtricos (Tiocromo) Caolorimtricos Espectrofotomtricos Polarogrficos Gravimtricos Volumtricos

b) Bioensayos: Utilizando animales de experimentacin (ratas), mediante estos ensayos se evlan los cambios o trastornos que presente el animal. c) Microbiolgicos: a. Ochromonas danica b. Lactobacillus fermenti c. Kleeckera brevis

d. 2. a)

Lactobacillus casei

Vitaminas Liposolubles Qumicos y Fsicos

a. Absorcin UV b. Colormetricos: ensayo Carr-Price c. Fotomtricos b) Bioensayos: Se evala el desarrollo de la rata y al terminar el ensayo, al animal se le extraer el hgado.

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Determinacin de acido ascrbico Pesamos 10g de muestra (fruta triturada, jugo de naranja) en la balanza analtica, en un vaso de precipitado En una pipeta volumtrica tomamos 10ml de de acido oxlico al 2% y enrasamos con agua destilada en un matraz aforado de 50 ml Preparamos el equipo de filtracin y posteriormente filtramos el contenido del matraz Tomamos 10ml del filtrado en un erlenmeyer y le aadimos 20ml de acido oxlico Posteriormente procedemos a realizar la titulacin de nuestra muestra y el patrn de acido ascrbico 0,1mg/ml con 2,6 DCFI, para ver mejor el punto de viraje aadir ter etlico (el cual extrae el color a la superficie para mejor visualizacin) Preparacin del patrn: Se pesa 0.1g de acido ascrbico y se diluye a 100ml del cual se saca una alcuota de 10ml para luego enrasar a 100ml, del ultimo de saca 5 ml de la solucin patrn de acido ascrbico para luego titular 6. DATOS: Determinacin de acido ascrbico N Muestra Cantidad 1 2 Jugo naranja kiwi de 2ml 10.7700 g 50ml 2ml titulacin V de titulacin de 2,6 DCFI (ml) 30 23

5. CALCULOS
Para el jugo de naranja: 0.5 mg vit. C X mg vit. C 0.9842 mg vit. C X mg vit. C 15.24ml de 2,6 DCFI 30ml de 2,6 DCFI 2 ml naranja 100ml

X1 mg vit. C = 9.21mg vit. C / 100 ml de jugo de naranja Para el kiwin:

0.5 mg vit. C X mg vit. C 0.7546 mg vit. C X mg vit. C 18.86 mg vit. C X mg vit. C X1 mg vit. C =175.16 mg vit. C/ 100ml de kiwi

15.24ml de 2,6 DCFI 23 ml de 2,6 DCFI 2 ml de 2,6 DCFI 50ml de 2,6 DCFI 10.7700 g kiwi 100g

6. RESULTADOS:
N 1 2 Muestra Jugo de naranja kiwi Vit. C (acido ascorbico) 9.21mg vit. C / 100 ml de jugo de naranja 175.16 mg vit. C/ 100ml de kiwi

7. CONCLUSION:
Dada la importancia de la vitamina C que contribuye a nuestro organismo en aspectos mencionados anteriormente en el marco terico se realiza anlisis del contenido las vitamina C en el jugo de naranja y el kiwi, este ultimo presenta mas porcentaje de vitamina C que casi todos los frutos, el cual determinamos por el mtodo colorimtrico con la titulacin del 2,6 DCFI

8. CUESTIONARIO:
1) Que otros mtodos analticos se emplean para determinar la vitamina C? El cido ascrbico (AA) es fcilmente oxidado a cido dehidroascrbico (ADA) y por lo tanto, es necesario seleccionar las condiciones de extraccin en forma cuidadosa con el fin de minimizar las posibles prdidas debido a las etapas de preparacin de las muestras. Las soluciones de extraccin ms comnmente utilizadas son las de los cidos metafosfrico, oxlico y actico y mezclas de ellos. Se puede agregar EDTA en ciertos procedimientos para complejar los iones de los metales as como tambin agentes reductores como ditiotreitol (DTT). Bsicamente existen dos enfoques diferentes para la determinacin del cido ascrbico: - La determinacin del cido ascrbico presente en la muestra o en el extracto de muestra ignorando alguna presencia posible de ADA. - La determinacin del cido ascrbico "total" que incluye la suma de AA y ADA utilizando un mtodo que transforma ya sea AA a ADA o ADA a AA con la consiguiente cuantifcacin de ADAoAA. Todos los mtodos que utilizan las propiedades reductoras de la molcula de cido ascrbico pertenecen a la primera categora. Se pueden utilizar muchos reactivos y de todos ellos, el 2,6-diclorofenolindofenol (DCFI) es ciertamente el ms utilizado debido a que su uso es simple y los resultados son en general confiables. El DCFI es de color azul profundo pero incoloro cuando es reducido por AA. Por lo tanto, es fcil titular volmenes fijos del extracto de la muestra hasta que permanezca un color rosado y comparar el volumen de reactivo utilizado con aquellos de una solucin estndar de concentracin conocida de AA. En ciertos casos, no se percibe el cambio de color debido a otros componentes coloreados presentes en el extracto En estos casos, el punto final de la titulacin puede visualizarse midiendo el cambio de potencial en la solucin con un electrodo de platino-plata/cloruro de plata (Pt-Ag/AgCl) (23).

Uno de los mtodos ms especficos que pertenecen a la segunda categora fue desarrollado por Deutsch y Weeks (24) y se basa en la medicin de ADA despus de la oxidacin de todo el AA utilizando ya sea oxgeno unido a carbn u otro oxidante tal como iodo. El ADA formado es luego derivatizado con ofenilendiamina para formar un derivado fuertemente fluorescente, el que puede cuantificarse fcilmente por la comparacin con soluciones estndares. El mtodo es un procedimiento AOAC de accin final (25). En aos recientes, diversos investigadores han publicado procedimientos que utilizan HPLC para separar y cuantificar AA y/o ADA. El siguiente procedimiento de ensayo permite la determinacin simultnea de AA y cido eritrbico (26) y se ha utilizado para determinar AA en carne, productos crnicos, alimentos procesados, alimentos enriquecidos, verduras, frutas, leche y bebidas. Extraccin El material (1-5 g) es extrado con 25-50 ml de cido metafosfrico 0,5% que contiene ditiotreitol 0,2% (DTT) utilizando un homogenizador o mediante agitacin. Despus de la centrifugacin, el extracto es diluido con buffer acetato pH 4,8 que contiene DTT 0,2%, se filtra usando un filtro de 0,45 m y se inyecta en el HPLC. El Cuadro 10 muestra las condiciones de HPLC. Resumen 1. 2. 3. La determinacin del cido ascrbico puede realizarse fcilmente mediante titulacin con DCFI pero slo se est determinando AA y en algunos casos pueden ocurrir interferencias. El mtodo de Deutsch y Weeks con el derivado de quinolina fluorescente formado con fenilendiamina proporciona una manera confiable de medir la vitamina C "total". Si ha de determinarse el cido ascrbico "total", HPLC puede proporcionar una alternativa confiable suponiendo que utilizan condiciones apropiadas extraccin para la reduccin ADA a AA previo a cuantificacin con HPLC. Cuadro 10 Condiciones de cromatografa para cido ascrbico Columna Fase estacionaria Fase mvil Flujo Presin Volumen de inyeccin Deteccin Tiempo de retencin Estndar Clculo Acero inoxidable; 250x4,0 m Hypersil ODS (Shandon), 5 m Buffer acetato": Metanol: Agua (15:40:945) 0,8ml/min 90 bar 10-20 l UV: 254 nm aprox. 6-8 min aprox. 10 g/ml Mtodo estndar externo Recuento de rea o altura

a Buffer acetato:36,8 g de acetato de sodio*3H20 disueltos en 800 ml de agua, 101 ml de cido actico, pH ajustado a 3,8 y diluido a 1000 ml con agua. 1) El mtodo volumtrico con 2.6 DCFI que dificultades presenta?

Es menos efectiva con muestras coloridas, por lo cual se debe realizar mas diluciones, ademas de que es un poco dificultoso observar el punto de viraje y presenta ciertas interferencias