Coliformes Fecais Mtodo do nmero mais provvel Etapa 1 : Teste presuntivo - Dilui-se 25 gramas de amostra (mussarela) em gua destilada

durante 25 segundos. - Retira-se 1ml de cada tubo, como na figura a seguir. Aps 24-48 horas de incubao a 35C, verifica-se a produo de gs. Se houver produo de gs, haver suspeita de coliformes.

Etapa 2: Para confirmao uma alada de cada tubo suspeito transferida para o tubo de caldo verde brilhante Bile 2% (VB) e caldo E. coli (EC), a observao de crescimento com a produo de gs nos tubos VB, aps 24-48 horas de incubao a 35 considerado confirmada a presena de coliformes. O crescimento com produo de gs nos tubos EC, aps 24 horas de incubao a 45,5C considerada confirmativa a presena de coliformes termotolerantes. Etapa 3: Os tubos EC positivos so suspeitos da presena de E. coli, para a confirmao uma alada de cada tubo estriada em agar Levine eosina azul de metilo ( L-EMB), isso um meio diferencial para distinguir E. coli dos demais coliformes termotolerantes. Se houver a confirmao com o desenvolvimento de colnias de E. coli, duas dessas devem ser isoladas para provas bioqumicas de indol, VM, VP e citrato (IMViC) so consideradas confirmadas as culturas com perfis ++ --, biotipo 1, ou -+ --, biotipo 2, sendo este teste opcional.

Listeria monocytogenes Mtodo BAM/FDA Etapa 1 (Pr- enriquecimento e enriquecimento seletivo): A)Homogeneizar 25g da amostra com 225 ml de caldo de enriquecimento para Listeria tamponado (BLEB), com piruvato de sdio mas sem os agentes seletivos. Incubar a 30 C por 4 horas, adicionar os agentes seletivos e continuar a incubao a 30 at completar 48 horas. Para at 10 amostras o processo se dar da seguinte forma: 50 g de 5 amostras homogeneizar com 250ml de BLEB com piruvato e sem os agentes seletivos. Proceder da mesma forma com o restante da amostra. Juntar 50ml de cada uma das amostras compostas j homogeneizada e adicionar 200 ml de BLEB, incubar a 30C por 4 horas. Adicionar os agentes seletivos e continuar a incubao a 30C at completar 48horas. B) Plaqueamento seletivo diferencial: Agitar o frasco de enriquecimento seletivo e estriar (estrias de esgotamento), uma alada em uma placa de Agar Oxford (OXA). Incubar as placas a 35C e observar a presena de colnias tpicas com 24 horas de incubao ( colnias esfricas,

pretas, rodeadas por um alo preto de hidrolise da esculina). Se no houver o desenvolvimento de colnias nesse intervalo reencubar ate completar 48 horas.

Salmonella 25 g de amostra de cada alimento inoculada em 225 mL de gua peptonada a 1%, tamponada e em seguida incubada 35C, por 18-24 horas. Alquatas de 10 mL do prenriquecimento devem ser transferidas para 90 mL de caldo Selenito Cistina e incubado 42,5 C por 24 horas em banho- Maria. A partir dos caldos de enriquecimento seletivo so feitas estrias com o auxlio de ala de platina em placas contendo gar Entrico Hektoen (HE) e gar Salmonella-shigella (S-S) e incubadas 35C por 24 horas. As colnias tpicas so submetidas aos testes bioqumicos trplice-acar-ferro (TSI), gar Lisina-Ferro,gar citrato de, prova de fermentao de carboidrato e compostos, no caldo carboidrato vermelho de fenol e prova de hidrlise de uria.