Diagnstico Bioqumico

Citogentica: breve descripcin de las principales tcnicas utilizadas para realizar un estudio cromosmico
Dra. Pilar Corral Dpto. de Biologa Molecular IACA Laboratorios citogenetica@iaca.com.ar Introduccin El laboratorio de citogentica juega un papel fundamental para la gentica clnica. Con los avances cientficos y tecnolgicos desarrollados a partir de los aos 70, no slo hemos podido identificar los cromosomas, sino que hemos podido establecer que las anomalas cromosmicas contribuyen significativamente en la enfermedad gentica, resultando en retardo mental, retraso en el crecimiento, malformaciones, abortos espontneos e infertilidad. Por tal motivo, es importante que el mdico conozca cuales son los medios o herramientas que se disponene en la actualidad, su utilidad, indicaciones para estudio y significado de las mismas. Hoy en da, el anlisis cromosmico puede realizarse con tcnicas de: 1. Citogentica convencional: Cariotipo de resolucin estndar y cariotipo de alta resolucin (AR). 2. Citogentica molecular: Hibridacin in situ fluorescente (FISH), hibridacin in situ fluorescente multicolor (M-FISH o SKY) y la hibridacin genmica comparada (CGH). Estas ltimas metodologas representan una autntica revolucin en el rea del la gentica, dado que han permitido mejorar la sensibilidad y la especificidad de los hallazgos citogenticos. Cundo es necesario realizar un cariotipo? Tcnicas de citogentica convenciona El cariotipo de un individuo puede realizarse por Las indicaciones para realizar un cariotipo quedan reflejadas en la tabla siguiente:
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diversas tcnicas de bandeo cromosmico y en diferentes tejidos, siendo el bandeo G en linfocitos de sangre perifrica la tcnica y muestra de eleccin (Figura 1). Esta metodologa de bajo costo, permite mediante el anlisis detallado de todos los cromosomas, detectar la presencia de anomalas numricas y estructurales. Las anomalas numricas (aneuploidas) implican la prdida y/o ganancia de uno o varios cromosomas completos y puede incluir tanto a autosomas como a cromosomas sexuales. Las anomalas estructurales implican cambios en la estructura de uno o varios cromosomas, las ms comunes son: deleciones, inversiones, translocaciones. Figura 1. Cariotipo femenino con bandeo G de resolucin estndar
Human female G-bands

Tabla I. Indicaciones para realizar un cariotipo 1. Perodo prenatal:

- Infertilidad inexplicable - Diagnstico prenatal (lquido amnitico y biopsia de corion) 7. En todas las edades:

- Edad mayor de 35 aos - Ansiedad materna - Triple screening alterado - Oligoamnios - polihidraminos - Retraso de crecimiento intrauterino (CIR) - Arteria umbilical nica - Sospecha ecogrfica de cromosomopata - Antecedentes de comosomopata balanceada en un progenitor 2. Perodo neonatal: - Malformaciones mayores aisladas - Presencia de 3 o ms defectos congnitos menores - Recin nacido con rasgos dismrficos - Recin nacido con genitales ambiguos - Parto con producto muerto de causa inexplicable - Muerte neonatal de causa inexplicada 3. Perodo de lactancia: - Nios con dificultades para el aprendizaje - Nios con rasgos dismrficos - Nios con retraso psicomotor 4. Perodos preescolar-escolar: - Trastornos del crecimiento - Retraso psicomotor - Rasgos dismrficos 5. Perodo de adolescencia: - Ginecomastia - Falta de desarrollo puberal - Amenorrea primaria o secundaria - Retraso mental - Rasgos dismrficos 6. Perodo del adulto: - Padres de nios con anomalas cromosmicas estructurales - Abortos de repeticin

- Procesos malignos (cariotipo constitucional y tumoral) - Control de transplantes de mdula sea Puesto que en las mejores condiciones tcnicas, la resolucin del cariotipo de resolucin estndar no supera las 550 bandas, se deber realizar un cariotipo de alta resolucin o tcnicas de citogentica molecular en aquellos casos donde la alteracin estructural sospechada sea menor a 10 megabases. En qu consiste un cariotipo de alta resolucin y cmo se obtiene? El cariotipo de alta resolucin (AR) consiste en el anlisis de los cromosomas en profase y prometafase, incrementando as el nmero de bandas visibles al microscopio. En nuestro laboratorio, las clulas en profase y prometafase se obtienen a partir de un cultivo de linfocitos sincronizado mediante el agregado de los reactivos 5'-fluoro2'-desoxiuridina (FrdU) y 5'-bromo- 2'-desoxiuridina (BrdU). Los cromosomas en profase y prometafase pueden alcanzar una resolucin superior a las 800 bandas (Figura 2). Figura 2. Cariotipo masculino con bandeo G de alta resolucin

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De esta manera, al producirse una elongacin de los cromosomas es posible la deteccin de alteraciones estructurales ms pequeas como microdeleciones, duplicaciones y sutiles translocaciones. Encontramos un ejemplo de su aplicacin en los sndromes de delecin y en algunos sndromes de microdelecin (ver Tabla II). Tambin se utiliza para la confirmacin de resultados obtenidos en un cariotipo de resolucin estndar, y para definir en forma precisa los puntos de ruptura de los cromosomas involucrados en alteraciones estructurales. Tabla II. Sndromes de delecin / microdelecin Sndrome Regin cromosmica delecionada 4p16.3 5p15.2 8q24.11-q24.13 7q11.23 11p13 15q11.2 17p13.3 17p11.2 22q11.2 16p13.3 Xp22.3

Wolf-Hirschhorn Cri du Chat Langer-Giedion Wiliams* WARG* Prader Willi/Angelman* Miller- Dieker* Smith Magenis* DiGeorge* Rubinstein-Taybi* Kallman*

Es importante aclarar que: - Ciertas deleciones muy pequeas pueden escapar a esta tcnica y dar resultado falsos negativos. - Cualquier delecin que se sospeche citogenticamente debe ser confirmada por FISH u otra tcnica de citogentica molecular. - Slo algunas microdeleciones son citogenticamente visibles. Actualmente, la manera de identificar estos sndromes es por medio de FISH, utilizando sondas especficas para las regiones delecionadas. Por otro lado, el American College of Medical Genetics (ACMG) recomienda que el AR debe reservarse para casos

donde un sndrome de microdelecin/microduplicacin especfico es considerado, en el cual su diagnstico generalmente requiere de cromosomas con una resolucin superior a 650 bandas. Adems, debido a la gran dificultad y cantidad de trabajo que requiere el anlisis de cromosomas de alta resolucin, en la rutina el AR de 850 bandas slo debe ser indicado para mapear regiones cromosmicas especficas. Es importante recordar que la realizacin de cualquier prueba gentica debe ir acompaada de un acto de asesoramiento gentico. Cmo solicitar estos estudios? Tipo de muestra y requerimiento 5.0 ml de sangre 1961 BANDEO G (CARIOTIPO RESOLUCIN ESTNDAR) perifrica con heparina sdica. Trabajar en condiciones Cdigo Estudio solicitado

1401 CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIN

de mxima esterilidad. Remitir muestra a temperatura ambiente, dentro de las 24 horas de realizada la extraccin. Enviar planilla de datos del paciente.

Bibliografa
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