Ensayo de Biuret: Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio

(KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Consiste en tratar una protena o pptido con Cu en medio alcalino, producindose una ++ coloracin violcea por formacin de un complejo de coordinacin entre el Cu y los pares electrnicos libres de los nitrgenos de los grupos amino de la unin peptdica. Son necesarias por lo menos dos uniones peptdicas para que tenga lugar la reaccin. La reaccin del biuret no es una reaccin especfica para protenas. Eso hace que un resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar los resultados falsos positivos Un resultado negativo de la reaccin del biuret sobre una muestra problema no necesariamente indica la ausencia de protenas, ya que puede ocurrir a) que no existan protenas o pptidos en la muestra (ni tampoco otras sustancias no proteicas biuret positivas), b) que existan una o ms sustancias interferentes en la muestra que impidan que se produzca la reaccin (lo que dara lugar a un resultado falso negativo). Esto puede descartarse (o evitarse) si conozco de antemano la composicin aproximada de la muestra. Por ejemplo, si deseo determinar el contenido de pptidos + generados por una reaccin de hidrlisis cida, los H del medio interferirn con la reaccin del ++ biuret, ya que sta necesita de un medio alcalino para la formacin del complejo con Cu . En este caso la interferencia puede eliminarse alcalinizando el medio antes de realizar el ensayo (en caso contrario obtendra un falso negativo como resultado) y c) Que existan pptidos, pero a una concentracin inferior al lmite de sensibilidad del mtodo. Todo mtodo permite determinar la presencia de un compuesto slo si la concentracin del mismo es superior a cierto valor. Existen mtodos mucho mas sensibles que el biuret (ver mas abajo).

++

Figura 1: Reaccin de Biuret.

Ensayo de Xantroproteco:

Esta reaccin se usa para detectar la presencia de protenas solubles en una solucin. Se realiza mediante el uso de HNO3 concentrado que, en presencia de protenas o aminocidos con restos aromticos torna la solucin de un color amarillo oscuro.

Los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados produciendo un compuesto Amarillo. La produccin de un producto coloreado Amarillo al aadir cido ntrico es una prueba para la presencia de tirosina o triptfano en una protena. La adicin de base fuerte hace que el color se torne ms oscuro hacia anaranjado. Las manchas amarillas en la piel causadas por cido ntrico son el resultado de la reaccin xantoproteca. La reaccion xantoproteica se puede considerar como una sustitucion electrofilica aromatica de los residuos de tirosina de las proteinas por el acido nitrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH acido.