OBJETIVOS

Objetivos General

Estudiar la importancia que tienen los cultivos puros para el anlisis de las caractersticas bioqumicas, reaccin a la coloracin y morfologa que presentan las colonias;

Objetivos especficos

Obtener colonias de bacterias en cultivo puro mediante la siembra en medios lquidos, fondo en tubo y mtodo de estras por agotamiento Aprender a cultivar en medio liquido( caldo nutritivo) Adquirir las habilidades necesarias para realizar las principales tcnicas de inoculacin (siembra) e identificacin de las principales formas bacterianas

METODOLOGA

Mtodo de estras por agotamiento Con el asa ya esterilizada se tom una porcin de una de las colonias presentes en el cultivo, y se deposit en un costado de la caja de petri (contena agar nutritivo), a partir de ese punto se hicieron estras pasando el asa suevamente en forme de zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo. Luego se tapo la caja de petri, se quemo el asa y se incubo a 37Oc/ 24 horas. Este procedimiento se realiz al pie del mechero.

Figura 1: Modelo de estriado

Siembra en fondo en tubo, por picadura Con un asa previamente esterilizado se tom una pequea cantidad de la muestra a examinar, se inclin el tubo de ensayo( contenia agar) y se introdujo la punta del asa en este; llegando al fondo pero sin tocar el tubo. Se sac el asa por el mismo canal y al llegar a la superficie inclinada, se practicaron estra

Siembra en caldos Al pie del mechero y con una asa esterilizada se tomo la muestra a examinar, se inclino el tubo con el caldo y en el espcio desocupado por la inclinacion del liquido se coloco la muestra en la pared del tubo, se enderezo y se mezclo por rotacion, posteriormente se tapo con algodn.

Figura 2: Siembra de un cultivo a un tubo con medio inclinado

Frotis, fijacin y coloracin de una muestra Se coloc 1 o 2gotas de agua en el portaobjetos con un asa estril, se tom una colonia del cultivo y se mezcl con el agua haciendo movimientos circulares del centro de la gota hacia afuera y al pie del mechero, se dejo secar, el frotis fue fijado pasando el portaobjetos rpidamente sobre la flama del mechero. Se cubri el frotis previamente fijado con cristal violeta, se dej actuar durante 1 minuto, se lav con agua para eliminar el exceso de colorante. Se agreg lugol y se dej un minuto, se lav con agua nuevamente Se inclin el portaobjetos y se aplic gota a gota el decolorante alcohol - acetona, inmediatamente se lav. El frotis se cubri con fucsina por 20 segundos para la coloracin de contraste, se lav y se dej secar al aire.

RESULTADOS

Siembra en fondo en tubo, por picadura

(Figura 3)

En esta siembra se observ: El crecimiento de las bacterias en la puntura no fueron muchas, pero las que se lograban observar eran de forma punteada, en la superficie se notaron en mayor cantidad las bacterias . estas poseian un colo amarillo bajo. Siembra en caldos En esta siembra se apreciaron bacterias adheridas a las paredes del tubo de ensayo y en el interior del liquido, crecieron en forma de flculos y comparandola con la siembra en fondo en tubo por pocadura, en esta ( siembra en caldos) se not un mayor creciemiento y cantidad de bacterias. Hubo poca turbidez.

(Figura 4.)

Metodo de estrias por agotamiento

Las caracteristicas morfologicas de las bacterias que se observaron en la caja de petri son de forma fusiforme (lenticular ) . se noto una gran cantidad de micrroganismos, (muchas colonias)

OBSERVACION DE BACTERIAS EN EL MICROSCOPIO

Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: se vieron cocos estafilococos, y bacilos esporulados.

Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: seobservaron bacilos esporulados En forma de cerillos( tienen un aspecto parecido A un fosforo) Gram negativos, pues poseen un color futsia

Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: seobservaron bacilos esporulados y no Esporulados ( gram +), ademas de estas formas Bacterianas tambien se notan cocos

Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: se percibio una gran cantidad de cocos, la mayoria gram negativos y algunos gram positivos

Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: En esta muestra se vieron muchos C cocos cocos gram negativos.

CONCLUSIN

De la anterior experiencia se aprendi a diferenciar un caldo de una agar, el caldo es para muestras liquidas y el agar para solidas. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles estas bacterias. Existen diversas formas de obtener cultivos puros en este laboratorio se utilizaron tres: mtodo de estras, siembra en fondo en tubo y siembra en caldo. Adems se analizaron las caractersticas tanto macroscpicas como las microscpicas de las colonias de bacterias

BIBLIOGRAFA

1- Tcnica para inocular un tubo de caldo de cultivo. Universidad nacional Federico Villa real. Laboratorio de microbiologa I.

2- Manual de prcticas de microbiologa I. Instituto tecnolgico de Santo Domingo. 2005. Pg. 20.

RECOMENDACIONES

No hablar cuando se este realizando una siembra, ni exponer los medios al aire fuera del rea asptica Siempre se debe trabajar al pie del mechero, por tanto se debe tener cuidado con l.

Evitar acumulacin sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la prctica de laboratorio. Todos estos objetos se colocan en un lugar especificado por el profesor.
Debe tenerse precaucin y tomar medidas necesarias al manipular ciertos reactivos ( utilizados en la coloracin de una muestra)