NUTRIO, METABOLISMO, CRESCIMENTO E REPRODUO BACTERIANOS

Profa Eloisa

Introduo

Os microrganismos exibem os mais diversos mecanismos nutricionais. Procariotos (Bacteria e Archaea)

Nutrio

ocorre predominantemente pela absoro

A maioria

destes organismos possui uma espessa parede celular, impossibilitando a realizao de fagocitose.

Composio qumica de uma clula procaritica

Compostos gua % massa mida 70 Tipos diferentes 1

Protenas
Lipdios Lipopolissacardeos Peptideoglicano Glicognio DNA

15
2 1 0,7 1 1

2.000
4 1 1 1 1

RNA Metablitos
ons inorgnicos

5 3
0,3

500 350
20

Classificao quanto s fontes de energia e carbono

Fontes de energia:
Organismos

fototrficos (que utilizam a energia

luminosa) Organismos quimiotrficos (que utilizam a energia proveniente de reaes qumicas).

Fontes de carbono:
autotrficos (fontes inorgnicas CO2 ou on bicarbonato) Organismos heterotrficos (fontes orgnicas carboidratos (D-glicose), aminocidos, cidos monocarboxlicos, lipdios, lcoois, amido, celulose).
Organismos

Fonte de Carbono

Autotrficos - CO 2 a fonte de C
Quimioautotrfico ou Quimiolitotrfico (energia de compostos inorgnicos) Fotoautotrfico ou Fotolitotrfico (energia da luz e fonte de C inorgnica)

Heterotrficos - compostos orgnicos como fonte de C

Quimioheterotrfico ou Quimiorganotrfico (energia de compostos orgnicos) Fotoheterotrfico ou Fotorganotrfico (energia da luz e fonte de C orgnica)

Fonte de Nitrognio

Nitrognio atmosfrico
Convertido

em nitrognio orgnico. Ex: Azotobacter e Rhizobium (fixao do nitrognio) de amnio e nitratos (raramente nitritos)
ou hidrolisados de protenas

Compostos inorgnicos de nitrognio

Sais

Fontes orgnicas de nitrognio

Aminocidos

ons inorgnicos essenciais

Em quantidades apreciveis
Macronutrientes:

fsforo (fosfatos), enxofre, potssio, magnsio, ferro cobre, cobalto, zinco, mangans, molibidnio, sdio

Traos
Micronutrientes:

Fatores de Crescimento

Compostos orgnicos indispensveis a um determinado microrganismo, mas que ele no consegue sintetizar.

Devem estar presentes no meio para que o microrganismo possa crescer

Vitaminas (complexo B), aminocidos, nucleotdeos e cidos graxos

Nutrio em Gram positivos

Estas bactrias caracterizam-se por sintetizar uma srie de exoenzimas, as quais so liberadas no meio, clivando os nutrientes, que so captados por protenas transportadoras.
Os

fungos (clulas eucariticas), possuem um sistema de nutrio semelhante ao das bactrias Gram positivas, nutrindo-se pela absoro, aps a clivagem extracelular de compostos complexos

Nutrio em Gram negativos

Porinas: correspondem s protenas, formadas por trs subunidades idnticas, que originam um canal de cerca de 1 nm de dimetro, cujo mecanismo de abertura e fechamento permanece ainda desconhecido. As porinas permitem a passagem de molculas hidroflicas, de baixa massa molecular.

Devido presena de uma membrana externa de carter hidrofbico (LPS), as bactrias Gram negativas apresentam um grande nmero de porinas associadas camada lipopolissacardica.

gua

No constitui um nutriente, mas indispensvel para o crescimento.

Solvente

universal Auxilia a passagem de sibstncias pela membrana citoplasmtica Regulao da presso osmtica Regulao trmica

Enzimas

A membrana citoplasmtica no permite a passagem de substncias de elevado peso molecular.

Bactria utiliza amido, protenas e gorduras. Como?

Enzimas extracelulares ou exoenzimas realizam a quebra destes compostos para posterior absoro.

Crescimento bacteriano

Em microbiologia, o termo crescimento referese a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das dimenses celulares. Crescimento Populacional: definido como o aumento do nmero, ou da massa microbiana.

Reproduo Bacteriana

As bactrias dividem-se em duas, por fisso binria, e aumentam o seu nmero de forma geomtrica

Populao duplica a cada tempo de gerao.

Separao incompleta das clulas

Ttrade Diplococo Estreptococo Estafilococo Sarcina

Fisso Binria

Crescimento bacteriano

A taxa de crescimento a variao no nmero ou massa por unidade de tempo. O tempo de gerao o intervalo de tempo necessrio para que uma clula se duplique.
O

tempo de gerao varivel para os diferentes organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos at dias, sendo que em muitos dos organismos conhecidos, este varia de 1 a 3 horas.

Crescimento bacteriano

O tempo de gerao pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial, pela frmula abaixo:

N= No x 2 n onde:

N= nmero final de clulas No= nmero inicial de clulas n= nmero de geraes

Aplicando logaritmo (log): log N= log No + n log 2 n = log N - logNo / log 2 n = log N - log No / 0,301 n = 3,3 (log N-log No)

Crescimento Bacteriano

A partir da equao n = 3,3 (log N-log No) possvel calcular o nmero de geraes (n) que ocorreram em uma cultura se o n inicial de clulas for conhecido.

Tendo-se o valor de n pode-se calcular o tempo de gerao (g)

g = t/n Calcular o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 10 3 para 10 8 aps 5 horas de cultivo

Exemplo:

Tempo de Gerao

Fases do crescimento bacteriano

Quando uma cultura microbiana desenvolvese em um sistema fechado, pode-se confeccionar uma curva de crescimento.
Esta

pode ser dividida em diferentes etapas: lag, log, estacionria e de declnio.

Fases do crescimento bacteriano

Fase lag : Fase de adaptao estado de latncia Intensa atividade metablica (sntese de DNA e enzimas) Fase log (crescimento exponencial) : Reproduo celular ativa com tempo de gerao constante Maior atividade metablica da clula Fase estacionria : Nmero de morte igual ao nmero de novas clulas - EQUILBRIO Atividade metablica diminui Fase de declnio ou morte celular: Nmero de clulas mortas excede o de clulas novas

Crescimento bacteriano

A partir do conhecimento dos requerimentos nutricionais, podem ser confeccionados meios que permitam o crescimento microbiano in vitro. Cultura pura: corresponde a uma cultura contendo um nico tipo de organismo.
Permite

o estudo dos microrganismos isoladamente

Crescimento bacteriano

Meios de cultura

Meios aquosos, adicionados de nutrientes e, eventualmente, gar (polissacardeo = ster sulfato de galactana, retirado de algas - Gelidium), caso se deseje a consistncia slida. Quimicamente definidos (sintticos) composio qumica exata

Classes de meios:

Quimioheterotrficos - fatores orgnicos de crescimento (fonte de C e energia)

Quimicamente indefinidos (complexos) composio qumica no exatamente conhecida

Componente protico - principal fornecedor de carbono, nitrognio, enxofre e energia (peptonas e triptonas) Extrato de carne e extrato de levedura - vitaminas e outros fatores orgnicos de crescimento

Tipos de meios em relao consistncia:

Lquidos, Semi-slidos e Slidos

Simples, Enriquecidos, Seletivos, Diferenciais.

Tipos de meios, quanto composio:

Meios de Cultura

Lquido
Slido Semi-Slido

Oxignio atmosfrico

No nutriente, funciona como aceptor final de hidrognio nos processos de respirao aerbica. Classificao das bactrias quanto ao crescimento e utilizao de oxignio:

Aerbias exigem a presena de oxignio livre Microaerfilas exigem oxignio em pequena quantidade, no tolerando as presses normais de O2 atmosfrico Anaerbias estritas no toleram a presena de oxignio livre, morrendo rapidamente nessas condies Anaerbias no-estritas no utilizam oxignio atmosfrico, mas este no txico Facultativas podem crescer na presena ou ausncia de oxignio livre

Cultivo de anaerbios

Utilizao de meios redutores (tioglicolato de sdio) Utilizao de ambientes fechados, sem oxignio Garrafas de anaerobiose

Cultivo de aerbios

Crescimento em tubos, placas (esttico) Crescimento em Erlenmeyers e garrafas (dinmico)

Outros fatores envolvidos na nutrio

Temperatura
Cada

bactria tem um timo de temperatura para absoro de nutrientes que est intimamente relacionado ao crescimento e ao desenvolvimento da culturas

Classificao:
crescem e absorvem melhor entre as temperaturas de 0 e 18C Mesfilas entre 25 e 40C Termfilas entre 50 e 80 C
Psicrfilas

Concentrao Hidrogeninica (pH)

Valores de pH em torno de 7,0 so os mais adequados. Acidoflicos (1,0 a 5,5)

Thiobacillus (cresce em pH 1,5) Lactobacillus A maioria das bactrias Podem tolerar pH na faixa de 5,4 a 8,5 Vibrio cholearae (pH 9,0) Agrobacterium (pH 12,0)

Neutroflicos (5,5 8,0)

Alcaloflicos (8,5 11,5)

Fungos - tendem a ser mais acidfilos que as bactrias (pH <5).

Metabolismo bacteriano

Suprimento de energia Estruturas celulares ou molculas acessrias sua sntese e funcionamento Multiplicao bacteriana

Metabolismo bacteriano

Oxidao Acares, peptdios, gorduras

Visa

protenas,

a formao de ATP para transporte de nutrientes, movimentao dos flagelos, biossntese em geral

Metabolismo bacteriano

Vias metablicas
Respirao aerbia:

Oxidao de carboidratos oxidao da glicose gerando CO2 e gua + ATP

Gliclise (converso da glicose a piruvato) Converso de piruvato a acetil-CoA Oxidao de acetil-CoA pelo ciclo de Krebs

Oxidao de protenas, peptdios e aminocidos remoo do grupo amino, esqueleto de carbono oxidado produto entra no ciclo de Krebs e na gliclise Oxidao de lipdios degradao por lipases gerando cidos graxos oxidados acetil-CoA

Metabolismo bacteriano

Oxidao anaerbia:

Fermentao rendimento energtico menor

Fermentao de carboidratos:

via glicoltica com produo de piruvato, NADH e ATP Produtos lactato, etanol, formiato usados para identificao bacteriana

Fermentao de aminocidos:

Produz NADH, NH4+, cidos orgnicos e ATP

Respirao anaerbia:

Aceptor final de eltrons exgeno e inorgnico No h ciclo de Krebs

Rendimento energtico maior do que da fermentao, menor do que respirao aerbia

Metabolismo de Carboidratos

Gliclise

Oxidao da glicose a cido pirvico com produo de ATP e energia contida em NADH.
Oxidao de um derivado do cido pirvico (acetil coenzima A) a dixido de carbono, com produo de ATP, energia contida em NADH e FADH 2 . NADH e FADH 2 so oxidados. Cascata de reaes de oxirreduo envolvendo uma srie de transportadores de eltrons. A energia dessas reaes utilizada para gerar grande quantidade de ATP.

Ciclo de Krebs

Cadeia de transporte de eltrons

Ciclo de Krebs

Cadeia de Transporte de Eltrons

Respirao anaerbia

O aceptor final de eltrons uma substncia inorgnica diferente do oxignio (O2 ) Aceptor de eltrons pode ser: NO3- , SO4- , CO32-

Tem rendimento energtico menor do que a respirao aerbia.

Fermentao

Libera energia de acares ou molculas orgnicas, tais como aminocidos, cidos orgnicos, purinas e pirimidinas; No requer oxignio, mas algumas vezes pode ocorrer na presena deste; No requer o uso do ciclo de Krebs ou de uma cadeia de transporte de eltrons; Utiliza uma molcula orgnica como aceptor final de eltrons; Produz somente pequenas quantidades de ATP (grande parte da energia original dos compostos catabolizados permanece ainda nas ligaes qumicas dos compostos orgnicos formados).

Vias metablicas fermentativas

Catabolismo das Protenas